CN112274648A - 一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法 - Google Patents

一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，可有效解决对肿瘤多药耐药的治疗更加靶向精准、安全和高效的问题，解决的技术方案是，所述的杂化金属有机框架为具有类过氧化氢酶活性的金属有机框架（MOF），将胆固醇氧化酶修饰在金属有机框架（MOF）的表面，然后在金属有机框架（MOF）的内部物理负载抗肿瘤药物，形成纳米粒，最后在该纳米粒外面包裹凝胶外壳，得粒径为250‑300nm药物组合物，本发明制备方法简便，成本低，制备的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架凝胶外壳药物组合物可增强抗肿瘤效果，是肿瘤治疗药物制剂上的创新，经济和社会效益巨大。

Description

一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制 剂的制备方法
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架、小分子药物和凝胶外壳组合物的一种肿瘤靶向纳米制剂的制备方法。
背景技术
多药耐药性（multi-drug resistance，MDR）是肿瘤化疗失败、复发和转移的主要原因，也是困扰肿瘤治疗的一大难题。联合用药或使用P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）抑制剂等， “治标”不“治本”，治疗机制单一，毒副作用大，疗效不佳。纳米载体具有载药量大、易功能化修饰、控释、靶向和毒副作用低等优势。因此，根据耐药细胞膜和胞内的病理变化，制备一个可突破耐药细胞膜病理屏障，逐级高效递送药物的新型纳米制剂，可解决肿瘤多药耐药的问题，提高肿瘤治疗效果。
肿瘤耐药细胞膜上的胆固醇含量较高，是造成药物难以进入耐药细胞的屏障之一。胆固醇氧化酶能催化胆固醇的氧化反应，有效降低胆固醇含量，但其稳定性不佳，可回收与重复利用率低。近年来，发展较快的酶固定化技术能有效解决这一问题。而金属有机骨架（MOF）具有较高的药物装载量和酶-底物比，是固定胆固醇氧化酶的理想材料。采用具有类过氧化物酶活性的MOF发挥双重作用，既能作为胆固醇氧化酶和药物的载体，又能发挥其类过氧化物酶的催化作用，从而级联催化胆固醇。
此外，多数纳米载体对癌细胞不具有主动靶向能力。目前，常用于靶标治疗的为抗体、激酶抑制剂和凝集素糖类等外源性分子。这些外源性分子易引起免疫反应，从而导致严重的副作用。因此，内源性分子由于其良好的生物相容性，是近些年研究者关注的焦点。那么如何以内源性分子材料交联形成的水凝胶包裹载药MOF，高效靶向肿瘤细胞，逆转肿瘤多药耐药的新制剂，至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，可有效解决对肿瘤多药耐药的治疗更加靶向精准、安全和高效的问题。
本发明解决的技术方案是，一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，所述的杂化金属有机框架为具有类过氧化氢酶活性的金属有机框架（MOF），将胆固醇氧化酶修饰在金属有机框架（MOF）的表面，然后在金属有机框架（MOF）的内部物理负载抗肿瘤药物，形成纳米粒，最后在该纳米粒外面包裹凝胶外壳，得粒径为250-300nm药物组合物，具体制备方法包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取10-40mg锆基无机盐，加入5-25mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取10-75mg的有机配体，加入5-25mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入酸性试剂0.5-10mL，再超声反应5-15分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在100-150℃下反应12-24小时，得固体产物；固体产物用有机溶剂在10000r/min离心洗涤3-5次，于40-80℃真空干燥箱中干燥12-36小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
称取10-25mg锆基金属有机框架，加入1-5mL的有机溶剂，超声5-10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取5-15mg金属盐，加入1-5mL的有机溶剂，超声5-10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在20-40℃下搅拌4-12小时，然后用有机溶剂在10000r/min离心洗涤3-5次，于40-80℃真空干燥箱中干燥12-36小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
所述的锆基无机盐为四氯化锆或八水氧氯化锆中的任一种；
所述的有机配体为2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸、1,2,3-苯三甲酸、均苯三酸、2-氨基对苯二甲酸或对苯二甲酸的任一种；
所述的酸性试剂为乙酸或甲酸中的任一种或两种任意质量比的混合物；
所述的有机溶剂为四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、无水乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、丙酮中的任一种或两种任意质量比的混合物；
所述的金属盐为二氯化铜、硫酸铜、二氯化锰、硫酸镁、三氯化铁、硫酸亚铁、氯化锌中的任一种；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取2-10mg干燥的杂化金属有机框架，加入2-10mL缓冲溶液，超声5-15分钟，得到溶液A；称取1-5mg胆固醇氧化酶，加入2-10mL缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取5-30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、5-20mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液或B溶液中，并放置摇床上于30-50℃活化10-20分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应8-12h，再以10000r/min离心5-10分钟，用磷酸盐缓冲溶液洗涤3-5次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
所述缓冲溶液为pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )或pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L)中的任一种；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:1-20分散于pH7.4磷酸盐缓冲液(0.01mol/L)中，室温避光搅拌反应18-30小时，将反应混合物以10000r/min离心5-15分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )洗涤3-5次，于25℃真空干燥箱中干燥12-36小时，得小分子化疗药物的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
所述的小分子化疗药物为阿霉素、地西他滨、紫杉醇、多西紫杉醇、顺铂或盐酸拓扑替康中的一种；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取10-30mg凝胶纳米粒子，然后依次称取20-50mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、15-30mg N-羟基丁二酰亚胺于5-15mL缓冲溶液中溶解，于35-40℃摇床反应10-20分钟，得溶液C；称取10-30mg交联剂，于2-10mL缓冲液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于35-40℃摇床中过夜反应8-12h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
所述的凝胶纳米粒子为透明质酸、硫酸软骨素或柠檬酸中的一种；
所述交联剂为胱胺二盐酸盐、壳聚糖或多巴胺中的一种；
所述缓冲溶液为pH7.4 磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )、pH5.0 乙酸盐缓冲液(0.2mol/L )、1%乙酸溶液、pH5.0 柠檬酸钠缓冲液(0.1mol/L )或pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )中的一种；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:1-1:10混合，溶于2-10mL超纯水或无水乙醇中，室温搅拌过夜反应8-12h，超声5-10分钟，然后在10000r/min离心5-15分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂；
所述的纳米制剂的载药量为10%～45%。
本发明制备方法简便，成本低，制备的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架凝胶外壳药物组合物可增强抗肿瘤效果，是肿瘤治疗药物制剂上的创新，经济和社会效益巨大。
附图说明
图1为本发明的方法制备的纳米制剂用于抗肿瘤相对肿瘤体积变化曲线图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中可由以下实施例给出
实施例1
本发明一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取16mg锆基无机盐四氯化锆，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取50mg的有机配体2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸，加入5-25mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入酸性试剂乙酸0.9mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在120℃下反应24小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇在10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的有机溶剂四氢呋喃，超声5分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取7mg金属盐二氯化铜，加入3mL的有机溶剂四氢呋喃，超声5分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在25℃下搅拌6小时，然后依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇在10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入3mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )，超声10分钟，得到溶液A；称取1.5mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取18mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、12mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反10h，再以10000r/min离心5分钟，用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物地西他滨与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:4分散于pH7.4磷酸盐缓冲液(0.01mol/L)中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )洗涤3次，于25℃真空干燥箱中干燥16小时，得小分子化疗药物地西他滨的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取20mg凝胶纳米粒子透明质酸，然后依次称取40mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、35mg N-羟基丁二酰亚胺于溶解于5mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L)中，于37℃摇床反应15分钟，得溶液C；称取20mg交联剂胱胺二盐酸盐，于5mL pH7.4磷酸盐缓冲液(0.01mol/L)中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应10h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物地西他滨的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:5混合，溶于5mL超纯水或无水乙醇中，室温搅拌过夜反应10h，超声5分钟，然后在10000r/min离心10分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
实施例2
本发明一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取20mg锆基无机盐八水氧氯化锆，加入8mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取62mg的有机配体2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸，加入12mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入酸性试剂乙酸1.1mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在120℃下反应20小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃在10000r/min离心洗涤4次，于55℃真空干燥箱中干燥18小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的四氢呋喃，超声5分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取10mg金属盐，加入4mL的四氢呋喃，超声5分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在30℃下搅拌8小时，然后依次用N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃在10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取3mg干燥的杂化金属有机框架，加入3mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )，超声10分钟，得到溶液A；称取1mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取18mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、12mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入B溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应9h，再以10000r/min离心5分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:3分散于pH7.4 磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥18小时，得小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取20mg凝胶纳米粒子硫酸软骨素，然后依次称取30mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、20mg N-羟基丁二酰亚胺于8mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )中溶解，于37℃摇床反应15分钟，得溶液C；称取20mg交联剂胱胺二盐酸盐，于5mL pH7.4磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应9h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:2混合，溶于10mL超纯水中，室温搅拌过夜反应9h，超声5分钟，然后在10000r/min离心10分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
实施例3
本发明一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取20mg锆基无机盐四氯化锆，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取42mg的有机配体均苯三酸，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入甲酸9mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在140℃下反应12小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的无水乙醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取12mg金属盐三氯化铁，加入4mL的无水乙醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在25℃下搅拌10小时，然后依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取4mg干燥的杂化金属有机框架，加入2mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )，超声10分钟，得到溶液A；称取2.5mg胆固醇氧化酶，加入4mL pH7.4磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L)，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取20mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、15mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液或B溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应11h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L)洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物紫杉醇与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:15分散于pH7.4 磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液(0.01mol/L )洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥18小时，得小分子化疗药物紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取15mg凝胶纳米粒子透明质酸，然后依次称取30mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、25mg N-羟基丁二酰亚胺于12mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L)中溶解，于37℃摇床反应10分钟，得溶液C；称取15mg交联剂多巴胺，于9mLpH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应11h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:1混合，溶于6mL超纯水中，室温搅拌过夜反应11h，超声5分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
实施例4
本发明一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取20mg锆基无机盐八水氧氯化锆，加入6mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取25mg的有机配体均苯三酸，加入6mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入乙酸9mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在135℃下反应14小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇在10000r/min离心洗涤4次，于70℃真空干燥箱中干燥13小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取15mg锆基金属有机框架，加入3mL的甲醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取8mg金属盐二氯化锰，加入4mL的甲醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在30℃下搅拌7小时，然后用甲醇在10000r/min离心洗涤5次，于70℃真空干燥箱中干燥13小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取4mg干燥的杂化金属有机框架，加入2mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )，超声10分钟，得到溶液A；称取1mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取15mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、10mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应10h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物盐酸拓扑替康与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:3分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )中，室温避光搅拌反应20小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥24小时，得小分子化疗药物盐酸拓扑替康的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取15mg凝胶纳米粒子柠檬酸，然后依次称取25mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、20mg N-羟基丁二酰亚胺于10mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )中溶解，于37℃摇床反应10分钟，得溶液C；称取12mg交联剂壳聚糖，于10mL 1%乙酸溶液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应10h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物盐酸拓扑替康的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:6混合，溶于10mL超纯水中，室温搅拌过夜反应10h，超声5分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
实施例5
本发明一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取30mg锆基无机盐八水氧氯化锆，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取10mg的有机配体2-氨基对苯二甲酸，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入乙酸1mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在110℃下反应24小时，得固体产物；固体产物用无水乙醇在10000r/min离心洗涤3次，于45℃真空干燥箱中干燥36小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取18mg锆基金属有机框架，加入3mL的无水乙醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取12mg金属盐氯化锌，加入4mL的无水乙醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在20℃下搅拌11小时，然后用甲醇在10000r/min离心洗涤5次，于45℃真空干燥箱中干燥36小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入3mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )，超声10分钟，得到溶液A；称取2mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取15mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、10mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入B溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应11h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物多西紫杉醇与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:5分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )中，室温避光搅拌反应16小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥20小时，得小分子化疗药物多西紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取10mg凝胶纳米粒子透明质酸，然后依次称取40mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、25mg N-羟基丁二酰亚胺于15mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )中溶解，于38℃摇床反应12分钟，得溶液C；称取10mg交联剂多巴胺，于10mLpH5.0 乙酸盐缓冲液(0.2mol/L )中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于38℃摇床中过夜反应11h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物多西紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:7混合，溶于5mL超纯水中，室温搅拌过夜反应11h，超声5分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
实施例6
本发明一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取40mg锆基无机盐四氯化锆，加入20mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取15mg的有机配体对苯二甲酸，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入甲酸8mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在120℃下反应12小时，得固体产物；固体产物用丙酮在10000r/min离心洗涤3次，于75℃真空干燥箱中干燥12小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入4mL的丙酮，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取10mg金属盐三氯化铁，加入2mL的丙酮，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在35℃下搅拌5小时，然后用丙酮在10000r/min离心洗涤5次，于75℃真空干燥箱中干燥12小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入2mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )，超声10分钟，得到溶液A；称取3mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取15mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、10mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应12h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物顺铂与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:2分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )中，室温避光搅拌反应18小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥24小时，得小分子化疗药物顺铂的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取20mg凝胶纳米粒子硫酸软骨素，然后依次称取30mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、20mg N-羟基丁二酰亚胺于10mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )中溶解，于37℃摇床反应15分钟，得溶液C；称取20mg交联剂胱胺二盐酸盐，于5mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应12h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物顺铂的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:3混合，溶于10mL无水乙醇中，室温搅拌过夜反应12h，超声10分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
实施例7
本发明一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取30mg锆基无机盐四氯化锆，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取20mg的有机配体1,2,3-苯三甲酸，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入乙酸2mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在140℃下反应18小时，得固体产物；固体产物用丙酮在10000r/min离心洗涤3次，于45℃真空干燥箱中干燥35小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的无水乙醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取10mg金属盐二氯化铜，加入2mL的无水乙醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在20℃下搅拌10小时，然后用丙酮在10000r/min离心洗涤5次，于45℃真空干燥箱中干燥35小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入4mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )，超声10分钟，得到溶液A；称取1mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取12mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、8mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入B溶液中，并放置摇床上于37℃活化10分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应8h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（简称为COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:17分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )洗涤4次，于25℃真空干燥箱中干燥35小时，得小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取12mg凝胶纳米粒子硫酸软骨素，然后依次称取20mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、15mg N-羟基丁二酰亚胺于5mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液(0.1mol/L )中溶解，于35℃摇床反应20分钟，得溶液C；称取10mg交联剂壳聚糖，于10mLpH7.4 磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L )中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于38℃摇床中过夜反应9h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:8混合，溶于10mL无水乙醇中，室温搅拌过夜反应9h，超声10分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为本发明的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
本发明方法新颖独特，易操作，成本低，制备的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂具有抗肿瘤活性，可有效用于制备抗肿瘤药物，经试验，所制得的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法稳定可靠，胆固醇氧化酶与杂化有机金属骨架发生级联催化反应，降低胆固醇，增大小分子化疗药的抗肿瘤效果。与传统化疗相比具有高效、毒副作用小的优势，经反复测试，实施例给出方法制备的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂其载药量为10-45%，并经实验，抗肿瘤效果非常好，有关实验资料如下（以实施例2为例）：
购买裸鼠(雌性，3～4周龄)45只，随机分为3组，每组15只，设生理盐水组、盐酸阿霉素组、本发明制剂组，右上肢皮下接种MCF-7/ADR人乳腺癌耐药细胞，取肿瘤体积≥100mm3的小鼠。
尾静脉给药，实验期间，正常供给小鼠饮食与饮水，观察并记录小鼠的生长状态。每两天给药一次，共7次。每次给药之前，对各组小鼠进行称重，统计每组小鼠的重量。同时用电子游标卡尺测量肿瘤的长径A和短径B，取平均值，按公式V（mm3）=1/2×A×B2计算肿瘤体积。结果显示生理盐水组、盐酸阿霉素组＆本发明制剂组的抑瘤率分别为5.09％，20.17％，85.34％，说明该肿瘤特异靶向纳米制剂可显著增强抗肿瘤效果。
采用组织学和病理学常用的苏木精-伊红染色法（H＆E染色），给药结束后颈椎脱臼处死全部荷瘤小鼠，并剥瘤组织，以生理盐水清洗，固定24小时后用流动的自来水冲洗，固定、脱水、包埋、切片、贴片、烤片、染色、封片。于显微镜下拍摄肿瘤切片的照片，反复测量3次，取平均值，绘制曲线图（见图1），分析其病理学变化，结果表明，本发明制剂有效的抑制了肿瘤生长和增殖，，从曲线图中可以清楚的看出，空白对照组、盐酸阿霉素组在15天的试验中，随着时间的增加，肿瘤面积15天后不但没有增加，反而有缩小之趋势，而空白对照组、盐酸阿霉素组的肿瘤面积总体呈增大状态，显然本申请的制剂具有很好的抑制或抗肿瘤增长效果，在对实施例2试验的基础上，又对其他实施例进行了同样的试验，均取得了相同和相近似的结果，这里不一一列举。
实验表明，本发明制备方法简单，成本低，比同类药物可降低成本40%以上，制备的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架凝胶外壳药物组合物可增强抗肿瘤效果，抗肿瘤效果提高3倍以上，可高达85%以上，是抗肿瘤药物上的创新，有巨大的经济和社会效益。

Claims (8)

1.一种胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述的杂化金属有机框架为具有类过氧化氢酶活性的金属有机框架（MOF），将胆固醇氧化酶修饰在金属有机框架（MOF）的表面，然后在金属有机框架（MOF）的内部物理负载抗肿瘤药物，形成纳米粒，最后在该纳米粒外面包裹凝胶外壳，得粒径为250-300nm药物组合物，具体制备方法包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取10-40mg锆基无机盐，加入5-25mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取10-75mg的有机配体，加入5-25mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入酸性试剂0.5-10mL，再超声反应5-15分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在100-150℃下反应12-24小时，得固体产物；固体产物用有机溶剂在10000r/min离心洗涤3-5次，于40-80℃真空干燥箱中干燥12-36小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
称取10-25mg锆基金属有机框架，加入1-5mL的有机溶剂，超声5-10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取5-15mg金属盐，加入1-5mL的有机溶剂，超声5-10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在20-40℃下搅拌4-12小时，然后用有机溶剂在10000r/min离心洗涤3-5次，于40-80℃真空干燥箱中干燥12-36小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
所述的锆基无机盐为四氯化锆或八水氧氯化锆中的任一种；
所述的有机配体为2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸、1,2,3-苯三甲酸、均苯三酸、2-氨基对苯二甲酸或对苯二甲酸的任一种；
所述的酸性试剂为乙酸或甲酸中的任一种或两种任意质量比的混合物；
所述的有机溶剂为四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、无水乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、丙酮中的任一种或两种任意质量比的混合物；
所述的金属盐为二氯化铜、硫酸铜、二氯化锰、硫酸镁、三氯化铁、硫酸亚铁、氯化锌中的任一种；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取2-10mg干燥的杂化金属有机框架，加入2-10mL缓冲溶液，超声5-15分钟，得到溶液A；称取1-5mg胆固醇氧化酶，加入2-10mL缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取5-30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、5-20mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液或B溶液中，并放置摇床上于30-50℃活化10-20分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应8-12h，再以10000r/min离心5-10分钟，用磷酸盐缓冲溶液洗涤3-5次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
所述缓冲溶液为pH7.4 磷酸盐缓冲溶液或pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中的任一种；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:1-20分散于pH7.4磷酸盐缓冲液中，室温避光搅拌反应18-30小时，将反应混合物以10000r/min离心5-15分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液洗涤3-5次，于25℃真空干燥箱中干燥12-36小时，得小分子化疗药物的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
所述的小分子化疗药物为阿霉素、地西他滨、紫杉醇、多西紫杉醇、顺铂或盐酸拓扑替康中的一种；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取10-30mg凝胶纳米粒子，然后依次称取20-50mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、15-30mg N-羟基丁二酰亚胺于5-15mL缓冲溶液中溶解，于35-40℃摇床反应10-20分钟，得溶液C；称取10-30mg交联剂，于2-10mL缓冲液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于35-40℃摇床中过夜反应8-12h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
所述的凝胶纳米粒子为透明质酸、硫酸软骨素或柠檬酸中的一种；
所述交联剂为胱胺二盐酸盐、壳聚糖或多巴胺中的一种；
所述缓冲溶液为pH7.4 磷酸盐缓冲液、pH5.0 乙酸盐缓冲液、1%乙酸溶液、pH5.0 柠檬酸钠缓冲液或pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中的一种；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:1-1:10混合，溶于2-10mL超纯水或无水乙醇中，室温搅拌过夜反应8-12h，超声5-10分钟，然后在10000r/min离心5-15分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
2.根据权利要求1所述的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取16mg锆基无机盐四氯化锆，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取50mg的有机配体2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸，加入5-25mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入酸性试剂乙酸0.9mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在120℃下反应24小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇在10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的有机溶剂四氢呋喃，超声5分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取7mg金属盐二氯化铜，加入3mL的有机溶剂四氢呋喃，超声5分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在25℃下搅拌6小时，然后依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇在10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入3mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液，超声10分钟，得到溶液A；称取1.5mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取18mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、12mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反10h，再以10000r/min离心5分钟，用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物地西他滨与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:4分散于pH7.4磷酸盐缓冲液中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液洗涤3次，于25℃真空干燥箱中干燥16小时，得小分子化疗药物地西他滨的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取20mg凝胶纳米粒子透明质酸，然后依次称取40mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、35mg N-羟基丁二酰亚胺于溶解于5mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中，于37℃摇床反应15分钟，得溶液C；称取20mg交联剂胱胺二盐酸盐，于5mL pH7.4磷酸盐缓冲液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应10h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物地西他滨的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:5混合，溶于5mL超纯水或无水乙醇中，室温搅拌过夜反应10h，超声5分钟，然后在10000r/min离心10分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
3.根据权利要求1所述的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取20mg锆基无机盐八水氧氯化锆，加入8mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取62mg的有机配体2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸，加入12mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入酸性试剂乙酸1.1mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在120℃下反应20小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃在10000r/min离心洗涤4次，于55℃真空干燥箱中干燥18小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的四氢呋喃，超声5分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取10mg金属盐，加入4mL的四氢呋喃，超声5分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在30℃下搅拌8小时，然后依次用N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃在10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取3mg干燥的杂化金属有机框架，加入3mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液，超声10分钟，得到溶液A；称取1mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取18mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、12mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入B溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应9h，再以10000r/min离心5分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:3分散于pH7.4 磷酸盐缓冲液中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥18小时，得小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取20mg凝胶纳米粒子硫酸软骨素，然后依次称取30mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、20mg N-羟基丁二酰亚胺于8mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中溶解，于37℃摇床反应15分钟，得溶液C；称取20mg交联剂胱胺二盐酸盐，于5mL pH7.4磷酸盐缓冲液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应9h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:2混合，溶于10mL超纯水中，室温搅拌过夜反应9h，超声5分钟，然后在10000r/min离心10分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
4.根据权利要求1所述的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取20mg锆基无机盐四氯化锆，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取42mg的有机配体均苯三酸，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入甲酸9mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在140℃下反应12小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的无水乙醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取12mg金属盐三氯化铁，加入4mL的无水乙醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在25℃下搅拌10小时，然后依次用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇10000r/min离心洗涤4次，于60℃真空干燥箱中干燥24小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取4mg干燥的杂化金属有机框架，加入2mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液，超声10分钟，得到溶液A；称取2.5mg胆固醇氧化酶，加入4mL pH7.4磷酸盐缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取20mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、15mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液或B溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应11h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物紫杉醇与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:15分散于pH7.4 磷酸盐缓冲液中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲液洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥18小时，得小分子化疗药物紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取15mg凝胶纳米粒子透明质酸，然后依次称取30mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、25mg N-羟基丁二酰亚胺于12mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中溶解，于37℃摇床反应10分钟，得溶液C；称取15mg交联剂多巴胺，于9mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应11h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:1混合，溶于6mL超纯水中，室温搅拌过夜反应11h，超声5分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
5.根据权利要求1所述的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取20mg锆基无机盐八水氧氯化锆，加入6mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取25mg的有机配体均苯三酸，加入6mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入乙酸9mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在135℃下反应14小时，得固体产物；固体产物依次用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇在10000r/min离心洗涤4次，于70℃真空干燥箱中干燥13小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取15mg锆基金属有机框架，加入3mL的甲醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取8mg金属盐二氯化锰，加入4mL的甲醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在30℃下搅拌7小时，然后用甲醇在10000r/min离心洗涤5次，于70℃真空干燥箱中干燥13小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取4mg干燥的杂化金属有机框架，加入2mL的pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液，超声10分钟，得到溶液A；称取1mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取15mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、10mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应10h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物盐酸拓扑替康与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:3分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液中，室温避光搅拌反应20小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥24小时，得小分子化疗药物盐酸拓扑替康的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取15mg凝胶纳米粒子柠檬酸，然后依次称取25mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、20mg N-羟基丁二酰亚胺于10mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中溶解，于37℃摇床反应10分钟，得溶液C；称取12mg交联剂壳聚糖，于10mL 1%乙酸溶液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应10h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物盐酸拓扑替康的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:6混合，溶于10mL超纯水中，室温搅拌过夜反应10h，超声5分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
6.根据权利要求1所述的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取30mg锆基无机盐八水氧氯化锆，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取10mg的有机配体2-氨基对苯二甲酸，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入乙酸1mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在110℃下反应24小时，得固体产物；固体产物用无水乙醇在10000r/min离心洗涤3次，于45℃真空干燥箱中干燥36小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取18mg锆基金属有机框架，加入3mL的无水乙醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取12mg金属盐氯化锌，加入4mL的无水乙醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在20℃下搅拌11小时，然后用甲醇在10000r/min离心洗涤5次，于45℃真空干燥箱中干燥36小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入3mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液，超声10分钟，得到溶液A；称取2mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取15mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、10mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入B溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应11h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物多西紫杉醇与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:5分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液中，室温避光搅拌反应16小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥20小时，得小分子化疗药物多西紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取10mg凝胶纳米粒子透明质酸，然后依次称取40mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、25mg N-羟基丁二酰亚胺于15mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中溶解，于38℃摇床反应12分钟，得溶液C；称取10mg交联剂多巴胺，于10mL pH5.0 乙酸盐缓冲液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于38℃摇床中过夜反应11h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物多西紫杉醇的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:7混合，溶于5mL超纯水中，室温搅拌过夜反应11h，超声5分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
7.根据权利要求1所述的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取40mg锆基无机盐四氯化锆，加入20mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取15mg的有机配体对苯二甲酸，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入甲酸8mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在120℃下反应12小时，得固体产物；固体产物用丙酮在10000r/min离心洗涤3次，于75℃真空干燥箱中干燥12小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入4mL的丙酮，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取10mg金属盐三氯化铁，加入2mL的丙酮，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在35℃下搅拌5小时，然后用丙酮在10000r/min离心洗涤5次，于75℃真空干燥箱中干燥12小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入2mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液，超声10分钟，得到溶液A；称取3mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取15mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、10mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入A溶液中，并放置摇床上于37℃活化15分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应12h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物顺铂与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:2分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液中，室温避光搅拌反应18小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤5次，于25℃真空干燥箱中干燥24小时，得小分子化疗药物顺铂的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取20mg凝胶纳米粒子硫酸软骨素，然后依次称取30mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、20mg N-羟基丁二酰亚胺于10mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中溶解，于37℃摇床反应15分钟，得溶液C；称取20mg交联剂胱胺二盐酸盐，于5mL pH7.4磷酸盐缓冲溶液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于37℃摇床中过夜反应12h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物顺铂的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:3混合，溶于10mL无水乙醇中，室温搅拌过夜反应12h，超声10分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
8.根据权利要求1所述的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）杂化金属有机框架的合成：
取30mg锆基无机盐四氯化锆，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第一溶液；再称取20mg的有机配体1,2,3-苯三甲酸，加入9mL N,N-二甲基甲酰胺，超声10分钟，得第二溶液；将第一溶液和第二溶液混合，然后加入乙酸2mL，再超声反应10分钟，将反应混合物转移到高压反应釜中，在140℃下反应18小时，得固体产物；固体产物用丙酮在10000r/min离心洗涤3次，于45℃真空干燥箱中干燥35小时，得粉末状的锆基金属有机框架；
再称取20mg锆基金属有机框架，加入2mL的无水乙醇，超声10分钟，得锆基金属有机框架溶液；再称取10mg金属盐二氯化铜，加入2mL的无水乙醇，超声10分钟，得金属盐溶液；将锆基金属有机框架溶液和金属盐溶液混合，在20℃下搅拌10小时，然后用丙酮在10000r/min离心洗涤5次，于45℃真空干燥箱中干燥35小时，得粉末状的杂化金属有机框架；
（2）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
称取5mg干燥的杂化金属有机框架，加入4mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液，超声10分钟，得到溶液A；称取1mg胆固醇氧化酶，加入2mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液，超声使溶解完全，得到溶液B；依次称取12mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、8mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），加入B溶液中，并放置摇床上于37℃活化10分钟；之后将A、B两种溶液混合，继续放置于摇床中过夜反应8h，再以10000r/min离心10分钟，用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，得胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）；
（3）载药胆固胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素与胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架纳米粒（COD-MOF）以质量比1:17分散于pH7.4 磷酸盐缓冲溶液中，室温避光搅拌反应24小时，将反应混合物以10000r/min离心10分钟，得沉淀物，沉淀物用pH7.4 磷酸盐缓冲溶液洗涤4次，于25℃真空干燥箱中干燥35小时，得小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架；
（4）凝胶纳米粒的制备：
称取12mg凝胶纳米粒子硫酸软骨素，然后依次称取20mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、15mg N-羟基丁二酰亚胺于5mL pH5.0 2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲溶液中溶解，于35℃摇床反应20分钟，得溶液C；称取10mg交联剂壳聚糖，于10mL pH7.4 磷酸盐缓冲溶液中溶解，得到溶液D；将溶液C、溶液D混合均匀，置于38℃摇床中过夜反应9h，然后经透析，冻干得凝胶纳米粒；
（5）胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂的制备：
将1mg小分子化疗药物阿霉素的胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架与步骤（4）制备的凝胶纳米粒以质量比1:8混合，溶于10mL无水乙醇中，室温搅拌过夜反应9h，超声10分钟，然后在10000r/min离心15分钟，所得沉淀即为胆固醇氧化酶修饰的杂化金属有机框架肿瘤靶向纳米制剂。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114163481A (zh) * 2021-12-06 2022-03-11 郑州大学 一种含铂类药物纳米囊泡及其制备方法与应用
CN114409914A (zh) * 2022-01-12 2022-04-29 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） MOF-On-MOF架构的铁基金属有机框架复合材料的制备方法及所得产品和应用
CN114539545A (zh) * 2022-01-13 2022-05-27 中国科学院宁波材料技术与工程研究所 一种双金属-有机框架材料及其制备方法和应用
CN114712304A (zh) * 2022-04-18 2022-07-08 深圳大学 海藻酸钠基复合水凝胶的制备方法
CN116083411A (zh) * 2023-03-23 2023-05-09 北京理工大学 一种非均相光-酶偶联催化剂、制备方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1255864A (zh) * 1997-03-11 2000-06-07 G·D·瑟尔公司 使用回肠胆汁酸传输抑制苯并硫杂环庚三烯和HMGCo-A还原酶抑制剂的组合疗法
CN104984341A (zh) * 2015-07-22 2015-10-21 郑州大学 一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法
WO2017049411A1 (en) * 2015-09-23 2017-03-30 University Health Network Methods, compounds and compositions for modulating blood brain barrier integrity and re-myelination

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1255864A (zh) * 1997-03-11 2000-06-07 G·D·瑟尔公司 使用回肠胆汁酸传输抑制苯并硫杂环庚三烯和HMGCo-A还原酶抑制剂的组合疗法
CN104984341A (zh) * 2015-07-22 2015-10-21 郑州大学 一种近红外激光触发的复合纳米制剂的制备方法
WO2017049411A1 (en) * 2015-09-23 2017-03-30 University Health Network Methods, compounds and compositions for modulating blood brain barrier integrity and re-myelination

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIN DU ET AL: "Nanozyme‑natural enzymes cascade catalyze cholesterol consumption and reverse cancer multidrug resistance", 《JOURNAL OF NANOBIOTECHNOLOGY》 *
JAVAD HASSANZADEH ET AL: "Encapsulated cholesterol oxidase in metal-organic framework andbiomimetic Ag nanocluster decorated MoS2nanosheets for sensitivedetection of cholesterol", 《SENSORS AND ACTUATORS B: CHEMICAL》 *
陈敦富: "胆固醇氧化酶最新研究进展", 《生物技术》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114163481A (zh) * 2021-12-06 2022-03-11 郑州大学 一种含铂类药物纳米囊泡及其制备方法与应用
CN114163481B (zh) * 2021-12-06 2023-06-23 郑州大学 一种含铂类药物纳米囊泡及其制备方法与应用
CN114409914A (zh) * 2022-01-12 2022-04-29 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） MOF-On-MOF架构的铁基金属有机框架复合材料的制备方法及所得产品和应用
CN114539545A (zh) * 2022-01-13 2022-05-27 中国科学院宁波材料技术与工程研究所 一种双金属-有机框架材料及其制备方法和应用
CN114712304A (zh) * 2022-04-18 2022-07-08 深圳大学 海藻酸钠基复合水凝胶的制备方法
CN114712304B (zh) * 2022-04-18 2024-03-12 深圳大学 海藻酸钠基复合水凝胶的制备方法
CN116083411A (zh) * 2023-03-23 2023-05-09 北京理工大学 一种非均相光-酶偶联催化剂、制备方法及其应用
CN116083411B (zh) * 2023-03-23 2023-06-27 北京理工大学 一种非均相光-酶偶联催化剂、制备方法及其应用

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