CN104860959B - 一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用 - Google Patents

一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104860959B
CN104860959B CN201510244085.2A CN201510244085A CN104860959B CN 104860959 B CN104860959 B CN 104860959B CN 201510244085 A CN201510244085 A CN 201510244085A CN 104860959 B CN104860959 B CN 104860959B
Authority
CN
China
Prior art keywords
aspergillus
compound
sperochrone
scsio
culture medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510244085.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104860959A (zh
Inventor
王俊锋
贺卫军
田新朋
刘永宏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Original Assignee
South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Sea Institute of Oceanology of CAS filed Critical South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Priority to CN201510244085.2A priority Critical patent/CN104860959B/zh
Publication of CN104860959A publication Critical patent/CN104860959A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104860959B publication Critical patent/CN104860959B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/66—Aspergillus

Abstract

本发明公开了一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用。本发明在对南极土壤来源曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702的次生代谢产物的研究过程中，分离获得一个新颖骨架的α‑吡喃酮混源萜类化合物asperochrone A，其结构式如式(Ⅰ)所示，该化合物具有罕见的类四环素的多环系结构，且具有很强的抗流感病毒活性，且在有效剂量下，对正常细胞未发现有细胞毒性。因此是开发成为结构新颖、活性高效的抗流感病毒药物的理想侯选化合物。

Description

一种α-吡喃酮混源萜及其制备方法和应用
技术领域：
本发明属于天然产物领域，具体涉及一种新颖结构α-吡喃酮混源萜类化合物asperochrone A及其制备方法和应用。
背景技术：
天然产物一直都是药物研发的重要源泉。目前，从极端环境微生物天然产物中获得新颖骨架的活性次生代谢产物已逐渐成为天然药物研究的重要方向。
发明内容：
本发明公开了一种从曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702中分离得到的新颖骨架的α-吡喃酮混源萜类化合物asperochrone A。
本发明的化合物asperochrone A，其结构式如式(Ⅰ)所示：
本发明的第二个目的是提供一种制备化合物asperochrone A的方法，其特征在于，所述的化合物asperochrone A是从曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702的发酵培养物中制备分离得到的。
优选，所述的制备化合物asperochrone A的方法，具体步骤如下：
a)、制备曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体破碎后用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏B；
b)、将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经中压正相液相色谱，用二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂，从体积比100：0～0：100进行梯度洗脱，收集二氯甲烷/甲醇体积比97：3梯度洗脱下来的馏分，继续过葡聚糖凝胶Sephadex LH-20，以二氯甲烷/甲醇体积比1:1作为流动相洗脱，收集馏分再采用半制备高效液相进行纯化后得到化合物asperochrone A。
所述的步骤a)的制备曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702的发酵培养物，优选为：将活化的曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702接入种子培养基中，25℃，180rpm，培养72h制得种子液，将种子液以5％的接种量接入到发酵培养基中，25℃，静态培养70天制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方为每升培养基中含有：可溶性淀粉10g，蛋白胨1g，粗海盐20g，余量为水，pH 7.5。
本发明的第三个目的是提供提供曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702在制备化合物asperochrone A中的应用。
本发明通过实验发现化合物asperochrone A对流感病毒H1N1和H3N2具有较强的抑制作用(细胞毒活性)，IC50分别为28.2和12.2μM；同时发现化合物asperochrone A对正常细胞LX-2(人肝星形细胞)和293T(人胚肾细胞)均无细胞毒活性(IC50>500μM)，因此可望开发成为无毒的抗流感病毒新药。
本发明的第四个目的是提供化合物asperochrone A或其药用盐在制备抗流感病毒药物中的应用。
本发明的第五个目的是提供一种抗流感病毒药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成份的化合物asperochrone A，或其药用盐，和药学上可以接受的载体。
本发明在对南极土壤来源曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702的次生代谢产物的研究过程中，分离获得一个新颖骨架的α-吡喃酮混源萜类化合物asperochrone A，该化合物具有罕见的类四环素(a tetracycline-like polycyclic ring system)的多环系结构，且具有很强的抗流感病毒活性，且在有效剂量下，对正常细胞未发现有细胞毒性。因此是开发成为结构新颖、活性高效的抗流感病毒药物的理想侯选化合物。
本发明的曲霉Aspergillus sp.SCSIO 05702，于2015年01月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.10279。
附图说明：
图1是asperochrone A结构中多环系标记及其关键的1H–1H COSY(加粗黑线)和HMBC(蓝色，即箭头)相关；其中A为化合物asperochrone A多环结构的环系说明，B为COSY和HMBC关键相关说明；
图2是化合物asperochrone A关键的B环和C环上的NOESY(双箭头)相关；
图3是新骨架α-吡喃酮混源萜化合物asperochrone A的铜靶单晶示意图。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：化合物Asperochrone A的制备和分离
1、种子培养基(发酵培养基)：每升培养基含有可溶性淀粉10g，蛋白胨1g，粗海盐20g，余量为水，pH 7.5。按上述组份和含量混合均匀，然后121℃，灭菌30min备用。
2、发酵
2.1、种子培养：将活化的曲霉Aspergillus sp.SCSIO 05702接入每瓶含有300mL种子培养基的1000mL的锥形培养瓶中，25℃，180rpm，培养72h制得种子液。
2.2、发酵培养：将种子液以5％的接种量(体积百分比)接入到30L发酵培养基中，25℃，静态培养70d，而制得发酵培养物。
3、萃取：发酵培养物经布氏漏斗过滤将发酵液和菌丝体分离，发酵液用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用分散机破碎3分钟，再用丙酮超声破碎提取3次，每次30min，合并浸提液，减压回收丙酮后剩余水混合液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液减压蒸馏浓缩后得到浸膏B，将浸膏A和浸膏B合并，减压蒸馏得到粗提物(37.2g)。
4、asperochrone A的分离和鉴定
将浸膏A和浸膏B合并的粗提物(37.2g)经中压正相柱层析液相色谱(MPLC)，用二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂，从体积比100：0～0：100进行梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇体积比为97:3洗脱的馏分(2.3g)进一步经葡聚糖凝胶Sephadex LH-20分离纯化，采用二氯甲烷-甲醇(体积比1:1)洗脱，洗脱的馏分采用HPLC-DAD检测收集最大吸收波长在207，290和350nm吸收的馏分，该馏分最后用半制备高效液相精细分离，在洗脱体系为乙腈/水(体积比33：67，YMC-pack ODS-A,10×250mm,5μm,4mL/min)进行纯化后得到化合物asperochrone A(21.3mg，保留时间是19.4min)。
结构鉴定：化合物asperochrone A为淡黄色晶体，其核磁数据归属如表1所示；其高分辨质谱HRESIMS给出一个分子离子峰m/z 473.1791([M+Na]+)，确定其分子式为：C23H30O9，不饱和度为9。在1H NMR中，可以发现有一个甲氧基【δH 3.51,s】，一个甲基双峰和五个甲基单峰【(δH 1.09,1.30s,1.35s,1.52,1.92,and 2.24s,each 3H,Me-20,17,18,19,21,22)】，这些信号峰在13C NMR谱中对应为：δC 59.4(6-OCH3)，10.4(CH3,C-20)，23.8(CH3,C-21)，26.1(CH3,C-22)，22.2(CH3,C-19),9.7(CH3,C-17),17.4(CH3,C-18)。综合分析其1H、13C和DEPT NMR谱，可以发现asperochrone A一共有23个碳，包括十一个季碳【其中两个酮羰基δC 209.9(C-13)和212.6(C-15)，一个酯羰基δC 167.3(C-1)】，四个次甲基、一个亚甲基和七个甲基(表1)。结合分子不饱和度和分析碳的级数，可推测asperochrone A为一个四环结构。
表1.asperochrone A的1H-和13C-NMR数据归属，溶剂为CD3OD。
在其1H–1H COSY谱中，发现有一个长链相关：H-6(δH 4.43)/H-7(δH 2.13)/H-12(δH2.20)/H-20(δH 1.09)，由此推测得到一条碳链：C-6/C-7/C-12/C-20。在HMBC谱中，根据六个甲基、两个连氧次甲基(H-6,H-9)、两个次甲基(H-7,H-12)及一个亚甲基((H-16)的相关信号，可以得到α-吡喃酮(A环)和十氢还原的萘环(C环和D环)片段，通过1H–1H COSY谱得到的碳链C-6/C-7/C-12/C-20以及H-6与C-1,C-2和C-3的HMBC相关，可以推测α-吡喃酮和十氢还原的萘环是通过C-6位的含氧次甲基相连的。结合分子量和分子不饱和度可以获得C-3和C-8是通过氧桥相连的，而在HMBC相关信息中甲氧基【δH 3.51,s】的氢信号与C-6相关，说明甲氧基连接在C-6上，从而确定了asperochrone A的平面结构(图1)。
化合物Asperochrone A中，B环和C环的相对构型是通过NOESY实验中的相关信号确定的。如图2所示，H-7与H3-20相关，H-12与H3-19相关，推测H-7与H3-19是反式关系；H-6与H-7与H3-20相关，推测H-6，H-7和20-CH3同侧；H3-19与H-9和H-12相关，推测H-9，H-12和19-CH3同侧。α-吡喃酮混源萜化合物asperochrone A分子骨架中手性碳众多，氧化度极高，仅仅通过NOESY实验无法获得整个分子的相对构型。通过多种尝试，在asperochrone A甲醇溶液中获得了晶型较好的单晶，通过铜靶X-ray单晶衍射的方法，不仅验证了新骨架化合物asperochrone A的平面结构(图3)，而且确定了新骨架化合物asperochrone A的绝对构型为6R,7S,8S,9R,10R,11R,and 12R，确定化合物asperochrone A的结构式如式(Ⅰ)所示。
实施例3：化合物asperochrone A的抗流感病毒活性测定
采用流感病毒H1N1和H3N2作为实验病毒株，MDCK细胞作为实验细胞，抗流感病毒活性实验方法参考文献(Fang,W.；Lin,X.P.；Zhou,X.F.；Wan,J.T.；Lu,X.；Yang,B.；Ai,W.；Lin,J.；Zhang,T.Y.；Tu,Z.C.；Liu,Y.H.Cytotoxic and antiviral nitrobenzoylsesquiterpenoids from the marine-derived fungus Aspergillus ochraceusJcma1F17.Med.Chem.Commun.2014,5,701–705)。化合物asperochrone A对流感病毒H1N1和H3N2的抑制活性数据如表2所示。同时发现化合物asperochrone A对正常细胞LX-2(人肝星形细胞)和293T(人胚肾细胞)均无细胞毒活性(IC50>500μM)，因此提示能够被改构用于制备低毒高效的抗流感病毒新药。
表2：asperochrone A(IC50,μM)对流感病毒H1N1和H3N2的抑制活性
a Tamiflu：达菲(奥司他韦)为抗流感病毒阳性对照药(IC50,nM)。

Claims (7)

1.化合物asperochrone A，其结构式如式(Ⅰ)所示：
2.一种制备权利要求1所述的化合物asperochrone A的方法，其特征在于，所述的化合物asperochrone A是从曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702的发酵培养物中制备分离得到的，具体步骤如下：
a)、制备曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体破碎后用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏B；
b)、将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经中压正相液相色谱，用二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂，从体积比100：0～0：100进行梯度洗脱，收集二氯甲烷/甲醇体积比97：3梯度洗脱下来的馏分，继续过葡聚糖凝胶Sephadex LH-20，以二氯甲烷/甲醇体积比1:1作为流动相洗脱，收集馏分再经纯化后得到化合物asperochrone A。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤a)的制备曲霉(Aspergillussp.)SCSIO 05702的发酵培养物是将活化的曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702接入种子培养基中，25℃，180rpm，培养72h制得种子液，将种子液以5％的接种量接入到发酵培养基中，25℃，静态培养70天制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方为每升培养基中含有：可溶性淀粉10g，蛋白胨1g，粗海盐20g，余量为水，pH 7.5。
4.曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702在制备权利要求1所述的化合物asperochroneA中的应用。
5.权利要求1所述的化合物asperochrone A或其药用盐在制备抗流感病毒药物中的应用。
6.一种抗流感病毒药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成份的权利要求1所述的化合物asperochrone A，或其药用盐，和药学上可以接受的载体。
7.曲霉(Aspergillus sp.)SCSIO 05702，其保藏编号为：CGMCC No.10279。
CN201510244085.2A 2015-05-13 2015-05-13 一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用 Active CN104860959B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510244085.2A CN104860959B (zh) 2015-05-13 2015-05-13 一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510244085.2A CN104860959B (zh) 2015-05-13 2015-05-13 一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104860959A CN104860959A (zh) 2015-08-26
CN104860959B true CN104860959B (zh) 2017-01-18

Family

ID=53907187

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510244085.2A Active CN104860959B (zh) 2015-05-13 2015-05-13 一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104860959B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108299462B (zh) * 2018-03-20 2020-05-26 中国科学院海洋研究所 混源萜化合物及其分离方法和应用
CN109486685B (zh) * 2018-12-04 2020-10-30 海南师范大学 一种红树尖瓣海莲内生真菌及其在制备抗虫活性萜类晶体化合物中的应用
CN113527247B (zh) * 2021-08-18 2023-02-03 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种嗜氮酮类多聚体化合物及其制备方法和应用
CN115403556B (zh) * 2022-09-22 2023-11-10 中国科学院南海海洋研究所 戊酮噻吩类化合物及其制备方法和在抗炎药物中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010029313A1 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 Summit Corporation Plc. Antiinfective compounds
CN102482219A (zh) * 2009-03-26 2012-05-30 盐野义制药株式会社 吡喃酮和吡啶酮衍生物的制备方法
CN102690275A (zh) * 2011-03-25 2012-09-26 中国人民解放军第二军医大学 四氢呋喃并[3,4-c]吡喃酮类化合物及其制备方法和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010029313A1 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 Summit Corporation Plc. Antiinfective compounds
CN102482219A (zh) * 2009-03-26 2012-05-30 盐野义制药株式会社 吡喃酮和吡啶酮衍生物的制备方法
CN102690275A (zh) * 2011-03-25 2012-09-26 中国人民解放军第二军医大学 四氢呋喃并[3,4-c]吡喃酮类化合物及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
The reactivity of drimane unsaturated dialdehydes towards nucleophiles;Mikael Jonassohn,等;《Tetrahedron》;19971231;第53卷(第1期);237-244 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104860959A (zh) 2015-08-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104860959B (zh) 一种α‑吡喃酮混源萜及其制备方法和应用
Makino et al. Flavanones from Baeckea frutescens
CN105709205A (zh) Rakicidins类化合物用于抗临床致病厌氧菌的用途
Sun et al. Compounds from Kadsura angustifolia with anti-HIV activity
CN106278877A (zh) 一类新颖结构倍半萜化合物及其在制备抗炎药物中的应用
CN111943828A (zh) 一种壳二孢氯素类化合物及其在制备抗肿瘤药物或二氢乳清酸脱氢酶抑制剂药物中的应用
CN107827805A (zh) 一种红树植物木果楝真菌来源的吲哚二萜类化合物及其制备方法与应用
CN101270154B (zh) 一种具有抗肿瘤活性的环五肽
TW201127390A (en) Composition for treating influenza A (H1N1) virus and a preparation method therefor
CN104630116B (zh) 一种海洋链霉菌及其应用
CN103626636B (zh) 一种链霉倍半萜三醇及其制备方法和应用
CN100537594C (zh) 一种黄芪甲苷纯品的制备方法
CN109134574B (zh) 甾体化合物及其制备方法与应用和抗肿瘤的药物
CN105663138A (zh) 一种氯硝西泮的药物组合物及其医药用途
CN102993251A (zh) 一种用高效液相色谱纯化台勾霉素b的方法
CN110257255A (zh) 红树尖瓣海莲内生真菌来源的苯并吡喃酮衍生物及其制备方法与应用
CN108148119B (zh) 一种环六肽化合物及其在制备抗肠道病毒药物中的应用
CN107828663B (zh) 一种吲哚二萜类化合物晶体及其作为抗肿瘤药物的应用
CN104557841B (zh) 两个色酮类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN107954839B (zh) 一种抗炎活性化合物peniroquesine A及其制备方法和应用
Zhu et al. Penicamedine A, a highly oxygenated hexacyclic indole alkaloid from Penicillium camemberti
CN105713002A (zh) 抗生素Versicoloids A和B及其制备方法和在制备抗植物病原菌药物中的应用
CN108558606A (zh) 一种二倍半萜类化合物peniroquesines及其制备方法和应用
CN109125326A (zh) 土曲霉skl-001新次级代谢产物lw-4的用途
CN101508965B (zh) 一种链霉菌发酵三七皂苷制备20(S)-人参皂苷Rh1的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
EXSB Decision made by sipo to initiate substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant