CN105039418A - 利用金属结合蛋白制备金属纳米颗粒的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种利用重金属结合蛋白制备重金属纳米颗粒的方法。特别涉及一种用于制备重金属结构体的方法，其包括步骤：在含重金属离子的培养基中培养转化有重金属结合蛋白编码基因的微生物，从而在该微生物中生产重金属结构体；以及收集所产生的重金属结构体以及根据所述方法产生的重金属结构体的纳米颗粒。与通过物理结合金属材料的方式制备重金属结构体现有方法不同，本文所公开的量子点能够通过在细胞表达重金属结合蛋白来生产。此外，由于该量子点能够解决有机荧光团的缺陷即光学稳定性问题，因而该量子点是有用的。

Description

利用金属结合蛋白制备金属纳米颗粒的方法
本申请是2007年4月17日递交的中国发明专利申请200780019089.4的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种利用重金属结合蛋白来制备重金属纳米颗粒的方法，特别涉及一种制备重金属结构体的方法，该方法包括在含重金属离子的培养基中对转化有重金属结合蛋白编码基因的微生物进行培养，从而在微生物中产生重金属结构，并收集所产生的重金属结构体以及根据所述方法产生的重金属结构体的纳米颗粒。
背景技术
量子点是纳米级的半导体颗粒，当它们被诸如光线等能量激发时会发光，并且所发出光的颜色取决于颗粒的尺寸。也就是说，如果颗粒尺寸减小从而减小了颗粒维数时，电子云密度及其能量发生改变，由此该颗粒的特征会基于其维数而发生改变。例如，在二维系统中发现量子霍尔效应，但该效应并不出现在三维系统中。在本文中，术语“减小的维数”严格意义上意指电子被束缚在比德布罗意波长还小的区域中。零尺寸的量子点不是没有面积的点，而是指具有小于德布罗意波长的三维尺寸。在量子力学中，所有具备动量的物质颗粒的波即德布罗意波长会基于物质的不同而有所不同，并且对半导体材料而言大约为10nm。
如图1所示，量子点总体上是由核和壳所构成的球形，除图1所示的Zn、S及Cd之外还包括其它各种重金属。
量子点的制备方法大体上能够分为两种：利用诸如激光等光源的平版法；以及化学合成法。通过化学方法合成量子点的优点在它能够利用比平版相对简单的系统来生产量子点，但是该方法仍有许多技术问题有待解决以便以高成本效益方式生产大量的量子点。同样地，与利用现有的批量方法所制备的量子点相比，利用分子化学技术所制备的量子点具有优良的光学稳定性，并且它们的光学特性能够被控制从而基于纳米材料的尺寸大小、形状及成分发出各种不同波长的光线。有鉴于此，把基于量子点的纳米材料应用于生物领域成为可能。这表明基于量子点的纳米材料不仅能够广泛地用于生物传感器还能够用于体外光学成像的造影剂，这些可能性近来已经为多项研究所证实(Jovin,Nat.Biotechnol.,21:32,2003；Wuetal.,Nat.Biotechnol.,21:41,2003；Alivisatos,Nat.Biotechno22：47，2004；Gaoetal.,Nat.Biotechno.,22:969,2004；Lidkeetal.Nat.Biotechnol,22:198,2004)。
作为该可能性的典型例子，开发了一种能够体外示踪活细胞信号传导的技术，该技术的一个例子是HER2/neu途径的方法。这克服了已有的有机荧光团的缺陷，因为荧光团容易失去其光学活性从而无法对连续的细胞变化进行示踪(Wuetal.,Nat.Biotechnol.,21:41,2003；Lidkeetal.,Nat.Biotechnol.,22:198,2004)。同样地，为了对活细胞体内由erbB/HER受体介导的信号传导进行示踪，将上皮细胞生长因子(EGF)结合量子点并通过将它结合到上皮细胞生长因子受体上(EGFR)使其激活。然后对量子点耦合的EGFR耦合物结合入细胞的过程进行示踪(Lidkeetal.,Nat.Biotechnol.,22:198,2004)。该方法使得对活细胞内的生物过程进行实时观测成为可能。
进一步地，为了克服体内穿透性不足这一缺陷，开发了能够利用近红外范围内波长的半导体纳米晶体，从而使体内图像收集成为可能(Gaoetal.,Nat.Biotechnol.,22:969,2004)。在该方法中，为了有效地使量子点溶解并且同时有效地将量子点传递到体内，为量子点(ZnS-包覆CdSe)包被多嵌段共聚物，并把单克隆抗体结合到包被共聚物的反应基团上。
此外，为了克服光学成像体内穿透性低这一缺陷，具有近红外波长的量子点被用于对大鼠腋窝下的前哨淋巴结进行光学成像(Kimetal.,Nat.Biotechnol.,22:93,2004)。该纳米材料表现出不同于通过已有方法获得量子点所表现出的物理性质，并且由此具备应用于核磁共振成像的前景。
同时，处理环境中重金属的方法大体上包括化学、物理和生物处理方法。生物处理方法利用了微生物自身的生物机制以及由微生物引起的机制，包括生物吸附和生物聚集、氧化和还原、金属有机复合物和不溶性复合物的形成，为恢复被重金属污染的环境奠定了重要技术基础(VallsanddeLorenzo,FEMSMicrobiol.Rev.,26:327,2002)。此外，随着分子生物学的发展，近期在开发具备改善的结合重金属性质方面的尝试表明对现有生物处理方法进行改善是可能的。微生物合成重金属结合蛋白以通过生物聚集来去除体内外的重金属，并且这些蛋白质涉及到胞外金属离子的储存或浓度的调节。
近来，发现名为植物螯合肽的肽可以通过将真菌和植物暴露在重金属中的方法来产生，所述肽天然就能结合诸如铅、汞及镉等有害元素从而除去这些元素。植物螯合肽具有(γ-Glu-Cys)n-Gly(n＝2-7)结构并通过形成肽-金属的结合来聚集金属离子(Cobbett,Curr.Opin.PlantBiol.3:211,2000)。此外，作为其它种类的重金属结合蛋白，名为金属硫蛋白的低分子量蛋白质已经得到了很多研究，并且这些蛋白质具有丰富的半胱氨酸并能结合镉、锌、镍、铜等等(Hamer,Annu.Rev.Biochem.,55:913,1986；WuandLin,Biosens.Bioelectron.,20:864,2004)。
同时，涉及量子点制备的专利文献包括：韩国专利号10-0540801，名为“Methodofpreparingquantumdotsusingmetalpowder”；韩国专利号10-0526828，名为“Methodofpreparingquantumdotshavinguniformdistributionbyirradiatingmagneticmembraneorsemiconductormembranewithlaser”；韩国专利10-0541516，名为“methodforformingquantumdotsofsemiconductormaterial”；以及韩国专利10-0279739，名为“Methodforformingnanometer-sizesilicondots”。然而，这些方法都是通过金属材料的物理结合来制备量子点的方法。
本发明人已经注意到量子点成分是通过镉(Cd)、硒(Se)、锌(Zn)以及碲(Te)的常规组合来合成，在此利用生物工程方法对重金属结合蛋白进行了表达。结果，本发明人发现在体内经济地合成量子点是可能的，并且也利用了上述生物系统来制备光学性能稳定的量子点，由此完成了本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有生产重金属结构体能力的重组微生物，以及制备重金属结构体纳米颗粒的方法，该方法包括在含培养基的重金属环境中培养重组微生物。
本发明的另一目的在于提供改善纳米颗粒的方法，该方法包括把该纳米颗粒结合至选自下列物质中的至少一种：化学物质、配体、金属、DNA以及蛋白质。
为了实现上述目的，本发明提供了制备重金属结构体纳米颗粒的方法，该方法包括步骤：在含重金属离子的培养基中培养微生物，该微生物转化有一个编码一个或多个重金属结合蛋白的基因，从而在微生物中产生重金属结构体；以及收集所产生的重金属结构体。
本发明也提供了重金属结构体的纳米颗粒，其通过所述的方法制得，直径5-120nm，且呈球形。
本发明也提供了具有生产重金属结构体能力的重组微生物，该微生物中转化有含重金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体。
本发明也提供了一种改善纳米颗粒的方法，该方法包括将纳米颗粒结合选自下列物质中的至少一种：化学材料、配体、金属、DNA以及蛋白质。
本发明也提供了改善纳米颗粒的方法，该方法包括将蛋白质结合纳米颗粒，并用可识别标记结合蛋白的材料的蛋白质、结合目标蛋白的经标记配体或者特异性结合至目标蛋白的抗体来处理该结合蛋白。
本发明也提供了改善纳米颗粒的方法，该方法包括步骤：(a)用生物素包被纳米颗粒的表面；(b)在包被了生物素的表面上包被链霉亲和素；(c)用至少一种选择下列组中的化学残基：氨基、醛基和羧基对链霉亲和素包被的表面进行修饰；并且(d)用金或银包被经修饰的表面。
本发明的其它特点和实施方式将在下面的“具体实施方式”以及所附“权利要求”中作更清楚地阐述。
附图说明
图1示出了量子点的结构。
图2为本发明所述pTJ1-AtPCS表达载体的基因谱图。
图3为本发明所述pTJ1-PpMT表达载体的基因谱图。
图4示出在含诸如镉、锌及硒离子的重金属的培养基中表达植物螯合肽合成酶的E.coli的荧光扫描图。
图5示出在本发明的表达植物螯合肽合成酶的E.coli细胞内聚集的重金属结构体的激光共聚焦扫描显微图。在图5中，“a”：E.coli细胞显示出与420nm发射光谱相对应的蓝色荧光；“b”：E.coli细胞显示出700nm发色光谱的黄色荧光；“c”：实时图像；以及“d”：“a”和“b”的结合图。同样地，图中所有的刻度条都表示5μm。
图6示出在本发明的表达植物螯合肽合成酶的E.coli中聚集的重金属结构体的电子显微(TEM)图。在图6中，“a”：不表达植物螯合肽合成酶的对照组；b-d：在本发明的表达植物螯合肽合成酶的E.coli中聚集的不同放大倍数的重金属结构体的TEM图。
图7示出根据本发明，当表达植物螯合肽合成酶的E.coli在含镉(Cd)、锌(Zn)及铯(Cs)离子的培养基中进行培养时，聚集在细胞中的重金属结构体的能谱X射线图(EDS)和TEM分析结果。
图8示出根据本发明，当表达植物螯合肽合成酶的E.coli在含镉(Cd)、锌(Zn)及硒(Se)离子的培养基中进行培养时，聚集在细胞中的重金属结构体的能谱EDS和TEM分析结果。
图9示出根据本发明，当表达植物螯合肽合成酶的E.coli在含镉(Cd)、锌(Zn)及碲(Te)离子的培养基中进行培养时，聚集在细胞中的重金属结构体的能谱EDS和TEM分析结果。
具体实施方式
在本发明中，为了将重金属结合蛋白基因引入E.coli并在其中表达，然后依赖于由E.coli细胞中的金属结合蛋白表达所产生的重金属吸附和聚集来合成量子点，构建了可单独表达或组合表达植物螯合肽合成酶及金属硫蛋白的编码基因的质粒，所述编码基因编码重金属结合蛋白。然后，用该质粒转化E.coli并进行培养以在细胞中产生重金属结合蛋白，该细胞随后在含各种重金属离子的培养基中进行培养，并通过质量分析和荧光分析检测在细胞中所合成的重金属结构体是否是量子点。
一方面，本发明涉及制备重金属结构体纳米颗粒的方法，该方法包括步骤：在含重金属离子的培养基中培养微生物，该微生物转化有重金属结合蛋白编码基因，从而在微生物中产生重金属结构体；以及收集所产生的重金属结构体，通过所述方法获得的重金属结构体纳米颗粒的直径为5-120nm并呈球形。
在本发明中，该重金属结构体优选纳米颗粒，并且该纳米颗粒优选是量子点。在本发明中，该重金属结合蛋白能够选自下列组中：智人(Homosapiens)、拟南芥(Arabidopsisthaliana)、观赏烟草(Ornamentaltobacco)、小家鼠(Musmusculus)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)及大肠杆菌(Escherichiacoli)，但本发明并不仅限于此。
在本发明中，植物螯合肽合成酶以及金属硫蛋白被解释为重金属结合蛋白，但本领域技术人员容易想到其它具备等同或类似于所述蛋白性质的蛋白或肽也可以用于本发明中。
在另一方面，本发明涉及具备生产重金属结构体能力的微生物，该微生物转化有含重金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体。
在本发明中，重金属结合蛋白优选植物螯合肽合成酶或金属硫蛋白，并且所述植物螯合肽合成酶编码基因的一部分优选具有SEQIDNO:5的碱基序列。
本发明所述方法包括对转化有重组载体的E.coli进行培养的步骤以便在E.coli细胞中表达重金属结合蛋白，该E.coli可单独或组合表达拟南芥来源的植物螯合肽合成酶以及恶臭假单胞菌来源的金属硫蛋白。在本发明中，重金属结合蛋白优选融合于所述蛋白的C末端或者N末端。
用于本发明的重金属的特定实施例包括镉(Cd)、锌(Zn)、硒(Se)、碲(Te)、铯(Cs)、铜(Cu)、氯(Cl)、铅(Pb)、镍(Ni)、锰(Mn)、汞(Hg)、钴(Co)及铬(Cr)。
重组质粒pTJ1-AtPCS，其被用于本发明来转化E.coli从而表达植物螯合肽合成酶，包括植物螯合肽合成酶编码基因、青霉素抗性基因以及用于诱导表达的trc启动子。为了在E.coli中表达植物螯合肽合成酶，植物螯合肽合成酶蛋白编码基因通过合成两个来自与拟南芥染色体DNA互补的碱基序列(cDNA)的引物并利用该引物进行PCR而得以构建。同样地，利用GenBank中所储存的碱基序列通过PCR法从恶臭假单胞菌的染色体DNA中获取金属硫蛋白的重金属结合基因，并把该基因进行部分重叠PCR，从而获得植物螯合肽合成酶与金属硫蛋白的融合基因。氨苄青霉素抗性基因则能够用于菌株的筛选。
从菌株中获得的植物螯合肽合成酶和金属硫蛋白可以单独或组合表达，含有表达于其中的蛋白的细胞置于含重金属的培养基中培养并对各个生长阶段以及各种重金属浓度下进行观察。结果，发现重金属被吸收并聚集在细胞中形成了具有规则排列的量子点。体内量子点经过简单的细胞破碎工序并通过具有几百纳米孔尺寸的膜滤除破碎的细胞，由此容易地收集到量子点。
本领域技术人员容易想到不仅上述重金属结合蛋白而且包括蛋白、DNA、媒介物以及代谢物在内的所有重金属所能结合的胞内成分都能够被应用于本发明，而并不仅限于本发明的实施例。从较高等的生物体到微生物中都发现有重金属结合蛋白，该重金属结合蛋白首次发现于马的肾脏细胞中(MargosheandVallee,J.Am.Chem.Soc.,79:4813,1957)。目前已知在现有知识中典型的种包括智人(Homosapiens)、拟南芥(Arabidopsisthaliana)、观赏烟草(Ornamentaltobacco)、小家鼠(Musmusculus)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)及大肠杆菌(Escherichiacoli)。因此，本领技术人员容易想到各种金属结合区域都能够用于本发明中。
在本发明中，微生物优选从格兰氏阳性菌、格兰氏阴性菌、放线菌、酵母菌及真菌中选择。在本发明中，重组微生物优选E.coli。
在本发明中，微生物优选经过如此修饰：其不产生使所表达蛋白发生降解的胞内和胞外蛋白酶，从而有利于重金属结合蛋白的胞外表达。
在本发明中，含重金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体在该重金属结合蛋白的部分氨基酸序列中有缺失或位点特异性突变，从而该重金属结合蛋白有利于重金属结合。
在本发明中，该含重金属结合蛋白编码基因或其片段表达载体优选具有图2所示酶切图谱的pTJ1-AtPCS。同样地，该含有重金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体优选具有图3所示酶切图谱的pTJ1-PpMT。
根据本发明的重金属结构体纳米颗粒容易结合到各种化学材料或生物材料上，并由此能够用于各种目的的改造。因此，在另一方面，本发明涉及改善纳米颗粒的方法，其包括将该纳米颗粒结合选自化学材料、配体、金属、DNA及蛋白中的至少一种。
在一个实施例中，根据本发明的纳米颗粒能够通过如下方法得以改善：将蛋白质结合该纳米颗粒并用具有识别标记结合蛋白的物质的蛋白质、结合在该目标蛋白上的标记配体或者特异性结合该目标蛋白的抗体来处理该结合蛋白。
在另一实施例中，根据本发明的纳米颗粒能够通过包括如下步骤的方法进行改善：(a)用生物素包被纳米颗粒的表面；(b)在包被了生物素的表面上包被链霉亲和素；(c)用至少一种选择下列组中的化学残基：氨基、醛基和羧基对链霉亲和素包被的表面进行修饰；并且(d)用金或银包被经修饰的表面。
实施例
下文参考实施例对本发明作进一步具体描述。然而本领域技术人员容易想到提供这些实施例是为了对本发明作更充分的描述，本发明的范围并不仅限于此。
实施例1：重金属结合蛋白表达载体的制备
(1)植物螯合肽合成酶表达载体的制备
为了获得合成植物螯合肽合成酶的AtPCS基因(NCBI登录号AF461180)，利用由碱基SEQIDNO:5的序列(拟南芥植物螯合肽合成酶)所代表的拟南芥互补DNA(cDNA)作为模板并利用SEQIDNO:1与SEQIDNO:2的引物进行PCR。PCR反应以下列条件进行：在94℃预变性7min；在94℃变性1min，循环30次；在55℃退火1min；在72℃延伸1min；然后最终在72℃延伸7min。
SEQIDNO:1：5′-GGAATTCATGGCTATGGCGAGTTTAT-3′
SEQIDNO:2：5′-CCCAAGCTTATTAATAGGCAGGAGCAGCGAG-3′
利用琼脂糖凝胶电泳法分离由PCR反应所获得的1.5-kbDNA片段，并用2种限制性酶EcoRI和HindIII酶切。同时，用两种限制性酶EcoRI和HindIII对具有强诱导tac启动子的pTac99A质粒进行酶切(ParkandLee,J.Bacteriol.,185:5391,2003)。然后，该质粒通过T4DNA连接酶组装并连接到DNA片段上，并且连接的质粒通过电穿孔转化入E.coliDH5α。转化菌株在含抗生素氨苄青霉素(100ug/L)的LB平板培养基中进行筛选，由此获得pTJ1-AtPCS重组质粒(图2)。在所制备的重组质粒pTJ1-AtPCS中，被用作重金属结合蛋白的AtPCS基因可通过强诱导tac启动子而得以表达。
(2)金属硫蛋白表达载体的制备
为了获得合成金属硫蛋白的PpMT基因(NCBI登录号NC_002947REGION:3696753..3696977)，利用由碱基序列SEQIDNO:6(恶臭假单胞菌KT2440金属硫蛋白)的序列所代表的恶臭假单胞菌KT2440基因组DNA作为模板并以SEQIDNO:3与SEQIDNO:4的引物进行PCR。PCR反应以下列条件进行：在94℃预变性7min；在94℃变性1min，循环30次；在55℃退火1min；在72℃延伸1min；然后最终在72℃延伸7min。
SEQIDNO:3：5′-GGAATTCATGAACGATCAACGCTGCGC-3′
SEQIDNO:4：5′-AACTGCAGTTAGGGCGAGATCGGATCACT-3′
利用琼脂糖凝胶电泳法分离由PCR反应所获得的230bpDNA片段，并用2种限制性酶EcoRI和PstI酶切。同时，用两种限制性酶EcoRI和PstI对具有强诱导tac启动子的pTac99A质粒进行酶切。然后，该质粒通过T4DNA连接酶组装并连接到DNA片段上，并且连接的质粒通过电穿孔转化入E.coliDH5α。转化菌株在含抗生素氨苄青霉素(100ug/L)的LB平板培养基中进行筛选，由此获得pTJ1-PpMT重组质粒(图3)。在所制备的重组质粒pTJ1-PpMT中，被用作重金属结合蛋白的PpMT基因可通过强诱导tac启动子而得以表达。
作为用于表达重组蛋白宿主细胞，诸如E.coli和Bacillussubtillis等能够在短时间内进行高浓度培养、容易进行基因改造并具备良好生理特性的原核细胞已经被广泛地使用。然而，为了解决包括转录后修饰、分泌、三维活性结构以及蛋白质激活等各种问题，包括单细胞真核细胞、酵母菌(Pichiapastoris、Saccharomycescerevisiae、Hansenulapolymorpha等等)、丝状真菌、昆虫细胞、植物细胞以及哺乳动物细胞在内的从微生物到高等生物体的各种生物体近来都被用作生产蛋白质的宿主细胞。因此，不仅可以利用实施例中所述的E.coli细胞而且也可以利用其它宿主细胞，这对本领域技术人员而言是显而易见的。
实施例2：表达重组质粒pTJ1-AtPCS的E.coli的荧光分析
通过培养具有强诱导tac启动子的转化重组质粒pTJ1-AtPCSd的E.coliDH5α制备了植物螯合肽合成酶。基于该目的，将转化的E.coli接种于含100mLLB液体培养基的500mL摇瓶中，其中所述液体培养基中含有重金属离子(5mMCdCl2·2.5H2O、ZnCl2、SeO2、TeCL4及CsCl2)并且在37℃培养。该pTJ1-AtPCS重组质粒具有tac启动子，并且加入IPTG来诱导基因表达。为此，用分光光度计在600nm波长下对培养基进行检测，当其光密度达到0.6时，加入1mMIPTG以诱导基因表达。诱导表达4小时后，该培养基在4℃以6000rpm离心5min。然后，弃上清，用10mLPBS缓冲液(pH7.4)洗涤沉淀一次，在4℃以6000rpm再次离心5min，然后悬浮于10mLPBS缓冲液中。将100uL悬浮液样品加到96孔板的各孔中并利用荧光光度计(MolecularDevices，USA)在360-700nm的发射光谱下进行分析(图4)。如图4所示，可以看到在320nmUV激发光下出现强烈的发射光谱峰值约为420nm的荧光信号。这显示了具有特征性荧光信号的由量子点产生的材料进入到了E.coli菌株中。
同样地，用蒸馏水洗涤该表达植物螯合肽合成酶的E.coli菌株，并固定于聚L-赖氨酸包被的玻片上并用盖玻片覆盖。随后，利用激光共聚焦扫描显微镜(LSM510，CarlZeiss，Germany)对聚集在细胞内的重金属荧光图像进行分析(图5)。结果，如图5所示，可以在E.coli细胞中观察到图4中对应于约420nm发射波长的蓝色荧光(a)以及发射波长约为700nm的黄色荧光(b)。因此，诸如量子点等纳米颗粒的特征性荧光也可在本发明的胞外重金属结构体中观察到。图5中，(c)为实时图，(d)表示图(a)和(b)的合并图。同样地，图中所有刻度条都代表5μm。
实施例3：在表达重组质粒pTJ1-AtPCS的E.coli中所合成的体内重金 属的特征
为了确证通过IPTG所表达的植物螯合肽合成酶是否能在转化有带诱导tac启动子的重组质粒pTJ1-AtPCS的E.coliDH5α中产生重金属结构体，用蒸馏水洗涤实施例2中的E.coli并在冷冻干燥器中于真空状态下干燥一天，并用TEM(TehnaiG2，FEI，Netherlands)对聚集在细胞中的重金属进行分析。结果，发现重金属结构体的大小和形状是一致的(图6)。此外可以观察到，不出现在未表达植物螯合肽合成酶的对照组(a)中的重金属结构体在表达植物螯合肽合成酶的E.coli中(b)出现了(图6b、6c及6d)。
用图中的刻度条可以确定细胞中所合成的重金属颗粒的大小约为5-120nm，当然本发明的范围并不仅限于该大小而是有可能制备各种大小重金属颗粒。同样地，可以发现在E.coli细胞中形成了作为重金属颗粒特异性结构的格子状结构(图6c及6d)。
进一步地，利用TEM对由表达植物螯合肽合成酶的E.coli所吸收的重金属结构进行EDS分析(TechnaiG2，FEI，Netherlands)。在此，对显微图中作标记部分的重金属结构体作了分析，结果，在培养基中所添加成分中清除了镉(Cd)、锌(Zn)及铯(Cs)(图7)。
图7示出了，根据本发明当具有表达于其中的植物螯合肽合成酶的E.coli在含镉(Cd)、锌(Zn)及铯(Cs)各5mM的培养基中培养后，聚集在细胞中的重金属结构体的EDS和TEM分析结果。如图7所示，可以发现除了可能出现于生物体E.coli中的碳(C)和氧(O)、以及通常存在于E.coli细胞中的钠(Na)和氯(Cl)之外，锌(Zn)、镉(Cd)及铯(Cs)为细胞中重金属纳米颗粒的成分。
图8示出了，根据本发明当具有表达于其中的植物螯合肽合成酶的E.coli在含镉(Cd)、锌(Zn)及硒(Se)各5mM的培养基中培养后，聚集在细胞中的重金属结构体的EDS和TEM分析结果。特别地，对电子显微图中所标记的重金属结构体的一部分作了分析，结果发现该结构体含有锌(Zn)和硒(Se)并且硒(Se)的浓度高。
图9示出了，根据本发明当具有表达于其中的植物螯合肽合成酶的E.coli在含镉(Cd)、锌(Zn)及碲(Te)各5mM的培养基中培养后，聚集在细胞中的重金属结构体的EDS和TEM分析结果。对电子显微图中所标记的重金属结构体的一部分作了分析，结果，重金属结构体含有少量锌(Zn)、硒(Se)及镉(Cd)并还具有高浓度的碲(Te)。
图7-图9中EDS所用胞外重金属的尺寸约为30-50nm。此外，通过TEM可观察到具有从约5nm-约120nm各种尺寸的重金属颗粒都出现在细胞中。
工业实用性
如上所述和所证实的，本发明提供一种利用重金属结合蛋白制备的重金属结构的方法、根据所述方法制备的纳米颗粒作为量子点、以及具有生产重金属结构能力的重组微生物，该重组微生物转化有含金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体。与通过物理结合金属材料来制备量子点的现有方法不同，本发明所提供的作为纳米颗粒的体内量子点通过体内所表达酶的活性来合成。根据本发明，能够通过简单的方法以高效且经济的方式来大量生产量子点。此外，由于该量子点能够解决有机荧光团的缺陷即光学稳定性问题，因而该量子点是有用的。
虽然已经参考细节特征对本发明作了具体描述，但是该描述仅为优选实施方式而并非限制本发明的范围，这对本领域技术人员是显而易见的。因此，通过所附权利要求及其等同物来限定本发明的实质范围。

Claims (26)

1.一种用于制备重金属结构体纳米颗粒的方法，该方法包括步骤：在含重金属的培养基中培养转化有重金属结合蛋白编码基因的微生物，以在该微生物中生产重金属结构体；以及收集所产生的重金属结构体。
2.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，该重金属结合蛋白为植物螯合肽合成酶或金属硫蛋白。
3.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，该重金属结合蛋白源自下组中的任一种：智人、拟南芥、观赏烟草、小家鼠、酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、恶臭假单胞菌及大肠杆菌。
4.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，所述微生物选自革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、放线菌、酵母菌及真菌。
5.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，所述微生物经过修饰使其不会产生使所表达蛋白发生降解的胞内和胞外蛋白酶，从而有利于重金属结合蛋白的胞内表达。
6.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，所述微生物为E.coli。
7.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，该重金属为选自镉、锌、硒、碲、铯、铜、氯、铅、镍、锰、汞、钴及铬组成组中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，所述重金属结构体是纳米颗粒。
9.根据权利要求8所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，所述纳米颗粒是量子点。
10.通过权利要求8所述的方法制得的重金属结构体纳米颗粒，其直径为5-120nm且呈球形。
11.一种具有产生重金属结构体能力的重组微生物，所述微生物转化有含重金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体。
12.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述重金属是选自镉、锌、硒、碲、铯、铜、氯、铅、镍、锰、汞、钴及铬组成组中的一种或多种。
13.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述重金属结合蛋白是植物螯合肽合成酶或金属硫蛋白。
14.根据权利要求13所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，编码所述植物螯合肽合成酶的基因部分具有SEQIDNO:5的碱基序列。
15.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述重金属结合蛋白源自下列组中的任一种：智人、拟南芥、观赏烟草、小家鼠、酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、恶臭假单胞菌及大肠杆菌。
16.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述微生物选自革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、放线菌、酵母菌及真菌。
17.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述微生物是E.coli。
18.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述微生物经过修饰使其不会产生使所表达蛋白发生降解的胞内和胞外蛋白酶，从而有利于重金属结合蛋白的胞内表达。
19.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述含有重金属结合蛋白表达基因或其一部分的表达载体在该重金属结合蛋白的氨基酸序列的一部分有缺失或位点特异性突变，从而该重金属结合蛋白有利于重金属结合。
20.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，该含重金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体为具有图2所示酶切图谱的pTJ1-AtPCS。
21.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，该含重金属结合蛋白编码基因或其一部分的表达载体为具有图3所示酶切图谱的pTJ1-PpMT。
22.一种改善纳米颗粒的方法，所述方法包括将根据权利要求10所述的纳米颗粒结合到化学材料、配体、金属、DNA及蛋白中的至少一种上。
23.一种改善纳米颗粒的方法，所述方法包括将蛋白结合到根据权利要求10所述的纳米颗粒上，并用具有识别标记结合蛋白的物质的蛋白质、结合在目标蛋白上的标记配体、或者特异性结合目标蛋白的抗体来处理该结合蛋白。
24.一种改善纳米颗粒的方法，该方法包括步骤：
(a)将生物素包被在根据权利要求10所述的纳米颗粒的表面上；
(b)在由生物素包被的表面上包被链霉亲和素；
(c)用氨基、醛及及羰基中的至少一种化学基团对链霉亲和素包被的表面进行修饰；以及
(d)用金或银对经修饰的表面进行包被。
25.根据权利要求1所述的制备重金属结构体纳米颗粒的方法，其中，所述重金属结构体的组成为：
(a)镉(Cd)、锌(Zn)和铯(Cs)；
(b)镉(Cd)、锌(Zn)和硒(Se)；
(c)锌(Zn)和硒(Se)；
(d)镉(Cd)和硒(Se)；
(e)镉(Cd)和碲(Te)；或
(f)镉(Cd)、锌(Zn)、硒(Se)和碲(Te)。
26.根据权利要求11所述的具有产生重金属结构体能力的重组微生物，其中，所述重金属结构体的组成为：
(a)镉(Cd)、锌(Zn)和铯(Cs)；
(b)镉(Cd)、锌(Zn)和硒(Se)；
(c)锌(Zn)和硒(Se)；
(d)镉(Cd)和硒(Se)；
(e)镉(Cd)和碲(Te)；或
(f)镉(Cd)、锌(Zn)、硒(Se)和碲(Te)。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111001822A (zh) * 2018-11-20 2020-04-14 南华大学 一种多功能性铜纳米簇的制备方法及应用
CN113174358A (zh) * 2021-05-20 2021-07-27 上海交通大学 一种生物纳米碲及其利用恶臭假单胞菌的生物合成方法与应用
CN115947823A (zh) * 2022-09-29 2023-04-11 江汉大学 一种用于筛选结合和/或激活egfr的有毒金属的表达蛋白及制备方法

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8679858B2 (en) * 2011-01-11 2014-03-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Lanthanide mass dots: nanoparticle isotope tags
US9196760B2 (en) * 2011-04-08 2015-11-24 Ut-Battelle, Llc Methods for producing complex films, and films produced thereby
CL2012000789A1 (es) * 2012-03-30 2012-09-14 Univ Santiago Chile Metodo para la sintesis de nanoparticulas de oro que comprende incubar un micelio de botrytis cinerea con cloruro de oro.
CN102925404A (zh) * 2012-11-26 2013-02-13 南京工业大学 富集重镉的基因工程菌及其构建和应用
TWI580647B (zh) 2013-12-28 2017-05-01 公立大學法人大阪府立大學 Precious metal recovery method
CN104031941A (zh) * 2014-05-23 2014-09-10 杭州师范大学 一种硒化镉量子点的生物合成方法
KR20150144463A (ko) 2014-06-17 2015-12-28 이창길 온수 매트 및 그 제조방법
CN104198708B (zh) * 2014-09-15 2016-01-27 中南民族大学 基于水溶性四元Zn-Cd-Hg-Se量子点/聚离子液体敏感膜的光电免疫传感器
CN104745637A (zh) * 2015-02-27 2015-07-01 河南师范大学 一种以微生物细胞分泌液为基质制备硒纳米颗粒的方法
CN105948279B (zh) * 2015-07-26 2021-04-09 哈尔滨学院 一种去除含铬污水污染物的方法
CN106830528A (zh) * 2015-07-26 2017-06-13 李娜 一种去除含汞污水污染物的方法
CN106630489A (zh) * 2015-07-26 2017-05-10 李娜 一种去除含镉污水污染物的方法
US10851390B2 (en) 2016-01-08 2020-12-01 Korea Advanced Institute Of Science And Technology Method for producing metal nanoparticles and metal sulfide nanoparticles using a recombinant microorganism
WO2017119671A1 (ko) * 2016-01-08 2017-07-13 한국과학기술원 재조합 미생물을 이용한 금속 나노입자 및 금속 황화물 나노입자의 제조방법
CN109694887A (zh) * 2017-10-24 2019-04-30 朱一民 重组酵母菌及其用于制造生物质酒精的用途
CN116121156A (zh) * 2021-11-12 2023-05-16 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种制备金属量子点的基因工程菌和其应用及一种制备CdSe量子点的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1592720A (zh) * 2001-09-06 2005-03-09 罗杰A·艾西 金属结合蛋白及相关方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6391590B1 (en) * 1991-10-21 2002-05-21 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-metallothionein chimeric protein having biological recognition specificity
US6027711A (en) * 1995-06-07 2000-02-22 Rhomed Incorporated Structurally determined metallo-constructs and applications
US6489537B1 (en) * 1998-08-07 2002-12-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Phytochelatin synthases and uses therefor
KR100279739B1 (ko) 1998-11-17 2001-04-02 정선종 나노미터 크기의 실리콘 양자점 형성방법
US6844485B2 (en) 2001-08-07 2005-01-18 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acids encoding a phytochelatin synthase and uses thereof
JP4263581B2 (ja) * 2002-10-30 2009-05-13 ハンヤン ハク ウォン カンパニー，リミテッド 金属薄膜または金属粉末を利用した金属酸化物量子点形成方法
KR100540801B1 (ko) 2003-07-11 2006-01-11 학교법인 한양학원 금속 분말을 이용한 양자점 형성방법
KR100526828B1 (ko) 2003-04-30 2005-11-08 학교법인 한양학원 양자점 형성방법
KR100541516B1 (ko) 2004-02-19 2006-01-11 삼성전자주식회사 양자점 형성 방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1592720A (zh) * 2001-09-06 2005-03-09 罗杰A·艾西 金属结合蛋白及相关方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GIOACCHINO SCARANO等: "Properties of phytochelatin-coated CdS nanocrystallites formed in a marine phytoplanktonic alga（Phaeodactylum tricornutum，Bolin） in response to Cd", 《PLANT SCIENCE》 *
SANDRINE SAUGE-MERLE等: "Enhanced Toxic Metal Accumulation in Engineered Bacterial Cells Expressing Arabidopsis thaliana Phytochelatin Synthase", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 *
SAUGE-MERLE,S.等: "Accession NO.:AF461180.1，Arabidopsis thaliana phytochelatin synthase mRNA，complete cds", 《GENBANK DATABASE》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111001822A (zh) * 2018-11-20 2020-04-14 南华大学 一种多功能性铜纳米簇的制备方法及应用
CN111001822B (zh) * 2018-11-20 2022-12-27 南华大学 一种多功能性铜纳米簇的制备方法及应用
CN113174358A (zh) * 2021-05-20 2021-07-27 上海交通大学 一种生物纳米碲及其利用恶臭假单胞菌的生物合成方法与应用
CN115947823A (zh) * 2022-09-29 2023-04-11 江汉大学 一种用于筛选结合和/或激活egfr的有毒金属的表达蛋白及制备方法
CN115947823B (zh) * 2022-09-29 2024-05-03 江汉大学 一种用于筛选结合和/或激活egfr的有毒金属的表达蛋白及制备方法

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