SK15602002A3 - Cyclipostin, spôsob jeho výroby a farmaceutický prípravok s jeho obsahom - Google Patents
Cyclipostin, spôsob jeho výroby a farmaceutický prípravok s jeho obsahom Download PDFInfo
- Publication number
- SK15602002A3 SK15602002A3 SK1560-2002A SK15602002A SK15602002A3 SK 15602002 A3 SK15602002 A3 SK 15602002A3 SK 15602002 A SK15602002 A SK 15602002A SK 15602002 A3 SK15602002 A3 SK 15602002A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- formula
- compound
- physiologically acceptable
- cyclipostin
- alkyl
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 229930183107 cyclipostin Natural products 0.000 title abstract description 89
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 57
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims abstract description 22
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 18
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 10
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 5
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 claims description 3
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000006728 (C1-C6) alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical group [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 claims 1
- 229940125708 antidiabetic agent Drugs 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 description 19
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 description 19
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 19
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 19
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 14
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 14
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 14
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 13
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 12
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 12
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N methanol-d1 Chemical compound [2H]OC OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- YNKNWOLTEQUDMB-UHFFFAOYSA-N cyclipostin N Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C YNKNWOLTEQUDMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 8
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 8
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- BHKGHKHKDXVQJF-UHFFFAOYSA-N cyclipostin R Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCCC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C BHKGHKHKDXVQJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- UEXFAQDUVJPKAX-UHFFFAOYSA-N cyclipostin T Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCCCC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1CCC UEXFAQDUVJPKAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- SPNRYYRSSXKVRA-UHFFFAOYSA-N cyclipostin R2 Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCC(C)C)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C SPNRYYRSSXKVRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 6
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 6
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 6
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 5
- SYOULUNKPBFPTF-UHFFFAOYSA-N cyclipostin T2 Natural products C1OP(=O)(OCCCCCCCCCCCCCC(C)C)OC(CCC)=C2C(=O)OCC21 SYOULUNKPBFPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 5
- -1 ketone compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- AEULNKPXALBIHK-UHFFFAOYSA-N cyclipostin F Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCC(=O)CC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C AEULNKPXALBIHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 4
- XUZLXCQFXTZASF-UHFFFAOYSA-N nitro(phenyl)methanol Chemical compound [O-][N+](=O)C(O)C1=CC=CC=C1 XUZLXCQFXTZASF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940127470 Lipase Inhibitors Drugs 0.000 description 3
- MSPCIZMDDUQPGJ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N-(trimethylsilyl)trifluoroacetamide Chemical compound C[Si](C)(C)N(C)C(=O)C(F)(F)F MSPCIZMDDUQPGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 3
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 3
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 3
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutyric acid Chemical compound CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000011539 homogenization buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N oxybenzone Chemical compound OC1=CC(OC)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OMPQJMDGDAAXPE-NPMWZIQKSA-N (3r,8ar)-3-methoxy-5-methyl-3-oxo-8,8a-dihydro-1h-furo[3,4-e][1,3,2]dioxaphosphepin-6-one Chemical compound O1[P@@](OC)(=O)OC[C@H]2COC(=O)C2=C1C OMPQJMDGDAAXPE-NPMWZIQKSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IGHBXJSNZCFXNK-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-7-nitrobenzofurazan Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C2=NON=C12 IGHBXJSNZCFXNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940100578 Acetylcholinesterase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004648 C2-C8 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMPQJMDGDAAXPE-UHFFFAOYSA-N Cyclophostin Natural products O1P(OC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C OMPQJMDGDAAXPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002230 Diabetic coma Diseases 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001005187 Homo sapiens Hormone-sensitive lipase Proteins 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010023379 Ketoacidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZVQOOHYFBIDMTQ-UHFFFAOYSA-N [methyl(oxido){1-[6-(trifluoromethyl)pyridin-3-yl]ethyl}-lambda(6)-sulfanylidene]cyanamide Chemical compound N#CN=S(C)(=O)C(C)C1=CC=C(C(F)(F)F)N=C1 ZVQOOHYFBIDMTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004036 acetal group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001514 alkali metal chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001617 alkaline earth metal chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 231100000693 bioaccumulation Toxicity 0.000 description 1
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 1
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000480 butynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;ethyl acetate Chemical compound ClCCl.CCOC(C)=O WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000000492 insulin antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- SQDFHQJTAWCFIB-UHFFFAOYSA-N n-methylidenehydroxylamine Chemical compound ON=C SQDFHQJTAWCFIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002560 nitrile group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003791 organic solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 125000003544 oxime group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 125000002255 pentenyl group Chemical group C(=CCCC)* 0.000 description 1
- 125000005981 pentynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000002568 propynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 125000002577 pseudohalo group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/65744—Esters of oxyacids of phosphorus condensed with carbocyclic or heterocyclic rings or ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Cyclipostin, spôsob jeho výroby a farmaceutický prípravok s jeho obsahom
Oblasť techniky
Vynález sa týka novej zlúčeniny, nazvanej cyclipostin, ktorú je možné získať kultiváciou druhov' Streptomyces HAG 004107 (DSM 13381) a jej fyziologicky prijateľných solí a jej chemických ekvivalentov. Vynález sa ďalej zaoberá spôsobom výroby cyclipostinu mikroorganizmom HAG 004107 (DSM 13381), spôsobom použitia cyclipostinu a jeho fyziologicky prijateľných solí a chemických ekvivalentov ako liečiv, obzvlášť ako inhibítorov lipáz, rovnako ako farmaceutických prípravkov obsahujúcich cyclipostin alebo jeho fyziologicky prijatelné soli alebo jeho ekvivalent.
Doterajší stav techniky
Ochorenie, ktoré môže byť obzvlášť výhodne liečené pomocou inhibítorov lipáz, je cukrovka diabetes mellitus. Daabetes mellitus je ochorenie vyznačujúce sa zvýšenou koncentráciou cukru v krvi vyplývajúce z porušenej látkovej výmeny. Porucha látkovej výmeny je spôsobená nedostatkom inzulínu alebo jeho nedostatočným pôsobením. Chýbajúce pôsobenie inzulínu vedie k nedostatočnému využitiu glukózy nachádzajúcej sa v krvi pomocou telesných buniek. Tým dochádza, rovnako ako novým vznikom glukózy z proteínov (glukoneogenéza), k zvýšeniu hladiny krvnej glukózy. Okrem toho vedie znížené pôsobenie inzulínu k tomu, že sa prostredníctvom inzulínového antagonistu - hormónu glukagónu, zvyšuje lipolýza v tukovom tkanive, a tým sa zvyšuje koncentrácia mastných kyselín v krvi. Dochádza ku ketoacidóze, to znamená zvýšenej tvorbe ketonických zlúčenín (kyseliny octovej, β-hydroxymaslovej kyseliny, acetónu). Za akútnych podmienok1 je zlá biochemická regulácia životu nebezpečná a ak nie je liečená, vedie k diabetickej kóme a na záver k rýchlej smrti. Cukrovka patrí k častým poruchám látkovej výmeny u ludí, odhaduje sa, že až 3% populácie vykazuje diabetické alebo prediabetické dispozície, a tým aj akútne ohrozenie. Je teda veľká potreba prostriedkov na liečenie diabetes mellitus.
Liečenie cukrovky sa uskutočňuje pomocou dávok inzulínu, u starších pacientov sa proti diabetes, tzv. na inzulíne nezávislom diabetes (NIDDM) alebo tiež diabetes typu II, podávajú predovšetkým sulfonylmočoviny. Princíp pôsobenia sulfonylmočovín je založený na zvýšení vylučovania inzulínu β-bunkami v slinivke brušnej, čím sa vyrovnáva množstvo inzulínu alebo inzulínovej rezistencie. Pri pokročilom ochorení sa ale rovnako musí podávať inzulín. Pôsobenie inzulínu je teda možné zhrnúť nasledovne. Tento peptidový hormón znižuje koncentráciu glukózy v krvi a vedie k zvýšeniu anabolických a zároveň k zníženiu katabolitckých procesov:
- zvyšuje transport glukózy v telesných bunkách,
- zvyšuje tvorbu glykogénu v pečeni a vo svaloch,
- potláča lipolýzu,
- zvyšuje tvorbu mastných kyselín v tukových tkanivách, a
- zvyšuje tvorbu aminokyselín v telesných bunkách takisto ako syntézu proteínov.
Jeden z najsilnejších efektov inzulínu je potlačenie lipolýzy. U cukrovky typu II nepokračuje táto regulácia lipolýzy ďalej a dochádza k zvýšenej hladine voľných mastných kyselín v krvi. Volné mastné kyseliny v krvi stimulujú glukoneogenézu v pečeni a znižujú využitie glukózy v skeletálnom svalstve. Kontrolovaná lipolýza, to znamená uvoľňovanie voľných mastných kyselín prostredníctvom tzv. hormónsenzitívnej lipázy (HSL), ktorá sa nachádza v telesných bunkách, je znižovaná inzulínom pomocou fosforylačnej kaskády. Potrebné sú teda' inhibítory, to znamená látky zabraňujúce HSL, ktoré by simulovali pôsobenie inzulínu a umožňovali by znižovanie koncentrácie krvného tuku. Takéto činidlá by boli vhodné na liečenie cukrovky typu II, na kontrolu látkovej výmeny tukov, ale tiež na liečenie ochorení súvisiacich s ďalšími zásobnými látkami. Zo všetkých uvedených dôvodov sú nové inhibítory HSL a ďalších lipáz potrebné, a teda sa hladajú.
Prekvapujúco sa zistilo, že kmeň mikroorganizmov rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381, vie produkovať nové, vysoko účinné lipázové inhibítory, ktoré blokujú pôsobenie hormónsenzitívnej lipázy vo velmi nízkych koncentráciách. Nové prírodné zlúčeniny sú organofosfáty, ktoré sa skladajú z dvojnásobného cyklického systému (bicyklus) a substituovaného uhľovodíkového reťazca, a ktoré špecificky blokujú lipázy. Kruhový základ, ktorý má len metylovú skupinu namiesto uhľovodíkového reťazca, bol prvý raz opísaný ako inhibítor acetylcholín esterázy, CGA 134 736, R. Neumann a H.H. Peter v Experientia, diel 43, stránka 1235-1237, 1987. Neskôr bola rovnaká zlúčenina opísaná ako cyclophostin (T. Kurokawa a kol., v J. Antibiotics, 46, 1315-1318, 1993). Táto štruktúrne príbuzné zlúčenina, nevykazovala žiadne vlastnosti, ako je selektívne blokovanie lipázy. Skôr známe látky vykazujú nevýhody, ako sú nedostatočne vysoké pôsobenie, vyššia toxicita a/alebo nežiaduce vedľajšie účinky.
Podstata vynálezu
Predložený vynález opisuje zlúčeniny všeobecného vzorca I
kde
R1 je
1. uhlovodíkový reťazec s 2 až 30 atómami uhlíka, ktorý môže byť priamy, rozvetvený, nasýtený alebo nenasýtený, karbocyklický alebo heterocyklický, pričom uhľovodíkový reťazec je prípadne raz alebo dvakrát substituovaný:
1.1 -OH skupinou,
1.2 =0 skupinou,
1.3 -O-Ci-Cg-alkylom, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,
1.4 -O-C2-C6~alkenylom, kde alkenyl je priamy alebo rozvetvený,
1.5 -Ci-Cg-alkylom, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,
1.6 -arylom,
1.7 -Ci-Cg-alkylbenzénom,
1.8 -difenylom,
1.9 -NH-Či-C6-alkylom, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,
1.10 -NH-C2-C6-alkenylom, kde alkenyl je priamy alebo rozvetvený,
1.11 -NH2 skupinou,
1.12 =S skupinou,
1.13 -S-Ci~C6-alkylom, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,
1.14 -S-C2-C6-alkenylom, kde alkenyl je priamy alebo rozvetvený,
1.15 halogénom, kde substituenty 1.1 až 1.15 môžu byť tiež substituované,
2. - [-aryl-(CH2) n] m skupina, kde - [-aryl-(CH2) n] m skupina je raz alebo dvakrát substituovaná podlá opisu v 1.1 až 1.15 a n a m sú nezávisle od seba celé čísla 0, 1, 2 alebo 3;
R2 j e
1. Ci-Cg-alkyl, kde alkyl je nesubstituovaný alebo substituovaný raz alebo dvakrát substituentami opísanými v 1.1 až 1.15,
2. C2-Cg-alkenyl, kde alkenyl je nesubstituovaný alebo substituovaný raz alebo dvakrát substituentami opísanými v 1.1 až 1.15,
3. Ci-C6-alkinyl, kde alkinyl je nesubstituovaný alebo substituovaný raz alebo dvakrát substituentami opísanými v 1.1 až .1.15,
E je fosfor (P) alebo síra (S),
X1, X2 a X3 sú nezávisle od seba
1. -0-,
2. -NH-,
3. -Ν=,
4. -S-, alebo
5. -CH2- a -CHR2-, vo všetkých ich stereochemických formách a zmesiach týchto foriem v ľubovoľnom pomere, rovnako ako ich fyziologicky' prijateľné soli a chemické ekvivalenty.
R1 má výhodne reťazec obsahujúci 6 až 24 uhlíkových atómov, obzvlášť výhodne 10 až 18 uhlíkových atómov. Reťazec môže byť nasýtený, napríklad -alkyl, kde alkylový zvyšok môže byť priamy alebo rozvetvený, alebo môže byť nenasýtený, napr. -alkenyl alebo -alkinyl, kde alkenyl alebo alkinylový zvyšok môže byť priamy alebo rozvetvený. R1 môže byť nesubstituovaný alebo raz alebo dvakrát rovnako alebo rôzne substituovaný substituentami opísanými v skupinách 1.1 až 1.15. Výhodné sú substituenty na uhlíkových atómoch číslo 8' až 16', obzvlášť výhodné sú pozície 10' až 14'. Substituenty 1.1 až 1.15 môžu byť tiež substituované jednou alebo viacerými skupinami vybranými zo skupiny obsahujúcej: alkohol-, aldehyd-, acetál-, ketál-, éter-, karboxyl-, ester-, amino-, nitril-, nitro-, oxím-, oxíméter a halogén.
Karbocyklický uhlovodíkový reťazec, ktorý má 2 až 30 uhlíkových atómov, označuje reťazec s 2 až 30 uhlíkovými atómami s jedným alebo viacerými, výhodne s jedným, dvoma alebo troma kruhovými systémami, obsahujúcimi výhodne 4, 5, 6 alebo 7 uhlíkových atómov. Kruhy môžu byť mono-, di- alebo tricyklické, výhodne monocyklické a môžu byť umiestnené na začiatku, v strede alebo na konci uhľovodíkového reťazca. Karbocykly môžu byť alifatickej alebo aromatickej povahy. Príkladmi sú difenyl alebo alkylbenzén.
Heterocykli'cký uhlovodíkový reťazec, ktorý má 2 až 30 uhlíkových atómov, označuje reťazec s 2 až 30 uhlíkovými atómami s jedným alebo viacerými, výhodne s jedným až troma kruhovými systémami, u ktorých je aspoň jeden atóm uhlíka nahradený hete6 roatómom, ako napríklad 0, S alebo N. Kruhy môžu byť mono-, dialebo tricyklické, výhodne monocyklické a môžu byť umiestnené na začiatku, v strede alebo na konci uhľovodíkového reťazca. Kruhy môžu byť výhodne 4-, 5-, 6- alebo 7-členné, alifatickej alebo aromatickej povahy. Príkladmi sú alkylpiperidín, substituovaný alebo nesubstituovaný.
Aryl označuje aromatický kruh alebo kruhový systém, ktorý má 6 až 14 uhlíkových atómov, výhodne 6 až 10 uhlíkových atómov, ako napríklad prípadne substituovaný alkylfenol alebo alkylnaftol. Halogén označuje chlorid, bromid, fluorid alebo pseudohalogenid ako je kyanid (nitril).
-Ci-C6-alkyl označuje priamy alebo rozvetvený alkyl, ktorý má 1, 2, 3, 4, 5 alebo 6 uhlíkových atómov, ako napríklad metyl, etyl, izopropyl, terc-butyl a hexyl.
-C2-Cg-alkenyl označuje priamy alebo rozvetvený alkyl, ktorý má 2, 3, 4, 5 alebo 6 uhlíkových atómov, ako napríklad alyl, krotyl a pentenyl.
-C?-C6-alkinyl označuje priamy alebo rozvetvený alkyl, ktorý má 2, 3, 4, 5 alebo 6 uhlíkových atómov, ako napríklad propinyl, butinyl a pentinyl.
R1 výhodne znamená:
1. -(CH2)15CH3,
2. -(CH2) 13CH(CH3)2,
3. -(CH2)hCH(0H) (CH2)3CH3,
4. - (CH2) X2CH (OH)CH2CH(CH3)2,
5. -(CH2)12CH(OH) (CH2)2CH3,
6. - (CH2) 13CH (OH) CH2CH3,
7. - (CH2) 14CH (OH) CH3,
8. -(CH2)15CH2(OH) ,
9. -(CH2)16CH3, alebo
10.0 - (CH2) i3C=OCH2CH3,
11.0 - (CH2) i2C=OCH2CH2CH3,
12.0 - (CH2) 11C=OCH2CH2CH2CH3,
13.0 -(CH2)13CH3,
14.0 -(CH2)11CH(CH3)2,
15.0 -(CH2)i4CH3, alebo
16.0 - (CH2) i2CH (CH3) 2,
R2 označuje výhodne Ci-Cg-alkyl, obzvlášť metyl, etyl alebo pro pyl.
Výhodné zlúčeniny podľa tohto vynálezu sú uvedené ďalej:
Cyclipostin A2 všeobecného vzorca IIA:
Cyclipostin D všeobecného vzorca V:
OH
O
Cyclipostin G všeobecného vzorca VIII:
Cyclipostin N všeobecného vzorca X:
Cyclipostin P všeobecného vzorca XI:
Cyclipostin R všeobecného vzorca XIII:
Cyclipostin R2 všeobecného vzorca XIIIA:
Cyclipostin S všeobecného vzorca XIV:
Cyclipostin T všeobecného vzorca XV:
všetky ich stereochemické formy a zmesi týchto foriem v ľubovoľnom zastúpení, rovnako ako ich fyziologicky prijateľné soli a chemické ekvivalenty.
Spôsob počítania uhlíkových atómov pre NMR spektrá skôr uvedených vzorcov je nasledujúci:
Samotný kruhový systém obsahuje dva asymetricky substituované atómy, uhlíkový atóm 3 a atóm fosforu. Obidva atómy môžu vykazovať konfiguráciu R- alebo S-. S prekvapením sa zistilo, že kmeň rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381 dokáže vytvárať viaceré stereoizoméry zlúčenín všeobecného vzorca I, to znamená, že kmeň dokáže syntetizovať zlúčeniny, u ktorých zaujímajú atómy C3 a P nezávisle od seba konfiguráciu R- alebo S-. Izomér s priestorovou konfiguráciou na atóme uhlíka R- a konfiguráciou S- na atóme fosforu všeobecného vzorca IA je rozšírený u kultúry rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381.
Okrem toho sa tvoria tiež cyclipostiny iných konfigurácií, ako napríklad (R,R), (S,S) alebo (S,R), ktoré prekvapujúco tiež vykazujú značný biokačný vplyv na lipázy.
Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná soľ alebo jej chemický ekvivalent sa môže pripraviť pomocou mikroorganizmu rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381 alebo jeho variantom alebo mutáciou za vhodných podmienok fermentáciou v kultivačnom médiu až do namnoženia jednej alebo viacerých zlúčenín všeobecného vzorca I v kultivačnom médiu, pričom môžu byť získané záverečnou izoláciou z kultivačného média a prípadne prevedené do formy chemického ekvivalentu a fyziologicky prijateľnej soli.
Cyclipostiny podľa tohto vynálezu môžu byť produkované druhmi Actinomycetales, výhodne pomocou druhov Streptomyces HAG 004107, DSM 13381. Druh Streptomyces HAG 004107, DSM 13381 vykazuje slonovinové sfarbenie mycely (RAL 1014) a vyznačuje sa konídioformi charakteristickými pre Streptomycéty.
Izolát sa uložil v Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg IB, D 38124 Braunschweig, Nemecko na základe budapeštianskej dohody zo 16. marca 2000 pod nasledujúcim číslom: Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381.
Namiesto kmeňa Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 sa môžu tiež použiť mutácie a varianty, ktoré syntetizujú jednu alebo viac cyclipostinových zlúčenín podľa tohto vynálezu. Takéto mutanty sa môžu: pripraviť známymi spôsobmi pomocou fyzikálnych prostriedkov, napríklad žiarením ako je ultrafialové alebo róntgenové žiarenie alebo chemickými mutáciami, napríklad pomocou etylmetánsulfonátu (EMS), 2-hydroxy-4-metoxybenzofenónu (MOB) alebo N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidínu (MNNG) .
Vynález sa týka spôsobu výroby zlúčenín všeobecného vzorca I alebo ich fyziologicky prijateľných solí, vyznačujúceho sa tým, že sa mikroorganizmus Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 alebo jeho variant alebo mutácia fermentuje v kultivačnom médiu za vhodných podmienok až do nahromadenia jednej alebo viacerých zlúčenín všeobecného vzorca I v kultivačnom médiu, ktoré sa potom z kultivačného média izolujú a prípadne prevádzajú na ich chemický ekvivalent a fyziologicky prijatelné soli.
Výhodne sa kmeň Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381, jeho mutácia a/alebo variant fermentuje v živnom roztoku (označovanom tiež ako kultivačné médium) so zdrojom uhlíka a dusíka s bežnými anorganickými sólami, až do nahromadenia cyclipostinu v kultivačnom médiu a potom sa cyclipostin izoluje z kultivačného média a prípadne· sa rozdeľuje na jednotlivé aktívne komponenty.
Fermentácia sa výhodne uskutočňuje za aeróbnych podmienok, výhodne pri teplotách od 18 do 35°C pri pH 6 až 8.
Spôsob výroby podľa tohto vynálezu sa môže použiť na fermentáciu v laboratórnom meradle (mililitre až litre) a v priemyselnom meradle (kubické metre). Všetky percentuálne označenia sú uvádzané, ak nie je uvedené inak, v hmotnostných percentách. Pomer v zmesi u kvapalín sa vzťahuje na objem, ak nie je uvedené inak.
Ako výhodné zdroje uhlíka na aeróbnu fermentáciu sa hodia asimilovatelné uhľohydráty a cukrové alkoholy, ako je glukóza, laktóza, sacharóza alebo D-manitol, rovnako ako prírodné produkty obsahujúce sacharidy ako napríklad ovsenné vločky, sójová múčka a sladový extrakt. Ako dusíkaté zásobné látky prichádzajú do úvahy aminokyseliny, peptidy a proteíny, rovnako ako produkty ich odbúrania, ako je napríklad peptón alebo tryptón, rovnako ako mäsový extrakt, extrakt z kvasníc, pomleté semená napríklad kukurice, pšenice, fazule, sóje alebo bavlníka, destilačný zvyšok z výroby alkoholu, mäsová múčka alebo kvasnicový extrakt, rovnako ako amónne soli a nitráty. Zásobný roztok môže obsahovať anorganické soli ako napríklad chloridy, uhličitany, sulfáty alebo fosfáty alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín, železa, zinku, kobaltu a mangánu.
Tvorba cyclipostinu všeobecných vzorcov II až XVA podlá tohto vynálezu prebieha obzvlášť dobre v kultivačnom médiu obsahujúcom 0,1 až 5%, výhodne 0,3 až 3% ovsenných vločiek a stopových prvkov. Údaje v percentách sú uvedené v hmotnostných percentách vztiahnutých na celé kultivačné médium.
Tvorba cyclipostinu všeobecných vzorcov VII až XVA podľa tohto vynálezu prebieha obzvlášť výhodne v kultivačnom médiu obsahujúcom 0,1 až 5%, výhodne 0,3 až 2% glycerínu a 0,2 až 5%, výhodne 0,5 až 3% sójovej múčky a 0,05 až 1,0 g/1, výhodne 0,1 až 1,0 g/1 chloridu sodného.
V kultivačnom médiu produkuje Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 zmes cyclipostinov. Podľa zloženia kultivačného média sa môžu zastúpenia jedného alebo viacerých cyclipostinov podľa tohto vynálezu líšiť. Okrem toho je možné zložením média dosiahnuť syntézu jediného cyclipostinu mikroorganizmom, takže jeden alebo viac cyclipostinov vôbec nevzniká, prípadne vzniká v množstvách menších, ako je hranica pozorovatelnosti.
Výhodne obsahuje kultúra preukázateľný cyclipostin.
Výhodne vznikajú cyclipostin A alebo P alebo P2.
Okrem cyclipostinu A až T2 (zlúčeniny všeobecného vzorca II až XVA) vytvára Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 v kultivačnom médiu ďalšie príbuzné zlúčeniny, ktoré sa od skôr uvedených zlúčenín líšia rôznymi zvyškami R1 a R2 vo všeobecných vzorcoch II až XVA. V menších množstvách sa preukázali cyclipostiny, ktoré majú skrátený alebo viac rozvetvený zvyšok R1. V kultúre Streptomyces HAG 004107, DMS 13381 sú tiež ako vedľajšie produkty preukázané oxidačné produkty (produkty hydroxylácie) .
Kultivácia mikroorganizmov sa uskutočňuje aeróbne tiež napríklad submerzným spôsobom za trepania alebo miešania v banke alebo fermentore, prípadne zavádzaním vzduchu alebo kyslíka. Môže sa uskutočňovať v teplotnom rozsahu od 18 do 35°C, výhodne od 25 do 32°C, obzvlášť pri teplotách od 26 do 30°C. pH hodnoty by mali byť v rozsahu 6 až 8, výhodne v rozsahu 6,5 až 7,8. Mikroorganizmus sa za týchto podmienok všeobecne kultivuje počas 24 až 300 hodín, výhodne 30 až 90 hodín.
Výhodne sa kultivuje vo viacerých stupňoch, t. z. že najprv sa pripraví jedna alebo viaceré predkultúry v tekutom kultivačnom médiu, ktorá(é) sa potom preočkuje do vlastného produkčného média, hlavnej kultúry, napr. v objemovom pomere 1:10. Predkultúra sa získa napr. tým, že sa mycélium naočkuje do živného roztoku a nechá sa asi 36 až 120 hodín, výhodne 48 až 96 hodín rásť. Mycélium sa môže udržiavať v kmeni asi 3 až 40 dní, výhodne 4 až 10 dní na pevnej alebo kvapalnej živnej pôde, napríklad na sladovom-kvasinkovom agare alebo agare z ovsenných vločiek.
Priebeh fermentácie sa môže sledovať pomocou pH hodnôt kultúry alebo mycélia, rovnako ako pomocou chromatografických metód, ako napríklad tenkovrstvová chromatografia alebo vysokotlaková kvapalinová chromatografia alebo pomocou sledovania biologickej aktivity. Cyclipostiny pódia tohto vynálezu sú z malej časti obsiahnuté tiež vo filtráte kultúry. Spôsob čistenia opi15 saný v nasledujúcom texte slúži na čistenie cyclipostinu podľa tohto vynálezu, výhodne na čistenie cyclipostinu A a P.
Izolácia, prípadne čistenie cyclipostinov podľa tohto vynálezu z kultivačného média sa uskutočňuje známymi spôsobmi s ohľadom na chemické, fyzikálne a biologické vlastnosti prírodných látok. Na testovanie koncentrácie cyclipostinu v kultivačnom médiu alebo v jednotlivých izolovaných frakciách sa môže použiť tenkovrstvová chromatografia, napríklad na silikagéli s využitím zmesi dichlórmetán-etylacetát alebo chloroform-metanol (napríklad v pomere 98:1) ako elučného činidla alebo pomocou HPLC. Detekcia pri delení pomocou tenkovrstvovej chromatografie sa môže uskutočňovať napríklad pomocou farbiacich činidiel, ako je molybdátofosforečná kyselina alebo pomocou pár I2, pričom množstvo vzniknutej látky sa meria porovnaním so štandardným roztokom.
Pri izolácii cyclipostinu podľa tohto vynálezu sa mycélium najskôr oddelí od kultivačného média obvyklým spôsobom a potom sa cyclipostin extrahuje z bunkovej hmoty pôsobením rozpúšťadla miešatelného s vodou. Fáza organického rozpúšťadla obsahujúceho cyclipostin podľa tohto vynálezu sa následne koncentruje vo vákuu a čistí sa ďalej podľa uvedeného opisu.
Filtrát kultúry sa prípadne spojí s koncentrátom mycáliového extraktu a extrahuje sa s vhodným rozpúšťadlom, nemiešatelným s vodou, ako napríklad n-butanolom alebo etylacetátom. Na záver sa oddelená organická fáza skoncentruje vo vákuu a rozpustí sa v zodpovedajúcom objeme zmesi voda/metanol 1/30.
Ďalšie čistenie jedného alebo viacerých cyclipostinov podľa tohto vynálezu sa uskutočňuje pomocou chromatografie na vhodných materiáloch, výhodne napríklad na molekulárnych sitách, normálnych fázových nosičoch ako napríklad na silikagéli, oxide hlinitom, ionomeničových živiciach alebo adsorbčných živiciach ako napríklad na obrátenej (reverznej, RP) fáze. S pomocou týchto chromatografii sa cyclipostiny rozdelia. Chromatografia cycli16 postinov sa uskutočňuje s organickým rozpúšťadlom alebo so zmesou vodného a organického rozpúšťadla.
Pod termínom zmes vodného alebo organického rozpúšťadla sa myslia všetky rozpúšťadlá miešatelné s vodou, výhodne metanol, propanol a acetonitril, v koncentráciách rozpúšťadla 10 až 100%, výhodne 60 až 90% rozpúšťadla' alebo tiež pufrované vodné roztoky, ktoré sú miešatelné s organickými rozpúšťadlami. Použité pufry sú rovnaké ako je opísané skôr.
Rozdelenie cyclipostinov je založené na ich rozdielnej polarite a uskutočňuje sa pomocou chromatografie na reverznej fáze, napríklad MCI® (adsorbčná živica od firmy Mitsubishi, Japonsko) alebo Amberlite® (Tosohaas), na ďalších hydrofóbnych materiáloch ako napríklad na RP-8- alebo RP-18-fázach. Okrem toho môže byť delenie uskutočňované s pomocou chromatografie na normálnej fáze, napríklad silikagéli, oxide hlinitom a podobne.
Chromatografia cyclipostinov sa uskutočňuje s pufrovanými alebo nasýtenými vodnými roztokmi alebo zmesou vodných roztokov s alkoholmi alebo inými rozpúšťadlami miešatelnými s vodou. Ako organické rozpúšťadlá sa používajú propanol a acetonitril. Pod pojmom pufrovaňé alebo nasýtené vodné roztoky sa rozumie napr. voda, fosfátový pufor, acetát amónny, citrátový pufor v koncentráciách od 1 mM do 0,5 M rovnako ako kyselina mravčia, kyselina octová, kyselina trifluóroctová alebo iné bežne používané kyseliny známe odborníkom v odbore, výhodne v koncentráciách od 0,01 do 3%, výhodne 0,1%.
Chromatografia gradientom začína so 100% vodným pufrom a končí so 100% rozpúšťadlom, výhodne sa používa lineárny gradient od 50 do 100% 2-propanolu alebo acetónu.
Alternatívne sa môže použiť gélová chromatografia alebo chromatografia na hydrofóbnej fáze.
Gélová chromatografia sa uskutočňuje na polyakrylamidových géloch alebo géloch zo zmesových polymérov, ako napríklad Biogel-P2® (firma Biograd), Fractogel TSK HW 40® (firma Merck, Nemecko alebo Toso Haas, OSA) alebo Sephadex® (firma Pharmacia, Uppsala, Švédsko).
Poradie chromatografii je navzájom zameniteľné.
I
Ďalšia velmi dôležitá metóda čistenia cyclipostinu je kryštalizácia. Cyclipostiny kryštalizujú z roztokov organických rozpúšťadiel a zmesí vody s organickými rozpúšťadlami. Kryštalizácia sa uskutočňuje známymi postupmi, ako napríklad koncentrovaním alebo ochladením nasýteného roztoku cyclipostinu.
Cyclipostiny podľa tohto vynálezu sú stabilné v tuhom stave alebo v kvapalnom stave a v roztoku pri hodnotách pH od 4 do 8, obzvlášť v rozsahu 5 až 7, a dovoľujú spracovanie do galenických foriem.
Vynález zahŕňa ďalšie obvyklé chemické ekvivalenty zlúčenín všeobecného vzorca I, ktoré vykazujú nepatrné chemické rozdiely a ktoré majú rovnaké účinky alebo sa za miernych podmienok premieňajú na zlúčeniny podľa tohto vynálezu. K známym ekvivalentom patrí napríklad ester a éter, rovnako ako produkty oxidácie, produkty redukcie a produkty hydrogenácie zlúčenín podľa tohto vynálezu.
Esterové a éterové deriváty, produkty oxidácie, produkty redukcie a produkty hydrogenácie sa pripravujú spôsobmi opísanými v literatúre, napríklad v Advanced Organic Synthesis, 4. vydanie, J. March, John Wiley & Sons., 1992.
Tento vynález zahŕňa všetky stereoizomérne formy zlúčenín všeobecného vzorca I až XVA. Zlúčeniny všeobecných vzorcov I až XVA obsahujú asymetrické centrá, ktoré môžu mať navzájom nezávisle konfiguráciu S- alebo R-. K vynálezu patria všetky možné enantioméry a diastereoizoméry, rovnako ako zmesi dvoch alebo viacerých stereoizomérnych foriem, napríklad zmesi enantiomérov a/alebo diastereoizomérov vo všetkých pomeroch. Enantioméry sú tiež v enantiomérnych formách, rovnako ako ľavotočivé tak aj pravotočivé antipódy, R- a S-konfigurácie, vo forme racemátov a vo forme zmesí obidvoch enantiomérov vo všetkých pomeroch predmetom tohto vynálezu. Predmetom vynálezu sú tiež cis/trans izoméry, rovnako ako cis-forma, prípadne trans-forma alebo, zmesi týchto foriem vo všetkých pomeroch.
Na základe ich vynikajúcich farmakologických vlastností sú zlúčeniny pódia tohto vynálezu vhodné na použitie ako liečivá v humánnej a/alebo veterinárnej medicíne. Blokujú lipázy a sú vhodné na liečenie ochorení vyvolaných poruchou látkovej výmeny, ktoré majú príčiny v poruchách výmeny lipidických látok. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá tohto vynálezu vykazujú prekvapujúci blokovací účinok na hormónsenzitívnu lipázu, HSL, alosterický enzým v adipocytoch, ktorý je blokovaný inzulínom a je zodpovedný za odbúranie tukov v tukových bunkách a tým aj za kolobeh tukového podielu v krvnom toku. Inhibícia tohto enzýmu zodpovedá tiež inzulínu podobnému pôsobeniu zlúčenín podlá tohto vynálezu, čo nakoniec vedie k zníženiu obsahu voľných mastných kyselín- v krvi a krvného cukru. Môžu byť tiež nasadené pri poruchách látkovej výmeny ako napríklad pri na inzulíne nezávislom diabetes mellitus, u diabetického syndrómu a pri priamom poškodení pankreasu.
Vynález zahŕňa tiež farmaceutické prípravky, obsahujúce jeden alebo viac cyclipostinov podľa tohto vynálezu a/alebo ich chemických ekvivalentov. Výhodne sa používajú v zmesi s vhodnými pomocnými látkami alebo nosičmi. Ako nosný materiál sa používajú všetky farmakologicky prijateľné nosiče a/alebo pomocné látky.
Vynález opisuje ďalej spôsob výroby liečiv pódia tohto vynálezu, vyznačujúci sa tým, že sa aspoň jedna zlúčenina podľa tohto vynálezu zmieša s vhodným farmaceutický prijateľným nosičom a prípadne ďalšou vhodnou účinnou látkou, prídavnou látkou alebo pomocnou látkou vo forme vhodnej na podávanie.
Liečivé prípravky podlá tohto vynálezu sa všeobecne podávajú vo forme orálnej, lokálnej alebo parenterálnej, ale sú tiež principiálne možné ako rektálne prostriedky. Vhodné tuhé alebo kvapalné galenické formy sú napríklad granulát, prášok, tablety, dražé, (mikro)kapsuly, sirupy, emulzie, suspenzie, aerosóly, kvapky alebo injikovatelné roztoky vo forme ampúl, rovnako ako preparáty so spomalenou formou uvoľňovania, u ktorých sa používa obvyklý nosič a prídavné alebo pomocné činidlo, ako sú napríklad dezintegrátory, spojivá, poťahovacie činidlá, napučiavacie látky, mastencové múčky alebo mazadlá, chuťové látky, sladidlá alebo rozpúšťadlá. Ako často používaný nosič alebo pomocnú látku môžeme uviesť napr. uhličitan horečnatý, oxid titaničitý, laktózu, manitol a ďalšie cukry, mastenec, želatínu, škroby, vitamíny, celulózu a jej deriváty, živočíšne alebo rastlinné oleje, polyetylénglykoly a rozpúšťadlá, ako je sterilná voda, alkohol, glycerín a viacsýtne alkoholy.
Prípadne môže byť dávkovacia forma na orálne podávanie pripravená ako mikrokapsuly, s cielom spomaliť uvoľňovanie alebo predĺžiť ho na dlhší čas, ako napríklad pomocou potiahnutia alebo.vložením účinnej látky do častice vhodného polyméru, vosku alebo podobne.
Výhodne sa farmaceutické prípravky zhotovujú v dávkovacích formách, kde každá jednotka obsahuje ako aktívnu zložku známu dávku jednej alebo viacerých cyclipostinových zlúčenín podľa tohto vynálezu a/alebo ich chemického derivátu. U tuhých dávkovacích foriem, ako sú tablety, kapsuly a čapíky, môžu tieto dávky obsahovať až 200 mg, výhodne asi 0,1 až 100 mg a u injikovatelných roztokov vo forme ampúl až 200 mg, výhodne asi 1,0 až 100 mg denne.
Podávané denné dávky sú závislé od telesnej hmotnosti, veku, závažnosti a stavu pacientov. Podľa podmienok sa môžu podávať nižšie alebo tiež vyššie denné dávky. Podávanie dennej dávky môže byť uskutočňované pomocou jedinej dávkovacej formy alebo pomocou viacerých menších dávkovacích foriem alebo pomocou viacnásobne rozdelenej dávky v určitých intervaloch. Vynález tiež zahŕňa farmaceutické prípravky, obsahujúce jeden alebo viac cyclipostinov a/alebo jeho chemických ekvivalentov podlá tohto vynálezu. Výhodné je použitie v zmesi s vhodnou pomocnou látkou alebo nosičom. Ako nosič sa môže použiť akýkoľvek farmakologicky prijateľný nosič a/alebo pomocná látka.
Pôsobenie zlúčenín všeobecného vzorca I podľa tohto vynálezu sa skúša nasledujúcim enzýmovým systémom:
Príprava enzýmu
Príprava čiastočne čisteného HSL
Izolované krysie tukové bunky sa získali z tukového tkaniva u samčích pohlavných žliaz neošetrovaných ludských krýs (wistar, 220-250 g) pomocou postupu spracovania s kolagenázou, publikovanom napr. v: B.S. Nillson a kol., Anál. Biochem. 158, 1986, 399407; G.Frederikson a kol., J. Biol. Chem. 256, 1981, 6311-6320; H. Tornquist a kol., J. Biol. Chem., 251, 1976, 813-819). Tukové bunky z 10 krýs sa premyli trikrát flotáciou, každý raz 50 mi homogenizačného pufra (25 ml Tris/HCl, pH 7,4, 0,25 M sacharóza, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 10 μς/πιΐ leupeptínu, 10 μς/ιηΐ antipatínu, 20 μg/ml pepstatínu) a rozpustili sa v 10 ml homogenizačného pufra. Tukové bunky sa dali do homogenizátora typu teflon v skle (Braun-Melsungen) a homogenizovali pri 1500 otáčkach za minútu pri 15°C. Homogenizát sa centrifugoval (Sorwall SM24-Rórchen, 5000 otáčok za minútu, 4°C). Fáza medzi hore ležiacou vrstvou tuku a tuhou peletou sa odobrala a znova centrifugovala. Takto získaná fáza sa znova centrifugovala (Sorwall SM24-Rôrchen, 20000 otáčok za minútu, 45 minút, 4°C). Medzifáza sa odobrala a nechala sa reagovať s 1 g heparínu na sepharose (Pharmacia-Biotech, CL-6B, 5 x premyla s 25 mM Tris/HCl, pH 7,4, 150 mM NaCl). Po inkubácii počas 60 minút pri 4°C (pretrepané v intervaloch 10 minút) sa reakčná zmes centrifugovala. Kvapalina sa upravila prídavkom kyseliny octovej na pH 5,2 a inkubovala 30 minút pri 4°C. Zrazenina sa centrifugovala (Sorwall SM34, 12000 otáčok za minútu, 10 minút, 4°C) a zvyšok sa suspendoval v
2,5 ml 20 mM Tris/HCl, pH 7,0, 1 mM EDTA, 65 mM NaCl, 13% sacharózy, 1 mM DTT, 10 μg/ml leupeptín/pepstatín/antipatín. Suspenzia sa dialyzovala cez noc proti roztoku 25 mM Tris/HCl, pH 7,4, 50% glycerín, 1 mM DTT, 10 pg/ml leupeptín, pepsatín, antipatín a potom dala na stĺpec hydroxyapatitu (0,1 g na 1 ml suspenzie, ekvilibrovanom s 10 mM fosfátu draselného, pH 7,0, 30% glycerínu, 1 mM DTT). Stĺpec sa premyl so štyrmi objemami ekvilibračného pufra s rýchlosťou toku od 20 do 30 ml/hod. HSL sa eluoval jedným objemom ekvilibračného pufra obsahujúceho 0,5 M fosfátu draselného a potom dialyzoval (pozri skôr) a 5 krát až 10 krát koncentroval pomocou ultrafiltrácie (Amicon Diaflo PM 10 filter) pri 4°C. Čiastočne čistený HSL sa môže prechovávať 4 až 6 týždňov pri teplote -70°C.
Stanovenie
Na prípravu substrátu sa zmiešalo 25-50 pCi [3H]trioleoylglycerínu (v toluéne), 6,8 μπιοί neznačeného trioleoylglycerínu a 0,6 mg fosfolipidu (fosfatidylcholín/fosfatidylinositol
3:1 w/v), zmes sa sušila pomocou N2 a potom rozpustila v 2 ml 0,1 M KPi (pH 7,0) s opracovaním pomocou ultrazvuku (Branson 250, mikrostriekačka, nastavenie 1-2, 2x1 min. v 1 minútových intervaloch). Po pridaní 1 ml KPi a obnovenom pôsobení ultrazvuku (4 x 30 sekúnd, v ľade po 30 sekundových intervaloch) sa pridal 1 ml 20% BSA (bovinný sérový albumín) (v KPi) (výsledná koncentrácia trioleoylglycerínu 1,7 mM). Na reakciu sa pipetovalo 100 μΐ roztoku substrátu k 100 μΐ HSL roztoku (HSL pripravený ako je uvedené skôr, zriedený v 20 mM KPi, pH 7,0, mM EDTA, 1 mM DTT, 0,02% BSA, 20 μρ/πιΐ pepstatín, .10 pg/ml leupeptín) a inkubovalo sa 30 minút pri 37°C. Po prídavku 3,25 ml zmesi metanol/chloroform/heptán (10:9:7) a 1,05 ml 0,1 M K2CC>3,
0,1 M kyseliny boritej (pH 10,5) sa všetko dobre zmiešalo a na záver centrifugovalo (800 x g, 20 min.). Po oddelení fáz sa odo22 bral jeden ekvivalent hornej fázy (1 ml) a odmerala sa rádioaktivita pomocou kvapalinového scintilačného zariadenia.
Vyhodnotenie
Látky sa skúšali skôr opísaným spôsobom v štyroch nezávislých meraniach. Blokovanie enzymatickej aktivity HSL pomocou testovanej zlúčeniny sa určovalo porovnaním s nechránenou kontrolnou reakciou. Výpočet hodnoty IC50 sa uskutočnil pomocou krivky s aspoň 10 koncentráciami testovanej zlúčeniny. Na analýzu dát sa použil softwarový paket Graphit, Elsevier-Biosoft. V tomto teste vykazovali zlúčeniny podľa tohto vynálezu nasledujúce účinky:
Cyclipostin A, P, P2 a R blokujú lipolýzu u krysích adipocytov s IC50 - ~0,2 μΜ, inhibujú ľudskú hormón-senzitívnu lipázu (HSL) s trioleoylglycerínom ako substrátom: IC50 = ~0,07 až 0,5 μΜ. HSL z krýs sa blokovalo s NBD (4-chlór-7-nitrobenzo-2-oxa-l, 3-diazol) ako substrátom, v koncentráciách od 4 nM do 10 nM.
Cyclipostin chráni hormónsenzitívnu lipázu (HSL), rovnako ako mono-acyl-glycerín-lipázu krysieho extraktu v submikromolárnych koncentráciách.
V nasledujúcich príkladoch je ďalej vysvetlený tento vynález. Uvedené percentuálne údaje sú hmotnostné percentá. Obsah zmesí u kvapalín je udávaný v objemových percentách, ak nie je uvedené inak.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Príprava glycerínovej kultúry Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381
100 ml živného roztoku (sladový extrakt 2,0%, kvasnicový ex23 trakt 0,2%, glukóza 1,0%, (NH4)2HPO4 0,05%, pH 6,0) v sterilnej 300 ml Erlenmeyerovej banke sa naočkovalo s kmeňom Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 a inkubovalo 7 dní pri teplote 28°C a 180 otáčkach za minútu na rotačnej trepačke. 1,5 ml tejto kultúry sa na záver zriedilo s 1,5 ml 99% glycerínu a uložilo pri 20°C.
Príklad 2
Príprava predkultúry Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 v Erlenmeyerovej banke
Sterilná Erlenmeyerova banka sa naplnila so 100 ml nasledujúceho živného roztoku: 15 g/1 glukózy, 15 g/1 sójovej múčky, 5 g/1 zrna, 2 g/1 CaCO3 a 5 g/1 NaCl a naočkovala pomocou jednej skúmavky (rovnaký živný roztok s 2% agaru) rastovej kultúry na šikmom agare alebo s 1 ml glycerínovej kultúry (pozri Príklad 1) a trepačka sa prevádzkovala pri 180 otáčkach za minútu pri 28°C. K naočkovaniu 10 a 200 1 fermentora stačí 48 až 96 hodín stará submerzná kultúra (očkovacie množstvo asi 10%) z rovnakého živného roztoku.
Príklad 3
Príprava kultúry Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 v Erlenmeyerovej banke
Sterilná 300 ml Erlenmeyerova banka sa naplnila 100 ml nasledujúceho živného roztoku: 20 g/1 psích ovsenných vločiek,
2,5 ml roztoku stopových prvkov, a naočkovala s 10% očkovacím množstvom predkultúry (Príklad 2) a inkubovala na trepačke pri 180 otáčkach za minútu pri 28°C. Kultúra sa mohla po dvoch dňoch očkovať do fermentora na výrobu cyclipostinu. Roztok stopových prvkov mal nasledujúce zloženie:
g/1 CaCl2 x 2H2O, g/1 Fe(III)-citrát,
0,2 g/1 MnSO4 x H2O,
0,1 g/1 ZnCl2,
Ο,025 g/1 CuSO4 x 5H2O,
0,02 g/1 Na-tetraborát,
0,004 g/1 CoCl2 x 6H2O,
0,01 g/1 Na-molybdát.
Príklad 4 !
Produkcia cyclipostinov všeobecného vzorca II až IX
200 1 fermentor sa naplnil 90 1 živného roztoku za nasledujúcich podmienok:
Živné médium:
g/1 ovsenných vločiek vo vode,
2,5 ml/1 stopových prvkov, pH 7,8 (pred sterilizáciou).
Živný roztok sa 30 minút sterilizoval pomocou tepla a po ochladení sa naočkovalo 5% objemu očkovacieho materiálu, získaného podlá Príkladu 3.
Roztok stopových prvkov:
g/1 CaCl2 x 2H2O, g/1 Fe(III)-citrát,
0,2 g/1 MnSO4 x H2O,
0, 1 g/1 ZnCl2,
0,025 g/1 CuSO4 x 5H2O,
0,02 g/1 Na-tetraborát,
0,004 g/1 CoCl2 x 6H2O,
0,01 g/1 Na-molybdát.
Trvanie procesu: 72 hodín.
Teplota inkubácie: 27°C.
Rýchlosť miešania: 65 otáčok za minútu.
Zavzdušňovanie: 6 m3 vzduchu za hodinu.
Fermentácia sa uskutočňovala bez prídavku činidiel na potlačenie tvorby peny. Produkčné maximum sa dosiahlo po 48 hodinách.
Príklad 5
Produkcia cyclipostinov všeobecného vzorca X až XVA
200 1 fermentor spracováva 100 1 obsah za nasledujúcich podmienok:
Živné médium:
5g/l glukózy;
20g/l glycerínu;
20g/l sójovej múčky;
5g/l kvasnicového extraktu
3g/l chloridu sodného;
2,5 ml/1 roztoku stopových prvkov pH 7,0 (pred sterilizáciou)
Trvanie procesu: 72 hodín.
Teplota inkubácie: 27°C.
Rýchlosť miešania: 65 otáčok za minútu.
Zavzdušňovanie: 6 m3 vzduchu za hodinu.
Fermentácia sa uskutočňuje bez pridania činidiel na potlačenie tvorby peny. Maximum produkcie sa dosiahne po cca 48 hodinách.
Príklad 6
Izolácia cyclipostinovej zmesi z kultivačného média Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381.
Po ukončení fermentácie Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 sa 100 1 kultivačnej zmesi z fermentora, získanej podlá príkladu 4 za prídavku asi 2% filtračného činidla (napríklad Celit®) sfiltrovalo a bunková hmota (10 1) sa extrahovala so 40 1 metanolu. Metanolický roztok účinnej látky sa · zbavil mycélia pomocou filtrácie a skoncentroval sa vo vákuu. Koncentrát sa nalial na pripravený stĺpec 7 1 ®MCI GEL, CHP20P. Eluoval sa s gradientom vody a propan-2-olu. Výtok z kolóny (20 litrov za hodinu) sa zachytával vo frakciách (po 10 litrov) a frakcie obsahujúce cyclipostiny (frakcie 19 až 21) sa skoncentrovali vo vákuu. Frakcie sa skúmali pomocou HPLC (pozri Príklad 6). Frakcia 19 obsahovala cyclipostin A až E, rovnako ako ich
izoméry, frakcia 20 | obsahovala | cyclipostin F a | jej izoméry, |
frakcia 21 obsahovala ako ich izoméry. | cyclipostin | N, P, P2, Q, R, | S a T rovnako |
Príklad 7 HPLC analýza cyclipostinov | |||
Vysokotlaková | kvapalinová | chromatografia | HPLC-analýza |
cyclipostinov sa uskutočňovala pomocou zariadenia HP 1100® s kolónou YMC-Pack Pro C18® [AS-303, 250 x 4,6 mm, S-5 pm, 120°C] . Rýchlosť toku bola 1 ml/minúta, teplota kolóny 40°C. Kolóna sa eluovala gradientom 0,05% trifluóroctovej kyseliny v acetonitrile. Čistý acetonitril sa dosiahol po 11 minútach a potom sa kolóna eluovala izokraticky len s týmto rozpúšťadlom. Detekcia sa uskutočňovala pomocou merania absorpcie ultrafialového svetla pri 210 nm. Za týchto podmienok mali cyclipostiny nasledujúce
retenčné časy: | |||
Cyclipostin | A | 12,7 | minút |
Cyclipostin | A 2 | 12,6 | minút |
Cyclipostin | F | 13,2 | minút |
Cyclipostin | N | 15, 9 | minút |
Cyclipostin | P | 17,7 | minút |
Cyclipostin | P 2 | 17, 3 | minút |
Cyclipostin | Q | 18,3 | minút |
Cyclipostin | R | 16,7 | minút |
Cyclipostin | R2 | 16, 4 | minút |
Cyclipostin | S | 18,5 | minút |
Cyclipostin | T | 19,1 | minút a |
Cyclipostin | T 2 | 18,7 | minút. |
Príklad 8
Získanie čistého cyclipostinu A a A2
Frakcia 19, získaná podľa Príkladu 6, sa odparila vo vákuu, pridal sa 1 g kontrastného činidla rozpusteného v zmesi voda-metanol (1:1) a zmes sa naniesla na kolónu Nucleoprep 100-5 C18 AB® (21 x 250 mm)·. Kolóna sa eluovala s gradientom 50% acetonitrilu v 0,01% trifluóroctovej kyseline až do 100% acetonitrilu. Prietok sa nastavil na 50 ml za minútu. Výstup z kolóny sa skúmal meraním absorpcie svetla pri 210 nm, čím sa testovalo blokačné pôsobenie na lipázu. Odoberali sa frakcie s veľkosťou 60 ml. Frakcie číslo 34 a 35 obsahovali cyclipostin A, vo frakciách 41 až 44 bol cyclipostin A2. Tieto frakcie sa spojili, odparili vo vákuu a potom oddelili na kolóne SP 250/10 Nucleosil 100-5 C18 HD® (21 x 250 mm) . Ako gradient sa použil 50 až 66% acetonitril v 0,01% trifluóroctovej kyseline, pH hodnota roztoku sa prikvapkaním roztoku hydroxidu amónneho nastavila na 4,0. Frakcie obsahujúce čisté zlúčeniny sa spojili a odparili do sucha. Získalo sa 5,4 mg čistého cyclipostinu A vo forme voskovitej látky a 3 mg cyclipostinu A2 vo forme oleja.
Príklad 9
Charakterizácia cyclipostinu A
Vzhľad: Látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatial čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
IR-pásy: 1752 a 1671 cm'1.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie v matrici nitrobenzylalkohol/LiCl sa našla nasledujúca molekulárna hmotnosť: 467,2757 amu, zodpovedajúca sumárnemu vzorcu cyclipostinu A-Li C23H41O7PLÍ. Z toho vyplýva sumárny vzorec pre cyclipostin A C23H41O7P, molekulárna hmotnosť 460.
Pomocou elektrónsprejovej hmotnostnej spektrometrie v poži28 tívnom ionizačnom móde (ESI, pozitívne) sa našli piky 461 amu, zodpovedajúce nájdenému (M+H)+, okrem toho charakteristický pík pri 221 amu, zodpovedajúci C7H10O5P. V ESI negatívnom móde sa našli piky 459 amu (M-H)- (C16H34O5P) a 219 amu (C7HSO6P) · Na určenie polohy alkoholovej skupiny sa zlúčenina derivatizovala pomocou N-metyl-N-trimetylsilyltrifluóracetamidu a vzorka sa skúmala pomocou hmotnostnej spektrometrie využívajúcej elektrónovú ionizáciu. Vzniká trimetylsilyl derivát:
s hmotnosťou 554 amu. Poloha silylovanej hydroxyskupiny sa preukázala pomocou intenzívnych iónov 497 (α-štiepenie) a 159 amu (α-štiepenie).
NMR signály: pozri Tabulka 1
Tabulka 1:
!H a 13C NMR chemické posuny cyclipostinu A v metanol-d^ pri 300 K
3H | 13C | |
1. | 171,08(1,4 Hz)b) | |
2 | - | 114,61(3,4 Hz)bl |
3 | 3,87 | 40,75 |
4 | 4,46/3,86 | 66,04 |
5 | 4,31/4,25 | 69,39 (6,0 Hz)b) |
6 | - | 161,47 (8,0 Hz)b) |
7 | 2,4 0 | 17, 89 (4, 6 Hz)bl |
ľ | 4,25 | 71, 61 (6, 6 Hz)b) |
2' | 1,73 | 31,16(6,6 Hž)b> |
3' | 1, 41 | 26,39 |
n' | 3,49 | 72,45 |
n±l | 1,46-1,33 | 38,44, 38,15 |
4'—14' (a) | 1,37-1,26 | 30,85-30,58 |
15' | 1,34 | 23,84 |
16' | 0,91 | 14,43 |
a) okrem n a n+1.
b) v zátvorke uvedené 13C/31P interakčné konštanty.
Príklad 10
Charakterizácia cyclipostinu B
Cyclipostin B sa pripravil podľa opisu v Príklade 8 pre cyclipostin A, viacnásobným opakovaním chromatografického postupu a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 8.
Vzhlad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatial čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou elektrónsprejovej hmotnostnej spektrometrie v pozitívnom ionizačnom móde (ESI, pozitívne) sa našli piky 461 arou, zodpovedajúce nájdenému (M+H)+, okrem toho charakteristický pík pri 221 amu, zodpovedajúci C7Hi0O6P. V ESI negatívnom móde sa našli piky 459 amu (M-H), 337 amu (C16H34O5P) a 219 amu (C;HgO6P) . Na určenie polohy alkoholovej skupiny sa zlúčenina derivatizovala pomocou N-metyl-N-trimetylsilyltrifluóracetamidu a vzorka sa skúmala pomocou hmotnostnej spektrometrie využívajúcej elektrónovú ionizáciu. Vzniká trimetylsilyl derivát s hmotnosťou 554 amu:
,OSí(CH3)3 „A 0 OSi(CH3)3
Poloha silylovanej hydroxyskupiny sa preukázala pomocou intenzívnych iónov pti 511 amu (α-štiepenie) a 145 amu (aštiepenie).
Sumárny vzorec cyclipostinu B: C23H41O7P, molekulová hmotnosť: 460.
Príklad 11
Charakterizácia cyclipostinu C
Cyclipostin C sa pripravil podľa opisu v Príklade 8 . pre cyclipostin A, viacnásobným opakovaním chromatografického postupu a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 8.
Vzhľad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatial čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou elektrónsprejovej hmotnostnej spektrometrie v pozitívnom ionizačnom móde (ESI, pozitívne) sa našli piky 461 amu, zodpovedajúce nájdenému (M+H)+, okrem toho charakteristický pík pri 221 amu, zodpovedajúci C7H10O6P. V ESI negatívnom móde sa našli piky 459 amu (M-H)', 337 amu (C16H34O5P) a 219 amu (C7H8C>6P) . Na určenie polohy alkoholovej skupiny sa zlúčenina derivatizovala pomocou N-metyl-N-trimetylsilyltrifluóracetamidu a vzorka sa skúmala pomocou hmotnostnej spektrometrie využívajúcej elektrónovú ionizáciu. Vzniká trimetylsilyl derivát s hmotnosťou 554 amu:
Poloha silylovanej hydroxyskupiny sa preukázala pomocou intenzívnych iónov pri 525 amu (α-štiepenie) a . 131 amu (aštiepenie).
Sumárny vzorec cyclipostinu B: C23H41O7P, molekulová hmotnosť: 460.
Príklad 12
Charakterizácia cyclipostinu F
Frakcia 20, získaná podľa Príkladu 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin F sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu a charakterizoval sa rovnako ako y Príklade 9.
Retenčný čas: 13,2 min.
Vzhľad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatial čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou elektrónsprejovej hmotnostnej spektrometrie v pozitívnom ionizačnom móde (ESI, pozitívne) sa našli piky 459 amu, zodpovedajúce nájdenému (M+H)+, okrem toho charakteristický pík pri 221 amu, zodpovedajúci C7H10O6P. V ESI negatívnom móde sa našli piky 457,6 amu (M-H)', 336 amu (C16H32O5P) a 219 amu (C7HsO6P) .
Sumárny vzorec cyclipostinu B: C23H39O7P/ molekulová hmotnosť: 458.
Príklad 13
Charakterizácia cyclipostinu P
Frakcia 21, získaná podľa Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 9 a cyclipostin P sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (210 mg) a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 9. Cyclipostin P sa kryštalizoval rozpustením 210 mg v 3 ml propan-2-olu a 13 ml acetonitrilu a prídavkom 8 ml vody.
Retenčný čas: 17,7 min.
Vzhlad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatial čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
IČ pásy: 2917, 2852, 1753, 1671, 1471, 1214, 996 a 832 cm-1.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie v matrici nitrobenzylalkoholu sa našla nasledujúca molekulárna hmotnosť: 445,2717 amu, zodpovedajúca (M+H)+ sumárnemu vzorcu cyclipostinu P: C23H42O6P. Z toho vyplýva sumárny vzorec pre cyclipostin P C23H4iO6P, molekulárna hmotnosť 444. Pomocou elektrčnsprejovej hmotnostnej spektrometrie v pozitívnom ionizačnom móde (ESI, pozitívne) sa našli piky 445 amu, zodpovedajúce nájdenému (M+H)+, okrem toho charakteristický pík pri 221 amu, zodpovedajúci C7H10O6P. V ESI negatívnom módu sa našli piky 443 amu (M-H), 321 amu (C16H32O4P) a 219 amu (C7H8O6P) .
NMR dáta sú uvedené v Tabuľke 2.
Tabulka 2: Chemické posuny cyclipostinu P v MeOD pri 300 K.
ΣΗ | 13C | |
1 | - | 171,08 |
2 | - | 114,60(3,0 Hz)al |
3 | 3,87 . | 40,74 |
4 | 4,47/3,85. | 66, 05 |
5 | 4,30/4,25 | 69,40(6,0 Hz)a) |
6 | - | 161,47(8,0 Hz)a) |
7 | 2,40 | 17,90 (4,6 Hz)a> |
ľ | 4,24 | 71,62 (6, 9 Hz) a) |
2' | 1,73 | 31,16(6,3 Hz)a) |
3' | 1,41 | 26, 38 |
4'—13' | 1,34-1,29 | 30,76-30,11 |
14' | 1,34-1,29 | 33,07 |
15' | 1,31 | 23,72 |
16' | 0,89 | 14,42 |
a) V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 14
Charakterizácia cyclipostinu P2
Frakcia 21, získaná podľa Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin P sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (130 mg) a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 9.
Retenčný čas: 17,1 min.
Vzhľad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatiaľ čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie v matrici nitrobenzylalkoholu sa našla nasledujúca molekulárna hmotnosť: 445,2721 amu, zodpovedajúca (M+H)+ sumárnemu vzorcu cyclipostinu P: C23H42O6P. Z toho vyplýva sumárny vzorec pre cyclipostin P2 C23H41O6P, molekulárna hmotnosť 444. Pomocou elektrosprej hmotnostnej spektrometrie v pozitívnom ionizačnom móde (ESI, pozitívne) sa našli piky 445 amu, zodpovedajúce (M+H)+, okrem toho charakteristický pík pri 221 amu, zodpovedajúci C7H10O6P. V ESI negatívnom móde sa našli piky 443 amu (M-H), 321 amu (ΟιθΗ32θ4Ρ) 3 219 amu (Ο^ΗθΟςΡ) .
NMR dáta sú uvedené v Tabulke 3.
Tabulka 3: Chemické posuny cyclipostinu P2 v MeOD pri 300 K.
13C | ||
1 | - | 171,05 |
2 | - | 114,60(3,2 Hz)a) |
3 | 3,87 | 40,74 |
4 i | 4,46/3,85 | 66,02 |
5 | 4,30/4,25 | 69,38(6,0 Hz)al |
6 | - | 161,46(8,0 Hz)a) |
7 | 2,40 | 17,90(4,6 Hz)a) |
ľ | 4,24 | 71,60(6,9 Hz)al |
2' | 1,73 | 31,16(6, 3 Hz) a) |
3' | 1,41 | 26, 39 |
4'-lľ | 1,34-1,29 | 31,04-30,11 |
12' | 1,29 | 28,53 |
13' | 1,17 | 40,25 |
14' | 1,52 | 29, 15 |
15', 16' | 0,87 | 23, 04 |
a) V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 15
Výroba a charakterizácia cyclipostinu N
Frakcia 21, získaná podľa Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin N sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (2 mg) a charakterizoval .sa rovnako ako v Príklade 9.
Retenčný čas: 15,9 min.
Vzhľad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatiaľ čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie v mat35 rici nitrobenzylalkoholu sa našiel kvázi-molekulárny ión (M+H)+ 417,2405 amu, zodpovedajúci sumárnemu vzorcu cyclipostinu N: C2iH3gOeP (Teória: 417,2406). Charakteristický pík v ESI pozitívnom móde: 221 amu.
Tabulka 4: Chemické posuny cyclipostinu N v MeOD pri 300 K.
3H | 13C | |
1 | - | 171,07 |
2 | - | 114,60(3,1 Hz)a) |
3 | 3, 87 | 40,74 |
4 | 4,45/3,84 | 66, 03 |
5 | 4,30/4,25 | 69,39(5, 9 Hz)a) |
6 | - | 161,47 (8,0 Hz) a) |
7 | 2,40' | 1'7,90 (4, 9 Hz)a) |
ľ | 4,24 | 71,60(6,6 Hz)a) |
2' | 1,73 | 31,16(6,2 Hz)a> |
3' | 1,41 | 26, 38 |
4'-lľ | 1,35-1,26 | 30,76-30,11 |
12' | 1,35-1,26 | 33,06 |
13' | 1,31 | 23,72 |
14' | 0,89 | 14,41 |
V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 16
Výroba a charakterizácia cyclipostinu R
Frakcia 21, získaná podlá Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin R sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (8 mg) a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 9.
Retenčný čas: 16,7 min.
Vzhlad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatial čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie za podmienok FAB-MS sa našiel kvázi-molekulárny ión (M+H)+ 431,2561 amu, zodpovedajúci sumárnemu vzorcu cyclipostinu R: C22H40O6P (Teória: 431,2562). Charakteristický pík v ESI pozitívnom móde: 221 amu.
Tabulka 5: Chemické posuny cyclipostinu R v MeOD pri 300 K.
13c | ||
1 | - | 171,06 |
2 | - | 114,58(3,2 Hz)al |
3 | 3,87 | 40,75 |
4 | 4,45/3,85 | 66, 04 |
5 | 4,30/4,25 | 69,40(6, 0 Hz)a) |
6 ; | - | 161, 48 (8,0 Hz)a) |
7 | 2,40 | 17,90(5,0 Hz)al |
ľ | 4,24 | 71,61(7,0 Hz)a> |
2' | 1,73 | 31,16(6,2 Hz)a) |
3' | 1,41 | 26,38 |
4'—12' | 1,37-1,25 | 30,74-30,10 |
13' | 1,17 | 33,06 |
14' | 1,30 | 23,71 |
15' | ,0,89 | 14,40 |
a) V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 17
Výroba a charakterizácia cyclipostinu R2
Frakcia 21, získaná podlá Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin R2 sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (8 mg) a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 9.
Retenčný čas: 16,4 min.
Vzhľad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatiaľ čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, voskovitá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie za podmienok FAB-MS sa našiel kvázi-molekulárny ión (M+H)+ 431,2564 amu, zodpovedajúci sumárnemu vzorcu cyclipostinu R2: C22H40O6P (Teória: 431,2562). Charakteristický pík v ESI pozitívnom móde: 221 amu.
Tabulka 6: Chemické posuny cyclipostinu R2 v MeOD pri 300 K.
13C | ||
1 | - | 171,06(1,7 Hz)a) |
2 | - | 114,58 (3, 1 Hz)al |
3 | 3,87 | 40,75 |
4 | 4,46/3,85 | 66,03 |
5 | 4,30/4,25 | 69,39(6, 0 Hz)a> |
6 | - | 161,47 (8,0 Hz) a) |
7 | 2,40 | 17,90(4,9 Hz)a> |
ľ | 4,24 | 71,60 (6, 9 Hz)a) |
2' | 1,73 | 31,16(6,6 Hz)a) |
3' | 1,41 | 26, 38 |
4'-10' | 1,37-1,25 | 31,02-30,10 |
11' | 1,29 | 28,51 |
12' | 1,16 | 40,24 |
13' | 1, 51 | 29,15 |
14', 15' | 0,87 | 23,02 |
a) V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 18
Výroba a charakterizácia cyclipostinu S
Frakcia 21, získaná podľa Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin S sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (0,7 mg) a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 9.
Retenčný čas: 18,5 min.
Vzhľad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatial čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, tuhá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie za podmienok FAB-MS sa našiel kvázi-molekulárny ión (M+H)+ 459,2883 amu, zodpovedajúci sumárnemu vzorcu cyclipostinu S: C24H44O6P (Teória: 459,2575). Charakteristický pík v ESI pozitívnom móde: 235 amu.
Tabuľka 7: Chemické posuny cyclipostinu S v MeOD pri 300 K.
3H | 13C | |
1 | - | 170,87 (1,4 Hz)a) |
2 | - | 113,66(3,1 Hz) a) |
3 | 3,85 | 40,77 |
4 | 4,45/3,85 | 66, 04 |
5 | 4,29/4,24 | 69,17 (6, 0 Hz)a> |
6 | - | 165,80 (8, 3 Hz)a) |
7 | 2,98/2,82 | 25,05(4, 6 Hz)a> |
8 | 1,16 | 10,86 |
ľ | 4,25 | 71,57 (6, 9 Hz)a) |
2' | 1,74 | 31,19(6, 3 Hz) a) |
3' | 1,42 | 26,41 |
4'-13' | 1,34-1,29 | 30,76-30,11 |
14' | 1,34-1,29 | 33,07 |
15' | 1,31 | 23,73 |
16' | 0,89 | 14,43 |
a) V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 19
Výroba a charakterizácia cyclipostinu T
Frakcia 21, získaná podlá Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin T sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (5 mg) a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 9.
Retenčný čas: 19,1 min.
Vzhlad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatiaľ čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, tuhá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotriostnej spektrometrie za podmienok FAB-MS sa našiel kvázi-molekulárny ión (M+H)+ 473,3030 amu, zodpovedajúci sumárnemu vzorcu cyclipostinu T: C25H46O6P (Teória: 473,3032). Charakteristický pík v ESI pozitívnom móde: 249 amu.
Tabulka 8: Chemické posuny cyclipostinu T v MeOD pri 300 K.
XH | 13C | |
1 | - | 171,98 (1,7 Hz)a) |
2 | -r | 114,39(3, 1 Hz)a! |
3 | 3,87 | 40,78 |
4 | 4,46/3,85 | 66, 02 |
5 | 4,29/4,26 | 69,23(5,9 Hz)al |
6 | - | 164,69 (8,7 Hz)a| |
7 | 2,89/2,83 | 33,35(4,5 Hz)a) |
8 | 1,65 | 20,63 |
9 | 0,98 | 13,84 |
ľ | 4,25 | 71,57(6,6 Hz)a) |
2' | 1,74 | 31,18 (6,2 Hz)a) |
3' | 1,42 | 26, 42 |
4'-13' | 1,34-1,29 | 30,78-30,11 |
14' | 1,34-1,29 | 33,06 |
15' | 1,31 | 23,72 |
16' | 0,89 | 14,42 |
a) V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 20
Výroba a charakterizácia cyclipostinu T2
Frakcia 21, získaná podľa Príkladov 5 a 6 sa oddelila rovnako ako je opísané v Príklade 8 a cyclipostin T2 sa získal viacnásobným opakovaním chromatografického postupu (4 mg) a charakterizoval sa rovnako ako v Príklade 9.
Retenčný čas: 18,7 min.
Vzhľad: látka rozpustná v organických rozpúšťadlách obsahujúcich kyslík, zatiaľ čo vo vode a petroléteri len málo rozpustná, neutrálna, bezfarebná, tuhá substancia.
UV-maximum: 228 nm v metanole.
Pomocou vysokorozlišovacej hmotnostnej spektrometrie za podmienok FAB-MS sa našiel kvázi-molekulárny ión (M+H)x 473,3035 amu, zodpovedajúci sumárnemu vzorcu cyclipostinu T: C25H46O6P (Teória: 473, 3032). Charakteristický pík v ESI pozitívnom móde: 249 amu.
Tabulka 9: Chemické posuny cyclipostinu T2 v MeOD pri 300 K.
13c . | ||
1 | - | 170, 98(1,7 Hz)a) |
2 | - | 114,40(3, 1 Hz)a) |
3 | 3,87 | 40,78 |
4 | 4,46/3,85 | 66, 02 |
5 | 4,29/4,25 | 69,23(5,9 Hz)al |
6 | - | 164,69(8,7 Hz)a> |
7 | 2,90/2,83 | 33, 35 (4,5 Hz)a) |
8 | 1,65 | 20, 63 |
9 | 0,98 | 13,84 |
ľ | 4,24 | 71,57(6,9 Hz)a) |
2' | 1,74 | 31,18 (6, 2 Hz)a> |
3' | 1,42 | 26, 42 |
4'-lľ | 1,37-1,25 | 31,03-30,11 ' |
12' | 1,29 | 28,52 |
13' | 1,17 | 40,25 |
14' | 1,52 | 29, 15 |
15', 16' | 0,87 | 23,03 |
a) V zátvorkách sú uvedené interakčné konštanty 13C/31P.
Príklad 21
Blokovanie hormón-senzitívnej lipázy (HSL)
I
Hodnoty IC50 na blokovanie hormón-senzitívnej lipázy u krýs s trioleylglycerínom ako substrátom:
Cyclipostin | A: | 20 | nM, |
Cyclipostin | N: | 450 | nM, |
Cyclipostin | P: | 30 | nM, |
Cyclipostin | P2: | 40 | nM, |
Cyclipostin | R: | 10 | nM, |
Cyclipostin | R2: | 220 | nM, |
Cyclipostin | S: | 20 | nM, |
Cyclipostin | T: | 200 | nM, |
Cyclipostin | T2 : | 60 | nM. |
Claims (14)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Zlúčenina všeobecného vzorca IR'O o(I)Z?kdeR1 je1. uhľovodíkový reťazec s 2 až 30 atómami uhlíka, ktorý môže byť priamy, rozvetvený, nasýtený alebo nenasýtený, karbocyklický alebo heterocyklický, pričom uhľovodíkový reťazec je prípadne raz alebo dvakrát substituovaný s:1.1 -OH skupinou,1.2 =0 skupinou,1.3 -O-Ci-Cg-alkylovou skupinou, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,1.4 -0-C2-C6-alkenylovou skupinou, kde alkenyl je priamy alebo rozvetvený,1.5 -Ci-Cg-alkylovou skupinou, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,1.6 -arylovou skupinou,1.7 -Ci-C6-alkylbenzénom,1.8 -difenylom,1.9 -NH-Ci-Cg-alkylovou skupinou, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,1.10 -NH-C2-C6-alkenylovou skupinou, kde alkenyl je priamy alebo rozvetvený,1.11 —NH2 skupinou,1.12 =S skupinou,1.13 -S-Ci-Cg-alkylovou skupinou, kde alkyl je priamy alebo rozvetvený,1.14 -S-C2-C6-alkenylovou skupinou, kde alkenyl je priamy alebo rozvetvený,1.15 halogénom, kde substituenty 1.1 až 1.15 môžu byť tiež substituované,
- 2.0 - [-aryl-(CH2) n]m skupina, kde - [-aryl-(CH2) n] m skupina je nesubstituovaná alebo substituovaná raz alebo dvakrát substituentami opísanými v 1.1 až 1.15 a n a m sú nezávisle od seba celé čísla 0, 1, 2 alebo 3;R2 je1.0 Ci-C6-alkylová skupina, kde alkyl je nesubstituovaný alebo substituovaný raz alebo dvakrát substituentami opísanými v 1.1 až 1.15,2.0 C2-C6-alkenylová skupina, kde alkenyl je nesubstituovaný alebo substituovaný raz alebo dvakrát substituentami opísanými v 1.1 až 1.15,
- 3.0 Ci-C6-alkinylová skupina, kde alkinyl je nesubstituovaný alebo substituovaný raz alebo dvakrát substituentami opísanými v 1.1 až 1.15,E je fosfor (P) alebo síra (S),X1, X2 a X3 sú nezávisle od seba1.0 -0-,2.0 -NH-,3.0 -N=,
- 4.0 -S-, al'ebo
- 5.0 -CH2- a -CHR2-, vo všetkých ich stereochemických formách a zmesiach týchto foriem v ľubovoľnom pomere, rovnako ako jej fyziologicky prijateľné soli a chemické ekvivalenty.2. Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná sol podľa nároku 1, kde R1 predstavuje uhľovodíkový reťazec s 10 až 18 atómami uhlíka, ktorý môže byť priamy, rozvetvený, nasýtený alebo nenasýtený, karbocyklický alebo heterocyklický alebo aromatický, pričom uhľovodíkový reťazec je nesubstituovaný alebo raz alebo dvakrát substituovaný substituentami opísanými v 1.1 až 1.15.3. Zlúčenina všeobecného vzorca I, alebo jej fyziologicky prijatelná sol, podlá nárokov 1 alebo 2, kdeR1 jeI. 0 -(CH2)15CH3,2.0 - (CH2) i3CH (CH3) 2,3.0 -(CH2)uCH(OH) (CH2)3CH3,4.0 -(CH2)nCH(OH)CH2CH(CH3)2,5.0 -(CH2)12CH(OH) (CH2)2CH3,
- 6.0 - (CH2) 13CH (OH) CH2CH3,
- 7.0 - (CH2) i4CH (OH) CH3,
- 8.0 -(CH2)i5CH2(OH) ,
- 9.0 -(CH2)i6CH3,
- 10.0 - (CH2) i3C=OCH2CH3,II. 0 - (CH2) 12C=OCH2CH2CH3,12.0 - (CH2) 11c=och2ch2ch2ch3,13.0 -(CH2)13CH3,14.0 - (CH2) X1CH (CH3) 2,15.0 -(CH2)i4CH3, nebo16.0 - (CH2) i2CH (CH3) 2 .4. Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijatelná sol, podľa nárokov 1, 2 alebo 3, kde R2 je alkyl, ktorý má 1 až 6 atómov uhlíka.5. Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, podľa nároku 4, kde R2 je -CH3, -CH2CH3 alebo -CH2CH2CH3 skupina.6. Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná soľ podľa jedného alebo viacerých nárokov 1 až 5, ktorá sa dá pripraviť pomocou mikroorganizmu Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 alebo jedným z jeho variantov alebo mutácií za vhodných podmienok fermentáciou v kultivačnom médiu až do nahromadenia jednej alebo viacerých zlúčenín všeobecného vzorca I v kultivačnom médiu, pričom sa zlúčenina následne izoluje z kultivačného média, a prípadne sa prevedie do formy chemického ekvivalentu a fyziologicky prijateľnej soli.7. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, podľa jedného alebo viacerých nárokov laž 6, vyznačujúci sa tým, že sa mikroorganizmus Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 alebo jeden z jeho variantov alebo mutácií fermentuje v kultivačnom médiu za vhodných podmienok až do nahromadenia jednej alebo viacerých zlúčenín všeobecného vzorca I v kultivačnom médiu, pričom zlúčenina sa následne izoluje z kultivačného média, a prípadne sa prevedie do formy chemického ekvivalentu a fyziologicky prijateľnej sqIí.8. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že sa fermentácia uskutočňuje za aerobných podmienok pri teplotách od 18 do 35°C, pri hodnotách pH od 6 do 8.9. Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná sol podľa jedného alebo viacerých nárokov 1 až 6 na použitie ako liečivo.10. Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná sol podlá jedného alebo viacerých nárokov 1 až 6 na použitie ako liečivo na inhibíciu lipáz.
- 11. Zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná sol podľa jedného alebo viacerých nárokov 1 až 6 na použitie ako antidiabetikum.
- 12. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje aspoň jednu zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľnú sol podľa jedného alebo viacerých nárokov 1 až 6.
- 13. Spôsob výroby farmaceutického prípravku podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že sa aspoň jedna zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijatelná sol, podľa jedného alebo viacerých nárokov 1 až 6 privedie do vhodnej dávkovacej formy spolu s vhodnou pomocnou látkou a/alebo nosičom.
- 14. Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE10021731A DE10021731B4 (de) | 2000-05-04 | 2000-05-04 | Cyclipostine, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Zubereitung derselben |
PCT/EP2001/004652 WO2001083497A1 (de) | 2000-05-04 | 2001-04-25 | Cyclipostine, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung derselben |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK15602002A3 true SK15602002A3 (sk) | 2003-04-01 |
Family
ID=7640768
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK1560-2002A SK15602002A3 (sk) | 2000-05-04 | 2001-04-25 | Cyclipostin, spôsob jeho výroby a farmaceutický prípravok s jeho obsahom |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1280812B1 (sk) |
JP (1) | JP5038572B2 (sk) |
KR (1) | KR100779867B1 (sk) |
CN (1) | CN1216890C (sk) |
AR (1) | AR028398A1 (sk) |
AT (1) | ATE288442T1 (sk) |
AU (2) | AU2001262229B2 (sk) |
BR (1) | BR0110459A (sk) |
CA (1) | CA2407808C (sk) |
CZ (1) | CZ20023547A3 (sk) |
DE (2) | DE10021731B4 (sk) |
DK (1) | DK1280812T3 (sk) |
EE (1) | EE05090B1 (sk) |
ES (1) | ES2236234T3 (sk) |
HK (1) | HK1055745A1 (sk) |
HR (1) | HRP20020864A2 (sk) |
HU (1) | HUP0300306A3 (sk) |
IL (2) | IL152612A0 (sk) |
MX (1) | MXPA02010297A (sk) |
NO (1) | NO330438B1 (sk) |
NZ (1) | NZ522352A (sk) |
PL (1) | PL358328A1 (sk) |
PT (1) | PT1280812E (sk) |
RU (1) | RU2266911C2 (sk) |
SK (1) | SK15602002A3 (sk) |
WO (1) | WO2001083497A1 (sk) |
YU (1) | YU81502A (sk) |
ZA (1) | ZA200208928B (sk) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8110665B2 (en) | 2003-11-13 | 2012-02-07 | Hanmi Holdings Co., Ltd. | Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin FC region as a carrier |
US7736653B2 (en) | 2003-11-13 | 2010-06-15 | Hanmi Pharm. Co., Ltd | Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin Fc region as a carrier |
KR100754667B1 (ko) | 2005-04-08 | 2007-09-03 | 한미약품 주식회사 | 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Fc 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물 |
EP1894601A1 (en) | 2006-08-29 | 2008-03-05 | sanofi-aventis | Treating mycobacterial infections with cyclipostins |
KR200453850Y1 (ko) * | 2008-04-23 | 2011-05-30 | 주식회사 에이티티알앤디 | 수질 관리 센서 내장형 수도미터기 |
KR102073748B1 (ko) | 2013-01-31 | 2020-02-05 | 한미약품 주식회사 | 재조합 효모 형질전환체 및 이를 이용하여 면역글로불린 단편을 생산하는 방법 |
AR096891A1 (es) | 2013-07-12 | 2016-02-03 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH04145089A (ja) * | 1990-10-05 | 1992-05-19 | Nippon Kayaku Co Ltd | 抗生物質nk901093、その製造法及びそれを有効成分として含有する殺虫・殺ダニ剤 |
JPH0656859A (ja) * | 1991-07-25 | 1994-03-01 | Nippon Kayaku Co Ltd | 抗生物質nk901093a、その製造法及びそれを有効成分として含有する殺虫・殺ダニ剤 |
-
2000
- 2000-05-04 DE DE10021731A patent/DE10021731B4/de not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-04-25 RU RU2002132558/04A patent/RU2266911C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-04-25 PT PT01936275T patent/PT1280812E/pt unknown
- 2001-04-25 CZ CZ20023547A patent/CZ20023547A3/cs unknown
- 2001-04-25 PL PL01358328A patent/PL358328A1/xx unknown
- 2001-04-25 NZ NZ522352A patent/NZ522352A/en unknown
- 2001-04-25 SK SK1560-2002A patent/SK15602002A3/sk unknown
- 2001-04-25 EE EEP200200599A patent/EE05090B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-04-25 MX MXPA02010297A patent/MXPA02010297A/es active IP Right Grant
- 2001-04-25 AT AT01936275T patent/ATE288442T1/de active
- 2001-04-25 DE DE50105249T patent/DE50105249D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 YU YU81502A patent/YU81502A/sh unknown
- 2001-04-25 ES ES01936275T patent/ES2236234T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 HU HU0300306A patent/HUP0300306A3/hu unknown
- 2001-04-25 CA CA2407808A patent/CA2407808C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 EP EP01936275A patent/EP1280812B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 CN CN018088813A patent/CN1216890C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 WO PCT/EP2001/004652 patent/WO2001083497A1/de active IP Right Grant
- 2001-04-25 AU AU2001262229A patent/AU2001262229B2/en not_active Ceased
- 2001-04-25 BR BR0110459-4A patent/BR0110459A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-04-25 DK DK01936275T patent/DK1280812T3/da active
- 2001-04-25 JP JP2001580922A patent/JP5038572B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 IL IL15261201A patent/IL152612A0/xx unknown
- 2001-04-25 AU AU6222901A patent/AU6222901A/xx active Pending
- 2001-04-25 KR KR1020027014691A patent/KR100779867B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-05-02 AR ARP010102068A patent/AR028398A1/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-10-30 NO NO20025209A patent/NO330438B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-10-31 HR HRP20020864 patent/HRP20020864A2/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-11-03 IL IL152612A patent/IL152612A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-04 ZA ZA200208928A patent/ZA200208928B/en unknown
-
2003
- 2003-11-06 HK HK03108059A patent/HK1055745A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI101978B (fi) | Menetelmä leustroduksiinien valmistamiseksi | |
SK15602002A3 (sk) | Cyclipostin, spôsob jeho výroby a farmaceutický prípravok s jeho obsahom | |
EP0001709B1 (en) | Deoxynarasin antibiotics, their production and use | |
RU2134694C1 (ru) | Аминоолигосахарид ск-4416, способ его получения, ингибитор сахаридгидролазы и антибактериальный агент | |
CA1252058A (en) | Enzyme-inhibitory griseolic acid derivatives, and their use | |
KR100245477B1 (ko) | 폴리히드록시시클로펜탄 유도체, 그의 제조방법 및 그의 치료적 용도 | |
US6756402B2 (en) | Cyclipostins, process for their preparation and use thereof | |
CA1230567A (en) | Cl-1957a antibiotic compound and its production | |
US4780311A (en) | Antihypercholesterolemic tri-yne carbonates | |
KR100862546B1 (ko) | 칼로포로사이드 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 의약 | |
US6380257B1 (en) | Aromatic di-keto derivatives, processes for their production and their use as a pharmaceutical | |
HUT68559A (en) | Process for producing and application of peptide agent from apiocrea chrysosperma | |
JP2971204B2 (ja) | 新規物質wk−2955およびその製造法 | |
US5436231A (en) | Adenophostins | |
JPH01240196A (ja) | 新規グリコペプチド系抗生物質pa−45052 | |
IE913430A1 (en) | Anticoccidial and growth promoting polycyclic ether¹antibiotic |