CN105018487A - 玉米第3号染色体穗行数主效qtl的分子标记及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种玉米第3号染色体穗行数主效QTL的分子标记及其应用。本发明还提供了一种用于鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状的引物对，为能够扩增得到以玉米基因组DNA为模板，采用序列表中序列1和序列2所示引物对进行PCR扩增所得的DNA片段的引物对，具体为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对。以玉米基因组为模板，采用该引物进行PCR扩增所得产物即为与玉米第3号染色体穗行数主效QTL紧密连锁的分子标记。实验证明，该玉米穗行数主效QTL的加性效应为0.88行-1.60行，可解释穗行数变异为6.73％-17.19％，在此基础上，针对目标区间NP15917-NP15989，继续开发新的分子标记，本发明为该穗行数主效QTL？qKRN3的精细定位及分子标记辅助育种奠定了坚实的基础。

Description

玉米第3号染色体穗行数主效QTL的分子标记及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种玉米第3号染色体穗行数主效QTL的分子标记及其应用。

背景技术

玉米已成为我国第一大粮食作物，国家统计局统计数据显示，其播种面积从2004年的2544.6万公顷到2014年的3707.6万公顷，总产量也从2004年的13028.71万吨上升到2014年的21567.3万吨，均呈现连续性增产的趋势，在粮食生产中起着重要的作用。但近年来，国内玉米的消费需求快速增长，供求处于“紧平衡”状态。随着人口的不断增加和耕地资源的不断减少，提高单位面积籽粒产量已成为我国玉米生产上越来越迫切的任务。

产量性状是一个非常复杂的性状，将产量性状分解成各个产量组成因子分别研究无疑是一个较好的选择。穗行数是一个重要的产量组成因子，与产量显著正相关，探明穗行数形成的遗传机理有助于阐明玉米产量性状形成的遗传机理。穗行数相关QTL/基因的发掘是研究其形成机制，实现高效常规和分子选择，提高育种效率和效果的关键。

玉米穗行数是数量性状，受多基因控制，与其他产量组成因子间也存在复相互作用，且性状的表现也容易受到环境的影响。传统育种因育种群体的规模较大，需要引进新的方法来提高育种效率，而结合分子标记辅助育种进行的产量及相关性状QTL的研究成为近年来研究玉米产量性状形成的遗传机理的热点。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状的引物对。

本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状的引物对，为能够扩增得到如下DNA片段的引物对：所述DNA片段是以玉米基因组DNA为模板，采用序列表中序列1和序列2所示引物对进行PCR扩增所得的DNA片段。

在本发明中，所述引物对具体由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成。

所述引物对的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述引物对的制备方法，包括将所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

本发明的第二个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状的试剂盒。

本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状的试剂盒，含有所述引物对和如下中的至少一种：dNTP、DNA聚合酶和PCR扩增缓冲液。

所述试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述试剂盒的制备方法，包括将引物对和如下中的至少一种分别单独包装的步骤：dNTP、DNA聚合酶和PCR扩增缓冲液。

本发明的第三个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定玉米杂交后代的穗行数性状的方法。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定玉米杂交后代的穗行数性状的方法，具体可包括如下步骤：

(a1)分别以玉米A、玉米B以及由所述玉米A和所述玉米B杂交而来的玉米杂交后代群体中的每个个体的基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)分别进行PCR扩增，得到所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物；

所述玉米A的穗行数多于所述玉米B的穗行数；

(a2)将所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物分别进行电泳，根据电泳结果按照如下确定所述玉米杂交后代的穗行数性状：与所述玉米A的PCR产物的电泳条带的带型相同的所述玉米杂交后代的穗行数多于或候选多于与所述玉米B的PCR产物的电泳条带的带型相同的所述玉米杂交后代。

本发明的第四个目的是提供一种从玉米杂交后代群体中获得穗行数相对较高的个体的方法。

本发明所提供的从玉米杂交后代群体中获得穗行数相对较高的个体的方法，具体可包括如下步骤：

(b1)分别以玉米A、玉米B以及由所述玉米A和所述玉米B杂交而来的玉米杂交后代群体中的每个个体的基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)分别进行PCR扩增，得到所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物；

所述玉米A的穗行数多于所述玉米B的穗行数；

(b2)将所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物分别进行电泳，选取所述玉米杂交后代群体中与所述玉米A的PCR产物的电泳条带的带型相同的个体，即为或候选为所述玉米杂交后代群体中所述穗行数相对较高的个体。

对于上述两种方法，在本发明中，所述玉米A具体为玉米自交系郑58；所述玉米B具体为玉米自交系昌7-2。相应的，所述玉米杂交后代群体具体为由玉米自交系郑58和玉米自交系昌7-2杂交而来的玉米杂交后代群体。

当然，所述玉米A也可为除玉米自交系郑58外符合条件A的任一类型的玉米；所述条件A为：以基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳，电泳条带的带型与参照带型A相同；所述参照带型A为以玉米自交系郑58的基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳所得的带型。如目标区段(以基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增的扩增产物)与玉米自交系郑58相同的RIL系。

相应的，所述玉米B也可为除玉米自交系昌7-2外符合条件B的任一类型的玉米；所述条件B为：以基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳，电泳条带的带型与参照带型B相同；所述参照带型B为以玉米自交系昌7-2的基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳所得的带型。如目标区段(以基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增的扩增产物)与玉米自交系昌7-2相同的RIL系。

RIL系为RIL(Recombinant Inbred Lines)重组自交系，生物学中用于遗传分析及作图的一类群体，由杂交后的材料经多代自交产生，群体中每个株系都是纯合的。

所述玉米A和所述玉米B中，任一为母本，另一为父本。

在上述两种方法中，所述玉米杂交后代具体可为纯合的玉米杂交后代，如RIL系、DH系，或者纯合的F2代、纯合的BC代等。

本发明的第五个目的是提供一种培育穗行数增加的玉米品种的方法。

本发明所提供的培育穗行数增加的玉米品种的方法，是选取符合如下条件的玉米作为亲本进行育种：以基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳，电泳条带的带型与参照带型A相同；

所述参照带型A为以玉米自交系郑58的基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳所得的带型。

在前述三种方法中，所述PCR扩增时采用的退火温度具体可为58℃。

进一步，所述PCR扩增的反应条件具体为：94℃5min；94℃30s，58℃30s，72℃40s，35个循环；72℃10min；12℃保存。

在前述三种方法中，所述电泳具体可为聚丙烯酰胺凝胶电泳，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳中，所述聚丙烯酰胺凝胶的浓度为8％(质量百分含量)。所述聚丙烯酰胺凝胶电泳为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

本发明的第六个目的是提供一种与玉米穗行数性状相关的分子标记。

本发明所提供的与玉米穗行数性状相关的分子标记，具体为以玉米基因组DNA为模板，采用所述引物对(序列1和序列2)进行PCR扩增所得的DNA片段。

其中，所述PCR扩增时采用的退火温度具体可为58℃。进一步，所述PCR扩增的反应条件具体为：94℃5min；94℃30s，58℃30s，72℃40s，35个循环；72℃10min；12℃保存。

所述引物对(序列1和序列2)或所述试剂盒或所述分子标记在如下任一中的应用也属于本发明的保护范围：

(1)鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状；

(2)玉米育种。

本发明首先通过QTL初定位，在玉米第3号染色体上检测到一个穗行数QTLqKRN3，其加性效应为0.88行-1.60行，可解释穗行数变异为6.73％-17.19％，位于两个SNP标记NP15917和NP15989之间且该区间内暂无其他标记的报道。在此基础上，针对目标区间NP15917-NP15989，继续开发新的分子标记，本发明为该穗行数主效QTL qKRN3的精细定位及分子标记辅助育种奠定了坚实的基础。

附图说明

图1为穗行数主效QTL qKRN3区段的分子标记遗传连锁图谱。

图2为利用jsr20561对ZC16×昌7-2的F2分离群体中部分单株的基因型检测结果。其中，A表示与母本郑58基因型相同(电泳带型相同)；B表示与父本昌7-2基因型相同(电泳带型相同)；H表示杂合带型；扩增片段大小为190bp左右。

图3为ZC16×昌7-2的F₂群体的穗行数分布图。N为102而非107，是因为个别单株在苗期取了叶片但后期没拿到表型。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

玉米自交系郑58：记载于“李跃.不同基因型玉米自交系对干旱胁迫的生理特性分析.西北农林科技大学,2014年硕士论文”一文，公众可从申请人处获得用于重复本发明实验。

玉米自交系昌7-2：记载于“叶雨盛,李哲,郝楠等.玉米自交系昌7-2对丝黑穗病抗性改良的初步研究.辽宁农业科学,2011年01期”一文，公众可从申请人处获得用于重复本发明实验。

实施例1、玉米穗行数主效QTL qKRN3的定位

一、实验材料

优良玉米自交系郑58、昌7-2、郑58(母本)×昌7-2(父本)的162个RIL系及其分别与两个亲本郑58和昌7-2组配的测配群体TC(郑58)、TC(昌7-2)，用于穗行数QTL的定位分析。

二、玉米穗行数主效QTL qKRN3的定位

1、玉米基因组DNA大量提取(改良CTAB法)

(1)取玉米植株幼嫩叶片10-20mg，置于1.5ml Eppendorf管中，加入液氮，研成细粉。

(2)在离心管中加入65℃预热的1×CTAB提取缓冲液600μl，轻轻振荡混匀。

(3)在65℃水浴锅中温浴30min，且每10min小心摇动离心管一次。

(4)30min后取出离心管，在通风橱中加入等体积氯仿:异戊醇(体积比24:1)，并小心充分摇动离心管2-3min，然后静置至有机相由无色→绿色→深绿色。

(5)室温下，10000rpm离心10min，然后吸上清500μl至新的离心管中。

(6)在上清中加入等体积预冷的异丙醇(-20℃)，小心混匀后于-20℃放置15min。

(7)室温下，10000rpm离心5min，小心倒掉上清后加入70％乙醇600μl进行漂洗，轻微摇动离心管，使DNA悬浮起来。

(8)室温下，10000rpm离心3min，然后小心倒掉上清并放置常温干燥。

(9)待DNA晾干后，加入适量的灭菌ddH₂O，充分溶解DNA。

(10)用紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度，存在-20℃冰箱中备用。

2、目标片段的扩增

PCR反应体系(10μl体系)如下：40ngμL^-1模板DNA 2.0μL；10×PCR buffer 1.0μL；dNTPs 0.2μL；引物1.0μL；rTaqDNA聚合酶0.1μL；ddH₂O 5.7μL。

PCR反应程序(10μl体系)如下：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃30s，36个循环；72℃10min；12℃保温。

3、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测

A.制胶

(1)将干净的两块玻璃板及垫片用夹子加紧，8％的胶(ml)：20％APS(μl)：TEMED(μl)按1:10:1的比例配好混匀，快速封底；

(2)准备干净的梳子，待封底的胶凝固，依每板35ml的8％的胶按同样的比例配胶，立即灌胶；如有气泡，则轻轻敲打玻璃板赶出气泡，平行插入干净的梳子；

(3)为防止残胶，待胶凝固后及时小心拔出梳子，将胶板固定在电泳槽上，加入1×TBE缓冲液。

40％PAGE溶液(5L)：去离子水2000ml；N,N’-甲叉双丙烯酰胺50g；丙烯酰胺1950g；搅拌器搅拌，充分溶解，定容至5L。

8％PAGE溶液：40％PAGE溶液稀释5倍即按40％PAGE:5×TBE缓冲液:去离子水＝1:1:3的比例稀释。

5×TBE缓冲液(5L)：Tris 270.00g；硼酸137.50g；EDTA-Na₂18.61g；去离子水定容至1L。

B.电泳

(1)在扩增的PCR产物中加入2.0μl的6×Loading Buffer，离心后，每孔点样4μl且每板有1孔点4μl的100bp DNA Ladder；

(2)常温下，在GT核酸电泳系统(Bio-Rad,USA)中200V预电泳2min，然后在120V恒压下电泳5h左右。

6×Loading Buffer(100ml)：0.5M EDTA(pH8.0)2ml；去离子甲酰胺98ml；溴酚兰0.05g；二甲苯氰0.05g。

1×TBE电泳缓冲液：5×TBE缓冲液稀释5倍即按5×TBE缓冲液:去离子水＝1:4的比例稀释。

C.银染

(1)0.1％染色液：待电泳结束，取干净的银染盆，称取0.50g的AgNO₃，500ml去离子水，混匀；

(2)染色：将胶板卸下，剥胶放入0.1％染色液中，每盆银染4板胶，然后在摇床上轻轻摇动，染色15min；

(3)显色液：NaOH 10.00g，无水Na₂CO₃0.20g-0.30g，去离子水500ml，甲醛750μl；

(4)显色：待染色15min后，小心倒掉显色液并用去离子水快速漂洗30s，每盆加入显色液500ml，继续放在摇床上，轻轻摇动10min左右；

(5)照胶：待凝胶变成浅黄，DNA条带完全显现，倒掉显色液，清水冲洗，用照相机记录每板胶的条带情况，以便读取带型。

4、数据处理及目标QTL的定位

利用Illumina GoldenGate SNP3K基因芯片(中国农业大学国家玉米改良中心基因分型平台)对所提取的RIL群体、亲本和F₁进行基因型检测(方法详见“Yan J，YangX，Shah T，et al.High-throughput SNP genotyping with GoldenGate assay inmaize.Molecular Breeding 2010，25:441-451”)，两个亲本各设置一个重复。利用genomestudio进行基因分型。对于基因型数据，定义与母本郑58基因型相同的记为A，与父本昌7-2基因型相同的记为B，缺失记为“-”，利用JoinMap 4.0软件进行目标区间的遗传连锁图谱构建。同时，将162个RIL系分别与郑58、昌7-2杂交的后代分别表示为L1i，L2i(i＝1,…,162)，并通过和式公式Z1＝(L1i+L2i)/2计算每一个RIL系的表型数据。利用复合区间作图法(Zeng Z B.Precision mapping of quantitative traitloci.Genetics,1994,136:1457-1468)进行玉米穗行数QTL的初定位。

结果显示：通过复合区间作图法(Zeng et al.,1994)，结合80个多态性标记在RIL群体(162个)中的基因型检测结果及其分别与郑58、昌7-2杂交后代在五个环境下的穗行数Z1数据，对玉米3号染色上的穗行数QTL进行初定位发现，利用和式Z1＝(L1i+L2i)/2数据，在五个环境下均在两个SNP标记NP15917和NP15989区间检测到穗行数主效QTL，将其命名为qKRN3，其加性效应为0.88行-1.60行，可解释的表型变异为6.73％-17.19％(表1)。

用于检测SNP标记NP15917的探针序列如下：5’-TACAGAAAAGAATCACTCAATAAACCAACATCTCAGTATCAGTACAACATYTCGTCTGCCTCCGATCTGGTCCCTCCAGGCCCTGCCGCCTCCTCACCGGA-3’(序列3，其中带有下划线的Y即为SNP位点，可为T或C)；

用于检测SNP标记NP15989的探针序列如下：5’-GGCACATACATGCTGGCAAGGGAACAAGAAGAGAAACACAGATAACACTTYCGGGTGGTCACCTTCTTTAGCGTGGCGACGGAAGGCATGTGAGAGGGAAC-3’(序列4，其中带有下划线的Y即为SNP位点，可为T或C)。

表1 不同环境下第3号染色体穗行数QTL检测结果

实施例2、玉米穗行数主效QTL qKRN3紧密连锁SSR标记jsr20561的获得

一、目标区间SSR标记的开发

针对玉米第3号染色体初定位的玉米穗行数主效QTL qKRN3，根据已公布玉米自交系B73的基因组序列信息，从玉米数据库MaizeGDB(http://www.maizegdb.org)中调取目标区间(SNP标记NP15917和NP15989)内不同区段上的序列，结合primer 3.0设计相应的引物。然后，经PCR扩增及8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测和小群体验证，最终选取在郑58、昌7-2间多态性明显且带型清晰的SSR引物用于标记分析，最终获得目标区间内多态性明显且带型清晰的SSR标记，共4对，记为多态性分子标记jsr19994、jsr220822、jsr20561和jsr21124。

二、目标区段遗传图谱的构建

利用目标区间两端的SNP标记NP15917、NP15989及区间内新开发的4对多态性SSR标记鉴定并统计郑58(母本)×昌7-2(父本)的RIL系(162个)的基因型。借助JoinMap4.0软件，其中“A”记为2，“B”记为0，“-”记为-1(与母本郑58基因型相同的记为A，与父本昌7-2基因型相同的记为B，缺失记为‘-’”)。利用Kosambi函数，获得各分子标记在目标区段上的最优顺序及标记间新的遗传距离，即目标区段内的遗传连锁图谱(图1)。

由图1可以看出，只有jsr19994和jsr20561共2对SSR标记被加密到目标区间NP15917和NP15989内，其相互间的遗传距离分别为1.2cM、1.1cM和0.7cM。

三、紧密连锁标记jsr20561的获得

结合新开发的4对SSR标记在RIL系中的基因型检测结果，利用RIL系在三个环境下的穗行数数据，同样通过复合区间作图法对穗行数主效QTL进行再次分析发现，目标QTL的峰值均出现在新开发的SSR标记jsr20561附近，其加性效应为0.85行-1.08行，可解释6.9％-7.12％的表型变异(表2)。

表2 不同环境下第3号染色体穗行数主效QTL qKRN3的检测结果

由此可以看出，该穗行数主效QTL qKRN3在多个环境下稳定存在，且与新开发的SSR标记jsr20561紧密连锁。

用于扩增SSR标记jsr20561的引物对：

上游引物：5’-ccgaccctgtaaaccctttt-3’(序列1)；

下游引物：5’-ggggatgagtggaagagaga-3’(序列2)。

实施例3、紧密连锁SSR标记jsr20561在玉米穗行数选择上的应用

一、实验材料

利用目标区段(SNP标记NP15917和NP15989之间)上与亲本郑58基因型相同的一个命名为ZC16的RIL系，与亲本昌7-2杂交得到F₁后再自交一代得到的F₂分离群体，鉴定紧密连锁SSR标记jsr20561在穗行数选择上的应用。

二、实验方法

对于ZC16(母本)×昌7-2(父本)的F₂分离群体，苗期单株挂牌取样后，提取其基因组DNA并以其为模板，用获得与穗行数主效QTL qKRN3紧密连锁的SSR标记jsr20561的扩增引物(序列1和序列2)进行PCR扩增(反应体系和反应条件见下文)，检测并统计各单株的基因型。同时，待玉米成熟后，考查并统计F₂群体中各单株的主穗穗行数。

PCR反应体系(10μL)：Mix 5.0μL；ddH₂O 2.5μL；上下游引物1.5μL(50ng)；浓度为20ng/μL的DNA模板1.0μL。其中，Mix为北京康润诚业生物科技有限公司产品。

PCR反应在Gene Amp PCR System 9700 PCR反应仪上进行，PCR反应程序如下：94℃5min；94℃30s，58℃30s，72℃40s，35个循环；72℃10min；12℃保存。

反应结束后，按照实施例1的方法进行8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

图2为利用SSR标记jsr20561对ZC16×昌7-2的F₂分离群体中部分单株的基因型检测结果。

对分离群体中各单株的基因型及穗行数进行统计分析(表3、图3)发现，利用SSR标记jsr20561，在分离群体的107个单株中共筛选出24株基因型与亲本郑58的基因型相同(即电泳条带的带型相同，为A)，其穗行数平均值为14.00，筛选出33株基因型与亲本昌7-2的基因型相同(即电泳条带的带型相同，为B)，其穗行数平均值为12.94，比基因型与郑58相同的24株的平均穗行数减少1.06行，在统计学上具有显著的差异(P<0.05)。由此可以看出，利用新开发的SSR标记jsr20561，可以在苗期有效筛选出穗行数多的玉米，节约实验成本，提高选择效率，从而快速筛选出穗行数多的株系，用于玉米的高产育种。

表3 ZC16×昌7-2的F₂群体的穗行数统计结果

综合以上结果，本发明首先通过初定位在玉米第3号染色体的两个SNP标记NP15917和NP15989区间检测到一个环境稳定的穗行数主效QTL qKRN3，继而针对目标区间继续开发新的分子标记，并结合RIL群体在多个环境下的穗行数再次进行QTL分析，获得了与目标QTL紧密连锁的SSR标记jsr20561，且利用该标记可有效筛选出穗行数多的玉米植株，提高选择效率，为玉米穗行数QTL的精细定位和分子标记辅助育种奠定标记基础，促进新品种的选育进程，加速玉米高产育种。

Claims (10)

1.用于鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状的引物对，为能够扩增得到如下DNA片段的引物对：所述DNA片段是以玉米基因组DNA为模板，采用序列表中序列1和序列2所示引物对进行PCR扩增所得的DNA片段。

2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于：所述引物对由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成。

3.制备权利要求1所述的引物对的方法，包括将权利要求1或2所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

4.用于鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状的试剂盒，含有权利要求1或2所述的引物对和如下中的至少一种：dNTP、DNA聚合酶和PCR扩增缓冲液。

5.一种鉴定或辅助鉴定玉米杂交后代的穗行数性状的方法，包括如下步骤：

(a1)分别以玉米A、玉米B以及由所述玉米A和所述玉米B杂交而来的玉米杂交后代群体中的每个个体的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的引物对分别进行PCR扩增，得到所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物；

所述玉米A的穗行数多于所述玉米B的穗行数；

(a2)将所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物分别进行电泳，根据电泳结果按照如下确定所述玉米杂交后代的穗行数性状：与所述玉米A的PCR产物的电泳条带的带型相同的所述玉米杂交后代的穗行数多于或候选多于与所述玉米B的PCR产物的电泳条带的带型相同的所述玉米杂交后代。

6.一种从玉米杂交后代群体中获得穗行数相对较高的个体的方法，包括如下步骤：

(b1)分别以玉米A、玉米B以及由所述玉米A和所述玉米B杂交而来的玉米杂交后代群体中的每个个体的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的引物对分别进行PCR扩增，得到所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物；

所述玉米A的穗行数多于所述玉米B的穗行数；

(b2)将所述玉米A的PCR产物、所述玉米B的PCR产物以及所述玉米杂交后代群体中的每个个体的PCR产物分别进行电泳，选取所述玉米杂交后代群体中与所述玉米A的PCR产物的电泳条带的带型相同的个体，即为或候选为所述玉米杂交后代群体中所述穗行数相对较高的个体。

7.一种培育穗行数增加的玉米品种的方法，是选取符合如下条件的玉米作为亲本进行育种：以基因组DNA为模板，采用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳，电泳条带的带型与参照带型A相同；

所述参照带型A为以玉米自交系郑58的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的引物对进行PCR扩增，将所得PCR产物进行电泳所得的带型。

8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增时采用的退火温度为58℃。

9.与玉米穗行数性状相关的分子标记，为以玉米基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物对进行PCR扩增所得的DNA片段。

10.权利要求1或2所述的引物对或权利要求4所述的试剂盒或权利要求9所述的分子标记在如下任一中的应用：

(1)鉴定或辅助鉴定玉米穗行数性状；

(2)玉米育种。