CN112121074B - 一种防制猪病毒性疾病的复方植物提取物制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及兽药技术领域，更具体地，本发明涉及一种防制猪病毒性疾病的复方植物提取物制剂及其应用；本发明通过以复方植物多糖、皂甙等有效成分，并控制其成分含量，来调节动物自身免疫力，提高病毒感染阈值；植物多糖成分通过与病毒结合靶点的结合，阻断病毒粘附；本发明通过规范关键指标成分及含量，做到复方植物提取物产品质量可控，保障制剂防治病毒的效果；本发明通过选择温补类、无明显有害物质的植物作为原料，可以实现长期群体给药，提取方法简单，只需进行简单过滤，无需进一步纯化，降低成本；本发明提供的复方植物提取物制剂，同时具有促进猪等牲畜食欲、抗氧化、抗应激、利尿排毒、促进增产等辅助性作用，提高应用范围。

Description

一种防制猪病毒性疾病的复方植物提取物制剂及其应用

技术领域

本发明涉及兽药技术领域，更具体地，本发明涉及一种防制猪病毒性疾病的复方植物提取物制剂及其应用。

背景技术

病毒性疾病对养猪业造成重大损失，目前尚无有效的防治药物。常见的的有蓝耳病、伪狂犬病等。养猪生产中，病毒性疾病的控制仍然是一个难点，特别是近年来一些新发的病毒性疾病如蓝耳病、圆环病毒病、非洲猪瘟等给我国养猪业造成了巨大的损失。蓝耳病又称呼吸与繁殖障碍综合症，是一种在猪群中广泛感染的病毒性疾病，造成母猪繁殖与呼吸障碍，从而严重影响仔猪初生重、断奶总、成活率等生产指标。高致病性蓝耳病甚至造成繁殖母猪快速死亡；猪伪狂犬病一旦感染，终生带毒，也是重要的繁殖障碍疾病，同时造成出生仔猪大量死亡。

植物类药物资源丰富，在病毒病控制方面有一定的优势。近年来的研究表明，一些复方植物成分(包括中药)具有增强免疫力，抗氧化、抗菌抗病毒、促生长等多种功效，对病毒性疾病防治有一定的效果，市面上多数抗病毒制剂选用板蓝根、大青叶、连翘、金银花等清热解毒类植物组方，该类制剂能直接作用于病毒，用于病毒性疾病的治疗有一定的效果，但他们也有药性寒凉的缺点，长期使用会对动物健康造成不良影响，降低生长性能。

目前复方植物成分制剂一般分为三种，分别是使用中药简单混合、提取纯的中药有效成分，或者使用植物提取物，其中中药简单混合广泛存在品质不稳定、生物利用度低、适口性差和使用量过大的问题，如申请号为201410590846.5一种治疗蓝耳病的中药，存在成分含量不稳定、适口性差、使用量过大等不足，致使效果难以保证。而提取纯的中药有效成分则价格昂贵，成本较高，故研制植物提取物复方制剂是一个重要发展方向。

发明内容

为了解决上述问题，本发明第一个方面提供了一种复方植物提取物制剂，所述制剂的成分包括黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸；

所述黄芪甲苷占制剂的重量百分数大于等于0.06wt％；

所述刺五加苷占制剂的重量百分数大于等于0.2wt％；

所述甘草酸占制剂的重量百分数大于等于0.8wt％。

作为本发明一种优选的技术方案，所述制剂的制备方法包括：

水酶提取：将茯苓、黄芪粉碎后，在茯苓加入水和酶，进行水酶提取、过滤，得到滤液A和滤渣A；

碱提：将滤渣A加入稀醇溶液，并加入粉碎后的黄芪，混合，在pH为11～ 12下加热提取、过滤，得到滤液B和滤渣B；

醇提：将刺五加粉碎后，加入乙醇-水溶液，回流提取、过滤，得到滤液C 和滤渣C；

水提：将甘草粉碎后，加入滤渣B、滤渣C混合后，加水回流提取、过滤，得到滤液D和滤渣D后，将滤渣D继续水提提取、过滤，得到滤液E；

干燥：合并滤液A、滤液B、滤液C、滤液D和滤液E，浓缩、干燥，得到所述制剂。

作为本发明一种优选的技术方案，所述水酶提取中，将茯苓粉碎后，加入 75～90wt％醇溶液低温浸提5～7h后，过滤，得到滤液F和滤渣F，将滤渣F加入水和β-葡聚糖酶，在50～65℃浸提5～7h、过滤，得到滤液A和滤渣A。

作为本发明一种优选的技术方案，所述碱提中，将滤渣A加入3～5wt％稀醇溶液，并加入粉碎后的黄芪，混合，在pH为11～12下加热到70～90℃提取 1～3h、过滤，得到滤液B1和滤渣B1，将滤渣B1重复碱提，得到滤液B2和滤渣B2，合并滤液B1和滤液B2，得到滤液B。

作为本发明一种优选的技术方案，所述醇提中，将刺五加和辅料一粉碎后，加入65～75wt％乙醇-水溶液，回流提取2～4h、过滤，得到滤液C和滤渣C。

作为本发明一种优选的技术方案，所述辅料一包括女贞子、金龟莲、栀子根中的两种及以上。

作为本发明一种优选的技术方案，所述水提中，将甘草、辅料二粉碎后，加入滤渣C混合，得到混合物一，并加入水回流提取、过滤，得到滤液D和滤渣 D后，将滤渣D继续水提提取、过滤，得到滤液E。

作为本发明一种优选的技术方案，所述辅料二包括白术、山药、当归、山楂中的两种及以上。

作为本发明一种优选的技术方案，黄芪、甘草、刺五加和茯苓的重量比为 (10～15)：(10～15)：(15～20)：(15～20)。

本发明第二个方面提供了一种如上所述的复方植物提取物制剂的应用，用于防制猪病毒性疾病。

本发明与现有技术相比具有以下有益效果：

(1)本发明通过以复方植物多糖、皂甙等有效成分，并控制其成分含量，来调节动物自身免疫力，提高病毒感染阈值；植物多糖成分通过与病毒结合靶点的结合，阻断病毒粘附。

(2)本发明通过规范关键指标成分及含量，做到复方植物提取物产品质量可控，保障制剂防治病毒的效果。

(3)本发明通过选择温补类植物作为原料，去除寒凉的清热解毒类中药，各植物成分中无明显有害物质，可以实现长期群体给药，不影响动物健康。

(4)且通过采用合适的工艺对多糖、苷类等全成分进行提取，提取方法简单，只需进行简单过滤，无需进一步纯化，降低成本，提高经济性和可行性。

(5)本发明提供的复方植物提取物制剂，同时具有促进猪等牲畜食欲、抗氧化、抗应激、利尿排毒、促进增产等辅助性作用，提高应用范围。

附图说明

图1为某大型猪场商品母猪场7.15-9.15日每日母猪死亡数量统计。

图2为某大型母猪场7.15-9.15日每日母猪检测抗原阳性数量统计。

具体实施方式

参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。

说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。

此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。

以下通过具体实施方式说明本发明，但不局限于以下给出的具体实施例。

本发明第一个方面提供了一种复方植物提取物制剂，本发明所述制剂的成分包括黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸；

所述黄芪甲苷占制剂的重量百分数大于等于0.06wt％；

所述刺五加苷占制剂的重量百分数大于等于0.2wt％；

所述甘草酸占制剂的重量百分数大于等于0.8wt％。

黄芪甲苷是一种从黄芪上提取出来的高纯度药物，有“超级黄芪多糖”之称。黄芪甲苷能增强机体免疫力、提高机体的抗病能力。黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ。其中生物活性最好的是黄芪苷IV即黄芪甲苷。黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。

刺五加苷(紫丁香苷)白色结晶，溶于热水喝乙醇，微溶于冷水，不溶于醚，来源于刺五加、救必应、槲寄生、暴马子皮。刺五加苷，又名紫丁香苷，分子式为C₁₇H₂₄O₉，密度为1.415g/cm³。

甘草酸来源于豆科植物甘草的根和根茎，是甘草中最主要的活性成分，含量约10％。甘草酸又称甘草皂甙、甘草甜素，它是由甘草次酸及2分子葡萄糖醛酸所组成的苷。白色至微黄色结晶性粉末，没有气味，有特异的甜味，甜度约为蔗糖的200倍。难溶于水、稀乙醇。易溶于热水，冷却后呈粘稠状胶冻。甘草酸为三萜皂甙。对热、碱和盐稳定。甘草酸在临床上已被用于治疗慢性肝炎。甘草酸在体外可明显抑制HIV阳性病人血单核细胞中的HIV复制。甘草酸还可以减少感染了致死剂量流感病毒的小鼠的发病率和死亡率。

所述制剂的成分还包括甘草苷。甘草苷为白色结晶，易溶于甲醇，几乎不溶于乙醚，来源于甘草。甘草甙是甘草黄酮类化合物中重要的单体活性成分，具有抗氧化、抗H IV等多种药理作用。对大白鼠幽门结扎形成的溃疡有抑制作用，对大鼠腹水肝癌及小鼠艾氏腹水癌细胞能产生形态学上的变化。在一种实施方式中，所述甘草苷占制剂的重量百分数大于等于0.05wt％。

申请人发现，当控制制剂中黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸的含量在一定范围以上时，通过黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸等有效成分共同作用，增强抗病能力，提高了病毒感染的阈值，并有改善生产性能、促进生长等作用，这可能是因为黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸等有效成分可以增强巨嗜细胞和T淋巴细胞的作用的同时，对特异、免疫和非特异性免疫均有促进作用，提高机体的抗病能力，从而发挥好的抗病毒性疾病的能力，促进畜牧等的产量和存活率。且对促进牲畜食欲、抗氧化、抗应激、利尿排毒、促进增产等也有好的作用。

因为本发明选择温补类植物作为原料，各植物成分中无明显有害物质，故对于粗纤维、蛋白质等水不溶物的非功效成分也可用于饲喂牲畜，但是在提取过程中，水不溶物的增加也意味着有效成分在制剂中含量的减少，故也需控制水不溶物不能太多。在一种实施方式中，制剂的成分还包括水不溶物，所述水不溶物占制剂的重量百分数小于等于35wt％。

在一种实施方式中，本发明所述制剂的制备方法包括：

水酶提取：将茯苓、黄芪粉碎后，在茯苓加入水和酶，进行水酶提取、过滤，得到滤液A和滤渣A；

碱提：将滤渣A加入稀醇溶液，并加入粉碎后的黄芪，混合，在pH为11～ 12下加热提取、过滤，得到滤液B和滤渣B；

醇提：将刺五加粉碎后，加入乙醇-水溶液，回流提取、过滤，得到滤液C 和滤渣C；

水提：将甘草粉碎后，加入滤渣B、滤渣C混合后，加水回流提取、过滤，得到滤液D和滤渣D后，将滤渣D继续水提提取、过滤，得到滤液E；

干燥：合并滤液A、滤液B、滤液C、滤液D和滤液E，浓缩、干燥，得到所述制剂。

水酶提取

在一种实施方式中，本发明所述水酶提取中，将茯苓粉碎后，加入75～90wt％醇溶液低温浸提5～7h后，过滤，得到滤液F和滤渣F，将滤渣F加入水和β- 葡聚糖酶，在50～65℃浸提5～7h、过滤，得到滤液A和滤渣A。本发明不对低温浸提的温度做具体限定，为本领域熟知的温度，可列举的有0～5℃。

茯苓，中药名。为多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。茯苓中含有三萜类：茯苓酸(pachymic acid)，16α-羟基齿孔酸(tumulosic acid)3β- 羟基-7.9(11)，24-羊毛甾三烯-21-酸；多聚糖类主要为茯苓聚糖(pachyman)，含量最高可达75％，为一种具有β(1→6)吡喃葡萄糖聚糖支链的β(1→3)吡喃葡萄糖聚糖，切断支链成β(1→3)葡萄糖聚糖，称为茯苓次聚糖(pachymaran)，常称为茯苓多糖(PPS)，具抗肿瘤活性。此外，茯苓中还含有三萜羧酸茯苓酸 (pachymic acid)、土莫酸(tumulosic acid)、齿孔酸(eburicoic acid)、松苓酸 (pinicolic acid)、松苓新酸(3β-hydroxylanosta-7,9(11)，24-trien-21-oic acid) 等。又报道尚含7,9(11)-去氢茯苓酸、7,9(11)-去氢土莫酸、多孔菌酸C (polyporenic acid C)及3,4-裂环-羊毛甾烷型(3,4-secolanostane)等三萜类化合物。多孔菌酸外用于肝脏具细胞毒作用。此外，还含有组氨酸、腺嘌呤、胆碱、β-茯苓聚糖酶、蛋白酶、辛酸、月桂酸、棕榈酸、脂肪、卵磷脂、麦角甾醇、磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺等。现代药理学研究表明，茯苓提取物中的三萜类化合物和多糖作为天然活性物质具有多种生理活性，如提高机体免疫力、抗菌、降糖、抗肿瘤等作用。

优选地，本发明所述茯苓粉碎的目数为70～90目。

本发明所述水酶提取中醇溶液为醇的水溶液，本发明不对醇溶液中醇的种类做具体限定，可列举的有，甲醇、乙醇、异丙醇。在一种实施方式中，本发明所述水酶提取中，茯苓和醇溶液的重量比为1：(4～8)。

更优选地，本发明所述水酶提取中，本发明所述滤渣E和水的重量比为1： (2～4)。

本发明所述酶用于茯苓中多糖的降解，可列举的有，β-葡聚糖酶，是采用Bacillus Lichenifomis菌株经过液态深层发酵制得，该酶是一种内切酶，专一作用于β-葡聚糖的1,3及1,4糖苷键，产生3-5个葡萄糖单位的低聚糖及葡萄糖。进一步优选地，本发明所述水酶提取中，酶浓度为0.5～1U/mL。

在特定条件下，1分钟内转化1微摩尔底物所需的酶量为一个活力单位(U)。酶浓度为每毫升酶-水溶液中酶的活力。

在茯苓中含有三萜类、多聚糖类物质，其中茯苓多糖(PPS)是茯苓的主要有效成分。近代临床及药理研究表明茯苓多糖具有很好的抗肿瘤作用，该糖具有增强巨嗜细胞和T淋巴细胞的细胞毒作用，还能增强细胞的免疫反应并激活机体对肿瘤的免疫监视系统，但茯苓多糖难溶于水，高浓度乙醇、正丁醇、丙酮等有机溶剂，没有生物活性，需要通过酶解等方法来,降低分子量，提高水溶性，进而促进生物活性的表达，为了促进制剂中茯苓多糖含量和溶解度，申请人通过水酶法，采用β-葡聚糖酶在一定量的水溶液对茯苓中的多糖进行酶解，提高制剂中茯苓多糖的含量，且申请人发现，酶解的温度不能太高，当太高时虽然促进酶解速率，但同时对葡聚糖酶具有破坏作用。

另外，申请人发现，当直接对茯苓粉碎后，进行酶解时，因为茯苓多糖等都在细胞内部，且酶解温度不能太高，酶解和提取效率较差，而申请人经过试验发现，在酶解前使用一定浓度醇进行低温浸提时，可促进茯苓多糖的溶解的同时，避免水不溶物过多。这可能是因为通过使用较高含量的醇在低温下浸提一段时间，因为细胞内外浓度差的不同，促进醇溶液向细胞内扩散，细胞内的有效成分向醇溶液浸出，且通过控制高浓度的醇溶液，可避免茯苓多糖等溶于醇溶液中，造成活性损失，促进后续酶解的过程。且申请人发现，通过使用一定浓度醇低温浸提，相对于高温浸提，或者使用更高浓度的醇溶液，可有效减少水不溶物的含量。避免水不溶物含量过多对有效成分作用的影响。

碱提

在一种实施方式中，本发明所述碱提中，将滤渣A加入3～5wt％稀醇溶液，并加入粉碎后的黄芪，混合，在pH为11～12下加热到70～90℃提取1～3h、过滤，得到滤液B1和滤渣B1，将滤渣B1重复碱提，得到滤液B2和滤渣B2，合并滤液B1和滤液B2，得到滤液B。

黄芪，中药材名。样品为豆科植物蒙古黄芪的根。春、秋季采挖，除去泥土、须根及根头，晒至六七成干，理直扎捆后晒干。功能主治为：补气固表，托毒排脓，利尿，生肌。用于气虚乏力、久泻脱肛、自汗、水肿、子宫脱垂、慢性肾炎蛋白尿、糖尿病、疮口久不愈合。黄芪中含黄酮类成分毛蕊异黄酮(calycosin)、 3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷，还含黄芪皂甙Ⅰ、Ⅴ、Ⅲ(astragalosideⅠ、Ⅴ、Ⅲ)。优选地，本发明所述碱提中，黄芪粉碎的目数为100～120目。

本发明所述碱提中，稀醇溶液为醇的水溶液，本发明不对稀醇溶液中醇做具体限定，可列举的有，甲醇、乙醇、异丙醇。在一种实施方式中，本发明所述滤渣A和黄芪的总重量，和稀醇溶液的重量比为1：(4～10)。本发明可通过添加碳酸钠、碳酸氢钠等调节溶液pH，为本领域熟知的方法，不做具体限定。

申请人发现，当制剂中黄芪甲苷大于0.06％时，和其他活性成分，如茯苓多糖等共同作用，对防治病毒性疾病，和提高受体免疫力具有好的作用。其中黄芪甲苷是黄芪中黄芪皂苷的乙酰基脱落得到的，在黄芪中含量很低，目前黄芪甲苷提取采用的煎煮水提、煎煮回流乙醇提等传统工艺，具有提取温度高、提取率低和提取耗时等缺点，而采用微波、超声等方法辅助提取，则会增加生产成本。且在对茯苓进行水酶提取时，为了避免茯苓中水不溶物过多，需要控制水酶提取的时间和次数，使得部分茯苓中多糖无法提取出来，而申请人意外发现，当将滤渣 A和黄芪共同使用碱提时，可通过使用简单的稀醇溶剂促进黄芪甲苷和茯苓中多糖的提取，不需要采取微波等辅助方法。

这可能是因为，黄芪中黄芪皂苷在碱性条件下碱解生成黄芪甲苷的同时，茯苓中多糖因为水酶解，带来更多的官能基团，从而得到碱性多糖，一方面和碱性醇溶液具有好的溶解性，促进茯苓中多糖的进一步提取，另一方面碱性多糖和黄芪甲苷好的相容性，也有利于促进黄芪甲苷在稀醇溶液中的溶解，从而促进黄芪甲苷的提取和含量的稳定性。

醇提

在一种实施方式中，本发明所述醇提中，将刺五加和辅料一粉碎后，加入 65～75wt％乙醇-水溶液，回流提取2～4h、过滤，得到滤液C和滤渣C。

刺五加(拉丁学名：Acanthopanax senticosus(Rupr.Maxim.)Harms)，别名：坎拐棒子、老虎潦、一百针。灌木，高1-6米；分枝多。叶有小叶5，稀3。根皮含挥发油、鞣质、棕桐酸、亚麻仁油酸、维生素A，B1等，还含有刺五加苷等苷类物质。在一种实施方式中，本发明所述刺五加和辅料一粉碎的目数为 100～120目。

优选地，本发明所述辅料一包括女贞子、金龟莲、栀子根中的两种及以上；进一步地，本发明所述辅料一包括金龟莲、栀子根；进一步地，本发明所述金龟莲、栀子根和刺五加的重量比为(4～8)：(8～10)：15。

金龟莲又称作“雪胆”，也有地区称作:金腰莲、金盆、赛金刚、蛇莲、苦金盆、罗锅底、曲莲等，雪胆为雪胆属多种植物的干燥块茎，主要有效成分为雪胆甲素、巧类、醇类、酪类、雪胆乙素、巧类、醇类、酪类和齐墩果酸等，能清热解毒，消炎杀菌，健胃止痛。用于胃痛，溃疡病，上呼吸道感染，支气管炎，肺炎，细菌性痢疾，肠炎，泌尿系感染，败血症及其他多种感染。

栀子根，中药名。为茜草科栀子属植物山栀Gardenia jasminoides Ellis的根。植物山栀，分布于我国中南、西南及江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾等省 。具有清热利湿，凉血止血之功效。主治黄疸型肝炎，痢疾，胆囊炎，感冒高热，吐血，衄血，尿路感染，肾炎水肿，乳腺炎，风火牙痛，疮痈肿毒，跌打损伤。栀子根中含有桦木酸、齐墩果酸、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷-6'-O-甲酯、常春藤皂苷元-3-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷-6'-O-甲酯、竹节参苷、豆甾醇、β- 谷甾醇、胡萝卜苷、香草酸、丁香酸等。

更优选地，本发明所述醇提中，乙醇-水溶液的重量，和刺五加、辅料一总重量的重量比为(10～20)：1。

刺五加苷作为刺五加的主要有效成分之一，对防治病毒性疾病具有好的效果，刺五加多糖及有苷类成分均能明显提高细胞产生诱生干扰素的能力，刺五加能增强网状内质系统的吞噬能力和腹腔巨噬细胞的吞噬能力，申请人发现，通过使用一定含量的乙醇-水溶液进行回流提取，因为刺五加苷对热的水和乙醇较好的溶解性，可促进刺五加苷的溶解，但同时申请人也发现高温提纯时，粗纤维、蛋白质等水不溶物杂质溶解的量也会增加，影响有效成分含量的稳定，故需要控制乙醇-水溶液回流提取的时间不能太长，但这也影响了刺五加苷最终的提取量。申请人意外发现，当使用辅料一和刺五加粉碎后，共同醇提，可在较短时间促进刺五加苷的提取，保持制剂中有效成分含量的稳定，这可能是因为醇提过程中，栀子根和金龟莲中渗出的齐墩果酸-吡喃葡萄、香草酸、丁香酸、雪胆甲素等有效成分可以和刺五加苷A、B、B1、C、D、E、F、G等相互作用，促进了在乙醇- 水溶液中的溶解，从而促进刺五加苷的含量。

且申请人发现，需要控制辅料一和刺五加的用量，以及乙醇-水溶液提取的用量和含量，当料液比过多，浓缩干燥损失的量增加，而乙醇-水中乙醇含量过多时，可能造成更多杂质的析出，此外，当辅料一中，如金龟莲、栀子根等的用量过高时，会对其他活性成分在制剂中的含量造成影响，而金龟莲、栀子根用量或比例不适当时，不利于刺五加等有效成分的快速溶解。

水提

在一种实施方式中，本发明所述水提中，将甘草、辅料二粉碎后，加入滤渣 C混合，得到混合物一，并加入水回流提取、过滤，得到滤液D和滤渣D后，将滤渣D继续水提提取、过滤，得到滤液E。

甘草，中药名。为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、胀果甘草Glycyrrhizainflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎。分布于东北、华北、陕西、甘肃、青海、新疆、山东等地。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效。常用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性，含有甘草酸、甘草苷等成分。在一种实施方式中，本发明所述甘草和辅料二粉碎的目数为 100～120目。

优选地，本发明所述辅料二包括白术、山药、当归、山楂中的两种及以上；进一步地，本发明所述辅料二包括白术、山药；进一步地，本发明所述甘草、白术、山药的重量比为10：(6～10)：(8～13)。

白术(学名：AtractylodesmacrocephalaKoidz.)：白术是一种常用重要的大宗中药材，具补脾健胃、燥湿利水、止汗安胎等功能。白术根茎含挥发油，油中主要成分为苍术酮、苍术醇、白术内酯等，对治疗肝硬化腹水、原发性肝癌、美尼尔氏综合症、慢性腰痛、急性肠炎及白细胞减少症等有一定疗效。其有效成分有挥发性成分、内酯类成分、苷类、多糖类成分以及氨基酸等，挥发油中白术内酯类成分是主要活性物质。

山药，中药材名。样品为薯蓣科植物薯蓣的块茎。山药块茎含薯蓣皂甙元(diosgenin)0。012％，多巴胺(dopamine)，盐酸山药碱(batatasinehydrochloride)，多酚氧化酶(polyphenoloxidase)，尿囊素(allantoin)止杈素(abscisin)Ⅱ。又含糖蛋白(glucoprotein)，水解得：赖氨酸(lysine)，组氨酸(histidine)，精氨酸(arginine)，天冬氨酸(asparticacid)，苏氨酸(threonine)，丝氨酸(serine)，谷氨酸(glutamicacid)，脯氨酸(proline)，甘氨酸(glycine)，丙氨酸(alanine)，缬氨酸(valine)，亮氨酸(leucine)，异亮氨酸(isoleucine)，酷氨酸(tyrosine)，苯丙氨酸(phenylalanine)和蛋氨酸(methionine)。还含包括上述氨基酸和胱氨酸(cystine)，γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid)在内的自由氨基酸，另含具降血糖作有用的多糖，并含由甘露糖(mannose)，葡萄糖(glucose)和半乳糖 (galactose)按摩尔比6.45：1：1.26构成的山药多糖，又含钡、铍、铈、钴、铬、铜、镓、镧、锂、锰、铌、镍、磷、锶、钍、钛、钒、钇、镱、锌、锆以及氧化钠、氧化钾、氧化铝、氧化铁、氧化钙、氧化镁等。根茎含多巴胺、儿茶酚胺(catecholamine)，以及胆甾醇(cholesterol)，麦角甾醇(ergosterol)，菜油甾醇(campesterol)，豆甾醇(stigmasterol)，β-谷甾醇(β-sitosterol)。粘液中含植酸(phyticacid)，甘露多糖(mannan)Ia,Ib和Ic；粘液含多糖40％，蛋白质2％，磷3％和灰分24％，多糖部分由80％的甘露糖和少量的半乳糖，木糖(xylose)，果糖(fructose)及葡萄糖所组成。珠芽(零余子)含5种分配性植物生长调节剂，命名为山药素(batatasin)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。还含止杈素，多巴胺和多种甾醇：胆甾烷醇(cholestanol)，(24R)-α-甲基胆甾烷醇(24R) -α-methylcholestanol，(24S)-β-甲基胆甾烷醇(24S)-β-methylcholestanol，(24R) -α-乙基胆甾烷醇(24R)-α-ethylcholestanol，胆甾醇，菜油甾醇，(24S)-β-甲基胆甾醇(24S)-β-methylcholestanol，24-亚甲基胆甾醇(24-methylenecholesterol)，β-谷甾醇，豆甾醇，异岩藻甾醇(isfucosterol)，X桐甾醇(clerosterol)，24- 亚甲基-25-甲基胆甾醇(24-emthylene-25-methylcholesterol)，7-胆甾烯醇 (lathosterol)，8(14)-胆甾烯醇cholest-8(14)-enol，(24R)-α-甲基-8(14) -胆甾烯醇(24R)-α-methylcholest-8(14)-enol，(24S)-β-甲基-8(14)-胆甾烯醇(24S)-β-methylcholest-8(14)-enol，(24R)-α-乙基-8(14)-胆甾烯醇 (24R)-α-ethylcholest-8(14)-enol。同属植物日本薯蓣块茎含三萜皂甙，尿囊素，胆碱(choline)，17种氨基酸及无机化合物。又含修养降血糖活性的日本薯蓣多糖(dioscoran)A、B、C、D、E、F。

更优选地，本发明所述水提中，将甘草、辅料二粉碎后，加入滤渣C混合，得到混合物一，并加入水回流提取2～4h，水和混合物一的重量比为1：(8～12)。

进一步优选地，本发明所述滤渣D继续水提提取中，在滤渣D中加入相对于滤渣D5～10倍重量的水，回流提取1～2h、过滤，得到滤液E。

申请人发现，当制剂中甘草酸含量大于0.8％时，和黄芪甲苷、刺五加苷等活性成分共同作用，对病毒防治和基体免疫力提高均有有益效果，且申请人经过试验发现，当添加辅料二，如白术、山药等，和甘草和滤渣一起提取时，可减少不溶物溶于高温水中，这可能是因为山药等含有的粘液蛋白等成分的浸出，使得水溶液中具有一定的粘度，且白术中白术内酯等小分子成分和甘草酸等的竞争吸附，也有利于促进甘草酸溶出的同时，减少水不溶物也随着滤液提取出来，对制剂整体活性成分含量产生影响。

且申请人为了进一步提高活性成分在制剂中的含量，将过滤得到的滤渣进行第二次加水回流提取，且申请人发现，当控制水和滤渣的重量比时，可减少高温提取时无效杂质的增多，避免无效成分的增加对活性成分含量的影响，提高活性成分含量的稳定性。

干燥

本发明不对滤液浓缩、干燥的方法做具体限定，可为本领域熟知的方法，可列举的有，蒸发浓缩、反渗透浓缩、膜蒸馏浓缩、减压干燥、喷雾干燥、沸腾干燥、冷冻干燥、红外干燥、微波干燥。

在一种实施方式中，黄芪、甘草、刺五加和茯苓的重量比为(10～15)：(10～ 15)：(15～20)：(15～20)。

在养殖业，病毒性疾病，如蓝耳病、伪狂犬疫苗等会严重影响牲畜的产量和存活率，而本申请通过选择合适的主料和辅料，且使用酶解、水提、醇提等比较简单的方法制备得到，避免了多次水提、醇提等操作对生产设备等的影响，降低了生产成本，得到黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸等有效成分在一定含量以上的制剂，对病毒性疾病具有好的防治效果，达到提量增产的效果。且为了简便生产工艺，申请人仅仅使用了过滤进行处理，这主要是因为制剂中的水不溶物等成分不会对牲畜产生影响，故不需要进一步提纯。但也需要注意的是，当提取过程水不溶物溶于滤液中过多时，会影响有效成分在制剂中的含量，从而对防治病毒性疾病的效果产生影响。此外，为了保持药效的稳定，维持制剂中有效成分也是重要的，而本发明制备制剂的过程中可保证有效成分稳定的溶解，减少有效成分的降解等，提高制剂的稳定性。

本发明第二个方面提供一种如上所述的复方植物提取物制剂的应用，用于防制猪病毒性疾病。

实施例

下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

本发明提供了一种复方植物制剂，所述制剂的制备方法包括：

水酶提取：将茯苓粉碎成80目后，加入80wt％乙醇溶液5℃浸提6h后，过滤，得到滤液F和滤渣F，将滤渣F加入水和β-葡聚糖酶，在60℃，酶浓度为0.8U/mL浸提6h、过滤，得到滤液A和滤渣A；所述茯苓和80wt％乙醇溶液的重量比为1：5；所述滤渣E和水的重量比为1：3；

碱提：将滤渣A加入5wt％乙醇溶液，并加入粉碎为110目黄芪，混合，在 pH为11.5下加热到80℃提取2h、过滤，得到滤液B1和滤渣B1，将滤渣B1重复碱提，得到滤液B2和滤渣B2，合并滤液B1和滤液B2，得到滤液B；所述滤渣A和黄芪的总重量，和5wt％乙醇溶液的重量比为1：5；

醇提：将刺五加、金龟莲、栀子根分别粉碎成110目后，混合，加入70wt％乙醇-水溶液，回流提取3h、过滤，得到滤液C和滤渣C；70wt％乙醇-水溶液的重量，和刺五加、辅料一总重量的重量比为15：1；

水提：将甘草、白术、山药分别粉碎成110目后，加入滤渣C混合，得到混合物一，并加入水回流提取3h，水和混合物一的重量比为1：10，过滤，得到滤液D和滤渣D后，在滤渣D中加入相对于滤渣D8倍重量的水，回流提取1.5h、过滤，得到滤液E；

干燥：合并滤液A、滤液B、滤液C、滤液D和滤液E，负压浓缩、喷雾干燥，得到所述制剂；

黄芪、甘草、刺五加和茯苓的重量比为10：10：15：16；金龟莲、栀子根和刺五加的重量比为6：9：15；甘草、白术、山药的重量比为10：8：10。

实施例2

本发明提供了一种复方植物制剂，所述制剂的制备方法包括：

水酶提取：将茯苓粉碎成70目后，加入90wt％乙醇溶液5℃浸提7h后，过滤，得到滤液F和滤渣F，将滤渣F加入水和β-葡聚糖酶，在65℃，酶浓度为 1U/mL浸提7h、过滤，得到滤液A和滤渣A；所述茯苓和90wt％乙醇溶液的重量比为1：8；所述滤渣E和水的重量比为1：4；

碱提：将滤渣A加入3wt％乙醇溶液，并加入粉碎为100目黄芪，混合，在 pH为11下加热到90℃提取1.5h、过滤，得到滤液B1和滤渣B1，将滤渣B1重复碱提，得到滤液B2和滤渣B2，合并滤液B1和滤液B2，得到滤液B；所述滤渣A和黄芪的总重量，和5wt％乙醇溶液的重量比为1：10；

醇提：将刺五加、金龟莲、栀子根分别粉碎成100目后，混合，加入75wt％乙醇-水溶液，回流提取4h、过滤，得到滤液C和滤渣C；75wt％乙醇-水溶液的重量，和刺五加、辅料一总重量的重量比为20：1；

水提：将甘草、白术、山药分别粉碎成100目后，加入滤渣C混合，得到混合物一，并加入水回流提取4h，水和混合物一的重量比为1：12，过滤，得到滤液D和滤渣D后，在滤渣D中加入相对于滤渣D10倍重量的水，回流提取2h、过滤，得到滤液E；

干燥：合并滤液A、滤液B、滤液C、滤液D和滤液E，负压浓缩、喷雾干燥，得到所述制剂；

黄芪、甘草、刺五加和茯苓的重量比为10：10：15：16；金龟莲、栀子根和刺五加的重量比为5：10：15；甘草、白术、山药的重量比为10：6：12。

实施例3

本发明提供了一种复方植物制剂，所述制剂的制备方法包括：

水酶提取：将茯苓粉碎成90目后，加入75wt％乙醇溶液5℃浸提5h后，过滤，得到滤液F和滤渣F，将滤渣F加入水和β-葡聚糖酶，在50℃，酶浓度为 0.7U/mL浸提6h、过滤，得到滤液A和滤渣A；所述茯苓和75wt％乙醇溶液的重量比为1：4；所述滤渣E和水的重量比为1：2；

碱提：将滤渣A加入3wt％乙醇溶液，并加入粉碎为120目黄芪，混合，在 pH为12下加热到70℃提取1h、过滤，得到滤液B1和滤渣B1，将滤渣B1重复碱提，得到滤液B2和滤渣B2，合并滤液B1和滤液B2，得到滤液B；所述滤渣A和黄芪的总重量，和3wt％乙醇溶液的重量比为1：4；

醇提：将刺五加、金龟莲、栀子根分别粉碎成120目后，混合，加入65wt％乙醇-水溶液，回流提取2h、过滤，得到滤液C和滤渣C；65wt％乙醇-水溶液的重量，和刺五加、辅料一总重量的重量比为12：1；

水提：将甘草、白术、山药分别粉碎成120目后，加入滤渣C混合，得到混合物一，并加入水回流提取2h，水和混合物一的重量比为1：9，过滤，得到滤液D和滤渣D后，在滤渣D中加入相对于滤渣D5倍重量的水，回流提取1h、过滤，得到滤液E；

干燥：合并滤液A、滤液B、滤液C、滤液D和滤液E，负压浓缩、喷雾干燥，得到所述制剂；

黄芪、甘草、刺五加和茯苓的重量比为10：10：15：16；金龟莲、栀子根和刺五加的重量比为7：8：15；甘草、白术、山药的重量比为10：10：8。

实施例4

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述水酶提取中，将茯苓粉碎成80目后，加入水和β-葡聚糖酶，在60℃，酶浓度为0.8U/mL浸提6h、过滤，得到滤液A和滤渣A；所述茯苓和80wt％乙醇溶液的重量比为1：5；所述滤渣E和水的重量比为1：3。

实施例5

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述水酶提取中，将茯苓粉碎成80目后，加入80wt％乙醇溶液，在60℃浸提3h 后，过滤，得到滤液F和滤渣F，将滤渣F加入水和β-葡聚糖酶，在60℃，酶浓度为0.8U/mL浸提6h、过滤，得到滤液A和滤渣A；所述茯苓和80wt％乙醇溶液的重量比为1：5；所述滤渣E和水的重量比为1：3。

实施例6

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述碱提中，将滤渣A加入20wt％乙醇溶液，并加入粉碎为110目黄芪，混合，在pH为11.5下加热到80℃提取2h、过滤，得到滤液B1和滤渣B1，将滤渣B1 重复碱提，得到滤液B2和滤渣B2，合并滤液B1和滤液B2，得到滤液B；所述滤渣A和黄芪的总重量，和20wt％乙醇溶液的重量比为1：5。

实施例7

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述碱提中，将滤渣A加入相对于滤渣A重量5倍的5wt％乙醇溶液，在pH为 11.5下加热到80℃提取2h、过滤，得到滤液B11和滤渣B11，将滤渣B11重复碱提，得到滤液B21和滤渣B21；将粉碎为110目黄芪加入相对于黄芪重量5 倍的5wt％乙醇溶液，在pH为11.5下加热到80℃提取2h、过滤，得到滤液B12 和滤渣B12，将滤渣B12重复碱提，得到滤液B22和滤渣B22，合并滤液B11、滤液B12、和滤液B21、滤液B22，得到滤液B；

实施例8

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述醇提中，将刺五加、金龟莲、栀子根分别粉碎成110目后，分别加入70wt％乙醇-水溶液，回流提取3h、过滤，并收集得到的滤液和滤渣，得到滤液C和滤渣C；其中在刺五加、金龟莲、栀子根分别回流提取中，添加的70wt％乙醇-水溶液的重量分别为刺五加、金龟莲、栀子根的15倍。

实施例9

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将栀子根替换成女贞子。

实施例10

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，金龟莲、栀子根和刺五加的重量比为1：14：15。

实施例11

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述水提中，将甘草加入滤渣C混合，得到混合物二，并加入水回流提取3h，水和混合物二的重量比为1：10，过滤，得到滤液D1和滤渣D1；将白术、山药分别粉碎成110目后，得到混合物三，并加入水回流提取3h，水和混合物三的重量比为1：10，过滤，得到滤液D2和滤渣D2后，收集滤液D1和滤液D2，得到滤液D，收集滤渣D1、滤渣D2，得到滤渣D，在滤渣D中加入相对于滤渣D的8倍重量的水，回流提取1.5h、过滤，得到滤液E。

实施例12

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述山药替换成山楂。

实施例13

本例提供一种复方植物制剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，甘草、白术、山药的重量比为10：16：2。

对照组1

本例提供一种复方植物制剂，所述制剂的制备方法包括：

醇提：将刺五加、金龟莲、栀子根分别粉碎成110目后，混合，加入70wt％乙醇-水溶液，回流提取3h、过滤，得到滤液C和滤渣C；70wt％乙醇-水溶液的重量，和刺五加、辅料一总重量的重量比为15：1；

水提：将甘草、白术、山药分别粉碎成110目后，加入滤渣C混合，得到混合物一，并加入水回流提取3h，水和混合物一的重量比为1：10，过滤，得到滤液D和滤渣D后，在滤渣D中加入相对于滤渣D8倍重量的水，回流提取1.5h、过滤，得到滤液E；

干燥：合并滤液A、滤液B、滤液C、滤液D和滤液E，负压浓缩、喷雾干燥，得到所述制剂；

甘草、刺五加的重量比为10：1；金龟莲、栀子根和刺五加的重量比为6：9： 15；甘草、白术、山药的重量比为10：8：10。

性能评价

将实施例提供的作为实验组进行下述实验。

1、小鼠伪狂犬疫苗攻毒试验：选取18～20g小鼠16只，随机分四组，选取实施例1提供的复方植物提取物制剂作为低剂量组和高剂量组试验，并使用对照组1作为竞品高剂量组，分别按表1中的剂量在饲料中添加一周后，用梅里亚 Barthan K61株按0.5头份攻毒，观察2周，观察2周后的存活率，制剂添加剂量和试验结果见表1。

表1性能表征测试

	空白	低剂量组	高剂量组	竞品高剂量组
					数量	4	4	4	4
实施例1		0.1％	0.2％
					竞品				0.2％
攻毒	0.5头份	0.5头份	0.5头份	0.5头份
					2周后存活	0	2	4	1

2、蓝耳病临床防治试验：将实施例1提供的复方植物提取物制剂加入饲料中，进行下述临床应用：

(1)复方植物制剂对母猪蓝耳病隔离期利用情况试验

2015年8月至11月，公司引进后备母猪5批次832头(其中88头为12-15KG 的后备母猪，97头为60-80KG的后备母猪，其余均为100KG左右的后备母猪)。每个批次的后备母猪引进后，开展后备母猪蓝耳病驯化工作。驯化的措施主要有：后备母猪引进后，隔离舍专人饲养45-60天；隔离期普免2次勃林格公司蓝耳病弱毒苗；定期加替米考星类抗生素保健；隔离期结束前，随机按比例采血样和唾液样进行血清学检测。隔离驯化结束后，转入生产线后备舍内查情配种。

8至9月份引种的后备母猪，分别于9月24日于10月9日份转入生产线后备舍。在10月19日，9月份引进的205头后备母猪，该批次爆发蓝耳病，发生后采用替米考星类药品拌料和肌住盐酸头孢噻呋钠，并在饮水中添加了多维。虽然得到控制，仍造成较大的死淘。详见表2。

11月份，引进的后备猪隔离驯化期全群添加实施例1提供的制剂30天，其余驯化措施不变。10月份引进的100头后备母猪和11月份引进的后备母猪均在隔离驯化期，饲料中按0.5％添加实施例1提供的制剂连续使用30天。驯化期间，泪斑现象减少，猪群健康较为稳定。详见表2。

表2 2015年8-11月份引进后备母猪隔离期利用情况

(2)复方植物提取物制剂对引进后备母猪配种试验

2016年1月份，后备母猪已经配种2个批次(为8月份引进的247头后备母猪批次和9月份引进的205头后备母猪批次)，配种后，大部分母猪出现泪斑，健康水平较差，并且在配种后第一个情期和第二个情期出现返情。故在配种后使用实施例1提供制剂(按0.5％)和解毒包(按0.2％)拌料，连用30天。该2 个批次配种受孕情况，详见表3。

表3 2015年8-11月份引进后备母猪配种情况

(3)复方植物制剂对后备母猪产仔试验

2016年4月上旬，后备母猪已经配种2个批次(为8月份引进的247头后备母猪批次和9月份引进的205头后备母猪批次)转入到怀孕后期舍，又有部分母猪出现泪斑，并伴发传染性胸膜肺炎，发生后，采取立即用替米考星(按0.2％) 拌料连用15天，并肌住盐酸头孢噻呋钠。虽有得到控制，仍造成怀孕后期母猪死亡9头，流产2头，并有4头母猪在分娩全部产死胎，严重影响了该两批次后备母猪的配种分娩率，详见表4。

自发生传染性胸膜肺炎后，在整个基础母猪群日粮中添加实施例1提供制剂 (按0.5％)1个月，2015年10月份引进的该批次后备母猪在5月份产仔情况，详见表4。

表4 2015年8-11月份引进后备母猪产仔情况

从表2～表4可知，通过使用添加本发明提供的制剂的饲料，在后备母猪隔离驯化期间，可有效稳定蓝耳病，改善后备母猪群的健康水平，其泪斑比例最高下降29％，剔除一个爆发蓝耳病的后备母猪批次，后备母猪从引进至配种死淘下降7.5％；此外，在后备母猪配种后使用该制剂，后备母猪配种利用率最高达 89.58％，受孕率最高达88.37％；且该制剂还可用在母猪怀孕后期90天至分娩期间，与之前没用对比，健仔窝平最高提高0.5头。说明本发明提供的制剂对防治蓝耳病、提高母猪免疫力和增产等具有好的效果。

3、非洲猪瘟防治实验：将实施例1提供的复方植物制剂作为试验组，对猪场非瘟疫苗毒感染后带生产的保护效果的实验：

(1)实验方案

(1.1)试验动物：公猪与母公猪与母群。

(1.2)试验时间：50天，2020年7月28日～2020年9月15日。

(1.3)方案：具体方案：试验前30天，饲料中添加试验组，每吨添加4kg；试验第31天～50天，每吨添加3kg，评估试验组对猪场非瘟疫苗毒感染后带毒生产的保护效果。

(1.4)数据采集：分别进行抗原抗体检测试验，每日母猪死亡统计、临床症状、生产情况的观察统计。

(2)评估指标

(2.1)抗原阳性增长情况与抗体阳性率的变化。

(2.2)临床症状：统计试验前期与中后期的临床上表现发烧、精神沉郁、不吃料的母猪数量。

(2.3)生产情况：收集试验前后猪群的生产情况对比。

(2.4)死淘率与阳性率：统计试验前后母猪的死淘数量与阳性数量。

(3)实验结果

(3.1)抗原抗体检测

以11栋的后备母猪和怀孕前中期母猪作为参考对象，分别于8月11日与8 月21日进行了两次采血检测，结果如下表6：

表6抗原抗体检测结果

从上述检测结果表明：抗原阳性数量维持稳定，表明群体的阳性数量并未增加，不再继续向外散毒，猪群维持住了稳定。抗体阳性率呈上升趋势，首先表明猪群抗体的产生有一定的滞后性；同时产生抗体意味着被感染，抗体阳性增加而抗原阳性不变(甚至消失)表明有大量的阳性猪检测不到抗原，说明使用试验组对抑制感染猪只向外排毒有一定效果。

(3.2)临床症状与生产情况

临床症状对比：非瘟发病初期，母猪场每日有疑似症状猪只400余头。添加试验组稳定后，母猪场每日有疑似症状猪只30余头。生产情况对比具体情况见表7：

表7生产情况记录表

从添加试验组之后，8月份到9月份母猪的空怀、流产数量减少。

(3.3)母猪场死淘数量

图1为某大型猪场商品母猪场7.15-9.15日每日母猪死亡数量统计，从表中可以发现添加试验组之后，经过一段时间的干预期，之后死亡数量开始下降。

图2为某大型母猪场7.15-9.15日每日母猪检测抗原阳性数量统计，从表中可以发现添加试验组之后，检测母猪抗原阳性的数量开始下降，说明试验组对于提升猪群免疫力，抑制病毒的复制与猪只体外散毒有一定的效果，这也与商品场母猪死亡统计表中的趋势相吻合。

从上述实验可知，本发明提供的复方植物提取物制剂能够通过诱导机体产生干扰素与免疫调节功能激活免疫系统，解除免疫抑制。使用“佳多康”提升猪群的免疫力，提高病毒的感染阈值，特别是针对本场猪群非瘟疫苗毒阳性、蓝耳不稳定的情况，使用该药能短时间内稳定猪群，确保猪群不向体外散毒，减少感染风险。

4、黄芪甲苷含量测试：将实施例提供的制剂作为样品，根据高效液相色谱进行黄芪甲苷含量测试：

(A.1)色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32:68)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

(A.2)对照品溶液的制备

取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

(A.3)供试品溶液的制备

取样品中粉约4g.精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml.冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml.微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次约40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷。通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm.柱高为12cm)，以水50ml 洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲都至刻度，摇匀，即得。

(A.4)测定法

分别精密吸取对照品溶液10μl.20μl，供试品落20μl.注人液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得黄芪甲苷的含量，若黄芪甲苷含量大于等于 0.06％，记为O，否则即为X，并进行评级，其中1级为黄芪甲苷含量小于0.06％，大于等于0.05％，2级为黄芪甲苷含量小于0.05％，大于等于0.04％，3级为黄芪甲苷含量小于0.04％，结果见表8。

5、刺五加苷含量测试：将实施例提供的制剂作为样品进行以下实验：

(A.1)仪器和设备：

A.1.1：分析天平(精确至0.0001g)。A.1.2：超声波清洗器，功率250W，频率33kHz。A.1.3：高效液相色谱仪(带紫外检测器)。

(A.2)试剂、溶液和对照品

A.2.1：甲醇(色谱纯)；A.2.2：刺五加苷对照品：

(A.3)操作步骤

A.3.1：刺五加苷对照品溶液的制备

取刺五加苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成第1ml含80μg的溶液，即得。

A.3.2：供试品溶液的制备

精密称取样品约1g,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30min，放冷，再称定重量，并用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

A.3.3：液相色谱条件和系统适用要求

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水(25：75)为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为265nm。理论板数按刺五加苷计算应不低于2000。

A.3.4：测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

A.3.5：计算与结果的表示

供试品中刺五加苷的含量(P)以质量分数(％)计，按下式计算

并判断刺五加苷在制剂中的含量是否大于等于0.2wt％，若是，记为O，否则，记为X，并进行评级，1级为刺五加苷含量小于0.2％，大于等于0.18％，2级为刺五加苷含量小于0.18％，大于等于0.15％， 3级为刺五加苷含量小于0.15％，结果见表8。

6、甘草酸和甘草苷含量测试：

(A.1)对照品溶液的制备

取甘草苷对照品适量，精密称定，用70％乙醇制成每1ml含甘草苷20μg的对照品溶液；取甘草酸铵对照品适量，精密称定，用70％乙醇制成每Iml含甘草酸铵0.2mg(折合甘草酸为0.1959mg)的对照品溶液。

(A.2)供试品溶液的制备

取样品，研细，取约0.2g.精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70％乙酶 100ml,密塞，称定重量，超声处理(功率250W.频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(A.3)测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10微升注人液相色谱仪，测定，即得。发现实施例1～3提供的甘草苷含量均大于等于0.05％，而甘草酸的含量若大于等于0.8％，记为O，否则记为X，并进行评级，其中1级为甘草酸含量小于0.8％，大于等于0.7％，2级为甘草酸含量小于0.7％，结果见表8。

7、水不溶物含量测试：精密称取实施例提供的制剂1g，加水25ml搅样溶解后，离心1小时(转速为每分1000转。或每分2000转，离心30分钟)，弃去上清液，沉淀加水25ml搅匀，再照上法离心洗涤，直至度、洗液无色澄明为止，沉淀用少量水洗入已干燥至恒重的蒸发皿中，置水浴上蒸干，在105℃干燥至恒重，称取遗留残渣的重量，作为水不溶物质量，并计算水不溶物占制剂的重量百分数作为水不溶物含量，其中水不溶物含量小于等于35％记为O，否则即为X，并进行评级，其中1级为水不溶物含量大于35％，小于等于40％，2级为水不溶物含量大于40％，小于等于45％，3级为水不溶物含量大于45％，小于等于50％， 4级为水不溶物含量大于50％，结果见表8。

8、制剂稳定性测试：随机选取十五批次实施例提供的制剂，观察黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸、甘草苷和水不溶物含量的标准差是否分别小于等于0.005％、0.02％、0.05％、0.5％，若是，则记为O，否则记为X，结果见表8。

表8性能表征测试

由上表测试结果可知，本发明提供的制剂中多糖和苷类等活性成分含量稳定，可有效防治病毒性疾病，如蓝耳病、伪狂犬病的同时，可促进猪等动物的免疫力和食欲等提高，实现增重增产，且本发明提供的制剂不含有有害成分，有利于持续饲喂使用。

前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。

Claims (2)

1.一种复方植物提取物制剂，其特征在于，所述制剂的成分包括黄芪甲苷、刺五加苷、甘草酸；

所述黄芪甲苷占制剂的重量百分数大于等于0.06wt%；

所述刺五加苷占制剂的重量百分数大于等于0.2 wt %；

所述甘草酸占制剂的重量百分数大于等于0.8 wt %；

所述制剂的制备方法包括：

水酶提取：将茯苓粉碎后，加入75～90wt%醇溶液低温浸提5～7h后，过滤，得到滤液F和滤渣F，将滤渣F加入水和β-葡聚糖酶，在50～65℃浸提5～7h、过滤，得到滤液A和滤渣A；

碱提：将滤渣A加入3～5wt%稀醇溶液，并加入粉碎后的黄芪，混合，在pH为11～12下加热到70～90℃提取1～3h、过滤，得到滤液B1和滤渣B1，将滤渣B1重复碱提，得到滤液B2和滤渣B2，合并滤液B1和滤液B2，得到滤液B；

醇提：将刺五加和辅料一粉碎后，加入65～75wt%乙醇-水溶液，回流提取2～4h、过滤，得到滤液C和滤渣C；所述辅料一为金龟莲、栀子根；

水提：将甘草、辅料二粉碎后，加入滤渣C混合，得到混合物一，并加入水回流提取、过滤，得到滤液D和滤渣D后，将滤渣D继续水提提取、过滤，得到滤液E；所述辅料二为白术、山药；

干燥：合并滤液A、滤液B、滤液C、滤液D和滤液E，浓缩、干燥，得到所述制剂。

2.根据权利要求1所述的复方植物提取物制剂，其特征在于，黄芪、甘草、刺五加和茯苓的重量比为10～15：10～15：15～20：15～20。

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