CN105012967A - 一种芩石利咽口服制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药复方制剂的制备方法技术领域，即芩石利咽口服制剂的制备方法。其步骤如下：改进了生石膏、连翘、薄荷、紫苏叶为微波提取挥发油。②将水牛角研磨液加入人工胃液提取和人工肠液提取。③将连翘、薄荷、紫苏叶、石膏残渣与黄芩、知母、地黄、赤芍、皂角刺、蒲公英、甘草共同煎煮。④将前面步骤1、步骤3所得的提取液及挥发油包合物混合均匀，加入步骤2的水牛角提取液，加入0.1%琼脂、0.2%山梨酸，混匀，趁热过滤，放冷，加入步骤①制得的挥发油包合物、1%苹果香精、1.5%甜蜜素，加蒸馏水至1000ml，分装于10ml玻璃安瓶中，灭菌。本发明简单易操作，实验结果稳定。

Description

一种芩石利咽口服制剂的制备方法

技术领域

本发明属于中药复方制剂的制备方法技术领域，即芩石利咽口服制剂的制备方法。具体设计一种先进的具有清咽利喉功效的芩石利咽口服制剂的制备方法，优化了方中中药的提取方法，尤其改进了方中的动物角类药物的提取方法，提高了提取效果，增加了提取收率，充分的利用药材资源，同时通过动物实验，充分证实增加了其清咽利喉的功效。

背景技术

芩石利咽口服液是有黄芩、生石膏、水牛角、连翘、蒲公英、知母、地黄、赤芍、皂角刺、紫苏叶、薄荷、甘草构成的复方口服液，收载于中药成方制剂手册中，为国家正式批准生产的中成药，批准文号为：国药准字Z20010120。其工艺步骤如下：以上十二味，取水牛角加水煎煮七次，前五次每次2小时，后两次每次8小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至100ml，静置，滤过，滤液备用。连翘、薄荷、紫苏叶加水浸泡半小时，提取挥发油，收集挥发油备用；药液待用。残渣与其余黄芩等八味（黄芩燀后投料）加水煎煮三次，每次0.5小时，趁热滤过，合并上述提取挥发油后的滤液，深缩至相对密度为1.15（80℃测），加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置12小时，滤过，回收乙醇至相对密度为1.07（80℃测），加入水牛角浓缩液，加蒸馏水至950ml，于60℃~80℃调pH值为5.8，加入0.1％琼脂、0.2％山梨酸，混匀，趁热滤过，放冷，加入挥发油、0.5％吐温-80、1％苹果香精、1.5％甜蜜素，加蒸馏水至1000ml，分装于10ml玻璃安瓿中，灭菌，即得。

但是生产工艺有部分不合理的部分，如有效成分提取不充分转移率较低，方中动物药水牛角、矿物药石膏的提取效率不高、挥发油及其不稳定，助溶剂吐温-80有害等问题，针对这些问题进行了改进形成新工艺。

发明内容

为了改进芩石利咽口服液及此配方其他口服剂型药物的提取工艺，更好的利用药材资源、得到疗效更好的芩石利咽口服液及此配方其他口服剂型药物，我们发明了本芩石利咽口服制剂的制备方法 。

 微波提取石膏，增加石膏的提取效率，微波提取挥发油，缩短了挥发油的提取时间及提取时的溢出率，同时省时节能提取率高，将挥发油用羟丙基-β-环糊精包合，包合后加入提取液中增加了挥发油的稳定性及均一性；由于挥发油包合工艺的引入，去除了助溶剂吐温-80，避免了吐温-80的应用风险（据报道，吐温-80具有肝毒性、过敏性、外周神经毒性、肾毒性等毒性反应）；采用冷冻粉碎和胶体磨湿法粉碎相结合，配合仿胃肠道环境的仿生态提取技术，结合先进的膜分离技术，提取水牛角中的活性成分，改善节约药材资源，更好的提取和保证水牛角有效成分。

本发明的目的是提供一种改进芩石利咽口服液及此配方其他口服剂型药物的制备方法：一种芩石利咽口服制剂的制备方法，其特征在于步骤如下：①取生石膏、连翘、薄荷、紫苏叶加水浸泡1小时，300-600W微波提取挥发油60min，收集挥发油，羟丙基-β-环糊精包合，包合物备用，提取液备用。②将水牛角表面刷洗干净后抛片、冷冻粉碎，然后投入胶体磨进行湿法粉碎，研磨液加入人工胃液提取（酸及胃蛋白酶水解）和人工肠液提取（胰蛋白酶、糜蛋白酶水解）（1:1-1:50），每步后均加热进行酶灭活，合并提取液，调pH值(1-14)，微孔滤膜过滤、超滤（切割相对分子量分子量20000）除去加入的蛋白酶及大分子杂质的，收集后浓缩成水牛角提取液，备用。③将连翘、薄荷、紫苏叶、石膏残渣（再次利用残渣的好处是更好的提取药液有效成分）与黄芩（0.5小时时放入）、知母、地黄、赤芍、皂角刺、蒲公英、甘草共同煎煮，每次1小时，趁热过滤，并合并提取挥发油后的滤液，浓缩后60-80%醇沉，静置12h后，洗过，回收乙醇至相对密度1.07（80℃测定）。④将前面步骤1、步骤3所得的提取液及挥发油包合物混合均匀，加入步骤2的水牛角提取液，加蒸馏水至950ml，与60-80℃调pH值为5.8，加入0.1%琼脂、0.2%山梨酸，混匀，趁热过滤，放冷，加入步骤①制得的挥发油包合物 、1%苹果香精、1.5%甜蜜素，加蒸馏水至1000ml，分装于10ml玻璃安瓶中，灭菌。

所述的羟丙基-β-环糊精包合挥发油是将β-环糊精溶于适量水中,搅拌加热使其全部溶解,将溶解在无水乙醇中的挥发油缓缓滴入已冷却的β-环糊精水溶液中,在30℃～60℃温度下在约200ｒ/ｍｉｎ磁力搅拌3～5ｈ,减压抽滤,分别用温蒸馏水和无水乙醇洗涤,真空干燥,得到固体包合物，包合物备用。

一种芩石利咽口服制剂的制备，其特征在于步骤如下：

（一）微波提取挥发油及石膏有效成分：取石膏、连翘、薄荷、紫苏叶加水（料液比1:50）浸泡1小时，300-600W微波提取挥发油60min， 收集挥发油，提取液备用。

（二）羟丙基-β-环糊精包合挥发油：将β-环糊精溶于适量水中,搅拌加热使其全部溶解,将溶解在少量无水乙醇中的挥发油缓缓滴入已冷却的β-环糊精水溶液中,在30℃～60℃温度下在约200ｒ/ｍｉｎ磁力搅拌3～5ｈ,减压抽滤,分别用温蒸馏水和无水乙醇洗涤,真空干燥,得到固体包合物。包合物备用。

（三）水牛角的提取方法

1.将水牛角刷净表面，电刨薄片后放入液氮中冷冻后进行粉碎。

2.将冷冻粉碎得水牛角粉，按料液比1:1-1:10投入胶体磨进行湿法粉碎，得研磨液。

3.将上述研磨液，加热至沸腾，沸腾后微沸状态继续提取2-6h。然后分离提取液，水牛角继续加水（料液比1:1-1:10）重复上述步骤提取2-4次，过滤后合并提取液浓缩后备用；水牛角药渣备用。

4.将步骤3水提后的水牛角药渣，加入人工胃液进行水解，温度39℃，水解4-6小时，加热至85℃灭活蛋白酶，过滤后上清液浓缩备用，水牛角药渣备用；所述人工胃液按《中国药典》附录配制：稀盐酸16.4ml，加水800ml与胃蛋白酶10g，摇匀后，加水衡释至100ml，用量同比例放大；人工胃液进行水解的好处是：与水牛角粉末服用后进入机体在胃中的pH值、酶的种类和浓度等消化条件一致，通过这种仿生方法，在体外得到与体内一致的水解物，避免以往酸碱酶水解法导致的过度水解或水解不到位，避免由于不同的酶，酶切位点各异，酶的选择影响了水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸组成, 从而导致的酶解产物生物活性的差异。

5.将步骤4水牛角药渣，加入人工肠液进行水解，温度39℃，水解8小时，加热至85℃灭活蛋白酶，过滤后上清液浓缩备用；所述人工肠液按中国药典附录配制：取磷酸二氢钾6.8g，加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，用量同比例放大；人工肠液水解的好处是：与水牛角粉末服用后进入机体在肠道中的PH值、酶的种类和浓度等消化条件一致，通过这种仿生方法，在体外得到与体内一致的水解物，避免以往酸碱酶水解法导致的过度水解或水解不到位，同时避免由于不同的酶，酶切位点各异，酶的选择影响了水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸组成, 从而导致的酶解产物生物活性的差异。

6.将步骤3、4、5所得的浓缩液合并后浓缩，进行透析除盐至透析液中电导率与配置人工胃液和肠液的蒸馏水相近，除盐后的提取液过微孔滤膜后进行超滤，切割相对分子量分子量15000－20000（截留至此分子量的原因是水解得到氨基酸和小肽的分子量均低于此分子量，同时，由于加入的人工胃液和人工肠液中的消化酶的分子量均大于20000，未被水解的大分子杂质分子量也大于20000）除去加入酶及大分子杂质的，收集后浓缩成水牛角提取液；超滤好处是：操作条件温和不破坏水解物的结构，是分离小肽及氨基酸体系的理想方法。

7. 提取液浓缩备用。

（四）将石膏、连翘、薄荷、紫苏叶残渣与黄芩（0.5小时时放入）、知母、地黄、赤芍、皂角刺、紫苏叶、薄荷、甘草共同煎煮，每次1小时，趁热过滤，并合并提取挥发油后的滤液，浓缩后60-80%醇沉，静置12h后，洗过，回收乙醇至相对密度1.07（80℃测定）。

（五）将前面所得的提取液及挥发油包合物混合均匀，加入加入水牛角、石膏提取液，加蒸馏水至950ml，与60-80℃调PH值为5.8，加入0.1%琼脂、0.2%山梨酸，混匀，趁热过滤，放冷，加入挥发油包合物、1%苹果香精、1.5%甜蜜素，加蒸馏水至1000ml，分装于10ml玻璃安瓶中，灭菌。

本发明优点在于：

1、将连翘、薄荷、紫苏叶提取挥发油，挥发油用羟丙基-β-环糊精包合，加入口服液，保证了挥发油的稳定性和均一性。同时去除了助溶剂吐温-80，药物临床应用更安全。从实验例1的结果可以看出改进工艺后，口服液中挥发油的含量明显增加，且均一性比较好，在同一批次的不同取样点获得的挥发油含量均一性有显著改善，保存3个月后，改进工艺的口服液挥发油稳定。

2.方中动物药水牛角提取效率不高、冷冻粉碎配合胶体磨湿法粉碎获得粒径更小的水牛角粉末，提高提取面积，更有利于下一步的提取，采用人工胃液提取和人工肠液提取，微孔滤膜过滤，水牛角提取液收率比较高，总含氮量为水煎的30倍，酸碱水解的21倍，酶水解的20倍。最终比常规工艺大大提高了浸膏率，总氨基酸得率。同时避免了酸碱分离工艺钡的残留，避免了钡离子对心脏的毒性。从实验例1的结果可以看出，本法提浸膏率为25.25%，总氨基酸得率为18.98%。明显具有优势。

3、本发明采取仿生态的提取方法、条件温和，胃蛋白酶的含量和酸度、胰蛋白酶的含量和pH值以及提取的温度，均与正常水牛角粉末进入机体后的消化环境一致，避免了由于不同的酶，酶切位点不通对水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸组成的影响，得到的提取液与机体内自然吸收的成分相似，所得成分状态好、药理活性好。采取了先进的膜分离技术，得到了更纯的具有解热抗炎活性的活性部位群。所得的提取液和机体正常吸收的成分及比例相似，更易于吸收产生疗效。

4、改进了石膏的提取工艺，更符合中医传统的用药方式要求。

5、从实验例3可知，本发明方法解热作用优于旧方法。从实验例4可知，本发明方法抗炎作用优于旧方法。实验工艺简单易操作，实验结果稳定，可以适用于工业大生产。

具体实施方式

实施例1

一种芩石利咽口服制剂的制备，其特征在于步骤如下：

（一）微波提取挥发油及石膏有效成分：取石膏、连翘、薄荷、紫苏叶加水（料液比1:50）浸泡1小时，300-600W微波提取挥发油60min， 收集挥发油，提取液备用。

（二）羟丙基-β-环糊精包合挥发油：将β-环糊精溶于适量水中,搅拌加热使其全部溶解,将溶解在少量无水乙醇中的挥发油缓缓滴入已冷却的β-环糊精水溶液中,在30℃～60℃温度下在约200ｒ/ｍｉｎ磁力搅拌3～5ｈ,减压抽滤,分别用温蒸馏水和无水乙醇洗涤,真空干燥,得到固体包合物。包合物备用。

（三）水牛角的提取方法

1.将水牛角刷净表面，电刨薄片后放入液氮中冷冻后进行粉碎；

2.将冷冻粉碎得水牛角粉，按料液比1:1-1:10投入胶体磨进行湿法粉碎，得研磨液；

3.将上述研磨液，加热至沸腾，沸腾后微沸状态继续提取2-6h。然后分离提取液，水牛角继续加水（料液比1:1-1:10）重复上述步骤提取2-4次，过滤后合并提取液浓缩后备用；水牛角药渣备用；

4.将步骤3水提后的水牛角药渣，加入人工胃液进行水解，温度39℃，水解4-6小时，加热至85℃灭活蛋白酶，过滤后上清液浓缩备用，水牛角药渣备用；所述人工胃液按《中国药典》附录配制：稀盐酸16.4ml，加水800ml与胃蛋白酶10g，摇匀后，加水衡释至100ml，用量同比例放大；人工胃液进行水解的好处是：与水牛角粉末服用后进入机体在胃中的PH值、酶的种类和浓度等消化条件一致，通过这种仿生方法，在体外得到与体内一致的水解物，避免以往酸碱酶水解法导致的过度水解或水解不到位，避免由于不同的酶，酶切位点各异，酶的选择影响了水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸组成, 从而导致的酶解产物生物活性的差异；

5.将步骤4水牛角药渣，加入人工肠液进行水解，温度39℃，水解8小时，加热至85℃灭活蛋白酶，过滤后上清液浓缩备用；所述人工肠液按中国药典附录配制：取磷酸二氢钾6.8g，加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，用量同比例放大；人工肠液水解的好处是：与水牛角粉末服用后进入机体在肠道中的PH值、酶的种类和浓度等消化条件一致，通过这种仿生方法，在体外得到与体内一致的水解物，避免以往酸碱酶水解法导致的过度水解或水解不到位，同时避免由于不同的酶，酶切位点各异，酶的选择影响了水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸组成, 从而导致的酶解产物生物活性的差异；

6.将步骤3、4、5所得的浓缩液合并后浓缩，进行透析除盐至透析液中电导率与配置人工胃液和肠液的蒸馏水相近，除盐后的提取液过微孔滤膜后进行超滤，切割相对分子量分子量15000－20000（截留至此分子量的原因是水解得到氨基酸和小肽的分子量均低于此分子量，同时，由于加入的人工胃液和人工肠液中的消化酶的分子量均大于20000，未被水解的大分子杂质分子量也大于20000）除去加入酶及大分子杂质的，收集后浓缩成水牛角提取液；超滤好处是：操作条件温和不破坏水解物的结构，是分离小肽及氨基酸体系的理想方法；

7. 提取液浓缩备用。

（四）将连翘、薄荷、紫苏叶残渣与黄芩（0.5小时时放入）、知母、地黄、赤芍、皂角刺、紫苏叶、薄荷、甘草共同煎煮，每次1小时，趁热过滤，并合并提取挥发油后的滤液，浓缩后60-80%醇沉，静置12h后，洗过，回收乙醇至相对密度1.07（80℃测定），

（五）将前面所得的提取液及挥发油包合物混合均匀，加入加入水牛角、石膏提取液，加蒸馏水至950ml，与60-80℃调PH值为5.8，加入0.1%琼脂、0.2%山梨酸，混匀，趁热过滤，放冷，加入挥发油包合物、1%苹果香精、1.5%甜蜜素，加蒸馏水至1000ml，分装于10ml玻璃安瓶中，灭菌。

实验例1：挥发油包合前后稳定性、均一性比较研究

取新工艺制得的制剂，分别进行3个月挥发性实验（20℃放置0日、1月、2月、3月定时取样，以薄荷中薄荷醇为指标性成分，用气相色谱法进行含量测定）；分别取同一批次不同时间点生产的10只样品进行均一性实验，以薄荷中薄荷醇为指标性成分，用气相色谱法进行，测定结果如下：

表-1新旧工艺挥发性试验结果

	新工艺（mg/1000ml）	原工艺（mg/1000ml）
			0日	1.71	0.89
1月	1.68	0.75
			2月	1.67	0.62
3月	1.59	0.45

表-2新旧工艺均一性试验结果

	新工艺	原工艺
			1	1.71	0.89
2	1.70	0.87
			3	1.75	0.69
4	1.75	0.92
			5	1.75	0.71
6	1.72	0.65
			7	1.69	0.93
8	1.68	0.81
			9	1.73	0.78
10	1.75	0.91

从实验结果可以看出改进工艺后，口服液中挥发油的含量明显增加，且均一性比较好，在同一批次的不同取样点获得的挥发油含量均一性有显著改善，保存3个月后，改进工艺的口服液挥发油稳定。

实验例2：水牛角不同提取方法的比较研究

水牛角刷净表面，刨成薄片后打成细粉，分别用以下方法进行提取并测定总提取物重量及氨基酸（蛋白的含量）。

2.1醇提取法：称取50g水牛角细粉置于5000ml圆底烧瓶中，配制50％乙醇，第一次加入8倍量50％乙醇，即400ml于圆底烧瓶中，连接冷凝回流装置，电热套加热至沸腾，调压至微沸状态，1h。过滤，第二次（同上）第三次（同上）。

滤液用减压回收乙醇装置，回收乙醇，剩余少量滤液置于已烘干至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干。 于105℃烘箱内，干燥3h,置干燥器中冷却0.5h,称重。计算总提取物收率。

2.2 酸提取法：称取50g水牛角细粉置于5000ml圆底烧瓶中，配制4mol/L 硫酸溶液400ml，加入圆底烧瓶。连接冷凝回流装置，回流水解6h，放冷后，调整溶液体积至400ml。取出200ml 用50％NaOH，调整至PH4，用抽滤机过滤，再用10％NaOH调整滤液至PH7，取50ml，用透析膜透析后，置于蒸发皿中，水浴锅蒸干，于105℃烘箱内，干燥3h，置干燥器中冷却0.5h,称重。计算总提取物收率。

2.3碱提取法：称取水牛角细粉50g，置5000ml圆底烧瓶中，配制4mol/L的NaOH溶液500ml，加入圆底烧瓶中。连接冷凝回流装置，回流水解6h，放冷后，调节溶液体积至650ml，取出325ml用4mol/L的硫酸溶液，调整到PH4，抽滤，滤液用10％NaOH溶液调整至PH7，取出50ml，用透析膜透析后，置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘箱内，干燥3h，置干燥器中冷却0.5h,称重。计算总提取物收率。

2.4 酸碱提取法：将酸水解液及碱水解溶液各取1/2量(即酸水解液200mL碱水解液325ml)混合,再加50％NaOH调至PH4,过滤,滤液用10%NaOH调至PH7, 取50ml，用透析膜透析后，置于蒸发皿中，水浴锅蒸干，于105℃烘箱内，干燥3h，置干燥器中冷却0.5h,称重。计算总提取物收率。

2.5 酶水解法：称取50g水牛角+0.0125g胰酶+40ml缓冲液（PH7.5、酶底比1:80、料液比1:40）置震荡培养箱中，42℃,3h，置烘箱中105℃灭酶15min取出过滤，滤液用透析膜透析后，置恒重蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘箱内，干燥3h，置干燥器中冷却0.5h,称重。计算总提取物收率。

2.6本发明提取方法：取水牛角50g刷净表面，电刨薄片后放入液氮中冷冻后进行粉碎。将冷冻粉碎得水牛角粉，按料液比1:2投入胶体磨进行湿法粉碎得研磨液。将研磨液，加热至沸腾，沸腾后微沸状态继续提取4h。然后分离提取液，水牛角继续加水重复上述步骤提取2次，合并提取液浓缩后备用，水牛角粉末备用。将步骤2水提后的水牛角末，加入人工胃液（《中国药典》附录：稀盐酸16.4ml，加水约800ml与胃蛋白酶10g，摇匀后，加水衡释至100ml））进行水解，温度39℃，水解4小时，加热至85℃灭活蛋白酶，过滤后上清液浓缩备用。水牛角粉末备用。将步骤4水牛角粉末，加入人工肠液（《中国药典》附录：取磷酸二氢钾6.8g，加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节PH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml）进行水解，温度39℃，水解8小时，加热至85℃灭活蛋白酶，过滤后上清液浓缩备用。将以上2步所得的浓缩液合并后浓缩，进行透析除盐，除盐后的提取液过微孔滤膜后进行超滤，截取相对分子量分子量20000以下除去加入的蛋白酶及大分子杂质的，收集后浓缩成水牛角提取液。浓缩,喷雾干燥,称量,计算总提取物收率。进行氨基酸分析。

 截留的氨基酸成分分析：水牛角提取物中含有氨基酸为：甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、天门冬氨酸 (Asp)、胱氨酸(Cly)、丙氨酸(Ala)、苏氨酸(Thr)、鸟氨酸 (Orn)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(γ-Aba)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His) 精氨酸(Arg)、脯氨酸(Pro)、缬氨酸(Val)、甲硫氨酸(Met)、酪氨酸(Tyr)、异亮氨酸( Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe), 蛋氨酸（Met），其中酪氨酸，丙氨酸、颉氨酸的含量相对较高。

总氨基酸含量测定　精密称取各提取物10mg,用蒸馏水配成10 mL,精密吸取0·5 mL置5 mL试管中,加水至2 mL,加茚三酮试剂0·5 mL,摇匀,置沸水浴中15 min,取出以流水冷却,加正丙醇-水(1∶1)混合液至刻度,摇匀,置1 mL比色池中,于570 nm波长处测定吸收度,以丙氨酸溶液为标准溶液绘制标准曲线,计算总氨基酸含量。

实验结果

水提浸膏率为0.58%，总氨基酸得率为0.38%。醇提浸膏率为0.79％，总氨基酸得率为0.61%。酸提浸膏率为0.97％，总氨基酸得率为0.76%。碱提浸膏0.29％，总氨基酸得率为1.96%。酸碱提浸膏率为1.51%，总氨基酸得率为1.18%。酶提浸膏率为10.22％，总氨基酸得率为7.98%。本法提浸膏率为25.25%，总氨基酸得率为18.98%。明显具有优势。

实验例3： 新旧芩石利咽制备方法解热作用的比较研究

采用皮下酵母致热法评价了新旧芩石利咽制备工艺的解热作用。结果表明新旧制备方法均可降低酵母致热大鼠体温，具有明显的解热作用。但本发明的新制备方法提取方法解热作用最佳。

实验方法：

将选取的健康大鼠随机分为4组，分别为空白对照组、阿司匹林阳性对照组、旧工艺芩石利咽组，新工艺芩石利咽组，皮下注射酵母诱导发热，5小时后开始给药，空白组给予等容积生理盐水，以各时间点的体温变化值作组间比较,实验结果数据以平均值±标准偏差表示。结果见表3，表3结果表明新工艺芩石利咽解热作用优于旧工艺芩石利咽。

表3  新旧工艺芩石利咽口服液解热作用的比较研究（X±SD,n=10）

实验例4：新旧芩石利咽制备方法抗炎作用的比较研究

采用小鼠耳二甲苯法致炎，评价了新旧芩石利咽制备工艺的抗炎作用。结果表明新旧制备方法均可减轻小鼠耳肿胀，具有明显的抗炎作用。但本发明的新制备方法提取方法抗炎作用最佳。

实验方法：

将选取的健康昆明种小鼠随机分为4组，分别为空白对照组、阿司匹林阳性对照组、旧工艺芩石利咽组，新工艺芩石利咽组， 灌胃给药0.5h后,于小鼠右耳内外侧各均匀涂抹0.05ml/只二甲苯致炎，10h后剪下小鼠左右耳,用打孔器分别在左、右耳同一部位打下直径6mm等大的圆形耳片,称重,求左、右耳片重,计算肿胀度。空白组给予等容积生理盐水，以各时间点的组肿胀变化值作组间比较,实验结果数据以平均值±标准偏差表示。结果见表4，

肿胀度=右耳片质量-左耳片质量

抑制率(%)=(溶媒组耳肿胀度-用药组耳肿胀度)/溶媒组耳肿胀度×100%

表3  新旧工艺芩石利咽口服液抗炎作用的比较研究（X±SD,n=10）

分组	肿胀度（mg）	抑制率（%）
			生理盐水	10.71±2.26
阿司匹林	5.21±2.01	51.35
			旧工艺组	7.98±2.26	25.49
新工艺组	6.92±2.27	35.41

表4结果表明新工艺芩石利咽抗炎作用优于旧工艺芩石利咽。

Claims (2)

1.一种芩石利咽口服制剂的制备方法，其特征在于步骤如下：

①取生石膏、连翘、薄荷、紫苏叶加水浸泡1小时，300-600W微波提取挥发油60min，收集挥发油，羟丙基-β-环糊精包合，包合物备用，提取液备用；

②将水牛角表面刷洗干净后抛片、冷冻粉碎，然后投入胶体磨进行湿法粉碎，研磨液加入酸及胃蛋白酶水解的人工胃液提取和胰蛋白酶、糜蛋白酶水解的人工肠液提取1:1-1:50，每步后均加热进行酶灭活，合并提取液，调pH值，微孔滤膜过滤、超滤除去加入的蛋白酶及大分子杂质的，收集后浓缩成水牛角提取液，备用；

③将连翘、薄荷、紫苏叶、石膏残渣与黄芩、知母、地黄、赤芍、皂角刺、蒲公英、甘草共同煎煮，每次1小时，趁热过滤，并合并提取挥发油后的滤液，浓缩后60-80%醇沉，静置12h后，洗过，回收乙醇至相对密度1.07，80℃测定；

④将前面步骤1、步骤3所得的提取液及挥发油包合物混合均匀，加入步骤2的水牛角提取液，加蒸馏水至950ml，与60-80℃调pH值为5.8，加入0.1%琼脂、0.2%山梨酸，混匀，趁热过滤，放冷，加入步骤①制得的挥发油包合物 、1%苹果香精、1.5%甜蜜素，加蒸馏水至1000ml，分装于10ml玻璃安瓶中，灭菌。

2.按照权利要求1所述的芩石利咽口服制剂的制备方法，其特征在于步骤如下：所述的羟丙基-β-环糊精包合挥发油是将β-环糊精溶于适量水中,搅拌加热使其全部溶解,将溶解在无水乙醇中的挥发油缓缓滴入已冷却的β-环糊精水溶液中,在30℃～60℃温度下在约200ｒ/ｍｉｎ磁力搅拌3～5ｈ,减压抽滤,分别用温蒸馏水和无水乙醇洗涤,真空干燥,得到固体包合物，包合物备用。