CN110903291B - 一种杂芳基并[4,3-c]嘧啶-5-胺类衍生物的盐、盐的晶型及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杂芳基并[4,3‑c]嘧啶‑5‑胺类衍生物的盐、盐的晶型及制备方法。具体地，本发明涉及式I化合物的盐、盐的晶型及制备方法。本发明式I化合物的盐的晶型具备良好的晶型稳定性，可更好地用于临床。

Description

一种杂芳基并[4,3-c]嘧啶-5-胺类衍生物的盐、盐的晶型及 制备方法

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺的盐、盐的晶型及制备方法。

背景技术

腺苷是天然存在的嘌呤核苷，是许多生理功能的内源性调节剂。在心血管系统、中枢神经、呼吸系统、肾脏、脂肪和血小板的功能调节中发挥重要作用。

腺苷的作用由G蛋白偶联受体家族介导，目前已知至少有四种亚型的腺苷受体，分类为A1、A2a、A2b和A3。其中A1和A3受体抑制酶腺苷酸环化酶的活性，而A2a和A2b受体刺激该酶的活性，由此调节细胞中环AMP水平，通过这些受体，腺苷调节广泛的生理功能。

A2a受体(A2aR)在机体分布较为广泛，在中枢神经系统主要表达于纹状体，在外周、心、肝、肺、肾等组织也均有表达。数个临床前研究表明，腺苷A2a受体拮抗剂对于治疗神经变性疾病，主要是帕金森病、亨廷顿病或阿尔茨海默病具有惊人疗效(Trends inNeurosci.2006,29(11),647-654；Expert Opinion on Therapeutic Patents,2007,17,979-991等)。而且也可以用于治疗其他中枢神经系统(CNS)相关的疾病例如抑郁、多动综合征、睡眠障碍和焦虑症(Clin.Neuropharmacol.2010,33,55-60；J.Neurosci.2010,30(48),16284-16292；Parkinsonisn Relat.Disord.2010,16(6),423-426；及其中的参考献:Mov.Disorders,2010,25(2),S305)。此外，腺苷A2a受体拮抗剂还具有作为神经保护剂的治疗潜力(参见Jenner P.J Neuro l.2000；247Supp12:1143-50)。

近来研究表明，在缺血低氧、炎症、创伤、移植等诸多病理过程中，腺苷A2a受体的激活可以发挥重要的免疫调节作用，这可能与A2a受体在T细胞、B细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞等多种免疫细胞上表达水平较高有关。此外，A2a受体的活化可以促使机体产生免疫耐受，密切参与了肿瘤细胞“免疫逃逸”或“免疫抑制”的形成，为肿瘤的发生发展创造了有利条件。Lokshin及其同事(Cancer Res.2006 Aug1；66(15):7758-65)证实自然杀伤细胞上的A2a受体活化可以通过升高cAMP,激活PKA抑制自然杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤。还有研究表明，激活A2a受体的活化可以促进黑色素瘤A375细胞、成纤维瘤NIH3T3细胞及嗜铬细胞瘤PC12细胞等肿瘤细胞的增殖，其可能与T细胞上A2a受体的活化可以抑制T细胞活化、增殖、与肿瘤细胞的黏附及对肿瘤细胞产生细胞毒性作用相关；而A2a受体基因敲除的小鼠则可以加强CD8+T细胞抗肿瘤的免疫作用,显著抑制肿瘤的增殖。因此，A2a受体拮抗剂也可用于肿瘤的治疗。

尽管对多种腺苷受体亚型具有显著生物学活性的化合物可具有治疗作用，但它们可导致不想要的副作用。例如腺苷A1受体在组织缺血/缺氧时，在中枢、循环、消化系统和骨骼肌中，细胞在处于缺氧和低氧的应激环境时，胞外聚集的腺苷通过激活胞膜上的A1受体启动相应的保护机制，从而增加细胞对缺氧低氧的耐受。位于免疫细胞上的A1受体在低氧环境中能促进细胞免疫应答。另外，A1受体还能降低游离脂肪酸和甘油三酯，参与调节血糖。因此，A1受体的持续阻断可能会引起机体组织中各种不良反应的发生(ChinesePharmacological Bulletin,2008,24(5),573-576)。如有文献报道，在动物模型上，阻断A1受体将会产生焦虑、觉醒等不良反应(Basic&Clinical Pharmacology&ToLcology,2011,109(3),203-7)。腺苷受体A3(如Gessi S等人，Pharmacol.Ther.117(1),2008,123-140所述)在心肌缺血期间释放的腺苷在心脏中发挥强力的保护作用，A3受体的持续阻断可能增加由任何预先存在的或正在发展的缺血性心脏病引起的并发症的可能性，所述缺血性心脏病诸如心绞痛或心衰。

目前已有许多化合物被开发为A_2a受体拮抗剂用于治疗很多疾病，如WO2007116106、WO2009080197、WO2011159302、WO2011095625、WO2014101373、WO2015031221中所述。

申请号为PCT/CN2018/079086(申请日2018年3月15日)的申请中提供了一种腺苷A_2a受体拮抗剂，结构如下所示：

该申请的全部内容并入本文。

化合物的药用形式(如晶型、盐)往往影响到该药物的化学稳定性，结晶条件及储存条件的不同有可能导致化合物的晶型结构的变化，有时还会伴随着产生其他形态的晶型。一般来说，无定形的药物产品没有规则的晶型结构，往往具有其它缺陷，比如产物稳定性较差，析晶较细，过滤较难，易结块，流动性差等。药物的多晶型对产品储存、生产及放大有不同的要求。因此，深入研究式I化合物的盐及盐的晶型，改善式I所示化合物的盐的各方面性质是很有必要的。

发明内容

本发明提供式I化合物的甲磺酸盐、式I化合物的对甲苯磺酸盐、式I化合物的硫酸盐、式I化合物甲磺酸盐α晶型、式I化合物对甲苯磺酸盐β晶型、式I化合物硫酸盐γ晶型及其制备方法，本发明的晶型具备良好的晶型稳定性。

本发明提供式Ⅰ化合物的酸加成盐，所述酸加成盐选自盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、焦硫酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、高氯酸盐、过硫酸盐、半硫酸盐、重硫酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、焦磷酸盐、偏磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、苯甲酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、丙酮酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、丙磺酸盐、柠檬酸盐、4-硝基苯甲酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、1,2-乙二磺酸盐、β-萘磺酸盐、苹果酸盐、丙炔酸盐、2-丁炔酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乙烯基乙酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、羟乙基磺酸盐、马来酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐、半乳糖二酸盐、葡庚糖酸盐、扁桃酸盐、1,2-乙烷基二磺酸盐、草酸盐、三氟乙酸盐、三氟甲磺酸盐、己二酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、羟基乙酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、2-苯氧基苯甲酸盐、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸盐、乙酰乙酸盐、2-羟基乙磺酸盐、硼酸盐、氯代苯甲酸盐、樟脑酸盐、衣康酸盐、樟脑磺酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、氨基磺酸盐、半乳糖醛酸盐、环戊基丙酸盐、十二烷基硫酸盐、丙烯酸盐、环戊烷丙酸盐、甘油磷酸盐、甲氧基苯甲酸盐、二葡萄糖酸盐、葡萄糖酸盐、庚酸盐、己酸盐、三甲基乙酸盐、葡糖醛酸盐、月桂酸盐、邻苯二甲酸盐、苯乙酸盐、月桂基硫酸盐、2-乙酰氧基苯甲酸盐、烟酸盐、肉桂酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、苯二甲酸盐、戊二酸盐、羟基马来酸盐、羟基苯甲酸盐、苯乙酸盐、3-羟基-2-萘甲酸盐、3-苯基丙酸盐、异丁酸盐、新戊酸盐、苦味酸盐、硬脂酸盐、2,2-二氯乙酸盐、酰化氨基酸盐、海藻酸盐、4-乙酰氨基苯磺酸盐、癸酸盐、胆酸盐、辛酸盐、壬酸盐、环拉酸盐、酞酸盐、盐酸半胱氨酸盐、山梨酸盐、盐酸甘氨酸盐、1,5-萘二磺酸盐、二甲苯磺酸盐、二盐酸胱氨酸盐、十一酸盐、聚乙烯磺酸盐、磺基水杨酸盐、苯基丁酸盐、4-羟基丁酸盐、聚乙烯硫酸盐、萘-1-磺酸盐和戊酸盐中的至少一种。

所述式Ⅰ化合物的酸加成盐，其甲磺酸盐的α晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为7.545、8.520、10.798、11.475、17.322、18.881、20.779处具有特征峰。

进一步地，所述α晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为7.545、8.520、10.798、11.475、17.322、18.881、19.409、20.779、21.881、23.249、24.402、24.713、25.607、29.279处具有特征峰。

更进一步地，所述α晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为7.545、8.520、10.798、11.475、13.293、14.289、15.175、15.909、16.474、17.322、18.881、19.409、20.779、21.881、23.249、24.402、24.713、25.607、26.107、26.602、26.852、28.024、29.001、29.279、29.845、31.246、32.097、33.432、35.012处具有特征峰。

所述式Ⅰ化合物的酸加成盐，其对甲苯磺酸盐的β晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为5.554、7.778、13.916、15.067、17.412、18.956、19.897、21.836、22.301、24.942处具有特征峰。

进一步地，所述β晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为5.554、7.778、11.616、12.350、13.916、15.067、17.412、18.956、19.406、19.897、20.572、21.836、22.301、23.046、24.942处具有特征峰。

更进一步地，所述β晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为5.554、7.778、11.616、12.350、12.881、13.916、15.067、16.340、17.412、18.956、19.406、19.897、20.572、21.836、22.301、23.046、23.682、24.356、24.942、26.839、27.247、27.956、28.514、29.498、30.483、31.719处具有特征峰。

所述式Ⅰ化合物的酸加成盐，其硫酸盐的γ晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为14.248、19.522、20.456、21.377、21.957、22.840、23.273、24.153、25.065、25.703、26.060、27.357、28.204、28.908、29.614、32.740处具有特征峰。

进一步地，所述γ晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为14.248、19.522、20.456、21.377、21.957、22.840、23.273、24.153、25.065、25.703、26.060、27.357、28.204、28.908、29.614、32.740、33.306、34.503、39.415、39.433处具有特征峰。

更进一步地，所述γ晶型的X-射线粉末衍射图谱，在衍射角2θ为14.248、18.310、18.893、19.522、20.456、21.377、21.957、22.840、23.273、24.153、25.065、25.703、26.060、27.357、28.204、28.908、29.614、30.445、31.186、32.740、33.306、34.503、35.054、36.035、38.029、39.415、39.433、40.385、41.482、43.063、44.055处具有特征峰。

本发明提供一种制备式Ⅰ化合物的甲磺酸盐的方法，包括式Ⅰ化合物与甲磺酸在溶剂中成盐的步骤。本发明进一步提供了制备式Ⅰ化合物的甲磺酸盐α晶型的方法，包括：取一定量的式I化合物，加入适量溶剂，加入甲磺酸，析晶、离心、干燥，得到式I化合物的甲磺酸盐α晶型。本发明进一步提供了制备式Ⅰ化合物的甲磺酸盐α晶型的方法，包括：取一定量的式I化合物，加入适量乙腈、丙酮、乙酸异丙酯、异丙醇、正庚烷或甲基叔丁基醚不溶，加入一定量的甲磺酸，室温打浆析晶，得到甲磺酸盐α晶型。

本发明提供一种制备式Ⅰ化合物的对甲苯磺酸盐的方法，包括式Ⅰ化合物与对甲苯磺酸在溶剂中成盐的步骤。本发明进一步提供了制备式Ⅰ化合物的对甲苯磺酸盐β晶型的方法，包括：取一定量的式I化合物，加入适量溶剂，加入对甲苯磺酸，析晶、离心、干燥，得到式I化合物的对甲苯磺酸盐β晶型。本发明进一步提供了制备式Ⅰ化合物的对甲苯磺酸盐β晶型的方法，包括：取一定量的式I化合物，加入适量乙腈、乙醇、丙酮、乙酸异丙酯、异丙醇、正庚烷或甲基叔丁基醚不溶，或者加入适量甲醇溶解，加入一定量的对甲苯磺酸，室温打浆析晶，得到对甲苯磺酸盐β晶型。

本发明提供一种制备式Ⅰ化合物的硫酸盐的方法，包括式Ⅰ化合物与硫酸在溶剂中成盐的步骤。本发明进一步提供了制备式Ⅰ化合物的硫酸盐γ晶型的方法，包括：取一定量的式I化合物，加入适量溶剂，加入硫酸，析晶、离心、干燥，得到式I化合物的硫酸盐γ晶型。本发明进一步提供了制备式Ⅰ化合物的硫酸盐γ晶型的方法，包括：取一定量的式I化合物，加入适量丙酮不溶，加入一定量硫酸，室温打浆析晶，得到硫酸盐γ晶型。

式I化合物的甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型、硫酸盐γ晶型的结晶溶剂及式I化合物酸加成盐的成盐溶剂选自烃类溶剂、醚类溶剂、醇类溶剂、酯类溶剂、酮类溶剂、腈类溶剂、卤代烃类溶剂、含氮溶剂、水、二甲基亚砜的一种或者多种。所述烃类溶剂包括但不限于环己烷、正庚烷、对二甲苯；所述醚类溶剂包括但不限于四氢呋喃、乙醚、丙二醇甲醚、甲基叔丁基醚、异丙醚或1,4-二氧六环；所述醇类溶包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、异戊醇或三氟乙醇；所述酯类溶剂包括但不限于乙酸乙酯、乙酸异丙酯或乙酸丁酯；所述酮类溶剂包括但不限于丙酮、苯乙酮、4-甲基-2-戊酮；所述腈类溶剂包括但不限于乙腈、丙腈；所述卤代烃类溶剂包括但不限于氯甲烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿或四氯化碳；所述含氮溶剂包括但不限于硝基甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺。

式I化合物的甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型、硫酸盐γ晶型的析晶方法选自室温析晶、冷却析晶、挥发溶剂析晶或加入晶种诱导析晶。

本发明还涉及包括式Ⅰ化合物酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型或硫酸盐γ晶型和任选的一种或多种药用载体和/或稀释剂的药物组合物。所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。例如，本发明所述包含式Ⅰ化合物酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型或硫酸盐γ晶型的药物制剂可以配制为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、栓剂、吸入剂或喷雾剂。

此外，本发明所述药物组合物还可以以任何合适的给药方式，例如口服、肠胃外、直肠、经肺或局部给药等方式施用于需要这种治疗的患者或受试者。当用于口服给药时，所述药物组合物可制成口服制剂，例如口服固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；或，口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。当制成口服制剂时，所述药物制剂还可包含适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。当用于肠胃外给药时，所述药物制剂可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。当制成注射剂时，所述药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法来进行生产。当配制注射剂时，所述药物制剂中可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。当用于直肠给药时，所述药物制剂可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物制剂可制成吸入剂或喷雾剂等。在某些实施方案中，本发明式Ⅰ化合物酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型或硫酸盐γ晶型以治疗和/或预防有效量存在于药物组合物或药物中。在某些实施方案中，本发明所述式Ⅰ化合物酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型或硫酸盐γ晶型以单位剂量的形式存在于药物组合物或药物中。

本发明进一步涉及一种制备药物组合物的方法，包括使选自本发明的式I化合物酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型或硫酸盐γ晶型中的一种或多种晶型与至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。

本发明进一步涉及所述式I化合物酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型或硫酸盐γ晶型或包含前述盐或晶型的药物组合物在制备用于治疗通过对A2a受体抑制而改善的病况或病症的药物中的用途。本发明进一步涉及所述式I化合物酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型或硫酸盐γ晶型或包含前述盐或晶型的药物组合物在制备治疗选自肿瘤、抑郁症、认知功能病症、神经退行性病症、注意力相关病症、锥体外症候群、异常运动障碍、肝硬化、肝纤维化、脂肪肝、皮肤纤维化、睡眠障碍、中风、脑损伤、神经炎症和成瘾行为的疾病的药物中的应用。本发明中所述的肿瘤选自黑色素瘤、脑瘤、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、神经母细胞瘤、肉瘤、骨软骨瘤、骨瘤、骨肉瘤、精原细胞瘤、睾丸肿瘤、子宫癌、头颈肿瘤、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、真性红细胞增多症、白血病、甲状腺肿瘤、输尿管肿瘤、膀胱癌、胆囊癌、胆管癌、绒毛膜上皮癌和儿科肿瘤；优选为肺癌。本发明中所述的神经退行性病症选自帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、共济失调毛细血管扩张症、牛海绵状脑病、克雅二氏病、小脑萎缩症、多发性硬化症、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症。

发明详述

在本申请的说明书和权利要求书中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。然而，为了更好地理解本发明，下面提供了部分相关术语的定义和解释。另外，当本申请所提供的术语的定义和解释与本领域技术人员所通常理解的含义不一致时，以本申请所提供的术语的定义和解释为准。

本发明所述的“醚类溶剂”是指含有醚键-O-且碳原子数为1至10个的链状化合物或环状化合物，具体实例包括但不限于：四氢呋喃、乙醚、丙二醇甲醚、甲基叔丁基醚、异丙醚或1,4-二氧六环。

本发明所述的“醇类溶剂”是指一个或多个“羟基”取代“C1-6烷基”上的一个或多个氢原子所衍生的基团，所述“羟基”和“C1-6烷基”如前文所定义，具体实例包括但不限于：甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、异戊醇或三氟乙醇。

本发明所述的“酯类溶剂”是指含碳原子数为1至4个的低级有机酸与含碳原子数为1至6个的低级醇的结合物，具体实例包括但不限于：乙酸乙酯、乙酸异丙酯或乙酸丁酯。

本发明所述的“酮类溶剂”是指羰基(-C(O)-)与两个烃基相连的化合物，根据分子中烃基的不同，酮可分为脂肪酮、脂环酮、芳香酮、饱和酮和不饱和酮，具体实例包括但不限于：丙酮、苯乙酮、4-甲基-2-戊酮

本发明所述的“腈类溶剂”是指一个或多个“氰基”取代“C1-6烷基”上的一个或多个氢原子所衍生的基团，所述“氰基”和“C1-6烷基”如前文所定义，具体实例包括但不限于：乙腈或丙腈。

本发明所述的“卤代烃类溶剂”是指一个或多个“卤素原子”取代“C1-6烷基”上的一个或多个氢原子所衍生的基团，所述“卤素原子”和“C1-6烷基”如前文所定义，具体实例包括但不限于：氯甲烷、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。

本发明所述的“X-射线粉末衍射图谱或XRPD”是经Cu-Kα射线衍射得到。

本发明所述的“差示扫描量热分析或DSC”是指在样品升温或恒温过程中，测量样品与参考物之间的温度差、热流差，以表征所有与热效应有关的物理变化和化学变化，得到样品的相变信息。

本发明所述的“2θ或2θ角度”是指衍射角，θ为布拉格角，单位为°或度，所述2θ的误差范围可以是±0.3、±0.2或±0.1。

发明的有益效果

本发明提供的8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺(式I化合物)的酸加成盐、甲磺酸盐α晶型、对甲苯磺酸盐β晶型和硫酸盐γ晶型的溶解度、稳定性、吸湿性方面更有优势，更适合于药物开发，满足生物利用度和药效要求，能够满足生产运输储存的药用要求，生产工艺稳定、可重复可控，能够适应于工业化生产。

附图说明

图1为以α晶型形式存在的式Ⅰ化合物甲磺酸盐的XRPD图；

图2为以α晶型形式存在的式Ⅰ化合物甲磺酸盐的DSC图；

图3为以α晶型形式存在的式Ⅰ化合物甲磺酸盐的TGA图；

图4为以α晶型形式存在的式Ⅰ化合物甲磺酸盐的DVS吸湿谱图；

图5为以α晶型形式存在的式Ⅰ化合物甲磺酸盐的DVS检测前后XRPD对比图；

图6为以β晶型形式存在的式Ⅰ化合物对甲苯磺酸盐的XRPD图；

图7为以β晶型形式存在的式Ⅰ化合物对甲苯磺酸盐的DSC图；

图8为以β晶型形式存在的式Ⅰ化合物对甲苯磺酸盐的TGA图；

图9为以β晶型形式存在的式Ⅰ化合物对甲苯磺酸盐的DVS吸湿谱图；

图10为以β晶型形式存在的式Ⅰ化合物对甲苯磺酸盐的DVS检测前后XRPD对比图；

图11为以γ晶型形式存在的式Ⅰ化合物硫酸盐的XRPD图；

图12为以γ晶型形式存在的式Ⅰ化合物硫酸盐的DSC图；

图13为以γ晶型形式存在的式Ⅰ化合物硫酸盐的TGA图；

图14为以γ晶型形式存在的式Ⅰ化合物硫酸盐的DVS吸湿谱图。

具体实施方式

以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，本发明的实质和范围并不局限于此。

以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质和范围。

实验所用仪器的测试条件：

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。

HPLC的测定使用Thermo Dionex Ultimate 3000高压液相色谱仪(Kromasil 100-5-C18 200×4.6mm色谱柱)。

XRPD为X射线粉末衍射检测：测定使用BRUKER D8型X射线衍射仪进行，具体采集信息：Cu阳极(40kV，40mA)，Cu-Kα射线

扫描方式：：θ/2θ，扫描范围：5-48°。

DSC为差示扫描量热：测定采用METTLER TOLEDO DSC 3+示差扫描量热仪，升温速率10℃/min，温度具体范围参照相应图谱(多为25-300或25-350℃)，氮气吹扫速度50mL/min。

TGA为热重分析：检测采用METTLER TOLEDO TGA 2型热重分析仪，升温速率10℃/min，温度具体范围参照相应图谱(多为25-300℃)，氮气吹扫速度20mL/min。

DVS为动态水分吸附：检测采用SMS DVS Advantage，在25℃，湿度变化为50％-95％-0％-95％-50％，步进为10％(最后一步为5％)(湿度具体范围以相应图谱为准，此处所列为大多使用方法)，判断标准为dM/dT不大于0.002。

式Ⅰ化合物制备例(申请号为PCT/CN2018/079086的申请中实施例20的制备方法)

8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺1(即式I化合物)

第一步

4-氯-6-(2,4-二氟苯基)嘧啶-2-胺1c

在氩气氛下，依次将化合物1a(11g，63.72mmol,韶远科技上海有限公司)、(2,4-二氟苯基)硼酸1b(10.06g，63.72mmol，上海书亚科技有限公司)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(4.66g，6.37mmol)和碳酸钾(26.42g，191.17mmol)加入500mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝4:1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应2小时。反应液过滤，滤液分液，水相用乙酸乙酯萃取(200mL×2)，合并有机相，减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系A(二氯甲烷/甲醇体系)纯化，得标题化合物1c(14.04g，产率：91.19％)。

MS m/z(ESI):242.3[M+1]

第二步

5-溴-4-氯-6-(2,4-二氟苯基)嘧啶-2-胺1d

将化合物1c(14.04g，58.11mmol)溶于300mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入N-溴代丁二酰亚胺(11.38g，63.92mmol)，搅拌反应1小时。反应液倒入1L水中，搅拌30分钟，过滤，收集滤饼，真空干燥，得粗品标题化合物1d(16g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):320.0[M+1]

第三步

5-溴-4-(2,4-二氟苯基)-6-肼基嘧啶-2-胺1e

将粗品化合物1d(16g，49.92mmol)溶于250mL乙醇中，加入50mL 85％水合肼，搅拌反应17小时。反应液过滤，滤饼依次用乙醇(20mL×2)、正己烷(20mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物1e(12g，产率：76.05％)。

MS m/z(ESI):316.0[M+1]

第四步

8-溴-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺1f

将化合物1e(4g，12.65mmol)和原甲酸(三)乙酯(2.25g，15.18mmol)溶解于50mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应2小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用5mL乙醇打浆0.5小时，过滤，滤饼用无水乙醚(10mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物1f(3.85g，产率：93.37％)。

MS m/z(ESI):326.2[M+1]

第五步

8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺1

氩气氛下，依次将2-(二氟甲基)-6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡啶1g(247.56mg，919.96μmol，采用专利申请“WO2011095625A1”公开的方法制备而得)、化合物1f(200mg，613.31μmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(44.88mg，61.33μmol)、碳酸钾(254.29mg，1.84mmol)加入12mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5:1)的混合溶剂中，加热至90℃，搅拌2小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A(二氯甲烷/甲醇体系)纯化，所得粗品用高效液相色制备(Waters2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物1，即式I化合物(26mg，产率：11.98％)。

MS m/z(ESI):389.5[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.40(s,1H),8.44(brs,2H),7.54(s,1H),7.40-7.18(m,4H),6.96-6.69(m,1H),2.44(s,3H)。

式Ⅰ化合物生物活性测试例(申请号为PCT/CN2018/079086的部分测试例)

式Ⅰ化合物对腺苷A_2a受体(adenosine A_2a receptor，A_2aR)cAMP信号通路，腺苷A_2b受体(adenosine A_2b receptor，A_2bR)cAMP信号通路，腺苷A₁受体(adenosine A₁receptor，A₁R)cAMP信号通路和腺苷A₃受体(adenosine A₃receptor，A₃R)cAMP信号通路抑制活性。

腺苷A_2a受体

CHO-K1/A_2aR细胞用含有10％胎牛血清和800μg/ml博来霉素的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为10⁶个/ml。在384孔板中每孔加入5μl细胞悬液，2.5μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入2.5μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的乙基咔唑，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：10000，2000，400，80，16，3.2，0.64，0.128，0.0256，0.00512，0.001024nM，乙基咔唑终浓度是20nM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物(Anti-cAMP-Eu-Cryptate)。每孔加入5μl稀释后的cAMP-d2，再加入5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值。

腺苷A₁受体

CHO-K1/A₁R用含有10％胎牛血清和1mg/mlG418的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，然后用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为5×10⁵个/ml。在384孔板中每孔加入12.5μl细胞悬液，6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的毛喉素和N6-环戊基腺苷，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：100000，10000，1000，100，10，1，0.1和0nM，毛喉素的终浓度是10μM，CPA的终浓度是10nM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按照1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物。每孔加入12.5μl稀释后的cAMP-d2，再加入12.5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值。

腺苷A₃受体

CHO-K1/A₃R用含有10％胎牛血清和10μg/ml嘌呤霉素的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为5×10⁵/ml。在384孔板中每孔加入12.5μl细胞悬液，6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的毛喉素和2Cl-IB-MECA，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：100000，10000，1000，100，10，1，0.1和0nM，毛喉素的终浓度是10μM，2Cl-IB-MECA的终浓度是5nM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按照1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物。每孔加入12.5μl稀释后的cAMP-d2，再加入12.5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值。

腺苷A_2b受体(adenosine A_2b receptor，A_2bR)

CHO-K1/A_2bR用含有10％胎牛血清和1mg/ml G418的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为10⁶个/ml。在384孔板中每孔加入5μl细胞悬液，2.5μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入2.5μl用含有20mMHEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的乙基咔唑(Torcis,1691/10)，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：100000，10000，1000，100，10，1，0.1和0nM，乙基咔唑终浓度是1μM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物。每孔加入5μl稀释后的cAMP-d2，再加入5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值。

式Ⅰ化合物小鼠脑通透性的测定

实验动物操作：C57小鼠4只，雌性，12/12小时光/暗调节，温度24±3℃恒温，湿度50-60％，自由进食饮水。禁食一夜后分别灌胃给药。给药剂量20mg/kg，给药组于给药后0.5h采血后处死(采血量0.5ml)，血样置于肝素化试管中，3500rpm离心10min分离血浆，记为血浆1，于-80℃保存；处死后的动物心脏灌流生理盐水，去除脑组织中多余血液，取脑组织，滤纸吸干残留的血液，记为脑组织1，-80℃保存。另取3只动物取空白血浆和脑组织2，处理方法同给药组。

血浆蛋白结合平衡透析过程：

1)样品制备

用DMSO溶解药物化合物至20mM，得到储备液I；移取适量储备液I，用甲醇稀释得到200μM稀释储备液II；移取10μl储备液II于1.5ml Eppendorf管中，加入990μl空白血浆，混匀得到2μM血浆样品2(DMSO含量≤0.2％)，用于该浓度血浆蛋白结合率的测定。移取上述配好的50μl血浆样品，记为T₀，置于-4℃冰箱保存待测。

2)实验过程

取RED装置将平衡透析管插至于96孔的底板中。取上述配制好的含待测物血浆样品2及相应空白血浆样品300μl，置于红色标记的孔中(plasma chamber)。取500μl pH 7.4磷酸缓冲盐溶液，置于并排红色标记的另一孔中(buffer chamber)。按上述步骤处理方法，每个化合物每一个浓度为2个样本。完毕用封条(sealing tape)覆盖96孔板，并将整块底板放至热混仪中，以400rpm转速，于37℃平衡4h。孵化结束后，从热混仪中取出96孔底板装置，完成平衡透析。取25μl平衡后的血浆样品或透析液样品，加入25μl相对应的未平衡的不含药的空白磷酸盐缓冲液或不含药的空白血浆，加入内标(乙腈配制)200μl，涡旋混合5min，离心10min(4000rpm)，取上清液进行LC/MS/MS分析。T₀样品不经孵化，直接采用上述建立的LC/MS/MS法分别测定总药物(plasma chamber)及游离药物(buffer chamber)与内标物色谱峰面积比，计算游离百分率(f_{u plasma}％)。

脑组织蛋白结合平衡透析过程：空白脑组织2按照稀释因子＝11的比例用pH7.4PBS将脑组织制成空白脑匀浆，加入化合物配制成2μM脑匀浆，其余与血浆蛋白结合的操作相同，采用建立的LC/MS/MS法分别测定总药物(brain homo chamber)及游离药物(buffer chamber)与内标物色谱峰面积比，计算游离百分率(f_{u brain hom}％)。

脑通透试验数据计算方法：

1)采用建立的LC/MS/MS法分别测定小鼠给药后0.5h的血浆1和脑组织1中的药物浓度，此为总浓度(C_total,p和C_total,b)；

2)采用RED Device Inserts装置，用平衡透析法分别测定化合物在小鼠血浆和脑组织中的蛋白结合率，从而计算出游离百分率(f_{u plasma}％,f_{u brain}％)；

血浆游离百分率(f_{u plasma}％)＝C_buffer/C_plasma×100％；

脑匀浆游离百分率(f_{u brain hom}％)＝C_buffer/C_{brain hom}×100％；

脑组织游离百分率(f_{u brain}％)＝f_{u brain hom}/(Df-(Df-1)×f_{u brain hom})×100％；此处Df＝11

3)采用以下公式计算血脑通透指数Kp-unbound。

化合物	血脑通透指数(Kp-unbound)
		式Ⅰ化合物	0.015

实施例1、甲磺酸盐α晶型的制备

将式I化合物约200mg，加乙腈4ml不溶，加入1.1eq的5mol/L的甲磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，将该产物定义为式I化合物甲磺酸盐α晶型，XRPD谱图如图1。DSC谱图如图2，吸热峰峰值为231.34℃；TGA谱图如图3。

DVS表征：样品在25℃的条件下，在20.0％RH-80.0％RH之间，随着湿度的增加吸水量也在增加，重量变化为0.1069％，引湿增重小于0.2％，该样品无或几乎无引湿性。在正常储存条件(即25℃湿度60％)，吸水约为0.1027％；在加速试验条件(即湿度70％)，吸水约为0.1233％；在极端条件(即湿度90％)，吸水约为0.2245％。DVS检测后晶型未发生转变。DVS谱图如图4，DVS检测前后X-射线粉末衍射对比谱图如图5。

表1、甲磺酸盐α晶型的特征峰

实施例2、甲磺酸盐α晶型的制备

将式I化合物约20mg，加丙酮0.6ml不溶，加入1.1eq的5mol/L的甲磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为甲磺酸盐α晶型。

实施例3、甲磺酸盐α晶型的制备

将式I化合物约20mg，加乙酸异丙酯0.4ml不溶，加入1.1eq的5mol/L的甲磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为甲磺酸盐α晶型。

实施例4、甲磺酸盐α晶型的制备

将式I化合物约20mg，加异丙醇0.4ml不溶，加入1.1eq的5mol/L的甲磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为甲磺酸盐α晶型。

实施例5、甲磺酸盐α晶型的制备

将式I化合物约20mg，加正庚烷0.4ml不溶，加入1.1eq的5mol/L的甲磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为甲磺酸盐α晶型。

实施例6、甲磺酸盐α晶型的制备

将式I化合物约20mg，加甲基叔丁基醚0.4ml不溶，加入1.1eq的5mol/L的甲磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为甲磺酸盐α晶型。

实施例7、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约200mg，加乙腈4ml不溶，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温打浆，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，将该产物定义为式I化合物对甲苯磺酸盐β晶型，XRPD谱图如图6。DSC谱图如图7，吸热峰峰值为238.24℃；TGA谱图如图8。

DVS表征：样品在25℃的条件下，在20.0％RH-80.0％RH之间，随着湿度的增加吸水量也在增加，重量变化为0.3068％，引湿增重小于2％但不小于0.2％，该样品略有引湿性。在正常储存条件(即25℃湿度60％)，吸水约为0.2686％；在加速试验条件(即湿度70％)，吸水约为0.3332％；在极端条件(即湿度90％)，吸水约为0.5133％。DVS检测后晶型未发生转变。DVS谱图如图9，DVS检测前后X-射线粉末衍射对比谱图如图10。

表2、对甲苯磺酸盐β晶型的特征峰

序号	2-Theta	d(A)	I％
				峰1	5.554	15.89867	100.0
峰2	7.778	11.35730	15.4
				峰3	11.616	7.61214	5.4
峰4	12.350	7.16145	3.2
				峰5	12.881	6.86708	1.7
峰6	13.916	6.35864	18.5
				峰7	15.067	5.87560	12.3
峰8	16.340	5.42026	2.3
				峰9	17.412	5.08903	44.4
峰10	18.956	4.67779	10.3
				峰11	19.406	4.57048	7.6
峰12	19.897	4.45876	10.3
				峰13	20.572	4.31399	4.1
峰14	21.836	4.06705	11.4
				峰15	22.301	3.98327	10.8
峰16	23.046	3.85604	10.1
				峰17	23.682	3.75389	4.5
峰18	24.356	3.65155	7.0
				峰19	24.942	3.56713	19.5
峰20	26.839	3.31908	7.6
				峰21	27.247	3.27040	4.7
峰22	27.956	3.18900	1.6
				峰23	28.514	3.12783	1.9
峰24	29.498	3.02567	2.2
				峰25	30.483	2.93016	1.5
峰26	31.719	2.81870	2.7

实施例8、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约20mg，加甲醇0.3ml溶解，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温缓慢挥发析晶，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例9、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约20mg，加乙醇0.6ml不溶，升温至45℃，继续搅拌30分钟后，缓慢降至室温，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温缓慢挥发析晶，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例10、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约20mg，加丙酮0.6ml不溶，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例11、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约20mg，加乙酸异丙酯0.4ml不溶，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例12、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约20mg，加异丙醇0.4ml不溶，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例13、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约20mg，加正庚烷0.4ml不溶，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例14、对甲苯磺酸盐β晶型的制备

将式I化合物约20mg，加甲基叔丁基醚0.4ml不溶，加入1.1eq的4mol/L的对甲苯磺酸，室温打浆1天，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，该产物为对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例15、硫酸盐γ晶型的制备

将式I化合物约200mg，加丙酮4ml不溶，加入1.1eq的6mol/L的硫酸，室温打浆，固体离心，真空干燥，得到产物。经X-射线粉末衍射检测，将该产物定义为式I化合物硫酸盐γ晶型，XRPD谱图如图11。DSC谱图如图12，第一吸热峰峰值为99.72℃，第二吸热峰峰值为171.90℃；TGA谱图如图13。

DVS表征：样品在25℃的条件下，在20.0％RH-80.0％RH之间，随着湿度的增加吸水量也在增加，重量变化为17.47％，引湿增重不小于15％，该样品极具引湿性。在正常储存条件(即25℃湿度60％)，吸水约为8.43％；在加速试验条件(即湿度70％)，吸水约为12.30％；在极端条件(即湿度90％)，吸水约为42.54％。DVS谱图如图14。

表3、硫酸盐γ晶型的特征峰

实施例16、影响因素实验

将式I化合物甲磺酸盐α晶型和对甲苯磺酸盐β晶型样品敞口平摊放置，考察在加热(40℃、60℃)、光照(4500Lux)、高湿(RH 75％、RH 92.5％)条件下样品的稳定性，取样考察期为30天。

实验结果：

表4、式I化合物甲磺酸盐α晶型和对甲苯磺酸盐β晶型影响因素实验结果

实验结论：

由表4的影响因素实验结果表明：在光照、高温40℃、高温60℃、高湿75％、高湿92.5％条件下，放置30天，甲磺酸盐α晶型的物理化学稳定性好，优于对甲苯磺酸盐β晶型。

实施例17、甲磺酸盐α晶型长期稳定性试验

式I化合物甲磺酸盐α晶型进行长期(25℃、60％RH)稳定性考察。

表5、甲磺酸盐α晶型长期稳定性实验结果：

25℃，60％RH条件下放置6个月后，甲磺酸盐α晶型的晶型未变；结合表5的数据，表明甲磺酸盐α晶型长期放置后物理、化学稳定性好。

Claims (21)

1.式Ⅰ化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺的甲磺酸盐，

2.式Ⅰ化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺的甲磺酸盐的α晶型，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱中，在2θ为7.545、8.520、10.798、11.475、17.322、18.881、20.779处有特征峰。

3.如权利要求2所述的α晶型，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱中，在2θ为7.545、8.520、10.798、11.475、17.322、18.881、19.409、20.779、21.881、23.249、24.402、24.713、25.607、29.279处有特征峰。

4.如权利要求2所述的α晶型，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱中，在2θ为7.545、8.520、10.798、11.475、13.293、14.289、15.175、15.909、16.474、17.322、18.881、19.409、20.779、21.881、23.249、24.402、24.713、25.607、26.107、26.602、26.852、28.024、29.001、29.279、29.845、31.246、32.097、33.432、35.012处有特征峰。

5.式Ⅰ化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺的对甲苯磺酸盐。

6.式Ⅰ化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺的对甲苯磺酸盐的β晶型，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱中，在2θ为5.554、7.778、13.916、15.067、17.412、18.956、19.897、21.836、22.301、24.942处有特征峰。

7.式Ⅰ化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺的硫酸盐。

8.式Ⅰ化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺的硫酸盐的γ晶型，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱中，在2θ为14.248、19.522、20.456、21.377、21.957、22.840、23.273、24.153、25.065、25.703、26.060、27.357、28.204、28.908、29.614、32.740、33.306处有特征峰。

9.如权利要求2-4、6、8任一项所述的晶型，其特征在于其2θ值误差范围为±0.2。

10.一种制备权利要求1所述的甲磺酸盐的方法，包括将化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺与甲磺酸成盐的步骤。

11.一种制备权利要求2-4任一项所述的式Ⅰ化合物甲磺酸盐的α晶型的方法，包括以下步骤：取一定量的式I化合物，加入适量乙腈、丙酮、乙酸异丙酯、异丙醇、正庚烷或甲基叔丁基醚不溶，加入一定量的甲磺酸，室温打浆析晶。

12.一种制备权利要求5所述的对甲苯磺酸盐的方法，包括将化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺与对甲苯磺酸成盐的步骤。

13.一种制备权利要求6所述的式Ⅰ化合物甲苯磺酸盐的β晶型的方法，包括以下步骤：取一定量的式I化合物，加入适量乙腈、乙醇、丙酮、乙酸异丙酯、异丙醇、正庚烷或甲基叔丁基醚不溶，或者加入适量甲醇溶解，加入一定量的对甲苯磺酸，室温打浆析晶。

14.一种制备权利要求7所述的硫酸盐的方法，包括将化合物8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺与硫酸成盐的步骤。

15.一种制备权利要求8所述的式Ⅰ化合物硫酸盐的γ晶型的方法，包括以下步骤：取一定量的式I化合物，加入适量丙酮不溶，加入一定量硫酸，室温打浆析晶。

16.一种药物组合物，其特征在于含有至少一种权利要求1-9任一项所述的盐或晶型，还包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

17.一种制备药物组合物的方法，其特征在于使至少一种权利要求1-9任一项所述的盐或晶型与至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。

18.权利要求1-9任一项所述的盐或晶型或权利要求16所述的药物组合物在制备用于治疗通过对A2a受体抑制而改善的病况或病症的药物中的用途。

19.权利要求1-9任一项所述的盐或晶型或权利要求16所述的药物组合物在制备治疗选自肿瘤、抑郁症、认知功能病症、神经退行性病症、注意力相关病症、锥体外症候群、异常运动障碍、肝硬化、肝纤维化、脂肪肝、皮肤纤维化、睡眠障碍、中风、脑损伤、神经炎症和成瘾行为的疾病的药物中的应用。

20.根据权利要求19所述的用途，其中肿瘤选自黑色素瘤、脑瘤、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、神经母细胞瘤、肉瘤、骨软骨瘤、骨瘤、骨肉瘤、精原细胞瘤、睾丸肿瘤、子宫癌、头颈肿瘤、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、真性红细胞增多症、白血病、甲状腺肿瘤、输尿管肿瘤、膀胱癌、胆囊癌、胆管癌、绒毛膜上皮癌、儿科肿瘤。

21.根据权利要求19所述的用途，其中神经退行性病症选自帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、共济失调毛细血管扩张症、牛海绵状脑病、克雅二氏病、小脑萎缩症、多发性硬化症、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症。

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