KR20210145175A - Fak 억제제의 염 및 결정 형태 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아래의 화학식 I에 의해 정의된 FAK 억제제의 타르트레이트 염, 및 증식성 질환을 치료하기 위한 그 억제제의 용도에 대한 것이다:
[화학식 I]

Description

FAK 억제제의 염 및 결정 형태

본 발명은 아래의 화학식 I에 의해 정의되는 FAK 억제제의 타르트레이트 염에 대한 것이다:

[화학식 I]

.

WO2012110774는 단백질 티로신 키나제 2(PTK2)로도 알려진 국소 접착 키나제(FAK)에 대한 활성을 나타내는 2,4,5-치환 피리미딘의 부류 및 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물을 개시한다.

방향성 세포 이동은 배아 발생, 상처 치유, 혈관신생, 종양 침습 및 전이를 포함하는 여러 생리적 및 병리적 공정에서 중요하다. 세포가 방향성을 갖고 이동하도록 자극하는, 세포외 신호의 전달은 세포외 기질 단백질에 대한 막통과 인테그린 결합 및 이의 인지체 수용체의 세포외 도메인 상에서의 성장 인자(예를 들어 EGF, IGF 및 VEGF)의 작용을 포함하는 여러 공정에 의해 유도될 수 있다.

FAK는 막통과 인테그린 및 성장 인자 수용체 둘 다로부터의 신호를 매개하는 비-수용체 티로신 키나제이다. FAK는 이들 다양한 세포외 신호의 조율에서 중추적 역할을 담당하여, 이의 외부 환경을 통한 세포의 방향성 이동을 초래하는 방식으로 이들을 통합하는 것으로 보고되었다.

인테그린 클러스터링 또는 성장 인자 수용체(예를 들어 EGFR, IGF-1 R, Her2 및 VEGFR)의 활성화는 Y397에서 FAK 자가인산화를 촉진한다.

이어서 인산화된 Y397 FAK는 c-Src(본원에서 Src로 나타냄)에 결합하고 Y576 및 Y577에서 FAK의 Src 매개된 인산화가 일어나서 활성 FAK-Src 복합체를 생성한다. 그 후 활성 FAK-Src는 세포 접착, 이동, 침습, 세포 생존, 증식, 화학치료법 내성의 획득 및 전이와 같은 공정에 영향을 주는 여러 생화학적 경로를 통한 신호전달을 촉진한다.

따라서 FAK 억제제는 세포 접착, 세포 이동, 세포 침습, 세포 증식 및 화학-내성의 감소에 적용될 것이다. 또한, FAK 억제제는 부적절한 세포외 기질 환경에서 세포에 대한 아폽토시스를 유도하고 혈관신생을 감소시키는 적용 가능성을 가질 것이다.

선택적 FAK 억제제인 화합물은 임의의 표적, 예컨대 다른 단백질 키나제의 억제로 인한 어떠한 잠재적 문제도 없이, 특정 생물학적 경로의 표적화를 가능하게 할 것이다.

본 발명자들은 화학식 I의 화합물(WO2012110774에서 제시된 13개 실시예의 세 번째 실시예임)이 약물화 가능한 분자로서 잠재력을 가짐을 확인하였다.

본 발명자들은 화학식 I의 화합물의 타르트레이트 염이 약동학을 비롯한 보관 및 생물약학 특성에 관해 자유 염기에 비해 추가 장점을 제공하는 특성을 가짐을 확인하였다.

특히,

· 실험 증거는 자유 염기의 결정성 형태가 수화물인 반면 타르트레이트는 무수물임을 시사한다. 타르트레이트 염의 무수성 성질은 이것이 보관 시 탈수시킬 수 없고 이에 따라 화학적, 및 물리적으로 보다 안정할 것임을 의미한다.

· 타르트레이트 염은 자유 염기 결정성 형태보다 흡습성이 더 적어서, 보관 시 물을 덜 흡수할 수 있음을 의미한다. 또한, 자유 염기는 물을 흡수하고 대안적 결정성 형태로 전환된다. 약학적 고체는 단일 결정성 형태로 유지되는 것이 바람직하다. 유사한 조건 하에, 타르트레이트 염은 많은 물을 흡수하지 않으며 단일 결정성 형태로 유지된다.

· 타르트레이트 염의 용해도는 수중에서 자유 염기보다 더 높고 상기 용해도는 테스트된 pH 범위에 걸쳐 보다 일관된다. 이는 보다 강력한 생물약학적 특성에 대한 잠재력을 제공한다.

· 래트 모델에서, 타르트레이트 염에 대한 혈장 AUC는 대응하는 자유 염기에 대한 것보다 유의미하게 더 높다.

따라서, 제1 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 타르트레이트 염이 제공된다:

[화학식 I]

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바람직하게는, 타르트레이트 염은 결정성 형태로 제공된다.

제2 구현예에서, 제1 구현예의 타르트레이트 염을 사용하여 증식성 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

제3 구현예에서, 증식성 질환의 치료에서 사용하기 위한 제1 구현예의 타르트레이트 염이 제공된다.

제4 구현예에서, 증식성 질환의 치료용 약제의 제조에서 제1 구현예의 타르트레이트 염의 용도가 제공된다.

제5 구현예에서, 제1 구현예의 타르트레이트 염을 포함하는 약학 조성물이 제공된다.

도 1은 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1 방법 1로부터 수득된 고체의 XRPD 회절기록이다.
도 2는 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 PLM 이미지이다.
도 3은 방법 1로부터의 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 1H NMR 스펙트럼이다.
도 4는 방법 1로부터 수득된 화학식 I 자유 염기 및 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1 물질의 적층 1H NMR 스펙트럼이다.
도 5는 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1 물질의 HPLC 순도 크로마토그래피기록이다. 체류 시간이 10.553인 주요 피크에 부가하여, 화살표로 나타내는 4개의 다른 피크가 존재한다. 이들 4개 피크의 체류 시간을 표에서 화살표로 표시한 열에 보다 명확히 표로 제공한다.
도 6은 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 TG/DT 열측정기록이다.
도 7은 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 DSC 제1 가열 열측정기록이다.
도 8은 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 DSC 제1 냉각 열측정기록이다.
도 9는 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 DSC 제2 가열 열측정기록이다.
도 10은 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 GVS 등온 그래프이다.
도 11은 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 GVS-후 XRPD 회절기록이다.
도 12는 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 FT-IR 추적이다.
도 13은 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 방법 2 제조로부터 수득된 고체의 XRPD 회절기록이다.
도 14는 방법 2로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 1H NMR 스펙트럼이다.
도 15는 화학식 I 자유 염기(A), 방법 1로부터 수득된 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1(B) 및 방법 2로부터 수득된 L-타르트레이트 패턴 1(C)의 적층 1H NMR 스펙트럼이다.
도 16은 화학식 I L-타르트레이트 패턴 2의 XRPD 회절기록이다.
도 17은 20 ㎎/㎏(자유 염기 당량)의 용량에서 화학식 I 자유 염기 또는 L-타르트레이트 염의 경구 투여 후 수컷 스프라그 다울리(Sprague Dawley) 래트에서 화학식 I의 평균 혈장 농도이다.

본 발명은 화학식 I의 화합물의 타르트레이트 염을 제공한다:

[화학식 I]

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타르트레이트 염은 D-타르트레이트 또는 L-타르트레이트, 바람직하게는 L-타르트레이트일 수 있다.

바람직한 구현예에서, 본 발명은 타르트레이트 염의 결정성 형태를 제공한다. 추가로 바람직한 구현예에서, 결정성 타르트레이트 염은 약 9.1, 15.5, 17.0, 18.5, 21.8, 22.1, 및 25.3에서의 2세타 값에서의 주요 피크를 갖는 특징적 분말 회절 패턴(XRPD)을 갖는다.

바람직하게는, 타르트레이트 염의 결정성 형태는 0.8 ㎎/㎖ 내지 1.0 ㎎/㎖, 보다 바람직하게는 0.9 ㎎/㎖의 수중 용해도를 갖는다.

바람직하게는, 타르트레이트 염의 결정성 형태는 대략 172℃ 내지 174℃, 보다 바람직하게는 대략 173℃의 용융 개시를 갖는다.

바람직한 형태에서 타르트레이트 염의 결정성 형태는 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 및 99.5% 이상의 결정성을 갖는다.

본 발명은 추가로 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 타르트레이트 염을 제공한다. 이러한 방법은 바람직하게는 약학 조성물 형태로, 치료 유효량의 타르트레이트 염을 이러한 대상체에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.

병태의 치료 맥락에서 본원에서 사용되는 용어 "치료"는 인간이건 동물이건(예로, 수의학적 적용에서), 일반적으로 치료 및 치료법에 관한 것이며, 여기서 일부 요망되는 치료 효과, 예를 들어, 병태의 진행 억제가 달성되며, 진행 속도의 감소, 진행 속도의 정지, 병태의 완화, 및 병태의 근치가 포함된다. 예방 조치로서의 치료(즉, 예방)가 또한 포함된다.

본원에서 사용되는 용어 "치료-유효량"은 일부 요망되는 치료 효과를 생성하는 데 효과적이고, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는, 타르트레이트 염을 포함하는 활성 화합물, 또는 물질, 조성물 또는 투여형의 양에 관한 것이다.

암

본 발명의 타르트레이트 염은 특히 항암제로서, 증식성 질환의 치료에 사용될 수 있다. 당업자는 후보 화합물이 단독으로 또는 조합으로, 임의의 특정 세포 유형에 있어서 암성 병태를 치료하는지 여부를 쉽게 결정할 수 있다.

암의 예에는 비제한적으로 뼈암, 뇌간 교종, 유방암, 부신의 암, 항문 영역의 암, 방광의 암, 내분비계의 암, 식도의 암, 두부경부의 암, 신장 또는 요관의 암, 간의 암, 부갑상샘의 암, 음경의 암, 소장의 암, 갑상샘의 암, 요도의 암, 자궁경부의 암종, 자궁내막의 암종, 나팔관의 암종, 신우의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 만성 또는 급성 백혈병, 결장암, 피부 또는 안내 흑색종, 혈액학적 악성물, 호지킨병, 폐암, 림프구 림프종, 중추 신경계(CNS)의 신생물, 난소암, 췌장암, 뇌하수체 샘종, 원발성 CNS 림프종, 전립샘암, 직장암, 신세포 암종, 연조직의 육종, 피부암, 척추 종양, 위암 및 자궁암이 포함된다.

비제한적으로 폐, 위장관(예로, 대장, 결장), 유방(유선), 난소, 전립샘, 간, 신장, 방광, 췌장, 뇌, 및 피부를 포함하는 임의의 유형의 세포가 치료될 수 있다.

본원에서 상기 정의된 항암 치료는 단독 치료법으로 적용될 수도 있고 또는 본 발명의 화합물에 부가하여, 통상적인 수술 또는 방사선치료법 또는 화학치료법이 포함될 수도 있다. 이러한 화학치료법에는 하기 분류의 항-종양제 중 하나 이상이 포함될 수 있다: (i) 의학 종양학에서 사용되는 바와 같은, 다른 항증식성/항신생물 약물 및 이의 조합, 예컨대 알킬화제(예를 들어 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 사이클로포스파미드, 질소 머스타드, 멜팔란, 클로람부실, 부설판, 테모졸아미드 및 니트로소우레아); 항대사물질(예를 들어 젬시타빈 및 항폴레이트, 예컨대 5 플루오로우라실 및 테가푸르와 같은 플루오로피리미딘, 랄티트렉시드, 메토트렉세이트, 시토신 아라비노시드, 및 하이드록시우레아); 항종양 항생제(예를 들어 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 닥티노마이신 및 미트라마이신과 같은 안트라사이클린); 항유사분열제(예를 들어 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드 및 탁솔 및 도세탁셀(탁소테어(Taxotere))과 같은 탁소이드 및 폴로키나제 억제제); 및 토포이소머라제 억제제(예를 들어 에토포시드 및 테니포시드와 같은 에피포도필로톡신, 암사크린, 토포테칸 및 캄프토테신);

(ii) 세포증식억제제, 예컨대 항에스트로겐(예를 들어 타목시펜, 풀베스트란트, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 요오독시펜), 항안드로겐(예를 들어 바이칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드 및 사이프로테론 아세테이트), LHRH 길항제 또는 LHRH 작용제(예를 들어 고세렐린, 류프로렐린 및 부세렐린), 프로게스토겐 (예를 들어 메게스트롤 아세테이트), 아로마타제 억제제(예를 들어 아나스트로졸, 레트로졸, 보라졸 및 엑세메스탄) 및 5*-환원효소의 억제제, 예컨대 피나스테리드;

(iii) 항-침습제(예를 들어 4-(6-클로로-2,3-메틸렌디옥시아닐리노)-7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에톡시]-5-테트라하이드로피란-4-일옥시퀴나졸린(AZD0530; 국제 특허 출원 WO 01/94341), N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-{6-[4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]-2-메틸피리미딘-4-일아미노}티아졸-5-카복사미드(다사티닙, BMS-354825; J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661 및 4-((2,4-디클로로-5-메톡시페닐)아미노)-6-메톡시-7-(3-(4-메틸피페라진-1-일)프로폭시)퀴놀린-3-카보니트릴(보수티닙, SKI-606; Cancer research (2003), 63(2), 375-81)과 같은 c-Src 키나제 패밀리 억제제, 및 마리마스타트와 같은 메탈로프로티나제 억제제, 유로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체 기능의 억제제 또는 헤파라나제에 대한 항체);

(iv) 성장 인자 기능의 억제제: 예를 들어 이러한 억제제에는 성장 인자 항체 및 성장 인자 수용체 항체(예를 들어 항 erbB2 항체 트라스투주맙[허셉틴(Herceptin)T], 항-EGFR 항체 파니투무맙, 항 erbB1 항체 세툭시맙[에르비툭스(Erbitux), C225] 및 문헌[Stern et al. Critical reviews inoncology/haematology, 2005, Vol. 54, pp11-29]에 개시된 임의의 성장 인자 또는 성장 인자 수용체 항체)가 포함된다; 이러한 억제제에는 또한 티로신 키나제 억제제, 예를 들어 표피 성장 인자 패밀리의 억제제(예를 들어 EGFR 패밀리 티로신 키나제 억제제, 예컨대 N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(게피티닙, ZD1839), N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민(에를로티닙, OSI 774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)-퀴나졸린-4-아민(Cl 1033), erbB2 티로신 키나제 억제제, 예컨대 라파티닙, 간세포 성장 인자 패밀리의 억제제, 혈소판-유래 성장 인자 패밀리의 억제제, 예컨대 이마티닙, 세린/트레오닌 키나제의 억제제(예를 들어 Ras/Raf 신호전달 억제제, 예컨대 파네실 트랜스퍼라제 억제제, 예를 들어 소라페닙(BAY 43-9006)), MEK 및/또는 AKT 키나제를 통한 세포 신호전달의 억제제, 간세포 성장 인자 패밀리의 억제제, c-kit 억제제, abl 키나제 억제제, IGF 수용체(인슐린-유사 성장 인자) 키나제 억제제; 오로라 키나제 억제제(예를 들어 AZD1152, PH739358, VX-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VX-528 및 AX39459) 및 사이클린 의존적 키나제 억제제, 예컨대 CDK2 및/또는 CDK4 억제제가 포함된다;

(v) 항혈관신생제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자의 효과를 억제하는 것들, [예를 들어 항 혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙(아바스틴(Avastin)T) 및 VEGF 수용체 티로신 키나제 억제제, 예컨대 4-(4-브로모-2-플루오로아닐리노)-6-메톡시-7-(1-메틸피페리딘-4-일메톡시)퀴나졸린(ZD6474; WO 01/32651 내의 실시예 2), 4-(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일옥시)-6-메톡시-7-(3-피롤리딘-1-일프로폭시)퀴나졸린(AZD2171; WO 00/47212 내의 실시예 240), 바탈라닙(PTK787; WO 98/35985) 및 SU11248(수니티닙; WO 01/60814), 예컨대 국제 특허 출원 WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 및 WO 98/13354에 개시된 것들과 같은 화합물 및 다른 기작에 의해 작용하는 화합물(예를 들어 리노미드, 인테그린 avb3 기능의 억제제 및 안지오스타틴)];

(vi) 혈관 손상제, 예컨대 콤브레타스타틴(Combretastatin) A4 및 국제 특허 출원 WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 및 WO 02/08213에 개시된 화합물;

(vii) 안티센스 치료법, 예를 들어 상기 기재된 표적에 대한 것들, 예컨대 ISIS 2503, 항-ras 안티센스;

(viii) 예를 들어 이상 유전자를 대체하기 위한 접근을 포함하는, 유전자 치료법 접근, 예컨대 이상 p53 또는 이상 BRCA1 또는 BRCA2, GDEPT(유전자 유도된 효소 전구약물 치료법) 접근, 예컨대 시토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 박테리아 니트로리덕타제 효소를 사용하는 것들 및 화학치료법 또는 방사선치료법에 대한 환자 관용성을 증가시키기 위한 접근, 예컨대 다중 약물 내성 유전자 치료법; 및

(ix) 예를 들어, 환자 종양 세포의 면역원성을 증가시키기 위한 생체외 및 생체내 접근을 포함하는 면역치료법 접근, 예컨대 사이토카인, 예컨대 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구 대식구 콜로니 자극 인자를 이용한 전달감염, T 세포 무력증을 감소시키는 접근, 전달감염된 면역 세포, 예컨대 사이토카인 전달감염된 수지상 세포를 사용하는 접근, 사이토카인 전달감염된 종양 세포주를 사용하는 접근 및 항 개별특이형 항체를 사용하는 접근

특정 관심 조합은 도세탁셀을 사용하는 것이다. 다른 가능한 관심 조합에는 젬시타빈, 시스플라틴 및 캄프토테신 전구약물 이리노테칸을 사용하는 것이 포함된다.

투여

활성 화합물 또는 활성 화합물을 포함하는 약학 조성물은 비제한적으로 경구(예로 섭취에 의해); 국소(예로 경피, 비강내, 눈, 협측, 및 설하 포함); 폐(예로, 입 또는 코를 통한, 예로 에어로졸을 사용하여, 예로 흡입 또는 취입 치료법에 의해); 직장; 질; 비경구, 예로, 피하, 피내, 근육내, 정맥내, 동맥내, 심장내, 수막내, 척수내, 낭내, 낭하, 안구내, 복강내, 기관내, 피부밑, 관절내, 지주막하, 및 흉골내를 포함하는 주사에 의해서; 예를 들어, 피하 또는 근육내, 데팟의 임플란트에 의해서를 포함하는 임의의 편리한 투여 경로에 의해, 전신으로건/말초로건 또는 요망되는 작용 부위에서 대상체에 투여될 수 있다. 대상체는 진핵생물, 동물, 척추 동물, 포유류, 설치류(예로 기니 피그, 햄스터, 래트, 마우스), 쥣과(예로 마우스), 개과(예로 개), 고양이과(예로 고양이), 말과(예로 말), 영장류, 유인원과(예로 원숭이 또는 유인원), 원숭이(예로 명주원숭이, 개코원숭이), 유인원(예로 고릴라, 침팬지, 오랑우탄, 긴팔원숭이), 또는 인간일 수 있다.

제형물

타르트레이트 염이 단독으로 투여될 수 있지만, 이를 상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 타르트레이트 염을, 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 아주반트, 부형제, 희석제, 충전제, 완충제, 안정화제, 보존제, 윤활제, 또는 당업자에게 잘 알려진 다른 물질 및 임의로 다른 치료제 또는 예방제와 함께 포함하는 약학 조성물(예로 제형물)로 제시하는 것이 바람직하다.

따라서, 본 발명은 상기 정의된 바와 같은 약학 조성물, 및 상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 타르트레이트 염을 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 완충제, 아주반트, 안정화제, 또는 본원에서 기재된 바와 같은 다른 물질과 함께 혼합하는 단계를 포함하는 약학 조성물을 제조하는 방법을 추가로 제공한다.

본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 타당한 의학적 판단 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 대상체(예로 인간)의 조직과 접촉하여 사용하기 적합하고, 합리적인 이익/위험 비로 상응하는 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여형에 관한 것이다. 각각의 담체, 부형제 등은 또한 제형물의 다른 구성분과 상용성인 관점에서 "허용 가능"해야 한다.

적합한 담체, 부형제 등은 표준 약학 교과서, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990]에서 확인될 수 있다.

제형물은 편리하게는 단위 투여형으로 제시될 수 있고 약학 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 방법에는 하나 이상의 보조 구성분을 구성하는 담체와 타르트레이트 염을 연합시키는 단계가 포함된다. 일반적으로, 제형물은 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 다와 타르트레이트 염을 균일하고 친밀하게 연합시킨 후, 필요한 경우 산물을 형상화함으로써 제조된다.

제형물은 액체, 용액, 현탁액, 에멀션, 엘릭서, 시럽, 정제, 로젠지, 과립, 분말, 캡슐, 카체트, 알약, 앰플, 좌약, 페사리, 연고, 겔, 페이스트, 크림, 스프레이, 미스트, 폼, 로션, 오일, 볼루스, 지약, 또는 에어로졸 형태일 수 있다.

경구 투여에 적합한(예로 섭취에 의한) 제형물은 각각 사전결정된 양의 타르트레이트 염을 함유하는, 별개 단위, 예컨대 캡슐, 카체트 또는 정제로; 분말 또는 과립으로; 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로; 또는 수중유 액체 에멀션 또는 유중수 액체 에멀션으로; 볼루스로; 지약으로; 또는 페이스트로 제시될 수 있다.

바람직하게는, 제형물은 경구 투여에 적합하다.

정제는 통상적 수단, 예로, 압축 또는 성형에 의해, 임의로 하나 이상의 보조 구성분과 함께 제조될 수 있다. 압축된 정제는 적합한 기계에서 타르트레이트 염을 자유-유동 형태, 예컨대 분말 또는 과립으로 압축하고, 임의로 하나 이상의 결합제(예로 포비돈, 젤라틴, 아카시아, 소르비톨, 트래거캔스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스); 충전제 또는 희석제(예로 락토스, 마이크로결정성 셀룰로스, 칼슘 하이드로겐 포스페이트); 윤활제(예로 마그네슘 스테아레이트, 활석, 실리카); 붕해제(예로 나트륨 전분 글리콜레이트, 가교 포비돈, 가교 나트륨 카복시 메틸 셀룰로스); 표면-활성제 또는 분산제 또는 수화제(예로 나트륨 라우릴 설페이트); 및 보존제(예로 메틸 p-하이드록시벤조에이트, 프로필 p-하이드록시벤조에이트, 소르브산)와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 성형된 정제는 적합한 기계에서 불활성 액체 희석제로 가습된 분말화된 화합물의 혼합물을 성형함으로써 제조될 수 있다. 정제는 임의로 코팅되거나 스코어링될 수 있고, 예를 들어, 요망되는 방출 프로필을 제공하기 위해 가변 비율로 하이드록시프로필메틸 셀룰로스를 사용하여, 내부의 타르트레이트 염의 느린 또는 제어되는 방출을 제공하기 위해 제형화될 수 있다. 정제에는 임의로 위 이외의 내장 부분에서 방출을 제공하기 위해, 장용성 코팅이 제공될 수 있다.

국소 투여에 적합한 제형물(예로 경피, 비강내, 눈, 협측, 및 설하)은 연고, 크림, 현탁액, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸, 또는 오일로 제형화될 수 있다. 대안적으로, 제형물은 패치 또는 드레싱, 예컨대 타르트레이트 염 및 임의로 하나 이상의 부형제 또는 희석제가 함침된 밴드 또는 접착 석고를 포함할 수 있다.

입에서 국소 투여에 적합한 제형물에는 풍미가미된 기재, 보통 수크로스 및 아카시아 또는 트래거캔스 중 타르트레이트 염을 포함하는 로젠지; 불활성 기재, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아 중 타르트레이트 염을 포함하는 향정; 및 적합한 액체 담체 중 타르트레이트 염을 포함하는 구강세척제가 포함된다.

눈에 대한 국소 투여에 적합한 제형물에는 또한 타르트레이트 염이 적합한 담체, 특히 타르트레이트 염에 대한 수성 용매 중에 용해되거나 현탁되는 점안제가 포함된다.

담체가 고체인, 비강 투여에 적합한 제형물에는 코 흡입이 취해지는 방식으로, 즉 코에 가까이 유지된 분말 용기로부터 비강 통로를 통한 신속한 흡입에 의해 투여되는, 예를 들어 약 20 마이크론 내지 약 500 마이크론 범위의, 입자 크기를 갖는 거친 분말이 포함된다. 담체가, 예를 들어, 비강 스프레이, 점비제로의, 또는 분무기에 의한 에어로졸 투여에 의한 투여용 액체인 적합한 제형물에는 타르트레이트 염의 수성 또는 유성 용액이 포함된다.

흡입에 의한 투여에 적합한 제형물에는 적합한 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로-테트라플루오로에탄, 이산화탄소, 또는 다른 적합한 기체의 사용으로, 가압된 팩으로부터 에어로졸 스프레이로 제시되는 것들이 포함된다.

피부를 통한 국소 투여에 적합한 제형물에는 연고, 크림, 및 에멀션이 포함된다. 연고로 제형화되는 경우, 타르트레이트 염은 임의로 파라핀계 또는 수-혼화성 연고 기재와 함께 채택될 수 있다. 대안적으로, 타르트레이트 염은 수중유 크림 기재와 함께 크림으로 제형화될 수 있다. 요망되는 경우, 크림 기재의 수성상에는, 예를 들어, 적어도 약 30% w/w의 다가 알코올, 즉 2개 이상의 하이드록실기를 갖는 알코올, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-디올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜 그리고 이의 혼합물이 포함될 수 있다. 국소 제형물에는 바람직하게는 피부 또는 다른 이환 영역을 통한 타르트레이트 염의 흡수 또는 침투를 증강시키는 화합물이 포함될 수 있다. 이러한 피부 침투 증강제의 예에는 디메틸설폭시드 및 관련된 유사체가 포함된다.

국소 에멀션으로 제형화되는 경우, 유성상은 임의로 단순히 유화제(다르게는 착출제로도 알려짐)를 포함할 수도 있고, 또는 지방 또는 오일 또는 지방과 오일 둘 다와 적어도 하나의 유화제의 혼합물을 포함할 수도 있다. 바람직하게는, 친수성 유화제가 안정화제로 작용하는 친유성 유화제와 함께 포함된다. 또한 오일 및 지방을 모두 포함하는 것이 바람직하다.

종합하면, 안정화제(들)를 포함하거나 포함하지 않는 유화제(들)가 소위 유화성 왁스를 구성하며, 오일 및/또는 지방과 함께 왁스가 크림 제형물의 유성 분산상을 형성하는 소위 유화성 연고 기재를 구성한다.

적합한 착출제 및 에멀션 안정화제에는 Tween 60, Span 80, 세토스테아릴 알코올, 미리스틸 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트 및 나트륨 라우릴 설페이트가 포함된다. 약학 에멀션 제형물에서 사용될 수 있는 대부분의 오일 중 타르트레이트 염의 용해도는 매우 낮을 수 있으므로, 제형물에 적합한 오일 또는 지방의 선택은 요망되는 미용 특성의 달성에 기반한다. 따라서 크림은 튜브 또는 다른 용기로부터의 누출을 방지하기 위해 적합한 점도를 바람직하게는 가지며 기름지지 않고, 염색시키지 않고, 세척 가능한 제품이어야 한다. 직쇄 또는 분기쇄, 1염기성 또는 2염기성 알킬 에스테르, 예컨대 디-이소아디페이트, 이소세틸 스테아레이트, 코코넛 지방산의 프로필렌 글리콜 디에스테르, 이소프로필 미리스테이트, 데실 올레에이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트 또는 크로다몰(Crodamol) CAP으로 알려진 분기쇄 에스테르의 배합물이 사용될 수 있고, 마지막 3개가 바람직한 에스테르이다. 이들은 요구되는 특성에 따라 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있다.

대안적으로, 고융점 지질, 예컨대 백색 연질 파라핀 및/또는 액체 파라핀 또는 다른 미네랄 오일이 사용될 수 있다.

직장 투여에 적합한 제형물은, 예를 들어, 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 기재와 함께 좌약으로 제시될 수 있다.

질 투여에 적합한 제형물은 타르트레이트 염에 부가하여, 적절한 것으로 당분야에 알려진 바와 같은 담체를 함유하는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제형물로 제시될 수 있다.

비경구 투여(예로 피부, 피하, 근육내, 정맥내 및 피내를 포함하는, 주사에 의해)에 적합한 제형물에는 항산화제, 완충제, 보존제, 안정화제, 정균제, 및 제형물을 의도되는 수신체의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성 등장성, 발열원-비함유, 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제가 포함될 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액, 및 혈액 성분 또는 하나 이상의 기관으로 화합물을 표적화하도록 설계되는 리포좀 또는 다른 미립자 시스템이 포함된다. 이러한 제형물에서 사용하기 적합한 등장성 비히클의 예에는 나트륨 클로라이드 주사제, 링거 용액, 또는 락테이트화 링거 주사제가 포함된다. 전형적으로, 용액 중 타르트레이트 염의 농도는 약 1 ng/㎖ 내지 약 10 ㎍/㎖, 예를 들어 약 10 ng/㎖ 내지 약 1 pg/㎖이다. 제형물은 단위-용량 또는 다회-용량 밀봉 용기, 예를 들어, 앰플 및 바이알로 제시될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수의 첨가만을 필요로 하는 냉동-건조(동결건조) 조건에서 보관될 수 있다. 즉석 주사 용액(extemporaneous injection solution) 및 현탁액은 멸균 분말, 과립, 및 정제로부터 제조될 수 있다. 제형물은 혈액 성분 또는 하나 이상의 기관으로 타르트레이트 염을 표적화하도록 설계되는 리포좀 또는 다른 미립자 시스템 형태일 수 있다.

투여량

타르트레이트 염, 및 타르트레이트 염을 포함하는 조성물의 적절한 투여량은 환자별로 다를 수 있음이 이해될 것이다. 최적 투여량의 결정에는 일반적으로 본 발명의 치료의 임의의 위험 또는 유해한 부작용과 치료 이익의 수준 사이의 균형을 맞추는 일이 수반될 것이다. 선택된 투여량 수준은 비제한적으로 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 화합물의 배출 속도, 치료 기간, 조합으로 사용되는 다른 약물, 화합물, 및/또는 물질, 및 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적인 건강상태, 및 사전 병력을 비롯한 다양한 요인에 따라 정해질 것이다. 일반적으로 투여량은 실질적인 유해하거나 해로운 부작용을 유도하지 않고 요망되는 효과를 달성하는 작용 부위에서의 국소 농도를 달성할 것이지만, 화합물의 양 및 투여 경로는 궁극적으로 의사의 판단에 따를 것이다.

생체내 투여는 치료 과정을 통해 1개 용량으로, 연속적으로 또는 간헐적으로(예로 적절한 간격의 분할된 용량으로) 실시될 수 있다.

가장 효과적인 투여 수단 및 투여량을 결정하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며 치료법을 위해 사용되는 제형물, 치료법의 목적, 치료받는 표적 세포, 및 치료받는 대상체에 따라 변할 것이다. 단회 또는 다회 투여는 치료의에 의해 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다.

일반적으로, 타르트레이트 염의 적합한 용량은 1일 당 대상체의 체중 ㎏ 당 약 100 pg 내지 약 250 ㎎의 범위이다.

본 명세서에서 개시되고 정의되는 발명이 텍스트 또는 도면으로부터 언급되거나 자명한 2개 이상의 개별 특성의 모든 대안적 조합으로 연장됨이 이해될 것이다. 모든 이러한 상이한 조합이 본 발명의 다양한 대안적 양태를 구성한다.

실시예

이제 본 발명이 하기 비제한적 예를 참조하여 기재될 것이다.

화학식 I의 화합물(화학식 I)의 타르트레이트 염의 합성 및 특징화

분석 방법

X-선 분말 회절(XRPD)

XRPD 분석을 3°내지 35°2θ에서 샘플을 스캐닝하며, PANalytical Xpert pro 상에서 수행하였다. 물질을 부드럽게 분쇄하여 임의의 응집물을 방출하고 샘플을 지지하기 위해 Mylar 중합체 필름을 갖는 멀티-웰 플레이트 상에 로딩하였다. 이어서 멀티-웰 플레이트를 회절측정계 내로 배치하고 40 kV/40 mA 발생기 설정을 사용하여 투과 모드(단계 크기 0.0130°2θ)로 작동하는 Cu K 방사선(α₁ λ = 1.54060 Å; α₂ = 1.54443 Å; β = 1.39225 Å; α₁:α₂ 비 = 0.5)을 사용하여 분석하였다.

편광 광학 현미경측정(PLM)

결정성(복굴절)의 존재를 Motic 카메라 및 이미지 포착 소프트웨어(Motic Image Plus 2.0)가 장착된, Olympus BX50 편광 현미경을 사용하여 결정하였다. 달리 언급되지 않는 한, 모든 이미지는 20x 대물렌즈를 사용하여 기록하였다.

열중량측정 분석(TG/DTA)

대략, 5 ㎎의 물질을 개방 알루미늄 팬 내로 칭량하고 동시 열중량측정/시차 열 분석장치(TG/DTA) 내로 로딩하여 실온에서 유지하였다. 이어서 샘플을 20℃부터 400℃까지 10℃/분의 속도로 가열하였고 그 시간 동안 샘플 중량의 변화를 임의의 시차 열 이벤트(DTA)와 더불어 기록하였다. 질소를 300 ㎤/분의 유속으로, 퍼징 기체로 사용하였다.

시차 주사 열량측정(DSC)

대략, 5 ㎎의 물질을 알루미늄 팬 내로 칭량하고 천공된 알루미늄 뚜껑으로 비-기밀식으로(non-hermetically) 밀봉하였다. 이어서 샘플 팬을 Seiko DSC6200(쿨러가 장착됨) 내로 로딩하고 냉각하고 20℃에서 유지하였다. 일단 안정한 열류 반응이 수득되면, 샘플 및 참조물을 10℃/분의 스캔 속도로 용융시까지(가능한 경우) 가열하고 생성 열류 반응을 모니터링하였다. 질소를 50 ㎤/분의 유속으로, 퍼징 기체로 사용하였다.

적외선 분광측정(IR)

적외선 분광측정을 Bruker ALPHA P 분광측정계 상에서 수행하였다. 충분한 물질을 분광측정계의 플레이트 중심 상에 배치하고 하기 파라미터를 사용하여 스펙트럼을 수득하였다:

해상도: 4 ㎝^-1

배경 스캔 횟수: 16회 스캔

샘플 스캔 횟수: 16회 스캔

데이터 수집: 4000 ㎝^-1 내지 400 ㎝^-1

결과 스펙트럼: 투과율

소프트웨어: OPUS 버전 6

핵 자기 공명(NMR)

양성자 및 염소에 대해 500.12 MHz에서 작동하는 DCH 저온탐침이 장착된 Bruker AVIIIHD 분광측정계 상에서 NMR 실험을 수행하였다. 실험을 중수소화 DMSO-d6 중에 수행하고 각각의 샘플을 약 10　mM 농도로 제조하였다.

¹H-¹³C HSQC NMR을 또한 동일한 기기 상에서 수집하였다.

다이나믹 증기 흡착(DVS)

대략 10 ㎎ 내지 20 ㎎의 샘플을 메쉬 증기 흡착 저울 팬 내로 배치하고 표면 측정 시스템에 의해 DVS-1 다이나믹 증기 흡착 저울 내에 로딩하였다. 샘플을 10% 증분으로 40% 내지 90% 상대 습도(RH)의 경사 프로필을 거치며 25℃에서 안정한 중량을 달성할 때까지(dm/dt 0.004%, 최소 단계 길이 30분, 최대 단계 길이 500분) 샘플을 각 단계에서 유지하였다. 흡착 주기의 완료 후, 샘플을 동일한 절차를 사용하여 0% RH까지 건조한 후 두 번째 흡착 주기를 다시 40% RH까지 거쳤다. 2개 주기를 수행하였다. 흡착/탈착 주기 동안의 중량 변화를 도시하여, 샘플의 흡습성 성질이 결정될 수 있도록 하였다. 이어서 XRPD 분석을 보유된 임의의 고체 상에서 수행하였다.

중량측정 증기 흡착(GVS)

대략 10 ㎎ 내지 20 ㎎의 샘플을 메쉬 증기 흡착 저울 팬 내로 배치하고 Hiden Analytical의 IGASorp 수분 흡착 분석장치 저울 내로 로딩하였다. 샘플을 10% 증분으로 40% 내지 90% 상대 습도(RH)의 경사 프로필을 거치며, 25℃에서 안정한 중량을 달성할 때까지(98% 단계 완료, 최소 단계 길이 30분, 최대 단계 길이 60분) 샘플을 각 단계에서 유지하였다. 흡착 주기의 완료 후, 샘플을 동일한 절차를 사용하여 0% RH까지 건조한 후, 최종적으로 다시 40% RH의 시작점으로 되돌렸다. 2개 주기를 수행하였다. 흡착/탈착 주기 동안의 중량 변화를 도시하여, 샘플의 흡습성 성질이 결정될 수 있도록 하였다.

고성능 액체 크로마토그래피-자외선 검출(HPLC-UV)

칼럼: Zorbax SB-C18, 150 ㎜ × 4.6 ㎜, 3.5 ㎛

칼럼 온도: 50℃

자동샘플수집장치 온도: 상온

UV 파장: 275 nm

주입 부피: 5 ㎕

유속: 1.0 ㎖/분

이동상 A: 증류수 중 0.1% TFA

이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% TFA

구배 프로그램:

액체 크로마토그래피-질량 분광측정(LC-MS)

기기: Dionex Ultimate 3000

칼럼: ACE Excel 3 Super C18, 75 × 4.6 ㎜, 3.0 ㎛

칼럼 온도: 30℃

주입 부피: 10 ㎕

유속: 1.0 ㎖/분

이동상 A: 증류수 중 0.1% 포름산

이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산

희석제: 50:50 물:아세토니트릴

바늘 세척: 아세토니트릴

PDA 범위: 190 nm 내지 400 nm

구배 프로그램:

화학식 I의 화합물의 타르트레이트 염과 이의 자유 염기의 비교

화학식 I의 화합물의 L-타르트레이트 염의 합성 - 방법 1

화학식 I L-타르트레이트를 하기 방법을 사용하여 제조하였다:

· 대략 500 ㎎의 화학식 I 자유 염기를 신틸레이션 바이알 내로 칭량하였다.

· 3 ㎖ 아세톤을 첨가하여 슬러리를 형성하고 995 ㎕의 THF 중 L-타르타르산 1 M 원액(1.05 몰 당량)을 슬러리 내로 천천히 피펫팅하였다.

· 이어서 슬러리를 부드럽게 휘젓고, 뚜껑을 닫고, 대략 72시간 동안 인큐베이터 진탕기에서 상온 내지 40℃의 열 주기(4시간 주기)로 설정하였다.

· 이 시점 후, 바이알을 인큐베이터 진탕기로부터 꺼내고 고체의 하위-샘플을 XRPD에 의해 분석하여 요망되는 패턴이 재현되었는지를 확인하였다. 샘플을 XRPD에 의해 관찰하고 L-타르트레이트 패턴 1로 명명하였다.

· 이어서 고체를 Whatman 등급 1 여과지(42.5 ㎜ ø)를 사용하여 부흐너 깔때기 상에서 진공 하에 단리하고 고체가 추가 15분 동안 진공 하에 필터층 상에서 건조되게 두었다. 그 후 고체를 사전-칭량된 신틸레이션 바이알로 옮기고 칭량하여 최종 질량 573.3 ㎎을 수득하였고, 이는 L-타르트레이트 1-염에 기반하여 대략 89% 수율이었다. XRPD를 건조된 고체 상에서 수집하였고 L-타르트레이트 패턴 1인 것으로 관찰되었다.

· 이어서 L-타르트레이트 패턴 1 물질을 PLM, TG/DTA, DSC, ¹H-NMR, HPLC 순도, GVS(GVS-후 XRPD 포함), FT-IR에 의해 특징화하고 7일 안정성, 염 불균화, 수화 및 열역학적 용해도 연구에서 사용하였다.

방법 1을 사용하는 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 제조는 성공적이었다. 573.3 ㎎의 고체를 회수하였고, 이는 무수 1-염을 기준으로 대략 89% 수율이었다. 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1 물질의 특징화는 하기를 시사하였다:

· 물질의 온도 사이클링-후 및 건조-후의 도 1에서의 XRPD 회절기록은 결정성이었고 패턴 1로 명명되었다.

· 도 2에서의 PLM 이미지는 침상 형태를 갖는 복굴절 결정을 나타내었다.

· 도 2 및 도 4에서의 ¹H NMR 분석은 화학식 I 자유 염기 피크에 대한 이동 및 염 형성의 증거를 제공한 넓은 물 피크를 나타내었다. 약 4.01 ppm에서 L-타르타르산 단일선 피크의 적분은 2H였으며, 이는 1:1의 화학식 I 자유 염기:L-타르타르산 비와 일치하여, 1-염이 형성됨을 제시하였다.

· HPLC에 의한 분석(도 5)은 99.8% 면적의 화학식 I의 순도를 제공하였다.

· 도 5에서의 TG 분석은 약 200℃ 초과에서의 분해 개시 시까지 유의미한 중량 손실을 나타내지 않았다. 이는 이것이 무수 형태임을 제시하였다.

· DT 추적은 173℃의 개시 및 177℃에서의 피크를 갖는 용융으로 인한 흡열 이벤트를 나타내었다(도 6)

· DSC 분석은 173℃의 개시 및 177℃에서의 피크를 갖는 첫 번째 가열 주기에서의 용융으로 인한 흡열 이벤트를 나타내었다(도 7). 이는 TG/DTA 데이터와 일치하였다. 후속 냉각(도 8) 및 두 번째 가열(도 9) 주기에서 추가 이벤트가 나타나지 않아, 용융 후, 냉각 시 재결정화가 일어나지 않으며 물질이 용융된 물질로 유지됨을 시사하였다.

· 물질은 GVS 분석에 의해 약간 흡습성인 것으로 확인되었고(도 10), 최대 90% RH에서 0.6 wt%의 질량 흡수가 관찰되었다.

· 샘플 GVS-후 실험의 도 11에서의 XRPD 분석은 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1에 대해 예상되는 XRPD 패턴 대비 XRPD 패턴에 변화를 나타내지 않았다.

· 도 12에서의 FT-IR 추적은 참조 목적을 위해 기록하였다.

화학식 I의 화합물의 L-타르트레이트 염의 합성 - 방법 2

테트라하이드로푸란(클래스 2) 대비 더 높은 ICH 분류를 갖는 원액 용매를 사용하여 L-타르트레이트 패턴 1의 재현성을 평가하기 위해, L-타르타르산의 1 M 원액을, 아세톤 및 에탄올(ICH 클래스 3 용매로 분류됨) 둘 다에서 제조하였다.

상기 용매 중 L-타르타르산의 불량한 용해도로 인해 아세톤 중 원액을 사용해서는 실험을 수행하지 않았다.

에탄올 중 원액을 사용하는 L-타르트레이트 패턴 1의 제조는 하기와 같이 수행하였다:

· 대략 100 ㎎의 화학식 I 자유 염기를 신틸레이션 바이알 내로 칭량하였다.

· 600 ㎕의 아세톤을 첨가하여 슬러리를 형성하고 바이알을 가볍게 진탕하였다.

· 199 ㎕의 에탄올 중 L-타르타르산 원액(1.05 몰 당량)을 슬러리 내로 천천히 피펫팅하였다.

· 바이알의 뚜껑을 닫고 인큐베이터 진탕기 내에 24시간 동안 4시간 주기로 상온 내지 40℃의 열 주기에 배치하였다. 생성 고체를 XRPD에 의해 분석하여 L-타르트레이트 패턴 1이 관찰되었다.

· 이어서 샘플의 뚜껑을 열고 72시간 동안 주변 조건에서 증발하게 두었다.

· 그 후 건조된 샘플을 XRPD 및 ¹H-NMR에 의해 분석하였다.

방법 2(테트라하이드로푸란 원액 대신 에탄올 원액 사용)를 사용하는 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 제조는 성공적이었고 XRPD 및 ¹H-NMR에 의한 수득된 고체의 특징화는 하기 결과를 제공하였다:

· 도 13에서의 XRPD 회절기록은 다른 방법과 필적하는 결정성을 나타내었고 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1에 대해 예상된 패턴과 매칭되었다.

· 도 14에서의 ¹H NMR 스펙트럼은 화학식 I L-타르트레이트 1-염과 일치하였고 방법 1을 사용하여 수득된 고체에 대해 수득된 ¹H NMR 스펙트럼(도 15)과 매칭되었다.

7일 안정성 연구

7일 안정성 평가를 하기와 같이 수행하였다:

· 대략 10 ㎎ 내지 20 ㎎의 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1을 1주 동안 40℃/75%RH, 80℃ 또는 주변 광량 및 상온 하에 배치하였다. 생성 고체를 XRPD에 의해 분석하여 물리적 안정성을 평가하고 HPLC에 의해 분석하여 화학적 안정성을 평가하였다.

7일 안정성 연구 결과를 아래에 요약한다.

L-타르트레이트 염에 대한 7일 안정성 연구 결과

7일 안정성 연구는 하기 결과를 시사하였다:

· 염은 HPLC 순도 결과에 유의미한 변화를 갖지 않고 평가된 안정성 조건 하에 화학적으로 안정하게 유지되었다.

· 또한 XRPD 패턴에 유의미한 변화가 존재하지 않아 이들이 물리적으로도 안정함을 시사하였다.

염 불균화 연구

염 불균화 연구를 하기와 같이 수행하였다:

· 대략 10 ㎎ 내지 20 ㎎의 화학식 I 자유 염기, L-타르트레이트 패턴 1을 HPLC 바이알 내로 칭량하였다.

· 이어서 1 ㎖ 증류수를 각각의 바이알에 첨가하고 바이알의 뚜껑을 닫고 24시간 동안 상온에서 진탕하였다.

· 상기 시간 후, 샘플을 나일론 필터(0.22 ㎛)를 갖는 원심분리관으로 옮기고 대략 15분 동안 원심분리하였다. 단리된 고체를 XRPD에 의해 분석하고 여액을 농도 결정을 위해 HPLC에 의해 분석하고 모든 여액의 pH를 pH 측정기로 측정하였다.

염 불균화 연구 결과를 아래에 요약한다.

염 불균화 연구 결과

염 불균화 연구는 하기 결과를 시사하였다:

· 어느 화학식 I 염에서도 염 불균화의 증거는 나타나지 않았다.

· 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1은 슬러리화 후 L-타르트레이트 패턴 2로 전환되었고(도 16), 이는 아마도 물의 흡수로 인한, 수화된 염으로 여겨졌다.

수화 연구

수화 연구를 하기와 같이 수행하였다:

· 대략 10 ㎎ 내지 20 ㎎의 화학식 I 자유 염기, L-타르트레이트 패턴 1을 1.5 ㎖ 바이알 내로 칭량하였다.

· 물/아세톤 혼합물을 제조하여 0.281, 0.637 및 0.888의 수 활성을 얻었다.

· 이어서 적절한 물/아세톤 혼합물을 각각의 바이알에 첨가하여 슬러리를 형성하고 바이알의 뚜껑을 닫고 24시간 동안 상온에서 진탕하였다.

· 상기 시간 후, 슬러리를 나일론 필터(0.22 ㎛)를 갖는 원심분리관으로 옮기고 15분 동안 원심분리하였다. 단리된 고체를 XRPD에 의해 분석하였다.

수화 연구 결과를 아래에 요약한다.

수화 연구 결과

수화 연구는 하기 결과를 시사하였다:

· L-타르트레이트 패턴 1 물질이 0.888의 최대 수 활성까지 안정한 것으로 관찰되었고, 이 시점에서 증가된 수화 수준이 L-타르트레이트 패턴 2로의 전환을 야기하였다. 패턴 2는 수화된 형태로 여겨졌다.

열역학적 용해도 연구

열역학적 용해도 연구를 하기와 같이 수행하였다:

· 대략 10 ㎎의 화학식 I 자유 염기 패턴 1 및 L-타르트레이트 패턴 1을 1.5 ㎖ 스크루-캡 바이알 내로 칭량하였다. 적절한 완충 시스템을 첨가하여 슬러리를 생성하고 바이알을 대략 24시간 동안 상온(약 22℃)에서 진탕하였다.

· 상기 시간 후, 슬러리를 나일론 필터(0.22 ㎛)를 갖는 원심분리관으로 옮기고 약 10분 동안 원심분리기를 사용하여 여과하였다. 이어서 단리된 고체를 XRPD에 의해 분석하고 여액을 pH 측정기로 측정하고 농도에 대해 HPLC에 의해 분석하였다.

열역학적 용해도 연구 결과를 아래에 요약한다.

열역학적 연구로부터의 결과 표

열역학적 용해도 연구는 하기 결과를 시사하였다:

· XRPD 결과는 pH 6.8에서, 화학식 I 자유 염기가 자유 염기의 경우 염 형성일 수 있는 XRPD 패턴에서의 변화를 보임을 나타내었다. 이는 L-타르트레이트 패턴 1 염에 대해서는 관찰되지 않았다.

· 가능한 HCl 염은 화학식 I 자유 염기의 경우 염 형성 또는 짝이온 스위칭으로 인해 pH 1.0에서 L-타르트레이트 패턴 1 및 자유 염기로부터 형성되었다.

· 관찰된 타르트레이트 염은 화학식 I 자유 염기(0.1 ㎎/㎖ 미만)에 비해 수중 용해도를 증가시켰다(0.6 ㎎/㎖ 내지 1.0 ㎎/㎖).

· pH 1.0에서, L-타르트레이트 패턴 1은 화학식 I 자유 염기와 동일한 용해도(0.3 ㎎/㎖)로 관찰되었다.

· pH 4.5에서, 화학식 I 자유 염기는 염(0.2 ㎎/㎖ 내지 2.8 ㎎/㎖)에 비해 유의미하게 더 가용성이었다(11.9 ㎎/㎖).

· pH 6.8에서, L-타르트레이트는 자유 염기(0.1 ㎎/㎖ 미만)에 비해 약간 증가된 용해도(0.2 ㎎/㎖)를 나타내었다.

전반적으로 L-타르트레이트 패턴 1 염은 화학식 I 자유 염기에 비해 일관되게 개선된 용해도를 나타내었으나, pH 4.5에서, 화학식 I 자유 염기는 상당히 더 가용성이었다.

요약

화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 제조는 500 ㎎ 스케일에서 성공적으로 수행되었고, 단리 수율은 89%, 순도는 99.8%였다. XRPD, TG/DTA 및 1H NMR에 의한 특징화를 수행하였고 GVS 분석은 물질이 최대 90%RH에서 0.6 wt.%의 질량 흡수로 약간 흡습성임을 시사하였다. GVS-후 XRPD 분석은 습도 조건에 대한 노출 후 형태 변화를 나타내지 않았다. 1주 동안 연구된 가속화된 안정성 조건(상온 및 주변 광량, 40℃/75% RH 및 80℃) 하에 물질은 안정한 것으로 간주되었다.열역학적 용해도 연구는 L-타르트레이트 패턴 1의 용해도가, 물, pH 1.0 완충액 및 pH 6.8 완충 용액 중 화학식 I 자유 염기에 비해 증가되었음을 나타내었다. 염 불균화 연구는 불균화의 증거를 나타내지 않았지만, 물질은 수화된 L-타르트레이트 패턴 2 물질로 전환되었다.

테트라하이드로푸란 원액과 대조적으로 L-타르타르산의 에탄올 원액을 이용하는 화학식 I L-타르트레이트 패턴 1의 제조는 100 ㎎ 스케일에서 성공적으로 수행되었다. XRPD 및 1H NMR에 의한 특징화는 합성 방법과 일치하였다. 이는 에탄올 원액의 사용이 상기 물질의 생산에 악영향을 미치지 않음을 시사하였다.

생물학적 연구

A. 연구 목적

20 ㎎/㎏(자유 염기 당량으로서)의 표적 용량에서 자유 염기 및 L-타르트레이트 염의 경구 투여 후 수컷 스프라그 다울리 래트에서 화학식 I의 화합물의 노출을 비교한다.

B. 방법 요약

핵심 실험 절차를 아래의 표에 요약한다. 데이터 분석과 함께, 인-라이프(in-life), 제형물 및 생물분석 절차의 추가 세부사항을 별첨 1에 기재한다.

본 섹션에 걸쳐, 용량 및 농도는 자유 염기 당량으로 표현한다.

C. 결과 및 논의

· 화학식 I의 자유 염기 또는 L-타르트레이트 염의 경구 투여 후 48 h 샘플링 기간 동안 어느 래트에서도 유해 반응 또는 화합물-관련 부작용이 관찰되지 않았다.

· 자유 염기 또는 L-타르트레이트 염의 경구 투여 후 화학식 I의 평균 혈장 농도 대 시간 프로필을 도 17에 나타내며 평균 노출 파라미터를 표 1에 제시한다.

· 화학식 I의 자유 염기 또는 L-타르트레이트 염의 경구 투여 후, 화학식 I의 최대 혈장 농도는 투약 후 5 h 내지 7 h에 관찰되었고, 겉보기 경구 반감기는 IV 투약 후 이전에 관찰된 것과 일치하였다.

· 화학식 I의 노출은 L-타르트레이트 염의 투약 후 더 높았다. Cmax 및 AUC는 각각 자유 염기보다 대략 30% 및 50% 더 컸다. AUC에서의 차이는 통계적으로 유의미했다(P < 0.05).

· 화학식 I의 알려진 N-탈메틸화 대사물질(이전에 확립된 MRM 파라미터를 사용하여 모니터링됨)이 자유 염기 및 L-타르트레이트 염 둘 다의 경구 투여 후 혈장 및 소변에서 검출되었으나, 믿을만한 표준의 부재로 인해 농도는 결정할 수 없었다.

도 17은 20 ㎎/㎏(자유 염기 당량)의 용량에서 화학식 I 자유 염기 또는 L-타르트레이트 염의 경구 투여 후 수컷 스프라그 다울리 래트에서 화학식 I의 평균 혈장 농도를 나타낸다. 놀랍게도, 혈장 AUC는 자유 염기에서보다 L-타르트레이트 염에서 유의미하게 더 높다.

[표 1]

a IV 데이터는 n = 2의 평균으로 나타낸다.

b 풀링된 소변에 존재하는 변화하지 않은 화학식 I(경구 투여 후 최대 48 h, 그리고 IV 투여 후 최대 24째에 수집됨).

* 자유 염기 및 L-타르트레이트 염 간 통계적 유의차(p<0.05)

별첨 1 - 실험 절차 및 데이터 분석

약동학

제형물 제조

· 투약일에, 절구 및 공이를 사용하여 Milli-Q 수(자유 염기 화학식 I에 대해 3.89 ㎖ 및 L-타르트레이트 염에 대해 4.00 ㎖) 중 고체 화합물(자유 염기에 대해 25.9 ㎎ 및 L-타르트레이트 염에 대해 34.3 ㎎)을 습식-제분하여 각각의 제형물(즉 화학식 I의 자유 염기 또는 L-타르트레이트 염)을 제조하였다.

· 각각의 제형물을 초음파분쇄하고 철저히 볼텍싱하여, 균일한 흰색 현탁액(자유 염기에 대해 겉보기 pH 7.6, 및 L-타르트레이트 염에 대해 3.2)을 생산하였으나, 자유 염기에 대한 제형물은 신속한 침강을 거쳤다.

· 2개 제형물을 제조하기 위해 칭량된 화합물의 질량 및 사용된 물의 부피에 기반하여, 둘 다에서 화학식 I(자유 염기 당량으로서)의 정규 농도는 6.67 ㎎/㎖이었다.

· 각각의 래트에 투여된 용량은 래트 중량(투약 전에 결정됨), 각각의 래트에 투여된 제형물의 부피 및 제형물 중 평가 화합물의 정규 농도에 기반하여 계산하였다.

인-라이프

· 화학식 I의 노출을 투약-전 및 투약-후 샘플링 기간에 걸쳐 물에 자유롭게 접근했고 투약 4 h-후 식품에 대한 접근이 회복된 하룻밤-공복처리 수컷 스프라그 다울리 래트에서 연구하였다. 인-라이프 세부사항은 표 A1-1에 제공한다.

· 동맥혈 및 전체 소변 샘플을 투약 48 h-후까지 수집하였다. 혈액/혈장 샘플 중 화학식 I의 생체외 분해 가능성을 최소화하기 위해 동맥혈을 헤파린, Complete®(프로테아제 억제제 칵테일) 및 칼륨 플루오라이드를 함유하는 보로실리케이트 바이알 내로(4℃에서) 직접 수집하였다. 일단 수집하면, 혈액 샘플을 원심분리하고, 상청액 혈장을 제거하여 LC-MS에 의한 분석 시까지 냉동(-80℃) 보관하였다.

[표 A1-1]

* 제형물 중 화학식 I(자유 염기 당량)의 정규 농도에 기반함

생물분석

샘플 가공 및 분석

혈장 샘플로부터의 평가 화합물의 추출을 아세토니트릴로의 단백질 침전을 사용하여 수행하였다. 적어도 7개의 상이한 분석물질 농도를 포함하는 각각의 표준물질 세트로, 용액 및 혈장 표준물질을 모두 새로 제조하였다. 수중 50% 아세토니트릴로 원액(DMSO 중 1 ㎎/㎖)으로부터 용액 표준물질을 희석하였다. 용액 표준물질(10 ㎕) 및 내부 표준물질인 디아제팜(10 ㎕, 5 ㎍/㎖)으로 블랭크 혈장(50 ㎕)을 스파이크처리하여 혈장 표준물질을 제조하였다.

용액 표준물질 대신 블랭크 아세토니트릴(10 ㎕)을 첨가한 것을 제외하고, 혈장 샘플을 유사하게 제조하였다. 아세토니트릴(120 ㎕)의 첨가, 볼텍싱(20 s) 및 3분 동안 마이크로원심분리기에서의 원심분리(10,000 rpm)에 의해 단백질 침전형성을 수행하였다. 이후 상청액을 분리하고, 3 ㎕를 아래의 표에 기재된 조건을 사용하여 LC/MS 분석을 위해 칼럼 상에 직접 주입하였다. 모든 혈장 농도는 비-염 당량으로 표현한다. 생물분석 방법의 요약을 표 A1-2에 제공한다.

[표 A1-2]

* 알려진 N-탈메틸화 대사물질을 확립된 MRM 파라미터를 사용하여 분석에 걸쳐 모니터링하였다.

검정 검증

사용된 교정 범위는 실험실 동물에서 수행된 약동학 연구에 대해 관찰된 전형적인 농도 범위에 기반하였다.

검정을 교정 범위, 선형도, 정확도, 정밀도 및 추출 효율에 관해 평가하였다. 시스템 소프트웨어 Quanlynx를 채택하는 내부 표준 방법을 사용하여 정량을 수행하였다. 검정 검증은 단회 분석 수행에서만 수행하였다; 일간 검증은 수행하지 않았다. 검출 하한(LLD)은 결정하지 않았다. 보관 안정성은 평가하지 않았다.

추출 효율은 관련 농도(50 ng/㎖ 또는 100 ng/㎖ 및 500 ng/㎖)에서 허용 가능하였고 검정은 0.5 ng/㎖ 내지 10,000 ng/㎖의 농도 범위 내에서 만족스러운 선형도, 정확도 및 정밀도를 나타내는 것으로 확인되었다. 검증 요약을 표 A1-3에 제공한다.

[표 A1-3]

* 배치 분석에 대해 허용 가능한 기준: QC 샘플의 적어도 67%가 정규 값의 ±15% 이내에 있다(산업용 FDA 가이드라인: 생물분석 방법 검증, 2001년 5월).

# 정량 하한(LLQ)은 역 계산된 농도가 정규 값의 ±20% 이내에 있는 허용 가능한 최저 교정 표준물질에 의해 정의된다.

^ 블랭크 혈장(혈장 샘플의 분석을 위해) 및 50% 아세토니트릴/물(소변 샘플의 분석을 위해)을 교정 표준물질 및 QC 샘플의 제조를 위해 사용하였다. 데이터는 적절한 경우 1차 또는 2차 방정식에 피팅하였다. 자유 염기 화합물을 사용하여 분석용 표준 곡선을 제조하고 L-타르트레이트 염의 혈장 표준물질을 또한 화합물 함량 비교를 위해 500 ng/㎖(자유 염기 당량)로 제조하였다. 반응에서 10% 미만 차이가 관찰되었고, 이에 따라 화학식 I의 자유 염기 및 L-타르트레이트 염의 분석 간에는 교정이 요구되지 않았다.

표준 계산

· 혈장 농도 대 시간 데이터를 비-구획 방법(PKSolver 버전 2.0)을 사용하여 분석하였다. 각각의 약동학 파라미터에 대한 표준 계산을 아래에 기재한다.

AUC_IV IV 투여 후 혈장 농도 대 시간 0부터 무한까지의 시간 프로필 하의 면적(이전에 보고됨: CDCO-FAK_11_031)

t_1/2 제거 반감기

λ_z IV 투여 후 말단 제거율 상수

BA 경구 생체이용률

AUC_oral 경구 투여 후 혈장 농도 대 시간 0부터 무한까지의 시간 프로필 하의 면적

C_max 경구 투여 후 관찰된 최대 혈장 농도

T_max C_max를 달성하기 위한 시간

· 자유 염기 및 L-타르트레이트 염 간 약동학 파라미터(t1/2, AUC, Cmax, Tmax 및 BA)에서의 차이를 α = 0.05에서의 유의성에 대해 페어링되지 않은 t-테스트 평가를 사용하여 평가하였다(GraphPad Prism, 버전 7.01).

Claims (13)

1. 화학식 I의 화합물의 타르트레이트 염:
   [화학식 I]
   

   

   .
2. 제1항에 있어서, 타르트레이트가 L-타르트레이트인 타르트레이트 염.
3. 제1항 또는 제2항의 타르트레이트 염의 결정성 형태.
4. 제3항에 있어서, 약 9.1, 15.5, 17.0, 18.5, 21.8, 22.1, 및 25.3에서의 2θ값에서 주요 피크를 갖는 구리를 사용한 특징적 분말 회절 패턴(XRPD)을 갖는 결정성 형태.
5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 0.8 ㎎/㎖ 내지 1.0 ㎎/㎖의 수중 용해도를 갖는 결정성 형태.
6. 제3항 또는 제4항에 있어서, 0.9 ㎎/㎖의 수중 용해도를 갖는 결정성 형태.
7. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 대략 172℃ 내지 174℃의 용융 개시를 갖는 결정성 형태.
8. 제7항에 있어서, 대략 173℃의 용융 개시를 갖는 결정성 형태.
9. 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 80% 이상의 결정성을 갖는 결정성 형태.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 타르트레이트 염을 사용하여 증식성 질환을 치료하는 방법.
11. 증식성 질환의 치료에서 사용하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 타르트레이트 염.
12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 타르트레이트 염을 포함하는 약학 조성물.
13. 제12항에 있어서, 경구 투여에 적합한 약학 조성물.

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