CN104984341A - 一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，利用近红外980nm激光照射该纳米制剂，借助其中上转换纳米粒的发射光触发光敏胶束释放药物，达到诊断治疗的目的，解决可见光穿透能力差，诊断治疗二次服药的问题，采用近红外光980nm激光照射深层组织，使C60产生活性氧，避免紫外光照射引起胶束破膜释药对组织造成的损伤，对肿瘤的治疗更加精准，安全，有效，本发明制备的复合纳米制剂可在近红外光980nm照射下，定时定位释药，同时能使C60在较深的组织内产生活性氧，协同化疗杀死肿瘤细胞，结合荧光成像和磁共振成像，实现诊断治疗一体化，避免二次服药的问题，原料来源丰富，成本低，使用效果好。
Description
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别是一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法。
背景技术：
C60，具有独特大小(直径约为0.71 nm)与中空球形32面体结构，其外表面分布着30个π电子组成的大π键，易于修饰，含有π电子的分子可通过π电子堆积吸附在C60表面。C60上连接一种造影剂后，表面仍存在π电子，对含π电子的化合物依然具有较强作用力。利用这种特性，可以构建一种近红外激光触发的复合纳米制剂。同时，C60在可见光照射下产生氧自由基、切割DNA的作用，表现出显著的细胞毒特性，且光毒性随照射时间和C60浓度增加而增强，表明C60 可作为光敏剂用于肿瘤治疗。
上转换纳米颗粒 (UCNPS) 是一类利用近红外光(通常为980nm) 激发、短波长发射的荧光材料，能克服有机染料光学稳定性差，半导体量子点易引发较强背景荧光的缺点而备受关注，将其应用在生物标记领域时，具有窄带发射，较大的反斯托克斯位移，较深的组织穿透深度和空间分辨率，对组织的损伤较小且不会产生自发荧光等优点，核壳式上转换荧光材料的荧光灵敏度更高。
超顺磁性氧化铁纳米颗粒作为一种新型磁共振T2场成像对比剂，可用于选择性增强网状内皮系统的磁共振成像，对肿瘤病变的成像效果好，能提高图像的清晰度，安全性高，在癌症的早期诊断中具有重要意义。100nm以下的磁性材料进入体内后可选择性浓集于靶器官并滞留一段时间，使成像组织的弛豫速率比背景部位改变更大，提高磁共振成像（MRI）诊断的效果。在C60表面通过化学修饰，连接上转换纳米荧光剂和超顺磁性氧化铁纳米粒，并荷载化疗药物DTX，可构建具有磁靶向性的光/磁双模态成像诊断治疗药物。
聚合物胶束的临界胶束浓度低，解离速度慢，能实现体内长循环，同时可包载难溶性药物并具有较高的载药量，常作为药物控释、靶向给药系统的载体使用。近年来，光敏胶束因其能在光照条件下，可控制药物的释放，提高治疗效果而被视为一种具有应用前景的新型药物转运系统，在医药领域得到越来越广泛的重视。然而，紫外光照射对组织的损伤，限制了光敏胶束在制剂中的应用，而C60虽可在可见光照射下产生活性氧，从而杀死肿瘤细胞，但因可见光的穿透性差而使其应用受限。
发明内容：
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明的目的就是提供一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，利用近红外980nm激光照射该纳米制剂，借助其中上转换纳米粒的发射光触发光敏胶束释放药物，达到诊断治疗的目的，解决可见光穿透能力差，诊断治疗二次服药的问题；
本发明解决的技术方案是采用近红外光980nm激光照射深层组织，使C60产生活性氧，避免紫外光照射引起胶束破膜释药对组织造成的损伤，对肿瘤的治疗更加精准，安全，有效。据此本发明解决的技术方案，包括以下步骤：
（1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，所述的四氧化三铁和C60的重量比为（1-10）:1，方法是：将50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声溶解，加入0.1-0.5ml溴代丙二酸二乙酯，15-25℃在N2保护下搅拌5h，过滤除去氢化钠，旋蒸除去甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物，将C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯中，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h（即甲苯相无色）；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60-COOH；
将C60-COOH50mg溶解于10ml由乙二醇和二缩醇体积比1:19构成的混合溶剂中，加入醋酸钠0.75g，三价铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液，200℃反应10h，冷至室温，反应产物依次用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60（C60-Fe3O4）（可直接采用专利申请号为 201310138295.4的“一种磁性水溶性富勒烯及其制备方法和应用”中的方法对C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4），所述的三价铁为氯化铁、溴化铁、高氯酸铁、硝酸铁、硫酸铁、硫化铁、磷酸铁中的任意一种；
（2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.10-0.50g的基质材料A，0.05-0.10g的敏化剂B和0.02-0.10g的激活剂C置于50ml三口烧瓶中，加5-10ml油酸，5-15ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，待其降至室温后，将含有0.10gNaOH，0.15g氟化物的甲醇溶液加入上述溶液中，20-50℃反应30分钟，除去甲醇，200-320℃反应1-5h，冷至室温后，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，最后沉淀重新分散于正己烷中，即得NaAF4:Ln3+上转换材料，以其为内核，按上述制备NaAF4:Ln3+方法再合成外层上转换材料，得核壳式上转换荧光材料；所述的基质材料A，为稀土氯化物YCl3·6H2O，GdCl3·6H2O或稀土氧化物Y2O3，Gd2O3的一种；所述的敏化剂B，为稀土氯化物YbCl3·6H2O或稀土氧化物Yb2O3的一种；所述的激活剂C，为ErCl3·6H2O或TmCl3·6H2O的一种；所述的氟化物，为NH4F、NaF、CaF2或MgF2的一种；
将0.02g 核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声溶解，35℃水浴，加体积浓度为15%的NH3·H2O 10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）；
（3）C60上负载光/磁成像对比剂：按重量比C60-Fe3O4:UCNPs-NH2=1g:（1-10）g，溶于10ml水中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)0.010g，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)0.01g，室温反应8-24h，收集反应产物，干燥，得C60上负载光/磁成像对比剂（C60/Fe3O4-UCNPs）；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸与甲醇的体积比为1:1，然后加入质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌8-48h，用质量浓度5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0. 8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将反应产物用乙酸乙酯萃取（得酯层），酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层（得水层），水层加入体积浓度为10%的盐酸溶液，调节pH=5，得沉淀，沉淀物真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇，加EDC和NHS，三者重量比为5:2:1，以二甲基甲酰胺为溶剂溶解，室温反应24h，成反应混合溶液，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，避光反应24h，反应产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
（5）制备近红外激光触发的复合纳米制剂：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，得沉淀，沉淀用pH值为7.2-7.4的PBS复溶，得复合纳米制剂（SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX）。
本发明制备的SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂可在近红外光980nm照射下，定时定位释药，同时能使C60在较深的组织内产生活性氧，协同化疗杀死肿瘤细胞，结合荧光成像和磁共振成像，实现诊断治疗一体化，避免二次服药的问题，原料来源丰富，成本低，使用效果好，有巨大的经济和社会效益。
具体实施方式：
以下结合实施例对本发明的具体实施方式进行详细说明。
本发明在具体实施中可由以下实施例给出：
实施例1
本发明在具体实施中，所述的一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，由以下步骤实现：
（1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法如下：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.1ml溴代丙二酸二乙酯，15℃N2保护下，搅拌5h，过滤除去氢化钠，旋蒸除去甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯中，加入380mg氢化钠，80℃，N2保护下，油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸，过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60-COOH；
称取C60-COOH50mg溶解于10mL由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19，加入醋酸钠0.75g，三氯化铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，反应产物分别用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得负载四氧化三铁的C60（C60-Fe3O4）；
（2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.10g的YCl3·6H2O，0.05g的YbCl3·6H2O和0.07g的ErCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加5ml油酸，5ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温，得混合溶液，将含有0.10gNaOH，0.15gNH4F的甲醇溶液加混合溶液中，在20℃反应30分钟，除去甲醇，200℃反应1h，冷至室温，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，得沉淀，沉淀用无水乙醇洗3次，再重新分散于正己烷中，得NaYF4:Yb,Er上转换材料；以NaYF4:Yb,Er上转换材料为内核，按上述制备NaYF4:Yb,Er方法再合成外层上转换材料，得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声使其完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%的NH3·H2O 10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
（3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和1gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，取EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应8h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸与甲醇的体积比为1:1，然后滴加质量浓度15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌8h，用质量浓度5%NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，得沉淀，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0. 8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层加入体积浓度为10%盐酸溶液，调节pH=5，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS混合在一起，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，避光反应24h，反应产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
（5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH为7.2-7.4的PBS复溶，得SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
实施例2
本发明在具体实施中，所述的一种近红外激光触发的复合纳米诊疗剂的制备方法，由以下步骤实现：
（1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声溶解，加入0.2ml溴代丙二酸二乙酯，20℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19（即乙二醇：二缩醇=1:19，V/V），加入醋酸钠0.75g，高氯酸铁0.27g，超声使其溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物分别用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60（C60-Fe3O4）；
（2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.25g的Y2O3，0.075g的Yb2O3和0.05g的TmCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加6ml油酸，6ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，待其降至室温后，将含有0.10gNaOH，0.15gNH4F的甲醇溶液加入上述溶液中，在25℃反应30分钟，除去甲醇，260℃反应2h，冷至室温，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷，即得NaYF4:Yb,Tm上转换材料；以NaYF4:Yb,Tm上转换材料为内核，按上述制备NaYF4:Yb,Tm方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声使其完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%NH3·H2O10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，得氨基化核壳式上转换荧光材料；
（3）C60上负载光/磁成像剂：将1gC60-Fe3O4和5gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应12h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌24h。再用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，得沉淀，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0. 8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层用体积浓度为10%的盐酸溶液，调节pH=5，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，避光反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
（5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH为7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
实施例3
本发明在具体实施中，所述的一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，由以下步骤实现：
（1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.3ml溴代丙二酸二乙酯，25℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60，即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19（即乙二醇：二缩醇=1:19，V/V），加入醋酸钠0.75g，硝酸铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60，即C60-Fe3O4；
（2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.50g的Gd2O3，0.10g的YbCl3·6H2O和0.07g的ErCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加10ml油酸，15ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温，成混合溶液，将含有0.10gNaOH，0.15g氟化铵的甲醇溶液加入混合溶液中，在25℃反应30分钟，除去甲醇，320℃反应5h，冷至室温后，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷溶液中，得NaGdF4:Yb,Er上转换材料，以NaGdF4:Yb,Er上转换材料为内核，按上述制备NaGdF4:Yb,Er方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声使其完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%NH3·H2O10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，真空干燥，得氨基化核壳式上转换荧光材料；
（3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和10gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应24h，磁铁收集产物，干燥，得C60上负载光/磁成像对比剂（C60/Fe3O4-UCNPs）；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌48h，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0. 8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层用体积浓度为10%的盐酸溶液调pH=5，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇。
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，避光反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
（5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH为 7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
实施例4
本发明在具体实施中，所述的一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，由以下步骤实现：
（1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.4ml溴代丙二酸二乙酯，22℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h（至甲苯相无色）；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19（即乙二醇：二缩醇=1:19，V/V），加入醋酸钠0.75g，硫酸铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，反应产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60，即C60-Fe3O4；
（2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.40g的GdCl3·6H2O，0.06g的Yb2O3和0.04g的TmCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加8ml油酸，11ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温，成混合溶液，将含有0.10gNaOH，0.15gMgF2的甲醇溶液加入混合溶液中，在20℃反应30分钟，除去甲醇，210℃反应3h，冷至室温，再加入丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，得沉淀，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷中，即得NaGdF4:Yb, Tm上转换材料；以NaGdF4:Yb, Tm上转换材料为内核，按上述制备NaGdF4:Yb, Tm方法再合成外层上转换材料，得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%的NH3·H2O10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，得沉淀，用无水乙醇和水分别洗3次，真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
（3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和3gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应10h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌18h。最后，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0. 8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层加入体积浓度为10%的盐酸溶液调pH=5，再沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，暗处（避光）反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，即得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
（5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH为7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
实施例5
本发明在具体实施中，所述的一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，由以下步骤实现：
（1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.4ml溴代丙二酸二乙酯，25℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60，即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19（即乙二醇：二缩醇=1:19，V/V），加入醋酸钠0.75g，硫化铁0.27g，超声溶解，然后将溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60（C60-Fe3O4）；
（2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.40g的GdCl3·6H2O，0.08g的Yb2O3和0.08g的TmCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加9ml油酸，12ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，待其降至室温后，将含有0.10gNaOH，0.15gCaF2的甲醇溶液加入上述溶液中，在25℃反应30分钟，除去甲醇，280℃反应3h，冷至室温后，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，沉淀重新分散于正己烷中，即得NaGdF4:Yb,Tm上转换材料，以NaGdF4:Yb,Tm上转换材料为内核，按上述制备NaGdF4:Yb,Tm方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声完全溶解，置于35℃水浴中，加入积浓度为15%的NH3·H2O搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
（3）C60上负载光/磁成像剂：将1gC60-Fe3O4和7gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应20h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌24h，最后，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0. 8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层用体积浓度为10%的盐酸溶液调pH=5，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，暗处（避光）反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，即得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
（5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH为7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
实施例6
本发明在具体实施中，所述的一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，由以下步骤实现：
（1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声完全溶解，加入0.5ml溴代丙二酸二乙酯，20℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将干燥的C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19（即乙二醇：二缩醇=1:19，V/V），加入醋酸钠0.75g，磷酸铁0.27g，超声溶解，然后将溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60（C60-Fe3O4）；
（2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.50g的Y2O3， 0.10g的YbCl3·6H2O和0.10g的ErCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加10ml油酸，15ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温时，将含有0.10gNaOH，0.15g氟化铵的甲醇溶液加入上述溶液中，在50℃反应30分钟，除去甲醇，320℃反应5h，冷至室温，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷，即得NaYF4: Yb,Er上转换材料，以NaYF4: Yb,Er上转换材料为内核，按上述制备NaYF4:Yb,Er方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%的NH3·H2O搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
（3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和10gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应24h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌48h，最后，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0. 8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层加入10%盐酸溶液调pH=5，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，避光反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，即得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
（5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH为 7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
由上述可以看出本发明涉及光敏壳聚糖胶束包裹C60荷载的光-磁双模态成像对比剂及难溶性抗癌药物多西他赛（DTX）的制备方法，可有效解决由紫外光照射触发纳米制剂释放对组织造成的损伤，改善C60在532nm可见光区产生活性氧但穿透性差的问题，克服肿瘤治疗和诊断二次服药的问题，能提高难溶性载体C60/Fe3O4-UCNPs和难溶性药物多西他赛的溶解性问题，具有磁靶向性，实现肿瘤的诊断治疗一次给药，实现所制备的近红外激光触发的复合纳米制剂在肿瘤治疗和诊断中的应用，并经试验取得了很好的有益技术效果，有关资料如下：
荷瘤A小鼠尾静脉注射SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂后，肿瘤部位观察到明显的黑化现象，4h时肿瘤部位有明显的黑化效应，与肿瘤组织的黑化程度相比，其他组织的黑化程度明显减弱，说明SNSCC60/Fe3O4- UCNPs/DTX复合纳米制剂，在磁场作用下可有效集中在肿瘤部位，体内磁共振成像表明，该制剂具有良好的负性增强效果，使T2场信号强度明显降低，可作为磁共振成像T2场的造影剂；荷瘤A小鼠尾静脉注射该制剂后，于4h，用近红外980nm激光照射，荧光强度较高，提示该复合纳米制剂可作为磁共振-荧光双模态成像对比剂使用。荷瘤小鼠每组6 只，分组如下：生理盐水组、DTX组、制剂组。每2天给药一次，一共给药7次，给药后第14天处死动物，剥离瘤块，称瘤重，根据以下公式计算肿瘤生长抑制率：肿瘤生长抑制率=(1－实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100%，以每组不同的抑瘤率比较体外抗肿瘤活性，结果见表1，说明制剂组具有更好的肿瘤治疗效果，综上所述，SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX是一种集治疗成像为一体的新型纳米制剂。
表1 各实施例体内肿瘤生长抑制率结果（%）
| 分 组 | 生理盐水组 | DTX组 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | 实施例6 |
| 抑制率 | 0% | 63% | 49% | 56% | 62% | 71% | 80% | 58% |
上述方法中的癌细胞A为：浅表性各种实体瘤，如：鼻咽癌，甲状腺癌，舌癌，喉癌，食道癌，乳腺癌，前列腺癌、恶性黑色素瘤中的一种。
本发明作为一种近红外激光触发的复合纳米制剂可以制成任意的药物制剂，比如：注射剂、注射用无菌粉针、分散剂、贴剂、凝胶剂、植入剂等。
总之本发明制备方法易操作，原料丰富，成本低，所制备的近红外激光触发的复合纳米制剂，能有效解决可见光穿透能力差，诊断治疗二次服药问题，采用近红外光980nm激光照射深层组织，使C60产生活性氧，避免紫外光照射引起胶束破膜释药对组织造成的损伤，对肿瘤的治疗更加精准，安全，有效，实现制备治疗肿瘤药物中的应用，经济和社会效益巨大。
Claims (9)
1.一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，所述的四氧化三铁和C60的重量比为（1-10）:1，方法是，将50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声溶解，加入0.1-0.5ml溴代丙二酸二乙酯，15-25℃在N2保护下搅拌5h，过滤除去氢化钠，旋蒸除去甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物，将C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯中，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60-COOH;
将C60-COOH50mg溶解于10ml由乙二醇和二缩醇体积比1:19构成的混合溶剂中，加入醋酸钠0.75g，三价铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液，200℃反应10h，冷至室温，反应产物依次用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60（C60-Fe3O4），所述的三价铁为氯化铁、溴化铁、高氯酸铁、硝酸铁、硫酸铁、硫化铁或磷酸铁的一种；
2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.10-0.50g的基质材料A，0.05-0.10g的敏化剂B和0.02-0.10g的激活剂C置于50ml三口烧瓶中，加5-10ml油酸，5-15ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，待其降至室温后，将含有0.10gNaOH，0.15g氟化物的甲醇溶液加入上述溶液中，20-50℃反应30分钟，除去甲醇，200-320℃反应1-5h，冷至室温后，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，最后沉淀重新分散于正己烷中，即得NaAF4:Ln3+上转换材料，以其为内核，按上述制备NaAF4:Ln3+方法再合成外层上转换材料，得核壳式上转换荧光材料；所述的基质材料A，为稀土氯化物YCl3·6H2O，GdCl3·6H2O或稀土氧化物Y2O3，Gd2O3的一种；所述的敏化剂B，为稀土氯化物YbCl3·6H2O或稀土氧化物Yb2O3的一种；所述的激活剂C，为ErCl3·6H2O或TmCl3·6H2O的一种；所述的氟化物，为NH4F、NaF、CaF2或MgF2的一种；
将0.02g 核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声溶解，35℃水浴，加体积浓度为15%的NH3·H2O 10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
3）C60上负载光/磁成像对比剂：按重量比C60-Fe3O4:UCNPs-NH2=1g:（1-10）g，溶于10ml水中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)0.010g，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)0.01g，室温反应8-24h，收集反应产物，干燥，得C60上负载光/磁成像对比剂（C60/Fe3O4-UCNPs）；
4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸与甲醇的体积比为1:1，然后加入质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌8-48h，用质量浓度5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0.8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将反应产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层水层加入体积浓度为10%的盐酸溶液，调节pH=5，得沉淀，沉淀物真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇，加EDC和NHS，三者重量比为5:2:1，以二甲基甲酰胺为溶剂溶解，室温反应24h，成反应混合溶液，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水中，逐滴加入至反应混合溶液，避光反应24h，反应产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
5）制备近红外激光触发的复合纳米制剂：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，得沉淀，沉淀用pH值为7.2-7.4的PBS复溶，得复合纳米制剂。
2.根据权利要求1所述的近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法如下：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.1ml溴代丙二酸二乙酯，15℃N2保护下，搅拌5h，过滤除去氢化钠，旋蒸除去甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯中，加入380mg氢化钠，80℃，N2保护下，油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸，过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60-COOH；
称取C60-COOH50mg溶解于10mL由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19，加入醋酸钠0.75g，三氯化铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，反应产物分别用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得负载四氧化三铁的C60（C60-Fe3O4）；
2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.10g的YCl3·6H2O，0.05g的YbCl3·6H2O和0.07g的ErCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加5ml油酸，5ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温，得混合溶液，将含有0.10gNaOH，0.15gNH4F的甲醇溶液加混合溶液中，在20℃反应30分钟，除去甲醇，200℃反应1h，冷至室温，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，得沉淀，沉淀用无水乙醇洗3次，再重新分散于正己烷中，得NaYF4:Yb,Er上转换材料；以NaYF4:Yb,Er上转换材料为内核，按上述制备NaYF4:Yb,Er方法再合成外层上转换材料，得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声使其完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%的NH3·H2O 10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和1gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，取EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应8h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸与甲醇的体积比为1:1，然后滴加质量浓度15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌8h，用质量浓度5%NaOH的溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，得沉淀，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0.8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层加入体积浓度为10%盐酸溶液，调节pH=5，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS混合在一起，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，得混合溶液，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶于20ml超纯水，逐滴加入混合溶液中，避光反应24h，反应产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH值为7.2-7.4的PBS复溶，得复合纳米制剂。
3.根据权利要求1所述的近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声溶解，加入0.2ml溴代丙二酸二乙酯，20℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19，加入醋酸钠0.75g，高氯酸铁0.27g，超声使其溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物分别用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60（C60-Fe3O4）；
2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.25g的Y2O3，0.075g的Yb2O3和0.05g的TmCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加6ml油酸，6ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，待其降至室温后，将含有0.10gNaOH，0.15gNH4F的甲醇溶液加入上述溶液中，在25℃反应30分钟，除去甲醇，260℃反应2h，冷至室温，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷，即得NaYF4:Yb,Tm上转换材料；以NaYF4:Yb,Tm上转换材料为内核，按上述制备NaYF4:Yb,Tm方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声使其完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%NH3·H2O10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，得氨基化核壳式上转换荧光材料；
3）C60上负载光/磁成像剂：将1gC60-Fe3O4和5gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应12h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌24h，再用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，得沉淀，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0.8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层用体积浓度为10%的盐酸溶液，调节pH=5，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，成混合溶液，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入混合溶液中，避光反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH为7.2-7.4的PBS复溶，即成复合纳米制剂。
4.根据权利要求1所述的近红外激光触发的复合纳米诊疗剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.3ml溴代丙二酸二乙酯，25℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60，即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19，加入醋酸钠0.75g，硝酸铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60，即C60-Fe3O4；
2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.50g的Gd2O3，0.10g的YbCl3·6H2O和0.07g的ErCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加10ml油酸，15ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温，成混合溶液，将含有0.10gNaOH，0.15g氟化铵的甲醇溶液加入混合溶液中，在25℃反应30分钟，除去甲醇，320℃反应5h，冷至室温后，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷溶液中，得NaGdF4:Yb,Er上转换材料，以NaGdF4:Yb,Er上转换材料为内核，按上述制备NaGdF4:Yb,Er方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声使其完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%NH3·H2O10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，真空干燥，得氨基化核壳式上转换荧光材料；
3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和10gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应24h，磁铁收集产物，干燥，得C60上负载光/磁成像对比剂（C60/Fe3O4-UCNPs）；
4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌48h，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0.8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层用体积浓度为10%的盐酸溶液调pH=5，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入上述溶液中，避光反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH 7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
5.根据权利要求1所述的近红外激光触发的复合纳米诊疗剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.4ml溴代丙二酸二乙酯，22℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19，加入醋酸钠0.75g，硫酸铁0.27g，超声溶解，然后将所得溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，反应产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60，即C60-Fe3O4；
2）氨基化核壳式上转换荧光材料的合成（UCNPs-NH2）：将0.40g的GdCl3·6H2O，0.06g的Yb2O3和0.04g的TmCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加8ml油酸，11ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温，成混合溶液，将含有0.10gNaOH，0.15gMgF2的甲醇溶液加入混合溶液中，在20℃反应30分钟，除去甲醇，210℃反应3h，冷至室温，再加入丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，得沉淀，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷中，即得NaGdF4:Yb, Tm上转换材料；以NaGdF4:Yb, Tm上转换材料为内核，按上述制备NaGdF4:Yb, Tm方法再合成外层上转换材料，得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%的NH3·H2O10ml搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，得沉淀，用无水乙醇和水分别洗3次，真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和3gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应10h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌18h，最后，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0.8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层加入体积浓度为10%的盐酸溶液调pH=5，再沉淀真空干燥，得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，成混合溶液，取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解，逐滴加入混合溶液中，暗处反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，即得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
5）近红外激光触发的复合纳米剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
6.根据权利要求1所述的近红外激光触发的复合纳米诊疗剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声使其完全溶解，加入0.4ml溴代丙二酸二乙酯，25℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将衍生物C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19，加入醋酸钠0.75g，硫化铁0.27g，超声溶解，然后将溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C60（C60-Fe3O4）；
2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.40g的GdCl3·6H2O，0.08g的Yb2O3和0.08g的TmCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加9ml油酸，12ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，待其降至室温后，将含有0.10gNaOH，0.15gCaF2的甲醇溶液加入上述溶液中，在25℃反应30分钟，除去甲醇，280℃反应3h，冷至室温后，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，沉淀重新分散于正己烷中，即得NaGdF4:Yb,Tm上转换材料，以NaGdF4:Yb,Tm上转换材料为内核，按上述制备NaGdF4:Yb,Tm方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声完全溶解，置于35℃水浴中，加入积浓度为15%的NH3·H2O搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
3）C60上负载光/磁成像剂：将1gC60-Fe3O4和7gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应20h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌24h，最后，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0.8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层用体积浓度为10%的盐酸溶液调pH=5，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，成混合溶液，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解于20ml超纯水，逐滴加入混合溶液中，暗处反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，即得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH7.2-7.4的PBS复溶，即成S复合纳米制剂。
7.根据权利要求1所述的近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将C60进行磁性修饰，形成C60-Fe3O4，方法是：50mg C60溶于50ml甲苯，加0.5g氢化钠，超声完全溶解，加入0.5ml溴代丙二酸二乙酯，20℃在N2保护下搅拌5h，过滤除氢化钠，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C60丙二酸酯衍生物；将干燥的C60丙二酸酯衍生物溶于30ml甲苯，加入380mg氢化钠，80℃在N2保护下油浴反应10h；除去甲苯，加20ml浓盐酸过滤，得滤饼，将滤饼溶于50ml甲醇中，过滤除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50℃真空干燥得丙二酸取代的C60即C60-COOH；
称取C60-COOH50mg充分溶解于10ml由乙二醇和二缩醇组成的混合溶剂中，乙二醇和二缩醇的体积比为1:19，加入醋酸钠0.75g，磷酸铁0.27g，超声溶解，然后将溶液转移至反应釜中，200℃反应10h，冷至室温，产物用无水乙醇洗涤3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三铁负载的C6（C60-Fe3O4）；
2）氨基化核壳式上转换荧光材料（UCNPs-NH2）的合成：将0.50g的Y2O3，0.10g的YbCl3·6H2O和0.10g的ErCl3·6H2O置于50ml三口烧瓶中，加10ml油酸，15ml十八碳烯，先升温到160℃，保持30分钟，降至室温时，将含有0.10gNaOH，0.15g氟化铵的甲醇溶液加入上述溶液中，在50℃反应30分钟，除去甲醇，320℃反应5h，冷至室温，加丙酮20ml，12000r/min离心10分钟，沉淀用无水乙醇洗3次，重新分散于正己烷，即得NaYF4:Yb,Er上转换材料，以NaYF4:Yb,Er上转换材料为内核，按上述制备NaYF4:Yb,Er方法再合成外层上转换材料，即得核壳式上转换荧光材料；
称取0.02g 上述核壳式上转换荧光材料，溶于70ml乙醇中，超声完全溶解，置于35℃水浴中，加体积浓度为15%的NH3·H2O搅拌10分钟，加正硅酸乙酯40μl，搅拌2h，然后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0.2ml，搅拌4h，12000r/min离心，用无水乙醇和水分别洗3次，沉淀真空干燥，即得氨基化核壳式上转换荧光材料；
3）C60上负载光/磁成像对比剂：将1gC60-Fe3O4和10gUCNPs-NH2，溶于10ml水中，再加入EDC0.010g，NHS0.01g，室温反应24h，磁铁收集产物，干燥，得C60/Fe3O4-UCNPs；
（4）光敏壳聚糖胶束的合成：1g壳聚糖溶于100ml醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液的体积比为1:1，然后滴加质量浓度为15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，搅拌48h，最后，用质量浓度为5%的NaOH溶液调pH至10，过滤，滤液用无水乙醇重结晶，离心，沉淀真空干燥，得N-琥珀酰壳聚糖；
称取1g邻硝基苯甲醇和0.8g丁二酸酐溶于10ml吡啶中，50℃水浴反应24h，将产物用乙酸乙酯萃取，酯层依次用水、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后弃去乙酸乙酯层，水层加入10%盐酸溶液调pH=5，沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰邻硝基苯甲醇；
称取0.2g N-琥珀酰邻硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比为5:2:1，用二甲基甲酰胺溶解，室温反应24h，成混合溶液，然后取0.8gN-琥珀酰壳聚糖溶解，逐滴加入混合溶液中，避光反应24h，产物用分子量为8000-12000的透析袋透析3天，冷冻干燥，即得光敏壳聚糖胶束（SNSC）；
5）近红外激光触发的复合纳米制剂的制备：取0.05gC60/Fe3O4-UCNPs，0.01g多西他赛溶于10ml超纯水中，超声2h，然后加入0.05gSNSC，室温搅拌12h，离心，沉淀用pH 7.2-7.4的PBS复溶，即成SNSCC60/Fe3O4-UCNPs/DTX复合纳米制剂。
8.权利要求1或2-7任一项所述的方法制备的近红外激光触发的复合纳米制剂作为肿瘤诊疗剂的应用。
9.权利要求1或2-7任一项所述方法制备的近红外激光触发的复合纳米制剂作为诊断治疗肿瘤注射剂、注射用无菌粉针、分散剂、贴剂、凝胶剂和植入剂的应用。
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