CN113646303A - Fak抑制剂的盐和晶型 - Google Patents

Abstract

本发明涉及由下式I定义的FAK抑制剂的酒石酸盐，以及该抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途。

Description

FAK抑制剂的盐和晶型

技术领域

本发明涉及由下式I定义的FAK抑制剂的酒石酸盐。

背景技术

WO2012110774公开了一类对粘着斑激酶(FAK)(也称为蛋白酪氨酸激酶2(PTK2))显示出活性的2,4,5-取代的嘧啶以及包含该化合物的药物组合物。

定向细胞迁移在许多生理和病理过程中很重要，这些过程包括胚胎发育、伤口愈合、血管生成、肿瘤侵袭和转移。刺激细胞定向移动的细胞外信号的转导可能由许多过程诱导，包括跨膜整合素与细胞外基质蛋白的结合以及生长因子(例如EGF、IGF和VEGF)对其同源受体的细胞外结构域的作用。

FAK是一种非受体酪氨酸激酶，可介导来自跨膜整合素和生长因子受体的信号。据报道，FAK在协调这些不同的细胞外信号方面发挥着核心作用，以一种可导致细胞通过外部环境定向运动的方式整合它们。

整合素聚集或生长因子受体(例如EGFR、IGF-1R、Her2和VEGFR)的激活促进Y397处的FAK自身磷酸化。

然后磷酸化的Y397 FAK与c-Src(在本文中称为Src)结合，并且在Y576和Y577处Src介导的FAK磷酸化产生活性FAK-Src复合物。然后，活性FAK-Src通过多种生化途径促进信号传导，这些途径影响诸如细胞粘附、迁移、侵袭、细胞存活、增殖、获得化疗耐药性和转移等过程。

因此，FAK抑制剂可用于减少细胞粘附、减少细胞迁移、减少细胞侵袭、减少细胞增殖和降低化学抗性。此外，FAK抑制剂将适用于在不适当的细胞外基质环境中诱导细胞凋亡和减少血管生成。

作为选择性FAK抑制剂的化合物将能够靶向特定的生物途径，而不会因抑制任何靶标(例如其他蛋白激酶)而导致任何潜在问题。

本发明人已经发现式I化合物(其是WO2012110774中呈现的十三个实施例中的第三个实施例)显示出作为可成药分子的潜力。

发明内容

本发明人发现式I化合物的酒石酸盐具有在储存和生物药物特性(包括药代动力学)方面提供了优于游离碱的额外优势的特性。

特别是：

·实验证据表明游离碱的晶型是水合物，而酒石酸盐是无水的。酒石酸盐的无水性质意味着它在储存时不会脱水，因此应该在化学和物理上更加稳定。

·酒石酸盐的吸湿性低于游离碱晶型，这意味着在储存时它不太可能吸水。此外，游离碱吸水并转化为另一种晶型。药物固体优选保持为单晶形式。在类似条件下，酒石酸盐不会吸收那么多的水并保持单晶形式。

·酒石酸盐在水中的溶解度高于游离碱，并且这种溶解度在测试pH的范围内更一致。这为更强大的生物制药特性提供了潜力。

·在大鼠模型中，酒石酸盐的血浆AUC显著高于相应的游离碱。

因此，在第一实施方式中，提供了一种式I化合物的酒石酸盐：

优选地，所述酒石酸盐以结晶形式提供。

在第二实施方式中，提供了一种使用第一实施方式的酒石酸盐治疗增殖性疾病的方法。

在第三实施方式中，提供了第一实施方式的酒石酸盐用于治疗增殖性疾病。

在第四实施方式中，提供了第一实施方式的酒石酸盐在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途。

在第五实施方式中，提供了一种包含第一实施方式的酒石酸盐的药物组合物。

附图说明

图1.从式I L-酒石酸盐模式(Pattern)1方法1获得的固体的XRPD衍射图。

图2.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的PLM图像。

图3.来自方法1的式I L-酒石酸盐模式1的1H NMR光谱。

图4.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1材料和式I游离碱的叠加1H NMR谱。

图5.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1材料的HPLC纯度色谱图。除了保留时间为10.553的主峰外，还有4个其他峰，由箭头指示。这4个峰的保留时间更清楚地列在表中带箭头的列中。

图6.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的TG/DT热谱图。

图7.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的DSC第一次加热热谱图。

图8.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的DSC第一次冷却热谱图。

图9.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的DSC第二次加热热谱图。

图10.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的GVS等温线图。

图11.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的GVS后的XRPD衍射图。

图12.从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1的FT-IR曲线。

图13.从方法2制备的式I L-酒石酸盐模式1获得的固体的XRPD衍射图。

图14.从方法2获得的式I L-酒石酸盐模式1的1H NMR谱。

图15.式I游离碱(A)、从方法1获得的式I L-酒石酸盐模式1(B)和从方法2获得的L-酒石酸盐模式1(C)的叠加1H NMR谱

图16.式I L-酒石酸盐模式2的XRPD衍射图。

图17.在以20mg/kg(游离碱当量)的剂量口服给药式I游离碱或L-酒石酸盐后雄性斯普拉格-杜勒(Sprague Dawley)大鼠中式I的平均血浆浓度。

具体实施方式

本发明提供式I化合物的酒石酸盐：

酒石酸盐可以是D-酒石酸盐或L-酒石酸盐，优选L-酒石酸盐。

在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种酒石酸盐的晶型。在进一步优选的形式中，结晶酒石酸盐具有如下特征粉末衍射图(XRPD)：在2θ值为约9.1、15.5、17.0、18.5、21.8、22.1和25.3处具有主峰。

优选地，所述酒石酸盐的晶型在水中的溶解度在0.8mg/ml和1.0mg/ml之间，更优选0.9mg/ml。

优选地，所述酒石酸盐的晶型具有大约在172℃至174℃之间，更优选大约173℃的熔融起始温度。

在优选的酒石酸盐的晶型中，所述酒石酸盐的晶型具有80％或更高、90％或更高、95％或更高、98％或更高、99％或更高和99.5％或更高的结晶度。

本发明进一步提供了本发明的酒石酸盐用于治疗人体或动物体的方法。这种方法可包括向该对象施用治疗有效量的酒石酸盐，优选以药物组合物的形式。

如本文在治疗病症的上下文中使用的术语“治疗”通常涉及治疗和疗法，无论是对人还是动物(例如在兽医应用中)，其中实现了一些期望的治疗效果，例如，抑制病情发展，包括降低发展速度、停止发展速度、改善病症和治愈病症。还包括作为预防措施(即预防)的治疗。

如本文所用，术语“治疗有效量”涉及活性化合物、或包含酒石酸盐的材料、组合物或剂型的量，其有效产生一些预期的，与合理的益处/风险比相称的治疗效果。

癌症

本发明的酒石酸盐可用于治疗增殖性疾病，特别是作为抗癌剂。本领域普通技术人员能够容易地确定候选化合物是否单独或组合治疗任何特定细胞类型的癌性病症。

癌症的例子包括但不限于骨癌、脑干神经胶质瘤、乳腺癌、肾上腺癌、肛门癌、膀胱癌、内分泌系统癌、食道癌、头颈癌、肾癌或输尿管癌、肝癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、小肠癌、甲状腺癌、尿道癌、宫颈癌、子宫内膜癌、输卵管癌、肾盂癌、阴道癌、外阴癌、慢性或急性白血病、结肠癌、皮肤或眼内黑色素瘤、血液系统恶性肿瘤、霍奇金病、肺癌、淋巴细胞性淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、垂体腺瘤、原发性CNS淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、软组织肉瘤、皮肤癌、脊柱轴肿瘤、胃癌和子宫癌。

可以治疗任何类型的细胞，包括但不限于肺、胃肠道(包括例如肠、结肠)、乳房(乳腺)、卵巢、前列腺、肝脏(肝)、肾脏(肾)、膀胱、胰腺、大脑和皮肤。

上文定义的抗癌治疗可以作为单独的疗法来应用，或者除了本发明的化合物之外，还可以包括常规手术或放射疗法或化学疗法。这种化学疗法可包括以下类别的抗肿瘤剂中的一种或多种：-(i)其他抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，如用于医学肿瘤学，例如烷化剂(例如顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺和亚硝基脲)；抗代谢药物(例如吉西他滨和抗叶酸药物，如氟嘧啶类如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类药物，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素和光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨以及紫杉醇类如紫杉醇和多西紫杉醇(泰索帝Taxotere)和波洛激酶抑制剂)；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康和喜树碱)；

(ii)细胞抑制剂，例如抗雌激素药物(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和碘氧芬)、抗雄激素药物(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍林、亮丙瑞林和布舍林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏拉唑和依西美坦)和5*-还原酶抑制剂如非那雄胺；

(iii)抗侵袭剂(例如c-Src激酶家族抑制剂，如4-(6-氯-2,3-亚甲基二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基氧基喹唑啉(AZD0530；国际专利申请WO 01/94341)、N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-甲酰胺(达沙替尼，BMS-354825；J.Med.Chem.，2004，47，6658-6661)和4-((2,4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)喹啉-3-腈(博舒替尼，SKI-606；癌症研究(2003)，63(2)，375-81)，以及金属蛋白酶抑制剂如马立马司他，尿激酶纤溶酶原激活剂受体功能抑制剂或乙酰肝素酶抗体)；

(iv)生长因子功能抑制剂：例如此类抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体(例如抗erbB2抗体曲妥珠单抗[赫赛汀]、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗erbB1抗体西妥昔单抗[爱必妥，C225]以及由Stern等人重要评论肿瘤学/血液学“Critical reviewsinoncology/haematology”，2005，第54卷，第11-29页公开的任何生长因子或生长因子受体抗体)；此类抑制剂还包括酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，ZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼，OSI 774)和6-丙烯酰胺-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(Cl1033)、erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼、肝细胞生长因子家族抑制剂、血小板衍生生长因子家族抑制剂如伊马替尼，丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号抑制剂如法呢基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(BAY 43-9006))，通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号抑制剂，肝细胞生长因子家族、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、IGF受体(胰岛素样生长因子)激酶抑制剂；极光激酶抑制剂(例如AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，例如CDK2和/或CDK4抑制剂；

(v)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子效果的抗血管生成剂，[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(阿瓦斯汀)和VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，例如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474；WO 01/32651中的实施例2)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171；WO 00/47212中的实施例240)、瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787；WO 98/35985)和SU11248(舒尼替尼；WO 01/60814、在例如国际专利申请WO97/22596、WO 97/30035、WO97/32856和WO 98/13354中公开的化合物以及通过其他机制起作用的化合物(例如，利诺胺、整合素avb3功能抑制剂和血管抑制素)]；

(vi)血管损伤剂，例如康普立停A4和在国际专利申请WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中公开的化合物；

(vii)反义疗法，例如针对上面列出的靶标的那些疗法，例如ISIS 2503，一种抗ras反义疗法；

(viii)基因治疗方法，包括例如替换异常基因(例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2)的方法、GDEPT(基因导向酶前体药物疗法)法如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的方法，和提高患者对化疗或放疗耐受性的方法如多药耐药基因治疗；和

(ix)免疫治疗方法，包括例如增加患者肿瘤细胞免疫原性的体外和体内方法，如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子转染、降低T细胞无反应性的方法、使用转染免疫细胞的方法，如细胞因子转染的树突细胞、使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和使用抗独特型抗体的方法。

特别感兴趣的是与多西紫杉醇的组合。其他可能感兴趣的组合包括吉西他滨、顺铂和喜树碱前药伊立替康。

给药

活性化合物或包含活性化合物的药物组合物可以通过任何方便的给药途径施用于对象，无论是全身/外周给药还是在所需作用部位，包括但不限于：口服(例如通过摄入)；局部(包括例如透皮、鼻内、眼部、口腔和舌下)；肺部(例如通过吸入或吹入疗法使用例如气雾剂，例如通过嘴或鼻子)；直肠；阴道；肠胃外，例如通过注射，包括皮下、皮内、肌肉内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、眶内、腹膜内、气管内、皮下、关节内、蛛网膜下和胸骨内；通过例如皮下或肌内植入贮库。对象可以是真核生物、动物、脊椎动物、哺乳动物、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、灵长类动物、猿猴(例如猴子或猿)、猴子(例如狨猴、狒狒)、猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)，或人。

制剂

尽管酒石酸盐可以单独给药，但优选将其作为药物组合物(例如制剂)提供，其包含至少一种如上定义的酒石酸盐以及一种或多种药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂或本领域技术人员熟知的其他材料和任选的其他治疗剂或预防剂。

因此，本发明进一步提供了一种如上定义的药物组合物和制备所述药物组合物的方法，包括将至少一种如上定义的酒石酸盐与一种或多种如本文所述的药学上可接受的载体、赋形剂、缓冲剂、佐剂、稳定剂、或其他材料混合。

如本文所用，术语“药学上可接受的”涉及在合理医学判断范围内适用于与对象(例如人)的组织接触而没有过多毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症的与合理的收益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。在与制剂的其他成分相容的意义上，每种载体、赋形剂等也必须是“可接受的”。

合适的载体、赋形剂等可以在标准药学教科书中找到，例如雷明顿的药学科学，第18版，麦克出版公司，宾夕法尼亚州伊斯顿，1990。

制剂可以方便地以单位剂型存在并且可以通过药学领域众所周知的任何方法制备。此类方法包括将酒石酸盐与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过将酒石酸盐与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然后如果需要将产品成型来制备制剂。

制剂可以是液体剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂、糖浆、片剂、散剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、扁囊剂、丸剂、安瓿、栓剂、子宫托、软膏剂、凝胶剂、糊剂、乳膏剂、喷雾剂、雾剂、泡沫剂、乳液剂、油剂、药丸剂、药糖剂或气雾剂的形式。

适用于口服给药(例如通过摄入)的制剂可以以离散单位的形式存在，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂，每一种都含有预定量的酒石酸盐；例如粉末或颗粒；例如在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或例如水包油液体乳液或油包水液体乳液；例如丸剂；例如药糖剂；或例如糊剂。

优选地，所述制剂适合于口服给药。

片剂可以通过常规方式制备，例如压制或模压，任选地与一种或多种辅助成分一起。压制片剂可以通过在合适的机器中压制自由流动形式例如粉末或颗粒的酒石酸盐，任选地与一种或多种粘合剂(例如聚维酮、明胶、阿拉伯胶、山梨糖醇、黄蓍胶、羟丙基甲基纤维素)；填充剂或稀释剂(例如乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅)；崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)；和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)混合来制备。模压片可以通过在合适的机器中模压被惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物来制备。片剂可以任选地包衣或刻痕并且可以被配制以提供其中酒石酸盐的缓慢或受控释放，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供所需的释放曲线。片剂可以任选地具有肠溶衣，以在除胃之外的肠道部分释放。

适用于局部给药(例如透皮、鼻内、眼部、口腔和舌下)的制剂可以配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。或者，制剂可包含贴剂或敷料，例如浸渍有酒石酸盐和任选的一种或多种赋形剂或稀释剂的绷带或胶布。

适合在口腔中局部给药的制剂包括糖锭(losenge)，含有在调味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中的酒石酸盐；软锭(pastille)，包含在惰性基质中的酒石酸盐，所述惰性基质例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；以及漱口水，包含在合适的液体载体中的酒石酸盐。

适用于眼部局部给药的制剂还包括滴眼剂，其中酒石酸盐溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是酒石酸盐的水性溶剂中。

适合经鼻给药的制剂，其中载体是固体，包括具有粒度例如在约20至约500微米范围内的粗粉，其以吸入鼻烟的方式给药，即通过从放在靠近鼻子的粉末容器中通过鼻道快速吸入。其中载体为液体的适合作为例如鼻喷雾剂、滴鼻剂给药，或通过雾化器气雾剂给药的制剂包含酒石酸盐的水性或油性溶液。

适合通过吸入给药的制剂包括以气雾剂喷雾存在的制剂，其来自加压包装且使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯-四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。

适合经皮肤局部给药的制剂包括软膏剂、乳膏剂和乳剂。当配制成软膏时，酒石酸盐可以任选地与石蜡或与水混溶的软膏基质一起使用。或者，酒石酸盐可以配制成具有水包油乳膏基质的乳膏。如果需要，乳膏基质的水相可以包括例如至少约30％w/w的多元醇，即具有两个或更多个羟基的醇，例如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。局部制剂可合意地包括增强酒石酸盐通过皮肤或其他受影响区域的吸收或渗透的化合物。这种皮肤渗透促进剂的例子包括二甲亚砜和相关类似物。

当配制成局部乳液时，油相可以任选地仅包含乳化剂(emulsifier)(也称为乳化剂emulgent)，或者它可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，亲水性乳化剂与充当稳定剂的亲脂性乳化剂一起被包括。还优选包括油和脂肪。

含或不含稳定剂的乳化剂一起构成所谓的乳化蜡，而蜡与油和/或脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，该基质形成油性分散相乳膏剂。

合适的乳化剂和乳液稳定剂包括吐温60、司盘80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。为制剂选择合适的油或脂肪是基于实现所需的化妆品特性，因为酒石酸盐在可能用于药物乳液制剂的大多数油中的溶解度可能非常低。因此，乳膏应该优选地是不油腻、不染色和可洗涤的产品，具有合适稠度以避免从管或其他容器泄漏。可以使用直链或支链、单或二元烷基酯，例如二异己二酸酯、硬脂酸异十六烷基酯、椰子脂肪酸丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯或称为Crodamol CAP的支链酯的混合物，后三种是优选的酯。根据所需的性能，这些可以单独使用或组合使用。

或者，可以使用高熔点脂质，例如白色软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。

适用于直肠给药的制剂可以以具有合适基质的栓剂提供，所述基质包括例如可可脂或水杨酸酯。

适合阴道给药的制剂可以是阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂，其除了酒石酸盐外，还含有本领域已知的合适的载体。

适合肠胃外给药(例如通过注射，包括透皮、皮下、肌肉、静脉和皮内)的制剂包括水性和非水性等渗、无热原、无菌注射液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂，以及使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；和水性和非水性无菌悬浮液，其可包括悬浮剂和增稠剂，以及脂质体或其他微粒系统，其设计用于将化合物靶向血液成分或一种或多种器官。在此类制剂使用的合适等渗载体的例子包括氯化钠注射液、林格氏溶液或乳酸林格氏注射液。通常，溶液中酒石酸盐的浓度为约1ng/ml至约10μg/ml，例如约10ng/ml至约1pg/ml。制剂可以存在于单位剂量或多剂量密封容器中，例如安瓿和小瓶，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下储存，只需要在立即使用前添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。制剂可以是脂质体或其他微粒系统的形式，其设计用于将酒石酸盐靶向血液成分或一种或多种器官。

剂量

应当理解，酒石酸盐和包含酒石酸盐的组合物的合适剂量可因患者而异。确定最佳剂量通常涉及治疗益处水平与本发明治疗的任何风险或有害副作用的平衡。选择的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于特定化合物的活性、给药途径、给药时间、化合物的排泄速率、治疗持续时间、其他组合使用的药物、化合物和/或材料，以及患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况和既往病史。化合物的量和给药途径最终将由医师决定，尽管通常剂量将在作用部位达到局部浓度，从而达到所需的效果而不会引起实质性的有害或造成损害的副作用。

体内给药可以在整个治疗过程中以一剂、连续地或间歇地(例如在适当的间隔以分开的剂型)进行。

确定最有效的给药方式和剂量的方法是本领域技术人员众所周知的，并且会随着用于治疗的制剂、治疗目的、被治疗的靶细胞和被治疗的对象而变化。可以使用由治疗医师选择的剂量水平和模式进行单次或多次给药。

通常，酒石酸盐的合适剂量范围为每天每千克对象体重约100pg至约250mg。

应当理解，在本说明书中公开和定义的本发明可扩展到从文本或附图中提及或显而易见的两个或多个单独特征的所有替代组合。所有这些不同的组合构成了本发明的各种替代方面。

实施例

现在将参考以下非限制性实施例描述本发明。

式I化合物(式I)酒石酸盐的合成与表征

分析方法

X射线粉末衍射(XRPD)

XRPD分析在PANalytical Xpert pro上进行，在3到35°的2θ之间扫描样品。将材料轻轻研磨以释放任何附聚物并装载到带有迈拉(Mylar)聚合物膜的多孔板上以支撑样品。然后将多孔板放入衍射仪中，并使用Cu K辐射(

α₁：α₂比＝0.5)在透射模式(步长0.0130°2θ)使用40kV/40mA发生器装置进行分析。

偏振光显微镜(PLM)

结晶度(双折射)的存在使用配备麦克奥迪(Motic)相机和图像捕获软件(Motic图片+(Motic Images Plus)2.0)的奥林巴斯(Olympus)BX50偏光显微镜确定。除非另有说明，否则所有图像均使用20倍物镜记录。

热重分析(TG/DTA)

将大约5mg的材料称重到一个开放的铝盘中并装入同步热重/差热分析仪(TG/DTA)并保持在室温。然后将样品以10℃/min的速率从20℃加热到400℃，在此期间记录样品重量的变化以及任何差热事件(DTA)。氮气用作吹扫气体，流速为300cm³/min。

差示扫描量热法(DSC)

将大约5mg材料称重到铝制DSC盘中并用穿孔铝盖非气密密封。然后将样品盘装入精工(Seiko)DSC6200(配备冷却器)中冷却并保持在20℃。一旦获得稳定的热流响应，以10℃/min的扫描速率将样品和参比加热至熔化(如果可能)，并监测由此产生的热流响应。氮气用作吹扫气体，流速为50cm³/min。

红外光谱(IR)

红外光谱在布鲁克α(Bruker ALPHA)P光谱仪上进行。将足够的材料放置在光谱仪板的中心，并使用以下参数获得光谱：

分辨率： 4 cm^-1

背景扫描时间： 16次扫描

样本扫描时间： 16次扫描

数据采集： 4000至400 cm^-1

结果光谱： 透射率

软件： OPUS版本6

核磁共振(NMR)

NMR实验在配备DCH冷冻探针的布鲁克AVIIIHD光谱仪上进行，针对质子和氟在500.12MHz下操作。实验在氘化DMSO-d6中进行，每个样品制备成约10mM浓度。

¹H-¹³C HSQC NMR也在同一仪器上采集。

动态蒸汽吸附(DVS)

将大约10-20mg样品放入网状蒸汽吸附天平盘中，并装到表面测量系统(SurfaceMeasurement Systems)的DVS-1动态蒸汽吸附天平中。样品经受在25℃从40–90％相对湿度(RH)以10％增量的斜坡曲线，在每一步保持样品直到达到稳定的重量(dm/dt 0.004％，最小步长30分钟，最大步长500分钟)。吸附循环完成后，使用相同的程序将样品干燥至0％RH，然后第二个吸附循环回到40％RH。进行两个循环。绘制吸附/脱附循环过程中的重量变化，从而可以确定样品的吸湿性。然后对任何剩下的固体进行XRPD分析。

重量蒸汽吸附(GVS)

将大约10-20mg样品放入网状蒸汽吸附天平盘中，并装入海德分析(HidenAnalytical)的IGASorp水分吸附分析仪天平中。样品经受在25℃从40％到90％相对湿度(RH)以10％增量的斜坡曲线，在每一步保持样品直到达到稳定的重量(98％步骤完成，最小步长30分钟，最大步长60分钟)。吸附循环完成后，使用相同的程序将样品干燥至0％RH，最后回到40％RH的起始点。进行两个循环。绘制吸附/脱附循环过程中的重量变化，从而可以确定样品的吸湿性。

高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)

色谱柱： Zorbax SB-C18,150mm x 4.6mm,3.5μm

柱温： 50℃

自动进样器温度： 环境温度

UV波长： 275nm

进样量： 5μL

流速： 1.0mL/min

流动相A： 0.1％TFA在去离子水中

流动相B： 0.1％TFA在乙腈中

梯度程序：

时间(分钟)	溶剂B[％]
		0.0	5
1.0	5
		15.0	95
15.1	95
		16.0	5
20.0	5

液相色谱-质谱(LC-MS)

仪器： 戴安Dionex Ultimate 3000

色谱柱： ACE Excel 3特级(Super)C18,75×4.6mm,3.0μm

柱温： 30℃

进样量： 10μL

流速： 1.0mL/min

流动相A： 0.1％甲酸在去离子水中

流动相B： 0.1％甲酸在乙腈中

稀释剂： 50:50的水：乙腈

针洗： 乙腈

PDA范围： 190-400nm

梯度程序：

时间(分钟)	溶剂B[％]
		0.00	5
12.00	95
		15.00	95
15.10	5
		20.00	5

式I化合物的酒石酸盐与其游离碱的对比

式I化合物的L-酒石酸盐的合成-方法1

使用以下方法制备式I L-酒石酸盐：

·将大约500mg的式I游离碱称入闪瓶中。

·加入3mL丙酮以形成浆液，然后将995μL的1M L-酒石酸1M的THF储备溶液(1.05摩尔当量)缓慢移入浆液中。

·然后将浆液轻轻涡旋、加盖并设置为在恒温摇床中在环境温度和40℃之间(4小时循环)进行72小时的热循环

·之后，将小瓶从培养摇床中取出，并通过XRPD分析固体的子样品以检查是否重现了所需的图谱。通过XRPD观察样品并指明为L-酒石酸盐模式1。

·然后在布氏漏斗上使用沃特曼(Whatman)1级滤纸

在真空下分离固体，并使固体在真空下在滤床上再干燥15分钟。然后将固体转移到预先称重的闪瓶中并称重以获得573.3mg的最终质量，其基于L-酒石酸单盐的产率约为89％。在干燥的固体上收集XRPD并观察为L-酒石酸盐模式1。

·L-酒石酸盐模式1材料然后通过PLM、TG/DTA、DSC、¹H-NMR、HPLC纯度、GVS(和GVS后的XRPD)、FT-IR进行表征，并用于7天稳定性、盐歧化、水合和热力学溶解度研究。

使用方法1制备式I L-酒石酸盐模式1是成功的。回收到573.3mg固体，基于无水单盐的产率约为89％。式I L-酒石酸盐模式1材料的表征表明如下：

·图1中材料温度循环后和干燥后的XRPD衍射图是结晶的，指明为模式1。

·图2中的PLM图像显示了具有针状形貌的双折射晶体。

·图2和图4中的¹H NMR分析显示了向式I游离碱峰和宽水峰的偏移，证明盐形成。L-酒石酸单峰在约4.01ppm的积分是2H，这与式I游离碱：L-酒石酸的比例为1:1一致；表明形成了单盐。

·HPLC分析(图5)给出了99.8％面积的式I纯度。

·图5中的TG分析表明，直到在200℃以上的降解开始之前，重量没有显著损失。这表明这是一种无水形式。

·DT曲线显示，由于熔化而发生了吸热活动，其中熔化起始温度为173℃，峰值为177℃(图6)。

·DSC分析显示，由于在第一个热循环(图7)中熔化而发生了吸热活动，其中熔化起始温度为173℃，峰值为177℃。这与TG/DTA数据一致。在随后的冷却(图8)和第二次加热(图9)循环中没有看到进一步的活动，这表明熔化后，冷却时没有发生二次结晶，材料仍然为熔融材料。

·通过GVS分析发现该材料具有轻微吸湿性(图10)，在高达90％RH的情况下观察到的质量吸收量为0.6wt％。

·图11中GVS后实验样品的XRPD分析显示了，与式I L-酒石酸盐模式1的预期XRPD图谱相比，XRPD图谱没有变化。

·记录了图12中的FT-IR曲线以供参考。

式I化合物的L-酒石酸盐的合成-方法2

为了测试使用ICH分类比四氢呋喃(2类)更高的储备溶液溶剂的L-酒石酸模式1的重现性，在丙酮和乙醇二者中都制备了1M的L-酒石酸储备溶液，这两种溶液被归类为ICH 3类溶剂。

由于L-酒石酸在丙酮溶剂中的溶解度差，因此没有使用丙酮储备溶液进行实验。

使用乙醇储备溶液制备L-酒石酸盐模式1按照如下进行：

·将大约100mg的式I游离碱称入闪瓶中。

·加入600μL丙酮以形成浆液并轻轻摇动小瓶。

·然后将199μL的L-酒石酸乙醇储备溶液(1.05mol当量)缓慢移液到浆液中。

·然后将小瓶盖上盖子并放入培养摇床中，以4小时为周期在环境温度和40℃之间进行24小时的热循环。通过XRPD分析所得固体并观察到L-酒石酸盐模式1。

·然后将样品开盖并在环境条件下蒸发72小时。

·然后通过XRPD和¹H NMR分析干燥的样品。

使用方法2(使用乙醇储备溶液代替四氢呋喃储备溶液)制备式I L-酒石酸盐模式1是成功的，并且通过XRPD和¹H NMR表征获得的固体得到以下结果：

·图13中的XRPD衍射图显示出与其他方法相当的结晶度，并且与式I L-酒石酸盐模式1的预期图谱相匹配。

·图14中的¹H NMR光谱与式I L-酒石酸单盐一致，并且与使用方法1获得的固体的¹H NMR光谱(图15)相匹配。

7天稳定性研究

根据如下进行7天稳定性测试：

·将大约10-20mg式I L-酒石酸盐模式1在40℃/75％RH、80℃或环境光和环境温度下放置1周。通过XRPD分析所得固体以评估物理稳定性并通过HPLC分析以评估化学稳定性。

7天稳定性研究的结果总结如下。

L-酒石酸盐的7天稳定性研究结果

7天稳定性研究表明以下结果：

·盐在稳定性测试条件下保持化学稳定性，HPLC纯度结果没有显著变化。

·XRPD图谱也没有显著变化，表明它们在物理上也很稳定。

盐歧化研究

根据如下进行盐歧化研究：

·将大约10-20mg的式I游离碱、L-酒石酸盐模式1称重到HPLC小瓶中。

·然后将1mL去离子水加入到每个小瓶中，将小瓶加盖并在环境温度下振摇24小时。

·之后，将样品转移到带有尼龙过滤器(0.22μm)的离心管中并离心约15分钟。通过XRPD分析分离的固体并且通过HPLC分析滤液用于浓度测定并且用pH计测量所有滤液的pH。

盐歧化研究的结果总结如下。

盐歧化研究结果

盐歧化研究表明以下结果：

·在任何式I盐中均未观察到盐歧化的证据。

·式I L-酒石酸盐模式1在浆化后转化为L-酒石酸盐模式2(图16)，据相信其是水合盐，可能是由于吸收了水。

水合作用研究

根据如下进行水合研究：

·将大约10-20mg的式I游离碱、L-酒石酸盐模式1称重到1.5mL小瓶中。

·制备水/丙酮混合物以提供0.281、0.637和0.888的水活度。

·然后将适当的水/丙酮混合物加入到每个小瓶中以形成浆液，将小瓶加盖并在环境温度下振摇24小时。

·之后，将浆液转移到装有尼龙过滤器(0.22μm)的离心管中并离心15分钟。

通过XRPD分析分离的固体。

水合研究的结果总结如下。

水合作用研究结果

水合作用研究表明以下结果：

·观察到L-酒石酸盐模式1材料在直到0.888的水活度下是稳定的，在这种情况下，这种增加的水合水平导致转化为L-酒石酸盐模式2。模式2被认为是水合物形式。

热力学溶解度研究

按照如下进行热力学溶解度研究：

·将大约10mg的式I游离碱模式1和L-酒石酸盐模式1称重到1.5mL螺旋盖小瓶中。加入适当的缓冲系统以形成浆液，并将小瓶在环境温度(约22℃)下振摇约24小时。

·之后，将浆液转移到含有尼龙过滤器(0.22μm)的离心管中，并使用离心机过滤约10分钟。然后通过XRPD分析分离的固体，通过pH计测量滤液并通过HPLC分析浓度。

热力学溶解度研究的结果总结如下。

热力学研究结果表

热力学溶解度研究表明以下结果：

·XRPD结果显示，在pH 6.8时，式I游离碱显示出XRPD图谱的变化，可能是游离碱的盐形成。这在L-酒石酸盐模式1盐中没有观察到。

·由于抗衡离子转换或在式I游离碱的情况下形成盐，L-酒石酸盐模式1和游离碱在pH 1.0形成可能的HCl盐。

·与式I游离碱(<0.1mg/mL)相比，观察到酒石酸盐在水中的溶解度增加(0.6至1.0mg/mL)。

·在pH 1.0时，L-酒石酸盐模式1观察到与式I游离碱相同的溶解度(0.3mg/mL)。

·在pH 4.5时，与盐(0.2至2.8mg/mL)相比，式I游离碱的溶解性明显更高(11.9mg/mL)。

·在pH 6.8时，L-酒石酸盐的溶解度(0.2mg/mL)与游离碱(<0.1mg/mL)相比略有增加。

尽管在pH 4.5时，式I游离碱更易溶解，但是总体而言，L-酒石酸盐模式1盐与式I游离碱相比显示出持续改善的溶解度。

概括

以500mg规模成功制备式I L-酒石酸盐模式1，分离产率为89％，纯度为99.8％。进行了XRPD、TG/DTA和¹H NMR表征，GVS分析表明该材料轻微吸湿，在90％RH质量吸收为0.6重量％。GVS后XRPD分析显示暴露于湿度条件后晶型没有变化。在研究了一周的加速稳定性条件下(环境温度和光照、40℃/75％RH和80℃)，该材料被认为是稳定的。热力学溶解度研究表明，与式I游离碱相比，L-酒石酸盐模式1在水、pH 1.0缓冲液和pH 6.8缓冲溶液中溶解度增加。盐歧化研究显示没有歧化的证据，尽管材料转化为水合L-酒石酸盐模式2材料。

使用L-酒石酸的乙醇储备溶液而不是四氢呋喃储备溶液成功地以100mg的规模制备式I L-酒石酸盐模式1。XRPD和1H NMR的表征与合成方法一致。这表明使用乙醇储备溶液不会对这种材料的生产产生不利影响。

生物学研究

A.研究目的

在以20mg/kg的目标剂量(以游离碱当量)口服给药游离碱和L-酒石酸盐后，比较式I化合物在雄性斯普拉格-杜勒大鼠中的暴露。

B.简要方法

关键的实验程序总结在下表中。附录1中描述了生命周期、制剂和生物分析程序以及数据分析的更多详细信息。

在本节中，剂量和浓度以游离碱当量表示。

C.结果和讨论

·在口服式I游离碱或L-酒石酸盐后的48小时采样期间，在任何大鼠中均未观察到不良反应或与化合物相关的副作用。

·口服游离碱或L-酒石酸盐后式I的平均血浆浓度与时间的曲线如图17所示，平均暴露参数列于表1。

·口服给药式I的游离碱或L-酒石酸盐后，在给药后5-7小时观察到式I的最大血浆浓度，并且表观口服半衰期与先前在IV给药后观察到的一致。

·服用L-酒石酸盐后，式I的暴露量更高。Cmax和AUC分别比游离碱高约30％和50％。AUC的差异具有统计学意义(P<0.05)。

·口服游离碱和L-酒石酸盐后，在血浆和尿液中检测到式I的已知N-去甲基化代谢物(使用先前建立的MRM参数监测)，但由于缺乏可靠标准，无法确定浓度。

图17显示了在以20mg/kg(游离碱当量)的剂量口服给药式I游离碱或L-酒石酸盐后雄性斯普拉格-杜勒大鼠中式I的平均血浆浓度。令人意外的是，L-酒石酸盐的血浆AUC显著高于游离碱。

表1：口服给药式I的游离碱和L-酒石酸盐后雄性斯普拉格-杜勒大鼠的平均血浆暴露参数。所有剂量和浓度均表示为游离碱当量。数据显示为平均值±SD，n＝3。

a IV数据显示为n＝2的平均值。

b汇合尿液中存在的不变式I(口服给药后48小时内收集，静脉给药后24小时内收集。

*游离碱和L-酒石酸盐之间的统计学显著差异(p<0.05)

附录1–实验步骤和数据分析

药代动力学

制剂制备

·在给药当天，在Milli-Q水(游离碱式I为3.89mL，L-酒石酸盐为4.00mL)中使用研钵和研杵湿磨固体化合物(25.9mg游离碱和34.3mg L-酒石酸盐)制备每个制剂(即式I的游离碱或L-酒石酸盐)。

·对每种制剂进行超声处理并彻底涡旋，产生均匀的白色悬浮液(游离碱的表观pH值为7.6，L-酒石酸盐的表观pH值为3.2)，尽管游离碱的制剂会快速沉降。

·基于称量的化合物质量和用于制备两种制剂的水体积，两者中式I(以游离碱当量)的标称浓度为6.67mg/mL。

·施用于每只大鼠的剂量是根据大鼠体重(给药前确定)、给予每只大鼠的制剂体积和制剂中测试化合物的标称浓度计算的。

生活中

·在禁食过夜的雄性斯普拉格-杜勒大鼠中研究了式I的暴露情况，这些大鼠在整个给药前和给药后采样期间都可以随意饮水，并且在给药后4小时恢复进食。表A1-1中提供了生活中的详细信息。

·在给药后48小时内收集动脉血和总尿液样本。将动脉血直接收集到含有肝素、

(一种蛋白酶抑制剂混合物)和氟化钾的硼硅酸盐小瓶(4℃)中，以最大限度地减少血液/血浆样品中式I离体降解的可能性。收集后，将血样离心，取出血浆上清液并冷冻(-80℃)储存，直至通过LC-MS进行分析。

表A1-1：生活总结

*基于配方中式I的标称浓度(游离碱当量)

生物分析

样品处理和分析

从血浆样品中提取测试化合物是通过用乙腈进行蛋白质沉淀来进行的。溶液和血浆标准品都是新鲜制备的，每组标准品都包含至少七种不同浓度的分析物。用50％乙腈水溶液从储备溶液(1mg/mL在DMSO中)稀释溶液标准品。血浆标准品的制备方法是在空白血浆(50μL)中加入溶液标准品(10μL)和内标，地西泮(10μL，5μg/mL)。

血浆样品的制备方法类似，除了加入空白乙腈(10μL)代替标准溶液。通过加入乙腈(120μL)，涡旋(20s)和在微量离心机中离心(10,000rpm)3分钟来进行蛋白质沉淀。随后分离上清液并取3μL直接注射到色谱柱上，使用下表中的条件进行LC/MS分析。所有血浆浓度均表示为非盐当量。表A1-2中提供了生物分析方法的总结。

表A1-2：生物分析方法仪器总结

*在整个分析过程中使用已建立的MRM参数监测已知的N-去甲基化代谢物。

检测验证

使用的校准范围基于在实验室动物中进行药代动力学研究而观察到的典型浓度范围。

就校准范围、线性、准确度、精密度和提取效率对检测进行了评估。使用系统软件Quanlynx使用内标法进行定量。检测验证仅在一次分析运行中进行；没有进行日间验证。未确定检测下限(LLD)。未评估储存稳定性。

在相关浓度(50或100和500ng/mL)下，提取效率是可接受的，并且发现该检测在0.5至10,000ng/mL的浓度范围内表现出令人满意的线性、准确度和精密度。表A1-3中提供了验证的总结。

表A1-3：检测验证总结

*批量分析的验收标准：至少67％的QC样品在标称值的±15％范围内(FDA工业指南：生物分析方法验证，2001年5月)。

#定量下限(LLQ)由最低可接受校准标准定义，该标准的反向计算浓度在标称浓度的±20％内。

^空白血浆(用于分析血浆样品)和50％乙腈/水(用于分析尿样)用于制备校准标准和QC样品。数据被拟合成合适的线性或二次方程。游离碱化合物用于制备分析标准曲线，L-酒石酸盐的血浆标准品也制备为500ng/mL(游离碱当量)用于化合物含量比较。观察到小于10％的响应差异，因此在式I的游离碱和L-酒石酸盐的分析之间不需要校正。

标准计算

·使用非房室方法(PKSolver 2.0版)分析血浆浓度与时间的关系数据。下面列出了每个药代动力学参数的标准计算。

AUC_IV IV给药后血浆浓度与时间曲线下从零到无限的面积(曾报道：CDCO_FAK_11_03l)

t1/2 消除半衰期

λz IV给药后终末消除速率常数

BA 口服生物利用度

AUC_oral 口服给药后血浆浓度与时间曲线下从零到无限的面积

C_max 口服给药后观察到的最大血浆浓度

T_max 达到C_MAX的时间

·使用未配对t检验在α＝0.05(GraphPad Prism，版本7.01)时进行显著性检验来评估游离碱和L-酒石酸盐之间的药代动力学参数(t1/2、AUC、Cmax、Tmax和BA)的差异。

Claims (13)

1.一种式I化合物的酒石酸盐：

2.如权利要求1所述的酒石酸盐，其特征在于，所述酒石酸盐是L-酒石酸盐。

3.一种如权利要求1或权利要求2所述的酒石酸盐的晶型。

4.如权利要求3所述的晶型，其特征在于，所述晶型在使用铜的特征粉末衍射图(XRPD)中在2θ值为约9.1、15.5、17.0、18.5、21.8、22.1和25.3处具有主峰。

5.如权利要求3或权利要求4所述的晶型，其特征在于，所述晶型在水中的溶解度为0.8mg/ml至1.0mg/ml。

6.如权利要求3或权利要求4所述的晶型，其特征在于，所述晶型在水中的溶解度为0.9mg/ml。

7.如权利要求3至5中任一项所述的晶型，其特征在于，所述晶型具有大约在172℃至174℃之间的熔融起始温度。

8.如权利要求7所述的晶型，其特征在于，所述晶型具有大约在173℃的熔融起始温度。

9.如权利要求3至8中任一项所述的晶型，其特征在于，所述晶型的结晶度为80％或更高。

10.一种治疗增殖性疾病的方法，其使用如权利要求1至9中任一项所述的酒石酸盐。

11.如权利要求1至9中任一项所述的酒石酸盐用于治疗增殖性疾病。

12.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1至9中任一项所述的酒石酸盐。

13.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物适合口服给药。

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