CN104877092A

CN104877092A - 含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物及其制备和作为抗肿瘤药物载体的应用

Info

Publication number: CN104877092A
Application number: CN201510037738.XA
Authority: CN
Inventors: 袁建超; 赵生兰; 赵研; 宋开润; 骆雯博
Original assignee: Northwest Normal University
Current assignee: Northwest Normal University
Priority date: 2015-01-26
Filing date: 2015-01-26
Publication date: 2015-09-02
Anticipated expiration: 2035-01-26
Also published as: CN104877092B

Abstract

本发明属于高分子化学及其应用领域，涉及一种含有缩醛键的双重靶向两亲性嵌段共聚物，是将功能化的三甲氧基苯甲醛和活化的叶酸通过RAFT聚合连接到N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上而形成的高分子嵌段共聚物。本发明的共聚物可在水中自组装形成胶束，并在癌细胞内微酸性的环境下缩醛键发生断裂，使得胶束结构被破坏，从而释放出阿霉素(DOX)，杀死癌细胞；该智能高分子药物载体由于滞留时间长、代谢速度慢、生物相容性好等一系列优点，改善了小分子药物和传统高分子载体的不足，因此在抗肿瘤药物的相关研究中具有很好的应用前景。

Description

含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物及其制备和作为抗肿瘤药物载体的应用

技术领域

本发明属于高分子化学领域，涉及一种具有双重靶向的抗肿瘤活性的两亲共聚物，尤其涉及一种含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物；本发明同时还涉及该共聚物作为抗肿瘤药物载体的应用。

背景技术

阿霉素是一种抗肿瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用，主要适用于急性白血病，对急性淋巴细胞白血病及粒细胞白血病均有效。阿霉素的结构式如下：

。

阿霉素具有较强的心脏毒性，使其在临床应用上受到一定的限制。药物载体是指能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系。由于各种药物载体释放和靶向系统能够减少药物降解及损失，降低副作用，提高生物利用度，因而对它的研究越来越受到重视。

功能化了的2,4,6-三甲氧基苯甲醛单体，其结构和性能在国内外的众多文献都有相关报道。首先缩醛键作为一种酸敏感的智能释放键，在癌细胞酸性环境下会缓慢断裂；其次三甲氧基苯甲醛作为一种疏水性特别好的物质，可以作为共聚物疏水的嵌段；所以该单体在抗肿瘤药物载体方面的应用中具有独特的自身优点。功能化了的2,4,6-三甲氧基苯甲醛单体的结构如下：

。

N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)是一种具有良好的生物相容性以及无毒可降解的药物载体，不仅能够降低药物的毒副作用，减少抗药性，提高药物在体内的稳定性，同时增加药物在肿瘤部位的富集，使药效得到更好的发挥等一系列的优点，作为肿瘤靶向药物载体已广泛应用于临床。HPMA结构式如下：

。

叶酸是一种很重要的能靶向到特定的细胞膜并通过叶酸受体使得胶束纳米粒被内吞，叶酸受体对叶酸分子有很强的亲合力。叶酸修饰的纳米载药系统主要是将药物输送到肿瘤细胞，如宫颈癌、子宫内膜、直肠癌、乳腺癌、肺癌、肾细胞癌、脑转移上皮癌和神经内分泌癌。此外，叶酸价格低、容易与载体偶联、容易生产和储存。因此，叶酸是应用较为广泛的靶向分子在抗肿瘤方面。叶酸结构式如下：

。

因此，将水溶性好的聚N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、叶酸、功能化的2,4,6-三甲氧基苯甲醛进行共聚后作为抗肿瘤药物载体，一方面使三者的抗肿瘤活性产生协同，以促进对肿瘤的抑制作用，另一方面，使抗肿瘤药物滞留时间长、代谢速度慢、生物相容性好，从而减少药物对正常组织的伤害。

发明内容

本发明的目的是提供一种含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物及其制备方法；

本发明的另一目的是提供一种含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物作为阿霉素药物载体的应用。

一、含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物

本发明含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物，是将功能化的三甲氧基苯甲醛和活化的叶酸通过RAFT聚合连接到N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上而形成的高分子嵌段共聚物——三甲氧基苯甲醛-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺-叶酸共聚物，其结构如下：

m（叶酸的含量）=10~16 mol %，n（HPMA的含量）= 60~68 mol %, o（缩醛的含量） =18~24mol %；数均分子量Mn = 1.2×10⁴~1.4×10⁴，Mw/Mn = 1.14~1.18。

二、含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备

本发明含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，包括以下工艺步骤：

(1) 化合物的制备：将三甲氧基苯甲醛与1,1,1-三羟甲基乙烷溶于的四氢呋喃中，再加入对甲苯磺酸作为催化剂，再加入4A分子筛，在室温下反应24~36小时，抽滤除去分子筛后用二氯甲烷溶解，再用pH=8.0的缓冲溶液洗涤，旋干，即得化合物；其结构式为：

三甲氧基苯甲醛与1,1,1-三羟甲基乙烷的摩尔比为1:2.5~1:3.0；2,4,6-三甲氧基苯甲醛与对甲苯磺酸的摩尔比为1:7.2~1:7.5。

(2) 化合物的制备：以二氯甲烷为溶剂，三乙胺为缚酸剂，化合物与甲基丙烯酰氯在冰浴下反应24~48小时；反应液用pH=8.0的缓冲溶液洗涤后，再用硅胶柱层析分离纯化，得化合物；其结构式为：

化合物与甲基丙烯酰氯的摩尔比为1:1.3~1:1.8；

化合物与三乙胺的摩尔比为1: 2.0~1: 2.5；

(3) 化合物的制备：将叶酸与二环己基碳二酰亚胺溶于二甲基亚砜中，于50~60 ℃下活化6~8小时，再加入烯丙基胺和催化剂4-二甲氨基吡啶，室温反应24~36小时，过滤，滤液用乙酸乙酯沉淀，干燥，即得化合物；其结构式为：

叶酸与二环己基碳二酰亚胺的摩尔比为1:1~1:1.1；

叶酸与烯丙基胺的摩尔比为1:1.5~1:1.7；

叶酸与催化剂4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1.5~1:1.7；

(4) 化合物的制备：以偶氮二异丁腈为引发剂，在二甲基亚砜中，在55~60 ℃下化合物与RAFT试剂聚合12~24小时；再加入N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺和偶氮二异丁腈的DMSO溶液，继续聚合24~36小时，然后用乙酸乙酯沉淀，干燥，即得化合物；其结构式为：

RAFT试剂为2-十二烷三硫酯基-2-甲基丙酸，其结构式为：

化合物与RAFT试剂的摩尔比为10:1 ~20:1。

化合物与N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的摩尔比为1:2~1:3。

引发剂偶氮二异丁腈的用量为化合物、RAFT试剂及N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺总质量的5 %~10 %。

(5) 目标化合物的制备：以二甲基亚砜为介质，引发剂偶氮二异丁腈为引发剂，在氮气保护下，化合物与化合物在55~60 ℃下反应24~48小时，反应液用乙酸乙酯沉淀三次，干燥，即得。其结构式为：

引发剂偶氮二异丁腈的用量为化合物与化合物总摩尔量的5 %~10 %。

图1为本发明制备的含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的核磁共振氢谱。通过核磁共振氢谱分析可以得出，化学位移在5.78 ppm和6.18 ppm为缩醛上的特征峰-CH-和苯环上的H，化学位移在3.70 ppm和2.91 ppm左右会出现HPMA上的特征峰-CH-(和-OH相连)和-CH₂(和-NH-相连)，化学位移在6.67 ppm、7.65 ppm和8.68 ppm为叶酸上的苯环上的两个H和杂环上的一个H，核磁共振氢谱说明用上述方法制备的共聚产物与设计的共聚物结构一致，表明成功合成了该共聚物。

三、两亲共聚物的抗肿瘤活性

1、载药聚合物胶束的制备及表征

（1）共聚物胶束的制备

本实验采用透析法制备聚合物胶束。称取10 mg两亲性聚合物溶于2 mL N,N′-二甲基甲酰胺中，当聚合物完全溶解，缓慢滴加10 mL去离子水，溶液会出现蓝色乳光并形成胶束。将上述溶液装入透析袋(MWCO=3500)后置于去离子水中透析，两天后取出胶束溶液，用容量瓶定容至10 mL，所得胶束溶液浓度即为1 mg/mL。

（2）载药聚合物胶束的制备

载药聚合物胶束的制备：将10 ~20 mg两亲性聚合物和1~2 mg阿霉素溶于l ~2 mLDMF中，搅拌2~4小时，在室温缓慢地滴加10~20 mL去离子，继续搅拌过夜，然后在去离子水中透析24~48小时，得到载药胶束溶液。

载药聚合物胶束的表征：用荧光探针技术测定临界胶束浓度CMC，当胶束浓度高于CMC时，溶液中开始形成胶束，疏水性芘荧光探针就会进入胶束疏水内核而且分散于其中，此时荧光光谱就会发生突变，通过这个突变点就可以确定CMC值为0.54 mg/L (聚合物)、0.62 mg/L (聚合物)，符合变化范围。用纳米粒径仪对上述制备的聚合物载药胶束的粒径及粒径分布进行检测，粒径大约115 nm左右。此外，采用透射电镜(TEM)观察了胶束的形貌为纳米级的小球（见图2）。综上所述，我们成功制备了纳米级的具有靶向的载药的胶束，有望在抗肿瘤药物方面有更好的应用前景。

2、体外抑制肿瘤细胞生长实验

采用四氮唑盐还原法(MTT)对Hela细胞株进行试验：取处于生长对数期的Hela细胞，将细胞浓度调为2×10⁴个／mL，在96孔培养板中加入90 μL/孔，边缘孔用无菌PBS填充。在5 % CO₂，37 ℃孵育，培养箱中放置待贴壁后再加药。对于本发明高分子聚合物载阿霉素无叶酸胶束、载阿霉素有叶酸胶束和游离阿霉素（DOX），均分别设定浓度为0.01、0.1、0.05、1、5、10μg/mL 6个梯度。加药后细胞在温度37 ℃二氧化碳培养箱内继续分别培养24小时后，取出先离心，后弃去96孔板内的上清培养液，小心用PBS冲洗2~3遍后，每孔加人20 ??L MTT(四氮唑，5 mg/mL，即0.5 % MTT)溶液，置于37 ℃二氧化碳培养箱内继续培养4小时。终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入150μL的DMSO，置摇床上低速振荡10分钟，使结晶物充分溶解。在酶标仪570 nm测定各孔的吸光OD值。测试结果见表1。细胞生长抑制率按以下公式计算：

抑制率=[(1－实验组平均OD值)/对照组平均OD值]×100％

由实验结果我们可以看出，相比于游离的阿霉素，具有靶向基团叶酸的药物载体有更好的癌细胞杀伤力，不含叶酸的药物载体对癌细胞的抑制率最弱。

3、体外模拟药物的水解、释放实验

通过紫外分光光度计测定其在292 nm处的吸光度并计算其水解率。取两份10 mL聚合物胶束，分别置于100 mL的pH 7.4 (100 mM)和pH 5.0 (100 mM)的缓冲溶液中开始透析，按照一定的时间间隔取样，并测其紫外吸收，再与最终滴加了2~3滴浓HCl时的吸光度进行比较。测得其在pH 7.4、pH 5.0环境下的水解率分别为18.4 %和80.5 %（见表2）。实验结果表明了在pH 5.0的微酸性环境下，共聚物胶束的水解效果更好。

（3）载药胶束的药物释放率

通过荧光分光光度计测定阿霉素在580 nm处的强度，计算载药胶束的药物释放率。取两份10 mL载药聚合物胶束，分别置于100 mL的pH 7.4 (100 mM)和pH 5.0 (100 mM)的缓冲溶液中，透析24小时，按照一定的时间间隔取样，并测紫外吸收，再与聚合物中负载的阿霉素进行比较。测得其在pH 7.4、pH 5.0环境下的最终释放率分别为26.1 %和72.5 %（见表3），说明了在pH 5.0时的释放出阿霉素的效果更好。

综上所述，本发明的共聚物将三甲氧基苯甲醛和活化了的叶酸与N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的抗肿瘤活性进行协同，进一步促进了对肿瘤的抑制作用；嵌段共聚物中存在智能缩醛键，使得在酸性环境下，当药物载体到达肿瘤靶向部位之后载体会缓慢释放出小分子药物阿霉素，这不仅降低了药物毒性，还能在肿瘤细胞内智能释放抗癌药物；共聚物中有靶向分子叶酸，使得药物能够更好地识别肿瘤细胞；共聚物中的高分子载体HPMA的存在，使共聚物体现出良好的生物相溶性，从而减少了对正常组织的伤害，所以在制备抗肿瘤药物方面具有很好的应用前景。

附图说明

图1为本发明制备的含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的核磁共振氢谱。

图2为本发明胶束载体的透射电镜图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明高分子共聚物的合成及结构表征作进一步的说明。

实施例1

(1) 化合物的制备：称取1.1 g的 2,4,6-三甲氧基苯甲醛与1.9 g 1.1.1-三羟甲基乙烷溶于30 mL四氢呋喃中，加入4 g活化了的4 A分子筛，待完全溶解后再加入0.13 g对甲苯磺酸作为催化剂，室温下反应24小时，抽滤除去分子筛，滤液浓缩后溶于二氯甲烷中，用pH=8.0的磷酸缓冲溶液洗涤三次，旋蒸除去溶剂，干燥，得到1.42 g白色固体，产率为89.3%；

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃); δ 0.70 (3H, s, -C H ₃), 3.76 (2H, s, -C H ₂-OH), 3.80 (3H, s, -OC H ₃), 3.82 (6H, s, -OC H ₃), 3.92 (2H, s, -C H ₂-C-CH₃), 4.16 (2H, d, -C H ₂-), 5.99 (1H, s, -C H ), 6.10 (2H, s, phenyl-group). ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃): δ 17.5, 33.8, 55.2, 55.8, 70.5, 91.0, 97.0, 106.8, 159.4, 161.9。

(2) 化合物的制备：0.5 g化合物溶于50 mL二氯甲烷中，加入0.38 g三乙胺，在冰浴下用恒压漏斗缓慢的滴入0.25 mL甲基丙烯酰氯，反应24小时，反应液用pH等于8.0的磷酸缓冲溶液洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，再用硅胶柱层析（乙酸乙酯:石油醚（v/v）=1:8~1:10）分离纯化，得到0.38 g白色固体，产率为61.8%；

¹H NMR(400 MHz, CDCl₃); δ 0.83 (s, 3H,-C H ₃), 1.97 (s, 3H,-C H ₃), 3.63 (d, 2H,-O-C H ₂-C-CH₃), 3.79 (s, 3H,-OC H ₃), 3.83 (s, 6H,-OC H ₃,), 4.04 (d, 2H,-O-C H ₂-C-), 4.62 (s, 2H, -C H ₂-OOC-), 5.56 (s, 1H,=C H H), 5.98 (s, 1H,=CH H ), 6.09 (s, 2H, phenyl-group), 6.13 (s, 1H,-C H ). ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃): δ 16.9, 18.3, 34.1, 55.3, 55.9, 67.3, 73.7, 91.0, 96.9, 107.1, 125.2, 136.5, 159.7, 161.9, 167.4。

（3）化合物的制备：将0.442 g叶酸溶于10 mL的二甲基亚砜中，用206 mg二环己基碳二亚胺在55 ℃下活化叶酸6小时，再加入85.5 mg烯丙基胺，108.5 mg 4-二甲氨基吡啶作为催化剂，在室温反应24小时；过滤，滤液用乙酸乙酯沉淀三次，干燥，得0.43 g黄色固体，产率为89.6 %；

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.62 (s, 1H, folic acid–C H – ), 7.61 (d, J = 8.6 Hz, 2H, –CH₂NHC₆ H ₂H₂CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO–), 6.64 (d, J = 8.6 Hz, 2H, –CH₂NHC₆H₂ H ₂CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO–), 5.88 (m, 1H, –NHCH₂C H =CH₂), 5.28 (dd, J = 27.0, 14.0 Hz, 2H, –NHCH₂CH=C H ₂), 4.46 (s, 2H, –C H ₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO–), 4.19 (t, J = 7.3 Hz, 1H, –CH₂NHC₆H₄CONHC H (COOH)CH₂CH₂CO–), 3.41 (d, J = 7.0 Hz, 2H, –NHC H ₂CH=CH₂), 2.25 (t, J = 7.4 Hz, 2H, –CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂C H ₂CO–), 1.92 (m, 2H, –CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)C H ₂CH₂CO–)。

(4) 化合物的制备：0.1 g化合物溶于1 mL的二甲基亚砜中，加入10 mg引发剂AIBN(偶氮二异丁腈)和10 mg RAFT试剂，在60℃下聚合12小时，用针管加入0.1 g N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)的DMSO溶液并补加20mg AIBN，继续在60℃下反应24小时，用乙酸乙酯沉淀三次，干燥。

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ, ppm): 7.28 (–NH–), 6.19 (–CHC₆ H ₂(OCH₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 5.79 (–CHC₆H₂(OCH₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 4.76 (CH₃CH(OH)CH₂NH– of HPMA), –CHC₆H₂(OCH ₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd and CH₃CH(OH)CH₂NH– of HPMA), 2.91 (CH₃CH(OH)CH ₂NH– of HPMA), 1.42-1.91 (–CH ₂– of polymer backbone), 0.69–1.33 (–CH ₃)。

(5) 目标化合物的制备：将0.1g化合物和50 mg化合物与加入到Shleck瓶中，再加入1.5 mL二甲基亚砜中，加入15 mg (10%, wt)引发剂偶氮而异丁腈(AIBN)，来回抽真空充氮气循环3~5次，用封口膜密封后保持温度大约在55℃左右聚合24小时，反应液用乙酸乙酯沉淀三次除去没反应的小分子物质，过滤，干燥。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6）: δ 8.68 (–C H – of folic acid heterocyclic), 7.65 (–CH₂NHC₆ H ₂H₂CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 6.95-7.47 (–N H –), 6.67 (–CH₂NHC₆H₂ H ₂CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 6.18 (–CHC₆ H ₂(OCH₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 5.78 (–C H C₆H₂(OCH₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 4.75 (CH₃CH(O H )CH₂NH– of HPMA), 4.39-4.49 (–C H ₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid ), 4.26 (–CH₂NHC₆H₄CONHC H (COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 3.59-4.17 (–CHC₆H₂(OC H ₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd and CH₃C H (OH)CH₂NH– of HPMA), 3.19-3.47 （–NHC H ₂CH)– and H₂O, 2.91 (CH₃CH(OH)C H ₂NH– of HPMA), 2.25 (–CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂C H ₂CO– of folic acid), 1.89 (–CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)C H ₂CH₂CO– of folic acid), 1.41-1.79 (–CH ₂– of polymer backbone), 0.41–1.18(–C H ₃)。

化合物： m（叶酸的含量）= 16 mol %，n（HPMA的含量）= 66mol %, o（缩醛的含量）= 18 mol %；Mn = 1.2×10⁴，Mw/Mn = 1.14。

实施例2

化合物~的制备：同实施例1；

目标化合物的制备：将0.12 g 化合物与50 mg化合物加入到Shleck瓶中，再加入1.5 mL二甲基亚砜中，加入15 mg (10 %, wt)引发剂偶氮而异丁腈(AIBN)，来回抽真空充氮气循环3~5次，用封口膜密封后保持温度大约在55 ℃左右聚合24小时，反应液用乙酸乙酯沉淀三次除去没反应的小分子物质，过滤，干燥，得0.14g黄色聚合物，产率为82.3 %。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6）: δ 8.68 (–C H – of folic acid heterocyclic), 7.67 (–CH₂NHC₆ H ₂H₂CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 6.95-7.47 (–N H –), 6.68 (–CH₂NHC₆H₂ H ₂CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 6.18 (–CHC₆ H ₂(OC

H₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 5.78 (–C H C₆H₂(OCH₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 4.75 (CH₃CH(O H )CH₂NH– of HPMA), 4.39-4.49 (–C H ₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid ), 4.26 (–CH₂NHC₆H₄CONHC H (COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 3.57-4.17 (–CHC₆H₂(OC H ₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd and CH₃C H (OH)CH₂NH– of HPMA), 3.19-3.47 （–NHC H ₂CH)– and H₂O, 2.92 (CH₃CH(OH)C H ₂NH– of HPMA), 2.25 (–CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂C H ₂CO– of folic acid), 1.89 (–CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)C H ₂CH₂CO– of folic acid), 1.42-1.79 (–CH ₂– of polymer backbone), 0.42–1.15 (–C H ₃)。化合物：m（叶酸的含量）= 12 mol %，n（HPMA的含量）= 68 mol %, o（缩醛的含量） =20 mol %；Mn = 1.4×10⁴，Mw/Mn = 1.17。

实施例3

化合物~的制备：同实施例1；

目标化合物的制备：将0.1 g 化合物与60 mg化合物加入到Shleck瓶中，再加入1.5 mL二甲基亚砜，15 mg (10%, wt)引发剂偶氮而异丁腈(AIBN)，来回抽真空充氮气循环3~5次，用封口膜密封后保持温度大约在55℃左右，RAFT聚合24小时，反应液用乙酸乙酯沉淀三次除去没反应的小分子物质，过滤，干燥。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6）: δ 8.68 (–C H – of folic acid heterocyclic), 7.66 (–CH₂NHC₆ H ₂H₂CONHCH(COOH) CH₂CH₂CO– of folic acid), 6.95-7.47 (–N H –), 6.67 (–CH₂NHC₆H₂ H ₂CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 6.18 (–CHC₆ H ₂(OCH₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 5.76 (–C H C₆H₂(OCH₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd), 4.76 (CH₃CH(O H )CH₂NH– of HPMA), 4.39-4.49 (–C H ₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid ), 4.26 (–CH₂NHC₆H₄CONHC H (COOH)CH₂CH₂CO– of folic acid), 3.59-4.17 (–CHC₆H₂(OC H ₃)₃ of trimethoxy-benzaldehyd and CH₃C H (OH)CH₂NH– of HPMA), 3.19-3.47 （–NHC H ₂CH)– and H₂O, 2.91 (CH₃CH(OH)C H ₂NH– of HPMA), 2.26 (–CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)CH₂C H ₂CO– of folic acid), 1.89 (–CH₂NHC₆H₄CONHCH(COOH)C H ₂CH₂CO– of folic acid), 1.42-1.79 (–CH ₂– of polymer backbone), 0.41–1.15 (–C H ₃)。

化合物： m（叶酸的含量）= 12 mol %，n（HPMA的含量）= 64 mol %, o（缩醛的含量）= 24 mol %；Mn = 1.3×10⁴，Mw/Mn = 1.16。

Claims

1.一种含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物，是将功能化的三甲氧基苯甲醛和活化的叶酸通过RAFT聚合连接到N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上而形成的高分子嵌段共聚物；其结构如下：

式中，m= 10~16mol %，n= 60~68mol %, o =18~24 mol %；数均分子量Mn = 1.2×10⁴~1.4×10⁴，Mw/Mn = 1.14~1.18。

2.如权利要求1所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，包括以下工艺步骤：

(1) 化合物的制备：以四氢呋喃作溶剂，对甲苯磺酸作为催化剂， 4A分子筛作为吸水剂，使三甲氧基苯甲醛与1,1,1-三羟甲基乙烷以1:2.5~1:3.0的摩尔比在室温下反应24~36小时，抽滤除去4A分子筛后用二氯甲烷溶解，再用pH=8.0的缓冲溶液洗涤，旋干，即得化合物；

(2) 化合物的制备：以二氯甲烷为溶剂，三乙胺为缚酸剂，化合物与甲基丙烯酰氯在-5~5℃下反应24~48小时；反应液用pH=8.0的缓冲溶液洗涤后，再用硅胶柱层析分离纯化，得化合物；

(3) 化合物的制备：将叶酸与二环己基碳二酰亚胺以1:1~1:1.1的摩尔比溶于二甲基亚砜中，于50~60 ℃下活化6~8小时，再加入烯丙基胺和催化剂4-二甲氨基吡啶，室温反应24~36小时，过滤，滤液用乙酸乙酯沉淀，干燥，即得化合物；

(4) 化合物的制备：以偶氮二异丁腈为引发剂，在二甲基亚砜中，首先化合物与RAFT试剂2-十二烷三硫酯基-2-甲基丙酸在55℃~60℃下反应12~24小时；再加入N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的DMSO溶液，继续反应24~36小时，然后用乙酸乙酯沉淀，干燥，即得化合物；

(5) 目标化合物的制备：以二甲基亚砜为介质，偶氮二异丁腈为引发剂，在氮气保护下，化合物与化合物在55℃~ 60 ℃下反应24~48小时，反应液用乙酸乙酯沉淀三次，干燥，即得。

3.如权利要求2所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，2,4,6-三甲氧基苯甲醛与对甲苯磺酸的摩尔比为1:7.2~1:7.5。

4.如权利要求2所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，化合物与甲基丙烯酰氯的摩尔比为1:1.3~1:1.8；化合物与三乙胺的摩尔比为1: 2.0~1: 2.5。

5.如权利要求2所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，叶酸与烯丙基胺的摩尔比为1:1.4~1:1.7；叶酸与催化剂4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1.4~1:1.7。

6.如权利要求2所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，化合物与RAFT试剂的摩尔比为10:1 ~20:1。

7.如权利要求2所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，引发剂偶氮二异丁腈的用量为化合物、RAFT试剂及N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺总摩尔量的5 %~10 %。

8.如权利要求2所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，化合物与N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的摩尔比为1:2~1:3。

9.如权利要求1所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物作为阿霉素药物载体的应用。

10.如权利要求9所述含有缩醛键的双重靶向的两亲共聚物作为抗肿瘤药物阿霉素载体的应用，其特征在于：将10 ~20 mg两亲性聚合物和1~2 mg阿霉素同时溶于l ~2 mLDMF中，搅拌2~4小时，在室温缓慢滴加10~20 mL去离子，继续搅拌过夜，然后在去离子水中透析24~48小时，得到载药胶束溶液。