CN105051013A - 拉喹莫德钠晶体及其改进的制造方法 - Google Patents

拉喹莫德钠晶体及其改进的制造方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了涉及结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物的主题，其中(i)>90％的拉喹莫德钠颗粒体积总量具有粒径≤40微米(ii)≥50％的拉喹莫德钠颗粒体积总量具有粒径≤15微米，其中有关堆积密度、轻叩密度和某些杂质的量方面满足一个或更多的进一步的要求。本发明还提供药物组合物，其包括一定量的拉喹莫德和BH-3-HLAQ、MCQ、MCQCA、MCQME、NEA和MCQEE的至少一种。本发明还提供了制备BH-3-HLAQ、MCQ、MCQCA、MCQME、MCQEE的方法和由所述方法制备的化合物。进一步提供了一种测试拉喹莫德样品是否含有不想要的杂质的方法。进一步提供了(a)制备经验证的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，(b)分发经验证批次的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，(c)验证一批次的含有拉喹莫德的药物产品的方法，和(d)制备包括拉喹莫德的经包装的药物组合物的方法，每个包括测定样品或批次中BH-3-HLAQ、MCQ、MCQCA、MCQME、NEA和MCQEE的至少一种的量。本发明还提供了使用BH-3-HLAQ、MCQ、MCQCA、MCQME、MCQEE作为参考标准以检测包含拉喹莫德的药物组合物中微量的杂质。最后，本发明提供了测定包括拉喹莫德的药物组合物中BH-3-HLAQ、MCQ、MCQCA、MCQME、MCQEE、5-HLAQ、螺-LAQ或3H-LAQ浓度的方法。

Description

拉喹莫德钠晶体及其改进的制造方法
本申请案要求2013年3月14日提交的美国临时申请号61/785,575的优先权，所述申请的全部内容以引用的方式并入本文中。
在整个本申请中，各种出版物按出版物的第一作者和年份提及。这些出版物的完整引用呈现于紧接于权利要求书之前的参考文献部分中。为了更全部地描述本文描述的发明的现有技术的状态，参考文献部分引用的出版物的公开内容特此以其全文引用的方式并入本申请中。
背景技术
拉喹莫德(Laquinimod)是一种已经在急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(aEAE)模型中显示有效的化合物(美国专利号6,077,851)。其化学名称为N-乙基-N-苯基-1,2,-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧喹啉-3-甲酰胺(N-ethyl-N-phenyl-1,2,-dihydro-4-hydroxy-5-chloro-1-methyl-2-oxoquinoline-3-carboxamide)以及其化学登记号是248281-84-7。
拉喹莫德是一种具有以下化学结构的小分子：
拉喹莫德
拉喹莫德钠具有高的口服生物可用性并且已经被教导作为口服制剂治疗多发性硬化(MS)(Polman,C.etal.,(2005)“TreatmentwithlaquinimodreducesdevelopmentofactiveMRIlesionsinrelapsingMS”,Neurology.64:987-991；Sandberg-WollheimM,etal.(2005)“48-weekopensafetystudywithhigh-doseorallaquinimodinpatients”,MultScler.11:S154)。研究还显示拉喹莫德可降低复发性MS中活动性MRI病变的发展。(Polman,C.etal.,(2005)“TreatmentwithlaquinimodreducesdevelopmentofactiveMRIlesionsinrelapsingMS”,Neurology.64:987-991)。
为了将拉喹莫德制备成制药药物产品，制造方法需要考虑本文公开的存在于产物中杂质的可能。拉喹莫德的早期合成生产的产品受杂质污染，例如甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(methyl5-chloro-4-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1,2–dihydroquinoline-3-carboxylate)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉(5-chloro-4-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1,2-dihydroquinoline)(K.Janssonetal.,(2006)“SynthesisandReactivityofLaquinimod,aQuinoline-3-carboxamide:IntramolecularTransferoftheEnolProtontoaNitrogenAtomasaPlausibleMechanismforKeteneFormation,J.Org.Chem.,71,1658-1667)。几个其它的杂质也已经被公开了(美国专利号.6,077,851；美国专利号6,875,869；和美国专利号7,884,208)。美国专利申请公开号2012/0010239(其内容以引用的方式并入本申请)公开了杂质5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-chloro-4-hydroxy-1-methyl-2-oxo-N-phenyl-1,2–dihydroquinoline-3-carboxamide)。美国专利申请公开号2013/0217724(其内容以引用的方式并入本申请)公开了杂质N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(N-ethyl-4,5-dihydroxy-1-methyl-2-oxo-N-phenyl-1,2–dihydroquinoline-3-carboxamide)。美国专利申请公开号2013/00345256(其内容以引用的方式并入本申请)公开了杂质N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(甲基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(N-ethyl-4-hydroxy-1-methyl-5-(methyl(2,3,4,5,6–pentahydroxyhexyl)amino)-2-oxo-N-phenyl-1,2-dihydroquinoline-3-carboxamide)。美国专利号8,178,127(其内容以引用的方式并入本申请)公开了杂质2-氯-6-(1-乙基-N-甲基-2-氧吲哚-3-甲酰胺)苯甲酸(2-chloro-6-(1-ethyl-N-methyl-2-oxoindoline-3-carboxamido)benzoicacid),1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮(1H,3H-spiro[5-chloro-1-methylquinoline-2,4-dione-3,3’-[1]ethylindolin-[2]-one)和5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基,1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(5-chloro-N-ethyl-3-hydroxy-1-methyl-2,4-dioxo-N-phenyl,1,2,3,4-tetrahydroquinoline-3-carboxamide)。
美国专利号6,077,851公开了拉喹莫德的合成方法和其盐的制备。美国专利号6,875,869公开了具有低含量的某些杂质的拉喹莫德酸(而不是拉喹莫德钠)的其它合成方法。美国专利号7,884,208教导了制备拉喹莫德钠的方法，该方法在去除了盐形成步骤之后出现的某些杂质，从而导致更高纯度的结晶混合物以及具有大颗粒和改进的轻叩和堆积密度(tappedandbulkdensity)结晶混合物。包括拉喹莫德钠的药物组合物被公开在PCT国际申请公开号WO2005/074899中。
在美国专利号6,077,851公开的拉喹莫德钠的制备中，拉喹莫德酸被悬浮在乙醇中，并且5M氢氧化钠溶液被加入。搅拌后，生成的沉淀物被过滤，用乙醇洗涤并且干燥。美国专利号6,077,851中的制备拉喹莫德钠方法普遍地被称为浆体到浆体(slurry-to-slurry)盐形成。
在美国专利号6,077,851公开的浆体到浆体盐形成方法中，拉喹莫德钠并非溶解在溶液中。因此，任何固体杂质(如果存在于拉喹莫德钠悬浮液中)无法通过过滤被去除。
美国专利号6,875,869公开了一种以高产率和低含量杂质制备碱性化合物拉喹莫德的方法。然而，美国专利号6,875,869中的方法仅仅用于合成碱性化合物(拉喹莫德酸)而不是盐。照此，浆体到浆体盐形成方法仍然需要形成钠盐。
美国专利号7,884,208教导了一种改进的用于制备拉喹莫德钠的方法，该方法产生了具有较高纯度的晶体以及具有改进的结晶性质(例如，包括不高于2ppm重金属且具有较高的轻叩密度)的晶体。在美国专利号7,884,208的实例13-17中公开的方法中，拉喹莫德钠被溶解在水中以形成水溶液；浓缩所述水溶液；然后水溶性的反溶剂被添加到浓缩的溶液中以形成拉喹莫德钠晶体。美国专利号7,884,208的方法除去了在盐形成之后的杂质，因此，产生了比直接由美国专利号6,077,851公开的“浆体到浆体”方法产生的拉喹莫德钠纯度更高的拉喹莫德钠。
发明内容
本发明提供了结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，其中
a)所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b)所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c)存在于所述混合物中重金属的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm重金属；
d)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(5-Chloro-4-hydroxy-1-methylquinolin-2(1H)-one)(MCQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
e)所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(5-chloro-4-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1,2-dihydroquinoline-3-carboxylicacid)(MCQCA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
f)存在于所述混合物中的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(methyl5-chloro-4-hydroxy-1-methyl-2-oxo-1,2-dihydroquinoline-3-carboxylate)(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
g)存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
h)存在于所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；或
i)存在于所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(N-ethyl-4,5-dihydroxy-1-methyl-2-oxo-N-phenyl-1,2-dihydroquinoline-3-carboxamide)(5-HLAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
本发明提供了结晶拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有小于5微米的粒径，其中：
a)所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b)所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c)存在于所述混合物中重金属的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
d)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
e)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
f)存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
g)存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
h)存在于所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；或
i)存在于所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
本发明提供了一种包括本文所描述的混合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供了一种重结晶拉喹莫德钠的方法，所述方法包括：
a)在水中溶解一定量的拉喹莫德钠以形成水溶液；
b)浓缩水溶液以形成包括约1.7-1.8ml水/克拉喹莫德钠的浓缩溶液；
c)添加丙酮到步骤b)的浓缩溶液中；以及
d)分离结晶的拉喹莫德钠。
本发明还提供了一种由本文记载的方法制备的结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物和包括所述混合物的药物组合物。
本发明提供了一种结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，其中
a)所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm；
b)所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm；
c)所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm；
d)所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm。
本发明还提供了一种包括本文描述的混合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还提供了一种经分离的具有下述结构的化合物：
或其盐。
本发明还提供了一种包括具有下述结构的化合物的组合物：
或其盐，其中所述组合物不含拉喹莫德或其盐。
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括一定量的拉喹莫德和2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(2-chloro-6-(3-(ethyl(phenyl)amino)-2-hydroxy-N-methyl-3-oxopropanamido)benzoicacid)(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(Ethyl5-chloro-4-hydroxy-1-ethyl-2-oxo-1,2-dihydroquinoline-3-carboxylate)(MCQEE)的至少一种，其中a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或d)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或e)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或f)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中。
本发明还提供了一种制备2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)的方法，所述方法包括步骤：a)添加氢氧化钠溶液到5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(5-chloro-N-ethyl-3-hydroxy-1-methyl-2,4-dioxo-N-phenyl-1,2,3,4–tetrahydroquinoline-3-carboxamide)水悬浮液中，b)搅拌步骤a)的混合物，然后添加盐酸溶液，c)用乙酸乙酯萃取水溶液，d)用盐水洗涤有机相，e)用硫酸钠干燥有机相，f)过滤悬浮液，g)蒸发滤液，h)通过从异丙醇中结晶纯化残留物，i)冷却悬浮液，然后过滤并且用异丙醇洗涤，以及j)获得和干燥的最终白色固体。
本发明还提供了2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，其由上述描述的方法制备。
本发明还提供了一种制备5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的方法，所述方法包括步骤：a)加热5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)和二甲亚砜的混合物，b)冷却步骤a)的混合物，以及c)过滤步骤b)的混合物以及收集最终的滤液。
本发明还提供了由上述描述的方法制备的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)。
本发明还提供了一种制备5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的方法，所述方法包括步骤：a)加热盐酸的乙酸(醋酸)溶液中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)混合物，b)冷却步骤a)的混合物，c)用异丙醇稀释步骤b)的混合物并且进一步冷却稀释的混合物，以及d)滤出由步骤c)产生的晶体。
本发明还提供了由上述记载的方法制备的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)。
本发明还提供了一种制备甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的方法，所述方法包括下述步骤：a)通过丙二酸二甲酯在二甲基甲酰胺中与甲醇钠溶液反应形成丙二酸二甲酯钠(sodiumdimethylmalonate)，b)中间体5-氯-1-甲基-1H-苯并[D][1,3]嗪-2,4-二酮(5-chloro-1-methyl-1h-benzo[D][1,3]oxazine-2,4-dione)与丙二酸二甲酯钠反应以形成甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)钠盐，以及，c)酸化甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)钠盐成为甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。
本发明还提供了由上述记载的方法制备的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。
本发明还提供了一种制备乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的方法，所述方法包括下述步骤：a)添加氢化钠到5-氯-1-甲基-1h-苯并[D][1,3]嗪-2,4-二酮和丙二酸二乙酯的二甲基甲酰胺溶液中，b)加热步骤a)的混合物同时搅拌，c)冷却步骤b)的溶液，d)淬灭步骤c)的反应混合物，e)酸化步骤d)的混合物，f)过滤，然后干燥步骤e)的混合物，以及g)通过在乙醇中溶解然后慢慢冷却，结晶步骤f)的粗产品。
本发明还提供了由上述记载的方法制备的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种测试拉喹莫德样品是否含有不想要的杂质的方法，所述方法包括测定样品是否含有具有下述结构的化合物：
本发明还提供了一种制备经验证的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，所述方法包括：a)获得一批次拉喹莫德；b)采用HPLC方法，测定所述批次中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及c)从所述批次制备所述药物组合物，仅在
i)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，或
ii)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，或
iii)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％、0.12％或0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，或
iv)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
v)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种用于制备包括拉喹莫德的药物组合物或用于分发经验证批次的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，所述方法包括：a)获得一批次的拉喹莫德或所述药物组合物；b)进行该批次样品的稳定性实验；c)稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述批次的样品中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的总量；以及d)验证所述批次用于分发或从所述批次制备所述药物组合物，仅在稳定性测试之后所述批次的样品含有
i)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，或
ii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，或
iii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％、0.12％或0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，或
iv)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
v)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.1％的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种验证一批次含有拉喹莫德或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物产品用于分发的方法，所述方法包括a)对所述批次的样品进行稳定性实验；b)稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述批次的样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及c)验证该批次用于分发，仅在稳定性测试之后所述批次的样品含有
i)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的1.0％的2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，或
ii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％或0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
iii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％的组合的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)。
本发明还提供了一种制备包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐的经包装的药物组合物的方法，所述方法包括：a)获得一批次的包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐的药物组合物；b)对所述批次的样品进行稳定性测试；c)稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及d)包装所述药物组合物，仅在
i)所述样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于1.0％，或
ii)所述样品中N-乙基苯胺(NEA)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.5％或0.1％，
iii)所述样品中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％。
本发明还提供了杂质或其盐用作参考标准以检测药物组合物中微量的杂质，所述药物组合物包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐，其中所述杂质选自由下述组成的群组：2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准(标准品)溶液c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液(resolutionsolution)，d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或冰醋酸调节到pH为7.0±0.05，e)配制包括缓冲溶液和乙腈的稀释溶液(diluentsolution)，f)配制包括稀释溶液和含水乙腈溶液的空白溶液，g)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液以及样品溶液进样到HPLC中，h)采用240nm处紫外吸收和稀释溶液作为流动相运行HPLC，i)测定样品溶液色谱图中杂质的峰的保留时间(RT)和面积，以及j)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)或乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液，并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，e)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，f)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，g)采用240nm紫外吸收和缓冲溶液和乙腈的混合物的流动相运行HPLC，h)测定样品溶液色谱图中杂质的峰的保留时间(RT)和面积，以及i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是N-乙基苯胺(NEA)、1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮](螺-LAQ)或5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包括杂质的标准溶液，c)配制包括杂质的定量极限(QL)溶液(QuantitationLimit(QL)solution)，d)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，e)通过在水中溶解磷酸二氢铵配制缓冲溶液，并且用氨水或磷酸调节pH到7.0±0.10，f)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，g)将分辨溶液、空白溶液、QL溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，h)采用212nm紫外吸收和缓冲溶液、乙腈和甲醇的混合物的流动相运行HPLC，i)测定样品溶液色谱图中杂质的峰的保留时间(RT)和面积，以及j)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)或N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(2,3,4,5,6-五羟基己氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(N-ethyl-4-hydroxy-1-methyl-5-(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexylamino)-2-oxo-N-phenyl-1,2-dihydroquinoline-3-carboxamide)(MEG-LAQ)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液，并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，e)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，f)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，g)采用242nm紫外吸收和空白溶液作为流动相运行HPLC，h)测定样品溶液色谱图中杂质的峰的保留时间(RT)和面积，以及i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)或N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，d)配制包括甲醇和乙腈的空白溶液，e)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液，并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，f)将分辨溶液、空白溶液和样品溶液进样到HPLC中，g)采用240nm紫外吸收以及包括乙腈和缓冲溶液的流动相运行HPLC，h)测定样品溶液色谱图中杂质的峰的保留时间(RT)和面积，以及i)用标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是N-乙基苯胺(NEA)、5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)或1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮](螺-LAQ)。
附图说明
图1：美国专利号7,884,208中图1。
图2：美国专利号7,884,208中图2。
图3：HPLC数据—拉喹莫德钠混合物的实例色谱图。
图4：HPLC数据—拉喹莫德钠的纯色谱图。
图5：典型批次的粗拉喹莫德钠在第一放大级别的显微镜照图。
图6：典型批次的粗拉喹莫德钠在第二放大级别的显微镜照图。
图7：批次C在第一放大级别的显微镜图。
图8：批次C在第二放大级别的显微镜图。
图9：DMSO中MCQ的1H-NMR图谱。
图10：DMSO中MCQ的13C-NMR图谱。
图11：MCQ的质谱图(ES+模式)。
图12：MCQ在KBr中的傅立叶变换红外光谱图。
图13：MCQCA在D2O+KOH中的1H-NMR光谱图。
图14：MCQCA在D2O+KOH中的13C-NMR光谱图。
图15：MCQCA的质谱图(ES+模式)。
图16：MCQCA的傅立叶变换红外光谱图。
图17：MCQEE在CDCl3中的1H-NMR光谱图。
图18：MCQEE在CDCl3中13C-NMR光谱图。
图19：MCQEE的质谱图(ES+模式)。
图20：MCQEE的傅立叶变换红外光谱图。
图21：5-HLAQ在DMSO中的1H-NMR光谱图。
图22：5-HLAQ在DMSO中的13C-NMR光谱图。
图23：5-HLAQ的质谱(ES+模式)。
图24：5-HLAQ的傅立叶变换红外光谱图。
图25：DELAQ在CDCl3中的1H-NMR光谱图。
图26：DELAQ在CDCl3中的13C-NMR光谱图。
图27：DELAQ的质谱图(ES+模式)。
图28：DELAQ在KBr中的傅立叶变换红外光谱图。
图29：3-HLAQ在CDCl3中的1H-NMR光谱图。
图30：3-HLAQ在CDCl3中的13C-NMR光谱图。
图31：3-HLAQ的质谱图(ES+模式)。
图32：3-HLAQ的傅立叶变换红外光谱图。
图33：螺-LAQ在DMSO中的1H-NMR光谱图。
图34：螺-LAQ在DMSO中的13C-NMR光谱图。
图35：螺-LAQ的质谱图(ES+模型)。
图36：螺-LAQ的傅立叶变换红外光谱图。
图37：BH-3-HLAQ在DMSO中的1H-NMR。
图38：BH-3-HLAQ在DMSO中的13C-NMR。
图39：BH-3-HLAQ的质谱图(ES+模式)。
图40：BH-3-HLAQ的FT-IR光谱图。
图41：分辨率测试色谱图(resolutiontestchromatogram)(研磨(晶体)之前的拉喹莫德钠和药物物质)—由保留时间鉴定和由HPLC测定含量和极性杂质/降解产物(极性IDD)。
图42：稀释剂色谱图(研磨(晶体)之前的拉喹莫德钠和药物物质)—由保留时间鉴定和由HPLC测定含量和极性杂质/降解产物(极性IDD)。
图43：含量分析的典型色谱图(研磨(晶体)之前的拉喹莫德钠和药物物质)—由保留时间鉴定和由HPLC测定含量和极性杂质/降解产物(极性IDD)。
图44：杂质测试的典型色谱图(研磨(晶体)之前的拉喹莫德钠和药物物质)—由保留时间鉴定和由HPLC测定含量和极性杂质/降解产物(极性IDD)。
图45：分辨率测试色谱图(研磨(晶体)之前的拉喹莫德钠和药物物质)—由HPLC测定N-乙基苯胺和非极性杂质(非极性IDD)。
图46：稀释剂色谱图(研磨(晶体)之前的拉喹莫德钠和药物物质)—由HPLC测定N-乙基苯胺和非极性杂质(非极性IDD)。
图47：标准样品色谱图(研磨(晶体)和药物物质之前的拉喹莫德钠)—由HPLC测定N-乙基苯胺和非极性杂质(非极性IDD)。
图48：分辨溶液1(分辨率测试)色谱图，(拉喹莫德胶囊)由HPLC鉴定并且测定含量和极性杂质/降解产物。
图49：分辨溶液2色谱图(拉喹莫德胶囊)，由HPLC鉴定并且测定含量和极性杂质/降解产物。
图50：稀释剂(空白)色谱图(拉喹莫德胶囊)，由HPLC鉴定并且测定含量和极性杂质/降解产物。
图51：用于含量分析的样品色谱图(拉喹莫德胶囊)，由HPLC鉴定并且测定含量和极性杂质/降解产物。
图52：测定杂质/降解产物的样品色谱图—(拉喹莫德胶囊)由HPLC鉴定并且测定含量和极性杂质/降解产物。
图53：分辨率测试色谱图(拉喹莫德胶囊)，测定非极性杂质/降解产物。
图54：空白(稀释剂)色谱图(拉喹莫德胶囊)，测定非极性杂质/降解产物。
图55：样品色谱图(拉喹莫德胶囊)，测定非极性杂质/降解产物。
图56：分辨溶液的典型色谱图(拉喹莫德胶囊)—由HPLC测定MEG-LAQ和BH-3-HLAQ。
图57：空白(稀释剂2)色谱图(拉喹莫德胶囊)—由HPLC测定MEG-LAQ和BH-3-HLAQ。
图58：QL溶液的色谱图(拉喹莫德胶囊)—由HPLC测定MEG-LAQ和BH-3-HLAQ。
图59：标准溶液的色谱图(拉喹莫德胶囊)—由HPLC测定MEG-LAQ和BH-3-HLAQ。
图60：典型样品色谱图(拉喹莫德胶囊)—由HPLC测定MEG-LAQ和BH-3-HLAQ。
具体实施方式
拉喹莫德是一种具有以下化学结构的小分子：
拉喹莫德
它是口服免疫调节剂，其已在各种实验性发炎性/自身免疫性动物模型中显示治疗性作用，所述动物模型例如为实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、用于多发性硬化症(MS)的动物模型、用于发炎性肠道疾病的葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎、用于I型糖尿病(IDDM)的非肥胖糖尿病(NOD)小鼠、用于格林-巴利综合症(Guillain-BarreSyndrome)的实验性自身免疫性神经炎(EAN)、全身性红斑狼疮症(SLE)、狼疮肾炎、狼疮关节炎、克隆氏病(Crohn'sDisease)和类风湿性关节炎。拉喹莫德在这些模型中的治疗活性由多种机理效应引起，该机理效应包括通过调节趋化因子介导的T细胞粘附减少白细胞浸润到目标组织中、调节细胞因子平衡、下调MHCII类引起抗原呈递变化，以及对树突状细胞亚群的作用(PCT国际申请公开号WO2013/169746)。
拉喹莫德的药学上可接受的盐包括锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锰盐、铜盐、锌盐、铝盐和铁盐。拉喹莫德的盐制剂和其制备工艺描述在例如美国专利申请公开号2005/0192315和PCT国际申请公开号WO2005/074899中，它们在此以引用的方式并入本申请中。
本发明提供了结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，其中
a)所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b)所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c)存在于所述混合物中重金属的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm重金属；
d)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
e)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
f)所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
g)存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
h)存在于所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；或
i)存在于所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
在所述混合物的一个实施例中，(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径。
在所述混合物的一个实施例中，拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有5微米或更小的粒径，其中：
a)所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；或
b)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％。
本发明提供了结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有小于5微米的粒径，其中：
a)所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b)所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c)存在于所述混合物中重金属的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm重金属；
d)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
e)存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
f)存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
g)存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
h)存在于所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；或
i)存在于所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
在所述混合物的一个实施例中，在单个批次中制备的所述混合物包括2.5kg或更多拉喹莫德钠的。在所述混合物的一个实施例中，基于所述混合物的未研磨的样品，测定拉喹莫德钠颗粒。在所述混合物的一个实施例中，基于所述混合物的研磨的样品，测定拉喹莫德钠颗粒的尺寸和体积总量。
在所述混合物的一个实施例中，所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度。
在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中铝的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中铝的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于2ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中钙的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中钙的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于25ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中铜的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中铜的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于0.6ppm。在所述混合物的实施例中，所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm。在所述混合物的实施例中，所述混合物中锌的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于4ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中重金属的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm。
在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％。
在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2-酮(1H)(MCQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％。在另一个实施例中，所述混合物中MCQME的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中非极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(DELAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中拉喹莫德酸的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中丙二酸二甲酯的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中丙二酸二乙酯的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中硫酸二甲酯的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于1ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中水的量，相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，按重量计，不高于1.5％。在所述混合物的一个实施例中，钠的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％。
在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中乙醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中正庚烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm。在所述混合物的另一个实施例中，所述混合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm。在所述混合物的另一个实施例中，所述混合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中甲醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于3000ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中丙酮的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中二氧六环的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm。在所述混合物的一个实施例中，所述混合物中二甲基甲酰胺的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
在所述混合物的一个实施例中，详述的化合物存在于所述混合物中。在另一个实施例中，详述的化合物至少以微量存在。
本发明提供了一种包括本发明的混合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于2.00％。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-5-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中非极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(甲基(2,3,4,5,6-五羟己基)氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(MEG-LAQ)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％。
在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中水的量，相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于1.50％。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中水的量，相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于0.80％。在所述药物组合物的一个实施例中，钠的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％的钠。
在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中乙醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中正庚烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm。在所述药物组合物的另一个实施例中，所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm。在所述药物组合物的另一个实施例中，所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中甲醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中丙酮的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中二氧六环的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm。在所述药物组合物的一个实施例中，所述药物组合物中二甲基甲酰胺的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
在所述药物组合物的一个实施例中，详述的化合物存在于所述药物组合物中。在另一个实施例中，详述的化合物至少以微量存在。
本发明提供了一种治疗罹患一种形式的多发性硬化、狼疮肾炎、狼疮关节炎、风湿性关节炎、BDNF相关的紊乱、克隆氏病、GABA相关的紊乱、大麻素受体I型(CB1)介导的紊乱(cannabinoidreceptortype1(CB1)mediateddisorder)或眼部炎症性疾病的个体的方法，所述方法包括向所述个体给药本发明的混合物或本发明的药物组合物，从而治疗所述个体。
本发明提供了一种缓解罹患一种形式的多发性硬化的个体的多发性硬化、狼疮肾炎、狼疮关节炎、风湿性关节炎、BDNF相关的紊乱、克隆氏病、GABA相关的紊乱、大麻素受体I型(CB1)介导的紊乱或眼部炎症性疾病的症状的方法，所述方法包括向所述个体给药本发明任一混合物或本发明的药物组合物，从而缓解所述个体的多发性硬化症状。
在一个实施例中，所述混合物或所述药物组合物在用于治疗一种形式的多发性硬化、狼疮肾炎、狼疮关节炎、风湿性关节炎、BDNF相关的紊乱、克隆氏病、GABA相关的紊乱、大麻素受体I型(CB1)介导的紊乱或眼部炎症性疾病或缓解上述疾病症状中的用途。
本发明提供了混合物或药物组合物在制备用于治疗一种形式的多发性硬化、GABA相关的紊乱、大麻素受体I型(CB1)介导的紊乱、狼疮肾炎、狼疮关节炎、风湿性关节炎、BDNF相关的紊乱、克隆氏病、或眼部炎症性疾病或缓解上述疾病症状的药物中的用途。
本发明提供了一种重结晶拉喹莫德钠的方法，所述方法包括：a)在水中溶解一定量的拉喹莫德钠以形成水溶液；b)浓缩水溶液以形成包括约1.7-1.8ml水/克拉喹莫德钠的浓缩溶液；c)添加丙酮到步骤b)的浓缩溶液中；以及d)分离重结晶的拉喹莫德钠。
在所述方法的一个实施例中，步骤a)中拉喹莫德钠的量为2.5kg或更多；在所述方法的一个实施例中，执行步骤a)，其中10-12ml水/克拉喹莫德钠。在所述方法的一个实施例中，执行步骤a)，其中约11ml水/克拉喹莫德钠。在所述方法的一个实施例中，通过加热水溶液到58-75℃的温度，执行步骤a)。在所述方法的一个实施例中，通过加热水溶液到60-73℃的温度，执行步骤a)。
在所述方法的一个实施例中，结晶在步骤a)之后并且在步骤c)之前发生。
在所述方法的一个实施例中，通过在浓缩步骤b)期间或之后通过快速搅拌诱发结晶。在所述方法的一个实施例中，通过在浓缩步骤b)期间或之后通过添加晶种诱发结晶。在所述方法的一个实施例中，在没有添加晶种的情况下发生结晶。
在所述方法的一个实施例中，在1.7-1.8ml水/克拉喹莫德钠的浓度下，在适合引发结晶的条件下，执行步骤b)。在所述方法的一个实施例中，在28-45℃下，执行步骤b)。在所述方法的一个实施例中，在30-40℃下，执行步骤b)。在所述方法的一个实施例中，执行步骤c)，其中浓缩溶液在40-55℃。在所述方法的一个实施例中，执行步骤c)，其中浓缩溶液在45-50℃。在所述方法的一个实施例中，执行步骤c)，其中6-12ml丙酮/克拉喹莫德钠。在所述方法的一个实施例中，执行步骤c)，其中约10ml丙酮/克拉喹莫德钠。在所述方法的一个实施例中，在1-4小时内执行步骤c)。在所述方法的一个实施例中，在1.2-2.5小时内执行步骤c)。在所述方法的一个实施例中，在步骤c)之后，冷却溶液到不低于-14℃并且不高于6℃的温度。在所述方法的一个实施例中，在步骤c)之后，冷却溶液到不低于-4℃并且不高于4℃的温度。
在所述方法的一个实施例中，所述溶液在3-5小时内冷却。在所述方法的一个实施例中，所述溶液在3.5-4.5小时内冷却。
在所述方法的一个实施例中，步骤d)进一步包括用步骤a)中采用的1-4ml丙酮/克粗拉喹莫德钠洗涤重结晶的拉喹莫德钠。在所述方法的一个实施例中，步骤d)进一步包括用步骤a)中采用的约3ml丙酮/克粗拉喹莫德钠洗涤重结晶的拉喹莫德钠。在所述方法的一个实施例中，步骤d)进一步包括在30-40℃下，在不高于50mmHg的真空下干燥结晶的拉喹莫德钠不少于1小时。
在所述方法的一个实施例中，步骤d)中分离的重结晶的拉喹莫德钠是结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，该颗粒具有粒度分布使得(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有小于5微米或更小的粒径。
本发明提供了由本发明的方法制备的结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物。
在由本发明的方法制备的结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物的一个实施例中，(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有5微米或更小的粒径。
在所述混合物的一个实施例中，
a)所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b)所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c)所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm；
d)所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm；
e)所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm；
f)所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm；
g)所述混合物中重金属的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
h)所述混合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
i)所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
j)所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
k)所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
l)所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
m)所述混合物中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
n)所述混合物中非极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
o)所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
p)所述混合物中拉喹莫德酸的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
q)所述混合物中丙二酸二甲酯的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
r)所述混合物中丙二酸二乙酯的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
s)所述混合物中硫酸二甲酯的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于1ppm；
t)所述混合物中水的量，相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，按重量计，不高于1.5％；
u)所述混合物包括相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％量的钠。
v)所述混合物中乙醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
w)所述混合物中正庚烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
x)所述混合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
y)所述混合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm；
z)所述混合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
aa)所述混合物中甲醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于3000ppm；
bb)所述混合物中丙酮的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
cc)所述混合物中二氧六环的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
dd)所述混合物中二甲基甲酰胺的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
在所述混合物的一个实施例中，
a)所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b)所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c)所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm；
d)所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm；
e)所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm；
f)所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm；
g)所述混合物中重金属的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于0.002％；
h)所述混合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
i)所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
j)所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
k)所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
l)所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
m)所述混合物中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
n)所述混合物中非极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
o)所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
p)所述混合物中拉喹莫德酸的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
q)所述混合物中丙二酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
r)所述混合物中丙二酸二乙酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
s)所述混合物中硫酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于1ppm；
t)所述混合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，按重量计，不高于1.5％；
u)所述混合物包括相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％量的钠；
v)所述混合物中乙醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
w)所述混合物中正庚烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
x)所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
y)所述混合物中甲醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于3000ppm；
z)所述混合物中丙酮的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
aa)所述混合物中二氧六环的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
bb)所述混合物中二甲基甲酰胺的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
在一个实施例中，所述混合物中正辛烷的量不高于200ppm。在另一个实施例中，所述混合物中正辛烷的量不高于20ppm。
在所述混合物的一个实施例中，详述的化合物存在于所述混合物中。在另一个实施例中，详述的化合物至少以微量存在。
本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括由本发明的方法制备的结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物和药学上可接受的载体。
在所述药物组合物的一个实施例中，
a)所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
b)所述药物组合物中极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于2.00％；
c)所述药物组合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
d)所述药物组合物中非极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
e)所述药物组合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于0.80％；
f)所述药物组合物包括相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％量的钠；
g)所述药物组合物中乙醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
h)所述药物组合物中正庚烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
i)所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
j)所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm；
k)所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
l)所述药物组合物中甲醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
m)所述药物组合物中丙酮的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm；
n)所述药物组合物中二氧六环的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
o)所述药物组合物中二甲基甲酰胺的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
在所述药物组合物的一个实施例中，
a)所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
b)所述药物组合物中极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于2.00％；
c)所述药物组合物中N-乙基苯胺(NEA)的量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
d)所述药物组合物中非极性杂质的总量，相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
e)所述药物组合物中水的量，相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于0.80％；
f)所述药物组合物包括相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％量的钠；
g)所述药物组合物中乙醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
h)所述药物组合物中正庚烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
i)所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
j)所述药物组合物中甲醇的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
k)所述药物组合物中丙酮的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm；
l)所述药物组合物中二氧六环的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；以及
m)所述药物组合物中二甲基甲酰胺的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
在一个实施例中，所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm。在另一个实施例中，所述药物组合物中正辛烷的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm。
本发明提供了一种结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，其中a)所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm；b)所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm；c)所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm；或d)所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm。
在所述药物组合物的一个实施例中，详述的化合物存在于所述药物组合物中。在另一个实施例中，详述的化合物至少以微量存在。
本发明提供了一种包括本发明的混合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在所述混合物的一个实施例中，拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有1微米或更大、2微米或更大、3微米或更大或4微米或更大的粒径。在所述混合物的一个实施例中，拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％具有大于1微米、大于2微米、大于3微米、大于4微米或大于5微米的粒径。
在所述混合物的又一个实施例中，所述混合物具有0.4g/mL到0.7g/mL、0.44g/mL到0.7g/mL、0.45g/mL到0.7g/mL、0.46g/mL到0.7g/mL或0.5g/mL到0.7g/mL的轻叩密度。在所述混合物的又一个实施例中，所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml、0.2g/ml到0.33g/ml、0.2g/ml到0.31g/ml的堆积密度。
在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物包括甘露醇。在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物包括葡甲胺。在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物包括硬脂富马酸钠。
在所述药物组合物的又一个实施例中，不低于70％标示量的拉喹莫德在30分钟内被溶解。在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物的胶囊含有90-110％标示量的拉喹莫德。在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物的胶囊含有95-105％标示量的拉喹莫德。在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物的胶囊含有98.0-102.0％标示量的拉喹莫德。
在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物具有符合美国药典(U.S.Pharmacopeia)的含量均匀性。在所述药物组合物的又一个实施例中，所述药物组合物具有符合欧洲药典(EuropeanPharmacopeia)的含量均匀性。
本发明还提供了具有以下结构的分离的化合物：
或其盐。
本发明还提供了包括具有以下结构的化合物的组合物：
或其盐，其中所述组合物不含拉喹莫德或其盐。
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括一定量的拉喹莫德和2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种，其中a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或d)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或e)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或f)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的所述药物组合物的一个实施例中，a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在一个实施例中，甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.12％的量存在于所述药物组合物中。在另一个实施例中，甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的所述药物组合物的一个实施例中，a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.06％的量存在于所述药物组合物中，或e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
在一个实施例中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的药物组合物的一个实施例中，a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.03％的量存在于所述药物组合物中，或c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中。
在一个实施例中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的药物组合物的一个实施例中，a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在一个实施例中，甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.12％的量存在于所述药物组合物中。在另一个实施例中，甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。在又一个实施例中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的所述药物组合物的一个实施例中，a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％或大于0.10％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且小于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.06％并且不高于0.10％的量存在于所述药物组合物中，或e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且不高于0.10％的量存在于所述药物组合物中。
在一个实施例中，甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.12％的量存在于所述药物组合物中。在另一个实施例中，甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的药物组合物的一个实施例中，a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％或大于0.03％并且小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.06％的量存在于所述药物组合物中，或e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
在一个实施例中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的药物组合物的实施例中，所述药物组合物进一步包括至少一种药学上可接受的载体。
在本文描述的所述药物组合物的实施例中，a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于1.0％的量存在于所述药物组合物中，或b)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或c)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.5％。
在一个实施例中，N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的所述药物组合物的一个实施例中，a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或e)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，小于0.1％。
在一个实施例中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的药物组合物的一个实施例中，a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.03％的量存在于所述药物组合物中，或d)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或e)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.03％的量存在于所述药物组合物中，或f)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据基于HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或g)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，小于0.03％。
在一个实施例中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的药物组合物的实施例中，a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于1.0％的量存在于所述药物组合物中，或b)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％并且不高于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或c)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，大于0.03％并且不高于0.5％。
在一个实施例中，N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的所述药物组合物的实施例中，a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且不高于1.0％的量存在于所述药物组合物中，或b)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.1％并且不高于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或c)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.1％并且不高于0.5％的量存在于所述药物组合物中。
在本文描述的药物组合物的实施例中，a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或d)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或e)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％并且小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或f)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或g)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，大于0.03％且小于0.1％。
在一个实施中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％的量存在于所述药物组合物中。在另一个实施例中，5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
在一个实施例中，本文描述的所述药物组合物包括拉喹莫德钠盐。在另一个实施例中，所述药物组合物为口服单位剂型。在另一个实施例中，它呈胶囊、片剂或液体悬浮液形式。在另一个实施例中，所述口服单位剂型包括大于0.3mg拉喹莫德。在另一个实施例中，所述口服单位剂型包括大于0.5mg拉喹莫德。在又一个实施例中，所述口服单位剂型包括大于0.6mg拉喹莫德。
本发明还提供了一种制备2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)的方法，所述方法包括下列步骤：a)添加氢氧化钠溶液到5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺的水悬浮液，b)搅拌步骤a)的混合物，然后添加盐酸溶液，c)用乙酸乙酯萃取水溶液，d)用盐水洗涤有机相，e)用硫酸钠干燥有机相，f)过滤悬浮液，g)蒸发滤液，h)通过从异丙醇中结晶纯化残留物，i)冷却悬浮液，然后过滤并且用异丙醇洗涤，以及j)获得并且干燥最终的白色固体。
本发明还提供了由上述描述的方法制备的2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)。
本发明还提供了一种制备5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的方法，所述方法包括下列步骤：a)加热5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)和二甲亚砜的混合物，b)冷却步骤a)的混合物，以及c)过滤步骤b)的混合物以及收集最终的滤液。
本发明还提供了由上述描述的方法制备的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)。
本发明还提供了一种制备5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的方法，所述方法包括下述步骤：a)加热盐酸的乙酸溶液中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)混合物，b)冷却步骤a)的混合物，c)用异丙醇稀释步骤b)的混合物并且进一步冷却稀释的混合物，以及d)滤出由步骤c)产生的晶体。
本发明还提供了由上述描述的方法制备的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)。
本发明还提供了一种制备甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的方法，所述方法包括以下步骤：a)通过丙二酸二甲酯在二甲基甲酰胺中与甲醇钠溶液反应形成丙二酸二甲酯钠，b)将中间体5-氯-1-甲基-1H-苯并[D][1,3]嗪-2,4-二酮与丙二酸二甲酯钠反应形成甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)钠盐，以及c)酸化甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)钠盐成为甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。
本发明还提供了由上述方法制备的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。
本发明还提供了一种制备乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的方法，所述方法包括下述步骤：a)添加氢化钠到5-氯-1-甲基-1氢-苯并[D][1,3]嗪-2,4-二酮和丙二酸二乙酯的二甲基甲酰胺溶液中，b)加热步骤a)的混合物同时搅拌，c)冷却步骤b)的溶液，d)淬灭步骤c)的反应混合物，e)酸化步骤d)的混合物，f)过滤，然后干燥步骤e)的混合物，以及g)通过在乙醇中溶解然后慢慢冷却，结晶步骤f)的粗产品。
本发明还提供了由上述方法制备的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种测试拉喹莫德样品是否含有不想要的杂质的方法，所述方法包括测定样品是否含有具有以下结构的化合物：
本发明还提供了一种制备经验证的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，所述方法包括：a)获得一批次拉喹莫德；b)采用HPLC方法，测定所述批次中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及c)从所述批次制备所述药物组合物，仅在
i)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，或
ii)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，或
iii)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％、0.12％或0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，或
iv)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
v)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
在一个实施例中，在步骤c)中，仅在所述批次经测定具有，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.12％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，才从所述批次制备所述药物组合物。在另一个实施例中，在步骤c)中，仅在所述批次经测定具有，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，才从所述批次制备所述药物组合物。
本发明还提供了一种制备包括拉喹莫德的药物组合物或分发经验证批次的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，所述方法包括：a)获得一批次的拉喹莫德或所述的药物组合物；b)进行该批次样品的稳定性实验；c)稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述批次的样品中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的总量；以及d)验证所述批次用于分发或从所述批次制备所述药物组合物，仅在所述批次的样品在稳定性测试之后含有
i)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，或
ii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，或
iii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％、0.12％或0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，或
iv)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
v)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.1％的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
在一个实施例中，如果步骤d)中，所述批次经验证用于分发，那么所述方法进一步包括分发所述批次的步骤e)。在另一个实施例中，在步骤d)中，所述批次经验证用于分发或从所述批次制备所述药物组合物，仅在所述批次的样品在稳定性测试之后含有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.12％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。在另一个实施例中，在步骤d)中，所述批次经验证分发或从所述批次制备所述药物组合物，仅在所述批次的样品在稳定性测试之后含有，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。
本发明还提供了一种验证一批次含有拉喹莫德或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物产品用于分发的方法，所述方法包括a)对所述批次的样品进行稳定性实验；b)稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述批次的样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及c)验证所述批次用于分发，仅在稳定性测试之后所述批次的样品含有
i)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的1.0％的2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，或
ii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％或0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
iii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％的组合的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)。
在一个实施例中，在步骤c)中，仅在所述批次的样品在稳定性测试之后含有相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，才经验证所述批次用于分发。
本发明还提供了一种制备包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐，并且经包装的药物组合物的方法，所述方法包括：a)获得一批次的包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐的药物组合物；b)对所述批次的样品进行稳定性测试；c)稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及d)包装所述药物组合物，仅在
i)所述样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于1.0％，或
ii)所述样品中N-乙基苯胺(NEA)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.5％或0.1％，
iii)所述样品中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％。
在一个实施例中，在步骤d)中，仅在所述样品中N-乙基苯胺(NEA)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％，才包装所述药物组合物。
在一个实施例中，所述拉喹莫德是拉喹莫德钠盐。
本发明还提供了杂质或其盐用作参考标准以检测药物组合物中微量的杂质，所述药物组合物包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐，其中所述杂质选自由以下组成的群组：2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液，并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，e)配制包括缓冲溶液和乙腈的稀释溶液，f)配制包括稀释溶液和含水乙腈的空白溶液，g)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液以及样品溶液进样到HPLC中，h)采用240nm紫外吸收和稀释溶液作为流动相运行HPLC，i)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，以及j)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)或乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，e)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，f)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，g)采用240nm紫外吸收和缓冲溶液和乙腈的混合物的流动相运行HPLC，h)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，以及i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是N-乙基苯胺(NEA)、1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮](螺-LAQ)或5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括杂质的定量极限(QL)溶液，d)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，e)通过在水中溶解磷酸二氢铵配制缓冲溶液并且用氨水或磷酸调节pH到7.0±0.10，f)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，g)将分辨溶液、空白溶液、QL溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，h)采用212nm紫外吸收和缓冲溶液、乙腈和甲醇的混合物的流动相运行HPLC，i)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，以及j)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)或N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(2,3,4,5,6-五羟基己氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(MEG-LAQ)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或磷酸调节pH到7.0±0.05，e)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，f)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，g)采用242nm紫外吸收和空白溶液作为流动相运行HPLC，h)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，以及i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)或N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)。
本发明还提供了一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，a)从所述药物组合物配制样品溶液，b)配制包含杂质的标准溶液，c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，d)配制包括甲醇和乙腈的空白溶液，e)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，f)将分辨溶液、空白溶液和样品溶液进样到HPLC中，g)采用240nm紫外吸收以及包括乙腈和缓冲溶液的流动相运行HPLC，h)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，以及i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是N-乙基苯胺(NEA)、5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)或1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮](螺-LAQ)。
本文公开的每一实施例被视为可应用于每一个其它的公开的实施例。因此，本文描述的各种因素的全部组合落入本发明的范围内。例如，混合物因素的任何实施例被视为应用于药物组合物。作为另一个实施例，0.46g/mL到0.7g/mL轻叩密度的实施例被视为应用于具有混合物中铝的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，少于5ppm的混合物。
与现有技术相比
申请人预料不到地获得了相比于现有技术的拉喹莫德钠混合物有所改进的结晶的拉喹莫德钠混合物。
美国专利号7,884,208教导了重结晶拉喹莫德钠的方法，该方法制得了，相比于在当时已知的拉喹莫德钠晶体，具有更大的晶体、更低的杂质含量和某些改进的结晶性质的结晶的拉喹莫德钠的混合物。
具体地，美国专利号7,884,208的方法获得了结晶的拉喹莫德钠的混合物，该混合物具有(i)混合物，其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有大于40微米的粒径和其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有大于15微米的粒径，(ii)高密度(轻叩和堆积)，(iii)低重金属含量，以及(iv)低含量的某些极性杂质。
然而，美国专利号7,884,208的重结晶方法(实例13-17,表1-4)未制得重结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中拉喹莫德钠体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或拉喹莫德钠体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径。
同样地，美国专利号7,884,208的重结晶方法未制得重结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中拉喹莫德钠体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径，其中拉喹莫德钠体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径，并且其中拉喹莫德钠体积总量的10％或更多具有小于5微米的粒径。
美国专利号7,884,208的实例14制得了重结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中拉喹莫德钠体积总量的10％或更多具有小于5微米的粒径。然而，该实例还显示了降低质量的结晶性质，具体地说，轻叩密度。实例14中制得的混合物具有可接受的D(0.1)值，但具有不理想的轻叩密度。
相反地，美国专利号7,884,208的实例13制得了具有高轻叩密度的混合物，但是并未制得晶体，其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径。
重要的是，美国专利号7,884,208无法实现重结晶的优势，即，更好的密度和杂质特征，虽然也制得了拉喹莫德钠晶体，其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径。
美国专利号7,884,208(借助于例1(批次A,B和C)和表1-3)还教导了美国专利号6,077,851中公开的方法产生了结晶的拉喹莫德钠的混合物，该混合物具有全部四个特征(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径，或拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，(ii)差的密度(轻叩和体积)，(iii)高重金属含量以及(iv)高极性杂质含量。重要的是，虽然美国专利号6,077,851获得了混合物，其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，但它没有获得具有可接受的密度和低含量杂质的晶体。
现有技术没有教导制备拉喹莫德钠的方法，其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，并且具有理想的密度和纯度特征。
本发明提供了一种方法，该方法能制得重结晶的拉喹莫德钠晶体的混合物，其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，并且具有理想的密度和纯度特征，具体地说，(i)高密度(轻叩或堆积)，(ii)低重金属含量或(iii)低极性杂质含量。
由本发明提供的拉喹莫德钠混合物通过改进的重结晶方法获得。
改进的重结晶方法
由本发明的重结晶方法制备的拉喹莫德钠相比于美国专利号6,077,851中公开的拉喹莫德钠具有改进的纯度和密度特征，相比于美国专利号7,884,208具有改进的结晶性质，尤其是较小的颗粒。
本发明改进的重结晶方法预料不到地导致了不同于美国专利号7,884,208公开的方法获得的重结晶条件，因此，产生了不同的产物。具体地说，浓缩水溶液到1.7-1.8预料不到地产生了具有减小含量的杂质、改进的结晶性质的结晶的拉喹莫德钠颗粒，并且其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径，拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径以及拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有5微米或更小的粒径。
没有局限于任何一个特定的理论，影响结晶的重要因素是结晶溶液的起始浓度。小心控制溶液的浓度可在促进自发结晶在浓缩步骤结束之前开始。本发明的方法可在添加丙酮之前开始自发结晶。
浓缩水溶液以形成包括约1.7-1.8mL水/克拉喹莫德钠的浓缩溶液，这是本发明的一个重要方面。
改进的结晶的拉喹莫德钠的混合物
美国专利号7,884,208教导了与大颗粒相关的优势。具体地说，美国专利号7,884,208教导了当制备药物组合物时，较大颗粒的拉喹莫德钠是更“适合加工的”，并且教导了较小颗粒经常与影响加工的粉尘样性能相关，有时与影响制备的流动性问题相关。另外，美国专利号7,884,208教导了已经显示化学稳定性通过增加源于于较小粒度的表面积被降低(Felmeister,A.Chpt88,Remington'sPharmaceuticalSciences,15thEdition,MackPublishingCompany,Easton,PA(1975))。
然而，本发明已经预料不到地获得改进的拉喹莫德钠的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有5微米或更小的粒径。
拉喹莫德已经被归类为高效的API，要求特别小心并且避免物质接触到工作人员和外界环境。拉喹莫德已经被归类为具有最高的效能速率，相当于按照8小时TWA操作以及制备期间推荐的可接受的日摄入量(ADI)小于0.01mg/天或<1μg/m3。高效能化合物与提供理想等级的工作人员保护的控制相关，无论是工程、给药的还是过程相关。例如，高效能化合物可要求无人类干涉和无手动操作(BruceD.Naumann,ControlBandingInThePharmaceuticalIndustry,http://www.aioh.org.au/downloads/documents/ControlBandingBNaumann.pdf)。
重要的是，虽然可研磨或不研磨本发明的混合物，但是实现本发明不需要研磨操作。
本发明的拉喹莫德钠的混合物克服了与具有大颗粒的混合物相关的潜在问题。对于加工和制备，本发明小粒径的拉喹莫德钠颗粒可避免需要研磨和粉碎步骤。美国专利号7,884,208体现了本领域的理解，即存在与药物组合物中小颗粒相关的问题，但是本发明的拉喹莫德钠不存在与稳定性、加工或制备相关的问题。
对药物物质来说，粉碎引入了的它本身的一系列的问题，并且这些问题超过了引入额外的药物加工步骤的缺点。例如，研磨可引入杂质、新的多晶型物、API晶体结构中的非晶型断面、颗粒形态的其它变化，结块的差别、增加的溶解度、湿度变化以及压缩系数的变化(Hausner,“TheRoleofParticleSizeintheDevelopmentofGenericProducts”2003)。因此，粉碎可能影响药物物质的功效和安全性。与大块结晶呋喃咀啶相比，源于小块结晶呋喃咀啶的副作用说明了研磨的一些缺点(Brumfitt,W.andJ.M.T.Hamilton-Miller,J.AntimicrobialChemotherapy42:363:371(1998))。
因此，生产不含大颗粒的药物物质以避免无效额外加工步骤(例如，研磨或过筛)是有优势的。本发明的拉喹莫德钠提供了具有小粒度的拉喹莫德钠颗粒的混合物，该小粒度避免了安全问题和与研磨相关的其它问题。
制剂加工期间另一需要关注的是保持药物产品含量的均匀性。对于拉喹莫德，拉喹莫德的单位剂量相对于药物产品(例如，片剂或胶囊)的总重是相当低的。典型制剂，例如，在总重超过200mg的胶囊中，可仅仅包括少量的拉喹莫德，例如0.3、0.6或1.2mg。照此，由于流动性、分离、均匀性或差的均匀分布问题导致的拉喹莫德量的小波动可造成与理想量(例如，0.3、0.6或1.2mg)大的百分数偏差。本发明的拉喹莫德钠的混合物提供了胶囊中高含量均匀性和小波动的拉喹莫德量。
表1拉喹莫德混合物的均匀性(UoB)和填充胶囊含量的均匀性(UoC)
UoB:混合物的均匀性，RSD是描述填充到胶囊中之前均匀性的参数；UoC:填充胶囊的含量均匀性，AV是对均匀性来说，与RSD相关的可接受值。
拉喹莫德颗粒形状的均匀性也是配制过程中一个重要的关注点，因为缺少形状的均匀性可引起药物物质密度的变化并且引起药物产品形成(例如胶囊或片剂形成)过程中的问题。结晶的拉喹莫德钠颗粒是杆状的颗粒。研磨操作可引起颗粒形状的变化是已知的。
减小的粒度导致更快的溶解特征是公知的。小颗粒的溶解速率通常比大颗粒的溶解速率更快，因为药物物质的较大表面积与液体介质接触。当配制具有低溶解速率的药物时，为了增加溶解进而促进快速的肠胃或口服吸收，理想的情况是减小颗粒尺寸。
在没有认识到药物物质问题与溶解速率有关的情况下，减小颗粒尺寸可能是不明智的，甚至是有害的。增加表面积可增加药物物质的降解速率。正如所讨论的，例如，美国专利号8,178,127和7,989,473，拉喹莫德钠易降解。
预料不到地，虽然已知缺点与小颗粒尺寸相关，但是还是发现了改进的药物物质和药物产品起因于结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有5微米或更小的粒径。
因此，本发明重结晶方法的优点在于最终的结晶的拉喹莫德钠混合物具有具有小粒度的颗粒，这与API在胶囊、片剂和其它的药物产物中分布的高均匀性和均一性相关。具有小粒度的拉喹莫德钠晶体能避免或减少需要额外的研磨步骤。得到本发明的小粒度拉喹莫德钠无需牺牲理想的纯度或密度特征并且无需在先的研磨操作。
本发明的另一优点在于拉喹莫德钠晶体相比于美国专利号6,077,851公开的浆体到浆体的方法制备的拉喹莫德钠晶体具有更大的密度。低轻叩密度不利于药物物质或药物产品中某些有价值的性质(例如压缩性，即压力下减少粉末体积的能力，和紧密性，即粉末被压缩成具有一定强度或硬度的药片的能力)。还已知具有低轻叩密度的晶体具有差的流动性，这导致在最终的剂型中(特别是在片剂中)缺乏含量的均匀性(Rudnicetal.Chpt.45,Remington'sPharmaceuticalSciences,20thEdition,LippincottWilliams&Wilkins,Baltimore,MD.(2000))。含量的均匀性对包括强效药物物质(例如，拉喹莫德钠)的药物组合物来说尤其重要。
相比于美国专利号6,077,851公开的浆体到浆体的方法，本发明还表明了低聚集的颗粒并且另外提供了具有可接受的密度和较低含量的杂质的颗粒。如在图5-8中所示，相比于本发明的低聚集率，美国专利号6,077,851公开的方法制备的粗拉喹莫德(图7和8)具有高聚集率(图5和6)。
本发明的另一优点在于本发明的方法是环境友好的，无需牺牲理想的结晶性质。具体地说，利用水作为主溶剂，本发明实现了环境友好性和改进的结晶特征(具体地，相对于美国专利号7,884,208在粒度分布方面)。
术语
如本文所使用的，除非另有说明，以下每一个术语都有如下所解释的定义。
如本文所使用的“拉喹莫德”意指拉喹莫德酸或包括拉喹莫德钠的其药学上可接受的盐。
如本文所使用的，“拉喹莫德酸”是N-乙基-N-苯基-1,2,-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧喹啉-3-甲酰胺，其化学登记号是248281-84-7。“拉喹莫德钠”是拉喹莫德酸的钠盐。
如本文所使用的，D(0.1)是粒度(单位：微米)，低于该粒度可发现10％体积的颗粒分布。
如本文所使用的，D(0.5)是粒度(单位：微米)，低于该粒度可发现50％体积的颗粒分布。
如本文所使用的，D(0.9)是粒度(单位：微米)，低于该粒度可发现90％体积的颗粒分布。
如本文所使用的，“晶体特征”包括粒度分布、堆积密度和轻叩密度。
如本文所使用的，“药物物质”是指药物产品中或用于药物产品的活性成分，该活性成分提供了在诊断、治愈、缓解、治疗或预防疾病中的药理活性或其它直接效果或影响人类或动物体的结构或任何功能。
如本文所使用的，“药物产品”是指含有药物物质和至少一种药学上可接受的载体的经配制的或最终剂型。
如本文所使用的，“不含”化学个体的组合物是指组合物含有(如果有的话)一定量的化学个体，其按照意在通过从组合物分离化学个体纯化组合物的积极行为，不能被避免。
例如，“不含”碱性试剂的组合物是指碱性试剂(如果存在的话)，按重量计，是组合物的少数成分。优选地，当组合物“不含”成分时，该组合物包括小于0.1wt％、0.05wt％、0.02wt％或0.01wt％的该成分。
如本文所使用的，“分离的”化合物是按照积极的分离行为从粗反应混合物中分离的化合物。分离的行为包括从粗反应混合物的其它已知的成分中分离化合物，该粗反应混合物具有一些杂质、未知的副产物和残留量的允许存在的粗反应混合物中其它已知的成分。纯化是分离这一积极行为的一个实例。
如本文所使用的，“稳定性测试”是指在具体的时间间隔和各种环境条件(例如，温度和湿度)下进行测试以看看经过其指定的保存期限后药物产品是否降解以及降解到什么程度。测试的具体条件和时间是它们加速药物产品在其保存期限内预期遇到的条件。例如，最终药物稳定性测试的详细要求被编写在21C.F.R§211.166中，其整体内容通过引用的方式被并入到本文中。
如本文所使用的，“溶解速率”基于药物物质在30min内溶解的量被测定，如美国药典<711>所示。
如本文所使用的，“大气压力”是指约1atm的压力。
如本文所使用的，“环境温度”是指约20℃到约30℃的温度。
如本文所使用的，在数值或范围的背景中“约(about)”意指详述的或要求保护的数值或范围的±10％。
如本文所使用的，在数值或范围的上下文中“约(approximately)”意指详述的或要求保护的数值或范围的±5％。
根据本发明，如本文所使用的与组合物相关的术语“稳定的药物组合物”表示组合物，该组合物在储存期间保持活性药用成分的物理稳定性/完整性和/或化学稳定性/完整性。此外，“稳定的药物组合物”由它们的降解产物的含量与其在零时间点时的含量相比在40℃/75％RH下6个月后不超过5％或在55℃/75％RH下两周后不超过3％表征。
如本文所使用的，“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”包含，例如引起疾病、紊乱或状况的抑制、恢复、或稳定，或减轻或缓解疾病、紊乱或状况的症状。如本文所使用的，“改善”或“缓解”状况或状态是指缓解或减轻那种状况或状态的症状。如本文所使用的，“抑制”个体的疾病进展或疾病并发症是指预防或减少个体的疾病进展和/或疾病并发症。
“向所述个体给药”是指向个体给药、配药或应用药剂、药物或治疗方案以减轻、治愈或减少与状况(例如，病理状况)相关的症状。
本发明的药物物质(例如，拉喹莫德钠)可与合适的药用稀释剂、填充剂、赋形剂、或载体(总称为药学上可接受的载体)混合给药，适当地根据目的给药方式和常规的药学实践来选择。单位剂型应是用于经口、直肠、局部、静脉内或直接注射或胃肠外给药的适当形式。化合物可以单独或与药学上可接受的载体混合地给药。
载体可是固体或液体，载体的类型一般基于采用的给药方式选择。活性剂可以片剂或胶囊、脂质体(作为团聚的粉末)的形式或以液体形式联合投药。合适的固体载体的实例包括乳糖、蔗糖、明胶和琼脂。胶囊或片剂可容易地被配制且使得容易吞咽或咀嚼；其它的固体形式包括颗粒和粉粒体。
胶囊或片剂可含有合适的粘结剂、润滑剂、崩解剂、稀释剂、着色剂、调味剂、流动促进剂和融化剂。例如，对于口服单位剂型的片剂或胶囊来说，活性药物成分可结合口服的无毒的药学上可接受的惰性载体，例如乳糖、明胶、琼脂、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露醇、山梨糖醇等。
合适的黏合剂包括淀粉、明胶、天然的糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然或合成的树胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶)或海藻酸钠、聚维酮、羧甲基纤维素、聚乙二醇、腊等。
这些剂型中的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、硬脂酸、硬脂酰富马酸钠、滑石粉等。
崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原树胶、交联羧甲基纤维素钠、羧基乙酸淀粉钠等。
可用来配制本发明口服剂型的技术、药学上可接受的载体和赋形剂的具体实例被描述在，例如，美国专利申请公开号2005/0192315、PCT国际申请公开号WO2005/074899,WO2007/047863和WO2007/146248以及美国专利号7,589,208中。例如，本发明的口服剂型可包含碱性反应组分，为了保持pH在8以上，所述组分最好占配方的约1-20重量％。
用于制造适用于本发明的剂型的技术和组合物描述于以下参考文献中：7ModernPharmaceutics,Chapters9and10(Banker&Rhodes,Editors,1979)；PharmaceuticalDosageForms:Tablets(Liebermanetal.,1981)；Ansel,IntroductiontoPharmaceuticalDosageForms2ndEdition(1976)；Remington'sPharmaceuticalSciences,17thed.(MackPublishingCompany,Easton,Pa.,1985)；AdvancesinPharmaceuticalSciences(DavidGanderton,TrevorJones,Eds.,1992)；AdvancesinPharmaceuticalSciencesVol.7.(DavidGanderton,TrevorJones,JamesMcGinity,Eds.,1995)；AqueousPolymericCoatingsforPharmaceuticalDosageForms(DrugsandthePharmaceuticalSciences,Series36(JamesMcGinity,Ed.,1989)；PharmaceuticalParticulateCarriers:TherapeuticApplications:DrugsandthePharmaceuticalSciences,Vol61(AlainRolland,Ed.,1993)；DrugDeliverytotheGastrointestinalTract(EllisHorwoodBooksintheBiologicalSciences.SeriesinPharmaceuticalTechnology；J.G.Hardy,S.S.Davis,CliveG.Wilson,Eds.)；ModemPharmaceuticsDrugs和thePharmaceuticalSciences,Vol40(GilbertS.Banker,ChristopherT.Rhodes,Eds.)。这些参考文献在此以引用的方式并入本申请中。合适的液体剂型的实例包括水溶液或水悬浮液、药学上可接受的油脂、醇类或其它的有机溶剂，包括酯类、乳剂、糖浆剂或酏剂、悬浮液、溶液和/或从非泡腾颗粒重构的悬浮液和从泡腾颗粒重构的泡腾制剂。此类液体剂型包含，例如，合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、增稠剂和熔化剂。
口服剂型任选地含有调味剂和着色剂。非胃肠道和静脉形式还包括矿物质和其它的材料使得他们与选择的注射或递送系统类型相匹配。
本发明的方法中采用的化合物还以脂质体递送系统(比如小的单层囊泡(smallunilamellarvesicles)、大的单层囊泡和多层脂质体)的形式被给药。脂质体可由各种磷脂构成，比如胆固醇、十八烷基胺或卵磷脂。该化合物可作为靶向组织的乳剂成分被给药。
本发明的方法中采用的化合物还可被结合到作为靶向药物载体或作为前药的可溶性聚合物。此类聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚(polyhydroxylpropylmethacrylamide-phenol)、聚羟乙基天冬酰胺苯酚(polyhydroxyethylasparta-midephenol)或由棕榈酰残基取代的聚乙烯氧化物聚赖氨酸(polyethyleneoxide-polylysine)。另外，化合物可结合到一类用于实现可控释放药物的生物可降解的聚合物上，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚艾司隆己内酯(polyepsiloncaprolactone)、多羟基丁酸、聚正酯、聚缩醛、聚二氢吡喃(polydihydropyrans)、聚丙烯酸树脂基粘结剂(polycyanoacylates)和交联或两性的水凝胶的嵌段共聚物。
对于以液体剂型经口给药，口服药物成分结合任何经口的无毒的药学上可接受的惰性载体如乙醇、丙三醇、水等。合适的液体剂型的实例包括水溶液或水悬浮液、药学上可接受的油脂、醇类或其它的有机溶剂，该有机溶剂包括酯类、乳剂、糖浆剂或酏剂、悬浮液、溶液和/或从无泡腾颗粒重构的悬浮液和从泡腾颗粒重构的泡腾制剂。此类液体剂型包含，例如，合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、增稠剂和熔化剂。
用于口服给药的液体剂型含有着色剂和调味品以增加患者的可接受性。一般来说，水、合适的油、盐水、含水葡萄糖(葡萄糖)和相关蔗糖溶液和乙二醇(比如丙二醇或聚乙二醇)是合适的非肠道溶液的载体。用于非肠道投药的溶液优选地含有活性成分的水溶性盐、合适的稳定剂和(如果需要)缓冲物质。抗氧化剂(比如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸，单独使用或组合使用)是合适的稳定剂。还使用柠檬酸和其盐和乙二胺四乙酸钠。另外，非肠道溶液包含防腐剂，比如氯化苯甲烃铵(benzalkoniumchloride)、甲基或丙基对羟基苯甲酸酯(methyl-orpropyl-paraben)和氯丁醇。合适的药学上可接受的载体被描述在雷明顿氏制药科学，默克出版公司(本领域标准的参考文本)。
本发明的药物物质，例如拉喹莫德钠，可以以各种形式被投药，包括本文详细描述的这些形式。使用化合物治疗可以是联合疗法或辅助疗法的成分，即需要药物的个体或患者被治疗或给药另一种与一种或多种当前化合物结合的针对疾病的药物。这种联合疗法可以是序贯疗法，其中患者首先采用一种药物治疗，然后同时给药另外一种或两种药物。这些药物可由相同的或两种或其以上的不同投药途径单独地给药，这取决于采用的剂型。
明胶胶囊可含有活性成分化合物和粉末状载体比如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。类似的稀释剂可被用于制备压缩的片剂。片剂和胶囊可被制备为即释产品或缓释产品以在数小时内提供连续的释放药物。压缩的片剂可以是用于掩饰任何讨厌的味道以及避免片剂接触空气的糖包衣的或薄膜包衣，或用于在消化道中选择性分解的肠溶包衣。
本发明公开的方法中采用的化合物还可以以鼻内形式被给药，通过采用合适的鼻内工具，或通过经皮途径，采用本领域技术人员熟知的那些形式的透皮贴剂。为了以透皮给药系统的形式给药，给药剂量在整个给药方案中通常是连续的而不是间歇的。
非肠道和静脉形式还可包括矿物质和其它的材料使得它们与选择的注射或递送系统的类型相匹配。
本发明公开的方法中采用的单位剂量的化合物包含单一化合物或具有额外的抗菌剂的其混合物。化合物可以以口服剂型比如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、悬浮液、糖浆剂和乳剂被给药。化合物还可以以静脉内(滴注或注射)、腹膜内、皮下或肌肉内的形式给药，或例如通过注射、局部施用或其它方法直接引入到感染部位的里面或上面，全部使用的剂型都是制药领域技术人员熟知的。
以毫克测量的拉喹莫德“剂量”或“单位剂量”是指不考虑制剂的形式存在于制剂中拉喹莫德酸的毫克量。单位剂量可以包含单一化合物或其化合物的混合物。单位剂量可以被制备用于口服剂型比如片剂、胶囊、丸剂、粉剂和颗粒剂。例如，拉喹莫德的“剂量”或“单位剂量”可以是0.3、0.6或1.2mg。
如本文所使用的，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物的成分，没有过度的不良副作用(比如毒性、刺激和过敏反应)，符合合理的利益/风险比。
如在本文所使用的，“药学上可接受的载体”是指适用于人和/或动物的载体或者辅料，没有过度的不良副作用(比如毒性、刺激和过敏反应)，符合合理的利益/风险比相当。它可以是药学上可接受的溶剂，悬浮剂或者载剂，用以将当前化合物递送给受试者。它可以是液体或固体并且根据想到的计划的给药方式选择。“药学上可接受的载体”包括填充片剂或胶囊的“填充剂”，使得生产和方便消费者使用有效可行。通过增加堆体积，该填充剂使得最终产品具有用于患者手拿的适当体积成为可能。“药学上可接受的载体”还包括“润滑剂”，该润滑剂防止成分聚集成团并且防止粘到片剂冲压机或胶囊充填机上。润滑剂还保证了片剂的形成和排出的发生，固体和弹出发生模壁之间具有低摩擦。“药学上可接受的载体”还包括惰性载体比如乳糖、明胶、琼脂、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、磷酸二钙、硫酸钙、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素等。脂质体也是一种药学上可接受的载体。
应当理解到，当提供参数范围时，本发明还提供了该范围内的全部整数，以及其十分之一和百分之一的数。例如，“0.15-0.35％”包括0.15％、0.16％、0.17％等、直至0.35％。
本发明还意在包括出现在本文公开的化合物(包括杂质)上的原子的全部同位素。同位素包括那些具有相同的原子序数但不同的质量数的原子。借助于一般的实施例而不局限于此，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括C-13和C-14。
如本文所使用的，用于筛选或测试样品中化合物的存在的分析方法的“检测极限”是阈值，在低于该阈值时，样品中的化合物不能由采用的分析方法检测到。用于检测含有拉喹莫德的样品中杂质的给定HPLC方法的检测极限可根据方法和被检测的杂质变化。例如，用于检测5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的典型HPLC方法的检测极限是0.03％，用于检测甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)和未知杂质的给定方法的检测极限是0.02％。
如本文所使用的，用于筛选或测试样品中化合物的存在的分析方法的“定量极限”是阈值，在低于该阈值时，样品中的化合物不能由采用的分析方法定量。用于检测含有拉喹莫德的样品中杂质的给定的HPLC方法的定量极限可根据被检测的杂质变化。
如本文所使用的，“密度”是定义为物质质量/单位体积的量度。
如本文所使用的，“堆积密度”或“BD”是指一种疏松的、未经过压缩的物质的密度的量度，其中物质的体积包括颗粒之间所包存的空气。
如本文所使用的，“轻叩密度”或”TD”是指已经被轻叩或振动的物质的密度的量度，轻叩或振动因此通过消除或最小化在颗粒之间包存的空气，使物质的体积最小化。
如本文所使用的，“快速搅拌”是指飞溅溶剂到容器壁上的搅拌。
如本文所使用的，“混合物均匀性”，是指包含拉喹莫德钠颗粒的混合物或颗粒在最终混合物形成之后的包封于胶囊、压片或以其它方式完成药物产品之前的均一性，并且能表示一个样品或多于一个样品的平均值。可以测量混合物的均匀性，例如通过抽取代表每一批次的最终混合物的上层、中层和下层的10个样品，进行HPLC含量分析以测量样品中活性成分的量并且比较每个样品中活性成分的量和活性成分的标示量。根据表示成每个样品中药物物质的标示量的百分数的测试样品的单个量，测定标准偏差和相对标准偏差。
如本文所使用的，“含量均匀性”是在指配制之后的剂型，例如胶囊或片剂之中的拉喹莫德含量的均一性。本文描述的由药物组合物的含量均匀性表示的单位剂量的均匀性满足美国药典<905>可接受的值和范围(如规定的)；L1＝15.0和L2＝25.0。可以测定含量均匀性，例如，如美国药典所示，其包括1)分析10个药片(或药物产品的其它剂型)以保证活性含量的相对标准偏差(RSD)小于或等于6.0％并且没有值落在85-115％之外；以及2)分析20个以上的药片(或药物产品的其它剂型)以保证全部30个的RSD小于或等于7.8％，至多一个值落在85-115％之外并且没有值落在规定含量的75-125％之外。
如本文所使用的，“残留溶剂”包括乙醇、正庚烷、正辛烷、甲醇、丙酮、二氧六环和二甲基甲酰胺。可以测定残留溶剂，例如，根据厂商声明的活性成分/赋形剂中残留溶剂含量以及依据美国药典<467>选项2的计算，产品满足USP<467>残留溶剂限度标准。测试不是必须的要求。
如本文所使用的，“NMT”意指至多。
如本文所使用的，“LT”意指少于。
如本文所使用的，“MCQME”意指甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯。MCQME被公开在美国专利号7,560,557和J.Org.Chem.,2006,71,1658-1667中，其内容以引用的方式并入本申请中。MCQME具有结构：
如本文所使用的，“MCQEE”意指乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯。MCQEE被公开在美国专利号7,560,557中，其内容以引用的方式并入本申请中。MCQEE具有结构：
如本文所使用的，“MCQ”意指5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮。MCQ被公开在美国专利号7,560,557和J.Org.Chem.,2006,71,1658-1667，其内容以引用的方式并入到本申请中。MCQ具有结构：
如本文所使用的，“MCQCA”意指5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸。MCQCA被公开在美国专利号7,560,557和J.Org.Chem.,2006,71,1658-1667，其内容以引用的方式并入本申请中。MCQCA具有结构：
如本文所使用的，“NEA”意指N-乙基苯胺。NEA被公开在美国专利号7,560,557中，其内容以引用的方式并入本申请中。NEA具有结构：
如本文所使用的，“5-HLAQ”意指N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺。5-HLAQ被公开在PCT国际申请号PCT/US13/26476和美国申请公开号US2013/0217724A1中，其内容以引用的方式并入本申请中。5-HLAQ具有结构：
如本文所使用的，“3-HLAQ”意指5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺。3-HLAQ被公开在PCT国际申请号PCT/US2008/013890和美国专利号8,178,127B2中，其内容以引用的方式并入本申请中。3-HLAQ具有结构：
如本文所使用的，“MEG-LAQ”意指N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(甲基(2,3,4,5,6-五羟己基)氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺。MEG-LAQ被公开在美国申请公开号US2013/0345256A1中，其内容以引用的方式并入本申请中。MEG-LAQ具有结构：
如本文所使用的，“DELAQ”意指5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺。DELAQ被公开在PCT国际申请号PCT/US2011/043391和美国申请公开号US2012/0010239A1中，其内容以引用的方式并入本申请中。DELAQ具有结构：
如本文所使用的，“螺-LAQ”意指1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮]。螺-LAQ被公开在PCT国际申请号PCT/US2008/013890和美国专利号8,178,127B2中，其内容以引用的方式并入本申请中。螺-LAQ具有结构：
如本文所使用的，“BH-3-HLAQ”意指2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸。BH-3-HLAQ具有以下结构：
如本文所使用的，“DMM”意指丙二酸二甲酯。DMM是合成试剂并且具有结构：
如本文所使用的，“DMS”意指硫酸二甲酯。DMS是合成试剂。
如本文所使用的，“MCIA”意指5-氯-1-甲基-1H-苯并[d][1,3]嗪-2,4-二酮。MCIA具有以下结构：
如本文所使用的，“DMF”意指N,N-二甲基甲酰胺。
如本文所使用的，“LOD”意指干燥失重。
下述具有相应质量的市售可得的溶剂也被用作药物物质测试的分析标准：乙醇、正庚烷、正辛烷、甲醇、丙酮、1,4-二氧六环以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。丙二酸二甲酯、甲基硫酸钠和13C2-硫酸二甲酯的分析标准的ID号和来源分别是S4695599(Merck)、A0294777(Arcos)和P-5052(HollandMoran)。
本文公开的任何范围，意味着该范围内的所有百分之一、十分之一和整数单位量作为本发明的一部分被具体地公开了。因此，例如0.01mg到50mg意指0.02、0.03...0.09；0.1、0.2...0.9；以及1、2...49mg单位量被包括在本发明的实施例中。
除非另有指明，杂质由普通的药典方法测定。
如本文所使用的，“反溶剂”是一种溶剂，其中在室温下，拉喹莫德钠(20-25℃)是微溶的，极微溶的，实际上是不溶的，或不溶的。术语“溶解度”按照美国药典XXV定义如下。
术语 溶解1份溶质所需溶剂的份数
微溶 100-1000
极微溶 1000-10,000
实际上不溶 10,000及以上
不溶 10,000及以上
通过从合适的溶剂或溶剂混合物中重结晶实现不纯结晶化合物的纯化(Vogel'sTextbookofPracticalOrganicChemistry.5thedition.LongmanScientific&Technical,1989.)。重结晶方法一般包括以下步骤：a)在接近沸点的合适的溶剂中溶解不纯的晶体物质；b)过滤热溶液除去不可溶材料和灰尘的颗粒中；c)冷却热溶液以导致溶解的物质结晶析出；以及d)从悬浮溶液中分离出晶体(同上)。然而，当标准的重结晶技术被应用于拉喹莫德钠时(如美国专利号7,884,208所教导的)，伴随的是低产量或没有产量。正如美国专利号7,884,208的实施例2-7所示，采用标准的重结晶方法尝试重结晶拉喹莫德钠导致了差的产量，如果有的话。美国专利号7,884,208公开的方法克服了与采用反溶剂重结晶拉喹莫德钠相关的困难，在反溶剂中拉喹莫德钠实际上是不溶的。另外美国专利号7,884,208的方法在添加反溶剂之前浓缩拉喹莫德钠水溶液。本发明公开的方法相比于美国专利号7,884,208中的方法是一种改进。
通过参考其后的实验细节和实施例，本发明被更好地理解，但本领域技术人员很容易理解，正如在其后的权利要求书中更充分记载的，具体地详细的实验仅仅说明本发明。
实验详情
粉末密度的测定
堆积(松散)密度(BulkDensity)
1.混合粉末；
2.在0.01克灵敏度天平上称量50毫升空量筒的皮重；
3.使量筒保持约45度角，不加压缩地将粉末转移到量筒中，达到40-50毫升的没有轻叩的表观体积；
4.迅速将装有样品的量筒扶正到垂直位置，以便取平体积便于读取；
5.读取表观体积(Va)到最接近的刻度单位；
6.称重具有样品的量筒(抵消给出样品重量M)；
7.按照公式BD＝M/Va计算松散密度(单位：克/毫升)；
8.重复进行步骤1-7，报告多次记录的平均数据。
轻叩密度(TappedDensity)
1.把用来计算松散密度的同样量筒放在QuantachromeDualAutotap仪器中；
2.进行1250次轻叩；
3.读取轻叩体积(Vf)到最接近的刻度单位；
4.按照下列公式TD＝M/Vf计算轻叩密度(单位g/ml)；
5.重复进行步骤1-4，报告多次记录的平均数据。
粒度的测定(DeterminationofParticleSize)
使用MastersizerS模型，通过Malvern激光散射(MalvernLaserDiffraction)测定粒度分布。激光散射取决于这样的事实：光的散射角与粒度成反比。测定颗粒的性质并解释为球形的量度(球形是仅有的可用一个唯一数字描述的形状)。此外，激光散射基于体积方面计算粒度分布，因此从粒度测定中排除颗粒计数。MastersizerS模型使用单一技术和单一范围设定测量颗粒。
D(0.1)是粒度(单位：微米)，发现10％按体积计的总体低于该粒度。D(0.5)是粒度(单位：微米)，发现50％按体积计的总体低于该粒度。D(0.9)是粒度(单位：微米)，发现90％按体积计的总体低于该粒度。
重金属的测定
使用由Spectro(Kleve,Germany)制造的电感耦合等离子原子发射光谱("ICP-AES")系统，利用电感耦合等离子原子发射光谱法测定金属含量。样品消解在65％硝酸中，用钪作为内标。
说明：在以下实施例中，所用溶剂的体积相对于拉喹莫德钠的起始重量计算。产率用重量百分数计算。
纯度的测定—用于拉喹莫德胶囊中含量和极性杂质/降解产物(AssayandPolarImpurities/DegradationProducts)的鉴定和测定的例示性HPLC法
使用ODS-3V柱子和由pH7.0乙酸铵缓冲液(80％)和乙腈(20％)的混合物组成的流动相，利用等度反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定拉喹莫德钠和极性杂质/分解产物。检测技术是240nm处的紫外吸收。
具体HPLC条件：
·柱子&填充物：InertsilODS-3V，5μm，4.6×250mm，GLScienceInc.
·保护柱：Opti-GuardC18，1×10mm
·流动相：乙腈:缓冲液pH7.0–20:80(v/v)，混合并且脱气。
·缓冲液pH7.0配制：将7.7g醋酸铵溶解在2000mL水中，用氨水或冰醋酸调节到pH7.0±0.05。通过0.45μm滤膜器过滤。
·流速：1.5mL/min
·测定：240nm处UV
·进样量：50μL
·稀释剂A：乙腈/水–50:50(v/v)
·稀释剂B(和空白)：流动相
·柱子温度：40℃
·自动进样器温度：5℃
·运行时间：40分钟
常规HPLC法
1.标准品(标准)溶液的配制
1.1拉喹莫德标准储备溶液(LaquimodStandardStockSolution)(溶液S)
一式两份精确称取约15mg拉喹莫德钠标准品放入50mL容量瓶中。用稀释剂A稀释到2/3刻度(volume)，在冷的超声波浴中超声处理2分钟，用稀释剂A稀释至刻度。
标准储备溶液的浓度是约300μg/mL拉喹莫德钠。在冰箱2℃-8℃中储存时，标准储备溶液可使用一个月。
1.2用于含量分析(assay)的拉喹莫德标准工作溶液(LaquimodStandardWorkingSolution)(溶液A)
用稀释剂B将3mL标准储备溶液稀释到10mL(稀释因子3.33)。
拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。浓度表示为拉喹莫德(酸)是约85μg/mL。
在冰箱(2℃-8℃)中储存时，标准工作溶液A可使用7天。
1.3MCQCA标准储备溶液
精确称取约18mgMCQCA标准品放入100mL容量瓶中。用乙腈稀释至刻度，超声处理(在冷的超声波浴中)直到物质完全溶解—储备MCQCA溶液。
MCQCA的浓度是约180μg/mL。
MCQCA储备标准溶液应当新近配制。
1.4用于杂质测定的标准溶液(溶液I)
用稀释剂B配制溶液，其包括浓度为0.2％的拉喹莫德和MCQCA，相对于标准溶液A中拉喹莫德的工作浓度其浓度为0.1％。例如，使用下面的步骤。
将用于含量分析的4.0mL拉喹莫德钠标准溶液(溶液A)和1.0mLMCQCA储备标准溶液移取到100mL容量瓶中，用稀释剂B稀释至刻度(中间稀释液)。
将2.5mL该中间稀释液放置到50mL容量瓶中，用稀释剂B补偿达到刻度。
对拉喹莫德标准品来说总稀释因子是1666.67，对MCQCA来说是2000。
拉喹莫德钠的浓度是约0.18μg/mL(0.2％)。
MCQCA的浓度是约0.09μg/mL(0.1％，QL水平)。
当在冰箱中储存时，标准溶液I可使用24小时。
2.分辨溶液(Resolutionsolution)配制
2.1混合溶液
使用稀释剂A作为溶剂配制包含下列潜在杂质标准品(标记物)的溶液：
混合溶液：
MCQ:5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮
MCQCA:5-氯-4羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸
MCQCA:甲基5-氯-4羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯
5-HLAQ:N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺
混合溶液可如下配制：
称取约3mg每个杂质标准品/标记物放入100mL容量瓶中，用稀释剂A溶解(超声处理法是可接受的)并且稀释至刻度。
混合溶液中每个杂质的浓度是约30μg/mL。当在约-20℃冷冻储存时，混合溶液可使用达4个月。为此目的，新近配制的混合溶液应当分成等份，立即冷冻并储存在-20℃。融化后，该等份应当充分混合并且不能再冷冻。
2.2添加杂质的储备溶液
称取约3mgMCQEE(乙基5-氯-4羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯)放入100mL容量瓶中，用稀释剂A溶解(超声处理法是可接受的)并且稀释至刻度。这是MCQEE储备溶液。
当在约-20℃冷冻储存时，该溶液可使用达4个月。
为此目的，新近配制的MCQEE储备溶液应当分成等份，立即冷冻，储存在-20℃。融合后，该等份应当充分混合并且不能再冷冻。
称取约3mgMEG-LAQ(拉喹莫德葡甲胺加合物)放入100mL容量瓶中，用稀释剂A溶解(超声处理法是可接受的)并且稀释至刻度。这是MEG-LAQ储备溶液。
当在冰箱(2℃-8℃)中储存时，该溶液可使用一周。
2.3分辨溶液
使用混合溶液分别如下配制两个分辨溶液。
2.3.1分辨溶液1
将3mL拉喹莫德标准储备溶液(溶液S)，0.3mL混合溶液和0.3mLMCQEE储备溶液移取到10mL容量瓶中，用稀释液B稀释至刻度。这是分辨溶液1。
在它之中的拉喹莫德钠的浓度约90μg/mL。每个杂质的浓度是约0.9μg/mL(相对于拉喹莫德的工作浓度约1％)。
分辨溶液1用于分辨率测试(用于体系适应性)和五个杂质的保留时间(RT)/相对保留时间(RRT)的测定，这五个杂质为MCQ、MCQCA、MCQME、MCQEE和5-HLAQ。
如果在冰箱(2℃-8℃)中储存时，分辨溶液1可使用9天。
2.3.2分辨溶液2
将3mL拉喹莫德标准储备溶液(溶液S)，0.3mL混合溶液和0.3mLMEG-LAQ储备溶液移取到10mL容量瓶中，用稀释液B稀释至刻度。这是分辨溶液2。
在它之中的拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。每个杂质的浓度是约0.9μg/mL(相对于拉喹莫德的工作浓度约1％)。
分辨溶液2用于MEG-LAQ的保留时间的测定。
如果在冰箱(2℃-8℃)中储存，分辨溶液2可使用9天。
3.样品溶液配制
精确称取20个胶囊研钵，把它们的内容物完全倒入研钵。请注意必要时使用刮刀将胶囊的内容物完全倒入研钵。称重空胶囊，计算胶囊内容物的平均重量。在研钵中混合和研磨胶囊内容物并且将粉末在紧紧密封的容器中避光保存。
一式两份，精确称取相当于7个胶囊的粉末量，放到50mL容量瓶中。
加入稀释剂B达到2/3刻度，200动作/分钟(mot/min)摇晃30分钟。用稀释剂B稀释至刻度。充分混合。使用之前通过0.45μmGHPACRODISCGF过滤器或同等物过滤，弃去开始的0.5-1mL。
拉喹莫德(酸)的工作浓度是约84μg/mL。配制之后立即将样品溶液放置到冰箱或冷却到5℃的自动进样器中。当保存在温度2℃-8℃时，样品溶液可使用24小时。
4.过程(Procedure)
按照标准操作程序，进样分辨溶液、稀释剂B(空白)、用于含量和IDD测定的标准溶液和样品溶液。
测定样品和标准溶液的色谱图中拉喹莫德峰的保留时间(RT)和面积用于鉴定和含量分析。
测定样品溶液的色谱图中全部已知杂质和任何其它杂质的RT、相对保留时间(RRT)和峰面积用于计算杂质/降解产物的含量。
忽略赋形剂的早洗脱峰和体系峰(参见用于杂质/降解产物的测定的色谱图)。例如，使用0和RRT0.15(大约2.5分钟)之间的积分抑制(integrationinhibition)。
调整积分参数以拚除具有面积小于标准溶液Ⅰ(用于测定杂质/降解产物)的进样中拉喹莫德峰的平均响应的10％。
样品进样(经鉴定的下列分辨溶液2)中MEG-LAQ的积分峰。MEG-LAQ的含量由实施例23测试。
5.体系适用性测试
5.1分辨率测试(resolutiontest)
典型的拉喹莫德峰的保留时间是15.5±2.0分钟。
拉喹莫德峰的拖尾因子(USP)应当不大于2.0。
全部成对峰的分辨因子应当不小于(NLT)2。
已知杂质/降解产物的峰的RRT应当如下：
MCQME:0.33-0.38
MCQ:0.49-0.58
MCQEE:0.56-0.65
MCQCA:0.71-0.85
5-HLAQ:1.2-1.4(应当不大于23分钟)
MEG-LAQ峰与邻近峰相比实际上是变宽的。MEG-LAQ的保留时间是变化的，对色谱条件(pH,％乙腈、温度等)中极小的变化非常敏感，因此应当使用分辨溶液2的色谱图中它的峰限定。通常情况，它的RRT是约0.66。
5.2体系精度测试
为了测试体系精度，根据标准操作程序评估用于含量和IDD测定的拉喹莫德标准品。
溶液Ⅰ中的MCQCA用于测试体系灵敏度。标准溶液1(Std1)的六个进样的面积的RSD以及标准溶液1(Std1)和标准溶液2(Std2)之间的差别应当不大于(NMT)20％。
5.3空白
进样稀释剂B以检测体系峰。
6.通过保留时间(RT)鉴定
样品色谱图中所得到的主峰的RT应当相当于标准溶液进样中拉喹莫德峰所得到的。
7.计算和报告
7.1含量计算(AssayCalculation)
其中0.94是拉喹莫德钠盐到拉喹莫德(酸)的换算因子。
7.2杂质/降解产物的计算和评估
7.2.1相对保留时间(RRT)的计算
7.2.2杂质/降解产物含量的计算
面积杂质是样品溶液中杂质/降解产物(已知和未知)峰的面积。
面积标准品是标准溶液I的色谱图中拉喹莫德峰。
0.94是拉喹莫德钠盐到拉喹莫德(酸)的换算因子。
RRF是按照下列比率计算的杂质/降解产物相对响应因子：拉喹莫德回归线的斜率/杂质回归线的斜率
相对响应因子相对于拉喹莫德的数值是MCQME:0.74；MCQ:0.65；MCQEE:0.85；MCQCA:0.62和5-HLAQ:1.0。
未知杂质/降解产物的RRF被认为是1.0。
7.2.3杂质/降解产物的评估和报告
MCQME、MCQ、MCQEE、5-HLAQ和未知杂质的定量水平(QL)是0.05％。MCQME、MCQ、MCQEE、5-HLAQ和未知杂质的检测水平(DL)是0.02％。MCQCA的QL是0.1％。MCQCA的检测水平DL是0.03％。
在±5％实际相应保留时间内，使样品色谱图中的全部峰与体系适用性色谱图中的峰相关联。报告数据如表2所示。
表2HPLC数据的报告指南
*如果没有杂质被检测到，报告：任何其他(anyother)<0.2％。
表3实例体系适用性结果1
名称 RT RT比率 面积 USP分辨率 USP拖尾 积分类型
1 MCQME 5.460 0.36 35801 1.07 BB
2 MCQ 8.260 0.54 60687 8.2 1.16 BV
3 MCQEE 9.249 0.6 24029 2.6 1.05 VB
4 MCQCA 12.031 0.78 18609 5.7 1.34 BB
5 拉喹莫德 15.332 12332469 5.2 1.84 BB
6 5-HLAQ 20.451 1.33 89463 7.3 1.04 BB
实施例1–拉喹莫德钠的改良重结晶–中试生产，100倍放大(中试规模批次A和B)
按照如下进行中试规模拉喹莫德钠的重结晶(批次A和B)。在两个搪玻璃反应器(反应器A，30升体积，反应器B60升)中进行中试规模拉喹莫德钠的重结晶。在具有20微米筛目的HastelloyC搅拌式过滤干燥器中过滤和干燥固体产品。
开始粗拉喹莫德钠的批量大小是2.5kg。
将粗拉喹莫德钠(2.5kg)批次引入具有10体积工艺用水的反应器A中。在搅拌下，将该批次加热到60-73℃直到固体完全溶解。
通过0.2μm过滤系统将反应器A中的热溶液转移到反应器B中。用1.2体积工艺用水洗涤反应器A和过滤器，将洗液转移到反应器B中。
形成真空，在P<45mmHg，夹套温度(jackettemperature)T<65℃条件下，蒸发反应器B中的溶液直到残留物的体积达到5.4升(2.16体积)。然后形成大气压力，调整夹套温度40-50℃。搅拌该批次不少于10分钟，然后接种拉喹莫德钠晶体以引发结晶。
在45℃下搅拌该批次额外90分钟，在1.5–2.5小时向反应器中加入7.9体积丙酮。加入期间反应器温度保持在40和50℃之间。
在3.5-4.5小时期间将生成的浆体冷却到0±4℃，并且在这个温度搅拌10-15小时。然后在氮气压下将该浆体转移到过滤-干燥器中并且过滤固体。
滤饼用丙酮洗涤两次(2·2kg)用氮气净化，然后在真空(P<50mmHg)干燥，在搅动下升温(T＝40℃)。
将干燥的产品排出、取样分析并且包装。
实施例1的讨论：
实施例1拉喹莫德钠的重结晶的中试规模工艺是以美国专利号7,884,208(U.S.PatentNo.7,884,208)的实施例15为基础。起始物料是具有低粒度(d(0.1)＝1-2μ，d(0.5)＝6-11μ，d(0.9)＝20-35μ)并且呈现为聚合固体状的粗拉喹莫德钠。美国专利号7,884,208的实施例15涉及根据美国专利号6,875,869公开的方法制备的25.0g拉喹莫德钠(实验室规模)。实施例15中，将25.0g拉喹莫德钠溶解在拉喹莫德钠的水溶液中，然后在搅拌下真空蒸发以浓缩溶液具有体积比2.14v/w，接种生成的残留物以引起结晶，然后用反溶剂(丙酮)处理。
用2.5kg拉喹莫德钠进行改进的中试规模工艺，该工艺是实施例15的100倍放大。另外，该改进的中试规模工艺明显不同于美国专利号7,884,208的实施例15的实验室规模工艺。具体地说，实验室规模的蒸发是在圆底烧瓶中在旋转蒸发仪中没有搅拌的情况下进行的，而中试规模的蒸发是在反应器中搅拌的情况下进行的。在中试规模中，蒸发残留物被强力搅拌，液体飞溅到反应器壁上，固体沉积物形成，结晶是自发的。在实验室规模，亚稳定溶液可被浓缩到体积比2.1-2.2v/w，在该点不发生结晶，成核现象由晶种控制。在中试规模中，条件和浓缩是自发结晶发生，即，没有晶种的情况下引发结晶。
令人惊奇的是，中试规模没有导致拉喹莫德钠颗粒具有根据美国专利号7,884,208中实例15预期的粒度分布。与之相反的是，申请人意外地发现该中试规模导致重结晶的拉喹莫德钠颗粒混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径，(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有小于5微米的粒径。由两个不同工艺生成的粒度分布的比较如表4所示。
表4
上述美国专利号7,884,208的工艺和实施例1的工艺，每个产生不同的产品，并且是不等价的工艺。美国专利号7,884,208的工艺的申请人的中试规模版本(version)导致与现有技术实际上不同的条件，并导致实际上不同的具有更小粒度的产品，如图4所示。
由于拉喹莫德钠是强效药品，对API来说小粒度是有利的。形成具有减小的粒度的非聚合的拉喹莫德钠晶体可提供更好的药物产品均匀性，避免研磨或去成块操作。起始物料，粗拉喹莫德钠呈现为聚合的固体状。重结晶产品是散粒粉末。具有更小颗粒的粉末具有更强的聚合趋势。由浆体到浆体(slurry-to-slurry)重结晶(即，美国专利号6,077,851的工艺)制备的粗拉喹莫德钠产生具有更低粒度并且是高度聚合的颗粒。改进的工艺生产具有低的粒度并且是散粒的颗粒。
目的是在实验室，中试和工业规模中可放大的结晶法产生更小的晶体粒径，PSD和低聚合性。理想的PSD特征如下：d(0.1)<5μm,d(0.5)<15μm和d(0.9)<40μm。该方法是基于丙酮加入之前起始于水相的自发结晶。影响结晶的重要因素是结晶溶液的起始浓度。在新的结晶法中，蒸发快结束时，降低的水体积比从2.14v/w到1.7-1.8v/w。更高浓度溶液保证在蒸发操作快结束时开始自发结晶，并提供更高的过饱和度(supersaturationlevel)和更小的晶体粒径。
实施例2–拉喹莫德钠重结晶-实验室规模(实验室规模批次A)
按照如下进行实验室规模的拉喹莫德钠的重结晶(批次A)。
拉喹莫德钠重结晶步骤的全部操作包括在透明搅动式玻璃反应器中实验室规模进行蒸发，该反应器安装有搅拌器、温度计和用于加热和冷却的循环浴。
将25g粗Na拉喹莫德和275ml去离子水引入250ml搅拌式搪玻璃反应器中。将混合物搅拌并且加热到70℃，固体完全溶解之后，溶液通过纸过滤器过滤。将生成的澄清滤液引入安装有循环浴、搅拌器、温度计和真空蒸馏系统的250ml搪玻璃反应器中。
应用真空，在搅拌下蒸馏水，蒸发期间的压力是38-40mbar，夹套温度是55℃。
计算的2/3(ca.2/3)体积蒸馏之后，在液面之上反应器壁上观察到自发结晶。
继续蒸馏直到残留物体积达到45ml，然后形成大气压力，在50℃将该批次搅拌一个小时。在这个步骤中密集的结晶发生了。
在一个小时之内将200ml丙酮加入到生成的浆体中，在50℃将该批次搅拌额外的一个小时。
在一个小时期间将该批次冷却到0-5℃，在Büchner过滤器上过滤。固体滤饼用75ml丙酮洗涤。
在烘箱内真空下在50℃将收集的湿产品(28.0g)干燥至恒重。
干燥的产品–23.8g；结晶率–95.2％。
分析：
显微镜观察–棒状颗粒
通过Malvern测量的粒度分布(ParticleSizeDistributionbyMalvern)：
D(0.1)＝2.3μm；D(0.5)＝10.8μm；D(0.9)＝32.7μm
实施例3-拉喹莫德钠的重结晶-实验室规模(实验室规模批次B)
按照如下进行实验室规模的拉喹莫德钠的重结晶(批次B)。
拉喹莫德钠重结晶步骤的全部操作包括在透明搅动式玻璃反应器中实验室规模进行蒸发，该反应器安装有搅拌器、温度计和用于加热和冷却的循环浴。
将25gNa拉喹莫德粗产品和275ml去离子水引入250ml搅拌式搪玻璃反应器中。搅拌混合物并且加热到70℃，固体完全溶解之后，溶液通过纸过滤器过滤。生成的澄清滤液引入安装有循环浴、搅拌器、温度计和真空蒸馏系统的250ml搪玻璃反应器中。应用真空，在搅拌下蒸馏水，蒸发期间压力是38-40mbar，夹套温度是55℃。蒸馏期间，当残留物体积达到计算的120ml(ca.120ml)时在反应器壁上观察到自发结晶。继续蒸馏直到残留物体积达到45ml，然后形成大气压力，在50℃将该批次搅拌一个小时。在这个步骤中密集的结晶发生了。
在一个小时之内将200ml丙酮加入生成的浆体中，在50℃将该批次搅拌额外的一个小时。
在一个小时期间将该批次冷却到0-5℃，在这个温度搅拌额外的一个小时并且在Büchner过滤器上过滤。用75ml丙酮洗涤固体滤饼。
在烘箱内真空下在50℃将收集的湿产品(27.5g)干燥至恒重
干燥的产品–23.65g；结晶率–94.6％
分析：
显微镜观察–棒状颗粒
通过Malvern测量的粒度分布：
D(0.1)＝2.6μm；D(0.5)＝12.4μm；D(0.9)＝34.3μm
表5实验室规模拉喹莫德钠结晶结果
实施例2和实施例3的讨论：
实施例2和实施例3的结果总结在表5中。表5显示该工艺确实生产拉喹莫德钠晶体混合物，重结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径和(iii)拉喹莫德颗粒体积总量的10％或更多具有小于5微米的粒径。
实施例4–拉喹莫德钠的重结晶–生产规模(生产规模批次C,D和E)
按照如下进行生产规模的拉喹莫德钠的重结晶(批次C、D和E)。
在两个250升搪玻璃反应器(反应器I和反应器II)中进行生产规模拉喹莫德钠的重结晶是。固体产品在具有20微米筛目的HastelloyC-22搅动式过滤干燥器中过滤和干燥。
批次大小是6.5-7.5kg干燥的API。
将粗拉喹莫德钠批次引入具有11体积工艺用水的反应器I中。在搅拌下将该批次加热到60-73℃直到固体完全溶解。
在加热和搅拌下，将反应器I中的热溶液通过0.2μm过滤系统循环15-20分钟。循环完成之后，通过0.2μm过滤器将过滤后的溶液转移到反应器II中。反应器I和过滤器用1.75体积工艺用水洗涤，将洗液转移到反应器II中。
形成真空，在P<45mmHg，夹套温度T<65℃条件下将反应器II中的溶液进行蒸发直到残留物的体积达到14-16升(计算的1.7-1.8v/w水/粗拉喹莫德钠起始物料重量)。在这个步骤中自发结晶在反应器壁上开始。然后形成大气压力，调整夹套温度40-50℃。搅拌该批次不少于10分钟。
在45℃下搅拌该批次额外的90分钟，在1.5–2.5小时内向反应器中加入7.9体积丙酮。加入期间的反应器温度保持在40和50℃之间。
在2-5小时期间将生成的浆体冷却到0±4℃并且在这个温度下搅拌10-15小时。然后将该浆体转移到过滤-干燥器中，在氮气压下过滤固体。
用丙酮洗涤滤饼两次(2x10升)，用氮气净化，然后在真空下(P<50mmHg)，搅动下升温(T＝35±5℃)进行干燥。
排出、取样分析并且包装干燥的产品。
3个常规生产GMP批次的数据总结在表6中。表6显示的PSD数值与实施例2和实施例3显示的实验室规模实验结果吻合良好。
表6生成规模拉喹莫德钠结晶结果
批次C和D也具有减少水平的杂质(表7)，良好的堆积和轻叩密度(表6)
生产规模(22个结晶批次)生产的拉喹莫德钠的粉末密度分析显示了堆积密度在0.237和0.364g/ml之间的范围变化。轻叩密度是0.432-0.609g/ml。
分析批次C和D的结果显示在表7和表8中。
表7分析结果
表8拉喹莫德钠的金属杂质以PPM计
表9.来自MCQME的拉喹莫德钠的纯化
起始物料,粗产品(crude) 重结晶产品
批次编号 粗产品 C
外观 聚合的白色固体 散粒白色粉末
MCQME通过HPLC,％ 0.10 N.D.*
*N.D.–未检测到(<0.02％)
不同放大率下的粗产品的常规批次和重结晶拉喹莫德钠的显微镜照片显示在图5-8中。
实施例4的讨论：
改进的重结晶法表现了生产规模中粒度分布的重现性良好。减少蒸发残留物体积至1.7-1.8v/w比率，自发结晶的开始提供了想要的晶体粒径。改进的重结晶法说明了减小晶体粒径至d(0.9)<40μm水平和生产规模中粒度分布的重现性良好。
具有减小的晶体粒径的产品没有聚合趋势，不需要研磨或去结块以均化。具有类似于浆体到浆体法制备的PSD的产品是聚合的，因此在制剂中很有问题。
改进的结晶法还导致拉喹莫德钠具有想要的密度和纯度特征。
改进的结晶法还提供从有机杂质，例如MCQME中有效纯化。
表9显示的数据说明通过工业规模批次的拉喹莫德钠的重结晶可完全除去MCQME杂质。因为这个中间体具有基因毒性潜能，它应当被纯化到检测不到的水平。结晶过程还提供纯化全部其他已知有机杂质到检测极限以下的含量。
不同放大率下的常规批次的粗产品和重结晶拉喹莫德钠的显微镜照片显示在图5-8中，显示两种产品的棒状形态。此时，图5和6中的粗产品比图7和8中的重结晶的“晶体”产品更加聚合。
实施例5–拉喹莫德钠药物组合物的拉喹莫德胶囊
拉喹莫德胶囊是根据PCT国际申请公开号WO2007/146248的实施例2描述的方法制造的，其整个内容由此通过援引并入。执行WO2007/146248的实施例2的步骤。每个胶囊含有0.64mg拉喹莫德钠，相当于0.6mg拉喹莫德。
根据HPLC相对于拉喹莫德的量，胶囊具有指标范围内的许多杂质。
胶囊具有水含量不多于1.5％。
包入胶囊内的药物组合物的溶解特征，含量均匀性和残留溶剂符合美国药典<711>(溶解),美国药典<905>(均匀性)和美国药典<467>。
每个胶囊含有90.0–110.0％标示量。
胶囊含有NMT103cfu/g的好氧性微生物总数(TAMC)，NMT102cfu/g的混合酵母/霉菌总量(TYMC)，1g中没有埃希氏大肠杆菌(EscherichiaColi)。
实施例5的讨论：
实施例5说明在工业规模生产中，拉喹莫德的药物组合物可制备成为具有检测不到的含量或低含量的极性杂质和非极性杂质。
实施例6-拉喹莫德钠参考标准品的制备
拉喹莫德钠主要参考标准批次由拉喹莫德钠批次结晶制备，随后通过从水/丙酮混合物(1:4.5w/w)中结晶纯化。通过将药物物质批次溶解在水中同时加热进行结晶。在减少的压力条件下过滤澄清溶液，并将其浓缩到已知残留体积。加入丙酮，冷却溶液。将所得晶体过滤、洗涤和干燥。发现该批次的色谱纯度为100.0％。极性和非极性杂质两者总量是LT0.05％，DELAQ的含量是LT0.1％，和拉喹莫德酸含量是LT0.2％。
实施例7-MCQ的制备
MCQ是白色固体。提供MCQ的分子结构，化学式和分子量如下：
5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮
化学式C10H8ClNO2
分子量：209.629
用下列方式制备MCQ：在75℃加热MCQCA和DMSO2小时，然后冷却到室温。加入水，沉淀物通过过滤收集，用水洗涤并其在50℃真空烘箱中干燥。得到适合用做参考标准品的足够纯的材料。
用NMR、MS、元素分析和FT-IR表征MCQ，详细如下。
核磁共振(NMR)光谱法
在Bruker300MHz仪器上，在DMSO中进行MCQ的1H-NMR和13C-NMR表征。峰归属总结在表10中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图9和图10中。
表10.MCQ的13C和1H-NMR峰归属
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
N-CH3 29.30 3H 3.55 brs
C#2 161.53 -- --
C#3 99.57 1H 5.94 brs
C#4 161.53 -- --
C#4a 校正(ca.)113.2 -- --
C#5 校正130.5 -- --
C#6 124.78 1H 7.47 d(8.0)
C#7 130.93 1H 7.53 t(8.0)
C#8 114.22 1H 7.29 d(8.0)
C#8a 142.41 -- --
*brs＝宽的单峰,d＝二重峰,t＝三重峰
质谱法(MS)
使用正离子模式(ES+)下的电喷雾电离，在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到MCQ的质谱。包含35Cl和37Cl的MS信号之间的比例相当于这些同位素的自然丰度(大约3:1)。图11中显示的图谱与MCQ的分子量一致。MCQ的ES+质谱中主要信号的归属显示在表11中。
表11.MCQ的ES+质谱中主要峰的归属
m/z 归属
210 [M(35Cl)+H]+
212 [M(37Cl)+H]+
232 [M(35Cl)+Na]+
234 [M(37Cl)+Na]+
元素分析
在铂金-埃尔默2400系列IICHN分析仪上(Perkin-Elmer2400SeriesIICHNAnalyzer)进行元素分析测试。MCQ的结果显示在表12中。C、H和N的重量百分数是精确的，并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。
表12.MCQ的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N ％Cl
理论的 57.30 3.85 6.68 16.91
实验的 57.31 3.64 6.54 17.41
红外光谱
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量MCQ的FT-IR光谱。代表性的光谱显示在图12中。波段分配(bandassignment)总结提供在表13中。
表13.MCQ在KBr中的IR波段分配总结
跃迁能量(Transition Energy)(cm-1) 波段分配
702-1280 芳香C-H形变振动
1093和1135 芳香C–Cl伸缩
1164-1280 芳香C–OH伸缩
1164-1413 C–N伸缩
1554–1613 芳香C–C伸缩
1449-1613 芳香C＝C伸缩
1637 C＝O伸缩
2890 N-CH3伸缩
3450 OH伸缩
实施例8-MCQCA的制备
MCQCA是白色粉末。提供MCQCA的分子结构、化学式和分子量如下：
5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3羧酸
化学式C11H8ClNO4
分子量：253.639
使用下列方式制备MCQCA：
在65℃下使用回流冷凝器加热MCQEE在2.8MHCl的醋酸溶液中的混合物6小时。冷却混合物到室温，用2-异丙醇稀释，进一步冷却到8℃。晶体被虑出，用2-异丙醇洗涤，在50℃真空烘箱中干燥。
得到适合用做参考标准品的足够纯度的原料。
通过NMR、MS、元素分析和FT-IR表征MCQCA，详细如下。
核磁共振(NMR)光谱法
在D2O+KOH中在Bruker300MHz仪器上进行MCQCA的1H-NMR和13C-NMR表征。峰分配总结在表14中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图13和图14中。
表14.MCQCA的13C和1H-NMR峰分配
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
N-CH3 29.78 3H 3.43 s
C#2 162.31 -- --
C#3 113.46 -- --
C#4 176.93 -- --
C#4a 119.28 -- --
C#5 131.56 -- --
C#6 124.88 1H 7.05 d(8.0)
C#7 129.38 1H 7.21 t(8.0)
C#8 114.03 1H 7.14 d(8.0)
C#8a 141.32 -- --
C#9 169.62 -- --
*d＝双重峰,t＝三重峰,s＝单峰
质谱法(MS)
使用正离子模式(ES+)下的电喷雾电离在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到MCQCA的质谱。包含35Cl和37Cl的MS信号之间的比例相当于这些同位素的自然丰度(约3:1)。图15中显示的图谱与MCQCA的分子量一致。MCQCA的ES+质谱中主要信号的归属显示在表15中。
表15.MCQCA的ES+质谱的主要峰的归属
m/z 归属
236 [M(35Cl)+H-H2O]+
238 [M(37Cl)+H-H2O]+
254 [M(35Cl)+H]+
256 [M(37Cl)+H]+
276 [M(35Cl)+Na]+
278 [M(37Cl)+Na]+
元素分析
在Perkin-Elmer2400SeriesIICHN分析仪上进行元素分析测试。C、H和N的重量百分数是精确的，并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。
MCQCA的结果显示在表16中
表16.MCQCA的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N ％Cl
理论的 52.09 3.18 5.52 13.98
实验的 52.11 3.16 5.56 13.68
红外光谱
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量MCQCA的衰减全反射(ATR)FT-IR光谱。代表性的光谱显示在图16中。波段分配的总结提供在表17中。
表17.MCQCA的IR波段分配的总结
跃迁能量(cm-1) 波段分配
706-1206 芳香C–H形变振动
1008-1102 芳香C–Cl伸缩
1148-1284 芳香C–OH伸缩
1008-1434 C–N伸缩
1571-1678 芳香C–C伸缩
1571-1678 芳香C＝C伸缩
1678 C＝O伸缩
2520 COO-H伸缩
3090 芳香C–H伸缩
实施例8-MCQME的制备
MCQME是白色至淡黄色固体(yellowishsolid)。提供MCQME的分子结构、化学式和分子量如下：
甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3羧酸酯
化学式C12H10ClNO4
分子量：267.665
MCQME的制备从丙二酸二甲酯钠的形成开始，丙二酸二甲酯钠通过丙二酸二甲酯在DMF中与甲醇钠溶液反应形成。然后将中间体MCIA与丙二酸二甲酯钠反应形成MCQME钠盐。最后，将MCQME钠盐酸化到MCQME，MCQME用水洗涤并且干燥。下面是制备MCQME的详细描述。
将DMF(66.5kg[70.4升])，丙二酸二甲酯(9.6kg[72.7摩尔,8.3升])和30％甲醇钠的甲醇溶液(11.5kg[63.9摩尔])装入反应器中。搅拌反应混合物并将其加热到82℃到88℃，保持在该温度11/2到21/2小时以形成丙二酸二甲酯钠。然后将混合物冷却到30-40℃。为蒸发出甲醇，使用真空，逐步升温反应器夹套温度。在甲醇蒸发(不少于12kg[14.5升]蒸馏物)之后，用氮气破坏真空，加热反应混合物到82℃到88℃。然后将MCIA(8.5kg[40.1摩尔])逐步加入到反应混合物中，用DMF(10kg[10.6升])洗涤。将反应器内容物冷却到75℃以下，使用真空，逐步升高反应器夹套温度，蒸发甲醇(12kg[15升]蒸馏物)。用氮气破坏真空，冷却反应混合物到12℃至35℃。逐步加入工艺用水(119Kg)，保持反应混合物温度在12℃至35℃，然后加热反应混合物到42-48℃。在2-3小时期间将32％HCl水溶液(11.1kg[97.3摩尔])加入，用DMF将供料管线中的剩余盐酸溶液洗掉。将形成的浆体冷却到20℃至30℃，保持在该温度下不少于30分钟。
渐渐地将该浆体转移到过滤-干燥器中。通过加压该浆体将母液移除。将工艺用水(每个循环29.8kg)加入到过滤-干燥器中，并且将其压出。用水洗涤过滤-干燥器内含物直到流出洗涤液的pH是NLT4。在40℃至50℃(过滤干燥器的夹套温度)下真空干燥产物。
真空干燥直到来自过滤-干燥器的样品的LOD少于2.0％，水含量(通过Karl-Fischer测量)不多于0.5％。然后将夹套冷却到20℃到30℃，将干燥的MCQME排出。
产率是62％至87％。
去成块、分析和释放干燥的MCQME。
实施例9–MCQEE的制备
MCQEE是浅黄色固体(lightyellowsolid)。提供MCQEE的分子结构、化学式和分子量如下：
乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3羧酸酯
化学式：C13H12ClNO4
分子量：281.692
使用下列方式制备MCQEE：
将氢化钠加入到MCIA和丙二酸二乙酯的DMF溶液中。将混合物逐步地加热到95℃，并搅拌3.5小时，然后冷却到35℃。反应混合物用水猝灭，然后用37％HCl酸化。1小时后，在8℃过滤混合物，用水洗涤(直到母液的pH是4.5)，并且在40℃真空烘箱中干燥。通过在85℃将粗产品溶解在乙醇中然后缓慢冷却(在冰水浴中)结晶粗产品。过滤得到的晶体，用乙醇洗涤，在50℃真空烘箱中干燥。
得到适合用作参考标准品的足够纯度的原料。
通过NMR、MS、元素分析和FT-IR表征MCQEE，详细如下。
核磁共振(NMR)光谱法
在CDCl3中在Bruker300MHz仪器上进行MCQEE的1H-NMR和13C-NMR表征。峰分配总结在表18中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图17和图18中。
表18.MCQEE的13C和1H-NMR峰分配
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
N-CH3 30.08 3H 3.63 s
C#2 158.76 -- --
C#3 98.18 -- --
C#4 172.99 -- --
C#4a 112.48 -- --
C#5 134.50 -- --
C#6 125.96 1H 7.23 d(8.0)
C#7 133.28 1H 7.48 t(8.0)
C#8 113.29 1H 7.24 d(8.0)
C#8a 143.53 -- --
C#9 172.67 -- --
C#1` 62.56 2H 4.51 q(7.0)
C#2` 14.20 3H 1.48 t(7.0)
*d＝双重峰,t＝三重峰,s＝单峰，q＝四重峰
质谱法(MS)
使用正离子模式(ES+)下的电喷雾电离，在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到MCQEE的质谱。包含35Cl和37Cl的MS信号之间的比例相当于这些同位素的自然丰度(约3:1)。图19中显示的图谱与MCQEE的分子量一致。MCQEE的ES+质谱中主要信号的归属显示在表19中。
表19.MCQEE的ES+质谱的主要峰的归属
m/z 归属
236 [M(35Cl)+H-(CH3-CH2-OH)]+
238 [M(37Cl)+H-(CH3-CH2-OH)]+
282 [M(35Cl)+H]+
284 [M(37Cl)+H]+
304 [M(35Cl)+Na]+
306 [M(37Cl)+Na]+
元素分析
在Perkin-Elmer2400SeriesIICHN分析仪上进行元素分析测试。C、H和N的重量百分数是精确的并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。MCQEE的结果显示在表20中。
表20.MCQEE的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N ％Cl
理论的 55.43 4.29 4.97 12.59
实验的 55.44 4.25 4.87 12.57
红外光谱
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量MCQEE的衰减全反射(ATR)FT-IR光谱。代表性的光谱显示在图20中。波段分配的总结提供在表21中。
表21.MCQEE的IR波段分配总结
跃迁能量(cm-1) 波段分配
676-1213 芳香C–H变形振动
1019-1092 C–Cl伸缩
1145-1438 C–N伸缩
1145-1270 芳香C–OH伸缩
1438-1603 芳香C–C伸缩,芳香C＝C伸缩
1656 C＝O伸缩
实施例115-HLAQ的制备
5-HLAQ是灰白色(off-whitesolid)固体。提供5-HLAQ的分子结构、化学式和分子量如下：
N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺
化学式：C19H18N2O4
分子量：338.357
5-HLAQ在大多数有机溶剂和含水酸性介质中是不稳定的。因此通过常用的方法纯化是极其困难的。所以，通过形成二醋酸酯衍生物，然后碱性水解、酸化沉淀和快速过滤对原料进行纯化。
5-HLAQ通过多步法制备，描述如下：
合成包括：1)从2-氨基-6-甲氧基苯甲酸(化合物1)制备5-MeO-拉喹莫德(化合物2)；2)制备5-HLAQ粗产品(化合物3)；3)乙酰化酚基生成二醋酸酯拉喹莫德(di-acetate-laquinimod)衍生物(化合物4)；4)水解二醋酸酯衍生物产生纯化的5-HLAQ(化合物5)。
5-HLAQ的制备过程进一步分步描述在下面段落中：
5-MeO-拉喹莫德(化合物2)
从2-氨基-6-甲氧基苯甲酸(化合物1)开始通过4步合成过程得到5-MeO-拉喹莫德。这4步与开始于ACBA的拉喹莫德的制备方法是一样的。
5-HLAQ粗产品(化合物3)
将5-MeO-拉喹莫德溶解在二氯甲烷中，将溶液冷却到0-5℃。加入AlCl3，在0-5℃搅拌反应混合物0.5小时，然后在环境温度下搅拌7小时。在30℃将溶液蒸干(在水浴中)，加入水。过滤得到的灰色固体，用1NHCl洗涤，在30℃真空烘箱中干燥。
二醋酸酯拉喹莫德(化合物4)
将醋酸酐加入到5-HLAQ粗产品的吡啶溶液中，在室温下将反应混合物搅拌1小时。将吡啶蒸干，将油状残留物溶剂在二氯甲烷中。用1NHCl洗涤有机溶液，然后用水洗涤液。通过快速层析在硅胶上(流动相：1％甲醇在二氯甲烷中)纯化粗产品2。
5-HLAQ(化合物5)
将1NNaOH溶液加入到4的乙醇悬浮液中。将反应混合物搅拌40分钟，蒸发乙醇。用5NHCl酸化残留物至pH1-2，过滤白色固体，用水洗涤并且干燥。得到5-HLAQ为白色固体，经HPLC测定具有纯度>99％。
得到适合用作参考标准品的足够纯度的原料。
用NMR、MS、元素分析和FT-IR表征5-HLAQ，详细如下。
核磁共振(NMR)光谱法
在Bruker300MHz仪器上在DMSO中进行5-HLAQ的1H-NMR和13C-NMR表征。峰分配总结在表22中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图21和图22中。
表225-HLAQ的13C和1H-NMR峰分配
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
N-CH3 29.09 3H 3.39 brs
C#2 157.95 -- --
C#3 102.85 -- --
C#4 159.65 -- --
C#4a -- -- --
C#5 155.20 -- --
C#6 107.79 1H 6.84 d(8.0)
C#7 131.91 1H 7.36 t(8.0)
C#8 106.35 1H 6.61 d(8.0)
C#8a 140.47 -- --
C#9 158.79 -- --
N-CH2-CH3 42.81 2H 3.76 dq(7)
N-CH2-CH3 12.91 3H 1.08 t(7)
C#1` 141.59 -- --
C#2`/6` 126.84 1H 7.3 m
C#3`/5` 128.46 1H 7.3 m
C#4` 127.31 1H 7.18 m
*brs＝宽的单峰,d＝双重峰,t＝三重峰,s＝单峰,m＝多重峰,dq＝双的四重峰
质谱法(MS)
使用正离子模式(ES+)下的电喷雾电离，在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到5-HLAQ的质谱。
图23显示的图谱与5-HLAQ的分子量一致。5-HLAQ的ES+质谱中主要信号的归属显示在下面的表23中。
表235-HLAQ的ES+质谱的主要峰的归属
m/z 归属
339 [M+H]+
361 [M+Na]+
元素分析
在Perkin-Elmer2400SeriesIICHN分析仪上进行元素分析测试。C、H和N的重量百分数是精确的，并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。5-HLAQ的结果显示在表24中
表245-HLAQ的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N
理论的 67.44 5.36 8.28
实验的 67.05 5.06 8.07
红外光谱
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量5-HLAQ的衰减全反射(ATR)FT-IR光谱。代表性的光谱显示在图24中。波段分配的总结提供在表25中。
表255-HLAQ的IR波段分配总结
跃迁能量(cm-1) 波段分配
686-1257 芳香C–H变形振动
1019-1416 C–N伸缩
1157-1249 芳香C–OH伸缩
1586-1631 芳香C–C伸缩，芳香C＝C伸缩
1659 C＝O伸缩
实施例10DELAQ的制备
DELAQ是灰白色到淡黄色固体(paleyellowsolid)。提供DELAQ的分子结构、化学式和分子量如下：
5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺
化学式：C17H13ClN2O3
分子量：328.750
使用下列方式制备DELAQ：
将夹套反应器中的MCQME、正庚烷、正辛烷和苯胺的混合物加热到Tj＝135℃，将挥发物蒸馏3小时。停止蒸馏，将额外部分的正庚烷和苯胺加入到混合物中。在Tj＝135℃，继续蒸馏额外的2小时。将反应混合物物冷却到室温，加入正庚烷。通过过滤收集形成的结晶固体，用正庚烷洗涤。湿原料在50℃真空烘箱中干燥。
得到适合用作参考标准品的足够纯度的原料。
用NMR、MS、元素分析和FT-IR表征DELAQ，详细如下。
核磁共振(NMR)光谱法
在Bruker300MHz仪器上在CDCl3中进行DELAQ的1H-NMR和13C-NMR表征。峰分配被总结在表26中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图25和图26中。
表26DELAQ的13C和1H-NMR峰分配
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
N-CH3 30.23 3H 3.68 s
NH -- 12.57 brs
C#2 162.09 -- --
C#3 96.84 -- --
C#4 173.81 -- --
C#4a 113.50 -- --
C#5 134.51 -- --
C#6 126.61 1H 7.27 m
C#7 132.89 1H 7.47 m
C#8 113.81 1H 7.27 m
C#8a 142.08 -- --
C#9 169.61 -- --
C#1` 137.01 -- --
C#2`/6` 121.29 1H 7.65 m
C#3`/5` 129.02 1H 7.36 m
C#4` 124.95 1H 7.17 m
*brs＝宽的单峰,s＝单峰,m＝多重峰。
质谱(MS)
使用正离子模式(ES+)下的电喷雾电离，在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到DELAQ的质谱。包含35Cl和37Cl的MS信号之间的比例相当于这些同位素的自然丰度(约3:1)。图27显示的图谱与DELAQ的分子量一致。DELAQ的ES+质谱中主要信号的归属显示在下面的表27中。
表27DELAQ的ES+质谱的主要峰的归属
m/z 归属
236 [M(35Cl)+H-(CH3)-(Ph)]+
238 [M(37Cl)+H-(CH3)-(Ph)]+
329 [M(35Cl)+H]+
331 [M(37Cl)+H]+
元素分析
在铂金-埃尔默Perkin-Elmer2400SeriesIICHN分析仪上进行元素分析测试。C、H和N的重量百分数是精确的，并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。DELAQ的结果显示在表28中。
表28.DELAQ的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N ％Cl
理论的 62.11 3.99 8.52 10.78
实验的 61.90 3.83 8.38 10.96
红外光谱
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量DELAQ的FT-IR光谱。代表性的光谱显示在图28中。波段分配的总结被提供在表29中。
表29.DELAQ在KBr中的IR波段分配总结
跃迁能量(cm-1) 波段分配
686-1203 芳香C–H变形振动
735-833 N-H变形振动
1077-1089 C–Cl伸缩
1203-1449 C–N伸缩
1203 芳香C–OH伸缩
1489-1620 芳香C–C伸缩，芳香C＝C伸缩
1659 C＝O伸缩
2951 COO-H伸缩
实施例113-HLAQ的制备
3-HLAQ是黄色固体。提供3-HLAQ的分子结构、化学式和分子量如下：
5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺
化学式：C19H17ClN2O4
分子量：372.802
使用下列方式制备3-HLAQ：
将拉喹莫德钠的水溶液逐滴加入到磷酸氢二钠二水合物和硫酸氢钾(2KHSO5·KHSO4·K2SO4)的水溶液中。加入10％NaOH直到pH为8.0。在室温下将溶液混合30分钟。得到的固体经过滤，用水洗涤，在50℃真空烘箱中干燥。粗产品从乙酸乙酯和正庚烷的混合物中重结晶两次。每次产物通过将混合物冷却到10℃并且搅拌1小时分离。滤出得到的晶体，用正庚烷洗涤，在50℃真空干燥箱中干燥。
得到适合用作参考标准品的足够纯度的原料。
用NMR、MS、元素分析和FT-IR表征3-HLAQ，详细如下。
核磁共振(NMR)光谱法
在Bruker300MHz仪器上在CDCl3中进行3-HLAQ的1H-NMR和13C-NMR表征。峰分配总结在表30中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图29和图30中。
表30.3-HLAQ的1H和13C-NMR峰分配
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
N-CH3 30.56 3H 3.21 s
C#2 165.45 -- --
C#3 77.92 -- --
C#4 188.90 -- --
C#4a 136.16 -- --
C#5 校正131.6 -- --
C#6 126.75 1H 7.14 d(8.0)
C#7 134.90 1H 7.35 t(8.0)
C#8 113.78 1H 6.84 d(8.0)
C#8a 144.51 -- --
C#9 167.87 -- --
N-CH2-CH3 46.96 2H 3.79 q(6.0)
N-CH2-CH3 12.55 3H 1.16 bt(6.0)
C#1` 137.19 -- --
C#2`/6` 131.62 1H 7.07-7.15 m
C#3`/5` 128.91 1H 7.07-7.15 m
C#4` 129.11 1H 7.07-7.15 m
*d＝二重峰,t＝三重峰,s＝单峰,m＝多重峰,q＝四重峰,bt＝宽的三重峰
质谱(MS)
使用正离子模式下(ES+)的电喷雾电离，在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到3-HLAQ的质谱。包含35Cl和37Cl的MS信号之间的比例相当于这些同位素的自然丰度(约3:1)。图31显示的图谱与3-HLAQ的分子量一致。3-HLAQ的ES+质谱中主要信号的归属显示在下面的表31中。
表313-HLAQ的ES+质谱的主要峰的归属
元素分析
在Perkin-Elmer2400SeriesIICHN分析仪上进行元素分析测试。C、H和N的重量百分数是精确的，并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。3-HLAQ的结果显示在表32中。
表323-HLAQ的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N ％Cl
理论的 61.21 4.60 7.51 9.51
实验的 61.09 4.68 7.38 9.30
红外光谱
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量3-HLAQ的衰减全反射(ATR)FT-IR光谱。代表性的光谱显示在图32中。波段分配的总结被提供在表33中。
表333-HLAQ的IR波段分配总结
跃迁能量(cm-1) 波段分配
794-1244 芳香C–H变形振动
1035-1116 C–Cl伸缩
1061-1417 C–N伸缩
1458-1480 CH2变形振动
1583 芳香C–C伸缩，芳香C＝C伸缩
1663-1693 C＝O伸缩
2979 N-CH2中C-H伸缩
实施例12螺-LAQ的制备
螺-LAQ是白色粉末。提供螺-LAQ的分子结构、化学式和分子量如下：
1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮]
化学式：C19H15ClN2O3
分子量：354.787
使用以下方式制备螺-LAQ。
将拉喹莫德(游离酸)、硝酸铈(IV)铵、乙醇和醋酸的水溶液的混合物混合1小时。然后，沉淀物经过滤，依次用水和乙醇洗涤，在50℃真空烘箱中干燥。
得到适合用作参考标准品的足够纯度的原料。
用NMR、MS、元素分析和FT-IR表征螺-LAQ，详细如下。
核磁共振(NMR)光谱法
在Bruker300MHz仪器上在DMSO中进行螺-LAQ的1H-NMR和13C-NMR表征。峰分配总结在表34中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图33和图34中。
表34螺-LAQ的13C和1H-NMR峰分配
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
N-CH3 30.95 3H 3.44 brs
C#2 164.10 -- --
C#3 71.76 -- --
C#4 185.60 -- --
C#4a 124.66 -- --
C#5 133.49 -- --
C#6 126.13 1H 7.54 d(8.0)
C#7 136.03 1H 7.74 t(8.0)
C#8 115.77 1H 7.20 d(8.0)
C#8a 145.62 -- --
N-CH2-CH3 34.90 2H 3.75 q(8.0)
N-CH2-CH3 12.40 3H 1.16 t(8.0)
C#2` 167.40 -- --
C#3`a 117.83 -- --
C#4` 124.87 1H 7.20 d(8.0)
C#5` 122.84 1H 7.38 ddd(8.0,6.5,2.5)
C#6` 129.84 1H 7.0-7.1 m
C#7` 109.64 1H 7.0-7.1 m
C#7`a 143.17 -- --
*brs＝宽的单峰，d＝二重峰，t＝三重峰，s＝单峰，m＝多重峰，dd＝双重二重峰(doubledoublet)，ddd＝双重双重二重峰(doubledoubledoublet)，q＝四重峰。
质谱(MS)
使用正离子模式(ES+)下的电喷雾电离，在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到螺-LAQ的质谱。包含35Cl和37Cl的MS信号之间的比例相当于这些同位素的自然丰度(约3:1)。图35显示的图谱与螺-LAQ的分子量一致。螺-LAQ的ES+质谱中主要信号的归属显示在下面的表35中。
表35.螺-LAQ的ES+质谱中主要峰的归属
m/z 归属
311 [M(35Cl)+H-(CH2CH3)-(CH3)]+
313 [M(37Cl)+H-(CH2CH3)-(CH3)]+
355 [M(35Cl)+H]+
357 [M(37Cl)+H]+
元素分析
在Perkin-Elmer2400SeriesIICHN分析仪上进行元素分析测试。C、H和N的重量百分数是精确的，并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。螺-LAQ的结果显示在表36中。
表36螺-LAQ的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N ％Cl
理论的 64.32 4.26 7.90 9.99
实验的 64.08 4.22 7.75 10.12
红外光谱
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量螺-LAQ的衰减全反射(ATR)FT-IR光谱。代表性的光谱显示在图36中。波段分配的总结提供在表37中。
表37.螺-LAQ的IR波段分配总结
跃迁能量(cm-1) 波段分配
687-1244 芳香C–H变形振动
1020-1091 C–Cl伸缩
1020-1454 C–N伸缩
1153-1278 芳香C–OH伸缩
1582 芳香C–C伸缩，芳香C＝C伸缩
1667-1738 C＝O伸缩
实施例13MEG-LAQ的制备
MEG-LAQ的分子结构、化学式和分子量显示如下：
N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(2,3,4,5,6-五羟己基)胺基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺
化学式：C26H33N3O8
分子量：515.556
回流拉喹莫德钠和葡甲胺的水溶液，并用空气鼓泡约1个月。所得溶液用水稀释两倍(twice)，用浓盐酸酸化到pH1-2。将水溶液过滤后用氯仿萃取。然后，将浓氢氧化铵溶液加入到水溶液中直到中性。蒸发溶液，所得棕色浆液用甲醇洗涤。葡甲胺凝固后，过滤，然后用将硅胶加入到甲醇溶液。蒸发溶剂，所得混合物用硅胶柱色谱法纯化(流动相：20％甲醇在二氯甲烷中)。
这个合成和纯化提供适合用作标准品的足够纯度的原料。
实施例14BH-3-HLAQ的制备
提供BH-3-HLAQ的分子结构、化学式和分子量如下：
2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸
化学式：C19H19ClN2O5
分子量：390.818
将1NNaOH溶液加入到3-HLAQ的水悬浮液中。搅拌黄色溶液0.5小时，然后加入1NHCl溶液。含有白色固体的水溶液用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥。过滤悬浮液，蒸馏至干，通过结晶从IPA：水混合物(1:3.75v/v)中纯化固体残留物。冷却悬浮液到0-5℃，并保持1小时，过滤，用IPA：水混合物(1:10v/v)洗涤。所得白色固体在50℃真空烘箱中干燥。
在最初定性时，通过IR、元素分析、MS和NMR证明BH-3-HLAQ标准品符合分子结构。额外的测试包括色谱纯度和干燥失重。
该合成和纯化提供适合用作标准品的足够纯的原料。
为了结构确证目的，用NMR、MS、元素分析和FT-IR表征BH-3-HLAQ样品，详细如下。
NMR光谱
在Bruker300MHz仪器上在DMSO中进行BH-3-HLAQ的1H-NMR和13C-NMR表征。峰分配总结在表38中。1H-NMR和13C-NMR光谱分别显示在图37和图38中。
表38BH-3-HLAQ的13C和1H-NMR峰分配
13C(ppm) 1H(ppm) 多重性(Hz)*
CO2H 165.62 -- --
C#1 130.08 -- --
C#2 135.13 -- --
C#3 130.20 1H 7.77 d(8.0)
C#4 131.66 1H 7.66 t(8.0)
C#5 129.38 1H 7.19 d(8.0)
C#6 140.13 -- --
N-CH3 37.43 3H 3.09 --
C#1' 167.55 -- --
C#2' 68.67 1H 4.25 s
C#3' 168.93 -- --
NCH2CH3 43.43 2H 3.43,3.38 ABq of q(14.0,7.0,2.0)
NCH2CH3 12.24 3H 0.86 t(7.0)
C#7 137.34 -- --
C#8/12 127.86 2H 6.46 br
C#9/11 128.93 2H 7.27 m
C#10 127.80 1H 7.27 m
*s＝单峰，br＝宽峰，m＝多重峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰
质谱
使用正离子模式(ES+)下的电喷雾电离，在Q-TOFMicro-TM-MICROMASS(TOF)质谱仪上得到BH-3-HLAQ的质谱。图39显示的图谱与BH-3-HLAQ的分子量一致。BH-3-HLAQ的ES+质谱中主要信号的归属显示在表39中。
表39.BH-3-HLAQ的ES+质谱的主要峰的归属
m/z 归属
391 [M+H]+
413 [M+Na]+
FT-IR
使用Nicolet6700"ThermoScientific"FT-IR仪器测量BH-3-HLAQ的衰减全反射(ATR)FT-IR光谱。图40显示了典型光谱。波段分配的总结被提供在表40中。
表40.BH-3-HLAQ的IR波段分配的总结
跃迁能量(cm-1) 波段分配
703,737,769 芳香C–H变形振动
1090 芳香C–Cl伸缩
1492 芳香C＝C伸缩
1586 C–N伸缩
1652,1728 C＝O伸缩
3081 芳香C–H伸缩
3442 O-H伸缩
元素分析
在Perkin-Elmer2400SeriesIICHN分析仪上进行元素分析测试。C、H和N的重量百分数是精确的，并且在±0.3％之内是可重现的。卤素的精确度是±0.5％。BH-3-HLAQ的结果显示在表41中。
表41.BH-3-HLAQ的元素分析结果
元素 ％C ％H ％N ％Cl
理论的 58.39 4.90 7.17 9.07
实验的 58.31 4.79 7.15 9.56
实施例17-拉喹莫德钠物质的说明
化学式：C19H16ClN2NaO3
精确分子量：378.07
分子量：378.78
m/z:378.07(100.0％),380.07(32.0％),379.08(20.8％),381.08(6.9％),380.08(2.8％)
元素分析：C,60.25；H,4.26；Cl,9.36；N,7.40；Na,6.07；O,12.67
拉喹莫德钠是白色到灰白色粉末，在水中易溶，应当在储存在密封良好的容器中，避光，室温。
拉喹莫德钠的指标(specifications)如下：
表42
对MCQME来说，可供选择的指标是NMT10％和LT10％。
表43列出了当前用于测定在释放时和稳定性测试期间药物物质中杂质含量的非药典分析方法。还列出了方法编号和每个杂质的检测和定量极限。
表43.用于测定杂质的分析方法
参数 方法1 方法类型 定量极限 检测极限
MCQ 实施例19 RP-HPLC 0.05％ 0.02％
MCQCA 实施例19 RP-HPLC 0.05％2 0.02％
MCQME 实施例19 RP-HPLC 0.05％ 0.02％
5-HLAQ 实施例19 RP-HPLC 0.05％ 0.02％
MCQEE 实施例19 RP-HPLC 0.05％ 0.02％
LAQ 实施例19 RP-HPLC 0.2％ 0.03％
NEA 实施例19 RP-HPLC 0.06％ 0.02％
实施例15拉喹莫德钠药物产品的说明
将拉喹莫德药物产品制备成0.6mg拉喹莫德钠胶囊。拉喹莫德钠胶囊(0.6mg)的指标如下：
表44.释放和保存期限指标
1R＝释放；S＝稳定性
2MCQ:5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮
3MCQCA:5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸
45-HLAQ:N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺
5MEG-LAQ:N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(甲基(2,3,4,5,6-五羟己基)氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺
6BH-3-HLAQ:2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸
7频率：试点批次，前三个生产批次，之后根据要求偶然测试。
8频率：对释放来说，试点批次，前3个产品批次，之后每五批一次，或者如果每年制造少于5个批次，那么至少每年一个批次。对稳定性来说：a)对长期来测试来说，在零点时间，每年一次和/或到期日。b)对中间测试(Intermediatetesting)来说，在零点时间和12个月。c)对加速测试来说，在零点时间和6个月。
成品稳定性协议包装规格是每个销售容器/封装和/或单位剂量配制(marketingcontainer/closureand/oruniedoseconfiguration)的最大规格和最小规格。
表45
9仅仅针对验证批次和商业批次。
10仅仅针对如果加速测试失败。
下面的例子描述了在释放的时候和稳定性测试期间用于测定药物产品中杂质含量的非药典分析方法。还列出了方法编号和每个杂质的检测和定量极限，以及相应的验证编号。
表46.用于测定药物产品中杂质的分析方法
参数 实施例编号 方法类型 定量极限 检测极限
MCQ&MCQCA 实施例21 RP-HPLC 0.1％ 0.03％
5-HLAQ 实施例21 RP-HPLC 0.05％ 0.02％
NEA1 实施例22 RP-HPLC 0.1％ 0.03％
3-HLAQ1 实施例22 RP-HPLC 0.1％ 0.03％
MEG-LAQ 实施例23 RP-HPLC 0.2％ 0.1％
BH-3-HLAQ 实施例23 RP-HPLC 0.05％ 0.02％
1NEA和3-HLAQ从商品指标中删除了因为从来没有观察到它们。使用列出的方法，初期稳定批次中的这些杂质的监测将持续到稳定性程序完成。
实施例19-测定拉喹莫德药物物质样品中MCQ、MCQCA、5-HLAQ、MCQME和MCQEE的量的方法
通过HPLC分析拉喹莫德钠药物物质。使用下列HPLC方法测定MCQ、MCQCA、MCQME、MCQEE和5-HLAQ的量。
1.HPLC条件
全部配制(preparations)都是在具有不透明盖子的琥珀色瓶中进行的。配制完成之后，立即将溶液放置在冰箱或冷却到5℃的自动进样器架子中。
2.标准溶液配制
2.1储备标准溶液(溶液S)
精确称取约15mg拉喹莫德钠标准品放入到50mL容量瓶中。用稀释剂A稀释达到2/3刻度(volume)，在冷的超声波浴中超声处理约2分钟，用稀释剂A稀释到刻度。储备标准溶液浓度是约300μg/mL。在冰箱中储备标准溶液可储存一个月。
2.2用于含量分析的标准溶液(溶液A)
用稀释剂B将3mL储备标准溶液稀释到10mL(稀释因子3.33)。拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。在冰箱中储存时标准溶液A可使用7天。
2.3MCQCA储备标准溶液
精确称取约18mgMCQCA标准品放入到100mL容量瓶中。用乙腈稀释到刻度，超声处理直到物质完全溶解-储备MCQCA溶液。
MCQCA的浓度是约180μg/mL。
MCQCA储备标准溶液应当新近配制。
2.4用于杂质测定的标准溶液(溶液I)
使用稀释剂B配制溶液，其包含浓度为0.2％的拉喹莫德和相对于标准溶液A中拉喹莫德的工作浓度，浓度为0.1％的MCQCA。例如，使用下列过程。
将4.0mL用于含量分析的拉喹莫德钠标准溶液(溶液A)和1.0mLMCQCA储备标准溶液移取到100mL容量瓶中，用稀释剂B稀释到刻度(中间稀释溶液)。
将2.5mL中间稀释液放入到50mL容量瓶中，用稀释剂B补足到刻度。
总稀释因子对拉喹莫德来说是1666.67，对MCQCA来说是2000。
拉喹莫德钠浓度是约0.18μg/mL(0.2％)。
MCQCA浓度是约0.09μg/mL(0.1％,QL水平)。
当在冰箱中储存时，标准溶液I可使用24个小时。
3.分辨溶液配制
3.1混合溶液
用稀释剂A配制下列杂质溶液：
混合溶液可如下配制：
称取每个杂质约3mg放入到100mL容量瓶中，用稀释剂A溶解和稀释到刻度–混合溶液。混合溶液中每个杂质的浓度是约30μg/mL。混合溶液仅仅用于测定已知杂质的准确保留时间，当储存在约–20℃时，可使用达4个月。为此目的，新配制的混合溶液应当分为等份，立即储存在约–20℃。融合后，等份不能再冷冻。
3.2分辨溶液
将3mL储备标准溶液(溶液S)和0.3mL混合溶液移取到10mL容量瓶中，用稀释剂B稀释到刻度。拉喹莫德钠形式浓度是约90μg/mL。每个杂质的浓度是约0.9μg/mL(相对于拉喹莫德钠1％)。如果在冰箱中储存分辨溶液可使用9天。
4.样品配制
精确称取约15mg拉喹莫德钠晶体或DS放入到50mL容量瓶中。用稀释剂A稀释达到2/3刻度，在冷的超声波浴中超声处理约2分钟，用稀释剂A稀释到刻度–储备样品溶液。
用稀释剂B将3mL储备样品溶液稀释到10mL–工作样品溶液(稀释因子3.33)。
拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。
配制完成之后，必须在不迟于24小时之内分析样品。
5.过程(procedure)
根据相关SOP's进样分辨溶液、空白、用于含量和IDD测定的标准溶液、拉喹莫德样品溶液。
6.体系适用性测试
6.1分辨率测试
1.拉喹莫德峰的典型保留时间是15.5±2.0分钟.
2.拉喹莫德峰的拖尾因子应当不大于2.0。
3.峰之间应当达到NLT2的分辨因子。
4.特定杂质峰的典型RRT应当如下：
杂质 典型RRT
MCQME 0.33–0.38
MCQ 0.49–0.58
MCQEE 0.56–0.65
MCQCA 0.72–0.85
5-HLAQ 1.2–1.4*
*5-HLAQ的保留时间应当不大于23分钟.
6.2体系精度测试
为了测试体系精度，根据相关SOP's评估用于含量和IDD测定的拉喹莫德标准品。
溶液I中的MCQCA用于测试体系的灵敏度。标准溶液1(Std1)的六个进样的面积的RSD以及标准溶液1和标准溶液2(Std2)之间的差异应当是NMT20％。
7.保留时间(RT)的鉴定
样品色谱图中得到的主要(拉喹莫德)峰的RT应当与标准溶液得到的一致。
8.计算和报告
8.1拉喹莫德钠的含量计算
报告减去拉喹莫德酸含量之后的以干基计算的含量结果。
8.2杂质的评估和计算
相对于稀释的拉喹莫德钠标准品(溶液I)进行计算。
MCQME、MCQ、MCQEE、5-HLAQ和未知杂质的定量含量是0.05％。
MCQME、MCQ、MCQEE、5-HLAQ和未知杂质的检测含量是0.02％。
MCQCA的报告含量是0.10％。
MCQCA的检测含量是0.03％。
调整积分参数以拚除具有面积小于拉喹莫德钠标准品(溶液I)平均面积的10％的峰。
在±5％实际相应保留时间内，使样品色谱图中的已知杂质峰与体系适用性色谱图中的峰相关联。
计算拉喹莫德钠中的杂质：
RRF–计算的杂质的相对响应因子如下比率：拉喹莫德钠回归线斜率/杂质回归线斜率相对于拉喹莫德钠的相对响应因子(RRF)数值如下所示：
9.报告杂质
报告杂质如下：
*如果没有检测到未知杂质，报告：任何其他<0.02％。
变体1:至少一个杂质≥0.05％或MCQCA≥0.10％
变体2:全部杂质<0.05％并且MCQCA<0.10％
变体3:全部杂质<0.05％并且MCQCA<0.03％
变体4:全部杂质<0.02％并且MCQCA<0.03％
图41显示了根据以上方法的分辨率测试色谱图。
图41的体系适用性结果
图42显示了根据以上方法的稀释剂色谱图。
图43显示了根据以上方法的含量分析的典型色谱图。
图43的峰结果
名称 RT 面积 ％面积 积分类型
1 拉喹莫德 15.598 12787417 100.00 BB
图44显示了根据以上方法的杂质测试的典型色谱图。
图44的峰结果
名称 RT 面积 ％面积 积分类型
1 拉喹莫德 15.598 12790697 100.00 BB
实施例20–测定拉喹莫德药物物质的样品中NEA、3-HLAQ和SPIRO-LAQ的量的方法
用HPLC分析拉喹莫德钠药物物质。使用下列HPLC方法测定NEA、3-HLAQ和螺-LAQ的量。
1.HPLC条件
全部配制应当在琥珀色瓶中进行。推荐在使用之前用乙腈洗涤容量瓶和吸管。应当排除使用塑料巴斯德吸管。
2.标准溶液配制
2.1新的标准储备溶液
精确称取约25μL(约25mg)N-乙基苯胺(NEA)标准品放入到50mL容量瓶中。用稀释剂A稀释到刻度。
储备标准溶液的浓度是约500μg/mL。
在冰箱中储存时，NEA储备标准溶液可使用三周。
2.2NEA标准原稀释液溶液(NEAStandardprimarydilutionsolution)
用稀释B稀释0.5mLNEA储备标准溶液到50mL。
N-乙基苯胺的浓度是约5μg/mL。
2.3NEA工作标准溶液
用稀释剂B稀释0.5mLNEA标准原稀释液溶液到25mL(总稀释因子5000)。
N-乙基苯胺的浓度是约0.1μg/mL(约0.1％工作浓度)。
在冰箱中储存时，NEA工作标准溶液可使用四天。
3分辨溶液配制
3.1拉喹莫德钠储备溶液
精确称取约15mg拉喹莫德钠标准品放入到50mL容量瓶中。用稀释剂A稀释达到2/3刻度，在冷的超声波浴中超声处理约2分钟，用稀释剂A稀释到刻度。
在冰箱中储存时，拉喹莫德储备溶液可使用一个月。
3.2螺-LAQ储备溶液
称取约2.5mg螺-LAQ放入到50mL容量瓶中。用95％乙腈–5％水的混合物溶解且稀释到刻度
3.33HLAQ储备溶液
称取约2.5mg3-HLAQ放入到50mL容量瓶中。用95％乙腈–5％水溶解且稀释到刻度。
3.4分辨溶液
将下列等份移取到50mL容量瓶中，用稀释剂B稀释到刻度：
15mL拉喹莫德钠储备溶液、1.0mL螺-LAQ储备溶液、1.0mL3-HLAQ储备溶液和0.1mLNEA标准储备溶液。
拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。
NEA、螺-LAQ和3-HLAQ的浓度是约1μg/mL(1％)。
分辨溶液仅仅用于测定拉喹莫德、NEA、3-HLAQ和螺-LAQ的保留时间，在-20℃储存时可使用一个月。为此目的，新配制的分辨溶液应当分成等份，立即储存在-20℃。融化后，该溶液等份不能再冷冻。
进样之前，用力混合融化后的分辨溶液。
融化之后，分辨溶液在冰箱中储存时可使用4天。
4.样品溶液配制
精确称取约15mg拉喹莫德钠晶体或DS放入到50mL容量瓶中。用稀释剂B稀释达到2/3刻度，超声处理直到物质完全溶解，且用稀释剂B稀释到刻度－样品储备溶液。
用稀释剂B稀释3mL样品储备溶液到10mL(稀释因子3.33)。
拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。
说明：配制完成之后立即将样品溶液放置到冰箱或冷却到5℃的自动进样器中。配制完成之后必须不迟于12小时分析样品。
5.过程
根据相关SOP，进样分辨溶液、稀释剂B(两倍或三倍)、标准品和样品溶液。
6.体系适用性测试
6.1分辨率测试
拉喹莫德峰的典型保留时间是2.2±0.5分钟。
NEA峰的典型保留时间是12.2±1.5分钟。
特定杂质峰的色谱绘图(chromatographicmapping)应当按照下列顺序：3-HLAQ、NEA和螺-LAQ
两个成对峰应当达到NLT2的分辨率。
6.2体系精度测试
根据相关SOP，评估标准品以测试体系精度。
6.3空白
进样稀释剂B以检测体系峰。
7.评估和计算
NEA和任何其他杂质的定量极限是0.06％。
NEA和任何其他杂质的检测极限是0.02％。
调整积分参数以拚除具有面积小于标准面积的15％的峰。
忽略在0和拉喹莫德的RT加一分钟之间洗脱出的全部杂质峰。
依照方程式计算非极性杂质的含量：
其中RRF是相对于的杂质的NEA的相对响应因子如同表：
杂质 NEA 3-HLAQ 螺-LAQ 未知杂质
RRF 1.00 1.37 0.92 1.23
8.报告方式
*如果没有检测到未知杂质，报告：任何其他<0.02％。
图45显示根据以上方法的分辨率测试色谱图。
图45的体系适用性分离结果(SystemSuitabilitySeparationResults)
图46显示根据以上方法的稀释剂色谱图(diluentchromatogram)。
图46的峰结果
图47显示根据以上方法的典型样品色谱图。
图47的峰结果
名称 积分类型 RT 高度(μV) 面积 ％面积
1 拉喹莫德 bb 2.145 96369 11564891 99.99
2 体系峰 BB 3.421 166 1216 0.01
实施例21–测定拉喹莫德药物产品的样品中MCQ、MCQCA、5-HLAQ、MCQME和MCQEE量的方法。
通过HPLC分析包含0.6mg拉喹莫德的拉喹莫德胶囊。使用下列HPLC方法测定MCQ、MCQCA、5-HLAQ、MCQME和MCQEE的量。
1.HPLC条件
全部配制应当避光。对液体配制来说，使用带有不透明盖子的琥珀色瓶。仅仅使用玻璃巴斯德吸管。配制完成之后，标准品和样品溶液应当冷藏在2–8℃。
2.标准溶液配制
2.1拉喹莫德标准储备溶液(溶液S)
精确称取一式两份约15mg拉喹莫德钠标准品放入到50mL容量瓶中。用稀释剂A稀释达到2/3刻度，在冷的超声波浴中超声处理2分钟并且用稀释剂A稀释到刻度。
标准储备溶液的浓度是约300μg/mL拉喹莫德钠。
标准储备溶液当在冰箱(2℃-8℃)中储存时，可使用一个月。
2.2用于含量分析的拉喹莫德标准工作溶液(溶液A)
用稀释剂B稀释3mL标准储备溶液到10mL(稀释因子3.33)。
拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。表示成拉喹莫德(酸)的浓度是约85μg/mL。
标准工作溶液A当在冰箱(2℃-8℃)中储存时，可使用7天。
2.3MCQCA标准储备溶液
精确称取约18mgMCQCA标准品放入到100mL容量瓶中。用乙腈稀释到刻度，(在冷的超声波浴中)超声处理直到物质完全溶解－储备MCQCA溶液。
MCQCA的浓度是约180μg/mL。
MCQCA储备标准溶液应当是新配制的。
2.4用于测定杂质的标准溶液(溶液I)
使用稀释剂B配制溶液，其包含浓度为0.2％的拉喹莫德和相对于标准溶液A中拉喹莫德的工作浓度，浓度为0.1％的MCQCA。例如，使用下列过程。
将4.0mL用于含量分析的拉喹莫德钠标准溶液(溶液A)和1.0mLMCQCA储备标准溶液移取到100mL容量瓶中，并且用稀释剂B稀释到刻度(中间稀释液)。
将2.5mL该中间稀释液放入到50mL容量瓶中并且用稀释剂B补足到刻度。
总稀释因子对拉喹莫德标准品来说是1666.67，对MCQCA来说是2000。
拉喹莫德钠的浓度是约0.18μg/mL(0.2％)。
MCQCA的浓度是约0.09μg/mL(0.1％,QL水平)。
当标准溶液I在冰箱中储存时，可使用24小时。
3.分辨溶液配制
3.1混合溶液
使用稀释剂A作为溶剂配制含有以下潜在杂质标准品(标记物)的溶液。
混合溶液：
混合溶液可如下配制：
称取约3mg每个杂质标准品/标记物放入100mL容量瓶中。用稀释剂A溶解(超声处理法是可接受的)并稀释至刻度。
混合溶液中每种杂质浓度是约30μg/mL。
当混合溶液在约-20℃冷冻储存时，可使用达4个月。
为此目的，新配制的混合溶液应当分成等份，立即冷冻并储存在-20℃。融化后，该等份应当充分混合并且不能再冷冻。
3.2添加杂质的储备溶液
称取约3mgMCQEE(乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯)放入100mL容量瓶中，用稀释剂A溶解(超声处理法是可接受的)并稀释至刻度。这是MCQEE储备溶液。
当在约-20℃冷冻储存时，该溶液可使用达4个月。
为此目的，新配制的MCQEE储备液应当分成等份，立即冷冻并储存在-20℃。融化后，该等份应当充分混合并且不能再冷冻。
称取约3mgMEG-LAQ(拉喹莫德的葡甲胺加合物)放入100mL容量瓶中，用稀释剂A溶解(超声处理法是可接受的)并稀释至刻度。这是MEG-LAQ储备溶液。
当在冰箱(2℃-8℃)中储存时，该溶液可使用一周。
3.3分辨溶液
使用混合溶液，分别如下配制两种分辨溶液。
3.3.1分辨溶液1
将3mL拉喹莫德标准储备溶液(溶液S)，0.3mL混合溶液和0.3mLMCQEE储备溶液移取到10mL容量瓶中，并且用稀释剂B稀释至刻度。这是分辨溶液1。
在其中的拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。每个杂质的浓度是约0.9μg/mL(相对于拉喹莫德的工作浓度约1％)。
分辨溶液1用于分辨率测试(用于体系适应性)和五个已知杂质的保留时间(RT)/相对保留时间(RRT)的测定，五个杂质为MCQ、MCQCA、MCQME、MCQEE和5-HLAQ。
在冰箱(2℃-8℃)中储存时，分辨溶液1可使用9天。
说明：可使用按照实施例19的方法制备的分辨溶液，代替分辨溶液1。
3.3.2分辨溶液2
将3mL拉喹莫德标准储备溶液(溶液S)、0.3mL混合溶液和0.3mLMEG-LAQ储备溶液移取到10mL容量瓶中，用稀释剂B稀释到刻度。这是分辨溶液2。
在它之中的拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。每个杂质的浓度是约0.9μg/mL(相对于拉喹莫德的工作浓度约1％)。
分辨溶液2用于MEG-LAQ保留时间的测定。
在冰箱(2℃-8℃)中储存时，分辨溶液2可使用一周。
4.样品溶液配制
精确称取20个胶囊，把它们的内容物完全倒入研钵中。请注意必要时使用刮刀将胶囊的内容物完全倒入研钵中。称重空胶囊，计算胶囊内容物的平均重量。
在研钵中混合和研磨胶囊内容物，将粉末避光保存在紧紧密封的容器中。
一式两份精确称取相当于7个胶囊的粉末量放入到50mL容量瓶中。
加入稀释剂B达到2/3刻度，在200动作/分钟(mot/min)下摇动30分钟。用稀释剂B稀释至刻度。充分混合。使用前通过0.45μmGHPACRODISCGF过滤器或等同物过滤，弃去最初的0.5-1mL。
拉喹莫德(酸)的工作浓度是约84μg/mL。
说明：配制之后立即将样品溶液放置到冰箱或冷却到5℃的自动进样器中。在温度2℃-8℃下储存时，样品溶液可使用24小时。
5.过程
按照相关SOP's，进样分辨溶液、稀释剂B(空白)、用于含量和IDD测定的标准溶液和样品溶液。
测定样品和标准溶液的色谱图中拉喹莫德峰的保留时间(RT)和面积用于鉴定和含量分析。
测定样品溶液的色谱图中全部已知杂质和任何其它杂质的RT、相对保留时间(RRT)和峰面积用于计算杂质/降解产物的含量。
忽略赋形剂的早洗脱峰和体系峰(参见用于测定杂质/降解产物的色谱图)。例如，使用0和RRT0.15之间的积分抑制(大约2.5分钟)。
调整积分参数以拚除面积小于标准溶液1(用于测定杂质/降解产物)的进样中拉喹莫德峰的平均响应的10％的峰。
忽略样品进样中MEG-LAQ的峰(鉴定的下列分辨溶液2)。用不同的方法测试MEG-LAQ的含量。
6.体系适用性测试
6.1分辨率测试
典型的拉喹莫德峰的保留时间是15.5±2.0分钟。
拉喹莫德峰的拖尾因子(USP)应当不大于2.0。
全部成对峰的分辨因子应当是NLT2。
已知杂质/降解产物的峰的RRT应当如下：
杂质 RRT
MCQME 0.33–0.38
MCQ 0.49–0.58
MCQEE 0.56–0.65
MCQCA 0.71–0.85
5-HLAQ 1.2–1.4*
*5-HLAQ的保留时间应当不大于23分钟。
与邻近峰相比MEG-LAQ峰实际是变宽的。MEG-LAQ的保留时间是可变的，对色谱条件(pH、％乙腈、温度等)的微小改变非常敏感，因此应当使用分辨溶液2的色谱图中它的峰限定。典型地，它的RRT是约0.66。
6.2体系精度测试
根据相关SOP's评估用于含量和IDD测定的拉喹莫德标准品用以测试体系精度。
溶液1中的MCQCA用于测试体系灵敏度。标准溶液1(Std1)的六个进样的面积的RSD以及标准溶液1和标准溶液2(Std2)之间的差别应当是NMT20％。
6.3空白
进样稀释剂B以检测体系峰。
7.通过保留时间(RT)鉴定
样品色谱图中得到的主要峰的RT应当相当于标准溶液的进样中对于拉喹莫德峰来说，得到的主要峰的RT。
8.计算和报告
8.1含量计算
其中：0.94：拉喹莫德钠盐到拉喹莫德(酸)的换算因子。
8.2杂质/降解产物的计算和评估
8.2.1相对保留时间(RRT)的计算
8.2.2杂质/降解产物含量的计算
面积杂质:样品溶液中杂质/降解产物(已知或未知)峰的面积。
面积标准品：标准溶液I的色谱图中拉喹莫德峰的面积。
0.94:拉喹莫德钠盐到拉喹莫德(酸)的换算因子。
RRF:按照下列比率计算的杂质/降解产物的相对响应因子：拉喹莫德回归线的斜率/杂质回归线的斜率。
相对于拉喹莫德，相对响应因子的数值是：
杂质 MCQME MCQ MCQEE MCQCA 5-HLAQ
RRF 0.74 0.65 0.85 0.62 1.0
未知杂质/降解产物的RRF被认为是1.0。
8.2.3杂质/降解产物的评估和报告
MCQME、MCQ、MCQEE、5-HLAQ和未知杂质的定量水平(QL)是0.05％。MCQME、MCQ、MCQEE、5-HLAQ和未知杂质的检测水平(DL)是0.02％。
MCQCA的QL是0.1％。MCQCA的检测水平DL是0.03％。
在±5％实际相应保留时间内，使样品色谱图中的全部峰与体系适用性色谱图中的峰相关联。
报告如下：
*如果没有杂质被检测到，报告：任何其他<0.02％.
图48显示根据以上方法的分辨率测试(分辨溶液1)色谱图。
图48的体系适用性分离结果
图49显示根据以上方法的分辨率测试(分辨溶液2)色谱图。
图49的体系适用性分离结果
图50显示根据以上方法的稀释剂空白色谱图。
图51显示根据以上方法的用于含量测定的样品色谱图。
图52显示根据以上方法的用于测定杂质/降解产物的样品色谱图。
实施例22-测定拉喹莫德药物产品的样品中NEA、3-HLAQ和螺-LAQ的量的方法
由HPLC分析包含0.6mg拉喹莫德的拉喹莫德胶囊。使用下列HPLC方法测定NEA、3-HLAQ和螺-LAQ的量。
1.缩写
2.HPLC条件
全部配制应当避光。对液体配制来说，使用具有不透明盖子的琥珀色瓶。
仅仅使用玻璃巴斯德吸管。
配制完成之后标准品和样品溶液应当冷藏在2–8℃。
3.标准溶液配制
3.1NEA标准储备溶液
一式两份精确称取约18μL(约18mg)N-乙基苯胺(NEA)标准品放入到50mL容量瓶中。用乙腈稀释到刻度。
标准储备溶液的浓度是约360μg/mL。
在冰箱(2℃–8℃)中储存时，NEA标准储备溶液可使用三周。
3.2NEA标准原稀释液溶液
用乙腈稀释0.5mLNEA标准储备溶液到50mL。
标准基本稀释液溶液的浓度是约3.6μg/mL。
3.3NEA标准工作溶液
将0.5mLNEA标准原稀释液溶液移取到20mL容量瓶中。加入4mL稀释剂A并且用乙腈稀释到刻度。
NEA的浓度是约0.09μg/mL(约0.1％拉喹莫德工作浓度)。
在冰箱(2℃–8℃)中储存时，NEA工作标准溶液可使用一周。
4.分辨溶液配制
可使用实施例20的分辨溶液。
4.1用于分辨率测试的拉喹莫德储备溶液
精确称取约15mg拉喹莫德钠标准品放入到50mL容量瓶中。用乙腈:水[50:50(v/v)]稀释达到2/3刻度，在冷的超声波浴中超声处理2分钟并且用乙腈:水[50:50(v/v)]稀释到刻度。
拉喹莫德储备溶液的浓度是约300μg/mL。
在冰箱(2℃-8℃)中储存时，拉喹莫德储备溶液可使用一个月。
4.2用于分辨率测试的NEA储备溶液
精确称取约25μL(约25mg)N-乙基苯胺(NEA)标准品放入到50mL容量瓶中。用乙腈:水[50:50(v/v)]稀释。
NEA储备溶液的浓度是约500μg/mL。
如果储存在冰箱(2℃-8℃)中，NEA储备溶液可使用3周。
4.3用于分辨率测试的螺-LAQ储备溶液
称取约2.5mg螺-LAQ放入到50mL容量瓶中。用乙腈:水[95:5(v/v)]溶解并且稀释到刻度。
螺-LAQ储备溶液的浓度是约50μg/mL。
4.4用于分辨率测试的3-HLAQ储备溶液
称取约2.5mg3-HLAQ放入到50mL容量瓶中。用乙腈:水[95:5(v/v)]溶解并且稀释到刻度。
3-HLAQ储备溶液的浓度是约50μg/mL。
4.5分辨溶液
将下列等份移取到50mL容量瓶中，用流动相溶液B[乙腈:缓冲液pH7.0(65:35v/v)]稀释到刻度：
用于分辨率测试的15mL拉喹莫德储备溶液，
用于分辨率测试的1.0mL螺-LAQ储备溶液，
用于分辨率测试的1.0mL3-HLAQ储备溶液，
用于分辨率测试的0.1mLNEA储备溶液。
拉喹莫德钠的浓度是约90μg/mL。
NEA、螺-LAQ和3-HLAQ的浓度是约1μg/mL(相对于拉喹莫德工作浓度约1％)。
分辨溶液仅仅用于测定拉喹莫德和已知潜在杂质/降解产物的保留时间，并且当在-20℃储存时可使用38天。为此目的，新配制的分辨溶液应当分成等份，立即储存在-20℃。融化后，溶液等份应当剧烈混合并且不能再冷冻。
当储存在冰箱(2℃-8℃)中时，分辨溶液可使用4天。
5.样品溶液配制
精确称取至少10个胶囊，把内容物完全倒入研钵中。称重空胶囊，计算胶囊内容物的平均重量。
在研钵中研磨样品，将粉末避光保存在紧紧密封的容器中。
一式两份精确称取相当于3个拉喹莫德胶囊的粉末量放入到20mL容量瓶中。
加入4到10mL稀释剂A，在200运动/分钟下摇动15分钟直至溶解。用乙腈稀释至刻度。充分混合。使用前通过0.45μmGHPAcrodiscGF过滤器或等同物过滤，弃去最初的2mL。
拉喹莫德的浓度是约90μg/mL。
说明：配制完成之后立即将样品溶液放置到冰箱或冷却到5℃的自动进样器中。配制完成之后应当在不迟于24小时内分析样品。
6.过程
按照相关SOP's，进样分辨溶液、空白、标准和样品溶液用于杂质/降解产物测定。
测定标准工作溶液中NEA的峰面积。
测定分辨和样品溶液的色谱图中拉喹莫德峰的保留时间(RT)。
测定样品溶液的色谱图中全部已知杂质和未知杂质的RT、相对于拉喹莫德峰的相对保留时间(RRT)和峰面积。
使用拉喹莫德峰的0和1.6×RT(体系峰的RT)之间的积分抑制。
调整积分参数拚除面积小于NEA标准品面积的20％的峰。
7.体系适用性测试
7.1分辨率测试
拉喹莫德的典型保留时间是2.2±0.5分钟。
NEA的典型保留时间是12.2±1.5分钟。
特定杂质/降解产物峰相对于NEA的RRT应当如下：
杂质/降解产物 相对于NEA的RRT
3-HLAQ 0.85–0.95
螺-LAQ 1.05–1.20
两个已知杂质/降解产物峰与NEA峰都应当达到NLT2的分辨因子。
7.2体系精度测试
为了测试体系精度，根据相关SOP评估标准品用于杂质/降解产物测定。
7.3空白
进样空白以检测体系峰。
8评估、计算和报告
8.1杂质/降解产物的RRT
8.2计算杂质/降解产物的含量
如下计算拉喹莫德胶囊中％IDD：
面积杂质:样品溶液中NEA、3-HLAQ或未知杂质/降解产物峰的面积。
参见8.3中的说明。
面积标准NEA：标准工作溶液中NEA的面积。
RRF:按照下列比率计算的杂质的相对响应因子：
NEA回归线的斜率/杂质回归线的斜率。
说明：对未知杂质/降解产物来说，使用拉喹莫德回归线的斜率。
相对于NEA，相对响应因子的数值是：
杂质 NEA 3-HLAQ 未知
RRF 1.0 1.39 1.15
8.4评估和报告
相对于拉喹莫德工作浓度，NEA、3-HLAQ和任何其他未知杂质/降解产物的定量极限(QL)是0.1％。
相对于拉喹莫德工作浓度，NEA、3-HLAQ和任何其他未知杂质/降解产物的检测极限(DL)是0.03％。
报告杂质/降解产物的含量如下：
*在±5％实际保留时间内，使样品色谱图中的NEA和3-HLAQ峰与体系适用性色谱图中的峰相关联。
**如果没有未知杂质出现，报告：“任何其他<0.03％”
说明：在螺-LAQ的RT(体系适用性测试中±5％实际保留时间)处洗脱出的峰报告为“任何其他杂质”峰。
图53显示根据以上方法的分辨率测试色谱图。
图53的体系适用性分离结果
图54显示根据以上方法的空白(稀释剂)色谱图。
图54的峰结果
名称 积分类型 RT 高度(μV) 面积 ％面积
1 体系峰 BB 3.508 116 858 52.53
2 体系峰 BB 5.740 41 775 47.47
图55显示根据以上方法的样品色谱图。
图55的峰结果
名称 积分类型 RT 高度(μV) 面积 ％面积
1 拉喹莫德 BB 2.1459 923247 4717424 99.97
2 体系峰 BB 3.499 71 666 0.01
3 体系峰 BB 5.736 38 642 0.01
实施例23测定拉喹莫德药物产品的样品中MEG-LAQ和BH-3-HLAQ的量的方法
参数 实施例编号 方法类型 定量极限 检测极限
MEG-LAQ 实施例23 RP-HPLC 0.2％ 0.1％
BH-3-HLAQ 实施例23 RP-HPLC 0.05％ 0.02％
通过HPLC分析包含0.6mg拉喹莫德的拉喹莫德胶囊。使用下列HPLC方法测定MEG-LAQ和BH-3-HLAQ的量。
1.色谱体系
为达到体系适用性要求，可改变流动相参数、流速和柱子温度。可在范围：55％-62％(v/v)溶剂A和45％-38％(v/v)溶剂B内改变流动相参数。全部溶剂必须是HPLC级别或等价物。全部配制应当冷藏在2–8℃保存并且避光。使用具有不透明盖子的琥珀色瓶(低光化玻璃器皿)。避免加热超声波浴。
2.缩写清单
3.标准溶液配制
3.1BH-3-HLAQ储备溶液
一式两份配制。精确称取约11.5mgBH-3-HLAQ放入到50mL容量瓶中。超声处理至溶解并且用稀释剂1稀释到刻度。
BH-3-HLAQ储备溶液的浓度是约230μg/mL。
如果冷藏储存(2℃–8℃)，BH-3-HLAQ储备溶液可使用1周。
3.2MEG-LAQ的储备溶液
一式两份配制。精确称取约11.5mgMEG-LAQ放入到50mL容量瓶中。超声处理至溶解并且用稀释剂1稀释到刻度。MEG-LAQ储备溶液的浓度是约230μg/mL。
如果冷藏储存(2℃–8℃)，MEG-LAQ储备溶液可使用1周。
说明：由于MEG-LAQ的高吸水性，它在空气中的暴露应当降到最小：称重之后立即用标准物(standard)封闭小瓶；推荐在可控低湿度条件下称重MEG-LAQ。
3.3BH-3-HLAQ的原稀释溶液
将2.0mLBH-3-HLAQ储备溶液移取到50mL容量瓶中。用稀释剂2稀释到刻度。BH-3-HLAQ的浓度是约9.2μg/mL。
3.4MEG-LAQ的原稀释溶液
将2.0mLMEG-LAQ储备溶液移取到50mL容量瓶中。用稀释剂2稀释到刻度。MEG-LAQ的浓度是约9.2μg/mL。
3.5标准溶液
将1.0mLBH-3-HLAQ原稀释溶液和2.5mLMEGLAQ原稀释溶液移取到50mL容量瓶中并且用稀释剂2稀释到刻度。
在该标准溶液中总稀释因子是：BH-3-HLAQ为1250，MEG-LAQ为500(来自储备溶液)。
BH-3-HLAQ的浓度是约0.18μg/mL(0.2％拉喹莫德工作浓度)和，MEG-LAQ是约0.45μg/mL(0.5％拉喹莫德工作浓度)。
如果冷藏储存(2℃–8℃)，标准溶液可使用1周。
3.6QL溶液
一次配制。将0.5mLBH-3-HLAQ原稀释溶液和2.0mLMEGLAQ原稀释溶液(每个复制份中的一份)移取到100mL容量瓶中并且用稀释剂2稀释到刻度。
BH-3-HLAQ的浓度是约0.045μg/mL(0.05％拉喹莫德工作浓度)，以及MEG-LAQ的浓度是约0.18μg/mL(0.2％拉喹莫德工作浓度)。
4.配制分辨溶液
4.1拉喹莫德储备溶液
一次配制。称取约15mg拉喹莫德钠标准品放入到50mL容量瓶中。用稀释剂1稀释达到2/3刻度，在超声波浴中超声处理2分钟并且用稀释剂1稀释到刻度。拉喹莫德储备溶液的浓度是约300μg/mL拉喹莫德钠。
如果冷藏储存(2℃–8℃)，拉喹莫德储备溶液可使用1个月。
4.2分辨溶液
将3mL拉喹莫德储备溶液和1mL每个原稀释溶液(每个复制份中的一份)移取到10mL容量瓶中。用稀释剂2稀释到刻度。充分混合。
分辨溶液中的拉喹莫德钠浓度是约90μg/mL(如果表达为拉喹莫德游离酸约85μg/mL)。每个杂质的浓度是约0.9μg/mL(相对于拉喹莫德的工作浓度约1％)。
如果冷藏储存(2℃–8℃)，分辨溶液可使用一周。
5.样品溶液的配制
精确称重20个胶囊，把它们的内容物完全倒入研钵中。请注意必要时使用刮刀将胶囊的内容物完全倒入研钵中。称重空胶囊。计算胶囊内容物的平均重量。
在研钵中混合和研磨胶囊内容物，将粉末避光保存在紧紧密封的容器中。
一式两份精确称取相当于7个胶囊的粉末量，每个放入到分开的50mL容量瓶中。
加入稀释剂2达到2/3刻度，在200动作/分钟下摇动30分钟。用稀释剂2稀释至刻度。充分混合。使用前通过0.45μmACRODISCGHPGF过滤器或等同物过滤，弃去前0.5-1mL。
配制完成之后立即将样品溶液放置到冰箱或冷却到5℃的自动进样器中。
拉喹莫德(酸)的工作浓度是约84μg/mL。
在2℃-8℃储存时，样品溶液可使用24小时。
6.体系适用性测试
6.1分辨率测试
一次进样分辨溶液。
拉喹莫德峰*的典型保留时间是在12–18分钟范围内。
分辨溶液进样中峰洗脱顺序和相对于拉喹莫德峰，杂质峰的典型RRT如下：
峰 MEG-LAQ BH-3-HLAQ 拉喹莫德
典型RRT* 0.55–0.75 0.80–0.95 1.0
*仅供参考，对于各种各样的柱子或由于实际流动相成分(溶剂A/溶剂B比例)和pH的变化，可能不同。
可接受的标准(Acceptancecriteria):
●MEG-LAQ和BH-3-HLAQ峰的拖尾因子(USP)应当在0.8–1.5之内。
●全部三个峰(MEG-LAQ、BH-3-HLAQ和拉喹莫德)之间的分辨因子应当不小于1.5。
可调整流速、温度和流动相成分(溶剂A和溶剂B比例)获得必需的体系适用性参数
6.2空白进样
进样空白(稀释剂2)两次以检测体系峰。忽略体系峰。
6.3灵敏度测试
从QL溶液的6次重复进样评估BH-3-HLAQ和MEG-LAQ峰的面积。
6次重复中每个峰的RSD应当不大于20％。
6.4体系精度测试
为了测试体系精度，根据相关SOP's评估标准品进样的色谱图中BH-3-HLAQ和MEG-LAQ峰的面积。
7.过程
7.1进样顺序
根据相关SOP's进样分辨溶液、空白–两次、QL溶液(6次重复)、标准溶液和样品溶液。
7.2色谱图的处理
忽略标准品和样品溶液进样中除了MEG-LAQ和BH-3-HLAQ之外的全部峰。
测定样品溶液色谱图中MEG-LAQ和BH-3-HLAQ峰的保留时间(RT)和面积用于鉴定和定量。
调整积分参数以拚除具有面积小于首次配制的标准溶液的六次连续进样的色谱图中BH-3-HLAQ峰的平均响应的10％的峰。
相对于拉喹莫德工作浓度，这相当于0.02％(BH-3-HLAQ的DL)。
8.计算和报告
8.1计算
相对于标准溶液色谱图中的相应峰对每个杂质(MEG-LAQ和BH-3-HLAQ)进行定量。
使用下列方程式计算MEG-LAQ和BH-3-HLAQ含量：
面积样品:样品溶液的色谱图中MEG-LAQ或BH-3-HLAQ峰的面积
面积标准品：标准溶液的色谱图中MEG-LAQ峰(平均)或BH-3-HLAQ峰(平均)各自的面积
表示要求量：0.6mg
8.2评估和报告
BH-3-HLAQ的QL(定量极限)是0.05％；MEG-LAQ的QL是0.2％。
BH-3-HLAQ的DL(检测极限)是0.02％；MEG-LAQ的DL是0.1％。
对等于或在QL之上的数值，报告计算结果。
对在QL之下但在DL之上的数值，对BH-3-HLAQ来说报告：“小于0.05％(QL)”，对MEG-LAQ来说，报告：“小于0.2％(QL)”。
对在DL之下的数值，对BH-3-HLAQ来说报告：“小于0.02％(DL)”，对MEG-LAQ来说报告：“小于0.1％(DL)”。图56显示根据上述方法的分辨溶液的典型色谱图。
图56的峰结果
图57显示根据上述方法的空白(稀释剂2)的色谱图。
图57的峰结果
名称 RT 面积 ％面积 积分类型
1 体系峰 2.944 12.128 100.00 BB
图58显示根据上述方法的QL溶液的色谱图。
图58的峰结果
图59显示根据上述方法的标准溶液色谱图。
图59的峰结果
名称 RT 积分类型 高度(μV) 面积 ％面积
1 乙二醇-LAQ 10.177 BB 760 45319 54.89
2 BH-3HLAQ 15.293 BB 814 25059 35.11
图60显示根据上述方法的典型样品色谱图。
图60的峰结果
名称 RT 积分类型 面积 ％面积
1 乙二醇-LAQ 10.503 BB 20741 68.17
2 BH-3HLAQ 13.952 BB 9683 31.83
实施例24–拉喹莫德钠药物物质和中间体中潜在基因毒性杂质的计算毒理学评估
使用DEREK预测软件(DEREKNexus,version2.0.0,2011i,LHASALtd,Leeds,UK)评估MCQ和MCQME的基因毒性潜能。计算毒理学评估总结在表47中。
表47.MCQ和MCQME的计算毒理学评估
有毒结构的可能性水平的DEREK定义如下：
似乎可能的：证据分量支持命题。
可疑的：具有相等的证据分量支持和反对命题。
实施例25–拉喹莫德钠药物物质的分批分析
在各种制造设备上制造若干批次的拉喹莫德钠药物物质，并随后分析。在制备和分析期间，提供样品溶液足够的光保护。
所有批次的药物物质在指标之内，如实施例17所提供的。
表48和表49显示拉喹莫德钠药物物质批次的批次分析。表50显示拉喹莫德酸的批次分析。
表48.拉喹莫德钠药物物质批次1-12的分析
表48中列举的杂质的QL和DL数值:
定量极限 检测极限
MCQ 0.05％ 0.02％
MCQCA 0.05％1 0.02％
MCQME 0.05％ 0.02％
5-HLAQ 0.05％ 0.02％
MCQEE 0.05％ 0.02％
LAQ 0.2％ 0.03％
NEA 0.06％ 0.02％
DELAQ 不适应(极限测试) 0.03％
DMM 不适应(极限测试) 0.03％
DMS 不适应(极限测试) 0.5ppm
丙酮 250ppm 25ppm
二氧六环 20ppm 10ppm
乙醇 25ppm 5ppm
正庚烷 250ppm 10ppm
甲醇 150ppm 30ppm
正辛烷 100ppm 10ppm
DMF 190ppm 50ppm
1报告极限0.10％.
表49.添加拉喹莫德钠药物物质批次13-18的分析
表50.拉喹莫德(酸形式)药物物质批次(批次19-22)的分析
4方法偏差(Deviationfrommethod)。所用不同的流动相和波长
实施例26在释放和在长期和加速储存拉喹莫德药物物质之后观察杂质
在释放和在长期和加速储存之后观察拉喹莫德钠批次中观察杂质。
在拉喹莫德钠批次中观察到的杂质水平范围(包括初期稳定性和验证批次)被总结在表51中。
表51.在释放和在长期和加速储存之后在拉喹莫德药物物质批次中观察到的杂质水平范围
参数 现行指标 观察到的杂质水平范围
MCQ NMT 0.15％ LT 0.02-LT 0.05％
MCQCA NMT 0.15％ LT 0.03-LT 0.05％
MCQME NMT 0.12％ LT 0.02-LT 0.05％
5-HLAQ NMT 0.10％ LT 0.02-LT 0.05％
MCQEE NMT 0.10％ LT 0.02-LT 0.05％
LAQ NMT 1.0％ LT 0.025-LT 0.2％
NEA NMT 0.10％ LT 0.02-LT 0.05％
DELAQ NMT 0.1％ LT 0.05-LT 0.1％
DMM NMT 0.1％ LT 0.05-LT 0.1％
DMS NMT 1ppm LT 1ppm
乙醇 NMT 5000ppm LT 5-LT 25ppm
正庚烷 NMT 5000ppm LT 10-LT 250ppm
甲醇 NMT 3000ppm LT 30-LT 150ppm
二氧六环 NMT 380ppm LT 10ppm
DMF NMT 880ppm LT 40-93ppm
丙酮 NMT 5000ppm LT 250ppm
正辛烷 NMT 2000ppm LT 10-LT 20ppm
重金属 NMT 20ppm NMT 20ppm
游离氯化物 NMT 0.1％ LT 0.1％
实施例27拉喹莫德钠药物产品的批次分析
在各种制造设备上制造若干批次的拉喹莫德钠药物产品，并随后分析。在制造和分析期间，给样品溶液的提供足够的光保护。
全部批次药物物质都在指标之内。
释放数据的评估显示了全部批次在它们释放的时候实际上在指标之内。此外，能够看出全部建议商业化的制造批次的产品，例如拉喹莫德0.6mg胶囊，已经表现出符合建议的产业指标。对全部测量参数来说，结果发现经过一段时间批次到批次的一致性。批次分析结果表明了所有批次的质量没有明显地彼此不同并且在不同的制造地点的制备提供了相似质量的物质。
表52、表53、表54、表55、表55、表56和表57涉及拉喹莫德钠药物产品批次的批次分析。
表52.对拉喹莫德0.6mg胶囊批次23-31的批次分析
4使用测定MEG-LAQ的以前方法进行分析。
5在释放这些批次之后引入对BH-3-HLAQ的测试。在25℃/60％RH最后有效稳定性时间点得到BH-3-HLAQ的列出结果(对批次23和27-30来说18个月，对批次24-26来说9个月，对批次31来说3个月)用于所有包装配置，有一个例外(参见脚注6)。
6在Alu/Alu起泡剂中得到批次27的0.06％的结果。
当前的QL和DL数值(对于表52来说):
定量极限 检测极限
MCQ和MCQCA的总数 0.1％ 0.03％
5-HLAQ 0.05％ 0.02％
NEA1 0.1％ 0.03％
3-HLAQ1 0.1％ 0.03％
MEG-LAQ 0.2％ 0.1％
BH-3-HLAQ 0.05％ 0.02％
1从商业指标中删掉NEA和3-HLAQ，因为它们在批次释放之后和在全部测试的储存条件下迄今完成的稳定性测试期间从来没有被观察到。使用列出的方法监测初期稳定性批次中的这些杂质直到稳定性试验结束。
表53.拉喹莫德0.6mg胶囊(批次32-38)的批次分析
6在释放该批次之后在指标中引入BH-3-HLAQ和水含量的测定。
表53的当前QL和DL数值:
1从商业指标中删掉NEA和3-HLAQ，因为它们在释放之后和在全部测试的储存条件下迄今完成的稳定性测试期间从来没有被观察到。使用列出的方法监测初期稳定批次中这些杂质直到稳定性试验结束。
表54.拉喹莫德胶囊0.3mg(批次39-42)的批次分析
表55.拉喹莫德胶囊0.3mg(批次43)的批次分析
表56.拉喹莫德药片0.05mg、0.25mg和0.3mg(批次44-49)的批次分析
4报告添加的特定杂质：0.03％ofMCQME.
表57拉喹莫德口服溶液1mg/mL(批次50)的批次分析
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Claims (95)

1.结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，其中
a.所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b.所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c.存在于所述混合物中重金属的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm重金属；
d.存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
e.存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
f.存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
g.存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
h.存在于所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；或
i.存在于所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
2.根据权利要求1所述的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径。
3.根据权利要求1或2所述的混合物，其中拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有5微米或更小的粒径，其中：
a.所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；或
b.存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％。
4.结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有小于40微米的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有小于15微米的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有小于5微米的粒径，其中：
a.所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b.所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c.存在于所述混合物中重金属的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm重金属；
d.存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
e.存在于所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
f.存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
g.存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
h.存在于所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；或
i.存在于所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的混合物，所述混合物在单个批次中被制备并且包括2.5kg或更多的拉喹莫德钠。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的混合物，其中基于所述混合物的未研磨的样品测定拉喹莫德钠颗粒或其中基于所述混合物的研磨的样品测定拉喹莫德钠颗粒的粒径和体积总量。
7.根据权利要求1-6任一项所述的混合物，所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度，和/或具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度。
8.根据权利要求1-7任一项所述的混合物，其中：
a.所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm或小于2ppm；
b.所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm或小于25ppm；
c.所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于25ppm；
d.所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm或小于0.6ppm；和/或
e.所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm或小于4ppm；
9.根据权利要求1-8中任一项所述的混合物，其中，所述混合物中重金属的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的混合物，其中，所述混合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的混合物，其中：
a.所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
b.所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
c.所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
d.存在于所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；和/或
e.所述混合物中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
12.根据权利要求1-11任一项所述的混合物，其中所述混合物中非极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％。
13.根据权利要求1-12任一项所述的混合物，其中：
a.所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
b.所述混合物中N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；和/或
c.所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(DELAQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的混合物，其中：
a.所述混合物中拉喹莫德酸的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
b.所述混合物中丙二酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
c.所述混合物中丙二酸二乙酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
d.所述混合物中硫酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于1ppm；
e.所述混合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，由K.F.库伦滴定法测定，不高于1.5％；和/或
f.钠的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的混合物，其中：
a.所述混合物中乙醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
b.所述混合物中正庚烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
c.所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
d.所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm；
e.所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
f.所述混合物中甲醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于3000ppm；
g.所述混合物中丙酮的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
h.所述混合物中二氧六环的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
i.所述混合物中二甲基甲酰胺的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
16.药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1-15任一项所述的混合物和药学上可接受的载体。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中：
a.所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
b.所述药物组合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于2.00％；
c.所述药物组合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
d.所述药物组合物中5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
e.所述药物组合物中非极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；和/或
f.所述药物组合物中N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(甲基(2,3,4,5,6-五羟己基)氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(MEG-LAQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％。
18.根据权利要求16或17所述的药物组合物，其中：
a.所述药物组合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于1.50％；
b.所述药物组合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于0.80％；和/或
c.所述药物组合物包括钠的量，相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％。
19.根据权利要求16-18任一项所述的药物组合物，其中：
a.所述药物组合物中乙醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
b.所述药物组合物中正庚烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
c.所述药物组合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
d.所述药物组合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm；
e.所述药物组合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
f.所述药物组合物中甲醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
g.所述药物组合物中丙酮的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm；
h.所述药物组合物中二氧六环的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
i.所述药物组合物中二甲基甲酰胺的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
20.一种治疗患有一种形式的多发性硬化、狼疮性肾炎、狼疮关节炎、风湿性关节炎、BDNF相关的紊乱、克隆氏病、GABA相关的紊乱、大麻素受体I型(CB1)介导的紊乱或眼部炎症性疾病的个体或缓解上述疾病的症状的方法，所述方法包括向所述个体给药根据权利要求1-15任一项所述的混合物或根据权利要求16-20任一项所述的药物组合物，从而治疗所述个体或缓解所述个体的症状。
21.根据权利要求1-15任一项所述的混合物或根据权利要求16-19任一项所述的药物组合物在治疗一种形式的多发性硬化、狼疮性肾炎、狼疮关节炎、风湿性关节炎、BDNF相关的紊乱、克隆氏病、GABA相关的紊乱、大麻素受体I型(CB1)介导的紊乱或眼部炎症性疾病或缓解上述疾病的症状中的用途。
22.根据权利要求1-15任一项所述的混合物或根据权利要求16-19任一项所述的药物组合物在制备用于治疗一种形式的多发性硬化、GABA相关的紊乱、大麻素受体I型(CB1)介导的紊乱、狼疮性肾炎、狼疮关节炎、风湿性关节炎、BDNF相关的紊乱、克隆氏病或眼部炎症性疾病或缓解上述疾病的症状的药物中的用途。
23.一种重结晶拉喹莫德钠的方法，所述方法包括：
a.在水中溶解一定量的拉喹莫德钠以形成水溶液；
b.浓缩所述水溶液以形成包括约1.7-1.8ml水/克拉喹莫德钠的浓缩溶液；
c.添加丙酮到步骤b)的浓缩溶液中；以及
d.分离重结晶的拉喹莫德钠。
24.根据权利要求23所述的方法，其中：
a.步骤a)中拉喹莫德钠的量为2.5kg或更多；
b.执行步骤a)，其中10-12ml水/克拉喹莫德钠，优选地，执行步骤a)，其中约11ml水/克拉喹莫德钠；和/或
c.通过加热水溶液到58-75℃的温度执行步骤a)，或其中通过加热水溶液到60-73℃的温度执行步骤a)。
25.根据权利要求23或24所述的方法，其中结晶在步骤a)之后并且在步骤c)之前发生，优选地，其中结晶：
a.通过在浓缩步骤b)期间或之后快速搅拌被引发；
b.通过在浓缩步骤b)期间或之后添加晶种被引发；或
c.在没有添加晶种的情况下发生。
26.根据权利要求23-25任一项所述的方法，其中：
a.以1.7-1.8ml水/克拉喹莫德钠的浓度，在适合引发结晶的条件下，执行步骤b)；和/或
b.在28-45℃或30-40℃下执行步骤b)。
27.根据权利要求23-26任一项所述的方法，其中：
a.执行步骤c)，其中浓缩溶液在40-55℃或45-50℃；
b.执行步骤c)，其中6-12ml丙酮/克拉喹莫德钠，优选地，执行步骤c)，其中约10ml丙酮/克拉喹莫德钠；
c.在1-4小时或1.2-2.5小时内执行步骤c)；和/或
d.在步骤c)之后，冷却溶液到不低于-14℃并且不高于6℃的温度，或其中在步骤c)之后，冷却溶液到不低于-4℃并且不高于4℃的温度。
28.根据权利要求23-27任一项所述的方法，其中在3-5小时或3.5-4.5小时内冷却溶液。
29.根据权利要求23-28任一项所述的方法，其中
a.步骤d)进一步包括用步骤a)中采用的1-4ml丙酮/克粗拉喹莫德钠洗涤重结晶的拉喹莫德钠，优选地，步骤d)进一步包括用步骤a)中采用的约3ml丙酮/克粗拉喹莫德钠洗涤重结晶的拉喹莫德钠；
b.步骤d)进一步包括在30-40℃不高于50mmHg的真空下干燥重结晶的拉喹莫德钠不少于1小时；和/或
c.步骤d)中分离的重结晶的拉喹莫德钠是结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，该颗粒具有粒度分布使得(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径，(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有小于5微米或更小的粒径。
30.由权利要求23-29中任一项制备的结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物。
31.根据权利要求30所述的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，以及(iii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的10％或更多具有5微米或更小的粒径。
32.根据权利要求30或31所述的混合物，其中：
a.所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b.所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c.所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm；
d.所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm；
e.所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm；
f.所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm；
g.所述混合物中重金属的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
h.所述混合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
i.所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
j.所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
k.所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
l.所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
m.所述混合物中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
n.所述混合物中非极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
o.所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
p.所述混合物中拉喹莫德酸的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
q.所述混合物中丙二酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
r.所述混合物中丙二酸二乙酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
s.所述混合物中硫酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于1ppm；
t.所述混合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，按重量计，不高于1.5％；
u.所述混合物包括钠的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％。
v.所述混合物中乙醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
w.所述混合物中正庚烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
x.所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
y.所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm；
z.所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
aa.所述混合物中甲醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于3000ppm；
bb.所述混合物中丙酮的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
cc.所述混合物中二氧六环的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
dd.所述混合物中二甲基甲酰胺的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
33.根据权利要求30或31所述的混合物，其中：
a.所述混合物具有0.2g/ml到0.4g/ml的堆积密度；
b.所述混合物具有0.40g/ml到0.7g/ml的轻叩密度；
c.所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm；
d.所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm；
e.所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm；
f.所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm；
g.所述混合物中重金属的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
h.所述混合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
i.所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
j.所述混合物中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.15％；
k.所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.12％；
l.所述混合物中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
m.所述混合物中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
n.所述混合物中非极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
o.所述混合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
p.所述混合物中拉喹莫德酸的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
q.所述混合物中丙二酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
r.所述混合物中丙二酸二乙酯的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.10％；
s.所述混合物中硫酸二甲酯的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于1ppm；
t.所述混合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，按重量计，不高于1.5％；
u.所述混合物包括钠的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％；
v.所述混合物中乙醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
w.所述混合物中正庚烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
x.所述混合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm、200ppm或20ppm；
y.所述混合物中甲醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于3000ppm；
z.所述混合物中丙酮的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
aa.所述混合物中二氧六环的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
bb.所述混合物中二甲基甲酰胺的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
34.药物组合物，所述药物组合物包括根据权利要求30-33任一项所述的混合物和药学上可接受的载体。
35.根据权利要求34所述的药物组合物，其中：
a.所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
b.所述药物组合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于2.00％；
c.所述药物组合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
d.所述药物组合物中非极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
e.所述药物组合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于0.80％；
f.所述药物组合物包括钠的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％；
g.所述药物组合物中乙醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
h.所述药物组合物中正庚烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
i.所述药物组合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm；
j.所述药物组合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于200ppm；
k.所述药物组合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于20ppm；
l.所述药物组合物中甲醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
m.所述药物组合物中丙酮的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm；
n.所述药物组合物中二氧六环的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
o.所述药物组合物中二甲基甲酰胺的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
36.根据权利要求34所述的药物组合物，其中：
a.所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
b.所述药物组合物中极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于2.00％；
c.所述药物组合物中N-乙基苯胺(NEA)的量相对于拉喹莫德的量，由HPLC测定，不高于0.50％；
d.所述药物组合物中非极性杂质的总量相对于拉喹莫德钠的量，由HPLC测定，不高于1.00％；
e.所述药物组合物中水的量相对于拉喹莫德钠的量，由K.F.库伦滴定法测定，不高于0.80％；
f.所述药物组合物包括钠的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，从5.8％到6.4％；
g.所述药物组合物中乙醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
h.所述药物组合物中正庚烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于5000ppm；
i.所述药物组合物中正辛烷的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于2000ppm、200ppm、或20ppm；所述药物组合物中甲醇的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；
j.所述药物组合物中丙酮的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm；
k.所述药物组合物中二氧六环的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于380ppm；以及
l.所述药物组合物中二甲基甲酰胺的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，不高于880ppm。
37.结晶的拉喹莫德钠颗粒的混合物，其中(i)拉喹莫德钠颗粒体积总量的90％或更多具有40微米或更小的粒径或(ii)拉喹莫德钠颗粒体积总量的50％或更多具有15微米或更小的粒径，其中
a.所述混合物中铝的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于5ppm；
b.所述混合物中钙的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于60ppm；
c.所述混合物中铜的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于1ppm；
d.所述混合物中锌的量相对于拉喹莫德钠的量，按重量计，小于7ppm。
38.药物组合物，所述药物组合物包括权利要求37所述的混合物和药学上可接受的载体。
39.经分离的化合物，所述化合物具有下述结构：
或其盐。
40.组合物，所述组合物包括具有下述结构的化合物：
或其盐，其中所述组合物不含拉喹莫德或其盐。
41.药物组合物，所述药物组合物包括一定量的拉喹莫德和2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种，其中
a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或
c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或
d)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或
e)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中，或
f)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于10％的量存在于所述药物组合物中。
42.根据权利要求41所述的药物组合物，其中
a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或
e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
43.根据权利要求42所述的药物组合物，其中，甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.12％的量存在于所述药物组合物中，和/或其中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
44.根据权利要求41-43任一项所述的药物组合物，其中
a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或
c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.06％的量存在于所述药物组合物中，或
e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
45.根据权利要求44所述的药物组合物，其中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
46.根据权利要求44或45所述的药物组合物，其中
a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.03％的量存在于所述药物组合物中，或
c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或
d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或
e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中。
47.根据权利要求46所述的药物组合物，其中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中。
48.根据权利要求42所述的药物组合物，其中
a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或
e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
49.根据权利要求48所述的药物组合物，其中
a.甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.12％的量存在于所述药物组合物中，或其中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中，和/或
b.5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％的量存在于所述药物组合物中。
50.根据权利要求48或49所述的药物组合物，其中
a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据基于HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％或大于0.10％并且不高于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且小于0.15％的量存在于所述药物组合物中，或
d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.06％并且不高于0.10％的量存在于所述药物组合物中，或
e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且不高于0.10％的量存在于所述药物组合物中。
51.根据权利要求50所述的药物组合物，其中甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.12％的量存在于所述药物组合物中，或根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
52.根据权利要求48或49所述的药物组合物，其中
a)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％或大于0.03％并且小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或
c)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.06％的量存在于所述药物组合物中，或
e)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
53.根据权利要求52所述的药物组合物，其中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
54.根据权利要求41所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包括至少一种药学上可接受的载体。
55.根据权利要求54所述的药物组合物，其中
a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于1.0％的量存在于所述药物组合物中，或
b)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或
c)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.5％。
56.根据权利要求55所述的药物组合物，其中N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
57.根据权利要求55或56所述的药物组合物，其中
a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或
d)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或
e)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，小于0.1％。
58.根据权利要求57所述的药物组合物，其中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
59.根据权利要求57或58所述的药物组合物，其中
a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或
c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.03％的量存在于所述药物组合物中，或
d)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中，或
e)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.03％的量存在于所述药物组合物中，或
f)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中。
g)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，小于0.03％。
60.根据权利要求59所述的药物组合物，其中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.02％的量存在于所述药物组合物中。
61.根据权利要求54所述的药物组合物，其中
a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且不高于1.0％的量存在于所述药物组合物中，或
b)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％并且不高于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或
c)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，大于0.03％并且不高于0.5％。
62.根据权利要求61所述的药物组合物，其中N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以不高于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
63.根据权利要求54所述的药物组合物，其中
a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.05％并且不高于1.0％的量存在于所述药物组合物中，或
b)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.1％并且不高于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或
c)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，大于0.1％并且不高于0.5％。
64.根据权利要求54所述的药物组合物，其中
a)2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
b)5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
c)5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.5％的量存在于所述药物组合物中，或
d)甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中，或
e)N-乙基苯胺(NEA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％并且小于0.1％的量存在于所述药物组合物中，或
f)乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.02％并且小于0.05％的量存在于所述药物组合物中。
g)存在于所述药物组合物中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合量，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，大于0.03％并且小于0.1％。
65.根据权利要求64所述的药物组合物，其中5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以大于0.03％的量存在于所述药物组合物中，或根据HPLC方法测定，相对于拉喹莫德的浓度，以小于0.1％的量存在于所述药物组合物中。
66.根据权利要求41-65任一项所述的药物组合物，所述药物组合物包括拉喹莫德钠盐。
67.根据权利要求54-66任一项所述的药物组合物，所述药物组合物为口服单位剂型或呈胶囊、片剂或液体悬浮液形式。
68.根据权利要求67所述的药物组合物，其中所述口服单位剂型包括高于0.3mg拉喹莫德、高于0.5mg拉喹莫德或高于0.6mg拉喹莫德。
69.一种制备2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)的方法，所述方法包括下列步骤：
a)添加氢氧化钠溶液到5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺的水悬浮液；
b)搅拌步骤a)的混合物，然后添加盐酸溶液；
c)用乙酸乙酯萃取水溶液；
d)用盐水洗涤有机相；
e)用硫酸钠干燥有机相；
f)过滤悬浮液；
g)蒸发滤液；
h)通过从异丙醇中结晶纯化残留物；
i)冷却悬浮液，然后过滤并且用异丙醇洗涤，以及
j)获得并干燥最终的白色固体。
70.2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，其由权利要求69所述的方法制备。
71.一种制备5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)的方法，所述方法包括下列步骤：
a)加热5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)和二甲亚砜的混合物，
b)冷却步骤a)的混合物，以及
c)过滤步骤b)的混合物以及收集最终的滤液。
72.5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，其由权利要求71所述的方法制备。
73.一种制备5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的方法，所述方法包括下述步骤：
a)加热盐酸的醋酸溶液中乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的混合物，
b)冷却步骤a)的混合物，
c)用异丙醇稀释步骤b)的混合物并且进一步冷却稀释的混合物，以及
d)滤出从步骤c)产生的晶体。
74.5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，其由权利要求73所述的方法制备。
75.一种制备甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)的方法，所述方法包括下述步骤：
a)通过丙二酸二甲酯在二甲基甲酰胺中与甲醇钠溶液反应形成丙二酸二甲酯钠，
b)将中间体5-氯-1-甲基-1h-苯并[D][1,3]嗪-2,4-二酮与丙二酸二甲酯钠反应形成甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)钠盐，以及，
c)酸化甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)钠盐成为甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。
76.甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，其由权利要求75所述的方法制备。
77.一种制备乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的方法，所述方法包括下述步骤：
a)添加氢化钠到5-氯-1-甲基-1h-苯并[D][1,3]嗪-2,4-二酮和丙二酸二乙酯的二甲基甲酰胺溶液中，
b)加热步骤a)的混合物同时搅拌，
c)冷却步骤b)的溶液，
d)淬灭步骤c)的反应混合物，
e)酸化步骤d)的混合物，
f)过滤然后干燥步骤e)的混合物，以及
g)通过溶解在乙醇中然后慢慢冷却结晶步骤f)的粗产品。
78.乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)，其由权利要求77所述的方法制备。
79.一种测试拉喹莫德样品是否含有不想要的杂质的方法，所述方法包括测定样品是否含有具有下述结构的化合物：
80.一种制备经验证的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，所述方法包括：
a)获得一批次拉喹莫德；
b)采用HPLC方法，测定所述批次中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)中的至少一种的量；以及
c)从所述批次制备所述药物组合物，仅在
i)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，或
ii)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，或
iii)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.15％、0.12％或0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，或
iv)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
v)所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
81.根据权利要求80所述的方法，其中在步骤c)中，仅在所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.12％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，才从所述批次制备所述药物组合物，或其中在步骤c)中，仅在所述批次经测定具有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，才从所述批次制备所述药物组合物。
82.一种用于制备包括拉喹莫德的药物组合物或用于分发经验证批次的包括拉喹莫德的药物组合物的方法，所述方法包括：
a)获得一批次的拉喹莫德或所述的药物组合物；
b)进行该批次样品的稳定性实验；
c)稳定性测试之后由HPLC方法测定所述批次的样品中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的总量；以及
d)验证所述批次用于分发或由所述批次制备所述药物组合物，仅在稳定性测试之后所述批次的样品含有
i)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)，或
ii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)，或
iii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.15％、0.12％或0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，或
iv)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
v)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.1％的乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
83.根据权利要求82所述的方法，如果步骤d)中所述批次经验证用于分发，那么所述方法进一步包括分发所述批次的步骤e)。
84.根据权利要求82或83所述的方法，其中在步骤d)中，所述批次经验证用于分发或所述药物组合物从所述批次制备，仅在所述批次的样品在稳定性测试之后含有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.12％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)，或其中在步骤d)中，所述批次经验证用于分发或所述药物组合物从所述批次制备，仅在所述批次的样品在稳定性测试之后含有相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％的甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)。
85.一种验证一批次的含有拉喹莫德或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物产品用于分发的方法，所述方法包括
a)对所述批次的样品进行稳定性实验；
b)在稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述批次的样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及
c)验证所述批次用于分发，仅在稳定性测试之后所述批次的样品含有
i)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的1.0％的2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)，或
ii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％或0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，或
iii)相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％的组合的5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)。
86.根据权利要求85所述的方法，其中在步骤c)中，仅在所述批次的样品在稳定性测试之后含有相对于拉喹莫德的浓度不高于总的0.1％的N-乙基苯胺(NEA)，所述批次才经验证用于分发。
87.一种制备包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐的经包装的药物组合物的方法，所述方法包括：
a)获得一批次的包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐的药物组合物；
b)对所述批次的样品进行稳定性测试；
c)稳定性测试之后，由HPLC方法测定所述样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)的至少一种的量；以及
d)包装所述药物组合物，仅在
i)所述样品中2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于1.0％，或
ii)所述样品中N-乙基苯胺(NEA)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.5％或0.1％，
iii)所述样品中5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)的组合含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于总的0.5％。
88.根据权利要求87所述的方法，其中在步骤d)中，仅在所述样品中N-乙基苯胺(NEA)的含量经测定，相对于拉喹莫德的浓度，不高于0.1％，才包装所述药物组合物。
89.根据权利要求69-88中任一项所述的方法，其中拉喹莫德是拉喹莫德钠盐。
90.杂质或其盐用作参考标准检测药物组合物中微量的杂质，所述药物组合物包括拉喹莫德或其药学上可接受的盐，其中所述杂质选自由下述组成的群组：2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基苯胺(NEA)和乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
91.一种测定包括拉喹莫德的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，
a)由所述药物组合物配制样品溶液，
b)配制包含杂质的标准溶液，
c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，
d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，
e)配制包括缓冲溶液和乙腈的稀释溶液，
f)配制包括稀释溶液和含水乙腈的空白溶液，
g)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液以及样品溶液进样到HPLC中，
h)采用240nm紫外吸收和稀释溶液作为流动相运行HPLC，
i)测定样品溶液色谱图中杂质的峰的保留时间(RT)和面积，以及
j)相对于标准溶液色谱图中相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)、N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)或乙基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQEE)。
92.一种测定包括拉喹莫德的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，
a)由所述药物组合物配制样品溶液，
b)配制包含杂质的标准溶液，
c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，
d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，
e)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，
f)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，
g)采用240nm紫外吸收，和缓冲溶液和乙腈混合物的流动相运行HPLC，
h)测定样品溶液色谱图中杂质的峰的保留时间(RT)和面积，
i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是N-乙基苯胺(NEA)、1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮](螺-LAQ)或5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)。
93.一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度方法，所述方法包括，
a)由所述药物组合物配制样品溶液，
b)配制包含杂质的标准溶液，
c)配制包括杂质的定量极限(QL)溶液，
d)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，
e)通过在水中溶解磷酸二氢铵配制缓冲溶液，并且用氨水或磷酸调节pH到7.0±0.10，
f)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，
g)将分辨溶液、空白溶液、QL溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，
h)采用212nm紫外吸收和缓冲溶液、乙腈和甲醇混合物的流动相运行HPLC，
i)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，以及
j)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是2-氯-6-(3-(乙基(苯基)氨基)-2-羟基-N-甲基-3-氧代丙氨基)苯甲酸(BH-3-HLAQ)或N-乙基-4-羟基-1-甲基-5-(甲基(2,3,4,5,6-五羟基己氨基)氨基)-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(MEG-LAQ)。
94.一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，
a)由所述药物组合物配制样品溶液，
b)配制包含杂质的标准溶液，
c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，
d)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，
e)配制包括缓冲溶液和乙腈的空白溶液，
f)将分辨溶液、空白溶液、标准溶液和样品溶液进样到HPLC中，
g)采用242nm紫外吸收和空白溶液为流动相运行HPLC，
h)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，以及
i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行对杂质进行定量，
其中，所述杂质是5-氯-4-羟基-1-甲基喹啉-2(1H)-酮(MCQ)、5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸(MCQCA)、甲基5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-1,2-二氢喹啉-3-羧酸酯(MCQME)或N-乙基-4,5-二羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺(5-HLAQ)。
95.一种测定包括拉喹莫德和药学上可接受的载体的药物组合物中杂质浓度的方法，所述方法包括，
a)由所述药物组合物配制样品溶液，
b)配制包含杂质的标准溶液，
c)配制包括拉喹莫德和杂质的分辨溶液，
d)配制包括甲醇和乙腈的空白溶液，
e)通过在水中溶解醋酸铵配制缓冲溶液并且用氨水或冰醋酸调节pH到7.0±0.05，
f)将分辨溶液、空白溶液和样品溶液进样到HPLC中，
g)采用240nm紫外吸收以及包括乙腈和缓冲溶液的流动相运行HPLC，
h)测定样品溶液色谱图中杂质峰的保留时间(RT)和面积，
i)相对于标准溶液色谱图中的相应峰进行杂质的定量，
其中，所述杂质是N-乙基苯胺(NEA)、5-氯-N-乙基-3-羟基-1-甲基-2,4-二氧-N-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(3-HLAQ)或1H,3H-螺[5-氯-1-甲基喹啉-2,4-二酮-3,3’-[1]乙基吲哚-[2]-酮](螺-LAQ)。
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