CN104642140B - 一种锐药竹的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种锐药竹的快速繁殖方法，属于植物培养技术领域。其包括以下步骤：1）获取无菌材料；2）诱导培养；3）增殖培养；4）生根培养；5）移栽。本发明的有益效果是：采用本发明所提供的锐药竹的快速繁殖方法，增殖周期短，繁殖系数高，移栽成活率高，减少了组培快繁的环节，节约了生产成本，且植株的根系粗壮、新梢长势好、茎秆粗壮，移栽后的成活率高达98%以上。
Description
技术领域
本发明属于植物培养技术领域，具体涉及一种锐药竹的快速繁殖方法。
背景技术
锐药竹(Oxytenanthera braunii)，我国不产，是非洲竹区最优良的丛生竹种，中型，分布于热带非洲的坦桑尼亚。竹材可做建筑材料、制浆造纸，纸浆得率高，其新竹砍梢的伤流液可用于酿酒。竹液经发酵后制成美味饮料。
目前，国内外鲜有对锐药竹快速繁殖方法的研究。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种锐药竹的快速繁殖方法的技术方案。
所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
1）获取无菌材料
将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自来水下流动冲洗30min 后于超净工作台上，用75%的乙醇浸泡20-30s，再用0.l%的升汞溶液浸泡8-15min后，用无菌水冲洗6-8次，并吸干表面水分；
2）诱导培养
将步骤1）得到的培养材料，接种于诱导培养基中进行诱导培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养7天，所述的诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有NAA 0.02-0.1mg/L、6-BA 0.05-0.2 mg/L、中药多糖1-5mg/L，所述的中药多糖由柴胡、大黄、茯苓、枸杞和丹参构成的中药组合物中提取得到；
3）增殖培养
将步骤2）得到的外植体转接于增殖培养基中进行增殖培养，先进行暗处理1 周，再在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养12-15天，所述的增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有占MS培养基总重量0.1-0.5%的竹醋液和0.2-0.6%的黄秋葵汁；
4）生根培养
将步骤3）得到的外植体转入生根培养基中进行生根培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养15-20天，所述的生根培养基是以以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有6-BA 0.02-0.1 mg/L、IBA0.02-0.1 mg/L和中药多糖1-5mg/L，所述的中药多糖由熟地黄、葛根、银杏叶、黄芩、枳壳、薄荷、甘草构成的中药组合物中提取得到；
5）移栽
将已生根的植株去除，移栽至由黄心土、珍珠岩和泥炭土构成的混合基质上。
所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤2）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按柴胡20～40份、大黄10～30份、茯苓10～30份、枸杞5～20份和丹参5～20份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10 分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤2）中所述的诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有NAA 0.04-0.0.08mg/L、6-BA 0.08-0.12mg/L、中药多糖2-3mg/L。
所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤3）中增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有占MS培养基总重量0.2-0.3%的竹醋液和0.4-0.5%的黄秋葵汁。
所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤4）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按熟地黄20～40份、葛根20～40份、银杏叶10～30份、黄芩10～30份、枳壳5～10份、薄荷5～10份、甘草5～10份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10 分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤4）中生根培养基是以以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有6-BA 0.04-0.0.06 mg/L、IBA0.04-0.06 mg/L和中药多糖2-3mg/L。
所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤5）中黄心土、珍珠岩和泥炭土按重量比1:2:3混合。
本发明的有益效果是：采用本发明所提供的锐药竹的快速繁殖方法，增殖周期短，繁殖系数高，移栽成活率高，减少了组培快繁的环节，节约了生产成本，且植株的根系粗壮、新梢长势好、茎秆粗壮，移栽后的成活率高达98%以上。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步说明本发明。
实施例1
1）获取无菌材料
将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自来水下流动冲洗30min 后于超净工作台上，用75%的乙醇浸泡25s，再用0.l%的升汞溶液浸泡10min后，用无菌水冲洗7次，并吸干表面水分；
2）诱导培养
将步骤1）得到的培养材料，接种于诱导培养基中进行诱导培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养7天，所述的诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有NAA 0.06mg/L、6-BA 1.2 mg/L、中药多糖3mg/L，所述的中药多糖由柴胡、大黄、茯苓、枸杞和丹参构成的中药组合物中提取得到；
3）增殖培养
将步骤2）得到的外植体转接于增殖培养基中进行增殖培养，先进行暗处理1 周，再在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养14天，所述的增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有占MS培养基总重量0.3%的竹醋液和0.4%的黄秋葵汁，其中黄秋葵汁由新鲜黄秋葵磨碎榨汁得到；
4）生根培养
将步骤3）得到的外植体转入生根培养基中进行生根培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养18天，所述的生根培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有6-BA0.04 mg/L、IBA0.06mg/L和中药多糖3mg/L，所述的中药多糖由熟地黄、葛根、银杏叶、黄芩、枳壳、薄荷、甘草构成的中药组合物中提取得到；
5）移栽
将已生根的植株去除，移栽至由黄心土、珍珠岩和泥炭土按1:2:3构成的混合基质上，移栽后的成活率为99%。
该实施例1的步骤2）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按柴胡30份、大黄20份、茯苓20份、枸杞10份和丹参10份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
该实施例1的步骤4）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按熟地黄30份、葛根30份、银杏叶20份、黄芩20份、枳壳8份、薄荷8份、甘草8份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10 分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
实施例2
1）获取无菌材料
将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自来水下流动冲洗30min 后于超净工作台上，用75%的乙醇浸泡20s，再用0.l%的升汞溶液浸泡8min后，用无菌水冲洗8次，并吸干表面水分；
2）诱导培养
将步骤1）得到的培养材料，接种于诱导培养基中进行诱导培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养7天，所述的诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有NAA 0.02mg/L、6-BA 0.05mg/L、中药多糖1mg/L，所述的中药多糖由柴胡、大黄、茯苓、枸杞和丹参构成的中药组合物中提取得到；
3）增殖培养
将步骤2）得到的外植体转接于增殖培养基中进行增殖培养，先进行暗处理1 周，再在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养12天，所述的增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有占MS培养基总重量0.1%的竹醋液和0.2%的黄秋葵汁，其中黄秋葵汁由新鲜黄秋葵磨碎榨汁得到；
4）生根培养
将步骤3）得到的外植体转入生根培养基中进行生根培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养15天，所述的生根培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有6-BA0.04 mg/L、IBA0.06mg/L和中药多糖3mg/L，所述的中药多糖由熟地黄、葛根、银杏叶、黄芩、枳壳、薄荷、甘草构成的中药组合物中提取得到；
5）移栽
将已生根的植株去除，移栽至由黄心土、珍珠岩和泥炭土按1:2:3构成的混合基质上，移栽后的成活率为98%。
该实施例1的步骤2）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按柴胡20份、大黄10份、茯苓10份、枸杞5份和丹参5份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10 分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
该实施例1的步骤4）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按熟地黄20份、葛根20份、银杏叶10份、黄芩10份、枳壳5份、薄荷5份、甘草5份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
实施例3
1）获取无菌材料
将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自来水下流动冲洗30min 后于超净工作台上，用75%的乙醇浸泡30s，再用0.l%的升汞溶液浸泡15min后，用无菌水冲洗6次，并吸干表面水分；
2）诱导培养
将步骤1）得到的培养材料，接种于诱导培养基中进行诱导培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养7天，所述的诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有NAA0.1mg/L、6-BA 0.2mg/L、中药多糖5mg/L，所述的中药多糖由柴胡、大黄、茯苓、枸杞和丹参构成的中药组合物中提取得到；
3）增殖培养
将步骤2）得到的外植体转接于增殖培养基中进行增殖培养，先进行暗处理1 周，再在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养15天，所述的增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有占MS培养基总重量0.5%的竹醋液和0.6%的黄秋葵汁，其中黄秋葵汁由新鲜黄秋葵捣碎得到；
4）生根培养
将步骤3）得到的外植体转入生根培养基中进行生根培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养20天，所述的生根培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加有6-BA0.1mg/L、IBA0.1mg/L和中药多糖5mg/L，所述的中药多糖由熟地黄，葛根，银杏叶、黄芩、枳壳、薄荷、甘草构成的中药组合物中提取得到；
5）移栽
将已生根的植株去除，移栽至由黄心土、珍珠岩和泥炭土按1:2:3构成的混合基质上，移栽后的成活率为99%。
该实施例1的步骤2）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按柴胡40份、大黄30份、茯苓30份、枸杞20份和丹参20份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
该实施例1的步骤4）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按熟地黄40份、葛根40份、银杏叶30份、黄芩30份、枳壳10份、薄荷10份、甘草10份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
Claims (4)
1.一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
1）获取无菌材料
将包裹于竹节上的叶仔细剥除，选择完整、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自来水下流动冲洗30min 后于超净工作台上，用75%的乙醇浸泡20-30s，再用0.l%的升汞溶液浸泡8-15min后，用无菌水冲洗6-8次，并吸干表面水分；
2）诱导培养
将步骤1）得到的培养材料，接种于诱导培养基中进行诱导培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养7天，所述的诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加NAA 0.02-0.1mg/L、6-BA 0.05-0.2 mg/L、中药多糖1-5mg/L，所述的中药多糖由柴胡、大黄、茯苓、枸杞和丹参构成的中药组合物中提取得到；
3）增殖培养
将步骤2）得到的外植体转接于增殖培养基中进行增殖培养，先进行暗处理1 周，再在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养12-15天，所述的增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加占MS培养基总重量0.1-0.5%的竹醋液和0.2-0.6%的黄秋葵汁；
4）生根培养
将步骤3）得到的外植体转入生根培养基中进行生根培养，在光照强度2500Lux、温度25±2℃、光照条件16h/d下培养15-20天，所述的生根培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加6-BA 0.02-0.1 mg/L、IBA0.02-0.1 mg/L和中药多糖1-5mg/L，所述的中药多糖由熟地黄、葛根、银杏叶、黄芩、枳壳、薄荷、甘草构成的中药组合物中提取得到；
5）移栽
将已生根的植株取出，移栽至由黄心土、珍珠岩和泥炭土按重量比1:2:3混合构成的混合基质上；
上述的步骤2）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按柴胡20～40份、大黄10～30份、茯苓10～30份、枸杞5～20份和丹参5～20份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10 分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉；
所述的步骤4）中中药多糖按以下步骤制得：
a、按熟地黄20～40份、葛根20～40份、银杏叶10～30份、黄芩10～30份、枳壳5～10份、薄荷5～10份、甘草5～10份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量10倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10 分钟搅拌一次；
b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；
c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；
d、用灭菌纯化水洗涤c 中粗制中药多糖，洗涤后用20 倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5% 比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后10000rpm 离心10 分钟，弃去沉淀，收集上清；
e、将d 中上清液进行10 倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；
f、将e 中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥制得复合中药多糖冻干粉。
2.如权利要求1所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤2）中所述的诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加NAA 0.04-0.0.08mg/L、6-BA0.08-0.12 mg/L、中药多糖2-3mg/L。
3.如权利要求1所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤3）中增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加占MS培养基总重量0.2-0.3%的竹醋液和0.4-0.5%的黄秋葵汁。
4.如权利要求1所述的一种锐药竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步骤4）中生根培养基是以以MS培养基为基础培养基，然后按比例添加6-BA 0.04-0.0.06 mg/L、IBA0.04-0.06 mg/L和中药多糖2-3mg/L。
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