CN105030755A - 儿茶素类化合物在制备治疗高尿酸血症药物中的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯或没食子儿茶素没食子酸酯及其药学上可接受的盐用于治疗高尿酸血症的用途，本发明所述儿茶素类化合物不仅对黄嘌呤氧化酶显示出较强的体外抑制作用，还可明显降低患有高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，可作为潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂和降尿酸药物用于高尿酸血症和高尿酸血症引起的痛风或痛风并发症的治疗。

Description

儿茶素类化合物在制备治疗高尿酸血症药物中的新用途

技术领域

本发明属于化学医药领域，具体涉及一种儿茶素类化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的应用，以及一种可治疗高尿酸血症以及痛风的药物组合物。

背景技术

近年来，随着人们生活水平的提高，饮食结构发生变化，糖、脂肪、蛋白质的摄入量明显增加，高尿酸血症和痛风的发病率日益增高，己成为一种常见病。

一般认为血尿酸416μmol/L时为高尿酸血症，约5％-l2％高尿酸血症患者会发展成为痛风。临床特点是：痛风性急性关节炎反复发作、痛风石沉积、特征性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和肾尿酸结石形成。痛风的急性发作是尿酸钠(monosodiumuratecrystal，MSU)在关节及关节周围组织以结晶形式沉积引起的急性炎症反应。痛风不仅可以侵犯骨和关节，而且还容易累及肾脏和心血管系统。高尿酸血症及原发性痛风与肥胖症、高脂血症、高血压病、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病呈显著正相关。因此，高尿酸血症是危害人类健康的一种严重的代谢性疾病。适当控制血液中的尿酸值是预防、改善以痛风为代表的高尿酸血症的根本。

目前，对血液中尿酸的控制主要是通过以下两种途径实现的：(1)抑制尿酸的生成。尿酸是由次黄嘌呤和黄嘌呤经黄嘌呤氧化酶的作用而生成的,而黄嘌呤氧化酶是催化上述反应、进而生成尿酸所必须的酶，因此，抑制黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XO)活性可有效的抑制尿酸的形成，进而起到治疗痛风等症状的作用。目前常用的抑制尿酸生成的药物有别嘌呤醇、非布索坦等；(2)促进尿酸的排泄。目前常用的促进尿酸排泄的药物有丙磺舒、苯溴马龙等。

上述两种方式均可起到降低血液中尿酸的作用，进而对高尿酸血症引发的痛风、关节炎、皮下痛风结石、肾脏结石或痛风性肾病等病症产生疗效，但是上述药物毒副作用通常较大，例如，别嘌呤醇可引发变态反应(发病率10-15％)、超敏综合症、骨髓抑制等严重的毒副作用；丙磺舒、苯溴马隆则具有刺激胃肠道、引发肾绞痛、激发痛风急性发作等副作用，在一定程度上限制了这些药物的临床应用。

儿茶素是在植物中广泛存在的一种化合物，根据文献报道[“InhibitionofXanthineOxidasebyCatechinsfromTea(Camelliasinensis)”，1997,vol.17,p.4381-4385]，儿茶素具有一定的黄嘌呤氧化酶抑制活性，其结果显示在底物浓度设置为米氏常数Km时，实验中5种儿茶素和表儿茶素抑制常数Ki的值分别为303.95microM(儿茶素C)，20.48microM(表儿茶素EC)，10.66microM(表没食子儿茶素EGC)，2.86microM(表儿茶素没食子酸酯ECG)，0.76microM(表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG)，而阳性对照别嘌呤醇的Ki值为0.30microM。该结果表明除了儿茶素C的黄嘌呤氧化酶活性不佳，其余几种表儿茶素类均表现出较好的抑制活性，且EGCG为该5种化合物中抑制活性最佳的化合物。本发明选择对活性不佳的儿茶素进行结构修饰，获得了强于表儿茶素类化合物的抑制效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种儿茶素类化合物及其药学上可接受的盐用于制备治疗高尿酸血症药物的用途，以及一种可治疗高尿酸血症和痛风的药物组合物。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种具有如式(I)所示结构的没食子儿茶素及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的用途，

一种具有如式(II)所示结构的儿茶素没食子酸酯及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的用途，

一种具有如式(III)所示结构的没食子儿茶素没食子酸酯及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的用途，

本发明还提供一种用于治疗高尿酸血症的药物组合物，所述药物组合物中含有本发明所述的没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯或没食子儿茶素没食子酸酯及其药学上可接受的盐。

所述药物组合物还包括药学上可以接受的载体。

所述药物组合物添加常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的片剂、胶囊剂、软胶囊剂、口服液剂、散剂、滴丸剂、颗粒剂或注射剂。

所述高尿酸血症包括高尿酸血症引起的痛风及痛风并发症。

所述痛风并发症包括痛风性关节炎、痛风性肾病、尿路结石或心血管疾病。

本发明的优点在于：

本发明所述儿茶素类化合物GC、CG、GCG不仅对黄嘌呤氧化酶显示出较强的体外抑制作用，还可明显降低患有高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，且无毒副作用、安全性高，因此可作为潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂和降尿酸药物用于高尿酸血症和高尿酸血症引起的痛风或痛风并发症的治疗。更为突出的是，本发明所述儿茶素类化合物没食子儿茶素GC、儿茶素没食子酸酯CG及没食子儿茶素没食子酸酯GCG的体外和体内活性作用均显著优于文献报道的几种表儿茶素类化合物。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

儿茶素C，表儿茶素EC，表没食子儿茶素EGC，表儿茶素没食子酸酯ECG，表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG均为纯度大于98％的合格产品。

实施例1没食子儿茶素GC的制备及表征

取10g表没食子儿茶素(EGC)溶解于1000mLMcIlvaine缓冲液(pH5.0)中，置于高压反应釜中，120℃反应30分钟，反应结束后取样，高效液相色谱分析结果表明，转化率为62％；反应液浓缩后，使用制备HPLC进行分离纯化(C18色谱柱5U，50*500mm)，用10％-95％的乙醇梯度洗脱，收集纯度高于94％的GC组分，浓缩除去部分乙醇，加3倍量的后水继续浓缩，待溶液变混浊时，停止浓缩放置过夜析晶，过滤，晶体冷冻干燥后得到纯度为99.3％的单体化合物没食子儿茶素(GC)。对其进行检测及表征数据如下：

GCC₁₅H₁₄O₇m/z：305.06[M-H]-

¹H-NMR(acetone-d₆,400MHz)δ:4.47(1H,d,J＝7.8Hz,H-2),3.96(1H,m,J＝5.3,7.8Hz,8.1Hz,H-3),2.51(1H,dd,J＝16.0,8.1Hz，H-4a),2.89(1H,dd,J＝16.0,5.3Hz,H-4b),6.02(1H,d,J＝2.3Hz,H-6),5.87(1H,d,J＝2.3Hz,H-8),6.47(2H,s,H-2’,6’)

¹³C-NMR(acetone-d₆,100MHz)δ:28.0,68.7,82.7,95.5,96.2,100.7,107.1,131.5,133.9,146.8,156.7,157.6.

实施例2儿茶素没食子酸酯CG的制备及表征

取10g表儿茶素没食子酸酯(ECG)溶解于1000mLMcIlvaine缓冲液(pH5.0)中，置于高压反应釜中，120℃反应30分钟，反应结束后取样，高效液相色谱分析结果表明，转化率为56％；反应液浓缩后，使用制备HPLC进行分离纯化(C18色谱柱5U，50*500mm)，用20％-95％的乙醇梯度洗脱，收集纯度高于94％的CG组分，浓缩除去部分乙醇，加3倍量的后水继续浓缩，待溶液变混浊时，停止浓缩放置过夜析晶，过滤，晶体冷冻干燥后得到纯度为98.9％的单体化合物儿茶素没食子酸酯(CG)。对其进行检测及表征数据如下：

CGC₂₂H₁₈O₁₀m/z：441.07[M-H]-

¹H-NMR(acetone-d₆,400MHz)δ:5.09(1H,d,J＝6.4Hz,H-2),5.35(1H,m,J＝6.4Hz,H-3),2.73(1H,dd,J＝16.5,6.4Hz，H-4a),2.94(1H,dd,J＝16.5,5.0Hz,H-4b),6.07(1H,d,J＝2.3Hz,H-6),5.98(1H,d,J＝2.3Hz,H-8),7.04(3H,s,H-2’,2”,6”),6.79(1H,s,H-5’),6.95(1H,s,H-6’)

¹³C-NMR(acetone-d₆,100MHz)δ:24.3,71.1,79.2,95.6,99.6,110.2,114.4,119.2,121.3,131.4,139.8,146.2,156.4,157.6,158.0.

实施例3没食子儿茶素没食子酸酯GCG的制备及表征

取10g表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)溶解于1000mLMcIlvaine缓冲液(pH5.0)中，置于高压反应釜中，120℃反应30分钟，反应结束后取样，高效液相色谱分析结果表明，转化率为56.5％；反应液浓缩后，使用制备HPLC进行分离纯化(C18色谱柱5U，50*500mm)，用15％-95％的乙醇梯度洗脱，收集纯度高于94％的GCG组分，浓缩除去部分乙醇，加3倍量的后水继续浓缩，待溶液变混浊时，停止浓缩放置过夜析晶，过滤，晶体冷冻干燥后得到纯度为99.1％的单体化合物没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)。对其进行检测及表征数据如下：

GCGC₂₂H₁₈O₁₁m/z：457.08[M-H]-

¹H-NMR(acetone-d₆,400MHz)δ:5.06(1H,d,J＝6.2Hz,H-2),5.35(1H,m,J＝6.2,5.9Hz,H-3),2.73(1H,dd,J＝12.0,5.9Hz，H-4a),2.89(1H,dd,J＝12.0,5.9Hz,H-4b),6.06(1H,d,J＝2.5Hz,H-6),5.98(1H,d,J＝2.5Hz,H-8),7.04(2H,s,H-2”,6”),6.51(2H,s,H-2’,6’)

¹³C-NMR(acetone-d₆,100MHz)δ:23.6,71.0,79.1,106.3,110.1,121.3,130.9,133.9,139.8,146.3,156.3,157.5,158.0,167.6.

实施例4：儿茶素及表儿茶素类化合物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用

为评价受试化合物对黄嘌呤氧化酶的影响，以100％非布司他为阳性对照组，儿茶素C，表儿茶素EC,表没食子儿茶素EGC，表儿茶素没食子酸酯ECG，表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG，没食子儿茶素GC、儿茶素没食子酸酯CG及没食子儿茶素没食子酸酯GCG八种儿茶素单体为样品组来考察。

本实验研究体外对黄嘌呤氧化酶的影响，具体方法如下：

溶液配制：

磷酸盐缓冲溶液：称取19.48g的K₂HPO₄.3H₂O和1.99g的KH₂PO₄溶于500mL蒸馏水中，配成浓度为0.2mmol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.5)；

黄嘌呤底物溶液：称取黄嘌呤15.2mg，溶解于250mL蒸馏水中，配成浓度为0.4mmol/L的黄嘌呤底物溶液；

黄嘌呤氧化酶溶液：取黄嘌呤氧化酶5U，用上述磷酸盐缓冲溶液稀释至160mL，配成浓度为80U/L的黄嘌呤氧化酶溶液，4℃保存；

样品和阳性对照溶液：精密称取样组、非布司他(作为阳性对照)，分别用二甲亚砜溶解、蒸馏水稀释，配成浓度为0.01μmol/L-10μmol/L的不同浓度的溶液进行测试(其中二甲亚砜的最终浓度小于1％，样品组浓度达不到所需抑制效果时，浓度加倍重新配置)。

抑制作用测试：

样品组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、样品溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，涡旋震荡5秒后置于25℃水浴锅中反应5分钟，反应完毕后加入1.5mL无水乙醇，涡旋震荡5秒终止反应。反应液经3500rpm离心5分钟，吸取200μL到1.5mL离心管中，用生化分析仪分别检测每个样品的UA值，每个样品平行操作三次取平均值。

空白对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、磷酸盐缓冲溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，同法检测空白对照组的UA值，平行操作三次取平均值。

阳性对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、阳性对照溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，同法检测阳性对照组的UA值，平行操作三次取平均值。

测试结果：

根据黄嘌呤氧化酶抑制率＝[(空白对照组UA值－样品组UA值)/空白对照组UA值]*100，计算抑制率；酶促反应中的药物浓度C＝C₀*0.1/3.1(C₀为样品溶液浓度)；将药物浓度与抑制率进行回归，得回归方程；根据回归方程计算抑制率为50％时的C值，即半数抑制浓度IC₅₀，结果如表1所示。

表1化合物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用(IC₅₀，μmol/L)

表1结果表明，本发明化合物GC，CG，及GCG均比文献报道的C，EC，EGC，ECG，EGCG体现出更强的体外抑制作用，对黄嘌呤氧化酶的抑制作用与阳性药非布司他相当，可作为潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂用于高尿酸血症的治疗。

实施例5：化合物对降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平的影响

本实施例通过动物实验验证化合物对高尿酸血症小鼠的影响，以100％非布司他为阳性对照组，儿茶素及表儿茶素类化合物(儿茶素C，表儿茶素EC,表没食子儿茶素EGC，表儿茶素没食子酸酯ECG，表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG，没食子儿茶素GC、儿茶素没食子酸酯CG及没食子儿茶素没食子酸酯GCG)为样品组来考察。

试验动物及分组：健康雄性KM小鼠120只，体重为15-18g，由上海灵畅生物科技有限公司提供；

按每笼5只进行分笼处理后，在苏州凯祥生物科技有限公司的屏障系统内适应性饲养4天，从120只小鼠中选取体重集中的110只小鼠按体重随机平均分为11组，每组10只，分别为空白对照组，高尿酸血症模型组，阳性对照组，受试样品组。

高尿酸血症的造模：

适应期过后随即对小鼠进行灌胃给药，每天上午灌胃1次，其中受试化合物用纯水进行混悬，按照10mg/kg进行灌胃；阳性对照非布司他用纯水进行混悬，按照1.0mg/kg进行灌胃；空白对照组和高尿酸血症模型组均用纯水灌胃进行对照，连续灌胃7天；

在第7天上午灌胃0.5小时后对小鼠进行腹腔注射造模，其中空白对照组腹腔注射0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液；高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试样品组注射氧嗪酸钾(OA)，用CMC-Na溶液进行溶解，注射量均为300mg/kg体重；

腹腔注射1.5小时后摘除小鼠的眼球进行采血，采血容量不低于0.5mL，血样采集后于室温放置约1小时，待血液完全凝固后于3500rpm/4℃条件下离心10分钟，取血清在同等条件下复离5分钟，而后取0.2mL血清使用生化分析仪检测UA值；

用Excel和SPSS对数据进行统计分析，计算平均数和SD，经单因素方差分析后比较各实验组的组间差异，与空白对照组相比，高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试化合物组小鼠的血清尿酸水平显著提高，有显著性差异，表明造模成功。

表2化合物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响(μmol/L)

注：(###表示和空白对照组相比P<0.001；*表示与高尿酸血症模型组相比，P<0.05；**表示和模型组相比P<0.01；***表示和模型组相比P<0.001)

由表2结果看出，本发明所述化合物GC，CG，GCG均显示出强于C，EC，EGC，ECG，EGCG的体内降尿酸作用，且体现出显著的体内降尿酸效果，可作为潜在降尿酸药物用于高尿酸血症的治疗。

实施例6：儿茶素类化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物片剂

【处方1】

【处方2】

【处方3】

称取处方量的儿茶素类化合物或其药学上可接受的盐、乳糖和L-HPC，混合，过60目筛，混合均匀；加入10％的淀粉浆适量制软材，制粒，干燥，整粒后，加入微粉硅胶、硬脂酸镁混合均匀，压片，包薄膜衣，即得。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (8)

1.一种具有如式(I)所示结构的没食子儿茶素及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的用途，

。

2.一种具有如式(II)所示结构的儿茶素没食子酸酯及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的用途，

。

3.一种具有如式(III)所示结构的没食子儿茶素没食子酸酯及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的用途，

4.根据权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于，所述药物还包括药学上可以接受的载体。

5.根据权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于，所述药物添加常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的片剂、胶囊剂、软胶囊剂、口服液剂、散剂、滴丸剂、颗粒剂或注射剂。

6.根据权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于，所述高尿酸血症包括高尿酸血症引起的痛风及痛风并发症。

7.根据权利要求6所述用途，其特征在于，所述痛风并发症包括痛风性关节炎、痛风性肾病、尿路结石或心血管疾病。

8.一种用于治疗高尿酸血症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中含有如权利要求1-3任一所述的化合物及其药学上可接受的盐。