CN104870006A - 可注射的癌症组合物 - Google Patents

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Abstract

本文提供了可经由可注射的乳剂递送至患者的治疗前体药物组合物，所述治疗前体药物组合物包含连接至被选择的蛋白酶有效且特异地裂解的肽的治疗药物，所述选择的蛋白酶与患者中的包括例如前列腺癌细胞、肝癌细胞或乳腺癌细胞的癌细胞的细胞增生性紊乱有关。本文还提供了用所述治疗前体药物组合物治疗包括癌症的细胞增生性紊乱的方法。

Description

可注射的癌症组合物
优先权
该申请要求美国临时专利申请号61/714,662的优先权，通过引用特此将其全文并入。
序列表
本申请包括序列表，所述序列表已以ASCII格式电子地提交并且通过引用特此将其全文并入。于2013年10月14日生成的所述ASCII副本被命名为GENS0004PCT_SL.txt并且大小为113,192字节。
发明领域
该发明大体上涉及在患者中靶向激活并递送治疗药物至产生用于某些类型的肿瘤相关细胞或癌症细胞的选择的蛋白质(即，蛋白酶)或标志物的细胞，所述肿瘤相关细胞或癌症细胞例如，成纤维细胞活化蛋白(FAP)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、前列腺特异性抗原(PSA)和人类腺体激肽释放酶2(hK2)。该发明还涉及包含前体药物的可注射乳剂组合物，所述前体药物包含被连接至含有对所选择的蛋白质例如FAP、PSMA、PSA和hK2特异的裂解位点的氨基酸序列的治疗剂。该发明还涉及用于利用包含前体药物的可注射乳剂组合物对受试者成像的方法和组合物，所述前体药物包含被连接至含有对所选择的蛋白质特异的裂解位点的氨基酸序列的治疗剂。
发明背景
已设计肽前体药物来向患者中的与细胞增生性紊乱相关的细胞、肿瘤相关细胞(例如，肿瘤相关内皮细胞和基质细胞)、和癌症细胞直接地递送治疗药物。这些新颖的肽前体药物包含经特别地设计以被由与细胞增生性紊乱相关的细胞、癌症细胞或与肿瘤相关的细胞表达的某些蛋白质裂解的裂解位点。例如，美国专利号7,906,477、7,053,042和8,450,280描述了被人类腺体激肽释放酶2(hK2)特异地裂解的肽前体药物组合物；美国专利号7,767,648和7,468,354描述了被前列腺特异性膜抗原(PSMA)特异地裂解的肽前体药物组合物；美国专利号6,265,540、6,504,014、6,410,514、6,545,131、和7,635,682描述了被前列腺特异性抗原(PSA)特异地裂解的肽前体组合物；以及美国专利申请号12/087,398和13/471,316描述了被成纤维细胞活化蛋白(FAP)特异地裂解的肽前体药物组合物。
可在本文描述的肽前体药物中使用的治疗药物包括某些可包含伯胺的治疗药物(参见，例如，美国专利申请号13/471,316)。例如，已在多个发布的专利和专利申请中描述了倍半萜内酯诸如毒胡萝卜素(thapsigargin)和thapsigargicin、及其衍生物和类似物作为在对前列腺和乳腺癌特异的肽前体药物中治疗活性成分的用途。参见，例如，美国专利号7,906,477、7,767,648和6,545,131。
本文描述的前体药物还可在联合的方法中用来对细胞增生性紊乱和癌症成像、诊断以及靶向治疗。例如，美国专利申请号13/257,131描述了利用PSA-、PSMA-和hK2-特异的肽前体药物对受试者成像的方法和组合物。
目前公开的治疗药物化合物及其前体药物(例如，肽前体药物)、及其变化形式(例如，具有可检测的标记或成像化合物的前体药物)，本文有时统称为“活性化合物”。
本文描述的活性化合物在水中具有有限的溶解度。由于其有限的溶解度，本发明的活性化合物的水溶液需要增溶剂来溶解活性化合物。在药物制剂中通常地使用的药物增溶剂包括水溶性/可混溶的有机溶剂，诸如乙醇；表面活性剂，诸如聚山梨醇酯80或克列莫佛(Cremophor)；或环糊精等。但是，由于几乎所有这些增溶剂与包括在注射位置处的疼痛和刺激、超敏性或过敏性反应的某些毒性有关，所以这些制剂对于本文描述的活性化合物的基于注射的递送是不令人满意的。因此，对使本发明的活性化合物溶解至所期望的浓度而不使用任何水溶性或毒性增溶剂的可注射乳剂组合物存在需求。
本发明的活性化合物在水中也是不稳定的。在水性环境中，本发明的活性化合物当在60℃下贮存时，在7天内能降解多达约12％或更多。对于待用作药物产品的制剂，在诸如室温(25-30℃)或冷藏温度(2-8℃)的常规贮存温度下在1-2年内，制剂中的原料药的降解必须小于约10％。
因此生成本发明的活性化合物的水包油乳剂以使得本发明的活性化合物可长时间贮存并以可注射的方式为患者提供是期望的。
本发明的优势包括便于使用。本发明的可注射的乳剂组合物可作为冻干的产品贮存及运输，并在患者施用的地点用水重悬。另外，本文描述的可注射的乳剂组合物允许本发明的活性化合物以适于注射的浓度施用，与输注不同。另外地，可在单个即用型小瓶中贮存和运输本文描述的可注射乳剂化合物，用于施用只须向所述小瓶添加水，对于患者或药物的施用者而言不需要精确的混合或成分的制备。最后，本发明的活性化合物的冻干制剂是化学上稳定的。
基于本公开内容，本发明的其它优势对于本领技术人员将是明显的。
发明概述
本发明提供了可通过可注射的乳剂递送给患者的治疗前体药物组合物，所述治疗前体药物组合物包含连接至被所选择的蛋白酶有效地且特异地裂解的肽的治疗药物，所述所选择的蛋白酶与患者中的细胞增生性紊乱和/或癌细胞例如，前列腺癌细胞、肝癌细胞或乳腺癌细胞、或肿瘤相关细胞相关。键合基本上抑制了治疗药物的非特异的毒性，并且肽的裂解释放药物，活化药物或恢复其非特异的毒性。
本发明还提供了以安全且商业上可行的可注射乳剂形式的治疗前体药物(即，活性化合物)，其(a)无任何水溶性的且有毒的增溶剂，诸如有机溶剂或表面活性剂；(b)足够地稳定以提供可接受的货架寿命；(c)包含小的油滴并且可过滤通过0.2微米的滤器；(d)是透明或半透明的；以及(e)是可冻干的。
本发明还提供了用于治疗患有细胞增生性紊乱或有患有此类紊乱的风险的受试者中的此类紊乱的方法，所述细胞增生性紊乱包括涉及例如FAP、PAMA、PSA或hK2的生成的那些细胞增生性紊乱。该方法包括对受试者施用治疗有效量的本发明的活性化合物。在该实施方案中，可通过注射施用活性化合物。
在一方面，本发明以包含含有对选择的蛋白酶例如FAP、PSMA、PSA或hK2，或具有选择的蛋白酶的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列的肽为特征。本发明的肽优选地长度不多于20个氨基酸、更优选地长度不多于10个氨基酸、并且还更优选地长度为约6个氨基酸、长度为约5个氨基酸或长度为约4个氨基酸。本发明的氨基酸序列可以是线性的和/或可具有侧链键合。
在一个实施方案中，该肽还包含附接至肽的N-末端的封端基团，其中封端基团抑制对该肽的内肽酶活性。在一些实施方案中，封端基团选自由乙酰基、吗啉代羰基、苄基氧羰基、戊二酰基、和琥珀酰基取代基组成的组。在另一个实施方案中，封端基团包含乙酰基、吗啉代羰基、苄基氧羰基、戊二酰基或琥珀酰基取代基中的一种或更多种。
根据一方面，本文提供了以包含前体药物的可注射乳剂形式的组合物，所述前体药物包含治疗活性药物以及包含具有对具有所选择的蛋白酶例如FAP、PSMA、PSA、和hK2的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列的肽，其中所述肽的长度为20个或更少个氨基酸，并且其中所述肽被连接至所述治疗活性药物以抑制所述药物的治疗活性，并且其中所述治疗活性药物在被具有所选择的蛋白酶的蛋白水解活性的酶蛋白水解之后从所述肽裂解。
在一个实施方案中，治疗活性药物具有伯胺。在一个实施方案中，肽被直接地连接至治疗药物。在另一个实施方案中，肽被直接地连接至药物上的伯胺基团。
在另一个实施方案中，肽通过接头被连接至治疗药物。在相关的实施方案中，接头包含氨基酸序列、含伯胺或羧基的烷基基团、烯基基团或芳烃基(arenyl)基团中的一种或更多种。
在一个实施方案中，治疗活性药物为倍半萜内酯。在该实施方案的变化形式中，治疗活性药物为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。在该实施方案的另外的变化形式中，毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物包含伯胺。在该实施方案中，优选的衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。另外，在该实施方案中，另一个优选的衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
在一个实施方案中，治疗活性药物抑制肌浆网和内质网Ca2+-ATP酶(SERCA)泵。
在一个实施方案中，治疗活性药物具有对FAP生成组织、PAMA生成组织、PSA生成组织、或hK2生成组织至多20μM的LC50。在相关的实施方案中，治疗活性药物具有对FAP生成组织、PAMA生成组织、PSA生成组织、或hK2生成组织小于或等于2.0μM的LC50。
根据本发明的一方面，本文提供了制备前体药物的方法，该方法包括连接治疗活性药物和肽的步骤，所述肽包含具有对具有选择的蛋白酶例如FAP、PSMA、PSA或hK2的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列，其中所述肽的长度为20个或更少个氨基酸，并且其中所述肽被连接至所述治疗活性药物以抑制所述药物的治疗活性，并且其中所述治疗活性药物在被具有所选择的蛋白酶的蛋白水解活性的酶蛋白水解之后从所述肽裂解。
根据一方面，本文提供了治疗细胞增生性紊乱的方法，所述方法包括对患有细胞增生性紊乱的受试者施用治疗有效量的本文描述的组合物。
在一个实施方案中，紊乱是良性的。在另一个实施方案中，紊乱是恶性的。在该实施方案中，恶性紊乱可以是上皮癌。另外，在该实施方案中，恶性紊乱可进一步为表达选择性地裂解本发明的活性化合物的蛋白酶(例如PSA、hK2、FAP或PSMA)的任何上皮癌，或在其脉管系统中表达选择性地裂解本发明的活性化合物的蛋白酶(例如PSA、hK2、FAP或PSMA)的任何上皮癌。
在另一个实施方案中，恶性紊乱为肉瘤。例如，在该实施方案中，恶性肿瘤可为癌性的骨、软骨、脂肪、肌肉、血管、或造血组织。在该实施方案中，恶性紊乱可进一步为表达选择性地裂解本发明的活性化合物的蛋白酶(例如PSA、hK2、FAP或PSMA)的肉瘤。
在仍然另一个实施方案中，紊乱可以是炎症性状况(例如，风湿性关节炎)。
在本发明的该实施方案的一方面，本文提供了对选择的蛋白酶生成组织例如FAP生成组织、PSMA生成组织、PSA生成组织、和hK2生成组织成像的方法，所述方法包括：a)对患有或疑似患有与生成所选择的蛋白酶有关的细胞增生性紊乱的受试者施用本发明的连接至亲脂性成像标记的肽；b)允许经过足够的时间段以允许所述肽被所选择的蛋白酶裂解；c)允许亲脂性成像标记在组织中积累；d)允许未裂解的肽从受试者清除以提供成像标记的可靠的成像；以及e)为了诊断的目的对所述受试者成像。
在本发明的一个另外的方面，方法为对生成所选择的蛋白酶的软组织转移癌和/或骨转移癌成像的方法。
在本发明的另一个另外的方面，本发明的活性化合物可被用来对细胞增生性紊乱或癌症成像和诊断。在该实施方案中，优选的衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。在该实施方案中，另一个优选的衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
在本发明的另外的方面，细胞增生性紊乱被成像并被靶向。在一个可选的实施方案中，细胞增生性紊乱为癌症。在该实施方案的另外的方面，被成像并被靶向的癌症为上皮癌。在本发明的另一个方面，细胞增生性紊乱可表达PSA、PSMA、hK2或FAP。
在本发明的该实施方案的另一个另外的方面，被成像并被靶向的癌症为肉瘤。在本发明的该方面，恶性紊乱可进一步为表达PSA、PSMA、hK2或FAP的肉瘤。
另外，目前公开的主题提供了诸如PSA、FAP、hK2或PSMA的特定蛋白酶的选择性靶向并且利用蛋白酶的蛋白水解活性来放大成像信号。
附图
图1为精囊蛋白(Semenogelin)I(SEQ ID NO:21-24)和精囊蛋白II(SEQID NO:25-31)的氨基酸系列的一部分，显示了人类激肽释放酶2的裂解位点。
图2为显示由人类腺体激肽释放酶2(hK2)水解的肽的氨基酸序列(以出现顺序分别地SEQ ID NO:144-157)的表(表1)。图2公开“NO2-Y-G-K-A-X1-X2-X3-Dap-F-K(ABZ)”作为SEQ ID NO:485。
图3显示了能被连接至治疗药物的胺基的接头的特定实施方案的一组结构。
图4显示了PSMA激活的毒胡萝卜素前体药物的一个实施方案的结构。图4公开了SEQ ID NO:487。
图5描绘了在从人类胶原I制备的重组人类明胶的8.5kDa片段内的FAP裂解位点的完整图谱。图5以出现顺序分别地公开了SEQ ID NO:221、237、238、222、239、223、240、224、241、242、225、243、226、244、227、245、228、246、229、247、230、248、231、249、232、250、233、251、234、252、235、253、236、和254。
图6描绘了在从人类胶原I制备的100kDa重组人类明胶内的FAP裂解位点的完整图谱。图6以出现顺序分别地公开左栏裂解片段作为SEQ IDNO:358、384、359、385、360、386、361、387、362、388、363、389、364、390、365、391、366、392、367、393、368、394、369、395、370、396、371、397、372、398、373、399、374、400、375、401、376、402、377、403、378、404、379、405、380、406、381、407、382、408、383、和409。图6以出现顺序分别地公开右栏裂解片段作为SEQ ID NO:410、435、411、436、412、437、413、438、414、439、415、440、416、441、417、442、418、443、419、444、420、445、421、446、422、447、423、448、424、449、425、450、426、451、427、452、428、453、429、454、430、455、431、456、432、457、433、458、434、和459。
图7显示了用偶联至氨基酸的羧基基团的12-氨基十二酰基侧链在O-8位置处修饰的毒胡萝卜素类似物的化学结构。
图8为显示12ADT-Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)前体药物(G-202)的连续PSMA水解的示意图。
图9显示了表5，表5提供了本发明的可注射乳剂组合物的一个实施方案的药物动力学参数。
图10显示了对本发明的可注射乳剂组合物的一个实施方案，通过动物比较的浓度相对时间的曲线。
图11显示了对本发明的可注射乳剂组合物的一个实施方案，平均浓度相对时间的曲线。
发明详述
本发明为将治疗药物直接地递送至肿瘤内或肿瘤位置处的靶细胞的可注射乳剂形式的治疗前体药物组合物。虽然治疗药物可对细胞具有非特异的毒性，但是被连接至被诸如PAF、PSMA、PSA和hK2的组织特异的蛋白酶裂解的肽。在一个实施方案中，本发明的治疗前体药物被配制为安全且商业上可行的可注射乳剂组合物，所述可注射乳剂组合物(a)无任何水溶性和有毒的增溶剂，诸如有机溶剂或表面活性剂；(b)足够地稳定以提供可接受的货架寿命；(c)包含小的油滴；(d)可过滤通过0.2微米的滤器；(e)是透明或半透明的；以及(f)是可冻干的。
根据长期以来的专利法惯例，在该申请包括权利要求书中当使用术语“一(a)”“一(an)”和“该(the)”时，指“一个或更多个”。因此，例如，提及“受试者(a subject)”包括多个受试者，除非上下文清楚地是意思相反的(例如，多个受试者)等等。
为了该说明书以及所附的权利要求书的目的，除非另有说明，在所有的实例中，在说明书和权利要求书中使用的所有表示量、大小、尺寸、比例、形状、制剂、参数、百分比、数量、特征、及其它数值的数字要理解为由术语“约”修饰，即使术语“约”可能未明确地与该值、量或范围一起出现。因此，除非相反地指示，在以下说明书和所附的权利要求书中列出的数值参数不是精确的且不需要是精确的，但是如所期望的可以是接近的和/或较大或较小，反映了耐受性、转换因子、四舍五入、测量误差等，以及本领域技术人员已知的其它因素，取决于旨在通过目前公开的主题获得的期望特性。例如，当术语“约”指值时能够用意在于包括与特定的量在一些实施方案中+/-100％、在一些实施方案中+/-50％、在一些实施方案中+/-20％、在一些实施方案中+/-10％、在一些实施方案中+/-5％、在一些实施方案中+/-1％、在一些实施方案中+/-0.5％、以及在一些实施方案中+/-0.1％的差异，因为这样的差异对于执行所公开的方法或使用所公开的组合物是适当的。
另外，当术语“约”与一个或更多个数字或数值范围关联使用时，应理解为指所有此类数字，包括范围内的所有数字以及通过延伸所列出的数值以上和以下的边界来涉及的修改。通过端点描述的数值范围包括归入该范围的所有数字例如全部的整数，包括其分数(例如，1至5的描述包括1、2、3、4和5，以及其分数，例如1.5、2.25、3.75、4.1等)以及在该范围内的任何范围。
除非另有限定，本文使用的所有技术和科学术语具有与由该发明所属的技术领域的普通技术人员通常所理解的相同的意思。尽管与本文描述的机器、材料、和方法相似或等同的任何机器、材料、和方法可被用来实践或测试本发明，现在描述了优选的机器、材料和方法。本文提到的所有出版物被引用是为了描述并公开在出版物中报道并且可与本发明的多种实施方案关联使用的细胞系、方案、试剂和载体的目的。本文中没有事物被解释为承认本发明由于之前的发明的优点而无权早于此类公开内容。
如本文使用的术语“成纤维细胞活化蛋白-α”(FAP)指成纤维细胞活化蛋白-α以及具有与FAP相同或基本上相同的蛋白水解裂解特异性的其它蛋白酶。如本文使用的，术语“侧链”指如在蛋白质中存在的本领域已知的氨基酸的侧链，包括通过氨基酸侧链的翻译后修饰生成的那些。
如本文使用的，术语“前列腺特异性膜抗原”(PSMA)意思是前列腺特异性膜抗原，以及具有与前列腺特异性膜抗原相同或基本上相同的蛋白水解裂解特异性的所有其它蛋白酶。
如本文使用的，术语“人类腺体激肽释放酶2”(hK2)意思是人类腺体激肽释放酶2，以及具有与hK2相同或基本上相同的蛋白水解裂解特异性的其它蛋白酶。
如本文使用的，术语“前列腺特异性抗原”(PSA)意思是前列腺特异性抗原，以及具有与前列腺特异性抗原相同或基本上相同的蛋白水解裂解特异性的所有其它蛋白酶。
如本文使用的，“足够地有毒的”指表现出对细胞非特异的毒性的治疗药物，LC50浓度(即，杀死克隆原细胞50％所需的浓度)比本发明的前体药物的LC50浓度低至少3倍，更优选地低至少20倍，并且治疗药物最优选地具有比本发明的前体药物的LC50浓度低至少100倍的LC50浓度。
术语“接触”指使组织暴露至本发明的肽、治疗药物或前体药物，以使得其能够有效地抑制细胞过程、或杀死细胞。
“肽”或“多肽”意思是氨基酸的任何链，无论长度或翻译后修饰(例如，糖基化或磷酸化)。如本文所书写的，根据标准惯例展示氨基酸序列，即肽的氨基末端在左侧，并且羧基末端在右侧。“氨基酸序列”以及诸如“多肽”或“蛋白质”的术语并非旨在将氨基酸序列限于与所描述的蛋白质分子相关的完整的、原始的氨基酸序列。
如本文使用的术语“酸化剂”指用来向下调整乳剂的pH以增强乳剂的稳定性的酸性的剂，诸如盐酸或硫酸。
如本文使用的术语“碱化剂”指用来向上调整乳剂的pH以增强乳剂的稳定性的碱性的剂，诸如氢氧化钠或优选地精氨酸。
如在该发明中使用的术语“抗氧化剂”主要地指在可注射的产品中使用是安全的的金属离子螯合剂。金属离子螯合剂通过结合至金属离子作为抗氧化剂起作用并且从而降低金属离子对测试物质的氧化反应的催化作用。在该发明中有用的金属螯合剂可包括EDTA、甘氨酸和柠檬酸或其盐。
如在该发明中使用的“防腐剂”指选自包括以下的组的任何防腐剂：甲酚、尼泊金、苯酚、苯扎氯铵、苯甲酸、苯甲酸盐/酯、苯甲醇、氯丁醇、硫柳汞、山梨酸、山梨酸盐/酯、EDTA或其组合；或可由本领域普通技术人员将认识到的任何相似的化合物。
如果组合物中的活性化合物在于适当的条件下贮存至少一个月之后基本上没有化学上降解，则组合物是“化学上稳定的”。在某些实施方案中，在适当的贮存条件(例如，在-20℃、2-8℃、或在室温下)下持续至少3个月，组合物中的完整的活性化合物的浓度降低小于约10％、优选地小于约8％、优选地小于约6％、并且更优选地小于约5％。
如在该发明中使用的术语“冷冻保护剂”指在冷冻期间通过使亚微米大小的液滴在周围环境中保持分离来保护乳剂的任何安全且生物相容的剂。对该发明有用的冷冻保护剂包括但不局限于单糖、双糖、多糖、多元醇、或其混合物，或本领域普通技术人员将认识到的任何其它的相似化合物。例如，在某些实施方案中，冷冻保护剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖、或其混合物。在某些实施方案中，冷冻保护剂为蔗糖、蔗糖和甘露醇的组合、或蔗糖和海藻糖的组合。
如本文使用的术语“乳剂”指水包油乳剂。
如在该发明中使用的术语“可注射的”指成分被药物监管局(例如美国食品药品管理局)同意许可其在注射药物中使用。
如本文使用的术语“卵磷脂”为连接至磷酸的胆碱酯的硬脂酸的甘油二酯、棕榈酸的甘油二酯、和油酸的甘油二酯的天然存在的混合物，通常地称为磷脂酰胆碱。根据美国药典(USP)，卵磷脂为描述丙酮不溶的磷脂的复合混合物的非专用名称，其主要地由与不同量的诸如甘油三酯、脂肪酸、和碳水化合物的其它物质组合的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇组成。在本发明中有用的卵磷脂包括大豆卵磷脂、蛋卵磷脂、氢化的大豆卵磷脂、氢化的蛋卵磷脂、及其组合。在本发明的乳剂中卵磷脂被用作乳化剂。
如本文使用的术语“透光率(％)”为乳剂的透明度的计量并且被限定为在指定波长(例如600nm)处透过样品的入射光的比例。使用以下等式计算透光率：
Τλ＝I÷I0×100
其中I0为入射光的强度并且I为从样品出来的光的强度并且Τλ为透射比。Τλ值能通过UV可见分光光度计在固定波长下容易地测量。通常地使用诸如600nm的可见波长。
乳剂的透光率值与其液滴大小直接地相关并且是本发明的能被用来使该发明的乳剂区别于先前技术的乳剂的一个方面。对于诸如丙泊酚可注射乳剂的先前技术的乳剂，由于这些乳剂的光反射白色和不透明的特性，所以测量的在600nm波长处的透光率值通常地小于5-10％。
如本文使用的术语“中链甘油三酯(MCT)”指能被天然地衍生或合成地生成的另一种类型的甘油三酯油。MCT由通常地长度为约8至约12个碳原子的脂肪酸制成。如同植物油，MCT已被广泛地在可注射乳剂制品中用作需要肠外营养的患者的卡路里来源。此类油是商业上可得的，诸如来自SASOL GmbH,Germany的Miglyol 812、来自Parsippany,New Jersey的Croda,Inc.的CRODAMOL GTCC-PN、或来自Boonton,New Jersey的PVOInternational,Inc.的Neobees M-5油。在本发明中还可使用其它的低熔点中链油。
如本文使用的，如果本发明的乳剂组合物能作为冻干的乳剂在适当的条件下贮存至少3个月，并且重构后不表现出在其平均液滴大小上多于约100％的增加，或者没有相分离、乳油化、或聚集的迹象，则本发明的乳剂组合物是“物理上稳定的”。在某些实施方案中，在适当的贮存条件下(例如，在-20℃、2-8℃、或室温下)持续3个月，本发明的组合物的液滴的平均大小不增加多于约100％、优选地多于约75％、优选地多于约50％、优选地多于约40％、优选地多于约30％、优选地多于约25％、优选地多于约20％、或优选地多于约10％。
如本文使用的，“植物油”包括但不局限于杏仁油、琉璃苣油、黑加仑种子油、玉米油、红花油、芝麻油、棉花籽油、花生油、橄榄油、菜籽油、椰子油、棕榈油、芥花油(canola oil)等等也可使用。所使用的植物油的特定类型(例如大豆油、玉米油、或红花油等)不是关键的，只要其是安全、耐受良好、药学上可接受、化学上稳定的并且能形成具有期望的大小范围的液滴。
作为实例，如本文使用的术语“大豆油”指从大豆提取的精制油。作为另一个实例，如本文使用的“杏仁油”指从杏仁提取的精制油，等等。对于注射使用，在本发明中使用的所有此类油必须通过包括纯度、微生物和内毒素限制的某些质量规范，满足某些药典标准并且在满足cGMP标准的设施中制造。
在某些实施方案中，植物油与MCT油的比率在约2:1至约1:2的范围内，优选地为约1:1。
如本文使用的术语“渗透压调节剂”指蔗糖、甘油、或其混合物。在某些实施方案中，本发明的乳剂具有约300至1000mOsm的渗透压或渗压强度(osmolality)。
术语“抗体”指完整的免疫球蛋白分子，也指能结合表位决定簇的其片段诸如Fab、F(ab’)2、和Fv片段。与本发明的多肽结合的抗体例如FAP、PSMA、PSA或hK2能利用完整的多肽或利用包含感兴趣的小的肽的片段作为免疫抗原来制备。用来免疫动物(例如，小鼠、大鼠或兔)的多肽或寡肽能来源于RNA的翻译、或化学地合成，并且如果需要可缀合至载体蛋白。通常地所使用的化学地偶联至肽的载体包括牛血清白蛋白、甲状腺球蛋白、和钥孔戚血蓝蛋白(KLH)。然后使用经偶联的肽来免疫动物。
术语“生物活性的”指具有天然存在的分子的结构、调节性、或生物化学功能的蛋白质。同样地，“免疫活性的”或“免疫原性的”指天然的、重组的、或合成的蛋白酶(例如，FAP、hK2、PSMA或PSA)，或其任何的寡肽在合适的动物或细胞中引起特定的免疫反应并与特异的抗体结合的能力。
“保守氨基酸取代”和“保守变化”是预计最少地干扰原始蛋白质的特性的那些取代和变化，例如，蛋白质的结构以及特别地功能被保留并且不被此类取代显著地改变。保守的氨基酸取代通常地保持(a)取代的区域中的多肽骨架的结构，例如β折叠或α螺旋构象；(b)在取代的位点处分子的电荷或疏水性；和/或(c)大部分的侧链。
“可检测的标记”指能生成可测量的信号并且共价地或非共价地连接至多核苷酸或多肽的报告分子或酶。
术语“基本上纯化的”指从核酸或氨基酸序列的天然环境移出并且被分离或分开，并且至少约60％、优选地至少约75％、优选地至少约80％、并且最优选地至少约90％地不含所述核酸或氨基酸序列天然地与其相关的其它成分的核酸和氨基酸序列。
术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”指治疗措施和预防性(prophylactic)或预防性(preventative)措施两者，其中目的为预防或减缓(减轻)不期望的生理上的改变或紊乱，所述不期望的生理上的改变或紊乱诸如包括癌症的增生性紊乱的发展或扩散。为了该发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不局限于可检测到的或无法检测到的症状的缓解、疾病的程度的降低、疾病的稳定化(例如，不恶化)状态、疾病进程的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和、以及缓解(部分的或全部的)。“治疗(treatment)”还可指与如果不接受治疗预期的存活相比延长的存活。需要治疗的那些包括已经患有状况或疾病的那些，以及倾向于患有或正在患上状况或紊乱的那些或其中状况或紊乱待预防的那些。术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”、或“治疗(treatment)”包括预防性例如预防疾病的治疗、和姑息治疗。
短语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”意思是(i)本发明的活性化合物治疗或预防本文描述的特定疾病、状况、或紊乱，(ii)减弱、改善、或消除本文描述的特定疾病、状况、或紊乱的一种或更多种症状，或(iii)预防、减少或延迟本文描述的特定疾病、状况、或紊乱的一种或更多种状况的发生的量。减少不必是完全的。即在症状上部分的减少是预期的。另外，症状不需要被永久性地减少。在至少一种症状上暂时的减少是被本发明预期的。在癌症的情况下，治疗有效量的药物可减少癌症细胞或肿瘤相关细胞的数目；减小肿瘤的大小；抑制(例如，减缓至某个程度并且优选地停止)癌症细胞浸润进入周围器官；抑制(例如，减缓至某个程度并且优选地停止)肿瘤转移；将肿瘤生长抑制至某种程度；显示出在与癌症相关的生物标志物上的改善；和/或使与癌症相关的症状的一种或更多种减轻至某种程度。就药物可阻止生长和/或杀死现存的癌症细胞来说，其可以是抑制细胞生长的和/或细胞毒性的。对于癌症治疗，可例如通过评价疾病进展时间(TTP)和/或确定响应率(RR)来测量效力。
术语“癌症”和“癌性的”指或描述哺乳动物中通常地以不受调控的细胞生长为特征的生理状况。“肿瘤”包括一种或更多种癌性的细胞。癌症的实例包括但不局限于癌、黑色素瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、以及白血病或淋巴性恶性肿瘤。此类癌症的更多的特定的实例包括但不局限于上皮癌，乳房、子宫颈、肝、卵巢、前列腺、肺、结肠和直肠、胰腺、胃或肾的癌症。癌症的另外的实例在美国申请号12/087,398中被提供并且在本领域中被众所周知。
术语“细胞增生性紊乱”表示往往表现为与周围组织在形态学上和基因型上两者均不同的恶性的(即，癌性的)以及非恶性的细胞群体，例如，如在增生(诸如良性前列腺增生(BPH))、以及恶性的和良性的新生物中。由于多步骤过程，恶性细胞(即，癌症)可从这些细胞群体发展(但是对于本文描述的发明，其发展是不被要求的)。因此，如本文使用的，“细胞增生性紊乱”包括但不局限于癌症。
如本文使用的术语“与肿瘤有关的细胞”或“肿瘤相关细胞”意思是变成肿瘤团块的部分的未转化的细胞，与癌症细胞自身相对，例如，肿瘤内皮细胞、基质细胞、成纤维细胞或血管内皮的细胞。
如在该申请中使用的术语“前体药物”指与母体药物相比对肿瘤细胞有较小细胞毒性的药物活性物质的前体形式或衍生物形式，并且能被酶促地或水解地激活或转化成更具活性的母本形式。参见，例如Wilman,"Prodrugsin Cancer Chemotherapy",Biochemical Society Transactions,14,375-382页,615th Meeting Belfast(1986)以及Stella等，"Prodrugs:A Chemical Approachto Targeted Drug Delivery,"Directed Drug Delivery,Borchardt等人(编辑),247-267页,Humana Press(1985)。该发明的前体药物包括但不局限于含磷酸盐的前体药物、含硫代磷酸盐的前体药物、含硫酸盐的前体药物、含肽的前体药物、D-氨基酸修饰的前体药物、糖基化的前体药物、含β-内酰胺的前体药物、含任选地取代的苯氧乙酰胺的前体药物或含任选地取代的苯乙酰胺的前体药物、5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿嘧啶前体药物，其能被转化成更具活性的有细胞毒性的游离药物。能衍生成用于在在该发明中使用的前体药物形式的细胞毒性药物的实例包括但不局限于本文描述的那些化学治疗剂。
术语“保护基团”或“Pg”指通常地被用来封闭或保护特定的官能性，而使化合物上的其它官能团反应的取代基。例如，“氨基保护基团”为附接至氨基基团、封闭或保护化合物中的氨基官能性的取代基。合适的氨基保护基团包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(CBz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)。相似地，“羟基-保护基团”指封闭或保护羟基官能性的羟基的取代基。合适的保护基团包括乙酰基和甲硅烷基。“羧基-保护基团”指封闭或保护羧基官能性的羧基基团的取代基。常见的羧基保护基团包括CH2CH2SO2Ph、氰乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰)乙基、2-(对硝基苯基亚磺酰基)乙基、2-(二苯基膦基)-乙基、硝基乙基等。对于保护基团及其使用的一般性描述，参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
术语“动物”指人类(雄性或雌性)、非人类灵长类、伴侣动物(例如，狗、猫和马)、食物来源动物(例如，牛、猪、羊和家禽)、动物园动物、海生动物、鸟、啮齿动物以及其它相似的动物物种。
对于根据目前公开的主题的组合物的成分诸如盐、载体、赋形剂或稀释剂，术语“药学上可接受的”指与组合物中的其它组分相容的成分，由于所述成分可与目前公开的活性化合物组合而不消除化合物的治疗功效，并且适于如本文提供的用于受试者而对对其施用特定化合物的受试者无不适当的不良副作用(包括但不局限于毒性、刺激、和过敏反应)。药学上可接受的成分的实例包括但不局限于任何的标准药物载体，诸如磷酸缓冲盐溶液、水、诸如油/水性乳剂的乳剂、微型乳剂、以及多种类型的润湿剂。
术语“非天然存在的氨基酸”指通常地在活生物体中未被发现的氨基酸。
术语“至少一种症状被减少”意思是在治疗之后任何数目的症状中的至少一种被减少。所述减少不必是完全的。即，在症状上的部分的减少是被预期的。另外，症状不必被永久性地减少。在至少一种症状上的暂时的减少是被本发明所预期的。
术语“受试者”指要成为特定的治疗的接受者的任何动物，或从其收获癌症干细胞的任何动物。通常地，术语“受试者”和“患者”是可互换地使用的，除非本文另有说明。
如本文使用的，术语“疑似患有癌症的受试者”指表现出指示细胞增生性紊乱或癌症的一种或更多种征兆或症状(例如，值得注意的肿块或团块)，或正在进行筛检细胞增生性紊乱或癌症(例如，在常规体检期间)的受试者。疑似患有癌症的受试者还可具有细胞增生性紊乱或癌症的一种或更多种风险因素。疑似患有癌症的受试者通常地未对癌症进行测试。但是，“疑似患有癌症的受试者”包括已接受初步诊断(例如，CT扫描显示出团块)，但是还未对其进行证实测试(例如，活组织检查和/或组织学检查)或对于其癌症的阶段还未知的个体。该术语还包括曾经患有癌症的人(例如在缓解期的个体)。“疑似患有癌症的受试者”有时被诊断为癌症并且有时候发现未患有癌症。
如本文使用的，术语“诊断为癌症的受试者”指已被测试并且发现具有癌性细胞的受试者。可利用任何合适的方法来诊断癌症，包括但不局限于活组织检查、X-射线、血液试验以及本发明的诊断方法。“初步诊断”为仅基于视觉测试(例如，CT扫描或肿块的存在)和抗原试验的诊断。
术语“有癌症风险的受试者”是具有增加的细胞增生性紊乱或癌症的机会的人或患者(相对于一般群体)。此类受试者可例如来自有细胞增生性紊乱或癌症史的家族。在另一个实例中，有风险的受试者可以是其中有与种族、民族或遗传、或暴露于环境引发物有关的特定癌症的遗传史的个体。
如本文使用的，术语“施用”指对受试者(例如，受试者；或体内、体外、或离体细胞、组织、和器官)给予药物、前体药物、活性化合物、或其它的剂，或治疗性治疗(例如，本发明的组合物)的行为。对人体施用的示例性路径可通过眼睛(用于眼的)、嘴(口服的)、皮肤(经皮的)、鼻子(鼻的)、肺(吸入的)、口腔黏膜(口腔的)、耳朵，通过注射(例如，静脉注射地、皮下地、瘤内地、腹腔内地)等。
如本文使用的，术语“共同施用”指对受试者施用至少两种剂或疗法。在一些实施方案中，两种或更多种剂或疗法的共同施用是同时的。在其它的实施方案中，先施用第一剂/疗法，然后施用第二剂/疗法。本领域技术人员理解，所使用的制剂和/或多种剂或疗法的施用路径可不同。用于共同施用的适当剂量可由本领域技术人员容易地确定。在一些实施方案中，当剂或疗法被共同施用时，各个剂或疗法以比适于其单独施用的剂量低的剂量施用。因此，在剂或疗法的共同施用降低潜在地有害的(例如，有毒的)剂的必需剂量的实施方案中，共同施用是特别地期望的。
蛋白酶特异的肽
包含对例如FAP、hK2、PSMA和PSA特异的裂解位点的新颖的肽种类已被描述。参见例如，美国专利号7,906,477、7,053,042、8,450,280、7,767,648、7,468,354、6,265,540、6,504,014、6,410,514、6,545,131和7,635,682；以及美国专利申请号12/087,398和13/471,316。这些肽，以及具有对选择的蛋白酶特异的裂解位点的其它肽，对于在剂接触包含选择的蛋白酶的组织之前基本上抑制治疗剂的非特异性毒性是有用的。在一些实施方案中，此类组织表现出细胞增生性紊乱的征兆，并且可以是癌性的。
在本发明的一方面，描述了包含含有对选择的蛋白酶例如PSMA、PSA、hK2或FAP，或具有选择的蛋白酶的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列的肽。本发明的肽优选地长度不多于20个氨基酸，更优选地长度不多于约10个氨基酸，并且还更优选地长度不多于约6个氨基酸。在一个实施方案中，本发明的优选的氨基酸序列是线性的。在本发明的一个实施方案中，氨基酸序列可以是环状的，以使得序列的环状形式为无活性药物，所述无活性药物在被选择的蛋白酶裂解并线性化后能变成活化的药物。
虽然本发明包括可被与选择的蛋白水解活性有关的蛋白酶选择性地裂解的任何肽前体药物，但是以下FAP、PAMA、PSA和hK2的实例是例证性的。
PSA肽
本发明以包含肽的前体药物为特征，所述肽包含含有对PSA或具有PSA的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。PSA的裂解位点已在例如在美国专利号6,265,540、6,410,514、6,504,014、6,545,131和7,635,682中被描述。例如，由PSA识别的裂解位点的侧翼为至少氨基酸序列X5X4X3X2X1。该肽在位置X1处包含氨基酸谷氨酰胺、天冬酰胺或酪氨酸。X2可以是亮氨酸、酪氨酸、或赖氨酸。X3可以是丝氨酸或赖氨酸。X4可以是丝氨酸、异亮氨酸、或赖氨酸。X5可以是从0至16个另外的氨基酸。一些优选的实施方案包含与在野生型精囊蛋白I或精囊蛋白II序列中的16个剩余的氨基酸基本上相同的X5的序列。氨基酸序列还可包含连接至X1的羧基末端以生成氨基酸序列X5X4X3X2X1X-1的X-1。X-1为最多10个的另外的氨基酸。优选地，X-1具有连接至X1的羧基末端的组氨酸、亮氨酸、苏氨酸或丝氨酸。PSA裂解位点位于X1的羧基末端侧，除非X-1具有连接至X1的羧基末端的组氨酸，在该情况下PSA裂解位点将在组氨酸的羧基末端侧。
另一个氨基酸序列为X6X5X4X3X2X1，其中X5为丝氨酸或赖氨酸，X6为从0至15个另外的氨基酸，并且其它的氨基酸如以上。X-1也可存在，如以上描述的。另一个氨基酸序列为X7X6X5X4X3X2X1，其中X6为组氨酸或天冬酰胺，X7为从0至14个另外的氨基酸，并且其它的氨基酸如以上。X-1也可存在，如以上描述的。
优选的肽的一些实例包括诸如以下的四氨基酸序列：Ser-Lys-Leu-Gln(SEQ ID NO:1)、Ile-Ser-Tyr-Gln(SEQ ID NO:2)、和Lys-Ser-Lys-Gln(SEQID NO:3)。优选的五氨基酸序列的一些实例为Ser-Ser-Lys-Leu-Gln(SEQ IDNO:4)、Lys-Ile-Ser-Tyr-Gln(SEQ ID NO:5)和Thr-Lys-Ser-Lys-Gln(SEQ IDNO:6)。优选的六氨基酸序列的一些实例为His-Ser-Ser-Lys-Leu-Gln(SEQID NO:7)、Asn-Lys-Ile-Ser-Tyr-Gln(SEQ ID NO:8)和Ala-Thr-Lys-Ser-Lys-Gln(SEQ ID NO:9)。优选的七氨基酸序列的一些实例为Glu-His-Ser-Ser-Lys-Leu-Gln(SEQ ID NO:10)、Gln-Asn-Lys-Ile-Ser-Tyr-Gln(SEQ ID NO:11)、Glu-Asn-Lys-Ile-Ser-Tyr-Gln(SEQ ID NO:12)、Ala-Thr-Lys-Ser-Lys-Gln-His(SEQ ID NO:13)和His-Ser-Ser-Lys-Leu-Gln-Leu(SEQ ID NO:481)。如描述的，另外的氨基酸可包含X-1。
包含对PSA特异的裂解位点的肽的其它实例包括由氨基酸序列Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SSKYQ)(SEQ ID NO:18)、Gly-Lys-Ser-Gln-Tyr-Gln(GKSQYQ)(SEQ ID NO:19)和Gly-Ser-Ala-Lys-Tyr-Gln(GSAKYQ)(SEQID NO:20)组成或包含其的肽。
在一个实施方案中，毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)被连接至PSA特异的氨基酸序列的羧基末端。
hK2肽
本发明还以包含肽的前体药物为特征，所述肽包含含有对hK2或具有hK2的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。hK2的裂解位点已经例如在美国专利号7,906,477、7,053,042和8,450,280中被描述。例如，图1显示了精囊蛋白I(SEQ ID NO:21-24)和精囊蛋白II(SEQ ID NO:25-31)的氨基酸序列的一部分，显示了人类激肽释放酶2的裂解位点。
由hK2识别的裂解位点的侧翼为至少氨基酸序列X4X3X2X1。该寡肽在位置X1处包含氨基酸精氨酸、组氨酸或赖氨酸。X2可以是精氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、或组氨酸。X3可以是赖氨酸、丝氨酸、丙氨酸、组氨酸或谷氨酰胺。X4可以是从0至20个另外的氨基酸，优选地至少2个另外的氨基酸。一些优选的实施方案包含与在野生型精囊蛋白I或精囊蛋白II序列中的20个氨基酸基本上相同的X4的序列，所述在野生型精囊蛋白I或精囊蛋白II序列中的20个氨基酸为公认的精囊蛋白裂解位点的N-末端侧的从4至24个氨基酸。氨基酸序列还可包含连接至X1的羧基末端以形成氨基酸序列X4X3X2X1X-1的X-1。X-1为最多10个的另外的氨基酸，并且可包含任何氨基酸。优选地X-1具有连接至X1的羧基末端的亮氨酸、丙氨酸或丝氨酸。X-1可包含L-或D-氨基酸。hK2裂解位点位于X1的羧基末端侧。
在一些优选的肽中，X1和X2两者均为精氨酸。
优选的肽的一些实例包括(注意符号][表示hK2裂解位点)：
1.Lys-Arg-Arg][(SEQ ID NO:32)
2.Ser-Arg-Arg][(SEQ ID NO:33)
3.Ala-Arg-Arg][(SEQ ID NO:34)
4.His-Arg-Arg][(SEQ ID NO:35)
5.Gln-Arg-Arg][(SEQ ID NO:36)
6.Ala-Phe-Arg][(SEQ ID NO:37)
7.Ala-Gln-Arg][(SEQ ID NO:38)
8.Ala-Lys-Arg][(SEQ ID NO:39)
9.Ala-Arg-Lys][(SEQ ID NO:40)
10.Ala-His-Arg][(SEQ ID NO:41)
另外的优选的较长序列长度的肽包括：
11.Gln-Lys-Arg-Arg][(SEQ ID NO:42)
12.Lys-Ser-Arg-Arg][(SEQ ID NO:43)
13.Ala-Lys-Arg-Arg][(SEQ ID NO:44)
14.Lys-Lys-Arg-Arg][(SEQ ID NO:45)
15.His-Lys-Arg-Arg][(SEQ ID NO:46)
16.Lys-Ala-Phe-Arg][(SEQ ID NO:47)
17.Lys-Ala-Gln-Arg][(SEQ ID NO:48)
18.Lys-Ala-Lys-Arg][(SEQ ID NO:49)
19.Lys-Ala-Arg-Lys][(SEQ ID NO:50)
20.Lys-Ala-His-Arg][(SEQ ID NO:51)
另外的优选的包含X-1氨基酸的肽为：
21.Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:52)
22.Ser-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:53)
23.Ala-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:54)
24.Ala-Arg-Arg][Ser(SEQ ID NO:55)
25.His-Arg-Arg][Ala(SEQ ID NO:56)
26.Gln-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:57)
27.Ala-Phe-Arg][Leu(SEQ ID NO:58)
28.Ala-Gln-Arg][Leu(SEQ ID NO:59)
29.Ala-Lys-Arg][Leu(SEQ ID NO:60)
30.Ala-Arg-Lys][Leu(SEQ ID NO:61)
31.Ala-His-Arg][Leu(SEQ ID NO:62)
优选的具有X-1的仍然较长序列长度的肽包括：
32.His-Ala-Gln-Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:63)
33.Gly-Gly-Lys-Ser-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:64)
34.His-Glu-Gln-Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:65)
35.His-Glu-Ala-Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:66)
36.Gly-Gly-Gln-Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:67)
37.His-Glu-Gln-Lys-Arg-Arg][Ala(SEQ ID NO:68)
38.Gly-Gly-Ala-Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:69)
39.His-Glu-Gln-Lys-Arg-Arg][Ser(SEQ ID NO:70)
40.Gly-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:71)
41.Gly-Gly-His-Lys-Arg-Arg][Leu(SEQ ID NO:72)
在序列表(SEQ ID NO:73-142)中公开了可用于被hK2和具有hK2的蛋白水解活性的蛋白酶裂解的肽序列的其它实施方案。
在另一个优选的实施方案中，本发明的hK2肽序列包括序列G-K-A-X1-X2-X3(SEQ ID NO:143)，其中X1、X2和X3中的至少一种为精氨酸残基并且其中在X1、X2和X3的其它两个位置处的氨基酸残基为任何氨基酸残基。hK2可在X1、X2或X3后裂解肽，并且在一个优选的实施方案中，hK2在精氨酸残基后裂解肽。在图2中显示了具体的优选的序列(包含裂解位点)(SEQ ID NO:144-157)。在于图2中显示的序列中包括另外的优选的序列，在X3位置后具有另外的亮氨酸残基(SEQ ID NO:158-171)。
PSMA肽
本发明还以包含肽的前体药物为特征，所述肽包含含有对PSMA或具有PSMA的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。PSMA的裂解位点例如在美国专利号7,767,648和7,468,354中已被描述。在PCT/US13/56523中已描述了利用PSMA活化的前体药物的治疗方法。另外，在美国申请号61/791,909中公开了用于制备PSMA活化的前体药物的方法。设计了能被PSMA的蝶酰基聚-γ-谷氨酰基羧肽酶(叶酸水解酶)活性活化的前体药物。γ谷氨酰基水解酶(GGH)由肝细胞和多种肿瘤细胞类型分泌并且GGH活性存在于人类血清中。因此，有效的侧链连接底物期望地被PSMA特异地水解而被GGH最小限度的水解。
PSMA裂解位点包含至少二肽X1X2。该肽在位置X1处包含氨基酸Glu、Asp、Gln或Asn，但是在优选的实施方案中X1包括氨基酸Glu或Asp。X2可以是Glu、Asp、Gln或Asn。氨基酸序列还可包含连接至X2的羧基末端的X3。X3可以是Glu、Asp、Gln或Asn。氨基酸序列还可包含连接至X3的羧基末端的X4。X4可以是Glu、Asp、Gln或Asn。氨基酸序列还可包含连接至X4的羧基末端的X5。X5可以是Glu、Asp、Gln或Asn。氨基酸序列还可包含连接至X5的羧基末端的X6。X6可以是Glu、Asp、Gln或Asn。另外的更长序列长度的肽可以相似的方式构造。
例如，本发明的一个实施方案包括肽序列X1X2X3X4X5X6X7，其中X1、X2、X3、X4、X5和X6如以上所限定的，并且X7为最多24个的另外的氨基酸，优选地最多14个的氨基酸，并且更优选地最多9个的另外的氨基酸。
在另一个实例中，本发明的PSMA肽为以下序列：X1…Xn，其中n为从2至30的范围、优选地从2至20的范围、更优选地从2至15的范围、并且还更优选地从2至6的范围的任何整数，其中X1为Glu、Asp、Gln或Asn，但是优选地为Glu或Asp，并且直至Xn的剩余肽(例如，在n＝2的情况下X2；在n＝3的情况下X2X3；在n＝4的情况下X2X3X4；等等)独立地选自Glu、Asp、Gln和Asn。肽序列的一些优选的实例如以上。在另一个实例中，X2至Xn-1独立地选自Glu和Asp，并且Xn独立地选自Glu、Asp、Gln和Asn。
本发明的PSMA肽的长度可被优化以允许有效的PSMA水解，如果必要，治疗药物在水溶液中增强的溶解度，以及限制的体外非特异性毒性。
在α连接的二肽中，Asp-Glu、Asp-Asp、Asp-Asn和Asp-Gln优选地在本文描述的PSMA前体药物中使用。在所有的α连接的三肽中，Glu-Glu-Glu、Glu-Asp-Glu、Asp-Glu-Glu、Glu-Glu-Asp、Glu-Asp-Asp、Asp-Glu-Asp、Asp-Asp-Glu、Asp-Asp-Asp、Glu-Glu-Gln、Glu-Asp-Gln、Asp-Glu-Gln、Glu-Glu-Asn、Glu-Asp-Asn、Asp-Glu-Asn、Asp-Asp-Gln和Asp-Asp-Asn优选地在本文描述的PSMA前体药物中使用。在位置X2处包含Gln或Asn的三肽也可被期望地使用。所有较长的α连接肽也可被用来在本文描述的前体药物中使用，并且在X2至Xn的任何位置处具有Gln或Asn的此类肽也可被期望地使用。
侧链键合
PSMA还能水解多种侧链连接的肽。特定的侧链连接例如γ-连接的肽对PSMA不特异，而是还可被GGH水解。一些优选的肽利用PSMA的双重能力来水解天冬氨酰基残基和谷氨酰基残基之间的某些α键合和侧链键合。
在侧链连接的二肽中，Glu*Asp、Glu*Asn、Glu*Glu、Glu*Gln、Asp*Asp、Asp*Glu、Asp*Asn和Asp*Gln可被用来在本文描述的PSMA前体药物中使用。在所有的侧链连接的三肽中，Glu*Glu*Glu、Glu*Asp*Glu、Asp*Glu*Glu、Glu*Glu*Asp、Glu*Asp*Asp、Asp*Glu*Asp、Asp*Asp*Glu、Asp*Asp*Asp、Glu*Glu*Gln、Glu*Asp*Gln、Asp*Glu*Gln、Glu*Glu*Asn、Glu*Asp*Asn、Asp*Glu*Asn、Asp*Asp*Gln和Asp*Asp*Asn可被优选地用来在本文描述的PSMA前体药物中使用。类似序列的更长的肽也可被用来在本文描述的PSMA前体药物中使用。
混合肽
一些优选的肽包含PSMA可水解、α连接的二肽“帽”，所述二肽“帽”不是GGH的底物，并且是更特异的PSMA的底物。联合α连接和侧链连接的PSMA底物可以是高度有效且特异的。例如，Glu*Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:487)和Glu*Glu*Glu*Asp-Gln(SEQ ID NO:488)在血清中具有高的稳定性。包含两个α键合和两个γ键合的肽例如Asp-Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:489)在人类和小鼠血浆中可以是对水解完全地稳定的。在美国专利号7,767,648中描述了很多含天冬氨酸和谷氨酸的接头。这些特定的接头可被结合至治疗药物上的胺基基团。
列举的肽在优选的那些中：Glu*Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:487)、Asp-Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:489)和Glu-Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ IDNO:490)。具有混合的α键合和侧链键合并且在其他方面对应于本文的描述的很多其它的肽可由本领域普通技术人员容易地预期并构造。
在本发明的一个实施方案中，肽包括序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQID NO:486)，其中用*指示的键中的至少一个为γ羧基键合。在本发明的另一个方面，肽通过天冬氨酸连接至包含治疗有效量的8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)的组合物，如在图8中显示的。在一个实施方案中，本发明的前体药物通过使8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)连接至掩蔽肽Asp-Glu-γ-Glu-γ-Glu-γ-Glu(其中连字符表示α键合并且γ符号表示γ键合)的N末端Asp的β羧基以生成前体药物12ADT-β-Asp-α-Glu-γ-Glu-γ-Glu-γ-GluOH(即，G-202)来生成(图8)。
在另外的实施方案中，可使用二羧酸接头，诸如12-碳接头12-羧基十二烷酸盐/酯，例如在图3中显示的12-CDT-Asp。
本发明的肽优选地长度不多于20个氨基酸，优选地长度不多于10个氨基酸，更优选地长度不多于6个氨基酸。一些长度仅2个或3个氨基酸的肽相当地适于在本文描述的PSMA前体药物中使用。本发明的一些优选的氨基酸序列是线性的。但是，在二羧基氨基酸上存在的多个键合位点也可被用来生成分支肽。这些分支肽可包含被偶联至肽链的各个氨基酸的治疗剂，以使得通过PSMA的酶促活性来使单个氨基酸从肽链裂解，释放治疗剂的多个分子。
图4是PSMA活化的毒胡萝卜素前体药物的特定实施方案的结构。DBTG指8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素，如显示的其通过氧原子连接至前体药物的剩余部分。因此，优选的底物结合了α键合的特异性和γ键合的增强的效率。带负电荷的较长长度的底物能提供两种另外的目的：第一，其有助于使例如毒胡萝卜素类似物的高亲脂性毒素更可溶于水；第二，高度带电荷的前体药物将更少可能地穿过质膜，进一步限制非特异性细胞毒性。
以下前体药物为优选的实施方案的实例：
(1)12ADT-Glu*Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:487)
(2)12ADT*Glu-Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:490)
(3)12CDT-Glu*Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:487)
(4)12ADT-Asp-Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:489)
(5)12CDT-Asp-Glu*Glu*Asp-Glu(SEQ ID NO:489)
(6)12ADT-Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)(图8)
前体药物被PSMA水解并释放相应的含Asp或含Glu的毒胡萝卜素类似物、或毒胡萝卜素类似物自身，并且当未被PSMA代谢时也缺乏有效的细胞毒性。将非生成PSMA的TSU-Pr1人类前列腺癌细胞系以对应的游离毒胡萝卜素类似物的LD50的约50倍的剂量暴露至每种PSMA前体药物。相对于TSU前列腺癌细胞系，12ADT-Glu具有对于致死的约50nM的LD50值。
FAP肽
本发明还以包含肽的前体药物为特征，所述肽包含含有对FAP或具有FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。FAP的裂解位点和活性已在例如美国专利申请号12/087,398和13/471,316中被描述，并且FAP活化的抗肿瘤化合物已在美国专利申请号10/039,781、10/036,111、10/336,378和10/036,224，以及美国专利号6,613,879中被描述。
在一个实施方案中，FAP的底物包含的剂包括包含以下序列的肽：VGPAGK(SEQ ID NO:172)、GARGQA(SEQ ID NO:173)、PPGPPGPA(SEQ ID NO:174)、(D/E)RG(E/A)(T/S)GPA(SEQ ID NO:175)、DRGETGPA(SEQ ID NO:176)、RTGDAGPA(SEQ ID NO:177)、ASGPAGPA(SEQ IDNO:178)、DRGETGPA(SEQ ID NO:179)、DKGESGPA(SEQ ID NO:180)、AKGEAGPA(SEQ ID NO:181)、PPGPPGPA(SEQ ID NO:182)、EPGPPGPA(SEQ ID NO:183)、DAGPPGPA(SEQ ID NO:184)、GETGPAGA(SEQ IDNO:185)、QPSGPAGA(SEQ ID NO:186)、ERGETGPA(SEQ ID NO:187)、DRGATGPA(SEQ ID NO:188)、DRGESGPA(SEQ ID NO:189)、DPGETGPA(SEQ ID NO:190)、LNGLPGA(SEQ ID NO:191)、PSGPAGPA(SEQ ID NO:192)、PAGAAGPA(SEQ ID NO:193)、FPGARGPA(SEQ IDNO:194)、FQGLPGPA(SEQ ID NO:195)、PLGAPGPA(SEQ ID NO:196)、PPGAVGPA(SEQ ID NO:197)、MGFPGPA(SEQ ID NO:198)、RVGPPGPA(SEQ ID NO:199)、AGPVGPPA(SEQ ID NO:200)、AGPPGPPA(SEQ ID NO:201)、EPGASGPA(SEQ ID NO:202)、ETGPAGPA(SEQ ID NO:203)、PPGAVGPA(SEQ ID NO:204)、AQGPPGPA(SEQ ID NO:205)、KTGPPGPA(SEQ ID NO:206)、VMGFPGPA(SEQ ID NO:207)、或SGEAGPA(SEQ IDNO:208)；及其部分和变体。
在另一个实施方案中，FAP的底物包含含有以下序列的肽：XXXXX-A(SEQ ID NO:209)、XXXX-AG(SEQ ID NO:210)、XXXX-AGG(SEQ ID NO:211)、XXXXX-AGG(SEQ ID NO:482)、XXXX-S(SEQ ID NO:212)、XXXX-SG(SEQ ID NO:213)、XXXX-V(SEQ ID NO:214)、或XXXXVG(SEQ ID NO:215)，其中X为任何氨基酸、及其部分和变体。
由于已发现由FAP的大多数裂解在Pro后面，所以落在本发明的范围内的FAP的其它肽底物包括具有脯氨酸的肽。由于发现FAP在以下氨基酸的后面裂解，所以其它的肽可包含以下氨基酸：Ala(例如，A/A、A/G、A/P、A/R)、Asp(例如，D/G、D/T)、Gly(例如，G/A、G/E、G/L、G/Q、G/P、G/V)、Glu(例如，E/P)、Lys(例如，K/A、K/G)、Ser(例如，S/P)和Val(例如，V/G)。
其它的实施方案包括在P’位置处具有不同的长度的FAP底物肽(例如P’1-P’3)。即，在P1处具有脯氨酸，但是在P’1处无氨基酸，在P’1处具有Ala、Ser、Val，或在P’1处具有Ala、Ser、Val且在P’2处具有Gly的序列。
对于FAP，其它的肽可具有以下序列，显示出在P7处对Asp或Glu、Arg或Ala残基，在P6处对Arg或Lys，在P4处对Ala、Asp或Glu，在P3处对Ala、Ser或Thr以及在P’1处对Ala、Ser或Val和在P’2处对Gly的偏好。
FAP选择性裂解位点利用在美国专利申请号12/087,398中描述的方法来鉴定。在表2中显示了在重组人类明胶的8.5kDa片段内鉴定出的FAP裂解位点。
表2
在重组人类明胶的8.5kDa片段内的FAP裂解位点(P7-P’3)
在表2中的数据的分析表明，FAP裂解主要地发生在脯氨酸(P)后面，但是FAP也可在包括甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、赖氨酸(K)和精氨酸(R)的其它氨基酸(在表2中加下划线的序列)的后面裂解。基于标准化离子流，看起来更丰富的离子由以脯氨酸作为裂解位点的那些组成。在那些序列中，在P2位置处G为优选的氨基酸。
基于8.5kDa明胶裂解图谱，通过利用甲氧基香豆素(MCA)/二硝基苯基(DNP)FRET组合来制备一系列荧光猝灭底物(表2中的有色序列)。参见，例如，Matsushita,O.等人J.Bacteriol,176,149-156(‘1994)。利用在具有0.4mmol/g的取代水平的Nova TagTM Dnp树脂(Novabiochem,San Diego,Calif)上偶联的标准Fmoc固相肽合成来进行肽的合成。用在N-甲基2吡咯烷酮(NMP)中的N-(7-甲氧基香豆素-4-乙酰氧基)琥珀酰亚胺(MCA-Osu)和1-羟基苯并三唑(HOBt)进行两次过夜N末端带帽。该合成方法得到具有序列MCA-AAl-AA2-AA3-AAx-DNP的肽。这些研究支持基于标准化的离子流的底物排序并且证实FAP倾向于在脯氨酸后面裂解但是也能在P1位置中的其它氨基酸后面裂解，图5。结果还显示，随着在P’位置处的氨基酸的数目增加，FAP水解作用增加，VGP//AGK裂解>GAVGP//A>PAGP//(分别地SEQ ID NO:464、466和468)，图5。
鉴定了另外的裂解位点并显示在表3和表4中，并且在图6中显示了通过FibroGen生成的在100kDa明胶内的FAP裂解位点的完全图谱。
表3
8.5kDa明胶的消化产物的MALDL质量的FindPept比对
表4
本发明的前体药物不被细胞吸收，但是被特异靶向的蛋白酶(例如，PSMA、PSA、hK2或FAP)在细胞外裂解以获得每分钟每毫克特异的蛋白酶至少5皮摩尔、优选地至少10皮摩尔、并且更优选地至少15皮摩尔的治疗药物。优选地，本发明的前体药物被除了特异靶向的蛋白酶(例如，PSMA、PSA、hK2或FAP)以外的细胞外蛋白酶(即，除了特异靶向的蛋白酶以外的任何蛋白酶)裂解以获得每分钟每毫克纯化的细胞外非特异性蛋白酶不多于4.0皮摩尔、优选地不多于2.0皮摩尔、并且更优选地不多于1.0皮摩尔的治疗药物。
因此，例如，可被PSMA裂解的本发明的肽前体药物不被细胞吸收，但是被PSMA细胞外地裂解以获得每分钟每毫克PSMA至少5皮摩尔、优选地至少10皮摩尔、并且更优选地至少15皮摩尔的治疗药物。优选地，本发明的PSMA特异的前体药物被除了PSMA以外的细胞外蛋白酶裂解获得每分钟每毫克纯化的细胞外非PSMA的蛋白酶不多于4.0皮摩尔、优选地不多于2.0皮摩尔、并且更优选地不多于1.0皮摩尔的治疗药物。
本发明的前体药物在人类血清中经24小时的时间段获得前体药物的至多5％、优选地至多2.5％、并且更优选地至多1.0％作为治疗药物。
本发明的肽可通过本领域已知的方法来合成。例如，本发明的肽和前体药物可通过美国专利号6,632,922、6,649,136、6,310,180、4,749,742和美国申请号61/791,909的方法来合成。也可在自动肽合成仪器(例如，Symphony/MultiplexTM自动肽合成仪(Protein Technologies,Inc,Tucson,Ariz.)或Perkin-Elmer(Applied Biosystems,Foster City,Calif.)Model 433A自动肽合成仪)上合成肽。
一个或更多个氨基酸的缺失也能导致得到的分子的结构的改变而不显著地改变其生物活性。这可导致也会有用的较小的活性分子的开发。例如可将特定肽的生物活性不需要的氨基或羧基末端氨基酸移除。本发明的肽包括本发明公开的肽的任何类似物、同系物、突变体、异构体或衍生物，只要本文描述的生物活性保持。在一个实施方案中描述的肽具有包含L-氨基酸的序列；但是，氨基酸的D-形式可被合成地生成并且使用于本文描述的肽中。在仍然另一个实施方案中，氨基酸为本领域技术人员已知的非天然存在的氨基酸。
本发明的肽包括为本文具体地示例的那些肽的保守变异的肽。保守变异还可包含取代的氨基酸的使用来代替未取代的母本氨基酸，只要对取代的多肽引起的抗体也与未取代的多肽发生免疫反应。此类保守的氨基酸取代在本发明的肽的类别的限定内，对于X位置可以是多种氨基酸的任一种。可根据用于选择本文提供的前体药物的方法，针对在本发明的前体药物中的使用的适合度筛选通过此类保守变异生成的肽。
本发明的肽的另外的实例被构造为本文公开的氨基酸序列的类似物、衍生物、和保守变体。因此，具有亲水性和疏水性取代、以及保守变异的肽的较宽的组被本发明包括。本领域技术人员能进行相似的取代以获得对本文描述的蛋白酶的具有较大的活性和/或特异性的肽。例如，本发明包括以上描述的肽序列，及其类似物或衍生物，只要肽的生物活性保持。本发明的肽的原始的氨基酸序列的较小的修饰可产生具有与本文描述的特定的肽相比基本上等价的活性的肽。此类修饰可以是有意的，如通过定点诱变或化学合成，或可以是自发的。通过这些修饰生成的所有的肽均被本文包括，只要原始的肽的生物活性保持，即对被选择的蛋白酶例如PSMA、PSA、hK2或FAP裂解的敏感性。
在一个实施方案中，很多种基团可被连接至本文公开的肽的羧基末端，本文公开的肽例如，对被PSA、hK2和FAP裂解敏感的肽。参见，例如，美国专利号7,906,477、7,053,042、6,265,540、6,410,514、6,504,014、6,545,131、7,635,682和美国专利申请号12/087,398和13/471,316。值得注意地，治疗药物可被连接至该位置。
在另一个实施方案中，例如，就对被PSMA裂解敏感的肽而言，包括治疗药物的很多种实体可被连接至肽的α氨基末端、α羧基末端、或侧链，如在美国专利号7,767,648和7,468,354中描述的。在该实施方案的更优选的实施方案中，在实体(例如，治疗药物)和肽之间的键合在肽的氨基末端或侧链发生。在该实施方案的一个实例中，就本发明的PSMA前体药物而言，实体优选地在X1处连接，但是，实体可在从X1至Xn-1的任何位置处连接。
在以上的实施方案两者中，优点为本发明的肽的裂解位点的蛋白酶特异性，以及其它功能特征。优选地，如果适用，治疗药物直接地或通过接头基团连接至羧基末端或α氨基末端。直接键合优选地通过酰胺键，以利用蛋白酶的蛋白水解活性和特异性。如果治疗药物和氨基酸序列之间的连接通过接头进行，为了相同的原因，该连接也优选地通过酰胺键进行。可通过本领域技术人员已知的任何键类型和化学基团使接头连接至治疗药物。在裂解后接头可无限期地保留在治疗药物上，或之后可通过与外部的剂进一步反应、或在自我裂解步骤中很快被移除。自我裂解的接头是在肽裂解后能分子内环化并释放药物，或在肽裂解后经受自发的SN1溶剂分解并释放药物的那些接头。
诸如可检测的标记或成像化合物的其它材料可连接至肽。也可连接至肽的多种基团包括如抗体和肽毒素的此类部分，所述肽毒素包括例如26个氨基酸的毒素蜂毒肽和35个氨基酸的毒素杀菌肽B(cecropin B)。这些肽毒素两者均已显示出对癌症细胞系的毒性。另外地，肽可偶联至蛋白质。该偶联可被用来生成无活性的前酶，以使得被选择的蛋白酶裂解会导致蛋白质的构象变化以活化蛋白质。肽序列还可被用来将药物偶联至抗体。抗体会结合至细胞表面的蛋白质并且存在于细胞外流体中的组织特异性蛋白酶能从肽接头裂解药物。参见，例如，美国专利号7,906,477和7,053,042，以及美国申请号12/087,398和13/471,316。
可将优选的氨基酸序列构造为对被本发明的选择的蛋白酶例如PSMA、PSA、FAP或hK2裂解是高度地特异的。另外肽序列可被构造为对被选择的蛋白酶裂解与纯化的细胞外和细胞内的蛋白酶相比是高度地选择性的。还可构造高度地特异的蛋白酶特异的肽序列，所述肽序列对在人类血清中裂解也是稳定的。构造和选择本发明的底物例如FAP底物、PSMA底物、PSA底物或hK2底物的方法是本领域已知的并在本文公开。
在一些实施方案中，本发明预期，本发明的肽是蛋白酶抗性的以及降解抗性的。在美国专利申请号12/087,398和13/471,316中描述了本发明的肽以及包含多种保护基团的肽的此类实施方案。
肽和底物的标记和筛选
例如在美国专利申请号12/087,398和13/471,316中描述了用于标记为蛋白酶特异的底物的肽的步骤。另外，用于筛选用于在本发明中使用的潜在前体药物的方法以及用于筛选组织和确定选择的蛋白酶的活性的方法是本领域已知的。
成像和诊断应用
在一个实施方案中，本文描述的可注射乳液可被用来施用本发明的活性化合物用于成像和诊断疑似患有癌症的受试者、诊断为患有癌症的受试者或有患有癌症的风险的受试者中的细胞增生性紊乱或癌症。在美国申请号13/257,131中描述了用于利用本发明的活性化合物来诊断和成像患者中的细胞增生性紊乱或癌症的方法。
在一个实施方案中，本文描述的可注射乳液可被用来施用本发明的活性化合物用于在疑似患有癌、黑色素瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、和白血病或恶性淋巴瘤，已被诊断患有其或有患有其的风险的受试者中成像和诊断包括癌症的细胞增生性紊乱。另外，在该实施方案中，本文描述的可注射乳液可被用来施用本发明的活性化合物用于在已被诊断患有上皮癌或有患有其的风险的受试者中成像和诊断癌症。在该实施方案的另外的变化形式中，本文描述的可注射乳液可被用来施用本发明的活性化合物用于在已被诊断患有前列腺癌、肝癌或乳腺癌或有患有其的风险的受试者中成像或诊断癌症。在另一个实施方案中，本文描述的可注射乳液可被用来施用本发明的活性化合物用于成像和诊断例如BPH的细胞增生性紊乱。
在一个实施方案中，本发明的活性化合物在治疗药物和肽之间包含酚接头。酚接头可以是放射性标记的。在某些实施方案中，放射性标记为125I、124I或131I。另外，在该实施方案的其它方面，短范围的α或β辐射使得用α或β发射体标记比诸如碘放射性标记的γ发射体有利。氚(3H)是适于与目前公开的方法和组合物一起使用的代表性的β发射体。本发明的肽可以是可由选择的蛋白酶例如PSMA、PSA、hK2和FAP裂解的任何肽。
在该实施方案的另外的方面，治疗药物为倍半萜-γ-内酯(例如，毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物)。
在本发明的这些实施方案的一个替代选择中，对受试者成像的方法包括使用单电子发射计算机断层摄影(SPECT)成像。仍然在这些实施方案的另一个替代选择中，成像可以是正电子发射断层摄影。例如，酚接头可用125I标记用于SPECT成像，用124I标记用于PET成像，以及用131I标记用于联合药物/放射疗法。
在另外的实施方案中，成像和诊断包括癌症的细胞增生性紊乱的方法可包括向受试者提供本发明的包含前体药物的可注射乳液，所述前体药物包含倍半萜-γ-内酯(在一些优选的实施方案中，毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物)；具有放射性标记的酚接头；以及可被PSA、FAP、hK2或PSMA裂解的肽，或可被选择的蛋白酶裂解的任何其它的肽。
在该实施方案的一个变化形式中，毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。在该实施方案的另一个变化形式中，毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。
本发明还提供了通过提供本发明的连接至能被成像技术例如PET检测的亲脂性成像标记的肽来对软组织转移或骨转移成像的方法。该方法通常地通过对患有或疑似患有与能裂解本发明的肽的蛋白酶例如PSA、PSMA、hK2或FAP有关的细胞增生性紊乱的受试者施用本发明的连接至含伯胺的亲脂性标记的肽来实现。在优选的实施方案中，标记的肽利用本发明的可注射乳液来施用并且被偶联至诸如倍半萜-γ-内酯(在一些优选的实施方案中，毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物)的治疗药物。在有对待裂解的肽特异的酶促地活性的蛋白酶处(例如，PSMA、PSA、hK2或FAP生成组织)，肽被从亲脂性成像标记选择性地裂解。然后亲脂性成像标记被拉进邻近的细胞的细胞膜中。
在足够允许肽被选择的蛋白酶裂解，并允许未裂解的肽充分地从受试者清除以允许可靠的成像的一段时间之后，对受试者成像。亲脂性标记在生成选择的蛋白酶的软组织或骨中积累，并且允许诊断受试者。用于PET扫描的合适的标记为放射性核素，所述放射性核素诸如18F、11C、13N和15O，以及本领域已知的任何其它正电子发射体。可通过本领域技术人员已知的方法，通过将标记引入本领域技术人员已知的亲脂性片段或部分来将亲脂性工程化入标记中。
在美国申请号13/257,131中公开了可与本发明的肽前体药物一起使用用于成像和诊断应用的多种接头的实例。制备用于利用本发明的肽前体药物来成像并检测癌症的组合物的方法的实例也在本文公开，并且其是本领域众所周知的。
前体药物组合物
本发明还以前体药物组合物为特征，所述前体药物组合物包含连接至含有对选择的蛋白酶例如FAP、PSMA、PSA和hK2，或具有此种蛋白酶的酶促活性的任何酶特异的裂解位点的肽的治疗药物。如以上所述，本发明的肽可被用来靶向治疗药物，用于在生成选择的蛋白酶的组织或细胞、或肿瘤相关细胞处或在其内活化。可用于本发明的前体药物中的肽为以上描述的那些。
可在本发明的前体药物中使用的治疗药物包括例如倍半萜-γ-内酯，所述倍半萜-γ-内酯诸如属于倍半萜类化合物的愈创木内酯、inuchineolide、大根香叶内酯、桉烷内酯家族的那些。这些包括墨西哥蒿素(estafiatin)、大海米菊素(grossheimin)、inuchineolide、arglabin、毒胡萝卜素及其衍生物，诸如thapsigargicin和本领域技术人员已知的很多其它的。参见，例如美国专利号6,545,131。
在一个实施方案中，本发明的优选的倍半萜-γ-内酯为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。如以上说明的，认为毒胡萝卜素及其衍生物通过抑制在很多细胞中发现的SERCA泵来起作用。毒胡萝卜素为从伞状花科毒胡萝卜属(Thapsia)属的物种分离的一组天然产物。
毒胡萝卜素具有独特的细胞毒性机制。不希望被特定的科学理论束缚，毒胡萝卜素是为所有细胞所需以维持代谢生活力的关键的细胞内蛋白质的肌质网/内质网钙ATP酶泵的有效抑制剂。SERCA泵被毒胡萝卜素抑制导致细胞内钙的持续升高，所述细胞内钙的持续升高激活ER应激和线粒体的凋亡途径两者。
毒胡萝卜素具有在美国专利号6,545,131中公开的结构。另外，在美国专利号6,265,540、6,504,014、6,410,514和6,545,131中还公开了倍半萜-γ-内酯的其它治疗性类似物。这些类似物具有对细胞非特异的毒性。该毒性被测量为杀死50％的克隆原细胞(LC50)所需的毒性。在一些实施方案中，该发明的类似物的LC50期望地为至多10μM、优选地至多2μM并且更优选地至多200nM类似物。
在一个实例中，在碳2或碳8处有烷酰基、烯酰基、和芳烃酰基(arenoyl)基团的毒胡萝卜素可使用于本文公开的本发明的实践中。诸如CO--(CH＝＝CH)n1--(CH2)n2-Ar--NH2、CO--(CH2)n2--(CH＝＝CH)n1--Ar--NH2、CO--(CH2)n2-(CH＝＝CH)n1--CO--NH--Ar--NH2和CO--(CH＝＝CH)n1--(CH2)n2-CO--NH--Ar--NH2及其取代的变体的基团可被用作碳8取代基，其中n1和n2为从0至5，并且Ar为任何取代或未取代的芳基基团。可在Ar上存在的取代基包括短链和中链烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、和烯氧基基团，硝基、卤代、和伯仲或叔氨基基团，以及通过酯或酰胺键合连接至Ar的此类基团。
在毒胡萝卜素类似物的其它实施方案中，这些取代基团以未取代的CO-(CH2)n3-NH2，或烷基、芳基、卤代、烷氧基、烯基、氨基、或氨基取代的CO-(CH2)n3-NH2为代表，其中n3为从0至15、优选地3-15、并且还优选地6-12。该类中特别地优选的取代基团为6-氨基己酰基、7-氨基庚酰基、8-氨基辛酰基、9-氨基壬酰基、10-氨基癸酰基、11-氨基十一酰基、和12-氨基十二酰基。这些取代基通常地从相应的氨基酸6-氨基己酸等合成。氨基酸是通过例如Boc保护的标准方法被N-末端保护的。使N-末端保护的取代基经二环己基碳二亚胺(DCCI)-促进地偶联至毒胡萝卜素，然后标准的脱保护反应生成含伯胺的毒胡萝卜素类似物。
取代基也可带有以附接至烷酰基、烯酰基、或芳烃酰基取代基的氨基酰胺基团形式的伯胺。例如，通过标准的C-末端保护技术，诸如通过用甲醇和亚硫酰氯处理来形成甲基酯，进行诸如6-氨基己酸等的第一氨基酸的C-末端保护，然后可使第一氨基酸的N-末端与任何类型的N保护的第二氨基酸偶联。
在优选的实施方案中，毒胡萝卜素类似物或衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素，本文中也被称作“L12ADT”。例如，图7显示了在O-8位置处用偶联至氨基酸的羧基基团的12-氨基十二酰基侧链修饰的毒胡萝卜素类似物的化学结构。
在另一个优选的实施方案中，毒胡萝卜素类似物或衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)(图8)。
在一些实施方案中，例如就对被PSA、hK2和FAP裂解敏感的肽而言，肽和治疗药物通过肽的羧基末端而被直接地或间接地(通过接头)连接。参见，例如，美国专利号7,906,477、7,053,042、6,265,540、6,410,514、6,504,014、6,545,131、7,635,682以及美国专利申请号12/087,398和13/471,316。
在其它的实施方案中，例如就对被PSMA裂解敏感的肽而言，肽和治疗药物被直接地或间接地(通过接头)连接至肽的α氨基末端、α羧基末端、或侧链，如在美国专利号7,767,648和7,468,354中所描述的。在该实施方案中进一步优选的实施方案中，在治疗药物和肽之间的键合为在肽的氨基末端或侧链发生的直接键合。
在以上实施方案两者中，在治疗药物上的附接位点必须使，当偶联至肽时，药物的非特异性毒性基本上被抑制。因此前体药物不应为显著地有毒的。
本发明的活性化合物还可包含增强活性化合物在溶剂中的溶解性的基团，活性化合物将在所述溶剂中使用。最常见的是溶剂为水，但是还可包括多糖类或其它经羟基化的部分。例如，葡聚糖、环糊精、淀粉以及此类基团的衍生物可被包含于本发明的肽或前体药物中。在优选的实施方案中，为肽或前体药物提供溶解性的基团为聚合物，例如多聚赖氨酸或聚乙二醇(PEG)。
药物制剂
在例如美国申请号12/087,398和13/257,131中公开了用于本发明的化合物的药物制剂。
本文提供了包含本发明的活性化合物的药物组合物。这些药物组合物包含于药学上可接受的载体中的治疗有效量的目前公开的活性化合物。
可制备药物制剂用于口服、静脉内、或气雾剂施用，如以下更详细地讨论的。在优选的实施方案中，目前公开的主题提供了已被冻干并且能被重构以形成药学上可接受的制剂用于诸如通过静脉内注射或肌肉内注射的施用的活性化合物。
适于肠胃外施用的制剂包括可包含抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂以及使得制剂与预期的接受者的血液等张的溶质的水性和非水性的无菌注射溶液；以及可包含悬浮剂和增稠剂的水性或非水性的无菌混悬剂。
有用的可注射组合物包括活性化合物在水或油媒介物中的无菌混悬剂、溶液或乳液。在一个实施方案中，组合物还可包含诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的配制剂。适于注射的组合物可以以例如在安瓿中或在多剂量容器中的单位剂量形式展示，并且可包含添加的防腐剂。可选地，可注射组合物可以以用于在使用前用合适的媒介物重构的粉末的形式提供，所述合适的媒介物包括但不局限于无菌的水、缓冲液、右旋糖溶液等。为了该目的，本发明的活性化合物可通过任何领域已知的技术来干燥，诸如冻干并在使用前重构。
为了延长的递送，可将活性化合物配制成用于通过植入或肌肉内注射施用的储库制品。可用合适的聚合的或疏水的材料(例如，作为可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制活性化合物，或将其配制成微溶的衍生物，例如作为微溶的盐。
取决于用于施用药物的方法，可以以多种方式包装用于应用的药物组合物(或制剂)。通常地，用于分配的试剂盒或物品包含有药物制剂以适当的形式存放于其中的容器。合适的容器是本领域技术人员所熟知的并且包括诸如瓶(塑料的和玻璃的)、袋、安瓿、塑料袋、金属筒等的材料。容器还可包括防损害装置(tamper-proof assemblage)以避免轻率地接近包裹(package)的内容物。另外，容器具有描述容器的内容物的被置于其上的标签。标签还可包含适当的警告。
可制备本发明的活性化合物的药物制剂用于施用的多种路径和类型。具有期望的纯度的化合物任选地以冻干的制剂、磨碎的粉末、或水溶液形式与药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂(Remington’sPharmaceutical Sciences(1980)第16版，Osol,A.编辑)混合。可通过在环境温度下在适当的pH下，并且以期望的纯度与生理上可接受的载体例如在所使用的剂量和浓度下对接受者无毒的载体混合来进行配制。制剂的pH主要地取决于特定的用途和化合物的浓度，但是可从约3至约8变化。在pH 5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施方案。
本文用于用途的活性化合物优选地是无菌的。活性化合物可作为固体组合物、冻干的制剂、或水溶液来贮存。本文描述的药物制剂可利用本领域所熟知的技术来冻干。在此类实施方案中，活性化合物以冻干物的形式来提供，所述冻干物能用合适的药学上可接受的载体重构以形成适于将其注射入受试者中的液体制剂。
在本发明的优选的实施方案中，本发明的活性化合物的药物制剂包括含有本发明的活性化合物的可注射乳剂组合物。
在一个实施方案中，本发明提供了于安全且商业上可行的可注射乳剂中的本发明的活性化合物，所述安全且商业上可行的可注射乳剂(a)无诸如有机溶剂或表面活性剂的任何水溶性和有毒的稳定剂，(b)足够地稳定以提供可接受的货架寿命，(c)包含小的油滴并且可过滤通过0.2微米的滤器，(d)是透明或半透明的并且(e)是可冻干的。
在一个实施方案中，本发明的乳剂为米白色、半透明的组合物，其包含直径小于约200纳米、或更优选地小于约150nm、或更优选地小于约75nm的平均大小的油滴。乳剂是稳定的并且冻干的形式具有良好的长期的稳定性。化学上来讲，其保持了本发明的活性化合物的完整性，并且物理学上来讲，其在长期贮存(例如，至少3个月，如在实施例6和实施例7中显示的)后保持半透明或透明并且保持纳米液滴的大小。另外，在一些实施方案中，乳剂以甚至在3个冻融处理循环之后高的透光率和小的液滴大小为特征(参见，例如实施例2和实施例4)。生物学上来讲，除了活性化合物部分，乳剂是非变应原的，不引起超敏性或过敏性反应，并且是非溶血性的。虽然不希望被任何特别的理论束缚，但是可推测公开的可注射乳剂使本发明的亲脂性前体药物可溶于油滴中。
在一个实施方案中，本发明提供了含有比在现有技术的可注射乳剂中公开的油浓度(约10-20％)低得多的油浓度(约2-3％)的可注射乳剂组合物。
在另一个实施方案中，本发明提供了含有比当前在现有技术的可注射乳剂中公开的卵磷脂浓度(小于约2％)高的多的卵磷脂浓度(约5-10％)的可注射乳剂组合物。
在优选的实施方案中，本发明提供了含有比在现有技术的可注射乳剂中公开的油浓度(约10-20％)低的多的油浓度(约2-3％)并且含有比当前在现有技术的可注射乳剂中公开的卵磷脂浓度(小于约2％)高的多的卵磷脂卵磷脂浓度(约5-10％)的可注射乳剂组合物。
在这些实施方案的变化形式中，本发明提供了使用由油(例如，大豆油)和中链甘油三酯油组成的两种油形成油相的可注射乳剂组合物，其中总的油浓度为最多3％，并且在优选的实施方案中为约1-3％。
在这些实施方案的仍然另一种变化形式中，本发明提供了使用约10-15％的蔗糖作为渗透压调节剂代替在现有技术的可注射乳剂中使用的2.2％甘油的可注射乳剂组合物。
在这些实施方案的另外的变化形式中，本发明包括含有约1.5％至约2.5％、优选地约2％的本发明的活性化合物，最多约1.5％、优选地约0.5-1％的油(例如，大豆油)，最多约1.5％、优选地约0.5-1％的中链甘油三酯，约5-15％、优选地约5-10％的卵磷脂，以及约10-15％的蔗糖的乳剂组合物，所有的百分率基于组合物的总重量。
在这些实施方案的另一个变化形式中，卵磷脂与前体药物的重量比率为约5:1至约7.5:1。在另外的实施方案中，卵磷脂与油的重量比率可以为约10:1至约5:1。
在这些实施方案的仍然另一个变化形式中，卵磷脂与前体药物的重量比率为约2.5:1至约5:1。在该实施方案的变化形式中，卵磷脂与油的比率可以为约10:1至约5:2。
本文公开的可注射乳剂组合物能为本发明的活性化合物提供对于可商业化的药物足够的长期的货架寿命。
作为水包油乳剂，本发明的可注射乳剂组合物在其组成和特性上显著地不同于其它的现有技术的可注射乳剂组合物。在一个实例中，传统的用于静脉内注射的可注射乳剂可由Propofol Injectable Emulsion的组合物代表，其包含10％植物油作为油相，1.8％蛋卵磷脂作为乳化剂以及2.25％甘油作为渗透压调节剂，其中药物被溶解于油滴中并且油滴悬浮在水相中。相似的组合物被用来溶解其它不溶性药物，诸如在包含20％植物油、1.8％蛋卵磷脂和2.25％甘油的Clevidipine Injectable Emulsion中(参见，例如www.cleviprex.com/clev-pdfs/1％2014_Proposed_PI-S-003％20(clean％20ver).pdf))，以及在包含15％植物油、1.2％蛋卵磷脂和2.2％甘油的DiazepamInjectable Emulsion中(参见，例如www.pfizer.ca/en/our_products/products/monograph/203)。可将这些现有技术的可注射乳剂的一般组成概括为具有约10-20％的植物油、小于2％的卵磷脂以及约2.2％的甘油。此外，这些现有技术的可注射乳剂共有相似的物理特性，即，其是乳白色的且外观上不透明、具有直径约300-400nm的平均液滴大小、并且被提供为水性液体。这些现有技术的乳剂组合物均非作为干的粉末可得的，并且因此不能用于诸如本发明的活性化合物的对水敏感的药物。
在一个实施方案中，本发明的可注射乳剂外观上是半透明的，而不是“乳白色且不透明”。具有半透明的外观或高的透光率允许使用者在注射前检查乳剂中任何污染物或杂质的存在。这将有助于确保乳剂药物的安全。本发明的可注射乳剂具有优选地至少约30％、更优选地至少约40％、还更优选地至少约50％、并且还更优选地至少约60％、并且还更优选地至少约80％的透光率，与诸如Propofol Injectable Emulsion的现有技术的乳剂的小于约20％相比。
在另一个实施方案中，本发明的可注射乳剂具有比现有技术的乳剂小的多的平均液滴大小。用于本发明的化合物的可注射乳剂的通常的液滴大小为直径在100nm和200nm之间，并且可以直径小于100nm。相对地，诸如Propofol Injectable Emulsion的在现有技术中公开的乳剂产品具有300nm和400nm之间的通常的液滴大小。本发明的乳剂的较小的液滴大小允许乳剂通过过滤穿过0.2微米的滤器来灭菌。由于诸如高温、高压锅、辐射或气体的其它灭菌方法能破坏本发明的活性化合物，所以此类过滤除菌对本发明的前体药物的可注射组合物是重要的。
在一个实施方案中，本发明的乳剂组合物具有直径不大于约200nm、优选地直径不大于约175nm、优选地直径不大于约150nm、优选地直径不大于100nm、以及优选地直径不大于75nm的平均初始液滴大小。
在另一个实施方案中，本发明的乳剂组合物在冻融压力后，保持直径不大于约200nm、优选地直径不大于约175nm、优选地直径不大于约150nm、优选地直径不大于100nm、以及优选地直径不大于75nm的平均液滴大小。
在另一个实施方案中，本发明的乳剂组合物具有直径不大于约200nm的初始液滴大小并且在冻融压力后保持直径不大于约200nm的平均液滴大小。优选地，本发明的乳剂组合物具有直径不大于约150nm的初始液滴大小并且在冻融压力后保持直径不大于约200nm的平均液滴大小。
在本文公开的本发明的实施方案的另一种变化形式中，本发明的可注射乳剂可被冻干并以干的形式提供。相对地，现有技术的乳剂不能被冻干并且仅能作为水性乳剂提供。本发明的乳剂的可冻干的性质提供了本发明的活性化合物的长期的稳定性并且允许本发明的乳剂作为药物产品在商业上是可行的。在一个实施方案中，本发明的可注射乳剂为本发明的活性化合物提供至少3个月、优选地至少6个月、优选地至少12个月、优选地至少24个月的稳定性，并且在一些实施方案中，以冻干的形式持续至少48个月是稳定的。重构后，本发明的乳剂组合物将优选地保持乳剂组合物的以其冻干前的百分率的成分。在一些实施方案中，在重构后，乳剂组合物持续约6个小时至约48个小时是稳定的。
在一个实施方案中，本文公开的乳剂组合物为水包油乳剂，所述水包油乳剂包含组合物的总重量的约1.5％至约2.5％、优选地约2％的本发明的活性化合物；组合物的总重量的最多约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的大豆油或相似的油；组合物的总重量的最多约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的中链甘油三酯；组合物的总重量的约5％至约15％、优选地约5％至约12％、并且更优选地约5％至约10％的卵磷脂；以及组合物的总重量的约8％至约17％、优选地约10％至约15％的蔗糖。
在一个实施方案中，本文公开的乳剂组合物为干的(例如冻干的)组合物，在与水混合后，其形成水包油乳剂，所述水包油乳剂包含组合物的总重量的约1.5％至约2.5％、优选地约2％的本发明的活性化合物；组合物的总重量的多达约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的大豆油或相似的油；组合物的总重量的多达约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的中链甘油三酯；组合物的总重量的约5％至约15％、优选地约5％至约12％、并且更优选地约5％至约10％的卵磷脂；以及组合物的总重量的约8％至约17％、优选地约10％至约15％的蔗糖。
该发明还提供了制备包含以下的水包油乳剂的方法：组合物的总重量的约1.5％至约2.5％、优选地约2％的本发明的活性化合物；组合物的总重量的最多约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的大豆油或相似的油；组合物的总重量的最多约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的中链甘油三酯；组合物的总重量的约5％至约15％、优选地约5％至约12％、并且更优选地约5％至约10％的卵磷脂；以及组合物的总重量的约8％至约17％、优选地约10％至约15％的蔗糖。
本发明还提供了制备干的(例如冻干的)组合物的方法，所述干的组合物在与水混合后形成包含以下的水包油乳剂：组合物的总重量的约1.5％至约2.5％、优选地约2％的本发明的活性化合物；组合物的总重量的最多约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的大豆油或相似的油；组合物的总重量的最多约5％、优选地约0.5％至约3％、并且更优选地约0.5％至约1％的中链甘油三酯；组合物的总重量的约5％至约15％、优选地约5％至约12％、并且更优选地约5％至约10％的卵磷脂；以及组合物的总重量的约8％至约17％、优选地约10％至约15％的蔗糖(所有的百分率基于组合物的总重量)。
本发明的乳剂还可包含药学上可接受的添加剂，所述药学上可接受的添加剂包括但不局限于酸化剂、碱化剂、抗氧化剂、抗菌性防腐剂、渗透压调节剂、冷冻保护剂、及其它可注射的组分。在某些实施方案中，此类添加剂帮助稳定乳剂并给予本发明的组合物足够的货架寿命。在优选的实施方案中，本组合物为化学上和物理上两者均稳定的。
剂量
本发明的前体药物或其组合物将通常地以有效地达到意图的目的的量来使用。当然，要理解所使用的量将取决于特定的应用。
为了用来治疗或预防肿瘤或者靶向细胞生长或与其相关的疾病，以治疗上有效的量施用或应用本发明的前体药物或其组合物。
对于系统施用，可从体外测定最初地估计治疗上有效的剂量。例如，可在动物模型中配制剂量以达到循环的前体药物浓度范围，所述循环的前体药物浓度范围包括如在细胞培养物中确定的IC50(例如，对50％的细胞培养物致死的测试化合物的浓度)、如在细胞培养物中确定的MIC(例如，对生长的最小抑制浓度)或如在细胞培养物中确定的IC100(例如，对100％的细胞培养物致死的肽的浓度)。此类信息可用来更精确地确定在人类中的有用的剂量。
还可利用本领域所熟知的技术从体内数据例如动物模型估计初始剂量。基于动物数据，本领域普通技术人员会容易地优化对人类的施用。
当然，所施用的活性化合物的量将取决于正在被治疗的受试者，取决于受试者的体重、疾病的严重程度、施用的方式以及处方医生的判断。
可间歇地重复疗法。疗法可单独地或与诸如例如其它的抗肿瘤物质或其它的药学上有效的物质的其它药物联合而被提供。
毒性
优选地，本文描述的活性化合物的治疗上有效的剂量将提供治疗益处而不导致实质的毒性。
本文描述的活性化合物的毒性可在细胞培养物或实验动物中通过标准制药学过程确定，例如，通过确定ID50(对群体的50％致死的剂量)或LD50(对群体的100％致死的剂量)。毒性作用和治疗作用之间的剂量比率为治疗指数。表现出高的治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养测定和动物研究获得的数据可被用于配制对在人类中使用无毒性的剂量范围。本文描述的活性化合物的剂量优选地在包含有效的剂量而几乎无或无毒性的循环浓度的范围。剂量可根据所使用的剂型和利用的施用路径而在该范围内变动。个体医师可考虑患者的状况选择确切的制剂、施用的路径和剂量。(参见，例如，Fingi等人,1975,于:The Pharmacological Basis ofTherapeutics，第1章，第1页中)。
制品
在本发明的另一个实施方案中，提供了包含可用于治疗以上所描述的紊乱的材料的制品或“试剂盒”。制品包括容器以及在容器上或与其关联的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子(bottle)、小瓶(vials)、注射器、泡罩包装等。容器可由诸如玻璃或塑料的多种材料形成。容器容纳对治疗状况有效的活性化合物或其制剂(例如，本发明的可注射乳剂的冻干的、水合的或再水合的形式)并且可具有无菌进入口(例如容器可以是具有可被皮下注射针刺破的塞子的静脉内注射溶液包或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂为本发明的活性化合物。标签或包装说明书指示，组合物用于治疗诸如细胞增生性紊乱或癌症的选择的状况。在一个实施方案中，标签或包装说明书包括使用说明并指示，组合物包含本发明的化合物并可被用来治疗细胞增生性紊乱或癌症。
在另一个实施方案中，试剂盒可包括(a)有本发明的活性化合物或其制剂包含于其中的第一容器；和(b)有第二药物制剂包含于其中的第二容器，其中第二药物制剂包含具有抗肿瘤或抗增生活性的第二化合物。本发明的该实施方案中的制品还可包括指示第一化合物和第二化合物可被用来治疗患有诸如癌症的细胞增生性紊乱的患者的包装说明书。可选地，或另外地，制品还可包括含有诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液的药学上可接受的缓冲液的第二(或第三)容器。其还可包括从商业和使用者的角度来看期望的其它材料，所述其它材料包括其它的缓冲液、稀释剂、滤器、针、和注射器。
治疗方法
本发明还提供了以本发明的活性化合物治疗生成靶向本发明的肽序列的蛋白酶(例如，FAP、hK2、PSMA和PSA)的细胞增生性紊乱或癌症的方法。本发明的活性化合物和/或其类似物或衍生物可以有效治疗此类紊乱的量被施用至包括人类或非人类动物的任何宿主。
如以上说明的，本发明的活性化合物可通过注射或通过随时间逐渐输注来肠道外地施用。可静脉内地、腹腔内地、肌内地、皮下地、腔内地或透皮地施用前体药物。用于递送本发明的活性化合物的优选的方法包括静脉内或皮下施用。在一个实施方案中，递送本发明的活性化合物的优选的方法是经由可注射乳剂。施用的其它方法以及给药方案将是本领域技术人员已知的。
在一个实施方案中，本文描述的可注射乳剂可被用来施用本发明的活性化合物用于在疑似患有癌症的受试者、诊断为患有癌症的受试者或有患癌风险的受试者中治疗细胞增生性紊乱或癌症。
在一个实施方案中，本文描述的可注射乳剂可被用来施用本发明的活性化合物用于在疑似患有癌、黑色素瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、和白血病或淋巴性恶性肿瘤的受试者，已诊断患有其或有患有其的风险的受试者中治疗包括癌症的细胞增生性紊乱。另外，在该实施方案中，本文描述的可注射乳剂可被用来施用本发明的活性化合物用于在已被诊断患有上皮癌或有患有其的风险的受试者中治疗癌症。在该实施方案的另外的变化形式中，本文描述的可注射乳剂可被用来施用本发明的活性化合物用于在已被诊断患有前列腺癌、肝癌或乳腺癌或有患有其的风险的受试者中治疗癌症。在另一个实施方案中，本文描述的可注射乳剂可被用来施用本发明的活性化合物用于治疗例如BPH的细胞增生性紊乱。
联合疗法
本发明的化合物可在药物联合制剂、或作为联合疗法的给药方案中与具有抗增生特性或可用于治疗包括癌症的细胞增生性紊乱的第二化合物联合。药物联合制剂或给药方案的第二化合物优选地具有与本发明的活性化合物互补的活性以使得两者不相反地影响彼此。此类分子合适地以对所意图的目的有效的量联合地存在。
联合疗法可作为同时的或顺序的方案来施用。当顺序地施用时，可在两次或更多次施用中来执行联合。联合施用包括利用各个单独的制剂或单个药物制剂来共同施用、和以任一顺序连续施用，其中优选地有一个时间期间两种(或所有的)活性剂同时地发挥其生物活性。对于任何以上共同施用的剂，合适的剂量为目前使用的那些，并且由于新鉴定的剂和其它的化学治疗剂或治疗的联合作用(增效)，合适的剂量可被降低。
联合疗法可提供“增效”并表现出“协同的”，例如当活性成分一起使用时，达到的效果比单独地使用各化合物产生的效果的和大。当活性成分：(1)被共同配制并在联合的、单位剂量制剂中被同时地施用或递送时；(2)作为单独的制剂被交替或平行地递送时；或(3)通过一些其它的方案时，可获得协同效应。当以交替疗法递送时，当化合物例如通过在各自的注射器中的不同的注射而被顺序地施用或递送时，可获得协同效应。通常，在交替疗法期间，有效剂量的每种活性成分被顺序地例如连续地施用，而在联合疗法中，有效剂量的两种或更多种活性成分被一起施用。
作为一个实例，可以与外科手术联合的方式施用剂，以移除异常增生性细胞团块。如本文使用的，“与外科手术联合”意思是可在外科手术过程之前、期间或之后施用剂。用于治疗上皮肿瘤状况的外科手术方法包括腹内外科手术，诸如右半结肠切除术或左半结肠切除术，乙状结肠、不完全或完全结肠切除术和胃切除术，彻底的或部分的乳房切除术，前列腺切除术和子宫切除术。在这些实施方案中，可通过连续输注或在单个大丸药中施用剂。在外科手术期间或在外科手术之后即刻施用可包括用在药学上可接受的载体中的剂的药物制品灌洗、浸泡或灌注肿瘤切除位点。在一些实施方案中，在外科手术时以及在外科手术之后施用剂以抑制转移性病灶的形成和发展。在外科手术过程之后，剂的施用可持续几小时、几天、几周，或在一些实例中几个月，以移除肿瘤团块。
还可以与非外科手术的抗增生(例如抗癌)药物疗法联合的方式对受试者施用剂。在一个实施方案中，可以与诸如细胞抑制化合物的抗癌化合物联合的方式施用剂。细胞抑制化合物为抑制细胞生长和/或增殖的化合物(例如，核酸、蛋白质)。在一些实施方案中，细胞抑制化合物针对肿瘤的恶性细胞。在仍然其它的实施方案中，细胞抑制化合物为抑制血管平滑肌细胞或成纤维细胞的生长和/或增殖的化合物。
要与本发明的剂联合使用的合适的抗增生药物或细胞抑制化合物包括抗癌药物。抗癌药物是本领域熟知的并例如在美国专利申请号12/087,398中被描述。
根据本发明的方法，可在其它的抗癌化合物之前、与其同时、或在其之后施用本发明的剂。施用时间表可包括以交替的模式施用不同的剂。在其它的实施方案中，可在用其他的疗法治疗之前和期间、或期间和之后、或之前和之后递送剂。在一些情况下，在施用其它的抗增生治疗之前多于24小时施用剂。在其它的实施方案中，可对受试者施用多于一种的抗增生疗法。例如，受试者可以与外科手术和至少一种其它的抗增生化合物两者联合的方式接受本发明的剂。可选地，可以与多于一种抗癌药物联合的方式施用剂。
制备前体药物化合物的方法
本发明提供了制备本发明的活性化合物的方法。该方法包括使治疗活性药物连接至以上描述的本发明的肽。在某些实施方案中，肽被直接地连接至药物；在另外的实施方案中，肽经由接头被间接地连接至药物。在某些实施方案中，肽的羧基末端被用于与例如对被PSA、hK2和FAP裂解敏感的前体药物连接。在其它的实施方案中，肽的氨基末端被用于与例如对被PSMA裂解敏感的前体药物连接。在美国申请号61/791,909中公开了制备本发明的PSMA前体药物的一个实例。
在一些实施方案中，治疗药物包含伯胺以利于与肽形成酰胺键。用于偶联羧基和氨基基团以形成酰胺键的很多可接受的方法为本领域技术人员已知。
肽可经由接头偶联至治疗药物。合适的接头包括但不局限于含有伯胺的任何化学基团，并包括氨基酸，含伯胺的烷基、烯基或芳烃基基团。接头和治疗药物之间的连接可以是本领域已知的任何类型，优选地为共价键合。
可与本发明的肽前体药物一起使用的接头也已在美国专利号7,906,477、7,053,042、7,767,648、7,468,354、6,265,540、6,504,014、6,410,514、6,545,131和7,635,682以及美国专利申请号12/087,398、13/471,316和13/257,131中被描述。
在某些实施方案中，接头包括氨基酸或氨基酸序列。序列可以是任何长度，但是优选地在1和10个氨基酸之间，最优选地在1和5个氨基酸之间。
前体药物化合物可根据本领域技术人员已知的标准合成或重组技术来制备。例如，可通过常规固相或液相肽化学法来合成肽连接部分。可从商业来源或从诸如从天然来源纯化、重组表达和其它技术的其它熟知的方法来获得生物活性实体和掩蔽部分。双极性接头和间隔部分可被合成或从商业来源或从其它熟知的方法来获得。
通常地，通过使掩蔽部分和生物活性实体与连接部分缩合来合成地制备前体药物。被熟知的保护基团可在前体药物化合物的制备中被有益地使用。如果连接部分是肽并且生物活性实体为多肽并且连接部分的末端经由酰胺键连接至生物活性实体的互补末端，则前体药物或其部分可方便地通过重组合成来制备。可制备编码连接部分的氨基酸序列以及生物活性剂的核酸并用来通过标准技术表达共价连接部分-生物活性剂复合体(参见，例如Ausubel等人,1987,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,New York)。然后掩蔽部分可通过标准溶液相肽化学法被连接至例如连接部分的氨基末端。如果掩蔽部分也是肽或多肽并且掩蔽部分的末端也经由酰胺键被连接至连接部分的互补末端，则整个前体药物可方便地通过重组合成技术来制备。表达前体药物的核酸应编码串联的掩蔽部分、连接部分和生物活性实体的氨基酸序列。可在任何真核或原核系统中表达通过重组合成生成的前体药物，在所述任何真核或原核系统中连接部分不被蛋白酶、肽酶或其它因子裂解。
现在将通过参考以下非限制性实施例来更详细地描述本发明。
实施例1.包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln-L12ADT(SEQ ID NO:18)的乳液的制 备
利用以下组成和过程来制备包含连接至肽Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQID NO:18)(本文称作“G-115”)的羧基末端的毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)的乳剂：
G-115F9组合物
过程
1.称量出大豆油、中链甘油三酯、大豆卵磷脂、和蔗糖，并连同约80％批次大小的去离子水一起转移至合适大小的容器。记录所添加的每种成分的重量。
2.利用高剪切混合器(例如Silverson Model L5)在约5000RPM下持续约2分钟使均质化以获得粗制(crude)乳剂。
3.称量出批次量的G-115并将其转移至乳剂中。高剪切以溶解所有固体。
4.均质化并利用1N盐酸或氢氧化钠来调节pH至3-4之间。
5.添加去离子水至总的批次重量。
6.利用微流射器(microfluidizer)(例如Model M110EH,MicrofluidicsCorporation)均质化，直到如通过激光散射(LLS)方法(例如，Model NanoZS,Malvern Zeta大小分拣器)确定的平均液滴大小小于150nm。
7.将乳剂过滤通过0.22μm滤器以对乳剂灭菌。
8.无菌地，将过滤的乳剂装至无菌小瓶。
9.卷边(crimp)密封小瓶。
如此制备的G-115F9乳剂为米白色且半透明的溶液，具有小于150nm的液滴大小。
实施例2.含G-115的乳剂的组成及液滴大小
通过在实施例1中描述的过程利用以下组成制备多种含2％w/w G-115的乳剂：
通过激光散射(LLS)方法(例如，Model NanoZS,Malvern Zeta大小分拣器)对每种组合物确定平均液滴大小。
在F2、F3、F4、F9和F10中观察到表现出小于150nm的初始液滴大小以及在3个冻融循环后小于200nm的液滴大小的组合物。这些组合物包含约2％的G-115、约0-1％的大豆油、约0-1％的中链甘油三酯、约10-15％的卵磷脂和约10-15％的蔗糖。在这些组合物中卵磷脂与药物的重量比被确定为约5:1至7.5:1。对于F9和F10的组合物，卵磷脂与油的比率被确定为约10:1至5:1。还观察到，在组成中包含油的组合物F9和F10表现出比不含油的F2、F3和F4小的初始液滴大小以及小的三次冻融循环后的液滴大小。
实施例3.含被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486) (本文也称作“G-202”)的肽的天冬氨酸的毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十 二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)的乳剂的制备。
利用以下组成和与在实施例1中所描述的相似的过程制备含2％G-202的乳剂：
G-202 F9组合物
·在室温下测量的密度为1.026g/mL
**相当于2.052mg/mL
过程：
1.称量出批次量的卵磷脂、大豆油、中链甘油三酯、蔗糖和约80％批次量的WFI，并转移至合适大小的容器。记录所添加的每种成分的重量。
2.利用高剪切混合器(例如Silverson Model L5)在约5000RPM下持续约2分钟使均质化以形成初级乳剂。
3.称量出批次量的G-202并将其转移至乳剂中。高剪切以溶解所有固体。
4.用1-2％批次大小的WFI冲洗混合器头。收集冲洗液并转移回初级乳剂。
5.用1N精氨酸溶液将粗制乳剂的pH调节至6.5+/-0.2。
6.添加更多的WFI至目标批次大小。高剪切以形成均一的初级乳剂。
7.利用微流射器(Model M110EH,Microfluidics Corporation)对初级乳剂微流射10次，以使液滴大小降低至如通过激光散射(LLS)方法(Model NanoZS,Malvern Zeta大小分拣器)确定的平均直径小于150nm。
8.测量pH。按需用1N精氨酸将pH调节至6.0+/-0.2。
9.在生物安全性的罩中，使经微流射的乳剂无菌地过滤通过无菌0.2μm滤器(Polyethersulfone,Nalgene)到无菌的接纳容器。
10.将过滤的乳剂装入无菌的USP Type I 2-mL玻璃小瓶(供应商：Schott,目录号#:68000314)中并用无菌的橡胶堵口(closure)(供应商：FisherScientific,目录号#:06447D)卷边密封。
如此制备的G-202F9乳剂为米白色且半透明的溶液，液滴大小小于150nm。
实施例4.含G202的乳剂的组成和液滴大小
通过在实施例3中描述的过程利用以下组成制备含2％G-202的乳剂：
通过激光散射(LLS)方法(例如，Model NanoZS,Malvern Zeta大小分拣器)对每种组合物确定平均液滴大小。在F9、F105、和F106中观察到表现出小于150nm的初始液滴大小并且在3个冻融循环后小于200nm的液滴大小的组合物。这些组合物包含约2％的G-202、约0.5-1％的大豆油、约0.5-1％的中链甘油三酯、约5-10％的卵磷脂和约10-15％的蔗糖。卵磷脂与药物的重量比为约2.5:1至5:1，并且卵磷脂与油的比率为约10:1至5:2。
实施例5.冻干
利用以下描述的方法对包含G-115(实施例1)和G-202(实施例3)的F9组合物进一步冻干：
1.将1.0mL经过滤的乳剂装入2–mL USP type I玻璃小瓶(Schott，目录号#68000314)。放置塞子在小瓶上下行一半(13mm灰色丁基胶塞子，Wheaton，目录号#06447E)。
2.将小瓶置于有以下冷冻-干燥循环条件的冻干仪(FTS System Model:DuraStopμP)中：
冷冻阶段参数：
干燥阶段参数：
3.冻干后，用过滤的氮气，NF回填小瓶并在约95％大气压下密封小瓶。
4.对于重构，将0.75mL WFI添加至每个小瓶中。用手重复颠倒小瓶至少2分钟或直到所有固体块溶解以形成均匀的乳剂。
该冻干方法在小瓶中对每个制剂生成米白色、均匀的块状物样的干燥形式。在将水添加至含冻干物的小瓶直到冻干前的重量后，冻干物形成米白色且半透明的溶液。如在实施例2和实施例4中显示的对每种组合物确定重构的乳剂的液滴大小。
实施例6.含G-115的乳剂的稳定性
根据实施例1至5制备了一批G-115F9冻干的乳剂(批号#141-1-46)并测试稳定性。稳定性测试包括外观、pH、G-115测定和通过HPLC的纯度，以及如通过激光散射确定的平均液滴大小。
冻干的块状物的外观
重构的乳剂的外观
重构的乳剂的光学显微镜观察(200×放大率)
G-115测定(mg/小瓶)
％标示量(标示量＝20mg/小瓶)
色谱纯度％(％峰面积)
通过激光散射方法的平均液滴大小(nm)
结论：冻干形式的G-115F9在-20℃、2-8℃和25℃下持续3.5个月是物理上和化学上稳定的。
实施例7.含G-202的乳剂的稳定性
根据实施例3和实施例5制备了一批G-202F9冻干的乳剂(批号#141-2-1)并测试了稳定性。稳定性测试包括外观、pH、G-202测定和通过HPLC的纯度，以及如通过激光散射确定的平均液滴大小。
冻干的块状物的外观
重构的乳剂的外观
显微镜观察(200×放大率)
pH
G-202测定(mg/小瓶)
％标示量(标示量＝20mg/小瓶)
色谱纯度％(％峰面积)
通过激光散射方法的平均液滴大小(nm)
结论：冻干形式的G-202F9在-20℃、2-8℃和25℃下持续3个月是物理上和化学上稳定的。
实施例8：透光率值的确定
用注射用水将一批G-202F9冻干的乳剂(批号#141-2-1L)重构至约20mg/mL。将重构的乳剂放入1-mm杯中用于透光率测量(型号：PharmaciaLKB,Ultraspec III)。在600nm处测量的透光率为91.6％。
实施例9：药代动力学分布的比较
该研究的目的是在单剂量腹膜内缓慢弹丸式注射至雄性食蟹猴(cynomolgus monkey)后，评价并比较与聚丙二醇/聚山梨醇酯20一起制成的G-202(制剂A)和作为纳米乳剂制成的G-202(G-202F9，制剂B)的药代动力学分布。对于制剂A稀释剂为聚丙二醇、聚山梨醇酯20、和0.9％氯化钠，对于制剂B稀释剂为注射用水和5％右旋糖。该研究为利用测试物品的两种不同制剂和两个给药事件的交叉设计。对动物过夜禁食并在给药后约2小时饲喂。在给药事件之间有约3周的清除期。猴就之前的药物处理而言是非首次用于实验的，但是基于在研究开始之前的体格检查和临床病理学评价被认为是处于良好健康的。根据在以下表中显示的实验设计对动物给药。在两个给药场次(事件)的每一个中使用测试物品的两种不同制剂。对动物过夜禁食并在给药后约2小时饲喂。在第1天和第20天的给药事件之间有约3周的洗脱期。
在给药的每一天，在以下列出的时间点从每只猴采集血液样品(约1mL/样品)。在指定的最佳时机(window)内收集所有的样品。
样品收集时间表
在每个给药事件后对每种制剂确定浓度。另外，收集用来制备制剂A和制剂B的每种媒介物制品的样品。用于制剂B的给药溶液满足可接受的标准(额定的0.4mg/mL药物浓度的96％和95％)。对于制剂A，药物浓度的分析比可接受的标准(±10％)低(额定的0.4mg/mL的77％和79％)；因此，实际浓度和标准化的剂量值被用于选择的药代动力学值的比较。
在给药之前以及给药后0.25、0.5、1、3、9、12、24和48小时时，经由股静脉从每只猴收集血样样品(约1mL/样品)。冷冻贮存血浆直到经由LC-MS/MS方法分析。
在表5中显示了两种制剂中的G-202的药代动力学参数(图9)。在图10中显示了个体动物G-202浓度相对时间的图。在图11中显示了平均G-202浓度相对时间的图。
在以下表中显示了两种制剂的平均值(±SD)药代动力学参数。
对于两种制剂，均在给药后的第一取样点0.25小时时观察到平均Tmax。制剂之间G-202的消除半衰期是相似的；对于制剂A平均半衰期为9.87小时，并且对于制剂B平均半衰期为9.93小时。两种制剂之间的分布体积也是相似的(对于制剂A 54.8mL/kg，对于制剂B 58.8mL/kg)。两种制剂间的清除值是相似的(对于制剂A 3.83mL/hr//kg，对于制剂B 4.14mL/hr//kg)。
因为两种制剂间给药水平的不同，所以Cmax和AUC0-∞基于剂量标准化的基础比较。两种制剂间的平均剂量标准化的AUC0-∞值是相似的(对于制剂A 265,000hr*kg*ng/mL/mg，对于制剂B 252,000hr*kg*ng/mL/mg)。两种制剂间的平均剂量标准化的Cmax是相似的，尽管对于制剂A略微地较高(对于制剂A 29,300kg*ng/mL/mg，对于制剂B 25,100kg*ng/mL/mg)。
基于来自该研究的数据，两种制剂的药代动力学是相似的。
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本文例证地表述的本发明可在本文未具体地公开的任何一个或更多个元素、一个或更多个限制不存在的条件下被合适地实践。因此，例如，应可扩展地而无限制地解释术语“包含(comprsing)”“包括(including)”“含有(containing)”等。另外地，本文使用的术语和表述已被用作描述性的而非限制性的术语，并且在使用此类术语和表述时不意图排除所显示和所描述的特征的任何等同物或其部分，但是认识到多种改变可能在本发明要求的范围内。因此，应理解，尽管本发明已通过优选的实施方案和任选的特征被具体地公开，但是本领域技术人员可寻求本文在其中具体化的本发明的改变和变化形式，并且认为此类改变和变化形式在本发明的如由所附的权利要求所限定的范围内。
本文已广泛地且一般性地描述了本发明。落在一般性的公开内容内的每种狭窄的形式和亚属的组群也形成本发明的部分。这包括本发明的一般性描述，带有从类(genus)除去任何主题的附带条件和负面限制，无论本文是否具体地列举了被除去(excised)的材料。
本文公开的和要求权利的所有组合物和方法鉴于本公开内容均可被制备和执行而无过度实验。尽管该发明的组合物和方法已根据优选的实施方案而被描述，但是变化形式可被应用到本文描述的组合物和方法以及方法的步骤顺序的步骤中而不偏离本发明的概念、精神和范围，这对本领域技术人员而言是明显的。更特别地，化学上和生理上均相关的某些剂可替代本文描述的剂而会达到相同或相似的结果，这将是明显的。认为对本领域技术人员是明显的的所有此类相似的替代和改变在如所附的权利要求所限定的本发明的精神、范围和概念内。
其它的实施方案在所附的权利要求中阐明。

Claims (186)

1.一种药物组合物，所述药物组合物适于静脉内施用，所述药物组合物包含：
(a)前体药物，所述前体药物包含
包含倍半萜-γ-内酯、其类似物或衍生物的治疗活性药物，和
包含具有对与细胞增生性紊乱有关的蛋白酶特异的裂解位点的氨基酸序列的肽，
其中所述肽的长度为20个或更少个氨基酸，
其中所述肽被连接至所述治疗活性药物以抑制所述药物的治疗活性，并且其中所述治疗活性药物在被所述蛋白酶蛋白水解后被从所述肽裂解；以及
(b)药学上可接受的媒介物；
其中所述前体药物以以总组合物的重量计从约1.5％至约2.5％的量存在。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物包含
以所述总组合物的重量计从约5％至约15％的量的卵磷脂或磷脂；和
以所述总组合物的重量计从约8％至约17％的量的蔗糖。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物还包含：
以所述总组合物的重量计多达约5％的量的油；和
以所述总组合物的重量计多达约5％的量的中链甘油三酯。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物包含
以所述总组合物的重量计从约0.5％至约3％的量的油；
以所述总组合物的重量计从约0.5％至约3％的量的中链甘油三酯；
以所述总组合物的重量计从约5％至约12％的量的卵磷脂或磷脂；以及
以所述总组合物的重量计从约10％至约15％的量的蔗糖。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物包含
以所述总组合物的重量计从约0.5％至约1％的量的油；
以所述总组合物的重量计从约0.5％至约1％的量的中链甘油三酯；
以所述总组合物的重量计从约5％至约10％的量的卵磷脂或磷脂；以及
以所述总组合物的重量计从约10％至约15％的量的蔗糖。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述前体药物以以所述总组合物的重量计约2％的量存在。
7.根据权利要求2所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约5:1至7.5:1。
8.根据权利要求3所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约5:1至7.5:1。
9.根据权利要求3所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:1。
10.根据权利要求8所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:1。
11.根据权利要求7所述的组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
12.根据权利要求10所述的组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
13.根据权利要求2所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约2.5:1至5:1。
14.根据权利要求3所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约2.5:1至5:1。
15.根据权利要求3所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:2。
16.根据权利要求4所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:2。
17.根据权利要求13所述的组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
18.根据权利要求16所述组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
19.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米滤器。
20.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米滤器。
21.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米的滤器。
22.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米的滤器。
23.根据权利要求19所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米滤器。
24.根据权利要求20所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米滤器。
25.根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米滤器。
26.根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米滤器。
27.根据权利要求25所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米滤器。
28.根据权利要求16所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米滤器。
29.根据权利要求16所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米滤器。
30.根据权利要求28所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米滤器。
31.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
32.根据权利要求31所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
33.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
34.根据权利要求33所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
35.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物的油滴在冻融压力后具有小于约200纳米的平均直径。
36.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物的油滴在冻融压力后具有小于约200纳米的平均直径。
37.根据权利要求32或34所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴在冻融压力后具有小于约200纳米的平均直径。
38.根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
39.根据权利要求38所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
40.根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物的油滴在冻融压力后具有小于约200纳米的平均直径。
41.根据权利要求39所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴在冻融压力后具有小于约200纳米的平均直径。
42.根据权利要求16所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
43.根据权利要求42所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
44.根据权利要求16所述的组合物，其中所述组合物的油滴在冻融压力后具有小于约200纳米的平均直径。
45.根据权利要求43所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴在冻融压力后具有小于约200纳米的平均直径。
46.根据权利要求2所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
47.根据权利要求3所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
48.根据权利要求46或47所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约60％的透光率值。
49.根据权利要求10所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
50.根据权利要求49所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约60％的透光率值。
51.根据权利要求16所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
52.根据权利要求51所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约60％的透光率值。
53.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物是可冻干的。
54.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物是可冻干的。
55.根据权利要求53或54所述的组合物，其中所述组合物化学上稳定持续至少3个月。
56.根据权利要求2所述的组合物，其中所述倍半萜-γ-内酯为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。
57.根据权利要求3所述的组合物，其中所述倍半萜-γ-内酯为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。
58.根据权利要求56所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。
59.根据权利要求57所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。
60.根据权利要求56所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
61.根据权利要求57所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
62.根据权利要求2所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
63.根据权利要求3所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
64.根据权利要求56所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
65.根据权利要求57所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
66.根据权利要求60所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
67.根据权利要求61所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
68.根据权利要求58所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
69.根据权利要求59所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
70.根据权利要求3所述的组合物，其中所述卵磷脂选自由大豆卵磷脂、蛋卵磷脂、或其组合或盐组成的组。
71.根据权利要求3所述的组合物，其中所述油为大豆油。
72.根据权利要求3所述的组合物，所述组合物另外地包含可注射的冷冻保护剂、或抗氧化剂。
73.根据权利要求72所述的组合物，其中所述冷冻保护剂为蔗糖并且所述抗氧化剂为EDTA或其盐。
74.根据权利要求2所述的组合物，其中所述细胞增生性紊乱为癌症。
75.一种冻干组合物，其中用水重构后形成适于静脉内施用的药物组合物，所述冻干组合物包含
(a)前体药物，所述前体药物包含
包含倍半萜-γ-内酯、其类似物或衍生物的治疗活性药物，以及
包含具有对与细胞增生性紊乱有关的蛋白酶特异的裂解位点的氨基酸序列的肽，
其中所述肽的长度为20个或更少个氨基酸，
其中所述肽被连接至所述治疗活性药物以抑制所述药物的治疗活性，并且其中所述治疗活性药物在由所述蛋白酶蛋白水解后从所述肽裂解；以及
(b)药学上可接受的媒介物；
其中所述前体药物以以总组合物的重量计从约1.5％至约2.5％的量存在。
76.根据权利要求75所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物包含
以总组合物的重量计从约5％至约15％的量的卵磷脂或磷脂；和
以总组合物的重量计从约8％至约17％的量的蔗糖。
77.根据权利要求76所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物还包含
以总组合物的重量计最多约5％的量的油；和
以总组合物的重量计最多约5％的量的中链甘油三酯。
78.根据权利要求77所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物包含
以总组合物的重量计从约0.5％至约3％的量的油；
以总组合物的重量计从约0.5％至约3％的量的中链甘油三酯；
以总组合物的重量计从约5％至约12％的量的卵磷脂或磷脂；以及
以总组合物的重量计从约10％至约15％的量的蔗糖。
79.根据权利要求78所述的组合物，其中所述药学上可接受的媒介物包含
以总组合物的重量计从约0.5％至约1％的量的油；
以总组合物的重量计从约0.5％至约1％的量的中链甘油三酯；
以总组合物的重量计从约5％至约10％的量的卵磷脂或磷脂；以及
以总组合物的重量计从约10％至约15％的量的蔗糖。
80.根据权利要求79所述的组合物，其中所述前体药物以以总组合物的重量计约2％的量存在。
81.根据权利要求76所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约5:1至7.5:1。
82.根据权利要求77所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约5:1至7.5:1。
83.根据权利要求77所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:1。
84.根据权利要求82所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:1。
85.根据权利要求81所述的组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
86.根据权利要求82所述的组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
87.根据权利要求76所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约2.5:1至5:1。
88.根据权利要求77所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约2.5:1至5:1。
89.根据权利要求77所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:2。
90.根据权利要求88所述的组合物，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:2。
91.根据权利要求88所述的组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中至少一个为γ羧基键合。
92.根据权利要求90所述的组合物，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中至少一个为γ羧基键合。
93.根据权利要求76所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米的滤器。
94.根据权利要求77所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米的滤器。
95.根据权利要求84所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米的滤器。
96.根据权利要求90所述的组合物，其中所述组合物可过滤通过0.2微米的滤器。
97.根据权利要求76所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
98.根据权利要求97所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
99.根据权利要求77所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
100.根据权利要求99所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
101.根据权利要求84所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
102.根据权利要求101所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
103.根据权利要求90所述的组合物，其中所述组合物的油滴具有小于约200纳米的平均直径。
104.根据权利要求103所述的组合物，其中所述组合物的所述油滴具有小于约150纳米的平均直径。
105.根据权利要求76所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
106.根据权利要求105所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约60％的透光率值。
107.根据权利要求77所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
108.根据权利要求107所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约60％的透光率值。
109.根据权利要求84所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
110.根据权利要求109所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约60％的透光率值。
111.根据权利要求90所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约30％的透光率值。
112.根据权利要求111所述的组合物，所述组合物表现出在600nm处不小于约60％的透光率值。
113.根据权利要求76所述的组合物，其中所述组合物化学上稳定持续至少3个月。
114.根据权利要求77所述的组合物，其中所述组合物化学上稳定持续至少3个月。
115.根据权利要求76所述的组合物，其中所述倍半萜-γ-内酯为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。
116.根据权利要求77所述的组合物，其中所述倍半萜-γ-内酯为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。
117.根据权利要求115所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。
118.根据权利要求116所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。
119.根据权利要求115所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
120.根据权利要求116所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
121.根据权利要求76所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
122.根据权利要求77所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
123.根据权利要求115所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
124.根据权利要求116所述的组合物，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
125.根据权利要求119所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
126.根据权利要求120所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
127.根据权利要求117所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
128.根据权利要求118所述的组合物，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
129.根据权利要求77所述的组合物，其中所述卵磷脂选自由大豆卵磷脂、蛋卵磷脂、或其组合物或盐组成的组。
130.根据权利要求77所述的组合物，其中所述油为大豆油。
131.根据权利要求77所述的组合物，所述组合物另外地包含可注射的冷冻保护剂、或抗氧化剂。
132.根据权利要求131所述的组合物，其中所述冷冻保护剂为蔗糖并且所述抗氧化剂为EDTA或其盐。
133.一种用于制备药物组合物的方法，所述方法包括：
(a)将权利要求2所述的组合物与水混合；
(b)将混合物均质化至直径小于200nm的平均液滴大小；
(c)通过0.2微米的滤器。
134.一种用于制备药物组合物的方法，所述方法包括：
(a)将权利要求3所述的组合物与水混合；
(b)将混合物均质化至直径小于200nm的平均液滴大小；
(c)通过0.2微米的滤器。
135.根据权利要求133所述的方法，其中所述平均液滴大小为直径小于150nm。
136.根据权利要求134所述的方法，其中所述平均液滴大小为直径小于150nm。
137.根据权利要求133所述的方法，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约5:1至7.5:1。
138.根据权利要求134所述的方法，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约5:1至7.5:1。
139.根据权利要求134所述的方法，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:1。
140.根据权利要求138所述的方法，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:1。
141.根据权利要求137所述的方法，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
142.根据权利要求140所述的方法，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
143.根据权利要求133所述的方法，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约2.5:1至5:1。
144.根据权利要求134所述的方法，其中所述卵磷脂与所述前体药物的重量比率为约2.5:1至5:1。
145.根据权利要求134所述的方法，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:2。
146.根据权利要求144所述的方法，其中所述卵磷脂与所述油的重量比率为约10:1至5:2。
147.根据权利要求143所述的方法，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
148.根据权利要求146所述的方法，其中所述前体药物包含毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)，所述毒胡萝卜素衍生物8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
149.根据权利要求133所述的方法，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米的滤器。
150.根据权利要求134所述的方法，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米的滤器。
151.根据权利要求140所述的方法，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米的滤器。
152.根据权利要求146所述的组合物，其中所述组合物可在冻融压力后过滤通过0.2微米的滤器。
153.根据权利要求133所述的方法，其中所述组合物是可冻干的。
154.根据权利要求134所述的方法，其中所述组合物是可冻干的。
155.根据权利要求153或154所述的方法，其中所述组合物化学上稳定持续至少3个月。
156.根据权利要求133所述的方法，其中所述倍半萜-γ-内酯为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。
157.根据权利要求134所述的方法，其中所述倍半萜-γ-内酯为毒胡萝卜素或毒胡萝卜素衍生物。
158.根据权利要求156所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。
159.根据权利要求157所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-氨基十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)。
160.根据权利要求156所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
161.根据权利要求157所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物为8-O-(12-[L-亮氨醇基氨基]十二酰基)-8-O-脱丁酰基毒胡萝卜素(L12ADT)。
162.根据权利要求133所述的方法，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
163.根据权利要求134所述的方法，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
164.根据权利要求156所述的方法，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
165.根据权利要求157所述的方法，其中所述肽包含具有对选自由PSA、PSMA、hK2和FAP组成的组的蛋白酶或具有PSA、PSMA、hK2或FAP的蛋白水解活性的酶特异的裂解位点的氨基酸序列。
166.根据权利要求160所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
167.根据权利要求161所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至包含Ser-Ser-Lys-Tyr-Gln(SEQ ID NO:18)的序列的肽的羧基末端。
168.根据权利要求158所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
169.根据权利要求159所述的方法，其中所述毒胡萝卜素衍生物被连接至具有序列Asp-Glu*Glu*Glu*Glu(SEQ ID NO:486)的肽的天冬氨酸，其中用*标示的键中的至少一个为γ羧基键合。
170.根据权利要求133或134所述的方法，所述方法还包括：
(d)冻干所述组合物。
171.一种治疗患者中的细胞增生性紊乱的方法，所述方法包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求2或3所述的组合物。
172.根据权利要求171所述的方法，其中所述细胞增生性紊乱为癌症。
173.一种治疗患者中的细胞增生性紊乱的方法，所述方法包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求4到74所述的组合物中的任何一种。
174.一种治疗患者中的细胞增生性紊乱的方法，所述方法包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求76到132所述的组合物中的任何一种。
175.一种用于检测受试者中的细胞增生性紊乱并对其成像的组合物，所述组合物包含权利要求2到74所述的组合物中的任何一种以及酚性接头。
176.根据权利要求175所述的组合物，其中所述酚性接头还包含放射性标记。
177.根据权利要求176所述的组合物，其中所述放射性标记为125I、124I、131I、或3H中的至少一种。
178.一种用于检测受试者中的细胞增生性紊乱并对其成像的组合物，所述组合物包含权利要求2到74所述的组合物中的任何一种以及亲脂性标记。
179.根据权利要求178所述的组合物，其中所述亲脂性标记为18F、11C、13N、或15O中的至少一种。
180.一种用于检测受试者中的细胞增生性紊乱并对其成像的组合物，所述组合物包含权利要求76到132所述的组合物中的任何一种以及酚性接头。
181.根据权利要求180所述的组合物，其中所述酚性接头还包含放射性标记。
182.根据权利要求181所述的组合物，其中所述放射性标记为125I、124I、131I、或3H中的至少一种。
183.一种用于检测受试者中的细胞增生性紊乱并对其成像的组合物，所述组合物包含权利要求76到132所述的组合物中的任何一种以及亲脂性标记。
184.根据权利要求183所述的组合物，其中所述亲脂性标记为18F、11C、13N、或15O中的至少一种。
185.一种对受试者中的细胞增生性紊乱成像并检测其的方法，所述方法包括对所述受试者施用权利要求175到184所述的组合物中的任何一种，以及对所述受试者成像。
186.根据权利要求185所述的方法，其中所述细胞增生性紊乱为癌症。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015192124A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Trustees Of Tufts College Fap-activated therapeutic agents, and uses related thereto
IL291922A (en) 2014-06-13 2022-06-01 Tufts College Fap-enabled medical substances and related uses
FR3031678B1 (fr) * 2015-01-19 2019-07-26 Universite Des Sciences Et Technologies De Lille Utilisation conjointe de asp-8adt et d'un inhibiteur d'autophagie dans le traitement de cancer.
CA3203072A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Andrea CASAZZA Compounds comprising a tetrapeptidic moiety
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Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030055052A1 (en) * 2000-11-10 2003-03-20 Stefan Peters FAP-activated anti-tumor compounds
US7468354B2 (en) * 2000-12-01 2008-12-23 Genspera, Inc. Tissue specific prodrugs
US20050049209A1 (en) * 2003-08-06 2005-03-03 Chen Andrew Xian Pharmaceutical compositions for delivering macrolides
US8557861B2 (en) * 2004-09-28 2013-10-15 Mast Therapeutics, Inc. Low oil emulsion compositions for delivering taxoids and other insoluble drugs
CA2625661A1 (en) * 2005-10-12 2007-04-19 Trojanon Gmbh & Co. Kg Synergistic pharmaceutical composition containing a peptide with 2 to 5 amino acids
US20100047170A1 (en) * 2006-01-05 2010-02-25 Denmeade Samuel R Peptide Prodrugs
US7635682B2 (en) * 2006-01-06 2009-12-22 Genspera, Inc. Tumor activated prodrugs
AU2009280803B2 (en) * 2008-07-23 2013-10-31 Bharat Serums And Vaccines Ltd. Stable injectable oil-in-water Docetaxel nanoemulsion
US8772226B2 (en) * 2009-03-17 2014-07-08 The Johns Hopkins University Methods and compositions for the detection of cancer
WO2011153513A2 (en) * 2010-06-03 2011-12-08 Latitude Pharma Nanoemulsion composition containing vitamin k

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