CN104905396B - 一种烟梗微生物处理提香的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于其步骤如下：取嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌分别接种于含有重量百分比为0.2%海藻糖的LB液体培养基中；培养后离心，然后用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用无菌水振荡均匀，使用时稀释为处理用菌剂；取菌剂喷洒到梗丝上进行处理即可。
Description
技术领域
本发明属于烟用添加剂的技术领域，特别是嗜酸小球菌用于烟梗处理提香的方法。
背景技术
烟草是茄科烟草属植物，烟梗即是烟叶之粗硬叶脉，约占叶重的 2 5— 30 %。烟梗是烟草工业的副产物，目前多作弃置处理。我国是烟草大国 ,每年有数十万吨烟梗资源被废弃，既造成环境污染 ,同时也是对自然资源的浪费。研究表明，烟梗中含有的成分种类与烟叶成分基本一致。在配方中加入膨胀梗丝后，由于其填充值较高，可以减少卷烟烟丝用量，不仅节约卷烟成本，也可以起到降低卷烟焦油量的作用。
烟梗的主要成分是细胞壁物质，约占40％以上，其包括木质素、纤维素、半纤维素和果胶等。这类物质的热裂解产物具有强烈的刺激性，杂气重、呛咳、涩口、香气量少，严重影响了卷烟的吸味品质，直接限制了梗丝在叶组配方中所占的比例。因此，降低梗丝燃烧产生的不良气息，提高梗丝吸味是提高梗丝综合利用率的关键问题。
现有技术表明，通过微生物或生物酶处理具有明显消除烟叶的青杂气，减轻刺激性的作用，对烟叶香气质量的改善也有一定的帮助。利用木质素降解菌和降解酶对烟梗进行处理能减轻梗丝的木质气、刺激性。尤其是现有技术公开了一种短小芽孢杆菌Van35，其能直接处理烟梗，改善其品质。
本发明旨在提供一种新的烟梗微生物处理方法，本产品与现有技术相比，具有更好的烟梗提香的效果，并且其来源不仅仅限制于保藏的某特殊菌株。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的烟梗微生物处理方法，本产品与现有技术相比，具有更好的烟梗提香的效果，并且其来源不仅仅限制于保藏的某特殊菌株，原材料成本低廉，易于购买，制备方法简单，适于大量生产。
为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于步骤如下：
(1)取嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌分别按照0.1％和0.15%的接种量接种于含有重量百分比为0.2%海藻糖的200ml的LB液体培养基中；
(2)在37℃摇床，转速160r/min振荡培养至OD值＝2.2；3800rpm/min离心8min，然后用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释15倍,并加入果胶酶即为处理用菌剂；
(3)称取梗丝，取0.12-0.15倍梗丝质量的菌剂喷洒到梗丝上，密封，30℃下恒温保持5小时，然后烘干梗丝，再将梗丝于20-22℃相对湿度为50%-60％的恒温恒湿箱平衡48h。
嗜酸小球菌( Pediococcus acidilactici ) 是一种乳酸菌,作为畜饲用添加剂的生产和使用已经得到中国和欧盟的认证,并可应用于美国和巴西等许多国家和地区,其安全性已得到国际主要权威机构(如美国FDA、欧盟SCAN 等) 的认证,是被选择用来改善动物消化道微生态系统的绿色、安全、环保的新型饲料添加剂。
枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
本发明人意外发现，这两种菌株混合培养成菌剂后，能够处理烟梗达到提香的效果。
本发明的有益之处在于：
1.本产品与现有技术相比，来源菌株易于购买得到，并且成本低廉，易于生产。
2.本发明的处理方法对烟梗的提香效果极佳，可大大改善烟梗的利用度。
具体实施方式
本发明的菌剂均为商业购买获得。
实施例1：
一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于步骤如下：
取嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌分别按照0.1％和0.15%的接种量接种于额外含有重量百分比为0.2%海藻糖的200ml的LB液体培养基中；
在37℃摇床，转速160r/min振荡培养上述培养基至OD值＝2.2；3800rpm/min离心8min，然后用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释15倍,并加入果胶酶即为处理用菌剂；
称取梗丝，取0.12倍梗丝质量的菌剂喷洒到梗丝上，密封，30℃下恒温保持5小时，然后烘干梗丝，再将梗丝于20℃相对湿度为50%的恒温恒湿箱平衡48h。
根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升LB培养基,应该在950 ml去离子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.
实施例2：
一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于步骤如下：
取嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌分别按照0.1％和0.15%的接种量接种于含有重量百分比为0.2%海藻糖的200ml的LB液体培养基中；
在37℃摇床，转速160r/min振荡培养上述培养基至OD值＝2.2；3800rpm/min离心8min，然后用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释15倍,并加入果胶酶即为处理用菌剂；
称取梗丝，取0.15倍梗丝质量的菌剂喷洒到梗丝上，密封，30℃下恒温保持5小时，然后烘干梗丝，再将梗丝于22℃相对湿度为60％的恒温恒湿箱平衡48h。
根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升LB培养基,应该在950 ml去离子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.
实施例3：
一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于步骤如下：
取嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌分别按照0.1％和0.15%的接种量接种于含有重量百分比为0.2%海藻糖的200ml的LB液体培养基中；
在37℃摇床，转速160r/min振荡培养上述培养基至OD值＝2.2；3800rpm/min离心8min，然后用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释15倍,并加入果胶酶即为处理用菌剂；
称取梗丝，取0.13倍梗丝质量的菌剂喷洒到梗丝上，密封，30℃下恒温保持5小时，然后烘干梗丝，再将梗丝于21℃相对湿度为55％的恒温恒湿箱平衡48h。
根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升LB培养基,应该在950 ml去离子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.
实施例4：
一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于步骤如下：
取嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌分别按照0.1％和0.15%的接种量接种于含有重量百分比为0.2%海藻糖的200ml的LB液体培养基中；
在37℃摇床，转速160r/min振荡培养上述培养基至OD值＝2.2；3800rpm/min离心8min，然后用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释15倍,并加入果胶酶即为处理用菌剂；
称取梗丝，取0.14倍梗丝质量的菌剂喷洒到梗丝上，密封，30℃下恒温保持5小时，然后烘干梗丝，再将梗丝于22℃相对湿度为58％的恒温恒湿箱平衡48h。
根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升LB培养基,应该在950 ml去离子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.
实施例5：
对比实施例：
一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于步骤如下：
称取梗丝，取蒸馏水喷洒到梗丝上，密封，30℃下恒温保持5小时，然后烘干梗丝，再将梗丝于20-22℃相对湿度为50%-60％的恒温恒湿箱平衡48h。
实施例6：效果测评：
（1）对梗丝主要化学成分含量和致香物质进行检测。
常规化学成分的检测结果表明：实施例1-4相对于实施例5的还原糖和总糖的含量发生了明显的提高，同时还检测到果胶、纤维素和木质素的含量发生了下降，尤其是果胶降低了58%。
致香成分检测结果表明：实施例1-4相对于实施例5的许多致香成分得到了提高，尤其是香兰素较对照提高了39%。
（2）感官测评
将实施例1-5的梗丝手工卷制成烟支，每个实施例的梗丝制成10根烟支，由50位评吸专家组成5组评吸小组分别对实施例1-5的烟支进行感官评吸。
感官评吸结果表明：梗丝经处理后，香味较对照显著提升，刺激性明显下降，即使没有添加烟叶丝也不让人觉得刺激和难受。
试验结果表明，本发明的方法可以有效降低提高梗丝的香气，愉悦度，提高梗丝抽吸品质，从而达到高比例添加梗丝的掺配量的目的。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种烟梗微生物处理提香的方法，其特征在于步骤如下：
(1)取嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌接种于含有海藻糖的200ml的LB液体培养基中；
(2)摇床培养，然后用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释15倍,并加入果胶酶即为处理用菌剂；
(3)称取梗丝，取菌剂喷洒到梗丝上，密封，30℃下恒温保持5小时，然后烘干梗丝，再将梗丝于恒温恒湿箱平衡；
其中，所述步骤（1）中，嗜酸小球菌，枯草芽孢杆菌分别按照0.1％和0.15%的接种量接种于含有重量百分比为0.2%海藻糖的200ml的LB液体培养基中；
所述步骤（2）摇床培养为：在37℃摇床，转速160r/min振荡培养至OD值＝2.2；3800r/min离心8min；
所述步骤（3）为取0.12-0.15倍梗丝质量的菌剂喷洒到梗丝上，在20-22℃相对湿度为50%-60％的恒温恒湿箱中平衡48h。
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