CZ20023547A3 - Cyclipostin, způsob jeho výroby a použití - Google Patents
Cyclipostin, způsob jeho výroby a použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20023547A3 CZ20023547A3 CZ20023547A CZ20023547A CZ20023547A3 CZ 20023547 A3 CZ20023547 A3 CZ 20023547A3 CZ 20023547 A CZ20023547 A CZ 20023547A CZ 20023547 A CZ20023547 A CZ 20023547A CZ 20023547 A3 CZ20023547 A3 CZ 20023547A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- formula
- compound
- physiologically acceptable
- acceptable salt
- cyclipostin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 229930183107 cyclipostin Natural products 0.000 title abstract description 90
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 54
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 8
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 16
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 7
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 claims description 3
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical group [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000006728 (C1-C6) alkynyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 claims 1
- 229940125708 antidiabetic agent Drugs 0.000 claims 1
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 abstract description 18
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 description 19
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 description 19
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 19
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 17
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 14
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 14
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 14
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 14
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 13
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 12
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 12
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 8
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N methanol-d1 Chemical compound [2H]OC OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- UEXFAQDUVJPKAX-UHFFFAOYSA-N cyclipostin T Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCCCC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1CCC UEXFAQDUVJPKAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- BHKGHKHKDXVQJF-UHFFFAOYSA-N cyclipostin R Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCCC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C BHKGHKHKDXVQJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 6
- -1 ketone compounds Chemical class 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 5
- YNKNWOLTEQUDMB-UHFFFAOYSA-N cyclipostin N Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C YNKNWOLTEQUDMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 5
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 5
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 5
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- AEULNKPXALBIHK-UHFFFAOYSA-N cyclipostin F Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCCC(=O)CC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C AEULNKPXALBIHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SYOULUNKPBFPTF-UHFFFAOYSA-N cyclipostin T2 Natural products C1OP(=O)(OCCCCCCCCCCCCCC(C)C)OC(CCC)=C2C(=O)OCC21 SYOULUNKPBFPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 4
- XUZLXCQFXTZASF-UHFFFAOYSA-N nitro(phenyl)methanol Chemical compound [O-][N+](=O)C(O)C1=CC=CC=C1 XUZLXCQFXTZASF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940127470 Lipase Inhibitors Drugs 0.000 description 3
- MSPCIZMDDUQPGJ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N-(trimethylsilyl)trifluoroacetamide Chemical compound C[Si](C)(C)N(C)C(=O)C(F)(F)F MSPCIZMDDUQPGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 3
- SPNRYYRSSXKVRA-UHFFFAOYSA-N cyclipostin R2 Natural products O1P(OCCCCCCCCCCCCC(C)C)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C SPNRYYRSSXKVRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 3
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 3
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 3
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 3
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutyric acid Chemical compound CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011539 homogenization buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N oxybenzone Chemical compound OC1=CC(OC)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- OMPQJMDGDAAXPE-NPMWZIQKSA-N (3r,8ar)-3-methoxy-5-methyl-3-oxo-8,8a-dihydro-1h-furo[3,4-e][1,3,2]dioxaphosphepin-6-one Chemical compound O1[P@@](OC)(=O)OC[C@H]2COC(=O)C2=C1C OMPQJMDGDAAXPE-NPMWZIQKSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IGHBXJSNZCFXNK-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-7-nitrobenzofurazan Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C2=NON=C12 IGHBXJSNZCFXNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940100578 Acetylcholinesterase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004650 C1-C8 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMPQJMDGDAAXPE-UHFFFAOYSA-N Cyclophostin Natural products O1P(OC)(=O)OCC2COC(=O)C2=C1C OMPQJMDGDAAXPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 1
- 208000002230 Diabetic coma Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001005187 Homo sapiens Hormone-sensitive lipase Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004036 acetal group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 1
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000480 butynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;ethyl acetate Chemical compound ClCCl.CCOC(C)=O WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000000492 insulin antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002560 nitrile group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 125000003544 oxime group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 125000002255 pentenyl group Chemical group C(=CCCC)* 0.000 description 1
- 125000005981 pentynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002568 propynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 125000002577 pseudohalo group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/65744—Esters of oxyacids of phosphorus condensed with carbocyclic or heterocyclic rings or ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P9/00—Preparation of organic compounds containing a metal or atom other than H, N, C, O, S or halogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Cyclipostin, způsob jeho výroby a použití
Oblast techniky
Vynález se týká nové sloučeniny, nazvané cyclipostin, kterou lze získat kultivací druhů Streptomyces HAG 004107 (DSM 13381) a jejích fyziologicky přijatelných solí a jejích chemických ekvivalentů. Vynález se dále zabývá způsobem výroby cyclipostinu mikroorganismem HAG 004107 (DSM 13381), způsobem použití cyclipostinu a jeho fyziologicky přijatelných solí a chemických ekvivalentů jako léčiv, obzvláště jako inhibitorů lipás, stejně jako farmaceutických přípravků obsahujících cyclipostin nebo jeho fyziologicky přijatelné soli nebo jeho ekvivalent.
Dosavadní stav techniky
Onemocnění, které může být obzvláště výhodně léčeno pomocí inhibitorů lipás, . je cukrovka diabetes mellitus. Diabetes mellitus je onemocnění vyznačující se zvýšenou koncentrací cukru v krvi vyplývající z porušené látkové výměny. Porucha látkové výměny je způsobena nedostatkem insulinu nebo jeho nedostatečným působením. Chybějící působení insulinu vede k nedostatečnému využití glukosy nacházející se v krvi pomocí tělesných buněk. Tím dochází, stejně jako novým vznikem glukosy z proteinů (glukohenese), ke zvýšení hladiny krevní glukosy. Kromě toho vede snížené působení insulinu k tomu, že se prostřednictvím insulinového antagonisty - hormonu glukagonu, zvyšuje lipolysa v tukové tkáni, a tím se zvyšuje _koncentr-ac.e -mastných—kyselin- v krvi. Dochází ke ketoacidoseT- to jest zvýšené tvorbě ketonických sloučenin (kyseliny octové, β-hydroxymáselné kyseliny, acetonu). Za akutních • ···· • · ··· · podmínek je špatná biochemická regulace životně nebezpečná a pokud není léčena vede k diabetickému komatu a na závěr k rychlé smrti. Cukrovka patří k častým poruchám látkové výměny u lidí, odhaduje se, že až 3% populace vykazuje diabetické nebo prediabetické dispozice a tím i akutní ohrožení. Je tedy velká potřeba prostředků pro léčení diabetes mellitus.
Léčení cukrovky se provádí pomocí dávek insulinu, u starších pacientů se proti diabetes, takzvaná na insulinu nezávislá diabetes (NIDDM) nebo také diabetes typu II, podávají především sulfonylmočoviny. Princip působení sulfonylmočovin je založen na zvýšení vylučování insulinu β-buňkami ve slinivce břišní, čímž se vyrovnává množství insulinu nebo insulinová resistence. Při pokročilém onemocnění se ovšem stejně musí podávat insulin. Působení insulinu lze tedy shrnout následovně. Tento peptidový hormon snižuje koncentraci glukosy v krvi a vede ke zvýšení anabolických a .zároveň ke snížení katabolických procesů:
• Zvyšuje transport glukosy v tělesných buňkách, • zvyšuje tvorbu glykogenu v játrech a ve svalech, • potlačuje lipolysu, • zvyšuje tvorbu mastných kyselin v tukových tkáních a • zvyšuje tvorbu aminokyselin v tělesných buňkách stejně jako syntézu proteinů.
Jeden z nejsilnějšleh efektů insulinu je potlačení lipolysy. U cukrovky typu II nepokračuje tato regulace lipolysy dále a dochází ke zvýšené hladině volných mastných kyselin v krvi. Volné mastné kyse_liny_—V-krvi-stimulují glukoneogenezi v játrech a snižují využití glukosy ve skeletálním svalstvu. Kontrolovaná lypolýza, to ·· ···· znamená uvolňování volných mastných kyselin prostřednictvím tzv. hormonsensitivní lipasy (HSL), která se nachází v tělesných buňkách, je snižována insulinem pomocí fosforylační kaskády. Byly by tedy potřeba inhibitory, to znamená látky zabraňující HSL, které by simulovaly působení insulinu a umožňovaly by snižování koncentrace krevního tuku. Takováto činidla by byla vhodná pro léčení cukrovky typu II, ke kontrole látkové výměny tuků, ale také pro léčení onemocnění dalších zásobních látek. Ze všech výše uvedených důvodů jsou nové inhibitory HSL a dalších lipás potřebné a jsou tedy hledány.
Překvapivě bylo shledáno, že kmen mikroorganismů rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381, umí produkovat nové vysoce účinné lipásové inhibitory, které blokují působení hormonsensitivní lipásy ve velmi nízkých koncentracích. Nové přírodní sloučeniny jsou organofosfáty, které se skládají z dvojnásobného cyklického systému (bicyklus) a substituovaného uhlovodíkového řetězce, a které specificky blokují lipásy. Kruhový základ, mající pouze methylovou skupinu namísto uhlovodíkového řetězce, byl poprvé popsán jako inhibitor acetylcholin esterázy, CGA 134 736 R. Neumann a Η. H. Peter v Experientia, díl 43, stránka 12351237, 1987. Později byla stejná sloučenina popsána jako cyclophostin (T. Kurokawa et al, v J. Antibiotics, 46, 1315-1318, 1993. Tato strukturně příbuzná sloučenina nevykazovala žádné vlastnosti jako je selektivní blokování lipásy. Dříve známé látky vykazují nevýhody jako jsou nedostatečně vysoké působení, vyšší toxicita a/nebo nežádoucí vedlejší účinky.
Podstata vynálezu
Předložený vynález popisuje sloučeniny obecného vzorce I
kde
R1 je
1. uhlovodíkový řetězec se 2 až 30 atomy uhlíku, který může být rovný, rozvětvený, nasycený nebo nenasycený, karbocyklický nebo heterocyklický, přičemž uhlovodíkový řetězec je případně jednou nebo dvakrát substituovaný:
1.1 -OH skupinou,
1.2 =0 skupinou,
1.3 -O-Ci~C6-alkyl, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,
1.4 -O-C2-C6-alkenyl, kde alkenyl je rovný nebo rozvětvený,
1.5 -Ci~C6-alkyl, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,
1.6 -aryl,
1.7 -Ci~C6-alkylbenzen,
1.8 -difenyl,
1.9 -NH-Ci-Cg-alkyl, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,
1.10 -NH-C2-C6-alkenyl, kde alkenyl je rovný nebo rozvětvený,
1.11 -NH2 skupinou,
1.12 =S skupinou,
1.13 -S-Ci-Cg-alkyl, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,
1.14 -S-C2-C6~alkenyl, kde alkenyl je rovný nebo rozvětvený,
1.15 halogenem, kde substituenty 1.1 až 1.15 mohou být také substituovány,______________ • ·
2. - [-aryl-(CH2)nim skupina, kde - [-aryl- (CH2)n]m skupina je jednou nebo dvakrát substituována podle popisu v 1.1 až 1.15 a n a m jsou nezávisle na sobě celá čísla 0, 1, 2, nebo 3;
R2
1. Ci-C6~alkyl, kde alkyl je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo dvakrát substituenty popsanými v 1.1 až 1.15,
2. C2-C6-alkenyl, kde alkenyl je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo dvakrát substituenty popsanými v 1.1 až 1.15,
3. Ci-Cg-álkynyl, kde alkynyl je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo dvakrát substituenty popsanými v 1.1 až 1.15,
E je fosfor (P) nebo síra (S),
Xi, X2 a X3 jsou nezávisle na sobě
1. -0-,
2. -NH-,
3. -N=,
4. -S-, nebo ' .
5. -CH2- a -CHR2-, ve všech jejích stereochemických formách a směsích těchto forem libovolného obsahu, stejně jako fyziologicky přijatelné soli a chemické ekvivalenty.
R1 má s výhodou řetězec obsahující 6 až 24 uhlíkových atomů, obzvláštěLv_ýhodně -LO-až- 18 uhlíkových atomů. Řétezeč_může být nasycený, například -alkyl, kde alkylový zbytek může být rovný nebo rozvětvený, nebo může být nenasycený, např. -
alkenyl nebo -alkynyl, kde alkenyl nebo alkynylový zbytek může1 být rovný nebo rozvětvený. Ri může být nesubstituován nebo jednou nebo dvakrát stejně nebo rozdílně substituován substituenty popsanými výše ve skupinách 1.1 až 1.15. Výhodné jsou substituenty na uhlíkových atomech číslo 8' až 16', obzvláště výhodné jsou pozice 10' až 14'. Substituenty 1.1 až
1.15 mohou být také substituovány jednou nebo více skupinami vybranými ze skupiny obsahující: alkohol-, aldehyd-, acetal-, ketal-, ether-, karboxyl-, ester-, amino-, nitril-, nitro-, oxim-, oximether a halogen.
Karbocyklický uhlovodíkový řetězec mající 2 až 30 uhlíkových atomů označuje řetězec s 2 až 30 uhlíkovými atomy s jedním nebo více, výhodně jedním, dvěma nebo třemi kruhovými systémy, obsahujících s výhodou 4, 5, 6 nebo 7 uhlíkových atomů. Kruhy mohou být mono-, di- nebo tricyklické, s výhodou monocyklické a mohou být umístěny na počátku, ve středu nebo na konci uhlovodíkového řetězci. Karbocykly mohou být alifatické nebo aromatické povahy. Příklady jsou difenyl nebo alkylbenzen.
Heterocyklický uhlovodíkový řetězec mající 2 až 30 uhlíkových atomů označuje řetězec s 2 áž 30 uhlíkovými atomy s jedním nebo více, výhodně jedním až třemi kruhovými systémy, u nichž je alespoň jeden atom uhlíku nahrazen heteroatomem jako třeba O, S nebo N. Kruhy mohou být mono-, di- nebo tricyklické, s výhodou monocyklické a mohou být umístěny na počátku, ve středu nebo na konci uhlovodíkového řetězci. Kruhy mohou být s výhodou 4-, 5-, 6- nebo 7-mičlenné, alifatické nebo aromatické——povahy-.-------Při-klady jsou áikýlpiperidin, substituovaný nebo nesubstituovaný.
• ··
Aryl označuje aromatický kruh nebo kruhový systém mající 6 až 14 uhlíkových atomů, s výhodou 6 až 10 uhlíkových atomů, jako třeba případně substituovaný alkylfenol nebo alkylnaftol. Halogen označuje chlorid, bromid, fluorid nebo pseudóhalogenid jako je kyanid (nitril).
-Ci-C6~alkyl označuje rovný nebo rozvětvený alkyl mající 1,
2, 3, 4, 5 nebo 6 uhlíkových atomů, jako například methyl, ethyl, i-propyl, terč.butyl a hexyl.
-C2-C6-alkenyl označuje rovný nebo rozvětvený alkyl mající 2,
3, 4, 5 nebo 6 uhlíkových atomů, jako například allyl, krotyl a pentenyl.
-C2-C6-alkynyl označuje rovný nebo rozvětvený alkyl mající 2, 3, 4, 5 nebo 6 uhlíkových atomů, jako například propynyl, butynyl a pentynyl.
R1
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
s výhodou znamená:
- {CH2) 15CH3 ,
-(CH2)l3CH(CH3)2,
- (CH2) 11CH (OH) (CH2) 3CH3,
- (CH2) 12CH (OH) CH2CH (CH3) 2 z -(CH2)i2CH(OH) (CH2)2CH3, -(CH2)i3CH(OH)CH2CH3, -(CH2)14CH(OH)CH3,
- <CH2)i5CH2{OH) ,
- (CH2) 16CH3, nebo
-(CH2)13C=OCH2CH3,
- (CH2) 12C=OCH2CH2CH3,
- (CH2) uC=OCH2CH2CH2CH3,
-(CH2)13CH3,------------------------14.0 -(CH2)uCH(CH3)2, 15.0_-(CH2)i4CH3, nebo
• · ·
·· ·
16.0 - (CH2) i2CH (CH3) 2,
R označuje s výhodou Ci-C6-alkyl, obzvláště methyl, ethyl nebo propyl.
Výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou uvedeny níže: Cyclipostin A vzorce II:
Cyclipostin A2 vzorce IIA:
Cyclipostin D vzorce V:
Cyclipostin F vzorce VII:
Cyclipostin P vzorce XI:
Cyclipostin R2 vzorce XIIIA:
Cyclipostin T vzorce XV:
všechny jejich stereochemické formy a směsi těchto forem v libovolném zastoupení, stejně jako jejich fyziologicky přijatelné soli a chemické ekvivalenty.
Způsob počítání uhlíkových atomů pro NMR spektra výše
V uvedených- vzorců-jednášleduj ící: ... _
Sám kruhový systém obsahuje dva asymetricky substituované atomy, uhlíkový atom 3 a atom fosforu. Oba atomy mohou vykazovat konfiguraci R- nebo S-. Bylo překvapivě shledáno, že kmen rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381 dokáže vytvářet víceré stereoizomery sloučenin obecného vzorce I, to znamená, že kmen dokáže sloučeniny syntetizovat, u nichž zaujímají atomy C3 a P nezávisle na sobě konfiguraci R- nebo
S—. Isomer s prostorovou konfigurací na atomu uhlíku R- a konfigurací S- na atomu fosforu vzorce IA je rozšířen u kultury rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381.
Kromě toho se tvoří také cyclipostiny jiných konfigurací, jako třeba (R,R), (S,S) nebo (S,R), které překvapivě rovněž vykazují značný blokační vliv na lipásy.
Sloučenina vzorce I nebo její fyziologicky přijatelná sůl nebo její chemický ekvivalent je připravítelná pomocí mikroorganismu rodu Streptomyces HAG 004107, DSM 13381 nebo jeho variantou nebo mutací za vhodných podmínek fermentací v kultivačním médiu až do namnožení jedné nebo více sloučenin obecného vzorce I v kultivačním médiu, přičemž mohou být získány závěrečnou izolací z kultivačního média, a případně převedeny do formy chemického ekvivalentu a fyziologicky přijatelné soli.
Cyclipostiny podle tohoto vynálezu mohou být produkovány druhy Actinomycetales s výhodou pomocí druhů Streptomyces HAG 004107, DSM 13381. Druh Streptomyces HAG 004107, DSM 13381 vykazuje slonovinově zbarvené mycely (RAL 1014) a vyznačuje se konidiofory charakteristickými pro Streptomycety.
Izolát byl uložen Deutschen Sámmlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1B, D 38124 Braunschweig, Německo na základě budapešťské dohody ze 16. března 2000 pod následujícím číslem: Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381.
Namísto kmene Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 mohou být také použity mutace a varianty, které syntetizují jednu nebo více cyclipostinových sloučenin podle tohoto vynálezu. Takovéto mutanty mohou být připraveny známými způsoby pomocí fyzikálních protředků, například zářením jako je ultrafialové nebo rentgenové záření nebo chemickými mutacemi, např,. pomocí ethylmethansulfonátu (EMS) , 2-hydroxy4-methoxybenzofenonu (MOB) nebo N-methyl-N'-nitro-Nnitrosoguanidinu (MNNG).
Vynález se týká způsobu výroby sloučenin vzorce I nebo jejich fyzilogických solí, vyznačujícího se tím, že se mikroorganismus Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 nebo—jeho-varianta—nebo-mutáce- fermentuje-vkuitivačnim-médiu· za vhodných podmínek až do namnožení jedné nebo více sloučenin obecného vzorce I v kultivačním médiu a na závěr se '4«ί
izoluje a případně převádí na chemický ekvivalent a fyziologicky přijatelnou sůl.
S výhodou se kmen Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381, jeho mutace a/nebo varianta fermentuje v živném roztoku (označovaném také jako kultivační médium) se zdrojem uhlíku a dusíku s běžnými anorganickými solemi, až do namnožení cyclipostinu v kultivačním médiu a na závěr se cyclipostin izoluje z kultivačního média a případně se rozděluje na jednotlivé aktivní komponenty.
Fermentace se s výhodou provádí za anerobních podmínek, s výhodou při teplotách od 18 do 35 °C při pH 6 až 8.
Způsob výroby podle tohoto vynálezu může být použit pro fermentaci v laboratorním měřítku (mililitry až litry) a pro průmyslové měřítko (krychlové metry). Všechna procentuální označení jsou uváděna pokud není uvedeno jinak v hmotnostních procentech. Obsah směsi u kapalin označuje objemy, pokud není uvedeno jinak.
Jako výhodné zdroje uhlíku pro anerobní fermentaci se hodí asimilovatelné uhlovodany a cukerné alkoholy jako je glukosa, laktosa, sacharosa nebo D-mannitol, stejně jako přírodní produkty obsahující sacharidy jako např. ovesné vločky, sojová moučka a sladový extrakt. Jako dusíkaté zásobní látky připadají v úvahu aminokyseliny, peptidy a proteiny, stejně jako produkty jejich odbourání jako třeba pepton nebo trypton, stejně jako masový extrakt, ovesný extrakt, jáhly, např. z kukuřice, pšenice, fazolí, sóji nebo bavlníku, deštíTační zbytek z výroby ' aíkoholuy masová moučka‘nebo-------ovesný extrakt, stejně jako amonné soli a nitráty. Zásobní roztok může obsahovat anorganické soli jako např. chloridy, • '* i.
*· · • ·· • .· uhličitany, sulfáty nebo fosfáty alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, železa, zinku, kobaltu a manganu.
Výstavba cyclipostinů vzorců II až XVA podle tohoto vynálezu probíhá obzvláště dobře v kultivačním médiu obsahujícím 0,1 až 5%, s výhodou 0,3 až 3% ovesných vloček a stopových prvků. Údaje v procentech jsou uvedeny v hmotnostních procentech vztažených na celé kultivační médium.
Výstavba cyclipostinů vzorců VII až XVA podle tohoto vynálezu probíhá obzvláště výhodně v kultivačním médiu obsahujícím 0,1 až 5%, s výhodou 0,3 až 2% glycerinu a 0,2 až 5%, s výhodou 0,5 až 3% sojové moučky a 0,05 až 1,0 g/1, s výhodou 0,1 až 1,0 g/1 chloridu sodného.
V kultivačním médiu produkuje Sterptomyces species HAG 004107, DSM 13381 směs cyclipostinů. Podle složení kultivačního média se mohou zastoupení jednoho nebo více cyclipostinů podle tohoto vynálezu lišit. Kromě toho, lze dosáhnout složením média syntézy jediného cyclipostinů mikroorganismem, takže jeden nebo více cyclipostinů vůbec nevzniká popřípadě vzniká v množstvích menších než je hranice pozorování.
S výhodou obsahuje kultura prokazatelný cyclipostin.
S výhodou vznikají cyclipostin A nebo P nebo P2.
Kromě cyclipostinů A až T2 (sloučeniny vzorce II až XVA) vytváří Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 v kultivačním médiu další příbuzné sloučeniny, které se od dříve uvedených sloučenin liší různými zbytky R1 a R2 ve -vzorcích—TI—až “XVA: V menších množstvích' “byly~ proká“zány— cyclipostiny, které mají zkrácený nebo více rozvětvený zbytek R1. V-kultuře Streptomyces HAG 004107, DMS 13381 byly také
'· 9 .9 <· · 9
9 Í9- 9 ·· « '9 <·ι •·<· · • ···· « '· · '9 · ’· 4· · ··· (·· jako vedlejší produkty prokázány oxidační produkty (produkty hydroxyláce).
Kultivace mikroorganismů se provádí aerobně také například submersním způsobem za třepání nebo míchání v baňce nebo fermentoru, případně zaváděním vzduchu nebo kyslíku. Může se provádět v teplotním rozsahu od 18 do 35 °C, s výhodou od 25 do 32 °C, obzvláště při teplotách od 26 do 30 °C. pH hodnoty by měly ležet mezi hodnotou 6 až 8, s výhodou mezi 6,5 až 7,8. Mikroorganismus se za těchto podmínek obecně provádí po dobu 24 až 300 hodin, s výhodou 30 až 90 hodin.
, Mycelium se naočkuje a nechá se asi 36 až 120 hodin, s výhodou 48 až 96 hodin růst. Mycelium může být udržováno v kmeni asi 3 až 40 dní, s výhodou 4 až 10 dní na pevné nebo kapalné živné půdě, například na sladovém-kvasinkovém agaru nebo agaru z ječmenných vloček.
Průběh fermentace může být sledován pomocí pH hodnot kultury nebo mycelia stejně jako pomocí chromatografických metod, jako je např. tenkovrstvá chromatografie nebo vysokotlaká kapalinová chromatografie nebo pomocí sledování biologické aktivity. Cyclipostiny podle tohoto vynálezu jsou z malé části obsaženy také ve filtrátu kultury. Způsob čištění popsaný v následujícím textu slouží k čištění cyclipostinu podle tohoto vynálezu, s výhodou k čištění cyclipostinu A a P.
Izolace popřípadě čištění cyclipostinů podle tohoto vynálezu —z'kultivačního-- média se—provádí— známými- způsoby—s—oh-l-edem-na chemické, fyzikální a biologické vlastnosti přírodních látek. Pro testování koncentrace cyclipostinu v kultivačním médiu ♦ · « • ♦ · • ·· · • ···· · • * ···· · * ·· • · · « · • · · · « · ·· ♦ · · * ·'· · ‘9· nebo v jednotlivých izolovaných frakcích může být použita tenkovrstvá chromatografie, například na silikagelu s využitím směsi dichlormethan-ethylacetát nebo chloroformmethanol (například v poměru 98:1) jako eluční činidlo nebo pomocí HPLC. Detekce při dělení pomoci tenkovrstvé chromatografie může být prováděno například pomocí barvících činidel jako je molybdatofosforečná kyselina nebo pomocí par I2, přičemž množství vzniklé látky se měří porovnáním se standardním roztokem.
Při izolaci cyclipostinu podle tohoto vynálezu se mycelium nejprve oddělí od kultivačního média obvyklým způsobem a poté se cyclipostin extrahuje z buněčné hmoty působením rozpouštědla mísitelného s vodou. Fáze organického rozpouštědla obsahující cyclipostin podle tohoto vynálezu, se následně koncentruje ve vakuu a čistí se dále podle uvedeného popisu.
Filtrát kultury se případně spojí s koncentrátem myceliového extraktu a extrahuje se s vhodným rozpouštědlem nemísitelným s vodou, jako např. n-butanolem nebo ethylacetátem. Na závěr se oddělená organická fáze zákoncentruje ve vakuu a rozpustí se v odpovídajícím objemu směsi voda/methanol 1/30.
Další čištění jednoho nebo více cyclipostinu podle tohoto vynálezu se provádí pomocí chromatografie na vhodných materiálech, s výhodou např. na molekulárních sítech, normálních fázových nosičích jako třeba na silikagelu, oxidu hlinitém, iontově výměnných pryskyřicích nebo adsorbčních pryskyřicích jako—třeba.....na obrácené (reverzní, RP)—fázi.---S pomocí těchto chromatografii se rozdělí cyclipostiny. Chromatografie cyclipostinů se provádí s organickým ·· · • »·
a organického rozpouštědla se ♦ I Φ Φ • φφφφ φ φ φ • ••Φ · rozpouštědlem nebo se směsí vodného rozpouštědla.
Pod termínem směs vodného nebo organického rozumí všechna rozpouštědla mísitelná s vodou, s výhodou methanol, propanol a acetonitril, v koncentracích rozpouštědla 10 až 100%, s výhodou 60 až 90% rozpouštědla nebo také pufrované vodné roztoky, které jsou mísitelné s organickými rozpouštědly. Použité pufry jsou stejné jako bylo popsáno výše.
Rozdělení cyclipostinů je založené na jejich rozdílné polaritě a provádí se pomocí chromatografie na reverzní fázi, např. MCI® (adsorbční pryskyřice od firmy Mitsubishi, Japonsko) nebo Amberlite® (TOSOHAAS), na dalších hydrofobních materiálech jako například na RP-8- nebo RP-18-fází. Kromě toho může být dělení prováděno s pomocí chromatografie na normální fázi, například silikagelu, oxidu hlinitém a podobně.
Chromatografie cyclipostinů se provádí s pufrovanými nebo nasycenými vodnými roztoky nebo směsi vodných roztoků s alkoholy nebo jinými rozpouštědly mísitelnými s vodou. Jako organická rozpouštědla se používají propanol a acetonitril. Pod pojmem pufrované nebo nasycené vodné roztoky se rozumí např. voda, fosfátový pufr, acetát amonný, citrátový pufr v koncentracích od . 1 mM do 0,5 M stejně jako kyselina mravenčí, kyselina octová, kyselina trifluoroctová nebo jiné běžně používané kyseliny známé odborníkům v oboru, s výhodou V- koncentracích -od-0-,01 -do 3 %, s-výhodou - 0, -1 %.-------------—-----t • · p-fc <· .
• · ·
9 9 • ·«·· 9 ·
• •tfc * • *· ·· · · • » · • · 9
9·
99 9»
99 • · fc * • * 9·9 ·» ··«♦
Chromatografie gradientem začíná se 100% vodným pufrem a končí se 100% rozpouštědlem, s výhodou se používá lineární gradient od 50 do 100% 2-propanolu nebo acetonu.
Alternativně může být použita gelová chromatografie nebo chromatografie na hydrofobní fázi.
Gelová chromatografie se provádí na polyakrylamidových gelech nebo gelech ze směsných polymerů, jako např. Biogel-P 2® (firma Biograd), Fractogel TSK HW 40® (firma Merck, Německo nebo Toso Haas, USA) nebo Sephadex® (firma Pharmacia, Uppsala, Švédsko).
Pořadí chromatografií je navzájem zaměnitelné.
Další velmi důležitá metoda čištění cyclipostinu je krystalizace. Cyclipostiny krystalizují z roztoků organických rozpouštědel a ze směsí vody s organickými rozpouštědly. Krystalizace se provádí známými postupy, jako např. koncentrováním nebo ochlazením nasyceného roztoku cyclipostinu.
í
Cyclipostiny podle tohoto vynálezu jsou stabilní v tuhém stavu nebo kapalném stavu a v roztoku při hodnotách pH od 4 do 8, obzvláště mezi 5 až 7, a dovolují zpracování do galenických forem.
Vynález zahrnuje další obvyklé chemické ekvivalenty sloučenin vzorce I, které vykazují nepatrné chemické rozdíly a které mají stejné účinky nebo se za mírných podmínek přeměňují na sloučeniny podle tohoto vynálezu. Ke známým ekvivalentům
--patří například ester a ether, stejně jako produkty oxidace, produkty redukce a produkty hydrogenace sloučenin podle tohoto vynálezu.
* • · · • · ♦ • ···· • · »·«· » • 9 9· • · 9
9 9 • · · • · · ·· 99··
Esterové a etherové deriváty, produkty oxidace, produkty redukce a produkty hydrogenace se připravují způsoby popsanými v literatuře, např. v „Advanced Organic Synthesis,
4. vydání, J. March, John Wiley & sons., 1992.
Tento vynález zahrnuje všechny stereoizomerní formy sloučenin vzorce I až XV A. Sloučeniny vzorců I až XV A obsahují asymetrická centra, která mohou mít navzájem nezávisle konfiguraci S- nebo R-. K vynálezu patří všechny možné enantiomery a diastereoizomery, stejně jako směsi dvou nebo více stereoizomerních forem, například směsí enantiomerů a/nebo diastereoizomerů ve všech poměrech. Enantiomery jsou také v enantiomerních formách, stejně jako levotočivé a také pravotočivé antipody, R- a S-konfigurace, ve formě racemátů a ve formě směsí obou enantiomerůve všech poměrech jsou předmětem tohoto vynálezu. Předmětem vynálezu jsou také cis/trans isomery, stejně jako cis-forma popřípadě trans forma nebo směsi těchto forem ve všech poměrech.
Na základě jejich vynikajících farmakologických vlastností se sloučeniny podle tohoto vynálezu hodí pro použití jako léčiva v humánní a/nebo veterinární medicíně. Blokují lipásy a hodí se pro léčení onemocnění vyvolaných poruchou látkové výměny, které mají příčiny v poruchách výměny lipidických látek. Sloučeniny obecného vzorce I podle tohoto vynálezu vykazují překvapivý blokovací účinek na hormonsensitivní lipásu, HSL, alosterický enzym v adipocytech, který je blokován insulinem a je zodpovědný za odbourání tuků v tukových buňkách a tím i za koloběh tukového podílu v krevním toku. Bránění tohoto
-enzymu-odpovídá.....také insulinu podobnému působení sloučenin podle tohoto vynálezu což nakonec vede ke snížení obsahu volných mastných kyselin v krvi a ke krevnímu cukru. Mohou
být také nasazeny při poruchách látkové výměny jako například při insulinově nezávislé diabetes mellitus, u diabetického syndromu a při přímém poškození pankreatu.
Vynález zahrnuje také farmaceutické přípravky, obsahující jeden nebo více cyclipostinů podle tohoto vynálezu a/nebo jejich chemických ekvivalentů. S výhodou se používají ve směsi s vhodnými pomocnými látkami nebo nosiči. Jako nosný materiál se používají všechny farmakologicky přijatelné nosiče a/nebo pomocné látky.
Vynález popisuje dále způsob výroby léčiv podle tohoto vynálezu, vyznačující se tím, že se alespoň jedna sloučenina podle tohoto vynálezu se smíchá s vhodným farmaceuticky přijatelným nosičem a případně další vhodnou účinnou látkou, přídavnou látkou nebo pomocnou látkou ve formě vhodné pro podávání.
Léčivé přípravky podle tohoto vynálezu se obecně podávají ve formě orální, lokální nebo parenterální, ovšem jsou také principiálně možné jako rektální prostředky. Vhodné tuhé nebo kapalné galenické formy jsou například granulát, prášek, tablety, dražé, (mikro)kapsle, sirupy, emulze, suspenze, aerosoly, kapky nebo injektovatelné roztoky ve formě ampulí stejně jako preparáty s protrahovanou formou uvolňování, u nichž se používá obvyklý nosič a přídavné nebo pomocné činidlo jako třeba desintegrátory, pojivá, potahovací činidla, bobtnající látky, klouzky nebo mazadla, chuťové látky, sladidla nebo rozpouštědla. Jako často používaný nosič nebo pomocná látka můžeme jmenovat např. uhličitan hořečnatý, oxid titaničitý, laktosa, mannitoi a.__dalš-í—-C-ukry.---talek,želatina, škroby, vitamíny, celulosa a její deriváty, živočišné nebo rostlinné oleje, polyethylenglykoly a rozpouštědla jako je sterilní voda, alkohol, glycerín a vícesytné alkoholy.
Případně může být dávková forma pro orální podávání připravena jako mikrokapsle, které se uvolňují během delšího časového úseku, jako například pomocí potažení nebo uzavřením účinné látky v komůrce vhodného polymeru, vosku nebo podobně.
S výhodou se farmaceutické přípravky zhotovují v dávkových formách, kde každá jednotka obsahuje jako aktivní složku známou dávku jedné nebo více cyclipostinových sloučenin podle tohoto vynálezu a/nebo jejich chemického derivátu. U tuhých dávkových forem jako jsou tablety, kapsle a čípky mohou tyto dávky obsahovat až 200 mg, s výhodou asi 0,1 až 100 mg a u injektovatelných roztocích ve formě ampulí až 200 mg, s výhodou asi 1,0 až 100 mg denně.
Podávané denní dávky jsou závislé na tělesné hmotnosti, stáří, závažnosti a stavu pacientů. Podle podmínek se moou podávat nižší nebo také vyšší denní dávky. Podávání denní dávky může být prováděno pomocí jediné dávkové formy nebo pomocí více menších dávkových forem nebo pomocí více násobně rozdělené dávky v určitých intervalech. Vynález také zahrnuje farmaceutické přípravky, obsahující jeden nebo více cyclipostinů a/nebo jeho chemických ekvivalentů podle tohoto vynálezu. Výhodné je použití ve směsi se vhodnou pomocnou látkou nebo nosičem. Jako nosič může být použit jakýkoliv farmakologicky přijatelný nosič a/nebo pomocná látka.
Působení sloučenin obecného vzorce I podle tohoto vynálezu se zkouší- následuj ícím-enzymovým-systémem:-----------------------------------------'í 'i '·>
Příprava enzymu:
Příprava částečně čištěného HSL:
Izolované krysí tukové buňky byly získány z tukové tkáně u varlat neošetřovaných lidských krys (wistar, 220-250 g) pomocí postupu zpracování s kolagenásou publikovaném v např. B. S. Nillson et al., Anal. Biochem. 158, 1986, 399-407; G. Frederikson et al. , J. Biol. Chem. 256, 1981, 6311-6320; H.
Tornquist et al., J. Biol. Chem., 251, 1976, 813-819). Tukové buňky z 10 krys promyty třikrát flotací s pokaždé 50 ml homogenizačního pufru (25 ml Tris/HCl, pH 7,4, 0,25 M sacharosa, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 10 gg/ml leupeptinu, 10 gg/ml antipatinu, 20 gg/ml pepstatinu) a byly rozpuštěny v 10 ml homogenisačního pufru. Tukové buňky byly dány do homógenizátoru typu „teflon ve skle (Braun-Melsungen) a homogenizovány při 1500 otáčkách za minutu při 15 °C.
Homogenizát byl centrifugován (Sorwall SM24-Rórchen, 5000 otáček za minutu, 10 minut, 4 °C) . Fáze mezi nahoře ležící vrstvou tuku a tuhou peletou byla odebrána a znovu centrifugována. Takto získaná fáze byla znovu centrifugOvána (Sorwall SM24-Rórchen, 20000 otáček za minutu, 45 minut, 4 °C) . Mezifáze byla odebrána a byla nechána reagovat s 1 g heparinu na sepharose (Pharmacia-Biotech, CL-6B, 5 x promyto s 25 mM Tris/HCl, pH 7,4, 150 mM NaCl) . Po inkubaci po dobu 60 minut při 4 °C (protřepáno v intervalech 10 minut) . Kapalina byla přivedena přídavkem kyseliny octové na pH 5,2 a inkubována 30 minut při 4 °C. Sraženina byla centrifugována ((Sorwall SM34, 12000 otáček za minutu, 10 minut, 4 °C) a zbytek suspendován ve 2,5 ml 20 mM Tris/HCl, pH 7,0, 1 mM EDTA, 65 mM NaCl, 13% sacharosy, 1 mM DTT, 10 gg/ml Těupeptiň/pěpštatin/antipatin. Suspenze byla dialyzována přes noc proti roztoku 25 mM Tris/HCl, pH 7,4, 50% glycerín, 1 mM • · « » · ·
9 9
9999 · • ·. 99 9 9
DTT, 10 gg/ml leupeptin, pepstatin, antipatin a poté dán na.
ml suspenze, sloupec hydroxyapatitu (0,1 g na 1 ekvilibrováném s 10 mM fosfátu draselného, pH 7,0, 30% glycerínu, 1 mM DTT) . Sloupec byl promyt se čtyřmi objemy ekvilibračního pufru při rychlosti toku od 20 do 30 ml/h. HSL byl eluován jedním objemem ekvilibračního pufru obsahujícího 0,5 M fosfátu draselného, a poté dializován (viz výše) a 5 krát až lOx koncentrován pomocí ultrafiltrace (Amicon Diaflo PM 10 filtr) při 4 °C. Částečně čištěný HSL může být přechováván 4 až 6 týdnů při teplotě -70 °C.
Stanovení:
Pro přípravu substrátu bylo smícháno 25-50 μθί [3H]trioleoylglycerínu (v toluenu), 6,8 μΜοΙ neznačeného trioleoylglycerínu a 0,6 mg fosfolipidu (fosfatidylcholin/ fosfatidylinositol 3:1 w/v), sušen pomocí N2 a poté rozpuštěn v 2 ml 0,1 M KPi (pH 7,0) s opracování pomocí ultrafialového záření (Branson 250,, mikrostříkačka, nastavení 1-2, 2x1 min v 1 minutových intervalech). Po přidání 1 ml KPi a obnoveném působení ultrafialového záření (4 x 30 sekund, v ledu po 30 sekundových intervalech) bylo přidáno 1 ml 20% BSA (bovin sérum albumin) (v KPi) (konečná koncentrace trioleoylglycerínu 1.7 mM). Pro reakci bylo pipetováno 100 μΐ roztoku substrátu ke 100 μΐ HSL roztoku (HSL připraven jako uvedeno výše, naředěn ve 20 mM KPiz pH 7,0, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,02% BSA, 20 μg/ml pepstatin, 10 μg/ml leupeptin) a inkubováno 30 minut při 37 °C. Po přídavku 3,25 ml směsi methanol/chloroform/heptan (10:9:7) a 1,05 ml 0,1 M K2CO3, 0,1 M_kyseliny borité (pH 10,5) bylo vše dobře smícháno a_na. závěr centrifudováno (800 x g, 20 min). Po oddělení fází byl odebrán jeden ekvivalent horní fáze (1 ml) a byla změřena radioaktivita pomocí kapalinového scintilačního zařízení. Vyhodnocení:
Látky byly zkoušeny výše popsaným způsobem ve čtyřech nezávislých měřeních. Blokováni enzymatické aktivity HSL pomocí testované sloučeniny bylo určováno srovnáním s nebráněnou kontrolní reakcí. Výpočet hodnoty IC5o bylo provedeno pomocí křivky s alespoň 10 koncentracemi testované sloučeniny. Pro analýzu dat byl použit softwarový paket GRAPHIT, Elsevier-BIOSOFT. V tomto testu vykazovaly sloučeniny podle tohoto vynálezu následující účinky: Cyclipostin A, P, P2 a R blokují lipolýzu u krysích adipocytů ;s IC50 = ~0,2 μΜ, inhibují lidskou hormon-sensitivní lipásu (HSL) s trioleoylglycerínem jako substrátem: IC50 = ~0,07 až 0,5 μΜ. HSL z krys bylo blokováno s NBD (4-chlor-7nitrobenzo-2-oxa-l,3-diazol) jako substrátem, v koncentracích od 4 nM do 10 nM.
Cyclipostin brání hormonsensitivní lipásu (HSL), stejně jako mono-acyl-glycerín-lipásu krysího extraktu v submikromolárních koncentracích.
V následujících příkladech bude dále vysvětlen tento vynález. Uvedené procentuální údaje jsou hmotnostní procenta. Obsah směsí u kapalin je udáván v objemových procentech, pokud není uvedeno jinak.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 . _________________________________________________ —Příprava’glyceřinové“kú“ltuřy Stréptomyces species HAG 004107, DSM 13381. f
100 ml živného roztoku (sladový extrakt 2,0%, ovesný extrakt 0,2%, glukosa 1,0%, (NH4)2HPO4 0,05%, pH 6,0) ve sterilní 300 ml Erlenmeyerově baňce byl naočkován s kmenem Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 a bylo inkubováno 7 dní při teplotě 28 °C a 180 otáčkách za minutu na rotační třepačce.
1.5 ml této kultury bylo na závěr naředěno s 1,5 ml 99% glycerínem a uloženo při 20 °C.
Příklad 2
Příprava předkultury Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 v Erlenmeyerově baňce
Sterilní Erlenmeyerova baňka byla naplněna se 100 ml •následujícího živného roztoku: 15 g/1 glukosy, 15 g/1 sojové moučky, 5 g/1 zrní, 2 g/1 CaCO3 a 5 g/1 NaCl a naočkována pomocí jedné zkosené zkumavky (stejný živný roztok s 2% agaru) růstové kultury nebo s 1 ml glycerinové kultury (viz Příklad 1) a třepačka byla provozována při 180 otáčkách za minutu při 28 °C. K naočkování 10 a 200 1 fermentoru postačuje 48 až 96 hodin stará submerzní kultura (očkovací množství cca 10%) ze stejného živného roztoku.
Příklad 3
Příprava kultury Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 v Erlenmeyerově baňce
Sterilní 300 ml Erlenmeyerova baňka byla naplněna 100 ml následujícího živného roztoku:
g/1 psích ovesných vloček
2.5 ml roztoku stopových prvků, byla naočkována s 10% očkovacím množstvím předkultury (Příklad 2) a byla- inkubována na třepačce při 180 otáčkách za minutu při 28 °C. Kultura byla se mohla po dvou dnech očkovat do fermentoru k výrobě cyclipostinu. Roztok stopových prvků měl následující složení:
g/1 CaCl2 x 2H2O 1 g/1 Fe(III)-citrát,
0,2 g/1 MnS04 x H2O,
0,1 g/1 ZnCl2,
0,025 g/1 CuSO4 x 5H2O,
0,02 g/1 Na-tetraborát,
0,004 g/1 CoCl2 x 6H2O,
0,01 g/1 Na-molybdát.
Příklad 4
Výroba Cyclipostinů vzorce II až IX
200 1 fermentor byl naplněn 90 1 živného roztoku za následujících podmínek:
Živné médium: 20 g/1 ovesných vloček ve vodě
2,5 ml/1 stopových prvků, pH 7,8 (před sterilizací)
Živný roztok byl 30 minut sterilizován pomocí tepla a po ochlazení bylo naočkováno 5% objemu očkovacího materiálu, získaného podle Příkladu 3.
Roztok stopových prvků: 3 g/1 CaCl2 x 2H2O, g/1 Fe(III)-citrát,
0,2 g/1 MnS04x H2O,
0,1 g/1 ZnCl2,
0,025 g/1 CuSO4 x 5H2O,
0,02 g/1 Na-tetraborát,
0,004 g/1 CoCl2 x 6H2O,
0,01 g/1 Na-molybdát.
Trvání procesu:----------------------72 - hodin —--------------------------------Teplota inkubace: 27 °C
Rychlo s t mí chání:
otáček za minutu
Zavzdušňování: 6 m3 vzduchu za hodinu
Fermentace byla prováděna bez přídavku činidel pro potlačení tvorby pěny. Produkční maximum bylo dosaženo po 48 hodinách.
Příklad 6
Izolace cyclipostinové směsi z kultivačního média Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381
Po ukončení fermentace Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 bylo 100 1 kultivační polévky z fermentoru, získané podle Příkladu 4 za přídavku cca 2% filtračního činidla (například Celit®) zfiltrováno a buněčná hmota (10 1) byla extrahována se 40 1 methanolu. Methanolický roztok účinné látky byl zbaven mycelia pomocí filtrace a zakoncentrován ve vakuu. Koncentrát byl nalit na připravený sloupec 7 1 ®MCI GEL, CHP20P. Byl eluován s gradientem vody a propan-2-olu. Rychlost toku (20 litrů za hodinu) byl použit pro frakcionování (10 litrů) a frakce obsahující cyclipostiny (frakce 19 až 21) byly zkoncentrovány ve vakuu. Frakce byly zkoumány- pomocí HPLC (viz Příklad 7) . Frakce 19 obsahovala cyclipostin A až E, stejně jako jejich isomery, frakce 20 obsahovala cyclipostin F a její isomery, frakce 21 obsahuje cyclipostin Ν, P, P2, Q, R, S a T stejně jako jejich isomery.
Příklad 7
HPLC analýza cyclipostinů
Vysokotlaká kapalinová chromatografie (HPLC)- Analýza cyclipostinů byla prováděna pomocí zařázení HP 1100® s kolonou YMC-Pack Pro C18® [AS-303, 250 x 4.6 mm, S-5 pm,
-1-2Ό - °Gj-r--Rychlost - toku’-byla T ml /minutu, “teplota ‘ kolony- 45 °C. Kolona byla eluována gradientem 0,05% trifluoroctové kysel-iny v acetonitrilu. Čistý acetonitril byl dosažen po 11 minutách a poté byla kolona eluována isokraticky pouze s tímto rozpouštědlem. Detekce byla prováděna pomocí měření absorpce ultrafialového světla při 210 nm. Za těchto podmínek měly cyclipostiny následující retenční časy:
| Cyclipostin | A | 12,7 | minut | |
| Cyclipostin | A | 2 | 12,6 | minut |
| Cyclipostin | F | 13,2 | minut | |
| Cyclipostin | N | 15,9 | minut | |
| Cyclipostin | P | 17,7 | minut | |
| Cyclipostin | P | 2 | 17,3 | minut |
| Cyclipostin | Q | 18,3 | minut | |
| Cyclipostin | R | 16,7 | minut | |
| Cyclipostin | R2 | 16,4 | minut | |
| -Cyclipostin | S | 18,5 | minut | |
| Cyclipostin | T | 19,1 | minut a | |
| Cyclipostin | T | 2 | 18,7 | minut. |
Příklad 8
Získání čistého cyclipostinů A a A2.
Frakce 19, získaná podle Příkladu 6, byla odpařena ve vakuu, bylo přidáno 1 g kontrastního činidla rozpuštěného ve směsi voda-methanol (1:1) a směs byla nanesena na kolonu Nucleoprep 100-5 C18 AB® (21 x 250 mm) . Kolona byla eluována s gradientem 50% acetonitrilu v 0,01% trifluoroctové kyselině až do 100% acetonitrilu. Průtok byl nastaven na 50 ml za minutu. Výstup z kolony byl zkoumán měřením absorpce světla při 210 nm, testující blokační působení na lipásu. Byly sbírány frakce o velikosti 60 ml. Frakce číslo 34 a 35 obsahovaly cyclipostin A, ve frakcích 41 až 44 byl cyclipostin A 2. Tyto frakce byly spojeny, odpařeny ve vakuu a poté odděleny na koloně SP 250/10 Nucleosil 100-5 C18 HD® (21 _x 250 mm) . Jako gradient byl použit 50 až 66% ·· ·
acetonitrilem v 0,01% trifluoroctové kyselině, pH hodnota roztoku byla přikapáním roztoku amonium hydroxidu nastavena na 4,0. Frakce obsahující čisté sloučeniny byly spojeny a odpařeny do sucha. Bylo získáno 5,4 mg čistého cyclipostinu A ve formě voskovité látky a 3 mg cyclipostinu A 2 ve formě oleje.
Příklad 9
Charakterizace cyclipostinu A
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
IR-pásy: 1752 a 1671 cm1.
Pomocí vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie v matrici nitrobenzylalkohol/LiCl byla nalezena následující molekulární hmotnost: 467,2757 amu, odpovídající sumárnímu vzorci cyclipostinu A-Li C23H41O7PLÍ. Z toho vyplývá sumární vzorec pro cyclipostin A C23H41O7P, molekulární hmotnost 460.
Pomocí elektrospray hmotnostní spektrometrie v positivním ionizačním módu (ESI, positivní) byly nalezeny píky 461 amu, odpovídající (M+H)+, kromě toho charakteristický pík při 221 amu, odpovídající C7H10O6P. V ESI negativním módu byly nalezeny píky 459 amu (M-H)~ (C16H34O5P) a 219 amu (C7H8O6P) . K určení polohy alkoholické skupiny byla sloučenina derivatizována pomocí N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamidu a vzorek byl zkoumán pomocí hmotnostní spektrometrie a elektronovou ionizací. Vzniká trimethylsilyl derivát:
o hmotnosti 554 amu. Poloha silylované hydroxyskupiny byla prokázána pomocí intensivních iontů 497 (α-štěpení) a 159 amu (α-štěpení).
NMR signály: viz Tabulka 1
Tabulka 1:
XH a 13C NMR chemické posuny cyclipostinu A v methanol-d4 při 300 K
| 1H | ||
| 1 | - | 171,08 (1,4 Hz)0* |
| 2 | - | 114,61 (3,4 Ηζ)^ |
| 3 | 3,87 | 40,75 |
| 4 | 4,46/3,86 | 66,04 |
| 5 | 4,31/4,25 | 69,39 (6,0 Hz)0J |
| 6 | - | 161,47 (8,0 Hz)D) |
| 7 | 2,40 | 17,89 (4,6 Hz)D> . |
| 1‘ | 4,25 | 71,61 (6,6 Hz)*0 |
| 2' | 1,73 | 31,16 (6,6 Hz)0) |
| 3* | 1,41 | 26,39 |
| n4 | 3,49 | 72,45 |
| n±1 | 1,46-1,33 | 38,44, 38,15 |
| 4*-14* (a) | 1,37-1,26 | 30,85-30,58 |
| 15* | 1,34 | 23,84 |
| 16* | 0,91 | 14,43 |
Ji_a..n_+l ______ ______________, _________________________
b) v závorce uvedeny 13C/31P interakční konstanty.
··
Příklad 10
Charakterizace cyclipostinu B
Cyclipostin B byl připraven podle popisu v Příkladu 8 pro cyclipostin A, vícenásobným opakováním chromatografického postupu a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9. Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí elektrospray hmotnostní spektrometrie v positivním ionizačním módu (ESI, positivní) byly nalezeny píky 461 amu, odpovídající (M+H)*, kromě toho charakteristický pík při 221 amu, odpovídající C7H10O6P. V ESI negativním módu byly nalezeny píky 459 amu (M-H)~, 337 amu (C16H34O5P) a 219 amu (C7H8O6P). K určení polohy alkoholické skupiny byla sloučenina derivatizována pomocí N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamidu a vzorek byl zkoumán pomocí hmotnostní spektrometrie a elektronovou ionizací. Vzniká trimethylsilyl derivát o hmotnosti 554 amu.:
O OSi(CH3)3 >
° OSI(CH3)3
Poloha silylované hydroxyskupiny byla prokázána pomocí intensivních iontů 511 (α-štěpení) a 145 amu (α-štěpení). Sumární vzorec cyclipostinu B: C23H41O7P, molekulová hmotnost: 460.
Příklad 11:
--------Charakterizace—c-ye-l-i-postinu C-.-------- - -----------------------33
Cyclipostin C byl připraven podle popisu v Příkladu: 8 pro cyclipostin A, vícenásobným opakováním chromatografického postupu a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9. Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheřu pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí elektrospray hmotnostní spektrometrie v positivním ionizačním módu (ESI, positivní) byly nalezeny píky 461 amu, odpovídající (M+H)+, kromě toho charakteristický pík při 221 amu, odpovídající ΟγΗιοΟβΡ. V ESI negativním módu byly nalezeny píky 459 amu (M-H), 337 amu (C16H34O5P) a 219 amu (Ο7Η8Ο6Ρ). K určení polohy alkoholické skupiny byla sloučenina derivatizována pomocí N-methyl-N-trimethylšilyltrifluoracetamidu a vzorek byl zkoumán pomocí hmotnostní spektrometrie a elektronovou 'ionizací. Vzniká trimethylsilyl derivát o hmotnosti 554 amu.:
OSi(CH3)3
Poloha silylované hydroxyskupiny byla prokázána pomocí intensivních iontů 525 (α-štěpení) a 131 amu (α-štěpení). Sumární vzorec cyclipostinů B: C23H41O7P, molekulová hmotnost: 460.
Příklad 12
Charakterizace cyclipostinů F. 1
F r akce- 20,“ získaná podlé Přikradu' '6 ” bylá oddělen a- stej ně~ j ako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin F byl získán postupu a byl rozpouštědlech vícenásobným opakováním chromatografického charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 13,2 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance. UV-maximum: 22 8 nm v methanolu.
Pomocí elektrospray hmotnostní spektrometrie v positivním ionizačním módu (ESI, positivní) byly nalezeny píky 459 amu, odpovídající (M+H)+, kromě toho charakteristický pík při 221 amu, odpovídající C7H10O6P. V ESI negativním módu byly nalezeny píky 457,6 amu (M-H)~, 336 amu (C16H32O5P) a 219 amu (C7H8O6P) .
Sumární vzorec cyclipostinu B: C23H39O7P,
Molekulová hmotnost: 458.
Příklad 13
Charakterizace cyclipostinu P
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin P byl získán vícenásobným opakováním chromatografického postupu (210 mg) a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9. Cyclipostin P byl krystalizován rozpuštěním 210 mg ve 3 ml propanol-2-olu a 13 ml acetonitrilu a přídavkem 8 ml vody.
Retenční doba: 17,7 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovitá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
IČ -pásy :- 2 917, 2852, 1753-,-1671, 1471, 1214, 996 a 832 cm’1.--Pomocí vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie v matrici nitrobenzylalkoholu byla nalezena následující molekulární ·· 9 • 9 · · · • 9999 • ·
9 9· · hmotnost: 445,2717 amu, odpovídající (M+H)+ sumárnímu vzorci cyclipostinu P: C23H42O6P. Z toho vyplývá sumární vzorec pro cyclipostin P C23H41O6P, molekulární hmotnost 444. Pomocí elektrospray hmotnostní spektrometrie v positivním ionizačním módu (ESI, positivní) byly nalezeny píky 445 amu, odpovídající (M+H)+, kromě toho charakteristický pík při 221 amu, odpovídající C7H10O6P. V ESI negativním módu byly nalezeny píky 443 amu (M-H), 321 amu (C16H32O4P) a 219 amu (C7H8O6P) .
NMR data jsou uvedeny v Tabulce 2.
Tabulka 2: Chemické posuny cyclipostinu P v MeOD při 300 K.
| Ή | 13c | |
| 1 | 171,08 | |
| 2 | - | 114,60(3,0 Hz)B> |
| 3 | 3,87 | 40,74 |
| 4 | 4,47/3,85 | 66,05 |
| 5 | 4,30/4,25 | 69,40 (6,0 Hz)3' |
| 6 | - | '161,47 (8,0 Hz)a) |
| 7 | 2,40 | 17,90 (4,6 Hz)aJ |
| 1' | 4,24 | 71,62 (6,9 Hz)a) |
| 2* | 1,73 | 31,16 (6,3 Hz)B> |
| 3* | 1,41 | 26,38 |
| 4*-13* | 1,34-1,29 | 30,76-30,11 |
| 14* | 1,34-1,29 | 33,07 |
| 15* | 1,31 | 23,72 |
| 16* | 0,89 | 14,42 |
a)V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
·-· · · ·· • · · '·· · · · fr · ««« · · · · · · ······ fr· · ·· fr · · • · fr · · · · · ···· · ··· ··* ··' ····
Příklad 14
Charakterizace cyclipostinů P 2
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin P byl získán vícenásobným opakováním chromatograf ického postupu (130 mg) a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 17,1 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie v matrici ,,nitrobenzylalkoholu byla nalezena následující molekulární hmotnost: 445,2721 amu, odpovídající (M+H)+ sumárnímu vzorci cyclipostinů P: C23H42O6P· Z toho vyplývá sumární vzorec pro cyclipostin P 2 C23H41O6P, molekulární hmotnost 444. Pomocí elektrospray hmotnostní spektrometrie v positivním ionizačním módu (ESI, positivní) byly nalezeny píky 445 amu, odpovídající (M+H)+, kromě toho charakteristický pík při 221 amu, odpovídající C7H10O6P. V ESI negativním módu byly nalezeny píky 443 amu (M-H)~, 321 amu (Ci6H32O4P) a 219 amu (C7H8O6P) .
NMR data j sou uvedeny v Tabulce 3.
Tabulka 3: Chemické posuny cyclipostinů P 2 v MeOD při 300 K.
• ·4 ·α »«» ·» · » 9 · · • β « 9 < « • · · · · * · • · 9 9 9 9
999 ,·>.· 99 9999
| 1H | -- | |
| 1 | - | 171,05 |
| 2 | - | 114,60 (3,2 Hz)a) |
| 3 | 3,87 | 40,74 |
| 4 | 4,46/3,85 | 66,02 |
| 5 | 4,30/4,25 | 69,38 (6,0 Hz)aJ |
| 6 | - | 161,46 (8,0 Hz)a> |
| 7 | 2,40 | 17,90 (4,6 Hz)aJ |
| 1' | 4,24 | 71,60 (6,9 Hz)a} |
| 2' | 1,73 | 31,16 (6,3 HZ)a} |
| 3' | 1,41 | 26,39 |
| 4-1Γ | 1,34-1,29 | 31,04-30,11 |
| 12' | 1,29 | 28,53 |
| 13' | 1,17 | 40,25 |
| 14' | 1,52 | 29,15 |
| 15‘,16' | 0,87 | 23,04 |
a)V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
Příklad 15
Výroba a charakterizace cyclipostinu N
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin N byl získán vícenásobným opakováním chromatografického postupu (2 mg) a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 15,9 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance.
UV-maximum: 22 8 nm _v methanolu------------------------------ -------------------------Pomocí vysokorozlisovací hmotnostní spektrometrie v matrici nitrobenzylalkoholu byl nalezen kvasi-molekulární iont (M+H)+ • · • « ····
417,2405 amu, odpovídající sumárnímu vzorci cyclipostinu N: C21H38O6P (Teorie: 417,2406). Charakteristický pík v ESI positivním módu: 221 amu.
Tabulka 4: Chemické posuny cyclipostinu N v MeOD při 300 K.
| 'H | -*č- | |
| 1 | - | 171,07 |
| 2 | - | 114,60 (3,1 Hz)a) |
| 3 | 3,87 | 40,74 |
| 4 | 4,45/3,84 | 66,03 |
| 5 | 4,30/4,25 | 69,39 (5,9 Hz)a) |
| 6 | - | 161,47 (8,0 Hz)a) |
| 7 | 2,40 | 17,90 (4,9 Hz)a> |
| 1* | 4,24 | 71,60 (6,6 Hz)a) |
| 2* | 1,73 | 31,16 (6,2 Hz)3* |
| 3* | 1,41 | 26,38 |
| 4-1Γ | 1,35-1,26 | 30,76-30,11 |
| 12' | 1,35-1,26 | 33,06 |
| 13* | 1,31 | 23,72 |
| 14‘ | 0,89 | 14,41 |
a)V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
Příklad 16
Výroba a charakterizace cyclipostinu R
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin R byl získán vícenásobným opakováním chromatografického postupu (8 mg) a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 16,7 min.
Vzhled:______ Látka rozpustná--v organických -.....-rozpouštědlech---obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo^rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance.
·· « » • · · • · · • · « <fc· ·· *» 0 « e * β · * · ··*·
·.·· ·· fcfc • · · • · >
« · · · • · · ·· ···<
UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí vysokorozlisovací hmotnostní spektrometrie za podmínek FÁB-MS byl nalezen kvasi-molekulární iont (M+H)+ 431,2561 amu, odpovídající sumárnímu vzorci cyclipostinu R: C22H40O6P (Teorie: 431,2562). Charakteristický pík v ESI positivním módu: 221 amu.
Tabulka 5: Chemické posuny cyclipostinu R v MeOD při 300 K.
| Ή | 13c | |
| 1 | - | 171,06 |
| 2 | - | 114,58 (3,2 Hz)a; |
| 3 | 3,87 | 40,75 |
| 4 | 4,45/3,85 | 66,04 |
| 5 | 4,30/4,25 | 69,40 (6,0 Hz)a) |
| 6 | - | 161,48 (8,0 Hz)aJ |
| 7 | 2,40 | 17,90 (5,0 Hz)a) |
| 1‘ | 4,24 | 71f 61 (7,0 Hz)aJ |
| 2‘ | 1,73 | 31,16 (6,2 Hz)8) |
| 3‘ | 1,41 | 26,38 |
| 4‘-12’ | 1,37-1,25 | 30,74-30,10 |
| 13‘ | 1,17 | 33,06 |
| 14' | 1,30 | 23,71 |
| 15‘ | 0,89 | 14,40 |
a)V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
Příklad 17
Výroba a charakterizace cyclipostinu R2
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin R2 byl získán vícenásobným opakováním chromatografického postupu (8 mg)_a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 16,4 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, voskovítá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie za podmínek FAB-MS byl nalezen kvasi-molekulární iont (M+H)+ 431,2564 amu, odpovídající sumárnímu vzorci cyclipostinů R2: C22H40O6P (Teorie: 431,2562). Charakteristický pík v ESI positivním módu: 221 amu.
Tabulka 6: Chemické posuny cyclipostinů R2 v MeOD při 300 K.
| -Ή-- | 13c | |
| 1 | - | 171,06 (1,7 Hz)aJ |
| 2 | - | 114,58 (3,1 Hz)a} |
| 3 | 3,87 | 40,75 |
| 4 | 4,46/3,85 | 66,03 |
| 5 | 4,30/4,25 | 69,39 (6,0 Hz)aJ |
| 6 | 161,47 (8,0 Hz)a> | |
| 7 | 2,40 | 17,90 (4,9 Hz)aJ |
| 1* | 4,24 | 71,60 (6,9 Hz)a) |
| 2* | 1,73 | 31,16 (6,6 Hz)a) |
| 3‘ | 1,41 | 26,38 |
| 4‘-10* | 1,37-1,25 | 31,02-30,10 |
| 11* | 1,29 | 28,51 |
| 12‘ | 1,16 | 40,24 |
| 13‘ | 1,51 | 29,15 |
| 14‘,15' | 0,87 | 23,02 |
a)V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
Příklad 18 _ _________ ___________________________________—.........Výroba a charakterizace cyclipostinů S
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin S byl získán vícenásobným opakováním chromatograf i ckého postupu (0,7 mg) a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 18,5 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, tuhá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie za podmínek FAB-MS byl nalezen kvasi-molekulární iont (M+H) + 459,2883 amu, odpovídající sumárnímu vzorci cyclipostinu S: C24H44O6P ^(Teorie: 459,2575). Charakteristický pík v ESI positivním módu: 235 amu.
Tabulka 7: Chemické posuny cyclipostinu S v MeOD při 300 K.
| 1H | --,yC | |
| 1 | - | 170,87 (1,4 Hz)SJ |
| 2 | - | 113,66(3,1 Hz)a) |
| 3 | 3,85 | 40,77 |
| 4 | 4,45/3,85 | 66,04 |
| 5 | 4,29/4,24 | 69,17 (6,0 Hz)a) |
| 6 | - | 165,80 (8,3 Hz)a> |
| 7 | 2,98/2,82 | 25,05 (4,6 Hz)a} |
| 8 | 1,16 | 10,86 |
| 1’ | 4,25 | 71,57(6,9 Hz)a) |
| 2' | 1,74 | 31,19 (6,3 Hz)aJ |
| 3' | 1,42 | 26,41 |
| 4-13' | 1,34-1,29 | 30,76-30,11 |
| 14* | 1,34-1,29 | 33,07 |
| 15’ | 1,31 | 23,73 |
| --------16, | 0,89 | 14,43 |
a)V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
Příklad 19
Výroba a charakterizace cyclipostinu T
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin T byl získán vícenásobným opakováním chromatografického postupu (5 mg) a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 19,1 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo rozpustná, neutrální, bezbarvá, tuhá substance. UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie za podmínek FAB-MS byl nalezen kvasi-molekulární iont (M+H) + 473,3030 amu, odpovídající sumárnímu vzorci cyclipostinu Τ: C25H46O6P (Teorie: 473,3032). Charakteristický pík v ESI positivním módu: 249 amu.
Tabulka 8: Chemické posuny cyclipostinu T v MeOD při 300 K.
| TH~- | 13C | |
| 1 | 170,98(1,7 Hz)a) | |
| 2 | - | 114,39(3,1 Hz)a> |
| 3 | 3,87 | 40,78 |
| 4 | 4,46/3,85 | 66,02 |
| 5 | 4,29/4,26 | 69,23 (5,9 Hz)8’ |
| 6 | - | 164,69 (8,7 Hz)a> |
| 7 | 2,89/2,83 | 33,35 (4,5 Hz)a) |
| 8 | 1,65 | 20,63 |
| 9 | 0,98 | 13,84 |
| 1‘ | 4,25 | 71,57 (6,6 Hz)8’ |
| 2‘ | 1,74 | 31,18 (6,2 Hz)a} |
| 3‘ | 1,42 | 26,42 |
| 4'-13‘ | 1,34-1,29 | 30,78-30,11 |
| 14* | 1,34-1,29 | 33,06 |
| 15' | 1,31 | 23,72 |
| 16* | 0,89 | 14,42 |
a) V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
Příklad 20
Výroba a charakterizace cyclipostinu T2
Frakce 21, získaná podle Příkladů 5 a 6 byla oddělena stejně jako bylo popsáno v Příkladu 8 a cyclipostin T2 byl získán vícenásobným opakováním chromatografického postupu (4 mg) a byl charakterizován stejně jako v Příkladu 9.
Retenční doba: 18,7 min.
Vzhled: Látka rozpustná v organických rozpouštědlech obsahujících kyslík, zatímco ve vodě a petroletheru pouze málo_jrozp-US_tná., neutrální-,- bezbarvá,—tuhá substance.-------------UV-maximum: 228 nm v methanolu.
Pomocí vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie za podmínek FAB-MS byl nalezen kvasi-molekulární iont (M+H)+ 473,3035 amu, odpovídající sumárnímu vzorci cyclipostinu T: C25H46O6P (Teorie: 473,3032). Charakteristický pík v ESI positivním módu: 249 amu. ·
Tabulka 9: Chemické posuny cyclipostinu T2 v MeOD při 300 K.
| --ri- | 4dC | |
| 1 | - | 170,98 (1,7 Hz)” |
| 2 | - | 114,40(3,1 Hz)” |
| 3 | 3,87 | 40,78 |
| 4 | 4,46/3,85 | 66,02 |
| 5 | 4,29/4,25 | 69,23 (5,9 Hz)” |
| 6 | 164,69 (8,7 Hz)” | |
| 7 | 2,90/2,83 | 33,35 (4,5 Hz)” |
| 8 | 1,65 | 20,63 |
| 9 | 0,98 | 13,84 |
| 1* | 4,24 | 71,57 (6,9 Hz)” |
| 2* | 1,74 | 31,18 (6,2 Hz)” |
| 3* | 1,42 | 26,42 |
| 4'-11* | 1,37-1,25 | 31,03-30,11 |
| 12* | 1,29 | 28,52 |
| 13* | 1,17 | 40,25 |
| 14* | 1,52 | 29,15 |
| 15*, 16* | 0,87 | 23,03 |
a)V závorkách jsou uvedeny interakční konstanty 13C/31P.
Příklad 21
Blokování hormon-sensitivní lipásy (HSL)
Hodnoty IC50 pro blokování hormon-sensitivní lipásy u krys s trioleylglycerínem jako substrátem:
| Cyclipostin A: | 20 nM, |
| Cyclipostin N: | 450 nM, |
| Cyclipostin P: | 30 nM, |
| Cyclipostin P2: | 40 nM, |
| Cyclipostin R: | 10 nM, |
| Cyclipostin R2: | 220 nM, |
| Cyclipostin S: | 20 nM, |
| Cyclipostin T: | 200 nM, |
| Cyclipostin T2: | 60 nM. |
il
Claims (13)
- Patentové nároky1. Sloučenina obecného vzorce IO kdeR1 je1. uhlovodíkový řetězec se 2 až 30 atomy uhlíku, který může být rovný, rozvětvený, nasycený nebo nenasycený, karbocyklický nebo heterocyklický, přičemž uhlovodíkový řetězec je případně jednou nebo dvakrát substituovaný s:1.1 —OH skupinou,1.2 =0 skupinou,1.3 -0-Ci-C6~alkylovou skupinou, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,1.4 -0-C2-C6-alkenylovou skupinou, kde alkenyl je rovný nebo rozvětvený,1\ 5 -Ci-C6-alkylovou skupinou, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,1.6 -arylovou skupinou,1.7 -Ci-C6-alkylbenzenem,1.8 -difenylem,1.9 -NH-Ci-C6-alkylovou skupinou, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,1.10 -NH-C2-C6-alkenylovou skupinou, kde alkenyl je rovný nebo rozvětvený,1.11 -NH2 skupinou, _________T. 12* =S * skupinou,1.13 -S-Ci-C6-alkylovou skupinou, kde alkyl je rovný nebo rozvětvený,9 9< 9« • 9 9' · 9 9' ·9 9 9 * 9 99 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 ·9999 99 99 99991.14 -S-C2-C6-alkenylovou skupinou, kde alkenyl je rovný nebo rozvětvený,1.15 halogenem, kde substituenty 1.1 až 1.15 mohou být také substituovány, 2.0 - [-aryl-(CH2) nim skupina, kde - [-aryl- (CH2) n3m skupina je nesubstituované nebo substituována jednou nebo dvakrát substituenty popanými v 1.1 až 1.15 a n am jsou nezávisle na sobě celá čísla 0, 1, 2, nebo 3;R2 je1.0 Ci-Ce-alkylová skupina, kde alkyl je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo dvakrát substituenty popsanými v 1.1 až 1.15,
- 2.0 C2-C6-alkenylová skupina, kde alkenyl je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo dvakrát substituenty popsanými v 1.1 až 1.15,
- 3.0 Ci-C6~alkynylová skupina, kde alkynyl je nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo dvakrát substituenty popsanými v 1.1 až 1.15,E je fosfor (P) nebo síra (S) ,Xi, X2 a X3 jsou nezávisle na sobě 1.0 -0-,2.0 -NH-,3.0 -N=,
- 4.0 —S—, nebo 5.0 -CH2- a -CHR2-,...______ve všech jej ích stereochemických formách a směsích těchto forem libovolného obsahu, stejně jako její fyziologicky přijatelné soli a chemické ekvivalenty.·*' · • 9999 ··2. Sloučenina vzorce I nebo její fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 1, kde R1 představuje uhlovodíkový řetězec* s 10 až 18 atomy uhlíku, který může být rovný, rozvětvený, nasycený nebo nenasycený, karbocyklický nebo heterocyklický nebo aromatický, přičemž uhlovodíkový řetězec je nesubstituovaný nebo jedenkrát nebo dvakrát substituovaný substituenty popsanými v 1.1 až 1.15.3. Sloučenina vzorce I nebo její fyziologicky přijatelná sůl podle nároků 1 nebo 2, kdeR1 s označujeI. 0 -(CH2)15CH3,2.0 -(CH2)13CH(CH3)2,3.0 - (CH2) nCH (OH) (CH2) 3CH3,4.0 -(CH2)nCH{OH)CH2CH(CH3)2,
- 5.0 -(CH2)i2CH(OH) (CH2)2CH3,
- 6.0 -(CH2)i3CH(OH)CH2CH3,
- 7.0 -(CH2)i4CH(OH)CH3, ’8.0 -(CH2)i5CH2(OH) ,9.0 -(CH2)16CH3,10.0 -(CH2)13C=OCH2CH3,II. 0 -(CH2)12C=OCH2CH2CH3,12.0 -(CH2)iiC=OCH2CH2CH2CH3,13.0 -(CH2)i3CH3,14.0 -(CH2)iiCH(CH3)2,15.0 -(CH2)14CH3, nebo 16.0 -(CH2)i2CH(CH3)2.4. Sloučenina vzorce I nebo její fyziologicky přijatelná sůl ____________podle -nároků—1-, --2-- nebo -3 ,--kde _R2~j'e_‘aTkyl”ma’j íb_í 1 až 6 atomů uhlíku.» 4 4 · 4 · » 4 4 4 9 • · 4 9 4 4 4 44-4 4 fr · · •4 4 9 • 4444 ·5. Sloučenina vzorce I nebo její fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 4, kde R2 je -CH3, -CH2CH3 nebo -CH2CH2CH3 skupina.6. Sloučenina vzorce I nebo její fyziologicky přijatelná sůl podle nároků 1 až 5, kterou lze připravit pomocí mikroorganismu Streptomyces species HAG 004107, DSM 13381 nebo jeho variantou nebo mutací za vhodných podmínek fermentací v kultivačním médiu až do namnožení jedné nebo více sloučenin obecného vzorce I v kultivačním médiu, přičemž může být získána závěrečnou izolací z kultivačního média, a případně převedena do formy chemického ekvivalentu a fyziologicky přijatelné soli.7. Způsob výroby sloučeniny vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli podle nároků laž 6, vyznačuj ící se ti m, že se mikroorganismus Streptomyces species HAG .004107, DSM 13381 nebo jeho varianta nebo mutace fermentuje v kultivačním médiu za vhodných podmínek až do namnožení jedné nebo více sloučenin obecného vzorce I v kultivačním médiu, přičemž sloučenina se získává závěrečnou izolací z kultivačního média, a případně se převádí do formy chemického ekvivalentu a fyziologicky přijatelné soli.
- 8. Způsob výroby sloučeniny vzorce I podle nároku 7, vyznačující se tím, že se fermentace provádí za anerobních podmínek při teplotách od 18 do 35 °C při pH v hodnotách od 6 do 8.
- 9—Použití sloučeniny vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli podle nároků 1 až 6 jako léčivo.« «! · · · · · · · · • · fr ·· · · · · · • · « · · · · · * • frfr·· · · · · · · · * • · ♦ ····« ···· · ··· *· ·· ····
- 10. Použití sloučeniny vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli podle nároků 1 až 6 jako léčivo k potlačení lipás.
- 11. Použití sloučeniny vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli podle nároků 1 až 6 jako antidiabetikum.
- 12. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu vzorce I nebo její fyziologicky přijatelnou sůl podle nároků 1 až 6.
- 13. Způsob výroby farmaceutického přípravku podle nároku 12, vyznačující setím, že se alespoň jedna sloučenina vzorce I nebo její fyziologicky přijatelnou sůl podle nároků 1 až.6 přivede do vhodné dávkově formy společná s vhodnou pomocnou látkou a/nebo nosičem.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10021731A DE10021731B4 (de) | 2000-05-04 | 2000-05-04 | Cyclipostine, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Zubereitung derselben |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20023547A3 true CZ20023547A3 (cs) | 2003-02-12 |
Family
ID=7640768
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20023547A CZ20023547A3 (cs) | 2000-05-04 | 2001-04-25 | Cyclipostin, způsob jeho výroby a použití |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1280812B1 (cs) |
| JP (1) | JP5038572B2 (cs) |
| KR (1) | KR100779867B1 (cs) |
| CN (1) | CN1216890C (cs) |
| AR (1) | AR028398A1 (cs) |
| AT (1) | ATE288442T1 (cs) |
| AU (2) | AU2001262229B2 (cs) |
| BR (1) | BR0110459A (cs) |
| CA (1) | CA2407808C (cs) |
| CZ (1) | CZ20023547A3 (cs) |
| DE (2) | DE10021731B4 (cs) |
| DK (1) | DK1280812T3 (cs) |
| EE (1) | EE05090B1 (cs) |
| ES (1) | ES2236234T3 (cs) |
| HK (1) | HK1055745A1 (cs) |
| HR (1) | HRP20020864A2 (cs) |
| HU (1) | HUP0300306A3 (cs) |
| IL (2) | IL152612A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA02010297A (cs) |
| NO (1) | NO330438B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ522352A (cs) |
| PL (1) | PL358328A1 (cs) |
| PT (1) | PT1280812E (cs) |
| RU (1) | RU2266911C2 (cs) |
| SK (1) | SK15602002A3 (cs) |
| WO (1) | WO2001083497A1 (cs) |
| YU (1) | YU81502A (cs) |
| ZA (1) | ZA200208928B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8110665B2 (en) | 2003-11-13 | 2012-02-07 | Hanmi Holdings Co., Ltd. | Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin FC region as a carrier |
| US7736653B2 (en) | 2003-11-13 | 2010-06-15 | Hanmi Pharm. Co., Ltd | Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin Fc region as a carrier |
| KR100754667B1 (ko) | 2005-04-08 | 2007-09-03 | 한미약품 주식회사 | 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물 |
| EP1894601A1 (en) | 2006-08-29 | 2008-03-05 | sanofi-aventis | Treating mycobacterial infections with cyclipostins |
| KR200453850Y1 (ko) * | 2008-04-23 | 2011-05-30 | 주식회사 에이티티알앤디 | 수질 관리 센서 내장형 수도미터기 |
| KR102073748B1 (ko) | 2013-01-31 | 2020-02-05 | 한미약품 주식회사 | 재조합 효모 형질전환체 및 이를 이용하여 면역글로불린 단편을 생산하는 방법 |
| AR096891A1 (es) | 2013-07-12 | 2016-02-03 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04145089A (ja) * | 1990-10-05 | 1992-05-19 | Nippon Kayaku Co Ltd | 抗生物質ｎｋ９０１０９３、その製造法及びそれを有効成分として含有する殺虫・殺ダニ剤 |
| JPH0656859A (ja) * | 1991-07-25 | 1994-03-01 | Nippon Kayaku Co Ltd | 抗生物質ｎｋ９０１０９３ａ、その製造法及びそれを有効成分として含有する殺虫・殺ダニ剤 |
-
2000
- 2000-05-04 DE DE10021731A patent/DE10021731B4/de not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-04-25 RU RU2002132558/04A patent/RU2266911C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-04-25 PT PT01936275T patent/PT1280812E/pt unknown
- 2001-04-25 CZ CZ20023547A patent/CZ20023547A3/cs unknown
- 2001-04-25 PL PL01358328A patent/PL358328A1/xx unknown
- 2001-04-25 NZ NZ522352A patent/NZ522352A/en unknown
- 2001-04-25 SK SK1560-2002A patent/SK15602002A3/sk unknown
- 2001-04-25 EE EEP200200599A patent/EE05090B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-04-25 MX MXPA02010297A patent/MXPA02010297A/es active IP Right Grant
- 2001-04-25 AT AT01936275T patent/ATE288442T1/de active
- 2001-04-25 DE DE50105249T patent/DE50105249D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 YU YU81502A patent/YU81502A/sh unknown
- 2001-04-25 ES ES01936275T patent/ES2236234T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 HU HU0300306A patent/HUP0300306A3/hu unknown
- 2001-04-25 CA CA2407808A patent/CA2407808C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 EP EP01936275A patent/EP1280812B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 CN CN018088813A patent/CN1216890C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 WO PCT/EP2001/004652 patent/WO2001083497A1/de active IP Right Grant
- 2001-04-25 AU AU2001262229A patent/AU2001262229B2/en not_active Ceased
- 2001-04-25 BR BR0110459-4A patent/BR0110459A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-04-25 DK DK01936275T patent/DK1280812T3/da active
- 2001-04-25 JP JP2001580922A patent/JP5038572B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 IL IL15261201A patent/IL152612A0/xx unknown
- 2001-04-25 AU AU6222901A patent/AU6222901A/xx active Pending
- 2001-04-25 KR KR1020027014691A patent/KR100779867B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-05-02 AR ARP010102068A patent/AR028398A1/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-10-30 NO NO20025209A patent/NO330438B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-10-31 HR HRP20020864 patent/HRP20020864A2/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-11-03 IL IL152612A patent/IL152612A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-04 ZA ZA200208928A patent/ZA200208928B/en unknown
-
2003
- 2003-11-06 HK HK03108059A patent/HK1055745A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2007291075A (ja) | 新規化合物ステレニン及びその製造方法 | |
| CZ261493A3 (en) | Pharmacologically active compounds, process of their preparation and pharmaceutical preparations in which they are comprised | |
| CZ20023547A3 (cs) | Cyclipostin, způsob jeho výroby a použití | |
| FI101978B (fi) | Menetelmä leustroduksiinien valmistamiseksi | |
| KR100229257B1 (ko) | 폴리히드록시시클로펜탄 유도체, 그의 제조방법 및 그의 치료적 용도 | |
| RU2134694C1 (ru) | Аминоолигосахарид ск-4416, способ его получения, ингибитор сахаридгидролазы и антибактериальный агент | |
| US6756402B2 (en) | Cyclipostins, process for their preparation and use thereof | |
| US6297043B1 (en) | Mumbaistatin, a process for it's production and its use as a pharmaceutical | |
| JP3786461B2 (ja) | 新生理活性物質 | |
| US5436231A (en) | Adenophostins | |
| KR0148207B1 (ko) | 인지질 분해효소 a₂억제물질을 생성하는 스트렙토마이세스 종 pi-005 | |
| JP2971204B2 (ja) | 新規物質ｗｋ−２９５５およびその製造法 | |
| EP1193249A1 (en) | Citrullimycines, a process for their production and their use as pharmaceuticals | |
| JP2002034589A (ja) | 新規生理活性物質１１００−５０ | |
| WO1996026956A1 (en) | Protein phosphatase inhibitor |