CN104957044B - 毛钩藤的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种毛钩藤的快速繁殖方法，包括以下步骤：步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体；步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养；步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，培养直至生根；步骤四、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养。本发明通过建立毛钩藤的快速繁殖方法，具有繁殖率高、繁殖速率快等优点，便于在生产上大面积推广种植，满足了中药资源开发的迫切需要。
Description
技术领域
本发明涉及植物栽培领域，更具体地说，本发明涉及一种毛钩藤的快速繁殖方法。
背景技术
毛钩藤为茜草科、金鸡纳亚科钩藤属植物，别名倒吊风藤和台湾风藤，属藤本植物具攀援习性，嫩枝纤细，圆柱形或略具四棱角，被硬毛。毛钩藤是我国的特有种，主要分布在广东、广西、贵州、福建及中国台湾等地，生于山谷林下溪畔成灌丛中。钩藤属植物的根和带钩的茎枝中钩藤碱含量高，具有降血压、镇静、抗血小板聚集和抗血栓形成的作用，还有一定抗癌作用。毛钩藤多为野生资源，而人工栽培多是野外引种(其中包括种子播种，分株及扦插)，但其出芽率、成活率低，繁殖系数低，因此规模也小。随着市场需求量越来越大，现有的野生资源采集量逐渐增大而栽培资源同样跟不上采集需求。利用组织培养快繁技术，可以有效快速的增加其繁殖系数，不仅能满足市场对毛钩藤药材的需求，又有利于毛钩藤野生资源的保护。目前钩藤属中其他种的组织快繁已有报道，而以毛钩藤枝条作为繁殖材料的组织培养与快速繁殖尚未见报道。本发明通过建毛藤组织培养快速繁殖方法，具有繁殖率高、繁殖速率快等优点，便于在生产上大面积推广种植，满足了中药资源开发的迫切需要。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题和缺陷，并提供后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种毛钩藤的快速繁殖方法，首先利用针对毛钩藤的第一培养基和第二培养基培养毛钩藤的无菌外植体至生根，加快毛 钩藤苗的生根速率。
本发明还有一个目的是提供一种适用于毛钩藤苗的基质，保证毛钩藤苗减少虫害的侵蚀，提高毛钩藤的存活率。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种毛钩藤的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体；
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，诱导腋芽形成；所述第一培养基包括white培养基、1～1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂；
步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，培养直至生根；其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方；
所述固态培养基包括white培养基、0.1～0.2mg/L的珍珠粉、0.1～0.5mg/L的激动素KT、0.7～0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1～0.5g/L的活性炭；
所述液态培养基包括B5培养基、0.6～0.9mg/L的竹醋液和0.2～0.4mg/L的火龙果提取液；所述火龙果提取液的制作方法为将火龙果果皮破碎，用火龙果果皮质量10倍的50％的乙醇水溶液浸泡7小时，之后在55℃下萃取8小时，过滤，取滤液，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.05～0.06MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述火龙果提取液。
优选的是，在进行所述步骤三之前，还将所得的带腋芽的毛钩藤的无菌外植体进行脉冲电击处理：将带腋芽的毛钩藤的无菌外植体下方的1/3处浸泡于导电液中，控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理3-5s；所述导电液为质量分数为25％的硝酸钾溶液。
优选的是，所述步骤三中，从无菌外植体的下方开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
优选的是，所述培养盒包括：
盒体，其为中空圆柱状；
隔板，其为圆形，所述隔板的直径略小于所述盒体的直径，所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内，使所述盒体形成上部空间和下部空间，所述隔板平行于所述盒体的底部，所述隔板上间隔设置有2～4个使所述无菌外植体通过的第一通孔；
其中，所述盒体的底部设置有排水管，所述排水管上设有第一控制阀，所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管，所述进水管上设有第二控制阀，所述固态培养基设置于所述上部空间中，所述液态培养基置于所述下部空间中。
优选的是，还包括：步骤四、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10∶1∶10∶2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；
所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4∶1∶2∶5构成。
优选的是，所述步骤一中，选取毛钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，摘除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2-4cm长的带腋芽的嫩茎段作为毛钩藤的无菌外植体。
优选的是，所述步骤一中，对毛钩藤的外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，再用无菌水润洗所述外植体三遍，之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1％的竹醋液中25-30min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体20-30s。
优选的是，毛钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时，调节pH为5.7，控制光照强度为1800lx，每天的光照时间为10小时；毛钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养时，调节所述固态培养基的pH为5.7，调节所述液态培养基的pH为5.3，控制光照强度为2000lx，每天的光照时间为12小时。
本发明至少包括以下有益效果：
1、毛钩藤苗的外植体消毒采用的是由大蒜素和乙醇混合而成的消毒液，相较于一般消毒液和洗洁精，本发明的消毒液提取的是大蒜中的有效成分，在保证毛钩藤苗的外植体杀菌消毒的同时，可以提高毛钩藤苗的外植体在组 织培养时的成活率，成活率可提高22％左右。用消毒后的茶水对带节嫩茎端冲洗，使外植体上附着一层茶水膜，茶水中的茶多酚对植物的病原真菌和分生孢子的萌发有极强的抑制作用，防止外植体的生长感染真菌，提高外植体的存活率。
2、毛钩藤的快速培养首先通过组织培养，培养毛钩藤的外植体生根，之后再移栽，采用本发明的培养基配合毛钩藤的生长，大大加快了毛钩藤的生长速度，其中毛钩藤无菌外植体腋芽的形成仅需一周左右、在得到有腋芽的无菌外植体后植入第二培养基中培养7-10天就可得到毛钩藤的生根苗。比普通的培养基培养不仅提高了存活率，同时还大大缩短了培育时间。
3、第一培养基和第二培养基中添加有竹醋液，竹醋液能有效地促进毛钩藤无菌外植体腋芽的形成，缩短腋芽形成的时间，明显改善毛钩藤的组织细胞分裂，生长，使毛钩藤的根分化出来，同时促进形成层细胞分裂，长大，使茎逐渐加粗。同时竹醋液有利于提高毛钩藤对光的吸收，促进毛钩藤的光合作用，促进毛钩藤苗的营养吸收。
4、在生根阶段，采用固态培养基和液态培养基的搭配，液态培养基中采用的是竹醋液和火龙果提取液，保证了毛钩藤快速繁殖的同时，不会出现畸形化，使组织培养出的毛钩藤苗和自然生长的毛钩藤苗生长顺序相同，不会出现异化现象，在后期的移栽存活率也很高。
5、整个组织培养中所用的激素相较于一般的组织培养所用的激素要少，由于在激素环境下会导致根原基维管束的排列紊乱，有时会导致根无法顺利的萌发，将根原基维管束浸泡于液态培养基中，将上面一部分设置于固态培养基中，保证了毛钩藤生根所需的环境，同时提高了毛钩藤根的萌发率。
6、针对固液两用培养基，设计了一种培养盒，培养盒通过隔板分隔成两个空间，上面一个空间可以搁置固态培养基，下面一个空间可放置液态培养基，隔板上设置有2～4个第一通孔，用于放置毛钩藤的无菌外植体，同时也可保证固液两个培养基之间一定的连通，设置进水管和排水管，可在不更换固态培养及且不移出毛钩藤苗的情况下定期更换液态培养基，隔板也可从盒体中抽出。
7、基质的表面铺设聚乙烯醇缓释膜，可缓慢释放毛钩藤所需的营养物质， 不需人工管理，保证了毛钩藤生长所需。
8、鱼骨层中的营养物质是水溶性物质，全是毛钩藤生长所需，且很容易被毛钩藤吸收，减少了难降解的有机化学物质的使用，从而减少了对环境的污染。
9、在毛钩藤外植体分化出腋芽后进行脉冲电击处理，控制时间为3-5s，频率为380mHz，能促进毛钩藤的外植体生根，控制合适的时间和频率不会造成毛钩藤苗的畸形化，至畸率低于0.5％。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明所述培养盒的结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
一种毛钩藤的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体，选取毛钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2cm长的带腋芽的嫩茎段作为毛钩藤的无菌外植体。对毛钩藤的外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，再用无菌水润洗所述外植体三遍，之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1％的竹醋液中25min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体20s。
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为24℃，控制光照强度为1800lx，每天的光照时间为10小时，诱导腋芽形成。所述第一培养基包括white培养基、1mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂，调节pH为5.7。
步骤三、将所得的带腋芽的毛钩藤的无菌外植体进行脉冲电击处理：将带腋芽的毛钩藤的无菌外植体下方的1/3处浸泡于导电液中，控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理3s；所述导电液为质量分数为25％的硝酸钾溶液。
步骤四、将步骤三培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为24℃，控制光照强度为2000lx，每天的光照时间为12小时，培养直至生根。其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于无菌培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下方开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
所述固态培养基包括white培养基、0.1mg/L的珍珠粉、0.1mg/L的激动素KT、0.7mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1g/L的活性炭，调节所述固态培养基的pH为5.7。
所述液态培养基包括B5培养基、0.6mg/L的竹醋液和0.2mg/L的火龙果提取液，调节所述液态培养基的pH为5.3。所述火龙果提取液的制作方法为将火龙果果皮破碎，用火龙果果皮质量10倍的50％的乙醇水溶液浸泡7小时，之后在55℃下萃取8小时，过滤，取滤液，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.05MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述火龙果提取液。
步骤五、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10∶1∶10∶2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；
所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4∶1∶2∶5构成。
如图1所示，其中，所述培养盒1包括：
盒体11，其为中空圆柱状；
隔板12，其为圆形，所述隔板12的直径略小于所述盒体11的直径，所述隔板12可拆卸的固定于所述盒体11内，使所述盒体11形成上部空间和下部空间，所述隔板12平行于所述盒体的底部，所述隔板12上间隔设置有2～4 个使所述无菌外植体通过的第一通孔121；
其中，所述盒体的底部设置有排水管14，所述排水管14上设有第一控制阀，所述盒体11的下部空间的侧壁设置有进水管13，所述进水管13上设有第二控制阀，所述固态培养基设置于所述上部空间中，所述液态培养基置于所述下部空间中。
实施例2
一种毛钩藤的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体，选取毛钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成4cm长的带腋芽的嫩茎段作为毛钩藤的无菌外植体。对毛钩藤的外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，再用无菌水润洗所述外植体三遍，之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1％的竹醋液中30min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体30s。
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为26℃，控制光照强度为18001x，每天的光照时间为10小时，诱导腋芽形成。所述第一培养基包括white培养基、1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂，调节pH为5.7。
步骤三、将所得的带腋芽的毛钩藤的无菌外植体进行脉冲电击处理：将带腋芽的毛钩藤的无菌外植体下方的1/3处浸泡于导电液中，控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理5s；所述导电液为质量分数为25％的硝酸钾溶液。
步骤四、将步骤三培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为26℃，控制光照强度为2000lx，每天的光照时间为12小时，培养直至生根。其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于无菌培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下方开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
所述固态培养基包括white培养基、0.2mg/L的珍珠粉、0.5mg/L的激动素KT、0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.5g/L的活性炭，调节所述固态培养基的pH为5.7。
所述液态培养基包括B5培养基、0.9mg/L的竹醋液和0.4mg/L的火龙果提取液，调节所述液态培养基的pH为5.3。所述火龙果提取液的制作方法为将火龙果果皮破碎，用火龙果果皮质量10倍的50％的乙醇水溶液浸泡7小时，之后在55℃下萃取8小时，过滤，取滤液，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.06MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述火龙果提取液。
步骤五、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10∶1∶10∶2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；
所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4∶1∶2∶5构成。
其中，所述培养盒包括：
盒体，其为中空圆柱状；
隔板，其为圆形，所述隔板的直径略小于所述盒体的直径，所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内，使所述盒体形成上部空间和下部空间，所述隔板平行于所述盒体的底部，所述隔板上间隔设置有2～4个使所述无菌外植体通过的第一通孔；
其中，所述盒体的底部设置有排水管，所述排水管上设有第一控制阀，所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管，所述进水管上设有第二控制阀，所述固态培养基设置于所述上部空间中，所述液态培养基置于所述下部空间中。
实施例3
一种毛钩藤的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体，选取毛钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成3cm长的带 腋芽的嫩茎段作为毛钩藤的无菌外植体。对毛钩藤的外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，再用无菌水润洗所述外植体三遍，之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1％的竹醋液中27min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体26s。
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为25℃，控制光照强度为1800lx，每天的光照时间为10小时，诱导腋芽形成。所述第一培养基包括white培养基、1.2mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂，调节pH为5.7。
步骤三、将所得的带腋芽的毛钩藤的无菌外植体进行脉冲电击处理：将带腋芽的毛钩藤的无菌外植体下方的1/3处浸泡于导电液中，控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理4s；所述导电液为质量分数为25％的硝酸钾溶液。
步骤四、将步骤三培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为25℃，控制光照强度为2000lx，每天的光照时间为12小时，培养直至生根。其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下方开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
所述固态培养基包括white培养基、0.15mg/L的珍珠粉、0.4mg/L的激动素KT、0.75mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.4g/L的活性炭，调节所述固态培养基的pH为5.7。
所述液态培养基包括B5培养基、0.8mg/L的竹醋液和0.3mg/L的火龙果提取液，调节所述液态培养基的pH为5.3。所述火龙果提取液的制作方法为将火龙果果皮破碎，用火龙果果皮质量10倍的50％的乙醇水溶液浸泡7小时，之后在55℃下萃取8小时，过滤，取滤液，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.055MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述火龙果提取液。
步骤五、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面 铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10∶1∶10∶2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；
所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4∶1∶2∶5构成。
其中，所述培养盒包括：
盒体，其为中空圆柱状；
隔板，其为圆形，所述隔板的直径略小于所述盒体的直径，所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内，使所述盒体形成上部空间和下部空间，所述隔板平行于所述盒体的底部，所述隔板上间隔设置有2～4个使所述无菌外植体通过的第一通孔；
其中，所述盒体的底部设置有排水管，所述排水管上设有第一控制阀，所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管，所述进水管上设有第二控制阀，所述固态培养基设置于所述上部空间中，所述液态培养基置于所述下部空间中。
实验对比
对毛钩藤的带节嫩茎段采用以下三种方法消毒后，利用本发明的栽培方法栽培，栽培调节相同，每种消毒方法分别处理50株毛钩藤的带节嫩茎段，其存活率见表1，其中大蒜素消毒采用的是用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min；大蒜素和茶叶水的配合消毒采用的是用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述带节嫩茎段20s；洗洁精及升汞消毒采用的是用质量分数为1％洗洁精水溶液浸泡5min，自来水冲洗15min，无菌水润洗两次，然后在超净工作台用体积分数为75％的酒精浸泡30s，再用添加了2滴吐温-20的150mL质量浓度为0.1％升汞消毒5min，无菌水冲洗3次。
表1采用本发明对毛钩藤的带节嫩茎段消毒对其存活率的影响
对比例2，普通培养基的成分为0.3mg/L的NAA，编号为1，第二培养基的成分与实施例3中的成分相同，标号为2。分别用普通培养基和第二培养基对100株毛钩藤外植体进行组织培养。
表2第二培养基和普通培养基对毛钩藤苗生根率的影响
| 培养基 | 生根株数/株 | 生根率/％ |
| 1 | 54 | 54 |
| 2 | 88 | 88 |
对比例3，序号1的条件为控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理4s。序号2的条件为不施加任何脉冲电击。分别对100株毛钩藤带腋芽的外植体进行试验，之后均在相同条件下用第二培养基培育。
表3脉冲电击对毛钩藤带腋芽的外植体的生根率的影响
| 电击条件 | 生根株数/株 | 生根率/％ |
| 1 | 72 | 72 |
| 2 | 88 | 88 |
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (3)
1.一种毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体，选取毛钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，摘除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2-4cm长的带腋芽的嫩茎段作为毛钩藤的无菌外植体；
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，诱导腋芽形成；所述第一培养基由white培养基、1～1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂组成；毛钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时，调节pH为5.7，控制光照强度为1800lx，每天的光照时间为10小时；
步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，培养直至生根；其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方；从无菌外植体的下方开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中；毛钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养时，调节所述固态培养基的pH为5.7，调节所述液态培养基的pH为5.3，控制光照强度为2000lx，每天的光照时间为12小时；
所述固态培养基由white培养基、0.1～0.2mg/L的珍珠粉、0.1～0.5mg/L的激动素KT、0.7～0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1～0.5g/L的活性炭组成；
所述液态培养基由B5培养基、0.6～0.9mg/L的竹醋液和0.2～0.4mg/L的火龙果提取液组成；所述火龙果提取液的制作方法为将火龙果果皮破碎，用火龙果果皮质量10倍的50％的乙醇水溶液浸泡7小时，之后在55℃下萃取8小时，过滤，取滤液，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.05～0.06MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述火龙果提取液；
在进行所述步骤三之前，还将所得的带腋芽的毛钩藤的无菌外植体进行脉冲电击处理：将带腋芽的毛钩藤的无菌外植体下方的1/3处浸泡于导电液中，控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理3-5s；所述导电液为质量分数为25％的硝酸钾溶液；
步骤四、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10:1:10:2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；
所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4:1:2:5构成。
2.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，所述培养盒包括：
盒体，其为中空圆柱状；
隔板，其为圆形，所述隔板的直径略小于所述盒体的直径，所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内，使所述盒体形成上部空间和下部空间，所述隔板平行于所述盒体的底部，所述隔板上间隔设置有2～4个使所述无菌外植体通过的第一通孔；
其中，所述盒体的底部设置有排水管，所述排水管上设有第一控制阀，所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管，所述进水管上设有第二控制阀，所述固态培养基设置于所述上部空间中，所述液态培养基置于所述下部空间中。
3.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中，对毛钩藤的外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用质量比为1:100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，再用无菌水润洗所述外植体三遍，之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1％的竹醋液中25-30min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体20-30s。
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Application publication date: 20151007 Assignee: Guangxi Jiansen Forestry Development Co.,Ltd. Assignor: GUANGXI BOTANICAL GARDEN OF MEDICINAL PLANTS Contract record no.: X2023980045534 Denomination of invention: The Rapid Propagation Method of Uncaria barbata Granted publication date: 20170315 License type: Common License Record date: 20231106 |
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