CN102940683B - 一种用于治疗肝癌的中药复方组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药领域，具体涉及一种用于治疗肝癌的中药复方组合物，该组合物由以下重量百分比的组分组成：马钱子3～5%，红娘子5～6%，守宫6～10%，土鳖虫5～12%，水蛭8～12%，蜈蚣9～10%，生甘草12～19%，糯米粉32～40%。本发明的中药复方组合物综合马钱子、红娘子、守宫、土鳖虫、水蛭、蜈蚣、生甘草、糯米粉多味中药，共凑软坚散结，通络止痛之功效，进而抑制肿瘤生长，达到治疗肝癌的目的。

Description

一种用于治疗肝癌的中药复方组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种用于治疗肝癌的中药复方组合物，以及制备该中药复方组合物的方法。

背景技术

原发性肝癌（PLC，简称肝癌）是临床上最常见的恶性肿瘤之一,全球发病率逐年增长，已超过62.6万/年，居于恶性肿瘤的第5位；死亡接近60万/年，位居肿瘤相关死亡的第3位。我国是肝癌的高发国，每年有30.6万人发病，新发病例约占全球55％，由于肝癌起病隐匿、侵袭性强、发病时多数病例已属中晚期，预后差，死亡率高，是严重威胁我国人民健康和生命的重大疾病。

目前西医治疗肝癌由早期单一切除模式变为手术切除、肝移植、介入栓塞化疗、放射治疗、分子靶向治疗等多种模式，但即使根治性切除，由于肝癌的体积、病灶的部位、肝外转移及肝炎、肝硬化肝功能异常限制等原因，可以外科手术治疗的肝癌病人仅为10～20%，5年内仍有60%～70%的复发率。由于目前化疗药物选择性不高，在杀伤肿瘤细胞的同时，对机体的正常细胞也有杀伤作用；还有诱发继发性肿瘤和多药耐药性的危险，这些因素严重限制化疗药物的临床使用。

中医药治疗肝癌可通过诱导肝癌细胞凋亡、抑制其增殖诱导细胞分化，增强机体免疫功能等达到治疗疾病目的，具有多靶点的作用特点，且毒副作用小，临床应用可抑制肝癌细胞生长、延长患者带瘤生存时间，改善生活质量。然而，现有的中药制剂对肿瘤的治疗效果不尽理想。

发明内容

本发明的一个目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种可有效应用于肝癌治疗的中药复方组合物，该制剂可解毒散结，通络止痛，抑制肿瘤生长。

本发明的另一个目的是提供一种制备所述中药复方组合物的方法。

为达到以上目的，本发明提供了一种用于治疗肝癌的中药复方组合物，其由以下重量百分比的组分组成：马钱子3～5%，红娘子5～6%，守宫6～10%，土鳖虫5～12%，水蛭8～12%，蜈蚣9～10%，生甘草12～19%，糯米粉32～40%。

优选地，所述的中药复方组合物由以下重量百分比的组分组成：马钱子3～5%，红娘子5～6%，守宫6～9%，土鳖虫9～12%，水蛭9～12%，蜈蚣9～10%，生甘草12～19%，糯米粉32～37%。

更优选地，所述的中药复方组合物由以下重量百分比的组分组成：马钱子3.9%，红娘子5.8%，守宫9.7%，土鳖虫9.7%，水蛭9.7%，蜈蚣9.7%，生甘草19.3%，糯米粉32.2%。

本发明还提供了一种制备所述中药复方组合物的方法，其包括以下步骤：

（1）将马钱子用粗砂炒至表皮微黄、鼓起，取出刮去外皮备用；

（2）将红娘子用糯米粉炒至微黄；

（3）将全部组分混合粉碎，过筛，药粉混合均匀，按1:1重量比加入炼制蜂蜜，和药，制成丸剂或胶囊剂。

优选地，所述步骤（3）中，将全部组分混合粉碎后过120目筛。

优选地，所述步骤（3）中，以与所述中药复方组合物重量比为1:1的比例加入炼制蜂蜜，和药，制成丸剂。

本发明的中药复方组合物中，马钱子为马钱科植物马钱（Strychnos nuxvomica L.）的十燥成熟种子；性苦，温；有大毒。归肝、脾经；功能主治通络止痛，散结消肿。用于跌打损伤，骨折肿痛，风湿顽痹，麻木瘫痪，痈疽疮毒，咽喉肿痛。

红娘子为为蝉科昆虫红娘子的干燥全虫，干燥虫体呈长圆形，尾部较狭；苦辛，平，有毒；功能主治攻毒，通瘀，破积；外用治瘰疬，癣疮；内服治血瘀经闭，狂犬咬伤。

守宫为壁虎科动物无蹼壁虎Gekko swinhoana Gunther、多疣壁虎G.japonicum Doumerilet Bibron、壁虎G.chinensis Gray的干燥全体；味咸，性寒；小毒；归肝经；功能主治祛风定惊，解毒散结；用于中风瘫痪，历节风痛，风痰惊痫，瘰疬恶疮。

土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖Eupolyphaga Sinesis Walker或冀地鳖Steleophagaplancyi(Boleny)的雌虫干燥体。呈扁平卵形，咸，寒；有小毒。归肝经。破血逐瘀，续筋接骨。用于跌打损伤，筋伤骨折，血瘀经闭，产后瘀阻腹痛，瘕瘕痞块。

水蛭为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nippponica whitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全体。呈扁平纺锤形，有多数环节，咸、苦，平；有小毒。归肝经。破血通经，逐瘀消瘕。用于血瘀经闭，瘸瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤。

蜈蚣为为蜈蚣科动物少棘巨蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch的干燥体。呈扁平长条形，辛，温；有毒。归肝经。功能主治：息风镇痉，通络止痛，攻毒散结。用于肝风内动，痉挛抽搐，小儿惊风，中风口喁，半身不遂，破伤风，风湿顽痹，偏正头痛，疮疡，瘰疬，蛇虫咬伤。

生甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflateBat.或光果甘草Glycyrrhiza glabral L.的干燥根和根茎。味甘，性平。归心、肺、脾、胃经。功能主治：补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。

实验结果证明，本发明提供的用于治疗肝癌的中药复方组合物，其中马钱子具通络散结，消肿止痛之功，红娘子含斑蝥素，有破徵散结作用，两药合而为君药，共奏抗癌散结，化积消肿的功效。水蛭、土鳖虫、蜈蚣、守宫均具有活血化瘀，解毒散结，通络止痛的功用，共而为臣药，生甘草、糯米粉起调和诸药及解毒的作用，为使药。上述8味合用，共凑软坚散结，通络止痛之功效，进而抑制肿瘤生长，达到治疗肝癌的目的。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步的详述，但本发明的保护范围并不仅限于以下实施例。

实施例1

1.按以下配方称量各组分：

马钱子18g，红娘子27g，守宫45g，土鳖虫45g，水蛭45g，蜈蚣45g，生甘草90g、糯米粉150g。

2.按以下步骤制备组合物：

（1）将18g马钱子用粗砂炒至表皮微黄、鼓起，取出刮去外皮备用；

（2）27g红娘子用150g糯米粉炒至微黄；

（3）将全部组分混合粉碎，过120目筛，药粉混合均匀，按1:1比例加入炼制蜂蜜，和药，制成丸块，再用制丸机制成丸粒，干燥，分装即得,每丸粒重0.08g。

实施例2

1.按以下配方称量各组分：

马钱子9g，红娘子15g，守宫15g，土鳖虫30g，水蛭30g，蜈蚣22.5g，生甘草30g，糯米粉90g。

2.按以下步骤制备组合物：

（1）将9g马钱子用粗砂炒至表皮微黄、鼓起，取出刮去外皮备用；

（2）15g红娘子用90g糯米粉炒至微黄；

（3）将全部组分混合粉碎，过120目筛，药粉混合均匀，填充胶囊，即得胶囊剂，0.35g/粒。

实施例3

1.按以下配方称量各组分：

马钱子15g，红娘子18g，守宫30g，土鳖虫15g，水蛭24g，蜈蚣30g，生甘草45g、糯米粉120g。

2.按以下步骤制备组合物：

（1）将9g马钱子用粗砂炒至表皮微黄、鼓起，取出刮去外皮备用；

（2）15g红娘子用90g糯米粉炒至微黄；

（3）将全部组分混合粉碎，过120目筛，药粉混合均匀，按1:1比例加入炼制蜂蜜，和药，制成丸块，再用制丸机制成丸粒，干燥，分装即得,每丸粒重0.08g。

实施例4抗肝癌体内药效学试验研究

（一）实验材料与方法

1.实验材料

1.1药物

治疗组1的供试药物：取实施例1所得的中药复方组合物，加以蒸馏水溶解，配成有效成份浓度为0.075Kg/L的药液。

治疗组2的供试药物：取实施例2所得的中药复方组合物，加以蒸馏水溶解，配成有效成份浓度为0.075Kg/L的药液。

治疗组3的供试药物：取实施例3所得的中药复方组合物，加以蒸馏水溶解，配成有效成份浓度为0.075Kg/L的药液。

此处，“有效成分”指的是马钱子、红娘子、守宫、土鳖虫、水蛭、蜈蚣、生甘草和糯米粉。

1.2实验动物：

SPF级昆明种小鼠，雄性，6-8周龄，体重20±2g，购自广东省医学实验动物中心。动物质量合格证号：0093631，许可证号：SCXK（粤）2008-0002。动物饲养环境：室温为23±2℃，相对湿度为40-75%，采用标准饲料和水饲养。

1.3肿瘤细胞株：

小鼠H22肝癌细胞株购自中山大学医学院动物中心细胞库,经小鼠腹腔接种7～8d后，在无菌条件下抽取腹水，作为传代的瘤种。

1.4血清IL-2放免法检测试剂盒：

由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。

1.5实验仪器：

SN-695B型放免测量仪（上海日环仪器一厂）、TLL-C台式冷冻离心机（北京四环科学仪器厂）、GB303电子分析天平。

2.实验方法

2.1.造模方法

瘤株接种方法按照1989年第三届全国肿瘤药理及化疗学术会议规定的方法并优化改进。取H22腹水肝癌荷瘤小鼠之乳白色癌性腹水，以生理盐水l：3稀释；并计数癌细胞，含1×10⁷个细胞/m1，每只小鼠右侧腋窝皮下接种0.2ml，制备H22肝癌荷瘤小鼠。

2.2抑瘤实验

50只昆明种雄性小鼠,按上述方法制备肝癌荷瘤小鼠小鼠模型，造模24h后将小鼠随机分为5组，每组10只，分别为：模型组、治疗组1～3和环磷酰胺治疗组。治疗组1-3的剂量均按1.48g/kg体重（换算后相当于临床用药剂量）灌胃给药，环磷酰胺组的剂量按20mg/kg（换算后相当于临床用药剂量）腹腔注射给药，模型组予等体积生理盐水灌胃，每日1次，连续8天，末次给药24h后，小鼠称体重，小鼠眼眶静脉丛采血，离心，分离血清，断颈处死小鼠，取皮下瘤块称重。

2.3血清IL-2水平检测：

采用放免法，按试剂盒说明书操作。

3.疗效评价

3.1实体瘤疗效评价

实体瘤的疗效以抑瘤率表示：

抑瘤率（%）=[(模型组平均瘤重-相应给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重]×100%

3.2药物疗效评价标准

要求对照组瘤重均值不得低于1g；实验治疗组平均体重下降（给药前后自身比较）不得超过15%；死亡数不得超过20%；瘤重抑制率大于30%且重复试验3次，疗效稳定，与对照组有显著性差异者，可认为此药有一定疗效。

4.统计学处理：

计量资料以均数±标准差

表示，采用SPSS10.0软件包进行统计分析,多组计量资料分析采用One way ANOVA,多重比较采用LSD，以P<0.05表示差异有显著性意义。

（二）结果

1．用药前后一般状况及体重变化

造模前小鼠活动、饮食、毛色均无异常。实验第五天小鼠腋下可触及肿瘤。用药前期各组小鼠体重增加均较快，后期环磷酰胺组体重增加减慢。实验前各组小鼠体重差异无显著性意义(P>0.05)，实验结束时环磷酰胺组与模型组比较，小鼠的体重差异有显著性意义（P<0.05），见表1。

表1.用药前后体重变化

注：与模型组比较，*P<0.05

2.中药复方组合物对H22肝癌移植瘤小鼠瘤重的影响

与模型组比较，治疗组1、治疗组2和治疗组3瘤重明显减小，差异均有显著性意义(P<0.01)，与环磷酰胺组比较，差异均无显著性意义(P>0.05)；治疗组1的抑瘤率高于治疗组2和治疗组3，见表2。

表2.中药复方对H22肝癌移植瘤小鼠瘤重的影响

注：与模型组比较，*P<0.01。

3.中药复方对H22肝癌移植瘤小鼠血清IL-2含量的影响

治疗组1血清IL-2水平明显高于模型组，差异有显著性意义(P<0.01)。

治疗组2和治疗组3血清IL-2水平明显低于治疗组1，差异均有显著性意义(P<0.05，0.01)，见表3。

表3.中药复方对H22肝癌移植瘤小鼠血清IL-2含量的影响

注：与模型组比较，△P<0.01；与治疗组1比较，*P<0.05，**P<0.01；与环磷酰胺组比较，#P<0.01。

（三）结论

由以上动物实验结果可见，本发明提供的中药复方组合物对H22肝癌移植瘤小鼠有较好的抑制肿瘤生长作用，尤其以治疗组1的作用效果最好，提示实施例1的中药组分配剂量比较佳，其作用机理与调节免疫功能、升高小鼠血清IL-2水平密切相关。

实施例5抗肝癌药体外效学试验研究

1材料和方法

1.1实验细胞Huh7细胞系，由广州蓝搏生物公司提供。

1.2含药血清制备：

SPF级新西兰白兔6只,雌雄各半，体重1.8kg左右，随机分为3组，每组2只，分别为正常组、中药复方组（47.74g/Kg）和马红丸组(44.60g/Kg)，各给药组动物均灌胃给药，给药剂量=临床用量×等效剂量系数(按体表面积计算)×2，每日1次，连续3d，最后1次给药前12h，禁食不禁水，给药2h后麻醉，采血，离心，取上清液，即为含药血清，正常组动物予等体积生理蒸馏水灌胃，连续3d，取血清即为未含药血清。然后均以0.22μm微孔滤膜过滤除菌处理，56℃灭活30min，-2O℃冰箱冻存备用。临用前加入含10％胎牛血清DMEM培养液调成所需浓度。

1.3主要试剂与仪器

高糖DMEM培养液、胎牛血清购自美国GIBCO公司；二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)和胰蛋白酶均购自sigma公司；乙二胺四乙酸(EDTA)购自上海生物工程公司(美国Amreeso进口分装)；青霉素、链霉素购自华北制药有限公司。

1.4细胞培养

人肝癌Huh7细胞用含青霉素、链霉素各100U/mL、体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液置培养瓶中，在5%CO2、37℃饱和湿度的CO2培养箱中培养，2～3d更换1次培养液。待细胞长至80％～90％密度时，用0.2g/L EDTA和2.5g/L胰蛋白酶消化，倒置显微镜下观察细胞形态变圆，细胞间隙变大时弃去胰酶，收集细胞，离心弃上清重悬细胞，按1:3～1:4传代培养或选取对数生长期细胞进行实验。

1.5中药复方组\马红丸组对Huh7细胞增殖的影响比较

采用MTT法。将传代的Huh7细胞以1.0×l0⁵/mL的密度0.1mL接种于96孔板中，置于37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱内培养，培养24h后，吸弃上清，分为3组：正常对照组、空白血清组、中药复方组和马红丸组,各个浓度组均设4个复孔。正常对照组加含10％胎牛血清的DMEM培养液。治疗组分别加入已制备的中药复方组合物和马红丸含药血清，血清对照组加入未含药血清。均以10％胎牛血清的DMEM培养液培养。各组均于培养24、48h、72h后，轻轻吸弃上清液，加入MTT，放入培育箱中，培育4h，再用DMSO将其溶解，其后用酶标仪测定D值（490nm），比较药物的作用效果。

1.6.统计学处理：

计量资料以均数±标准差

表示，采用SPSS10.0软件包进行统计分析,多组计量资料分析采用One way ANOVA,多重比较采用LSD，以P<0.05表示差异有显著性意义。

2结果

用MTT法检测不同时间点中药复方对人肝癌Huh7细胞增殖的影响：

在药物作用的第24h，细胞开始出现凋亡现象，在镜下可见：出现细胞皱缩、脱壁、细胞漂浮及细胞破碎现象,细胞凋亡增加，本发明的中药复方组合物和马红丸均有较好的抑制细胞增殖作用效果，且效果均优于马红丸组（p<0.01），表明本发明的中药复方组合物能够显著抑制Huh7增殖，且作用稳定。见表4。

表4.不同时间点中药复方对肝癌Huh7细胞增殖的影响(

n=4)

注：①p<0.01，与空白对照组；②p<0.01，与血清对照组比较；③p<0.01，与马红丸组比较。

3结论

本发明的中药复方组合物在体外有较好的抑制Huh7细胞增殖作用，且效果优于马红丸。

Claims (6)

1.一种用于治疗肝癌的中药复方组合物，其特征在于由以下重量百分比的组分组成：马钱子3～5%，红娘子5～6%，守宫6～10%，土鳖虫5～12%，水蛭8～12%，蜈蚣9～10%，生甘草12～19%，糯米粉32～40%。

2.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其特征在于由以下重量百分比的组分组成：马钱子3～5%，红娘子5～6%，守宫6～9%，土鳖虫9～12%，水蛭9～12%，蜈蚣9～10%，生甘草12～19%，糯米粉32～37%。

3.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其特征在于由以下重量百分比的组分组成：马钱子3.9%，红娘子5.8%，守宫9.7%，土鳖虫9.7%，水蛭9.7%，蜈蚣9.7%，生甘草19.3%，糯米粉32.2%。

4.制备权利要求1至3任一项所述的中药复方组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将马钱子用粗砂炒至表皮微黄、鼓起，取出刮去外皮备用；

（2）将红娘子用糯米粉炒至微黄；

（3）将全部组分混合粉碎，过筛，药粉混合均匀，进一步制成丸剂或胶囊剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，将全部组分混合粉碎后过120目筛。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，以与所述中药复方组合物重量比为1:1的比例加入炼制蜂蜜，和药，制成丸剂。