CN104996543B

CN104996543B - 一种改良型水产品生物保鲜剂，其制备方法及用途

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Publication number: CN104996543B
Application number: CN201510468118.1A
Authority: CN
Inventors: 徐德峰; 叶日英; 孙力军; 王雅玲; 伍彬; 廖建萌
Original assignee: Guangdong Ocean University
Current assignee: Guangdong Ocean University
Priority date: 2015-07-31
Filing date: 2015-07-31
Publication date: 2018-06-22
Anticipated expiration: 2035-07-31
Also published as: CN104996543A

Abstract

本发明公开了一种改良型水产品生物保鲜剂，按重量计算，其包括：葡萄糖氧化酶0.1‑1%，茶多酚1~3%，水溶性壳聚糖1~3%，余量为水。本发明所用葡萄糖氧化酶为本实验室从深海中分离的一株海洋芽孢杆菌所产，较目前商品葡萄糖氧化酶制剂在低温下具有更高的活力，更适合于水产品冷链物流过程中的品质保鲜。本发明的保鲜剂保鲜效果显著，能明显抑制水产品的黑变和细菌引起的腐败变质，以及延长货架期。本发明保鲜剂成本低廉，并且操作简单，方便实用。

Description

一种改良型水产品生物保鲜剂，其制备方法及用途

技术领域

本发明涉及水产品贮藏与加工领域，具体涉及一种减缓水产品冷藏过程中品质劣变的复合生物保鲜剂。

背景技术

南美白对虾（Litopenaeus vannamei）作为世界三大养殖对虾中单产量最高的虾种占我国对虾总产量的70%～80%，但由于其肌肉组织松软，组织蛋白酶活性较强，造成虾体在冷链过程中以黑变和微生物超标为代表的品质劣变速度较快，严重影响对虾的感官和市场价值。

基于内源多酚氧化酶激活所引发的黑变，以及内源和外源性微生物繁殖所造成的腐败变质，目前对虾保鲜的主要技术途径在于抑制微生物和酶的活性，其手段有物理保鲜、化学保鲜和生物保鲜。物理保鲜以4℃的冷藏和-18℃的冻藏最为普遍，是目前保鲜的主要技术手段，但也存在能耗高、干耗大，以及精确控温难度大等缺陷；化学保鲜具有保鲜效果好、成本低廉，以及环境要求低等优势，但由于其安全性而越来越受到限制；生物保鲜因其良好的安全性和保鲜效果而在水产品贮藏与加工领域日益受到关注，各种生物保鲜剂的研究和应用已有较多报道，预示了良好发展前景。

目前应用在水产品保鲜中的生物保鲜剂其主要成分一般为多糖、植酸、茶多酚、葡萄糖氧化酶、溶菌酶等天然成分（李颖畅, 王亚丽, 吕艳芳, 等. 紫菜多糖提取物对冷藏对虾品质的影响. 现代食品科技[J], 2015, 31(3): 115-120. Encarnacion AB.,Fagutao F., Jintasataporn O., Worawattanamateekul W., Hirono I., Ohshima T.Application of ergothioneine-rich extract from an edible mushroom Flammulinavelutipes for melanosis prevention in shrimp, Penaeus monodon and Litopenaeus vannamei [J]. Food Research International, 2012, 45: 232–237. 解万翠，杨锡洪，曹湛慧，等. 一种对虾保鲜保水剂，CN104304411A；刘小莉，周剑忠，张丽霞，等. 一种延长水产品保质期的生物保鲜方法，CN104222255A；羌利民. 一种溶菌酶保鲜剂及其在水产品的保鲜中的应用，CN102106589A）。总体而言，其机理仍为保水、抗氧化和抗菌作用，各成分之间的合理组合是达到预期保鲜效果和降低使用成本的关键。值得注意的是，近年来利用酶的独特生化作用而制备的含酶生物保鲜剂已得到广泛应用。刘金昉利用壳聚糖复合纳米钛粉、溶菌酶和蜂胶，制备复合生物保鲜剂并结合冰温技术应用于对虾保鲜，结果表明在4℃冷藏条件下对虾感官、理化和微生物指标均较对照有显著改善，延长了对虾的保鲜期（刘金昉；刘红英；齐凤生，等. 复合生物保鲜剂结合冰温贮藏对南美白对虾的保鲜效果. 食品科学[J], 2014, 35（20）：286-290.）。葡萄糖氧化酶是值得关注的酶，然而，现阶段商品化的葡萄糖氧化酶都是由霉菌发酵产生，存在产酶活力低及分离复杂的缺陷，因此获得产酶活力高且酶的分离纯化相对简单的目标微生物是降低酶制剂使用成本的关键。

针对以上问题，本发明主要利用本实验室的研究成果，将分离自深海的一株高产葡萄糖氧化酶的芽孢杆菌进行发酵获得葡萄糖氧化酶粗品，与具有显著抗氧化活性的茶多酚，以及具有抑菌及成膜效应的水溶性壳聚糖进行组合复配，制备得到一种改良型水产品复合生物保鲜剂，并应用于对虾特别是南美白对虾冷藏保鲜，在提高保鲜效果的同时显著降低成本。

发明内容

捕捞后的对虾尤其是南美白对虾因自身良好的营养组成和疏松的组织结构，在适宜环境下其丰富的内源酶和微生物即可迅速发挥作用，造成感官和微生物品质劣变。因此，本发明所要解决的技术问题就在于制备一种可抑制冷藏期间南美白对虾黑变和微生物繁殖的复合生物保鲜剂。本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案来实现：

一种改良型水产品生物保鲜剂，按重量计算，其包括：葡萄糖氧化酶0.1-1%，茶多酚1~3%，水溶性壳聚糖1~3%，余量为水。优选地，按重量计算，其包括葡萄糖氧化酶0.3%，茶多酚1.5%，水溶性壳聚糖2%，其余为水。

优选地，所述葡萄糖氧化酶由芽孢杆菌CAMT22370发酵产生。本发明的芽孢杆菌Bacillus sp.CAMT22370是可生产低温葡萄糖氧化酶的深海菌株，该菌于2015年4月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，该保藏单位的简称为CCTCC，保藏单位地址为武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC No: M2015247。

优选地，所述葡萄糖氧化酶在0~10℃下活力大于4U/mL。

优选地，所述发酵为液体发酵，所采用的发酵培养基为：麦芽糖5g，酵母粉10g，氯化钙2.8g，氯化钠1g，吐温-80 1.5 mL，去离子水1L，pH7.5。

优选地，发酵条件为：接种量2~10%体积，产酶温度22~37℃，发酵时间36~84h，转速0~250rpm。

进一步优选地，发酵条件为：接种量6~8%体积，产酶温度30~35℃，发酵时间40~72h，转速150~250rpm。

一种上述任一种改良型水产品生物保鲜剂的制备方法，包括：按比例取葡萄糖氧化酶、茶多酚和水溶性壳聚糖，将其溶于水中。

本发明还提供上述改良型水产品生物保鲜剂在对虾保鲜中的用途，首先，使用上述任一种改良型水产品生物保鲜剂浸泡对虾5~10min，然后捞出对虾，风干，冷藏。

本发明的改良型水产品生物保鲜剂可直接使用，无需稀释。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

1、葡萄糖氧化酶活力高、性质独特：本发明所用葡萄糖氧化酶为本实验室从深海中分离的一株海洋芽孢杆菌所产，较目前商品葡萄糖氧化酶制剂在低温下具有更高的活力，更适合于水产品冷链物流过程中的品质保鲜。

本发明提供的芽孢杆菌Bacillus sp. CAMT22370能够产生低温葡萄糖氧化酶，该酶在0~10℃的食品冷链温度下的酶活相对于传统黑曲霉等来源的葡萄糖氧化酶显著提高，从而大幅改善在低温下的保鲜效果。

另外，现阶段商品化的葡萄糖氧化酶都是由霉菌发酵产生，存在产酶活力低及分离复杂的缺陷。以芽孢杆菌Bacillus sp. CAMT2237进行发酵，产生的低温葡萄糖氧化酶不仅酶活力高，而且分离容易。

2、保鲜效果显著，基于葡萄糖氧化酶的独特抗氧化和杀菌活性，复合茶多酚显著的抗氧化性，以及水溶性壳聚糖独特的抗菌活性，本生物复合保鲜剂在水产品冷链物流过程中可显著减缓因微生物、酶和氧等生物和物理因子所引发的品质劣变，维持产品良好的感官、理化及微生物指标，保鲜效果显著。经实验证明，本发明保鲜剂能明显抑制南美白对虾的黑变和细菌引起的腐败变质，可延长南美白对虾货架期5~6天。

3、操作简单，在水产品捕捞清洗后直接浸没于该保鲜液内浸泡10min，然后捞出按正常操作进行冷链物流，相比传统的直接冰鲜物流本专利虽然增加了一道工序，但整体操作简单，方便实用。

4、成本低廉，本专利所用成分目前在市场上价格较低，同时利用协同增效的原理将三者合理复配，进一步降低了组分浓度，显著降低了成本。

附图说明

图1为碳源种类对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶活力的影响图；

图2为氮源种类对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶活力的影响图；

图3为无机盐种类对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶活力的影响图；

图4为装液量对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶的影响图；

图5为接种量对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶的影响图；

图6为发酵温度对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶的影响图；

图7为发酵时间对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶的影响图；

图8为转速对Bacillus sp. CAMT22370产葡萄糖氧化酶的影响图；

图9为不同处理方式下对虾冷藏期间的黑变进程图；

图10为不同处理对南美白对虾微生物繁殖的影响图。

具体实施方式

在本发明中，酶活力的定义为每分钟催化产生1.0 μg H₂O₂的量即为一个酶活力单位。除在特定背景下或特别说明，酶活力均在室温（25℃）下测定。

以下实施例采用的培养基为：

富集及种子培养基：蛋白胨5g，酵母膏1g，硫酸亚铁0.1g，天然海水1L，pH7.6-7.8。

发酵培养基：麦芽糖5g，酵母粉10g，氯化钙2.8g，氯化钠1g，吐温-80 1.5mL，去离子水1L，pH7.5。

实施例1：产葡萄糖氧化酶菌株的筛选

本发明芽孢杆菌CAMT22370的筛选方法包括以下步骤：

（1）细菌的富集：称取1g 海泥于9ml的无菌海水试管中震荡均匀，静置，取上清液逐级稀释至10^-2，10^-3，l0^-4倍，震荡均匀后各取1mL不同浓度的样液分别接种至各培养基中，放于30℃培养箱中倒置培养。

（2）初筛：将富集菌体稀释至约10⁴/mL浓度，根据产物H₂O₂可将亚甲基蓝氧化为无色，设计含有亚甲基蓝浓度梯度的显色培养基，将稀释菌悬液采用稀释涂布法接种于显色培养基，在30℃下培养48h后根据菌体周围无色透明圈的大小初步判定产葡萄糖氧化酶活力高低，挑选若干菌株进行后续摇瓶发酵复筛。

（3）复筛：复筛主要采用酶标仪对初筛菌株的发酵液中的葡萄糖氧化酶活力进行快速比较筛选。利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖产生的H₂O₂可使靛蓝胭脂红褪色，其褪色程度在一定范围内与产生的H₂O₂量呈正相关，据此通过标准曲线计算出催化产物H₂O₂量，评价酶活力高低。酶活力的定义为每分钟催化产生1.0 μg H₂O₂的量即为一个酶活力单位。可溶性蛋白测定采用考马斯亮蓝G-250法测定。

实施例2：产葡萄糖氧化酶菌株的鉴定

对实施例1筛选出的菌株，采用形态学和分子生物学方法对其进行鉴定。

形态鉴定主要采用菌落形态和显微形态进行观察，生理生化鉴定根据菌株的代谢历程采用糖酵解试验、淀粉水解试验、V-P试验、甲基红试验、氧化酶试验、三糖铁琼脂试验和硫化氢靛基质-动力琼脂试验的方法进行，分子生物学鉴定采用16SrDNA测序与比对的方法进行鉴定。综合对形态、生理生化和生物分子学鉴定结果进行菌株归属。

其中，分子生物学鉴定首先采用细菌DNA提取试剂盒提取基因组DNA，然后采用通用引物进行PCR扩增，扩增体系及程序按常规操作参数，PCR产物纯化后完成测定的16SrDNA基因基因片段长度为1492bp，经比对，与Bacillus sp相似性最高，同源性达100%。

结果显示，筛选得到的菌株具有以下特征：（1）菌落形态：白色，直径较小，呈圆形，表面光滑，低凸起，较透明，边缘整齐；（2）细胞形态：杆状，单个排列，单端生鞭毛，革兰氏阳性；（3）：生理生化特征：生长温度为4-40℃，好氧，能耐受7%（wt）氯化钠，能水解明胶、淀粉、酪素，能利用硫酸铵、硝酸铵、D-氨基葡萄糖，可利用糖原、麦芽三糖、D-海藻糖、D-核糖为碳源，不能利用菊粉、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、甘露醇和木糖，吲哚反应为阴性，甲基红试验、接触酶、氧化酶和β-N-乙酰氨基葡糖苷酶试验为阳性，产过氧化氢酶，不产硫化氢。

该菌株经16S rDNA鉴定，测得基因片段长度为1492bp。将获得的基因序列输入Genbank，应用Blast程序将获得的基因序列与数据库中基因序列进行对比。结果显示，与芽孢杆菌Bacillus sp的16S rDNA序列的同源性为100%。将此结果结合菌株形态学及生理生化鉴定特征，确定该菌为芽孢杆菌Bacillus sp，将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2015247。

实施例3：芽孢杆菌CAMT22370液体发酵产葡萄糖氧化酶条件优化

本实验对筛选得到的芽孢杆菌CAMT22370的产酶条件进行了优化。具体而言，主要是对液体发酵产葡萄糖氧化酶的培养基和培养条件进行优化。除非特别说明，以下百分数为重量百分数。

1.碳源种类的筛选：在0.3%牛肉膏，0.5%氯化钠的基础上，以1%的添加量分别加入葡萄糖，乳糖，蔗糖，麦芽糖，山梨醇，甘露糖，制成只含某一碳源的培养基。发酵接种量为5%（体积比），转速150rpm，28℃恒温发酵培养72h，测定酶活力，以酶活力为判定标准，产酶量最大的碳源即为最佳发酵碳源，结果见图1。结果表明1%的麦芽糖为最佳碳源。

2.氮源种类的筛选：在1%麦芽糖，0.5%氯化钠的基础上，以0.5%的添加量分别加入多价蛋白胨，酵母膏，牛肉膏，䏡蛋白胨，胰蛋白胨，鱼蛋白胨，尿素，磷酸氢二铵及硝酸铵，制成只含单一氮源的培养基。发酵接种量为5%（体积比），转速150rpm，28℃恒温发酵培养72h，测定酶活力，以酶活力为判定标准，产酶量最大的氮源即为最佳发酵氮源，结果见图2。结果表明有机氮优于无机氮，有机氮之间对产酶影响不大，综合考虑以0.5%的蛋白胨为适宜氮源。

3.无机盐种类的筛选：在1%麦芽糖，0.5%蛋白胨的基础上，以0.05%的添加量分别加入CaCl₂、MgSO₄、KCl、MnCl₂、ZnCl₂、FeSO₄，制成只含某一无机盐的液体培养基。发酵接种量为5%（体积比），转速150rpm，28℃恒温发酵培养72h，测定酶活力，以酶活力为判定标准，产酶量最大的无机盐即为最佳无机盐，结果见图3。结果表明无机盐种类对产酶活力影响不大，综合考虑以添加0.05%的CaCl₂较为适宜。

4.摇瓶装液量的优化：在培养基组成确定的基础上，采用250mL锥形瓶进行摇瓶发酵，装液量分别为总体积的10%、20%、30%、40%、50%、60%，在35℃，150rpm条件下发酵72h，测定发酵液中葡萄糖氧化酶酶活，结果如图4。结果表明装液量为20%时酶活最高，随着装液量的增加，葡萄糖氧化酶酶活迅速降低。

5.接种量的优化：在250mL锥形瓶内装20%发酵培养基，分别接种2%、4%、6%、8%、10%的种子液，35℃，150rpm条件下发酵72h，测定发酵液中葡萄糖氧化酶酶活，结果如图5。结果表明6%的接种量较为适宜。

6.发酵温度的优化：将接种后的三角瓶分别置于22℃、25℃、28℃、31℃、34℃、37℃下，150rpm，装液量为20%，发酵培养72h。测其发酵液中葡萄糖氧化酶酶活，结果如图6。结果表明在31℃下发酵产酶活力较高。

7.发酵时间优化：将接种后装液量为20%，接种量6%的三角瓶分别置于31℃，150rpm，培养84h，每隔12h取样，测其葡萄糖氧化酶酶活，结果如图7。结果表明发酵60h时产酶活力达到最大，之后酶活有较小幅度下降。

8.转速的优化：将接种后装液量为20%，接种量6%的三角瓶分别置于31℃培养60h，转速分别设定为静置、50rpm、100rpm、150rpm、200rpm、250rpm，考察转速对产酶活力的影响，结果见图8。结果表明200rpm时产酶活力达到最大。

实施例4：芽孢杆菌CAMT22370的遗传稳定性研究

将芽孢杆菌CAMT22370连续传代培养，并测其酶活，以酶活力作为评价遗传稳定性的指标。结果如表1所示，传代8次，葡萄糖氧化酶活力保持在13U/mL左右，标准偏差为0.75，表明菌株有较好的遗传稳定性。

表1 芽孢杆菌CAMT22370的传代稳定性

实施例5：一种低温葡萄糖氧化酶的制备方法

按照以下方法制备低温葡萄糖氧化酶：

（1）配制发酵培养基：麦芽糖5g，酵母粉10g，氯化钙2.8g，氯化钠1g，吐温-801.5mL，去离子水1L，pH7.5。

（2）用常规方法活化芽孢杆菌CAMT22370，并制备种子液，其中种子培养基为：蛋白胨5g，酵母膏1g，硫酸亚铁0.1g，天然海水1L，pH7.6-7.8。

（3）往发酵培养基中接入6%（体积分数）的种子液，于28℃摇床培养60h，转速200rpm。

（4）收集发酵液，离心取上清，测定葡萄糖氧化酶的活力。

实施例6：芽孢杆菌CAMT22370发酵产葡萄糖氧化酶低温下的酶活力变化

取实施例5芽孢杆菌CAMT22370发酵所产葡萄糖氧化酶及条件相同下黑曲霉（A.niger）CICC3357产生的葡萄糖氧化酶，分别测定两种酶在0~10℃下的酶活力(n=3)，黑曲霉产酶培养基为常规马铃薯蔗糖培养基，培养条件同芽孢杆菌CAMT22370。结果如表2所示。

表2 芽孢杆菌CAMT22370与黑曲霉CICC3357低温下酶活力的比较（U/mL）

由表2可见，黑曲霉（A.niger）CICC3357产生的葡萄糖氧化酶在0~10℃低温下的酶活力基本不超过4U/mL，本发明产生的葡萄糖氧化酶在此低温下的酶活力超过5U/mL，相对于黑曲霉来源的葡萄糖氧化酶活力大幅提高。

实施例7：芽孢杆菌CAMT22370与黑曲霉CICC3357产葡萄糖氧化酶能力比较

采用与实施例6相同的方法产生葡萄糖氧化酶，分别测定芽孢杆菌CAMT22370和黑曲霉CICC3357在发酵24、36、48、60、72和84h时所产葡萄糖氧化酶的酶活力，并进行比较，结果如表3所示。

表3 芽孢杆菌CAMT22370与黑曲霉CICC3357产葡萄糖氧化酶活力变化（U/mL）

由表3可见，黑曲霉CICC3357产生的葡萄糖氧化酶在24~84h内产酶能力基本不超过11U/mL，本发明产生的葡萄糖氧化酶在此发酵时间内产酶能力可接近15U/mL，因此相对于黑曲霉来源的葡萄糖氧化酶而言，本发明产酶能力大幅提高。

实施例8：一种低温葡萄糖氧化酶的制备方法

按照以下方法制备低温葡萄糖氧化酶：

（3）往发酵培养基中接入7%（体积分数）的种子液，于31℃摇床培养60h，转速200rpm。

（4）收集发酵液，离心取上清，测定葡萄糖氧化酶的活力。

结果显示，发酵液中葡萄糖氧化酶在4℃低温下的活力为4.21U/mL，产量13.89 U/mL。

实施例9：制备改良型水产品生物保鲜剂

按照表4的配比（按重量计算）取各原料，其中葡萄糖氧化酶采用实施例7所得的低温葡萄糖氧化酶。将葡萄糖氧化酶放置于蒸馏水中，室温下搅拌至完全溶解，然后加入茶多酚搅拌至完全溶解，最后加入水溶性壳聚糖并搅拌至完全溶解，制备出含葡萄糖氧化酶、茶多酚、壳聚糖的三元复合生物保鲜剂。

表4 改良型水产品生物保鲜剂的组成

实施例10：改良型水产品生物保鲜剂的保鲜效果

将捕捞后大小均一、健康的南美白对虾采用充氧保活的方法保活运回实验室，暂养3天后剔除死亡、肢体残缺、变色等异常个体，用无菌水冲洗，放入碎冰中使虾体休克，将休克后的南美白对虾用上述实施例8中制备好的序号为1的复合保鲜剂溶液浸泡5min，然后捞出沥去虾体表面多余的保鲜剂，冷风吹干并装入无菌保鲜袋内，将装袋后的对虾放置于4℃冰箱内冷藏。同时以蒸馏水浸泡组作为阴性对照，以市售保鲜剂虾鲜宝作为阳性对照，其使用方法按照说明书进行。

采用色差计跟踪检测三组南美白对虾在冷藏期间的色泽变化，色差测定采用WSC-I 型微处理色差计，光圈直径30mm，聚光镜直径 30mm，用标准陶瓷板（X=91.295，Y=94.295，Z=107.045）作为工作标准，测量对虾表面在测样盒中的反射光，由三刺激值（X、Y、Z）计算出L值。其中L表示颜色透明度，L＝0为黑色，L＝100为白色，L值越小，表示黑变越重，以明度值L作为对虾黑变程度的指标，每组数值重复测三次取平均值，结果见图9。由图9可以看出，与对照相比，本复合保鲜剂可有效减缓对虾在冷藏期间的黑变进程。

菌落总数测定采用GB/T 4789.2-2010《食品微生物学检验总则》进行，将南美白对虾样品放入超声匀浆器充分匀浆，将匀浆液在超净工作台上称取1g加入9mL无菌水，搅拌均匀后成10^-1梯度菌悬液，依次操作制备系列稀释度菌悬液。移液枪移取1mL不同稀释度的菌悬液，用倾注法接种于营养琼脂无菌培养皿内，快速混匀后倒置于37℃恒温培养箱培养2-3天，然后按照标准程序进行菌落计数，比较不同处理对南美白对虾微生物繁殖的影响，结果见图10。

由图10可以看出，不同处理对细菌繁殖速度影响显著，蒸馏水浸泡组细菌快速繁殖，第4天超过7.0，失去商品价值，虾鲜宝组细菌繁殖速度较蒸馏水组明显下降，但仍处于缓慢上升状态，在冷藏至第5天时仍能较好保持微生物品质，与前两个处理不同，复合生物保鲜剂组细菌菌落总数一直处于低于5.0的较低状态，较好地抑制了微生物繁殖。

Claims

1.一种改良型水产品生物保鲜剂，其特征在于，按重量计算，其包括：葡萄糖氧化酶0.1-1％，茶多酚1～3％，水溶性壳聚糖1～3％，余量为水，其中所述葡萄糖氧化酶由保藏编号为CCTCC No：M2015247的芽孢杆菌发酵产生。

2.根据权利要求1所述的一种改良型水产品生物保鲜剂，其特征在于，按重量计算，其包括葡萄糖氧化酶0.3％，茶多酚1.5％，水溶性壳聚糖2％，其余为水。

3.根据权利要求1所述的一种改良型水产品生物保鲜剂，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶在0～10℃下活力大于4U/mL。

4.根据权利要求1所述的一种改良型水产品生物保鲜剂，其特征在于，所述发酵为液体发酵，所采用的发酵培养基为：麦芽糖5g，酵母粉10g，氯化钙2.8g，氯化钠1g，吐温-801.5mL，去离子水1L，pH7.5。

5.根据权利要求1所述的一种改良型水产品生物保鲜剂，其特征在于，发酵条件为：接种量2～10％体积，产酶温度22～37℃，发酵时间36～84h，转速0～250rpm。

6.根据权利要求1所述的一种改良型水产品生物保鲜剂，其特征在于：发酵条件为：接种量6～8％体积，产酶温度30～35℃，发酵时间40～72h，转速150～250rpm。