CN105030670A - 一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其每100mL硫色满酮脂肪乳剂中含有：硫色满酮0.01～1g，注射用油性溶剂2～20g，表面活性剂0.5～5g，卵磷脂2～20g，甘油0.5～3g，稳定剂0.1～5g。同时还公开了该脂肪乳剂的制备方法及其应用。本发明提供的硫色满酮脂肪乳注射液可有效增加硫色满酮的化学稳定性，制备的硫色满酮脂肪乳注射液载药量大，稳定性好，副作用小、安全性高，将治疗性药物硫色满酮和营养药脂肪乳合并制成一种药物制剂，患者在治疗疾病的同时还能补充所需营养；其提供的制备工艺快速简单，质量稳定，临床可供静脉注射使用，用于治疗抗真菌和抗肿瘤等疾病治疗，适于工业生产及医药领域的推广应用。

Description

一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种供静脉注射用的制剂，具体地说是一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂及其制备方法和应用。

背景技术

真菌（Fungus）是一类单细胞或多细胞异养真核生物，是微生物界中较大的一个类群。其可引起动植物的多种病害，不仅影响农作物的产量、动物的生长及生产，造成极大的经济损失，而且影响人体健康，威胁人类生命安全。虽然目前市场上已有氮唑类化合物、两性霉素B等抗真菌药物，但随着免疫抑制剂、广谱抗生素、抗肿瘤药物的广泛应用，腹膜透析、血透析和移植工作的开展以及免疫缺陷性疾病的出现，导致条件致病菌感染剧增，真菌病的发生率也随之大幅度上升。临床所应用的抗真菌药物不良反应大，而且多数仅具窄谱抑菌作用，同时使用过程中部分真菌对这些药物极易产生耐药性，因而难以满足临床治疗的需要。因此，迫切需要开发更多高效、广谱、低毒的抗真菌新药来满足临床治疗需求。

硫色满酮（thiocllromanone）又称塞克尔曼酮、色满酮、二氢苯并噻喃酮，是一类具有高脂溶性、低水溶性的含硫原子杂环化合物，其具有广泛的生理活性，易于通过真菌的细胞膜，破坏细胞壁、细胞膜的结构与功能，引起细胞内容物流出导致真菌死亡。药物研究中硫色满酮及其硫色酮衍生物具有较强的抗真菌作用；如对酵母菌、霉菌及毛癣菌、小孢子丝菌、新型隐球菌等几种重要的病源菌都有较强的抑制活性。其抑菌机制可能与硫化合物能够抑制菌丝的生长，而真菌的基本结构就是菌丝有关。此外，研究表明其对裸鼠具有较高的抗肿瘤活性。因此，硫色满酮极具有开发和研究价值。到目前为止，虽然有许多关于硫色满酮类化合物的文献报道，但是尚未有硫色满酮类化合物做成注射制剂生产销售。这是由于硫色满酮属于水溶性差、对光照比较敏感的药物，所以普通组方通过常规增溶技术制备成的注射剂需要加入大量的有机溶剂或表面活性剂，但是有机溶剂或表面活性剂会产生比较严重的毒性问题，而且其药物的稳定性较差、易产生过敏，无法满足大规模生产及临床应用。

发明内容

本发明的目的就是提供一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂及其制备方法和应用，以解决水溶性较差、毒副作用大以及药物稳定性较差的问题。

本发明的目的就是提供一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，每100mL硫色满酮脂肪乳剂中含有：

硫色满酮0.01～1g，

注射用油性溶剂2～20g，

表面活性剂0.5～5g，

卵磷脂2～20g，

甘油0.5～3g，

稳定剂0.1～5g，

余量为注射用水；

所述表面活性剂为吐温80、泊洛沙姆188、油酸钠、油酸和去氧胆酸中的一种或两种以上任意比例的混合物。

优选地，每100mL硫色满酮脂肪乳剂中含有：

硫色满酮0.1～0.5g，

注射用油性溶剂8～12g，

表面活性剂2～3g，

卵磷脂8～12g，

甘油2～3g，

稳定剂0.5～1g，

余量为注射用水。

更优选地，每100mL硫色满酮脂肪乳剂中含有：

硫色满酮0.1g，

注射用油性溶剂10g，

表面活性剂2g，

卵磷脂10g，

甘油2.5g，

稳定剂0.8g，

余量为注射用水。

本发明提供的每100mL硫色满酮脂肪乳剂中添加抗氧化剂0.1～3g。

本发明组方中所述抗氧化剂为亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、L-半胱氨酸或维生素E中的一种或任意比例的两种。

本发明组方中所述注射用油性溶剂为大豆油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、中链脂肪酸甘油三酯中的一种或两种以上任意比例的混合物。

本发明组方中所述稳定剂为胆固醇或胆固醇硫酸酯钠中的一种或两种任意比例的混合物。

本发明所述硫色满酮脂肪乳剂中还含有pH值调节剂；所述pH调节剂为氢氧化钠或盐酸；所述pH值调节剂调节溶液的pH值至5.0-9.0。

本发明还提供了一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂的制备方法，包括以下步骤：

（a）按照上述的配方称量各组分；

（b）将硫色满酮、稳定剂和卵磷脂加入注射用油性溶剂中，在温度为50～80℃的条件下搅拌均匀，得油相；

（c）将甘油、表面活性剂加入注射用水中，在温度为50～80℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得水相；

（d）将所述油相和水相混合，以5000～20000rpm搅拌2～10min，得到乳浊液；

（e）用pH调节剂调所述乳浊液的pH至5.0~9.0，用注射用水定容至100mL，在10～60℃、以300～1000bar压力均质4～15次；

（f）对步骤（e）均质后的乳浊液进行过滤，通氮气，灌封，灭菌，得到静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂。

本发明制备方法中所述注射用油性溶剂为大豆油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、中链脂肪酸甘油三酯中的一种或两种以上任意比例的混合物。

本发明制备方法中所述表面活性剂为吐温80、泊洛沙姆188、油酸钠、油酸和去氧胆酸中的一种或两种以上任意比例的混合物。

本发明制备方法中所述稳定剂为胆固醇或胆固醇硫酸酯钠中的一种或两种任意比例的混合物。

本发明制备方法中所述pH调节剂为浓度为0.1mol/L的氢氧化钠或盐酸。

本发明制备方法中在所述每100mL硫色满酮脂肪乳剂还可以添加抗氧化剂0.1～3g；所述抗氧化剂为水溶性抗氧化剂、油溶性抗氧化剂或水溶性抗氧化剂和油溶性抗氧化剂任意比例的搭配；具体为亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、L-半胱氨酸或维生素E中的一种或任意比例的两种；当添加的所述抗氧化剂为油溶性抗氧化剂时，将其与所述硫色满酮、稳定剂和卵磷脂加入到所述注射用油性溶剂中；当添加的所述抗氧化剂为水溶性抗氧化剂时，将其与甘油、表面活性剂加入到注射用水中；当添加的所述抗氧化剂为油溶性抗氧化剂和水溶性抗氧化剂两种时，将油溶性抗氧化剂与所述硫色满酮、稳定剂和卵磷脂加入到所述注射用油性溶剂中，将水溶性抗氧化剂与甘油、表面活性剂加入到注射用水中。

本发明中把含有8~12个碳原子组成碳链的脂肪酸称为中链脂肪酸甘油三酯。

本发明所述的硫色满酮为该类化合物中的任意一种。

优选地，本发明所述的硫色满酮，其化学通用名称为3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮。该药物的水溶性较差，通过常规增溶技术制备成的注射剂，常常需要加入大量的有机溶剂或表面活性剂，溶剂或表面活性剂可产生比较严重的血管刺激性、溶血性、过敏性及毒性问题，限制了该类药物的临床应用。

本发明提供了一种硫色满酮的供静脉注射的新型药物载体，通过选择了特定的原料和适当比例的组方，以3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮为例，采用乳剂制备技术，将药物溶于油相中，加入乳化剂后采用高压匀质法制成水包油型静脉注射乳剂可有效避免溶剂毒性问题，解决了硫色满酮在水中溶解度低的问题，改善了药物载药量小的问题，有效提高了产品的稳定性和水溶性，且在一定程度上保护了硫色满酮对光照的敏感性，无需苛刻的贮存条件，便于临床推广应用；本发明制备时借助高压匀质技术，无需有机溶剂就能大幅增溶药物，制备得到的硫色满酮脂肪乳注射液不含有机溶剂，对血管刺激较小；生物相容性好，外水相中药物较少，从而减轻了刺激性反应，可以大大增强患者的顺应性；其制备工艺简单可行、生产技术路线成熟，已具备扩大生产的条件和技术，可同时满足大规模生产及临床应用需求。

因此，本发明提供的硫色满酮脂肪乳注射液可有效增加硫色满酮的化学稳定性，制备的硫色满酮脂肪乳注射液载药量大，稳定性好，副作用小、安全性高，将治疗性药物硫色满酮和营养药脂肪乳合并制成一种药物制剂，患者在治疗疾病的同时还能补充所需营养；其提供的制备工艺快速简单，质量稳定，临床可供静脉注射使用，用于治疗抗真菌和抗肿瘤等疾病治疗，适于工业生产及医药领域的推广应用。

通过实验证明，本发明制备的硫色满酮脂肪乳剂在抗肿瘤中具有良好的抑制作用，可以得以推广应用。

本发明所提供的硫色满酮脂肪乳剂主要用于静脉注射，在临床使用时应根据所含药物的有效剂量使用即可，以遵医嘱为准。

具体实施方式

下面实施例用于进一步详细说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.1g，玉米油10g，卵磷脂10g，甘油2.5g，泊洛沙姆1882g，亚硫酸氢钠1.5g，维生素E0.1g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠1.0g、0.1mol·L^-1的盐酸1.0g），胆固醇0.8g，注射用水100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、卵磷脂、维生素E和胆固醇加入玉米油中，在温度为60℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将泊洛沙姆188、甘油和亚硫酸氢钠加入50mL注射用水中，在温度为50℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以10000rpm搅拌6min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在6.0~8.0之间，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在40～60℃之间，以800bar压力均质10次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

实施例2

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.1g，大豆油10g，卵磷脂10g，甘油2.5g，油酸钠2g，亚硫酸氢钠1.5g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠1.0g、0.1mol·L^-1的盐酸1.0g），胆固醇硫酸酯钠0.8g，注射用水100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、卵磷脂、胆固醇硫酸酯钠加入大豆油中，在温度为60℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将油酸钠、甘油和亚硫酸氢钠加入40mL注射用水中，在温度为80℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以20000rpm搅拌2min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在5.0~7.0之间，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在40～60℃之间，以1000bar压力均质5次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

实施例3

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.1g，蓖麻油10g，维生素E0.1g，卵磷脂10g，甘油2.5g，吐温802g，焦亚硫酸钠1.5g，胆固醇硫酸酯钠0.8g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠1.0g、0.1mol·L^-1的盐酸1.0g），注射用水100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、卵磷脂、维生素E、胆固醇硫酸酯钠加入蓖麻油中，在温度为70℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将吐温80、甘油和焦亚硫酸钠加入40mL注射用水中，在温度为50℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以5000rpm搅拌10min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在7.0~9.0之间，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在10～40℃之间，以300bar压力均质15次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

实施例4

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.1g，中链脂肪酸甘油三酯10g，卵磷脂10g，甘油2.5g，油酸2g，焦亚硫酸钠1.5g，胆固醇0.8g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠2.0g、0.1mol·L^-1的盐酸3.0g），注射用水100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、卵磷脂、胆固醇加入中链脂肪酸甘油三酯中，在温度为50℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将油酸、甘油和焦亚硫酸钠加入40mL注射用水中，在温度为50℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以20000rpm搅拌5min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在6.0~8.0之间，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在10～40℃之间，以1000bar压力均质4次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

实施例5

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.1g，大豆油10g，卵磷脂10g，甘油2.5g，泊洛沙姆1882g，胆固醇0.8g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠1.0g、0.1mol·L^-1的盐酸1.0g），注射用水100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、卵磷脂、胆固醇加入大豆油中，在温度为80℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将泊洛沙姆188、甘油加入40mL注射用水中，在温度为80℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以15000rpm搅拌5min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在5.0~6.0之间，，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在10～40℃之间，以800bar压力均质8次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

实施例6

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.01g，棉籽油2g，卵磷脂2g，甘油0.5g，吐温800.5g，胆固醇硫酸酯钠0.1g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠1.0g、0.1mol·L^-1的盐酸1.0g），注射用水100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、卵磷脂、胆固醇硫酸酯钠加入棉籽油中，在温度为70℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将吐温80、甘油加入40mL注射用水中，在温度为50℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以8000rpm搅拌10min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在6.0~8.0之间，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在10～40℃之间，以500bar压力均质13次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

实施例7

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮1.0g，中链脂肪酸甘油三酯20g，卵磷脂20g，甘油3g，去氧胆酸5g，焦亚硫酸钠1.5g，胆固醇5g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠2.0g、0.1mol·L^-1的盐酸3.0g），注射用水100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、卵磷脂、胆固醇加入中链脂肪酸甘油三酯中，在温度为70℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将去氧胆酸、甘油、焦亚硫酸钠加入60mL注射用水中，在温度为70℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以20000rpm搅拌8min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在6.0~8.0之间，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在30～50℃之间，以1000bar压力均质6次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

实施例8

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.5g，大豆油12g，卵磷脂13g，甘油2g，泊洛沙姆1883g，胆固醇3g，维生素E0.1g，抗坏血酸2.0g，pH值调节剂（0.1mol·L^-1的氢氧化钠2.0g、0.1mol·L^-1的盐酸3.0g），补充注射用水至100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、维生素E、胆固醇、卵磷脂加入大豆油中，在温度为80℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将泊洛沙姆188、甘油、抗坏血酸加入40mL注射用水中，在温度为80℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得到水相；

（3）将所得水相和油相混溶，用高速组织分散机进行分散，然后以15000rpm搅拌5min，得到乳浊液；

（4）用适量的pH值调节剂调节乳浊液的pH值范围在6.0~8.0之间，然后用剩余注射用水定容至100mL，将定容后的初乳转移至高压均质机中，控制均质温度在40～60℃之间，以800bar压力均质10次；

（5）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮脂肪乳剂。

对比例1

按以下配方称量：3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮0.5g，聚氧乙烯蓖麻油30g，维生素E0.1g，氯化钠0.9g，补充注射用水至100mL。

制备方法：

（1）将3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮、聚氧乙烯蓖麻油在温度为80℃的条件下搅拌均匀，得到油相；

（2）将50mL注射用水加入油相中，搅拌均匀后用剩余注射用水定容至100mL；

（3）用0.1mol·L^-1盐酸调节pH值的范围在6~8之间；

（4）过滤，通氮气，灌封，进行旋转式高压蒸汽灭菌，得到硫色满酮注射液。

实施例9对硫色满酮注射用脂肪乳剂的各项性能进行考察：

一、血管刺激性实验

取健康家兔15只，随机分成5组，每组3只。5组家兔左耳均注射氯化钠注射液，右耳分别注射本发明实施例1、2、3、6、7和对比例1的硫色满酮注射用脂肪乳剂，每天给药1次，连续3天。给药期间每天肉眼观察给药局部血管有无血栓形成，周围组织有无红肿淤血等炎症反应。给药结束后处死，自给药处向心方向3cm处取下耳组织，以10%福尔马林固定、石蜡包埋、制片、染色，光镜下观察血管及周围组织形态学改变。

表1血管刺激试验结果

实施例1、2、3、6和7的组织学观察结果表明：给药组兔耳缘静脉血管壁完整，光滑。未见内皮损伤，无血栓形成及周围组织水肿、炎细胞浸润、炎症及坏死等病理变化。给药组与阴性对照组比较无明显差别，表明所制备的注射用硫色满酮脂肪乳对家兔耳血管未见明显刺激。对比例1采用聚氧乙烯蓖麻油处方血管可见明显扩张，管壁及管周存在明显炎症细胞浸润，对家兔耳血管有明显刺激。

二、动物过敏性试验

取体重250g～350g健康豚鼠42只，随机分为7组，一组作为阴性对照组注射0.9%氯化钠注射液，每次注射剂量为0.5mL/只，一组作为阳性对照组注射10%卵白蛋白溶液，每次注射剂量为0.1mL/只，其余五组作为供试品组分别注射本发明实施例1、2、3、6、7和对比例1的硫色满酮注射用脂肪乳剂，每次注射剂量为0.5mL/只。注射方式与次数：隔日腹腔注射一次，共注射三次。分别在第一次注射后第14日及21日静脉注射供试品1mL/只、0.9%氯化钠注射液1mL/只和10%卵白蛋白溶液1mL/只进行激发，在注射后15分钟内，观察注射药液的豚鼠是否出现过敏反应。如有竖毛、呼吸困难或咳嗽3声等现象中的两种或两种以上者，或有抽搐、虚脱或死亡等现象之一者，则判为阳性（有过敏反应）。结果见表2。

表2过敏试验结果(n＝6)

从表2中可以看出，阴性对照组及本发明制备得到的硫色满酮注射用脂肪乳剂两次静脉给药后15分钟内每组各6只豚鼠均未出现过敏反应，阳性对照液两次静脉给药后1分钟内6只豚鼠全部出现咳嗽、呼吸抑制、抽搐直至死亡。结果表明：在本试验条件下本发明实施例1、2、3、6、7制备得到的硫色满酮注射用脂肪乳剂过敏试验未出现全身过敏反应。对比例1部分动物出现全身过敏反应。

三、动物溶血性试验

2%红细胞悬液的制备：取新鲜兔血10mL，置于烧杯中，用玻璃棒轻微搅动，数分钟后除去纤维蛋白，取出血液，加入5倍量生理盐水，摇匀，2500rpm/min离心5min，弃去上清液；沉淀的红细胞再用同量的生理盐水清洗，离心，如此反复洗涤3～4次，至上清液成无色透明为止。将洗涤好的红细胞用生理盐水配制成2%红细胞悬液，备用。

实验设计：取干净试管7个，分别编号，依次加入下表内各液，第6管不加供试液为空白对照管，第7管用蒸馏水代替生理水，摇匀，置于37℃水浴中，分别于0.5h、1h、2h、3h、4h观察是否有溶血现象发生。

结果判定标准：全溶血：溶液澄明红色，管底无红细胞残留；部分溶血：溶液澄明或棕色，管底有少量红细胞残留；无溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明；凝集：不溶血，红细胞在试管底部凝集，振摇后细胞不能分散。结果见表3。

表3本发明实施例1的硫色满酮注射用脂肪乳剂的溶血试验结果

注：+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不发生凝集

试验结果表明：本发明实施例1制备得到的硫色满酮注射用脂肪乳剂在4小时内未引起溶血或凝集反应。

四、加速稳定性试验

将本发明实施例1和对比例1制备的硫色满酮注射用脂肪乳剂在25±2℃的条件下放置6个月，考察物理化学稳定性的变化。结果见表4-a及4-b。

表4-a本发明加速稳定性试验结果

表4-b对比例加速稳定性试验结果

从表4-a中可以看出，本发明实施例1制备的硫色满酮注射用脂肪乳剂在25±2℃的条件下加速6个月后外观、物理稳定性及化学稳定性更好。

采用上述方法对本发明实施例2-8制备的硫色满酮注射用脂肪乳剂进行加速稳定性试验，在25±2℃的条件下加速6个月后外观、物理稳定性及化学稳定性良好。

五、长期稳定性试验

将本发明实施例1制备的硫色满酮注射用脂肪乳剂在6±2℃的条件下放置12个月，考察物理化学稳定性的变化。结果见表5-a和5-b。

表5-a长期稳定性试验结果

表5-b长期稳定性试验结果

从表5中可以看出，本发明实施例1制备的硫色满酮注射用脂肪乳剂在6±2℃长期试验12个月各项考察指标的检验结果仍符合质量标准规定。

采用上述方法对本发明实施例2-8制备的硫色满酮注射用脂肪乳剂进行长期稳定性试验，在6±2℃长期试验12个月后外观、物理稳定性及化学稳定性良好。

综上，本发明的硫色满酮注射用脂肪乳剂在经25±2℃加速试验6个月和6±2℃长期试验12个月各项考察指标的检验结果仍符合质量标准规定，可以保证制剂在贮藏期间的质量稳定。

实施例10静脉注射用3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮脂肪乳剂对鼠源肿瘤细胞移植瘤的抑制作用

（1）给药组及给药试剂

脂肪乳剂：以实施例1制备的注射用的脂肪乳剂为试验药物乳剂，生理盐水制成1mg·mL^-1原液保存于4℃，用前稀释至0.1mg·mL^-1。

阳性对照：注射用顺铂（齐鲁制药有限公司，批号712058CF），生理盐水制成1mg·mL^-1原液保存于4℃，用前稀释至0.1mg·mL^-1。

阴性对照组：给与药物体积相同的食用豆油。

（2）动物及瘤株

昆明种小鼠18~22g，雌雄各半，由河北医科大学实验动物中心提供（合格证号：806121）。小鼠H₂₂肝癌细胞引自中国科学院细胞所。

（3）体内抑制活性测试，测试药物对H₂₂小鼠皮下移植瘤的抑制作用

建立模型：无菌取腹腔内传代6~7d的H₂₂小鼠肝癌细胞，2000r/min离心5min后去其上清液，再用生理盐水按1:3的比例稀释摇匀，并调细胞数至2×10⁷/ml，取0.2mL接种于小鼠右上肢腋部皮下。随机分为5组，每组10只，雌雄各半。

结果统计：末次给药后24h，处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤质量，按以下公式计算抑瘤率：瘤质量抑制率%=（1-药物组平均瘤质量/阴性对照组平均瘤质量）×100%

（a）口服组实验（阳性对照组腹腔注射给药，其余各组均灌胃给药）。

小鼠接种24h后开始给药，乳剂组给药剂量分别为10、25、50mg·kg^-1；阳性对照组（顺铂）给药剂量为1mg·kg^-1；阴性对照组给与药物体积相同的食用豆油。以上各组每天给药1次，连续给药10天。其结果见表6。

表6灌胃给药对小白鼠体内H₂₂肝癌细胞的抑制活性

（b）腹腔注射组实验（各组均腹腔注射给药）。

乳剂组给药剂量分别为1、3、10mg·kg^-1；阳性对照组（顺铂）给药剂量为1mg·kg^-1；阴性对照组给与药物体积相同的聚氧乙烯蓖麻油与水的混合物，腹腔注射给药。以上各组每天给药1次，连续给药10天，其结果见表7。

表7注射给药对对小白鼠体内H₂₂肝癌细胞的抑制活性

（c）乳剂对种植S180腹水瘤小白鼠生命延长率的影响

无菌取腹腔内传代6～7d的S₁₈₀肿瘤细胞，2000r/min离心5min后去其上清液，再用生理盐水按1：3的比例稀释摇匀，并调细胞数至2×10⁷/ml，取0.2mL接种于昆明小鼠腹腔内。

小鼠接种24h后开始给药，每组每天给药1次，共给药10天。乳剂组给药剂量分别为1、3、10mg*kg^-1；阳性对照组（顺铂）给药剂量为1mg*kg^-1；以上各组均腹腔注射给药。每天记录小鼠死亡数，小鼠存活超过30天按30天计算，并按以下公式计算小鼠生命延长率：

生命延长率%=（药物组平均生存时间/阴性对照组平均生存时间-1）×100%

其生命延长率的结果见表8。

表8乳剂对种植S180腹水瘤小鼠生命延长率的影响

实施例11静脉注射用3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮脂肪乳剂对人源肿瘤细胞裸鼠移植瘤抑制活性的研究

（1）试验动物

裸鼠104只，鼠龄为5~6周，体重18~20克，雌雄各半，分笼饲养。其实验和饲养均在SPF条件下的超净层流架中进行，灭菌水和饲料供动物自由摄入。

人源肿瘤细胞：人胃低分化腺癌细胞株（SGC-7901），细胞培养基（RPMI1640），PBS。

（2）实验方法

（a）裸鼠体内癌细胞的培养

培养液为RPMI-1640(血清浓度为100ml/L)，置于37℃的CO₂恒温培养箱中。取培养的对数生长期的各组细胞，用1.25g/L的胰蛋白酶联合消化，收集细胞用无血清RPMI-1640液定容。经计数后调整浓度为每0.2mL里包含5.0×10⁶个细胞。取雌雄裸鼠各1只，每只裸鼠右背部皮下注射瘤液0.2ml。所有裸鼠在无特定病原体（SPF）条件下的层流架中饲养。

（b）腹腔注射组的实验方法同实施例10；其结果见表9。

在皮下移植瘤长到体积100mm³时，随机分组，每组8只，雌雄各半。每天给药1次，共给药7天。各组给药剂量均为3mg*kg^-1末次给药后24h，处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤质量，按以下公式计算抑瘤率：

（c）裸鼠体内癌细胞增长的抑制活性

在皮下移植瘤长到体积100mm³时，随机分组，每组8只，雌雄各半。每天给药1次，共给药7天。各组给药剂量均为3mg*kg^-1末次给药后24h，处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤质量，按以下公式计算抑瘤率：

瘤质量抑制率%=（1-药物组平均瘤质量/阴性对照组平均瘤质量）×100%

表9脂肪乳剂对裸鼠体内SGC-7901的抑制活性

Claims (10)

1.一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其特征在于，每100mL硫色满酮脂肪乳剂中含有：

硫色满酮0.01～1g，

注射用油性溶剂2～20g，

表面活性剂0.5～5g，

卵磷脂2～20g，

甘油0.5～3g，

稳定剂0.1～5g，

余量为注射用水；

所述表面活性剂为吐温80、泊洛沙姆188、油酸钠、油酸和去氧胆酸中的一种或两种以上任意比例的混合物。

2.根据权利要求1所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其特征在于，每100mL硫色满酮脂肪乳剂中含有：

硫色满酮0.1～0.5g，

注射用油性溶剂8～12g，

表面活性剂2～3g，

卵磷脂8～12g，

甘油2～3g，

稳定剂0.5～1g，

余量为注射用水。

3.根据权利要求1或2所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其特征在于，所述硫色满酮为3-氯代亚甲基-6-氟-硫色满-4-酮。

4.根据权利要求3所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其特征在于，每100mL硫色满酮脂肪乳剂中添加抗氧化剂0.1～3g，所述抗氧化剂为亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、L-半胱氨酸或维生素E中的一种或任意比例的两种。

5.根据权利要求4所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其特征在于，所述硫色满酮脂肪乳剂中含有pH值调节剂，所述pH值调节剂调节溶液的pH值至5.0-9.0。

6.根据权利要求1或2所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其特征在于，所述注射用油性溶剂为大豆油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、中链脂肪酸甘油三酯中的一种或两种以上任意比例的混合物。

7.根据权利要求1或2所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂，其特征在于，所述稳定剂为胆固醇或胆固醇硫酸酯钠中的一种或两种任意比例的混合物。

8.一种静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）按照权利要求1或2所述的配方称量各组分；

（b）将硫色满酮、稳定剂、卵磷脂加入到注射用油性溶剂中，在温度为50～80℃的条件下搅拌均匀，得油相；

（c）将甘油、表面活性剂加入到注射用水中，在温度为50～80℃的条件下搅拌至所述原料全部溶解，得水相；

（d）将所述油相和水相混合，以5000～20000rpm搅拌2～10min，得到乳浊液；

（e）用pH调节剂调所述乳浊液的pH至5.0~9.0，用注射用水定容至100mL，在10～60℃、以300～1000bar压力均质4～15次；

（f）对步骤（e）均质后的乳浊液进行过滤，通氮气，灌封，灭菌，得到静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂。

9.根据权利要求8所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂的制备方法，其特征在于，在所述每100mL硫色满酮脂肪乳剂添加抗氧化剂0.1～3g；所述抗氧化剂为水溶性抗氧化剂或/和油溶性抗氧化剂；当添加的所述抗氧化剂为油溶性抗氧化剂时，将其与所述硫色满酮、稳定剂和卵磷脂加入到所述注射用油性溶剂中；当添加的所述抗氧化剂为水溶性抗氧化剂时，将其与甘油、表面活性剂加入到注射用水中；当添加的所述抗氧化剂为油溶性抗氧化剂和水溶性抗氧化剂两种时，将油溶性抗氧化剂与所述硫色满酮、稳定剂和卵磷脂加入到所述注射用油性溶剂中，将水溶性抗氧化剂与甘油、表面活性剂加入到注射用水中。

10.一种权利要求3所述的静脉注射用硫色满酮脂肪乳剂在抗肿瘤中的应用。