CN105055534B - 高纯度岩黄连生物碱的生产方法 - Google Patents

Abstract

高纯度岩黄连生物碱的生产方法，主要包括下述步骤：1)药材干燥粉碎；2)纤维素酶和果胶酶组成的复合酶酶解；3)体积浓度50～90％乙醇为提取溶剂进行提取浓缩；4)离心分离；5)离子交换树脂处理得到粗总生物碱；6)粗总生物碱经过二级膜过滤，得到提纯物。该方法操作简便、易行，提取工艺条件温和，提取率高，分离纯化过程中生物碱损失少，回收率高，产品纯度高，可以获得总生物碱含量大于98％的岩黄连生物碱，完全满足制药要求。产品经检测，岩黄连生物碱含量98.6％，重金属、农残、微生物均符合国标GB/T5009、4789标准。

Description

高纯度岩黄连生物碱的生产方法

技术领域

本发明涉及植物药的制备，具体涉及岩黄连，更具体是一种高纯度岩黄连生物碱的生产方法。

背景技术

岩黄连(学名：Corydalis saxicola Bunting)别称：岩胡、岩连、菊花黄连、土黄连、石生黄堇，属罂粟目罂粟科，多年生草本植物，生于山地林缘岩石隙缝中，在我国南方多有分布，主要分布在分布于甘肃、湖北、广西、四川、贵州、云南等地，而广西多见于桂西及桂西北等地，以东兰、巴马、都安、靖西、德保较多。岩黄连是广西特色壮药【蓝日春，樊立勇，韦作干.164种特色壮药的分类及来源[J].中国民族医药杂志，2011，17(12)，36-40】，岩黄连在黔桂两省特别是桂西北地区有着比较悠久的应用历史，属于民间特效药，具有清热解毒、治疗肝炎等多重疗效。

岩黄连根或全草均可入药，全草含小檗碱，消旋卡文定碱，去氢卡文定碱，消旋岩黄连碱，左旋-13β羟基金罂粟碱，右旋四氢掌叶防己碱，左旋四氢非洲防己碱，原阿片碱，斯氏紫堇碱，白屈菜红碱等生物碱。

岩黄连性味苦、寒，凉。归经：入胃、肝经、大肠经。功用：清热解毒、利湿、安定、散瘀消肿，止痛止血、具有抗炎、利胆、抗病毒、杀菌、镇静镇痛、增强免疫功能、抗肿瘤的作用、岩黄连对甲、乙、丙型肝炎病毒均存在不同程度的抑制和杀灭作用，并且能快速产生抗体，同时能够有效稳定肝脏细胞膜、线粒体膜，并且还能促进肝细胞再生，起到保肝护肝的作用。

以岩黄连为原料提取纯化的岩黄连生物碱已被制成岩黄连注射液，临床主要应用于：1)治疗肝硬化、肝癌；2)治疗肝炎；也用于治疗高胆红素血症。

岩黄连药物的开发应用极大地促进了以岩黄连为原料提取纯化制备高纯度岩黄连生物碱的发展。CN 102600247 B公开了岩黄连生物碱提取物及制备方法，在原材料的预处理中，用纤维素酶配合果胶酶对药材进行酶水解，用两次层析法提取出总生物碱，含量达95％以上，使用的溶剂只有乙醇。然而该方法所得的生物碱的纯度还不高，不足以保证药品的使用安全性。

发明内容

为了确保药品的使用安全性，满足制药要求，为岩黄连药物的开发提供质量可靠的原料药，本发明公开一种高纯度岩黄连生物碱的生产方法。

本发明采取以下方法实现上述目的。

高纯度岩黄连生物碱的生产方法，主要包括下述步骤：

1)药材干燥粉碎：将岩黄连干燥后粉碎；所述岩黄连为全草。

2)酶解：粉碎后的药材加入到酶解池中，加水，再加入由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶，在温度35～65℃，pH4～6.5条件下酶解2～72h，得到酶解混合物；所述的酶解混合物就是酶解后酶解池中的全部物料；

3)提取浓缩：以体积浓度50～90％乙醇为提取溶剂，对酶解混合物提取三次，每次提取溶剂用量为酶解混合物重量的3～10倍，合并提取液，浓缩至含药材折算量2～10g/l；所述的含干燥药材折算量为：最开始投入的干燥药材重量与浓缩得到的液体体积之比；如果最开始投入干燥药材一吨，到这一步骤浓缩至500L，则结果为2g/l。

4)分离：浓缩液放置4～8小时后离心处理，收集沉淀物。

5)离子交换树脂处理：离心沉淀物用稀酸溶解，用酸性阳离子交换树脂吸附，先水洗至无色，再用体积浓度70％～80％、pH7.5～10的碱性乙醇溶液的洗脱液进行解析，收集解吸后的溶液，调到中性，除去乙醇后过滤得到粗总生物碱。

6)纯化：溶解粗总生物碱，先用截留值10000～50000的超滤膜过滤，再用截留值1000～3000的膜过滤，得到提纯物；

7)干燥、包装。

上述方法还包括下述的选择或改进。

在步骤2)，温度为35～40℃，pH为4～6，酶解4～24h，纤维素酶和果胶酶的比例为1∶0.1～3，复合酶的用量为0.1％～1％，加水量为干燥药材重量的1～5倍。

更进一步，在步骤2)，温度为40℃，pH为4.5，酶解6h，纤维素酶和果胶酶的比例为1∶0.5，复合酶的用量为0.25％～0.45％，加水量为干燥药材重量的3倍。

特别地，本发明中的上述步骤3)改变为：将上一批物料的第3次提取液用作为下一批物料的第1次提取溶剂，且只合并前两次提取液送入浓缩。

作为优选，在步骤3)，提取溶剂为75％乙醇，每次提取时间为1～4小时，提取液浓缩至含干燥药材折算量2g/l。

在步骤4)，浓缩液放置时，对浓缩液进行降温处理。

作为优选，降温处理包括循环水冷却。

在步骤5)，酸性阳离子交换树脂包括D-113、D-151、D-072、110或001×7，稀酸为1～10％重量浓度的稀盐酸、稀硫酸或稀硝酸。

在步骤6)，溶解采用水和/或乙醇，优选采用乙醇；同样作为优选，先用截留值10000的超滤膜过滤，除去大分子杂质，再用截留值1000的膜过滤除去小分子。

作为优选，在步骤7)，干燥采用真空干燥，温度不超过60℃。

本发明相对于已有技术，其积极效果如下：

一、优化复合酶解技术：操作简便、易行，对设备要求不高，酶解条件温和，降低了随后的溶剂提取难度，使整个提取工艺条件温和化，有助于保持药效成分的原有性质并显著提高药效成分的提取率。

二、离子交换树脂处理：吸附与解吸的效果好，总生物碱的洗脱率达到96％以上；生物碱损失少，回收率均在90％以上，并且本方法所用溶剂毒性小，纯化步骤少，对环境污染小，树脂可再生重复利用。

三、两级膜分离纯化技术：可以得到的岩黄连生物碱提取物产品纯度达到≥98％以上，使产品更适于制备岩黄连注射液。

四、溶剂套提技术：将上一批物料的第3次提取液用作为下一批物料的第1次提取溶剂，可以有效节省提取溶媒，节约20％以上；节省热能10％，减少浓缩溶媒量20％左右；提取率≥95％。

该方法可以获得总生物碱含量大于98％的岩黄连生物碱，完全满足制药要求。产品经检测，岩黄连生物碱含量98.6％，重金属、农残、微生物均符合国标GB/T5009、4789标准。

具体实施方式

实施例1

1)将岩黄连干燥后粉碎；

2)然后投料到酶解池，加干燥药材重量的3倍的水，再加入由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶，复合酶中纤维素酶和果胶酶的比例为1∶0.5，复合酶的用量为0.45％，在温度40℃，pH4.5条件下酶解6h，得到酶解混合物；

3)以体积浓度75％乙醇为提取溶剂，对酶解混合物提取三次，时间分别为2、1.5、1小时，各次提取溶剂用量分别为酶解混合物重量的6、5、4倍，合并前两次提取液，回收乙醇至无乙醇味，并浓缩至含干燥药材折算量2g/l；

第3次提取液用作为下一批物料的第1次提取溶剂，即为所述的套提。

4)浓缩液自然放置并用循环水冷却，4小时后离心处理，收集沉淀物。

5)离心沉淀物用5％重量浓度的稀盐酸溶解，用D-151酸性阳离子交换树脂吸附，先水洗至无色，再用体积浓度70％、pH8的碱性乙醇溶液的洗脱液进行解析，收集解吸后的溶液，调到中性，除去乙醇后过滤得到粗总生物碱，其含岩黄连总生物碱为70～80％。

6)粗总生物碱用乙醇溶解，先用截留值10000的超滤膜过滤，除去大分子杂质，再用截留值1000的膜过滤除去小分子，得到提纯物；其含岩黄连总生物碱大于98％。

7)温度不超过60℃条件真空干燥后包装。

实施例2

1)将岩黄连干燥后粉碎；

2)然后投料到酶解池，加干燥药材重量的3倍的水，再加入由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶，复合酶中纤维素酶和果胶酶的比例为1∶0.1，复合酶的用量为0.1％，在温度40℃，pH4.5条件下酶解4h，得到酶解混合物；

3)以体积浓度75％乙醇为提取溶剂，对酶解混合物提取三次，时间分别为2、1.5、1小时，各次提取溶剂用量分别为酶解混合物重量的6、5、4倍，合并前两次提取液，回收乙醇至无乙醇味，并浓缩至含干燥药材折算量2g/l；

第3次提取液用作为下一批物料的第1次提取溶剂，即为所述的套提。

4)浓缩液自然放置并用循环水冷却，4小时后离心处理，收集沉淀物。

5)离心沉淀物用5％重量浓度的稀硝酸溶解，用001×7酸性阳离子交换树脂吸附，先水洗至无色，再用体积浓度70％、pH8的碱性乙醇溶液的洗脱液进行解析，收集解吸后的溶液，调到中性，除去乙醇后过滤得到粗总生物碱，其含岩黄连总生物碱为70～80％。

6)粗总生物碱用乙醇溶解，先用截留值10000的超滤膜，除去大分子杂质，再用截留值1000的膜除去小分子，得到提纯物；其含岩黄连总生物碱大于98％。

7)温度不超过60℃条件真空干燥后包装。

实施例3

1)将岩黄连干燥后粉碎；

2)然后投料到酶解池，加干燥药材重量的3倍的水，再加入由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶，复合酶中纤维素酶和果胶酶的比例为1∶3，复合酶的用量为1％，在温度40℃，pH6条件下酶解24h，得到酶解混合物；

3)以体积浓度75％乙醇为提取溶剂，对酶解混合物提取三次，时间分别为2、1.5、1小时，各次提取溶剂用量分别为酶解混合物重量的6、5、4倍，合并前两次提取液，回收乙醇至无乙醇味，并浓缩至含干燥药材折算量2g/l；

第3次提取液用作为下一批物料的第1次提取溶剂，即为所述的套提。

4)浓缩液自然放置并用循环水冷却，4小时后离心处理，收集沉淀物。

5)离心沉淀物用5％重量浓度的稀硫溶解，用D-151酸性阳离子交换树脂吸附，先水洗至无色，再用体积浓度70％、pH8的碱性乙醇溶液的洗脱液进行解析，收集解吸后的溶液，调到中性，除去乙醇后过滤得到粗总生物碱，其含岩黄连总生物碱为70～80％。

6)粗总生物碱用水溶解，先用截留值10000的超滤膜，除去大分子杂质，再用截留值1000的膜除去小分子，得到提纯物；其含岩黄连总生物碱大于98％。

7)温度不超过60℃条件真空干燥后包装。

Claims (7)

1.高纯度岩黄连生物碱的生产方法，主要包括下述步骤：

1)药材干燥粉碎：将岩黄连干燥后粉碎；

2)酶解：粉碎后的药材加入到酶解池中，加水，再加入由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶，在温度35～65℃，pH4～6.5条件下酶解2～72h，得到酶解混合物；纤维素酶和果胶酶的比例为1∶0.1～3，复合酶的用量为0.1％～1％，加水量为干燥药材重量的1～5倍；

3)提取浓缩：以体积浓度50～90％乙醇为提取溶剂，对酶解混合物提取三次，每次提取溶剂用量为酶解混合物重量的3～10倍，合并提取液，浓缩至含干燥药材折算量2～10g/l；

4)分离：浓缩液放置4～8小时后离心处理，收集沉淀物；浓缩液放置时，对浓缩液进行降温处理；

5)离子交换树脂处理：离心沉淀物用稀酸溶解，用酸性阳离子交换树脂吸附，先水洗至无色，再用体积浓度70％～80％、pH7.5～10的碱性乙醇溶液的洗脱液进行解析，收集解吸后的溶液，调到中性，除去乙醇后过滤得到粗总生物碱；酸性阳离子交换树脂包括D-113、D-151、D-072、110或001×7，稀酸为1～10％重量浓度的稀盐酸、稀硫酸或稀硝酸；

6)纯化：采用水和/或乙醇溶解粗总生物碱，先用截留值10000～50000的超滤膜过滤，再用截留值1000～3000的膜过滤，得到提纯物；

7)干燥、包装；采用真空干燥，温度不超过60℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤2)，温度为35～40℃，pH为4～6，酶解4～24h，纤维素酶和果胶酶的比例为1∶0.1～3，复合酶的用量为0.1％～1％，加水量为干燥药材重量的1～5倍。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：在步骤2)，温度为40℃，pH为4.5，酶解6h，纤维素酶和果胶酶的比例为1∶0.5，复合酶的用量为0.25％～0.45％，加水量为干燥药材重量的3倍。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)改变为：将上一批物料的第3次提取液用作为下一批物料的第1次提取溶剂，且只合并前两次提取液送入浓缩。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤3)，提取溶剂为75％乙醇，每次提取时间为1～4小时，提取液浓缩至含干燥药材折算量2g/l。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：降温处理包括循环水冷却。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤6)，先用截留值10000的超滤膜过滤，再用截留值1000的膜过滤。