CN105012865B - 具有活血抗癌功效的中药组合物及其多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有活血抗癌功效的中药组合物及其多糖，以及其多糖的制备方法。本发明所述的中药组合物由以下重量份的中药组成：川芎：1‑2重量份；鸡血藤：2‑3重量份；莪术：1‑1.5重量份。本发明深入研究了所述中药组合物及其多糖对乳癌细胞的作用，所述中药组合物及其多糖具有活血抗癌功效，特别是其多糖具有抗小鼠乳腺癌细胞4T1增殖和迁移的作用。本发明所述的中药组合物及其多糖可以应用于抗肿瘤药物的研发，其多糖的制备方法是经过大量的筛选实验得到的，能最大限度的保存各药物组分的有效成分，制备的制剂效果显著、施用方便；而且该制备方法还可以应用于其他复方中药制备。

Description

具有活血抗癌功效的中药组合物及其多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，具体的说，涉及一种具有活血抗癌功效的中药组合物及其多糖的制备方法。

背景技术

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，原位乳腺癌并不致命，但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落，一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。

随着现代医学的发展，西医治疗乳腺癌的主要方法包括手术治疗，辅助治疗，放射治疗，内分泌治疗和生物治疗等，但是对于治疗后复发或失败的患者，进一步提高放、化疗效果，或带瘤生存，是目前肿瘤研究的难点和热点之一。

中医药治疗乳腺癌具有悠久的历史，积累了丰富的经验，疗效显著，没有明显的毒副作用，中医药治疗乳腺癌不是通过靶点作用进行的，对乳腺癌的直接抑制作用不如手术，放化疗明显，但在改善症状，提高肿瘤的稳定率，改善患者生存质量和生存率等方面具有较强的优势，对手术，放化疗具有协同和减毒作用。

以往研究表明，中晚期患者普遍存在气虚血瘀症状，淤血内存是肿瘤的重要病因之一，肿瘤的起病过程漫长，一般都存在血流不畅，血瘀的状况，手术创伤也会造成血液的高凝状态，血瘀的存在使循环中的癌细胞被微血栓包围，使化疗药物对癌细胞的杀伤作用大大降低，活血化瘀的中药可通过改善肿瘤部位的微循环，改善细胞的缺氧状态而起到对化疗的增效作用。

中医药能够通过活血降瘀，改善气虚血瘀症状，提高放化疗敏感性，降低复发和转移率，但中医是辩证施治，不同的患者可能需要不同治疗，如益气养血，养阴生津，温阳益肾，健脾养胃等，中医药临床研究尚处于探索阶段，没有统一的辨证和疗效标准，实验研究少，也没有疗效显著、服用方便的制剂。

基于上述缺陷，本发明提供一种具有活血抗癌功效的中药组合物及其多糖的制备方法，该中药组合物的多糖能够诱导肿瘤细胞死亡，抑制肿瘤增殖、迁移，因此可进一步用于制备抗肿瘤的药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有活血抗癌功效的中药组合物。

本发明的另一目的是提供一种具有活血抗癌功效的中药组合物的多糖。

本发明的又一目的是提供一种中药组合物的多糖的制备方法。

实验研究发现，本发明所述的中药组合物及其多糖能够诱导肿瘤细胞死亡，抑制肿瘤增殖、迁移，因此可进一步用于制备抗肿瘤的药物。

本发明所述的中药组合物由以下重量份的中药组成：川芎：1-2重量份；鸡血藤：2-3重量份；莪术：1-1.5重量份。

本发明所述的中药组合物由以下重量份的中药组成：川芎：1重量份；鸡血藤：3重量份；莪术：1重量份。

川芎、鸡血藤和莪术都属于中医药中“活血”的药物，中医所说的“活血”是指借用药物或特定的运动，促使气血恢复旺盛状态的一种综合方法，但它们在活血的范畴中都有不同的功效。

川芎常用于活血行气，祛风止痛，行气开郁，还具有抗菌作用和抗放射作用。川芎辛温香燥，走而不守，既能行散，上行可达巅顶；又入血分，下行可达血海。活血祛瘀作用广泛，适宜瘀血阻滞各种病症；祛风止痛，效用甚佳，可治头风头痛、风湿痹痛等症。昔人谓川芎为血中之气药，殆言其寓辛散、解郁、通达、止痛等功能。

鸡血藤性味归经:苦、甘，温。归肝、肾经。功能主治:补血，活血，通络。用于月经不调，血虚萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛，并对凝血有纤溶的作用，还能够抗噬菌体。

莪术破血行气，消积止痛。用于血瘀腹痛、肝脾肿大、心腹胀痛，积聚，妇女血瘀经闭，跌打损伤作痛以及饮食积滞。

上述三种中药合理配方，各种药物组份既有其自身的作用，又相互影响和协同作用，共同达到活血抗癌的目的。本发明所述的药物组合物可采用本领域常用的各种方法制备，可加入本领域常用辅料制成片剂、胶囊、口服液、颗粒剂等剂型。所述辅料可以包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。所采用的方法有液相提取法(常用的水提法和醇提法)，固态混合法或上述两种方法的组合。

特别的，经过实验研究，本发明还提供上述具有活血抗癌功效的中药组合物的多糖，该多糖由下述方法制备：

1)去脂：取中药材，加入3-6倍量的石油醚，回流提取1-3h，滤去药渣；再加入3-6倍量的石油醚，再回流提取1-3h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：向药渣中加入10-12倍量的水，浸泡，煎煮1-3次，过滤；滤液浓缩至0.9-1.25g/ml，得浓缩液；

3)醇析：浓缩液中加入无水乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为70-85％，静置，过滤得沉淀，将沉淀干燥，得粗多糖；

4)脱蛋白：将粗多糖脱除蛋白；

5)干燥。

优选的，步骤1)中，所述去脂如下进行：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤去药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚；

步骤2)中，所述浸泡时间为30-60分钟，优选30分钟；

所述煎煮为2次，煎煮时间分别为2h和1.5h；

优选的，所述浸提如下进行：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮 2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml，得浓缩液；

步骤3)中，所述含醇量为80％；静置时间为24小时；

所述过滤为减压抽滤；所述干燥为减压干燥(压力小于2.67kPa (20mmHg))，干燥时温度为60℃，时间为6h；

无水乙醇是常用的试剂，一般含醇量为95％；

步骤4)中，所述脱蛋白可采用本领域常用的方法，如NaOH法，TCA 法，sevage法等，考虑到脱蛋白率和总糖损失率，优选sevage法；

所述sevage法脱蛋白如下进行：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入体积为粗多糖体积1/5的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次；

步骤5)中，所述干燥用旋转蒸发仪进行，回收溶剂的同时减压干燥，得本发明所述中药组合物多糖。

具体的说，本发明所述的中药组合物多糖由下述方法制备：

1)去脂：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤去药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml；

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为80％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖；

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入体积为粗多糖体积1/5的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次；

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

经体外实验的研究结果表明，本中药复方多糖具有抑制乳腺癌细胞增殖、迁移的作用；MTT和细胞实时检测方法显示，其对小鼠乳腺癌细胞4T1细胞增殖有抑制作用，还可以抑制4T1细胞的迁移能力。

本发明还提供上述中药组合物的多糖的制备方法。

本发明所述的方法包括以下步骤：

1)去脂：取中药材，加入3-6倍量的石油醚，回流提取1-3h，滤去药渣；再加入3-6倍量的石油醚，再回流提取1-3h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：向药渣中加入10-12倍量的水，浸泡，煎煮1-3次，过滤；滤液浓缩至0.9-1.25g/ml，得浓缩液；

3)醇析：浓缩液中加入无水乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为70-85％，静置，过滤得沉淀，将沉淀干燥，得粗多糖；

4)脱蛋白：将粗多糖脱除蛋白；

5)干燥。

优选的，本发明所述的方法包括以下步骤：

1)去脂：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤去药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml；

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为80％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖；

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入体积为粗多糖体积1/5的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次；

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

本发明所述的中药多糖制备工艺是经过大量的筛选实验得到的，能最大限度的保存各药物组分的有效成分，从而提高药效。

本发明深入研究了所述中药组合物及其多糖对乳癌细胞的作用，所述中药组合物及其多糖具有活血抗癌功效，所述的多糖具有抗小鼠乳腺癌细胞 4T1增殖和迁移的作用。本发明所述的中药组合物，其多糖可以应用于抗肿瘤药物的研发，其多糖的制备方法还可以应用于其他复方中药制备，制备的制剂效果显著、施用方便。

附图说明

图1.HX组抑制小鼠4T1乳腺癌细胞增殖结果：其中(a)为RTCA连续观察HX组作用4T1细胞48h的增殖情况；(b)为与Control组比较，第36h HX组不同浓度的Cell index。

图2.HX组抑制小鼠4T1乳腺癌细胞迁移结果，其中(a)为RTCA连续观察HX组作用4T1细胞后的迁移情况；(b)与Control组比较，HX组不同时间的Cell index。

图3为HX组诱导小鼠4T1乳腺癌细胞凋亡的结果。

具体实施方式

以下实施例用于说明但不限定本发明的技术方案，如无特别说明，所采用的方法是本领域常用的方法，所采用的设备为本领域常用的设备。

实施例1 本发明所述的中药组合物多糖制备

按照表1所述的分量称取中药材：

表1 中药材用量表

按下述步骤提取多糖：

1)去脂：药材加入6倍量的石油醚回流提取2h，滤去药渣，再加入6 倍量的石油醚再提取2h，滤取药渣挥干石油醚。

2)浸提：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤。药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤。合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml。

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为80％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖。

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入1/5氯仿体积的正丁醇，振摇，放出氯仿层。重复8次。

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

结果见表2

表2 中药材多糖提取结果

表2的结果表明：

1g除蛋白后的粗多糖相当于生药23.25g。

实施例2

按照表3所述的分量称取中药材：

表3 中药材用量表

按下述步骤提取多糖：

1)去脂：药材加入5倍量的石油醚回流提取2h，滤去药渣，再加入5 倍量的石油醚再提取3h，滤取药渣挥干石油醚。

2)浸提：药渣加入10倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤。药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤。合并滤液，过滤，滤液浓缩至1.1g/ml。

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为70％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖。

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入1/5氯仿体积的正丁醇，振摇，放出氯仿层。重复7次。

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

得到除蛋白后的粗多糖，计算可知1g多糖相当于生药23.5g。

实施例3

按照表4所述的分量称取中药材：

表4 中药材用量表

按下述步骤提取多糖：

1)去脂：药材加入3倍量的石油醚回流提取3h，滤去药渣，再加入3 倍量的石油醚再提取3h，滤取药渣挥干石油醚。

2)浸提：药渣加入10倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤。药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤。药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤。合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml。

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为85％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖。

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入1/5氯仿体积的正丁醇，振摇，放出氯仿层。重复8次。

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

得到除蛋白后的粗多糖，计算可知1g多糖相当于生药23.35g。

实验例1

1、实验细胞：4T1小鼠乳腺癌细胞购自中国医学科学院基础医学研究所协和细胞库。

2、药物：川芎、鸡血藤、莪术，均购于北京中医医院中药房。

3、分组：

空白对照组(Control)

中药组(HX)

4.实验方法：MTT法和实时细胞检测法

4.1 MTT:常规培养细胞，消化离心，调整细胞浓度接种于96孔板中，待次日细胞贴壁后，加药物干预，分别于加药后24h，48h向每孔中加入15ulMTT，培养箱孵育4h，吸弃培养基，加DMSO溶解蓝紫色结晶，震荡混匀，酶标仪上570nm处检测OD值。

4.2实时细胞检测法：增殖

细胞悬液准备：

(1)常规消化，重悬后计数

(2)配制成浓度为3x10⁴cells/ml的细胞悬液5ml(共需细胞1.5x10⁵个)

P＝70/4*10⁵＝1.75*10⁶cell/ml

取细胞悬液86ul，加至5ml。

E-plate16准备:Real-time cell analysis(RTCA)xCELLigence DP：德国 RocheApplied Science公司；

(1)在E-Plate 16的孔中加入100μl 1640培养基；

(2)将E-Plate 16放到xCelligence系统上，系统会自动进行扫描，检查是否接触良好，若接触良好则可进行下一步；

(3)点击“Layout”页面，设置实验孔的细胞名称、数目.需要先设置此选项，然后才可进行下一步；

(4)测量基线阻抗：进入页面上“schedule”，点击“add a step”按钮，检测；

(5)取出E-Plate 16，在孔中加入100μl混合均匀的4T1细胞悬液；

(6)将E-Plate16置于超净台中室温放置30min；

(7)将E-Plate 16放到培养箱中的xCelligence上；

(8)进入页面上“schedule”，点击“add a step”按钮，设置总的测量时间(h)：大于总的观察时间即可，设置时间间隔(interval)：15min，系统自动算出测量次数(sweeps)；

Plot界面点击“add all”增加曲线，可以查看曲线变化。

(9)在系统点击“开始”按钮，开始检测细胞增殖曲线。加药时点击“暂停”按钮，取出E-plate16进行加药，加药结束后将plate放回，点击“开始”按钮。

(10)观察细胞生长曲线，当cell index达到1左右时，予以药物干预，观察药物干预后细胞的增殖情况。

4.3实时细胞检测法：迁移

(1)准备细胞悬液(与实时细胞检测法：增殖相同)；

(2)在CIM-Plate16板下室的孔中用多道或单道移液器加入165ul培养基，与上室组装在一起；

(3)在上室中加入30ul无血清培养基，轻拍板四周，使培养基分布均匀。将device置于37℃，CO2浓度为5％的CO₂培养箱平衡1h；

(4)基线测量：将平衡1h的device置于xCelligence上，系统自动扫描后，进行基线检测；

(5)将板取出，加100ul细胞悬液将CIM-Plate16板置于超净台中室温放置 30min；

(6)将CIM-Plate16板放到培养箱中的xCelligence上，检测24hr。

结果见图1和图2，图1显示HX组能够抑制小鼠4T1乳腺癌细胞增殖；图2显示HX组能够抑制小鼠4T1乳腺癌细胞迁移。

实验例2 细胞凋亡检测实验

(1)收集细胞：收集经不同药物处理24h或48h的细胞株，用0.125％胰酶消化2min，完全培养基终止消化，1500rpm离心5min。

(2)洗涤重悬：用PBS洗涤细胞2次(用手指弹散细胞，用枪轻柔吹打混匀)，第二次洗涤重悬细胞收集至1.5mLEP管中，离心后弃去上清，加入500uL的binding buffer，悬浮细胞，置于冰上。

(3)染色：加入5uL的Annexin V-FITC混匀后，加入5uLPI轻轻混匀，室温避光，反应15min。

(4)检测：用300目滤网过滤一遍细胞到流式的上样管中，流式细胞仪检测。

凋亡早期细胞因磷脂酰丝氨酸的暴露及具有完整细胞膜，故呈现 Annexin V-FITC染色阳性，PI染色阴性。坏死或者晚期凋亡的细胞呈Annexin V-FITC染色阳性，PI染色阳性。

流式图上显示：右下为早期凋亡，右上为晚期凋亡。左上为坏死，左 下为活细胞。

实验例1和2的实验结果显示：本发明所述的中药组合物多糖可以抑制小鼠4T1乳腺癌细胞增殖和迁移，并诱导凋亡。

Claims (18)

1.一种治疗乳腺癌的中药组合物的多糖，其特征在于，所述多糖由下述方法制备：中药组合物由以下重量份的中药制成：川芎：1-2重量份；鸡血藤：2-3重量份；莪术：1-1.5重量份；

1)去脂：取中药材，加入3-6倍量的石油醚，回流提取1-3h，滤取药渣；再加入3-6倍量的石油醚，再回流提取1-3h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：向药渣中加入10-12倍量的水，浸泡，煎煮1-3次，过滤；滤液浓缩至0.9-1.25g/ml，得浓缩液；

3)醇析：浓缩液中加入无水乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为70-85％，静置，过滤得沉淀，将沉淀干燥，得粗多糖；

4)脱蛋白：将粗多糖脱除蛋白；

5)干燥。

2.如权利要求1所述的多糖，其特征在于，步骤1)中，所述去脂如下进行：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤取药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚。

3.如权利要求1所述的多糖，其特征在于，步骤2)中，所述煎煮为2次，煎煮时间分别为2h和1.5h。

4.如权利要求1所述的多糖，其特征在于，步骤2)中，所述浸提如下进行：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml，得浓缩液。

5.如权利要求1所述的多糖，其特征在于，步骤4)中，所述脱蛋白采用sevage法；所述sevage法脱蛋白如下进行：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次。

6.如权利要求1-5任意一项所述的多糖，其特征在于，由下述方法制备：

1)去脂：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤取药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml；

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为80％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖；

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次；

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

7.如权利要求1-6任意一项所述的中药组合物多糖的制备方法，包括以下步骤：

1)去脂：取中药材，加入3-6倍量的石油醚，回流提取1-3h，滤取药渣；再加入3-6倍量的石油醚，再回流提取1-3h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：向药渣中加入10-12倍量的水，浸泡，煎煮1-3次，过滤；滤液浓缩至0.9-1.25g/ml，得浓缩液；

3)醇析：浓缩液中加入无水乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为70-85％，静置，过滤得沉淀，将沉淀干燥，得粗多糖；

4)脱蛋白：将粗多糖脱除蛋白；

5)干燥。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)去脂：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤取药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml；

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为80％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖；

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次；

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

9.如权利要求1-6任意一项所述的中药组合物的多糖在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

10.一种治疗乳腺癌的中药组合物的多糖，其特征在于，所述多糖由下述方法制备：中药组合物由以下重量份的中药制成：川芎：1重量份；鸡血藤：3重量份；莪术：1重量份；

1)去脂：取中药材，加入3-6倍量的石油醚，回流提取1-3h，滤取药渣；再加入3-6倍量的石油醚，再回流提取1-3h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：向药渣中加入10-12倍量的水，浸泡，煎煮1-3次，过滤；滤液浓缩至0.9-1.25g/ml，得浓缩液；

3)醇析：浓缩液中加入无水乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为70-85％，静置，过滤得沉淀，将沉淀干燥，得粗多糖；

4)脱蛋白：将粗多糖脱除蛋白；

5)干燥。

11.如权利要求10所述的多糖，其特征在于，步骤1)中，所述去脂如下进行：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤取药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚。

12.如权利要求10所述的多糖，其特征在于，步骤2)中，所述煎煮为2次，煎煮时间分别为2h和1.5h。

13.如权利要求10所述的多糖，其特征在于，步骤2)中，所述浸提如下进行：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml，得浓缩液。

14.如权利要求10所述的多糖，其特征在于，步骤4)中，所述脱蛋白采用sevage法；所述sevage法脱蛋白如下进行：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次。

15.如权利要求10-14任意一项所述的多糖，其特征在于，由下述方法制备：

1)去脂：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤取药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml；

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为80％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖；

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次；

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

16.如权利要求10-15任意一项所述的中药组合物多糖的制备方法，包括以下步骤：

1)去脂：取中药材，加入3-6倍量的石油醚，回流提取1-3h，滤取药渣；再加入3-6倍量的石油醚，再回流提取1-3h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：向药渣中加入10-12倍量的水，浸泡，煎煮1-3次，过滤；滤液浓缩至0.9-1.25g/ml，得浓缩液；

3)醇析：浓缩液中加入无水乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为70-85％，静置，过滤得沉淀，将沉淀干燥，得粗多糖；

4)脱蛋白：将粗多糖脱除蛋白；

5)干燥。

17.如权利要求16所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)去脂：取中药材，加入6倍量的石油醚，回流提取2h，滤取药渣；再加入6倍量的石油醚，再回流提取2h，滤取药渣，挥干石油醚；

2)浸提：药渣加入12倍量的水，浸泡30min，煎煮2h，过滤；药渣再加入10倍量的水，煎煮1.5h，过滤；合并滤液，过滤，滤液浓缩至1g/ml；

3)醇析：浓缩液中加入95％乙醇，边加入边搅拌，使含醇量为80％，静置过夜24h，减压抽滤得沉淀，将沉淀减压干燥，得粗多糖；

4)sevage法脱蛋白：粗多糖研匀分散于25倍水中，加入1/5体积的氯仿，随之再加入体积为氯仿体积1/5的正丁醇，振摇，放出氯仿层；重复7-8次；

5)干燥：用旋转蒸发仪回收溶剂，减压干燥。

18.如权利要求10-15任意一项所述的中药组合物的多糖在制备治疗乳腺癌药物中的应用。