CN101933457A - 酒竹的组培快繁技术 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种酒竹的组织培养和快速繁殖技术。包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养，移栽等步骤。本发明以MS培养基为基础，加入了辅助剂：活性炭、6-苄基腺嘌呤、6-糠氨基嘌呤、萘乙酸，用于酒竹丛生芽诱导生长，壮苗生根两个关键阶段的组织培养。该技术解决了酒竹快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节，达到了繁殖系数高、技术稳定、可实现工业化生产的目的。

Description

酒竹的组培快繁技术

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及植物的组织培养和快速繁殖技术。

背景技术

酒竹(Oxytenanthera braunii)是竹亚科锐药属竹种，原产非洲东部中高山地区(Liese，1992)。秆丛生，高6～10m，直径4～9cm，地下茎为复轴型，不具鞭；秆圆筒形，着枝一侧不具纵沟；节间长25～45cm，秆每节分枝5～9枚或更多枚，具次级枝；秆同一节上具明显区别于其他分枝的主枝1～2枚。酒竹在新竹(笋的高生长)形成过程中，新竹杆在砍梢后的前几天就开始在砍梢伤口分泌出酒精含量较高的伤流液，作为重要的生活和经济竹种，这种自然分泌和发酵的液体(未有任何人工添加成分)，其口感甜酸可口，分泌时间可持续一个月左右(28d)，每棵竹子合计可产酒30kg，按每亩每年50棵竹子用于产酒计算，亩产酒量可达1500kg/a，这种竹子分泌的天然酒，经2-3d的自然发酵，酒精度可达二十度，是一种上等饮料，应用前景十分广阔。

虽然原产地农民把酒竹当作一种固定生活收入而进行劳作，但是，由于该竹种分布在非洲东部山区，分布地原始、偏僻，交通不便利，且分布面积小，生产、经营几乎都处于原始状态，因此，世界上目前对酒竹研究、开发和利用尚处于起始阶段。同时，由于人们多年滥挖乱采及其生殖机制和微生境需求的某些限制，酒竹适生的分布地区和数量不多，难以满足工业领域的需要。因此，为了保护酒竹种质资源，同时满足对其日益增大的需求量，通过现代生物技术，用植物组织培养方法来进行无性繁殖，是大量繁殖酒竹的最可行的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种酒竹的组培快速繁殖方法。

方法的步骤如下：

1)外植体的选取与处理选1-2年生的幼枝，将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整的、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗30分钟后，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8分钟后用无菌水冲洗5次，切去外植体变色的部分，接种于培养基中。

2)诱导培养：选择0.5MS+4BA+NAA为诱导培养基，将所选取的芽接种于上述培养基中。

3)增殖培养：诱导培养7天后，将生长于诱导培养基上外植体转接于0.5MS+4BA+KT上进行培养；7天后转入0.5MS+2NAA+1.5IBA或0.5MS+2NAA+3IBA+3BA中继续培养7天。

4)生根培养：选择0.5MS+IBA为生根培养基；

5)移栽：将已生根的植株取出，移栽到珍珠岩∶泥炭土(1∶1)混合的基质上。

本发明的优点：(1)酒竹的快繁和生产可以在人为控制条件下进行，不受季节、气候条件与土壤等因素的制约，可排除病虫害的侵袭和农药残留量的困扰，严格控制酒竹的质量；(2)个体差异小，生产周期短，设备简单，占地面积少，能节省人力、物力等，便于工厂化生产；(3)利用组织培养过程中出现的芽变或人工诱变，或进行脱毒，培育新品种，提高酒竹品质；(4)保存酒竹种质资源；(5)通过组织培养酒竹快速获得新生植株，以减少对自然资源的破坏。该技术解决了酒竹快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节，达到了繁殖系数高速度快，技术稳定，实现工业化生产的目的。

具体实现方式

酒竹的组培快繁技术，包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养，移栽等步骤，具体地，选取完整的、刚要萌发新芽的竹节或顶芽为培养材料，选择0.5MS+4BA+NAA为诱导培养基，选择1/2MS+IBA为生根培养基。

诱导培养，在0.5MS+4BA+NAA的培养基中，培养7天后有新芽发出，无愈伤组织，把新芽接种于不同的诱导培养基(1)0.5MS+4BA+KT(2)0.5MS+2NAA+1.5IBA(3)0.5MS+2NAA+3IBA+3BA。半个月后结果如下：三种培养基中均有芽冒出；(1)植株叶片普遍偏黄，芽的生长速度缓慢；(2)、(3)植株健壮，色绿；(2)中叶柄基部膨大，有数个颗粒状突起；(3)中叶柄基部有2-5个小芽，小芽淡黄或绿色。由此可见，诱导培养以(2)、(3)为宜。

采用上述措施的本发明，用于酒竹丛生芽诱导和生长，壮苗生根两个关键阶段的组织培养，可适用于酒竹的组培快繁。使酒竹这一濒危植物实现工厂化快速育苗，更有效地保护和开发利用成为可能，在使用中将酒竹的芽接种在本发明上，30-45天大部分可诱导形成丛生芽，一般诱导率可达75-90％。在此基础上继续继代培养，丛生芽可大量增殖，25天继代一次的增殖倍数平均为3.3。把继代后的丛生芽转移到本发明提供的生根培养基中25-45天可大量发根，出根率在80％左右，45天可出瓶炼苗。

上述技术中，可优选完整的芽为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗30分钟后，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(HgCl)消毒8分钟后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分，接种于培养基中。

上述技术中诱导、增殖和生根步骤的PH值均为5.8，培养温度25℃，每天光照16小时，光照强度2300LX。

本发明的优异性体现在：提供了酒竹的植物组织培养和快速繁殖技术，摸索出了快速繁殖及其稳定生根等重要环节的关键性技术，一个外植体一年就可克隆繁殖出数万株后代，为该植物的商品化生产提供了一套切实可行的生产技术路线，实现了酒竹的工业化生产目的。

实施例1

选2年生的幼枝，将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整的、刚要萌发新芽作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗30分钟后，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8分钟后用无菌水冲洗5次，切去外植体变色的部分，接种于培养基中。选择0.5MS+4BA+NAA为诱导培养基，将所选取的芽接种于上述培养基中。诱导培养7天后，将生长于诱导培养基上外植体转接于0.5MS+4BA+KT上进行培养；

再过7天后转入0.5MS+2NAA+1.5IBA中，继续培养7天。再转入0.5MS+IBA培养基中，进行生根培养，在3-4星期内可得到新根。然后，将已生根的植株取出，移栽到珍珠岩∶泥炭土(1∶1)混合的基质上，进行育苗。

Claims (5)

1.一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于方法的步骤如下：

1)外植体的选取与处理选1-2年生的幼枝，将包裹于竹节上的叶仔细剥除，优选完整、刚要萌发新芽的竹节或顶芽作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗30分钟后，置于75％酒精中处理30秒，然后再经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8分钟后用无菌水冲洗5次，切去外植体变色部分，接种于培养基中。

2)诱导培养：选择0.5MS+4BA+NAA为诱导培养基，将所选取的芽接种于上述培养基中。

3)增殖培养：诱导培养7天后，将生长于诱导培养基上外植体转接于0.5MS+4BA+KT上进行继代培养；7天后转入0.5MS+2NAA+1.5IBA或0.5MS+2NAA+3IBA+3BA中继续培养7天。

4)生根培养：选择0.5MS+IBA为生根培养基；

5)移栽：将已生根的植株取出，移栽到珍珠岩∶泥炭土(1∶1)混合的基质上。

2.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的选择0.5MS+4BA+NAA为诱导培养基，培养7天后有新芽发出。将所选取的芽接种于上述培养基中：诱导、增殖、生根步骤培养基的PH值均为5.8，培养温度25℃±1，每天光照时间16时，光照强度2300LX。

3.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的将生长于诱导培养基上外植体转接于0.5MS+4BA+KT上进行培养7天后新芽数量增加为2-3个：一周后，转入0.5MS+2NAA+1.5IBA或0.5MS+2NAA+3IBA+3BA中继续培养7天，新芽数目进一步增加，可见外植体上有2-5个新芽出现，随培养时间增加，芽的数目增加。将长有数个芽的外植体在无菌条件下取出，按芽的个数用解剖刀分开，分置于上述连续培养基不同的培养容器中培养，在10-20天内，各培养容器内的芽可再生出一至数个新芽，达到了增殖的目的。

4.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的选择0.5MS+IBA为生根培养基，并在培养基中加入0.5％的活性炭：将连续培养中的植株转入生根培养基中。转入后在黑暗条件下培养1-2天后转到光下培养10-15天可诱导形成根。30-45天可形成发达的根系。

5.根据权利要求1所述的一种酒竹的组培快速繁殖方法，其特征在于所说的将已生根的植株取出，移栽到珍珠岩∶泥炭土(1∶1)混合的基质上：将已经生根的植株置于自然环境下4-5天后，打开瓶盖，置放4-5天后取出，用清水洗净根部的琼脂。栽培于珍珠岩∶泥炭土(1∶1)混合的基质中。一个月后可栽培于大田。