CN104957043B - 白钩藤的快速繁殖方法 - Google Patents
白钩藤的快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104957043B CN104957043B CN201510454146.8A CN201510454146A CN104957043B CN 104957043 B CN104957043 B CN 104957043B CN 201510454146 A CN201510454146 A CN 201510454146A CN 104957043 B CN104957043 B CN 104957043B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- explant
- uncaria sessilifructus
- sessilifructus roxb
- roxb
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000123749 Uncaria sessilifructus Species 0.000 title claims abstract description 82
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 88
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 35
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 35
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 34
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 30
- 241000219784 Sophora Species 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 21
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 claims description 19
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 claims description 19
- 241001330002 Bambuseae Species 0.000 claims description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 claims description 19
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 claims description 19
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 10
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 9
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 7
- 241000238040 Panulirus Species 0.000 claims description 6
- 241000927735 Penaeus Species 0.000 claims description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2,3-dicarboxylic acid Chemical compound C1C2C=CC1C(C(=O)O)C2(C(O)=O)[N+]([O-])=O QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 244000293323 Cosmos caudatus Species 0.000 claims description 5
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 5
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 5
- 239000004021 humic acid Substances 0.000 claims description 5
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical group C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 claims description 5
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 claims 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- JDLKFOPOAOFWQN-VIFPVBQESA-N Allicin Natural products C=CCS[S@](=O)CC=C JDLKFOPOAOFWQN-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- JDLKFOPOAOFWQN-UHFFFAOYSA-N allicin Chemical compound C=CCSS(=O)CC=C JDLKFOPOAOFWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000010081 allicin Nutrition 0.000 description 5
- 241000345998 Calamus manan Species 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000012950 rattan cane Nutrition 0.000 description 4
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 3
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 3
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 3
- 238000000518 rheometry Methods 0.000 description 3
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 2
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000007216 Furcation Defects Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 244000046101 Sophora japonica Species 0.000 description 1
- 235000010586 Sophora japonica Nutrition 0.000 description 1
- 241000157352 Uncaria Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002520 cambial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 244000089265 zong er cha Species 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种白钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:步骤一、制作白钩藤的无菌外植体;步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养;步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养,培养直至生根;步骤四、将生根的白钩藤苗移栽至基质中培养。本发明通过建立白钩藤的快速繁殖方法,具有繁殖率高、繁殖速率快等优点,便于在生产上大面积推广种植,满足了中药资源开发的迫切需要。
Description
技术领域
本发明涉及植物栽培领域,更具体地说,本发明涉及一种白钩藤的快速繁殖方法。
背景技术
白钩藤,又名无柄果钩藤,分布于广东、广西、云南等地,生于密林下或林谷灌丛中,具有清热解暑,消肿止痛,除风通血等功效。白钩藤的利用主要以野生资源为主,目前也有少量引种栽培,栽培中以种子播种和扦插繁殖为主,但成活率和繁殖系数偏低,利用组织培养快繁技术,可以有效快速的增加其繁殖系数,不仅能满足市场对白钩藤药材的需求,又有利于白钩藤野生资源的保护。目前钩藤属中其他种的组织快繁已有报道,而以白钩藤枝条作为繁殖材料的组织培养与快速繁殖尚未见报道。白钩藤资源濒临枯竭,因此引种栽培、人工繁殖等将成为有效利用白钩藤资源的新途径,目前未见有关于白钩藤的栽培、繁殖等方面的研究报道。本发明通过建立白钩藤的快速繁殖方法,具有繁殖率高、繁殖速率快等优点,便于在生产上大面积推广种植,满足了中药资源开发的迫切需要。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题和缺陷,并提供后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种白钩藤的快速繁殖方法,首先利用针对白钩藤的第一培养基和第二培养基培养白钩藤的无菌外植体至生根,加快白钩藤苗的生根速率。
本发明还有一个目的是提供一种适用于白钩藤苗的基质,保证白钩藤苗减少虫害的侵蚀,提高白钩藤的产量。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种白钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:
步骤一、制作白钩藤的无菌外植体;
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为24℃~26℃,诱导腋芽形成;所述第一培养基包括white培养基、1~1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂;
步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养,控制温度为24℃~26℃,培养直至生根;其中,所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基,所述第二培养基放置于培养盒中,使固态培养基在所述液态培养基的上方;
所述固态培养基包括white培养基、0.1~0.2mg/L的珍珠粉、0.1~0.5mg/L的激动素KT、0.7~0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1~0.5g/L的活性炭;
所述液态培养基包括B5培养基、0.6~0.9mg/L竹醋液和0.2~0.4mg/L槐花粉提取液;所述槐花粉提取液的制作方法为将槐花粉破壁后,用槐花粉质量10倍的50%的乙醇水溶液浸泡7小时,之后在65℃下萃取8小时,过滤,取滤液,将所述滤液真空减压浓缩至8mg/L,设置真空度为0.05~0.06MPa,减压浓缩时控制温度为65℃,即得所述槐花粉提取液。
优选的是,所述步骤三中,从无菌外植体的下端开始,将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基,将所述带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
优选的是,所述培养盒包括:
盒体,其为中空圆柱状;
隔板,其为圆形,所述隔板的直径略小于所述盒体的直径,所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内,使所述盒体形成上部空间和下部空间,所述隔板平行于所述盒体的底部,所述隔板上间隔设置有2~4个使所述无菌外植体通过的第一通孔;
其中,所述盒体的底部设置有排水管,所述排水管上设有第一控制阀,所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管,所述进水管上设有第二控制阀,所述固态培养基置于所述上部空间中,所述液态培养基置于所述下部空间中。
优选的是,还包括:步骤四、将生根的白钩藤苗移栽至基质中培养,移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯醇缓释膜,所述聚乙烯醇缓释膜中注入有质量配比为1∶1∶2∶1的复合氨基酸、尿素、生物菌肥和糖蜜发酵液;
按重量份数计,所述基质由5-6份腐殖酸、1-3份虾壳、15-20份珍珠岩、保水剂2-3份和30-35份田园土混合而成。
优选的是,所述步骤一中,选取白钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成2-4cm长的带腋芽的嫩茎段作为白钩藤的无菌外植体。
优选的是,所述步骤一中,对白钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述外植体三遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中25-30min,之后用消毒后的茶叶水持续冲洗外植体20-30s。
优选的是,白钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时,调节pH为5.7,控制光照强度为15001x,每天的光照时间为9小时;白钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养时,调节所述固态培养基的pH为5.7,调节所述液态培养基的pH为5.3,控制光照强度为22001x,每天的光照时间为12小时。
本发明至少包括以下有益效果:
1、白钩藤苗的外植体消毒采用的是由大蒜素和乙醇混合而成的消毒液,相较于一般消毒液和洗洁精,本发明的消毒液提取的是大蒜中的有效成分,在保证白钩藤苗的外植体杀菌消毒的同时,可以提高白钩藤苗的外植体在组织培养时的成活率,成活率可提高16%左右。用消毒后的茶水对带节嫩茎端冲洗,使外植体上附着一层茶水膜,茶水中的茶多酚对植物的病原真菌和分生孢子的萌发有极强的抑制作用,防止外植体的生长感染真菌,提高外植体的存活率。
2、白钩藤的快速培养首先通过组织培养,培养白钩藤的外植体生根,之后在移栽,采用本发明的培养基配合白钩藤的生长,大大加快了白钩藤的生长速度,其中白钩藤无菌外植体腋芽的形成仅需一周左右、在得到有腋芽的无菌外植体后植入第二培养基中培养7-10天就可得到白钩藤的生根苗。比普通的培养基培养不仅提高了存活率,同时还大大缩短了培育时间。
3、第一培养基和第二培养基中添加有竹醋液,竹醋液能有效地促进白钩藤无菌外植体腋芽的形成,缩短腋芽形成的时间,明显改善白钩藤的组织细胞分裂,生长,使白钩藤的根分化出来,同时促进形成层细胞分裂,长大,使茎逐渐加粗。同时竹醋液有利于提高白钩藤对光的吸收,促进白钩藤的光合作用,促进白钩藤苗的营养吸收。
4、在生根阶段,采用固态培养基和液态培养基的搭配,液态培养基中采用的是竹醋液和槐花粉提取液,保证了白钩藤快速繁殖的同时,不会出现畸形化,使组织培养出的白钩藤苗和自然生长的白钩藤苗生长顺序相同,不会出现异化现象,在后期的移栽存活率也很高。
5、整个组织培养中所用的激素相较于一般的组织培养所用的激素要少,由于在激素环境下会导致根原基维管束的排列紊乱,有时会导致根无法顺利的萌发,将根原基维管束浸泡于液态培养基中,将上面一部分设置于固态培养基中,保证了白钩藤生根所需的环境,同时提高了白钩藤根的萌发率。
6、针对固液两用培养基,设计了一种培养盒,培养盒通过隔板分隔成两个空间,上面一个空间可以搁置固态培养基,下面一个空间可放置液态培养基,隔板上设置有2~4个第一通孔,用于放置白钩藤的无菌外植体,同时也可保证固液两个培养基之间一定的连通,设置进水管和排水管,可在不更换固态培养及且不移出白钩藤苗的情况下定期更换液态培养基,隔板也可从盒体中抽出。
7、基质的表面铺设聚乙烯醇缓释膜,可缓慢释放白钩藤所需的营养物质,不需人工管理,保证了白钩藤生长所需。
8、虾壳中富含磷和钙还有大量的氨基酸,全是白沟藤生长所需,减少了难降解的有机化学物质的使用,从而减少了对环境的污染。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明所述培养盒的结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
一种白钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:
步骤一、制作白钩藤的无菌外植体,选取白钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成2cm长的带腋芽的嫩茎段作为白钩藤的无菌外植体。对白钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述带节嫩茎段三遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中25min,之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体20s。
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为24℃℃,调节pH为5.7,控制光照强度为15001x,每天的光照时间为9小时,诱导腋芽形成;所述第一培养基包括white培养基、1mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂。
步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养,控制温度为24℃℃,控制光照强度为22001x,每天的光照时间为12小时,培养直至生根。其中,所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基,所述第二培养基放置于无菌培养盒中,使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下端开始,将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基,将所述带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
所述固态培养基包括white培养基、0.1mg/L的珍珠粉、0.1mg/L的激动素KT、0.7mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1g/L的活性炭。调节所述固态培养基的pH为5.7。
所述液态培养基包括B5培养基、0.6mg/L竹醋液和0.2mg/L槐花粉提取液,调节所述液态培养基的pH为5.3。所述槐花粉提取液的制作方法为将槐花粉破壁后,用槐花粉质量10倍的50%的乙醇水溶液浸泡7小时,之后在65℃下萃取8小时,过滤,取滤液,将所述滤液真空减压浓缩至8mg/L,设置真空度为0.05MPa,减压浓缩时控制温度为65℃,即得所述槐花粉提取液。
步骤四、将生根的白钩藤苗移栽至基质中培养,移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯醇缓释膜,所述聚乙烯醇缓释膜中注入有质量配比为1∶1∶2∶1的复合氨基酸、尿素、生物菌肥和糖蜜发酵液;
按重量份数计,所述基质由5份腐殖酸、1份虾壳、15份珍珠岩、保水剂2份和30份田园土混合而成。
如图1所示,其中,所述培养盒1包括:
盒体11,其为中空圆柱状;
隔板12,其为圆形,所述隔板的直径略小于所述盒体的直径,所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内,使所述盒体形成上部空间和下部空间,所述隔板平行于所述盒体的底部,所述隔板上间隔设置有4个使所述无菌外植体通过的第一通孔121;
其中,所述盒体的底部设置有排水管14,所述排水管14上设有第一控制阀,所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管,所述进水管13上设有第二控制阀,所述固态培养基置于所述上部空间中,所述液态培养基置于所述下部空间中。
实施例2
一种白钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:
步骤一、制作白钩藤的无菌外植体,选取白钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成4cm长的带腋芽的嫩茎段作为白钩藤的无菌外植体。对白钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述带节嫩茎段三遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中30min,之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体30s。
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为26℃,调节pH为5.7,控制光照强度为15001x,每天的光照时间为9小时,诱导腋芽形成;所述第一培养基包括white培养基、1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂。
步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养,控制温度为26℃,控制光照强度为22001x,每天的光照时间为12小时,培养直至生根。其中,所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基,所述第二培养基放置于无菌培养盒中,使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下端开始,将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基,将所述带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
所述固态培养基包括white培养基、0.2mg/L的珍珠粉、0.5mg/L的激动素KT、0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.5g/L的活性炭。调节所述固态培养基的pH为5.7。
所述液态培养基包括B5培养基、0.9mg/L竹醋液和0.4mg/L槐花粉提取液,调节所述液态培养基的pH为5.3。所述槐花粉提取液的制作方法为将槐花粉破壁后,用槐花粉质量10倍的50%的乙醇水溶液浸泡7小时,之后在65℃下萃取8小时,过滤,取滤液,将所述滤液真空减压浓缩至8mg/L,设置真空度为0.06MPa,减压浓缩时控制温度为65℃,即得所述槐花粉提取液。
步骤四、将生根的白钩藤苗移栽至基质中培养,移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯醇缓释膜,所述聚乙烯醇缓释膜中注入有质量配比为1∶1∶2∶1的复合氨基酸、尿素、生物菌肥和糖蜜发酵液;
按重量份数计,所述基质由6份腐殖酸、3份虾壳、20份珍珠岩、保水剂3份和35份田园土混合而成。
其中,所述培养盒包括:
盒体,其为中空圆柱状;
隔板,其为圆形,所述隔板的直径略小于所述盒体的直径,所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内,使所述盒体形成上部空间和下部空间,所述隔板平行于所述盒体的底部,所述隔板上间隔设置有2~4个使所述无菌外植体通过的第一通孔;
其中,所述盒体的底部设置有排水管,所述排水管上设有第一控制阀,所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管,所述进水管上设有第二控制阀,所述固态培养基置于所述上部空间中,所述液态培养基置于所述下部空间中。
实施例3
一种白钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:
步骤一、制作白钩藤的无菌外植体,选取白钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成3cm长的带腋芽的嫩茎段作为白钩藤的无菌外植体。对白钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述带节嫩茎段三遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中26min,之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体26s。
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为25℃,调节pH为5.7,控制光照强度为15001x,每天的光照时间为9小时,诱导腋芽形成;所述第一培养基包括white培养基、1.2mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂。
步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养,控制温度为25℃,控制光照强度为22001x,每天的光照时间为12小时,培养直至生根。其中,所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基,所述第二培养基放置于无菌培养盒中,使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下端开始,将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基,将所述带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。
所述固态培养基包括white培养基、0.14mg/L的珍珠粉、0.4mg/L的激动素KT、0.77mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.3g/L的活性炭。调节所述固态培养基的pH为5.7。
所述液态培养基包括B5培养基、0.7mg/L竹醋液和0.3mg/L槐花粉提取液,调节所述液态培养基的pH为5.3。所述槐花粉提取液的制作方法为将槐花粉破壁后,用槐花粉质量10倍的50%的乙醇水溶液浸泡7小时,之后在65℃下萃取8小时,过滤,取滤液,将所述滤液真空减压浓缩至8mg/L,设置真空度为0.056MPa,减压浓缩时控制温度为65℃,即得所述槐花粉提取液。
步骤四、将生根的白钩藤苗移栽至基质中培养,移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯醇缓释膜,所述聚乙烯醇缓释膜中注入有质量配比为1∶1∶2∶1的复合氨基酸、尿素、生物菌肥和糖蜜发酵液;
按重量份数计,所述基质由5份腐殖酸、2份虾壳、17份珍珠岩、保水剂3份和32份田园土混合而成。
其中,所述培养盒包括:
盒体,其为中空圆柱状;
隔板,其为圆形,所述隔板的直径略小于所述盒体的直径,所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内,使所述盒体形成上部空间和下部空间,所述隔板平行于所述盒体的底部,所述隔板上间隔设置有2~4个使所述无菌外植体通过的第一通孔;
其中,所述盒体的底部设置有排水管,所述排水管上设有第一控制阀,所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管,所述进水管上设有第二控制阀,所述固态培养基置于所述上部空间中,所述液态培养基置于所述下部空间中。
实验对比
对白钩藤的带节嫩茎段采用以下三种方法消毒后,利用本发明的栽培方法栽培,栽培调节相同,每种消毒方法分别处理50株白钩藤的带节嫩茎段,其存活率见表1,其中大蒜素消毒采用的是用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min;大蒜素和茶叶水的配合消毒采用的是用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述带节嫩茎段20s;洗洁精及升汞消毒采用的是用质量分数为1%洗洁精水溶液浸泡5min,自来水冲洗15min,无菌水润洗两次,然后在超净工作台用体积分数为75%的酒精浸泡30s,再用添加了2滴吐温-20的150mL质量浓度为0.1%升汞消毒5min,无菌水冲洗3次。
表1 采用本发明对白钩藤的带节嫩茎段消毒对其存活率的影响
表2 第二培养基和普通培养基对白钩藤苗生根率的影响
培养基 | 生根株数/株 | 生根率/% |
1 | 52 | 52 |
2 | 85 | 85 |
其中,普通培养基的成分为0.3mg/L的NAA,编号为1,第二培养基的成分与实施例3中的成分相同,标号为2。分别用普通培养基和第二培养基对100株白钩藤外植体进行组织培养。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (3)
1.一种白钩藤的快速繁殖方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、制作白钩藤的无菌外植体,其制作方法为选取白钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成2cm长的带腋芽的嫩茎段作为白钩藤的无菌外植体;
步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为24℃~26℃,诱导腋芽形成;所述第一培养基由white培养基、1~1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂组成;白钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时,调节pH为5.7,控制光照强度为1500lx,每天的光照时间为9小时;
步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养,控制温度为24℃~26℃,培养直至生根;其中,所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基,所述第二培养基放置于培养盒中,使固态培养基在所述液态培养基的上方;从无菌外植体的下端开始,将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基,将所述带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中;白钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养时,调节所述固态培养基的pH为5.7,调节所述液态培养基的pH为5.3,控制光照强度为2200lx,每天的光照时间为12小时;
所述固态培养基由white培养基、0.1~0.2mg/L的珍珠粉、0.1~0.5mg/L的激动素KT、0.7~0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1~0.5g/L的活性炭组成;
所述液态培养基由B5培养基、0.6~0.9mg/L的竹醋液和0.2~0.4mg/L的槐花粉提取液组成;所述槐花粉提取液的制作方法为将槐花粉破壁后,用槐花粉质量10倍的50%的乙醇水溶液浸泡7小时,之后在65℃下萃取8小时,过滤,取滤液,将所述滤液真空减压浓缩至8mg/L,设置真空度为0.05~0.06MPa,减压浓缩时控制温度为65℃,即得所述槐花粉提取液;
步骤四、将生根的白钩藤苗移栽至基质中培养,移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯醇缓释膜,所述聚乙烯醇缓释膜中注入有质量配比为1:1:2:1的复合氨基酸、尿素、生物菌肥和糖蜜发酵液;
按重量份数计,所述基质由5-6份腐殖酸、1-3份虾壳、15-20份珍珠岩、保水剂2-3份和30-35份田园土混合而成。
2.如权利要求1所述的白钩藤的快速繁殖方法,其特征在于,所述培养盒包括:
盒体,其为中空圆柱状;
隔板,其为圆形,所述隔板的直径略小于所述盒体的直径,所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内,使所述盒体形成上部空间和下部空间,所述隔板平行于所述盒体的底部,所述隔板上间隔设置有2~4个使所述无菌外植体通过的第一通孔;
其中,所述盒体的底部设置有排水管,所述排水管上设有第一控制阀,所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管,所述进水管上设有第二控制阀,所述固态培养基置于所述上部空间中,所述液态培养基置于所述下部空间中。
3.如权利要求1所述的白钩藤的快速繁殖方法,其特征在于,所述步骤一中,对白钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为1:100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述外植体三遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中25-30min,之后用消毒后的茶叶水持续冲洗外植体20-30s。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510454146.8A CN104957043B (zh) | 2015-07-30 | 2015-07-30 | 白钩藤的快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510454146.8A CN104957043B (zh) | 2015-07-30 | 2015-07-30 | 白钩藤的快速繁殖方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104957043A CN104957043A (zh) | 2015-10-07 |
CN104957043B true CN104957043B (zh) | 2017-03-15 |
Family
ID=54211284
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510454146.8A Active CN104957043B (zh) | 2015-07-30 | 2015-07-30 | 白钩藤的快速繁殖方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104957043B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107094627A (zh) * | 2017-05-12 | 2017-08-29 | 江苏绿洲园艺绿化有限公司 | 一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其制备方法 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105284618B (zh) * | 2015-11-06 | 2017-09-05 | 广西大学 | 一种香蕉无ms组织培养的方法 |
CN105918133B (zh) * | 2016-05-27 | 2018-07-03 | 陈思 | 猪血木组织培养快速繁育方法 |
CN106688889B (zh) * | 2016-12-29 | 2018-08-31 | 广西壮族自治区药用植物园 | 提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法 |
CN107873516A (zh) * | 2017-11-14 | 2018-04-06 | 广西壮族自治区药用植物园 | 钩藤的培育方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102498900A (zh) * | 2011-11-16 | 2012-06-20 | 金志祥 | 一种钩藤种子高效育苗的方法 |
CN104641857B (zh) * | 2014-05-22 | 2017-02-01 | 韦玉国 | 钩藤苗的培育方法 |
CN104642140B (zh) * | 2015-03-13 | 2017-04-12 | 国家林业局竹子研究开发中心 | 一种锐药竹的快速繁殖方法 |
-
2015
- 2015-07-30 CN CN201510454146.8A patent/CN104957043B/zh active Active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107094627A (zh) * | 2017-05-12 | 2017-08-29 | 江苏绿洲园艺绿化有限公司 | 一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104957043A (zh) | 2015-10-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104957043B (zh) | 白钩藤的快速繁殖方法 | |
CN105165512B (zh) | 台湾桤木控偏冠四季扦插快繁方法 | |
CN104620840B (zh) | 一种欧丁香基质外生根扦插育苗法 | |
CN107278851B (zh) | 毛竹实生苗的培育方法 | |
CN104396493A (zh) | 一种湖北黄精的有性繁殖方法 | |
CN106358825A (zh) | 一种多穗柯育苗可以重复利用的扦插基质及其应用 | |
CN101116424B (zh) | 高效诱导培养百合小鳞茎的方法 | |
CN102648682A (zh) | 大规格广玉兰容器苗培育栽植方法 | |
CN102144556A (zh) | 瑶山苣苔组织培养及快速繁殖的方法 | |
CN103125393B (zh) | 裸花紫珠无菌播种与快速组培繁殖方法 | |
CN105028202B (zh) | 大叶钩藤的快速繁殖方法 | |
CN101627729B (zh) | 彩色马蹄莲优质球茎及其培育方法 | |
CN106332716A (zh) | 香樟树的扦插方法 | |
CN104094845B (zh) | 一种神农香菊的离体培养方法 | |
CN103548660B (zh) | 一种能自动吸液的植物育苗盆 | |
CN102960249B (zh) | 一种利用朝鲜崖柏嫩茎段试管内生根和生长同步的高效育苗方法 | |
CN106888948A (zh) | 一种首冠藤的播种繁殖方法 | |
CN105830918A (zh) | 一种提高千层塔芽孢移栽成活率的方法 | |
CN108040879A (zh) | 一种黄花补血草生根诱导培养基和黄花补血草繁育方法 | |
CN105815002B (zh) | 一种齿瓣石斛种子和共生真菌混合播种的育苗方法 | |
CN106900307A (zh) | 一种玉簪的分株繁殖方法 | |
CN106342628A (zh) | 一种毛桃扦插育苗的方法 | |
CN106342635A (zh) | 橡皮树种植的方法 | |
CN107439373B (zh) | 一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法 | |
CN101305690A (zh) | 一种利用离子束辐照提高黑麦草对水体去氮磷效率的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20151007 Assignee: Guangxi Jiansen Forestry Development Co.,Ltd. Assignor: GUANGXI BOTANICAL GARDEN OF MEDICINAL PLANTS Contract record no.: X2023980045534 Denomination of invention: The Rapid Propagation Method of White Hook Vine Granted publication date: 20170315 License type: Common License Record date: 20231106 |
|
EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |