CN104838892B - 用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法 - Google Patents
用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104838892B CN104838892B CN201510294306.7A CN201510294306A CN104838892B CN 104838892 B CN104838892 B CN 104838892B CN 201510294306 A CN201510294306 A CN 201510294306A CN 104838892 B CN104838892 B CN 104838892B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- larvas
- verticillium lecanii
- vigor
- spotted
- lecanii
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法,属生物技术。饲养银纹夜蛾;培养蜡蚧轮枝菌;制备蜡蚧轮枝菌的分生孢子液;将制备的分生孢子液制成悬浮液;将悬浮液均匀喷于银纹夜蛾幼虫体至体表面湿润,再把幼虫放入无菌人工气候室内饲养至虫体长满菌丝;收集上步的虫体,脱水干燥,贮存于-78℃~-95℃的冰箱。经过本发明技术繁殖的蜡蚧轮枝菌,繁殖续代过程中能够长时间保持菌株孢子活力及其感染能力,也可利用该方法对感染力及活力严重下降的菌株进行活力及感染能力恢复。
Description
技术领域
本发明属生物技术。
背景技术
蜡蚧轮枝菌[Verticillium lecanii(Zimm)]是一种常见的虫生真菌,隶属真菌门半知菌亚门丝孢纲丝孢目。该菌地理分布和寄主范围广,对蚜虫、粉虱、蚧、蓟马和害螨等农业害虫均具有良好的寄生效果,是一种相对成熟的生物农药。在以往的研究过程中,蜡蚧轮枝菌往往以固体或者液体培养基的方式大范围繁殖。蜡蚧轮枝菌KMZW-1是本专利申请人筛选并获得专利权(ZL200810233784.7)的一株针对蝇类昆虫具有高毒力的菌株,在续代繁殖的过程中发现,培养基法繁殖4~5代后其孢子活力明显开始下降,经研究发现其它蜡蚧轮枝菌也存在培养基培养续代后对宿主的感染能力及孢子活力下降的问题。文献检索未发现有恢复蜡蚧轮枝菌活力及感染能力技术方案的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法。
本说明书所述的百分比,若没有特别说明,均为重量比。
本发明方法如下:
1、饲养银纹夜蛾;
2、制备蜡蚧轮枝菌菌种:
(1)、培养蜡蚧轮枝菌:将蜡蚧轮枝菌KMZW-1菌株接种到PDA培养基上,放入25±0.5℃的恒温培养箱培养8~10天;
(2)、制备蜡蚧轮枝菌的分生孢子液:取在PDA培养基上长好的KMZW-1菌落,用无菌水将孢子洗下并过滤,定量滤液内蜡蚧轮枝菌的分生孢子数到100~120孢子/ml,得到分生孢子液;
(3)、接种及繁育:
A、将制备的分生孢子液加入占其重量1%~5%的吐温-80和5%~12%的甘油,于20℃~35℃下制成悬浮液;
B、将悬浮液均匀喷于银纹夜蛾幼虫体至体表面湿润,再把幼虫放入无菌人工气候室内,于24~26℃、不低于RH85%、光照L∶D=16h∶8h的条件下,饲养银纹夜蛾9-15天至虫体长满菌丝;
C、收集上步的虫体,于4℃~10℃的密闭环境下,使用干燥剂进行脱水干燥,干燥至虫体水分含量≤12%,将干燥后的虫体贮存于-78℃~-95℃的冰箱。
所说饲养银纹夜蛾的方法为现有技术,但最好采用如下方法:从野外采集银纹夜蛾的健康幼虫,在室温24~26℃、相对湿度75%~80%、光照条件L∶D=16∶8的环境下,使用以紫茎泽兰干粉为主要原料的半人工饲料对银纹夜蛾进行饲养,幼虫饲养至3~7天时备用。所说以紫茎泽兰干粉为主要原料的半人工饲料见中国专利文件ZL201410125557.8。
用银纹夜蛾为寄主昆虫繁殖的蜡蚧轮枝菌可以这样用作生物农药:将本发明方法所得贮存于冰箱的虫体置于常温,粉碎至40~100目,取1克干粉兑0.2~0.5公斤水,并加入1%吐温-80,搅拌均匀,在室温放置2小时,再搅拌均匀,置于喷雾器内进行喷雾,对蚜虫、粉虱、蚧、蓟马和害螨等农业害虫均具有良好的寄生效果,
经过本发明技术繁殖的蜡蚧轮枝菌,繁殖续代过程中能够长时间保持菌株孢子活力及其感染能力,也可利用该方法对感染力及活力严重下降的菌株进行活力及感染能力恢复。
以下是对比实验:
将PDA培养基上续代5代的蜡蚧轮枝菌,分作两份,一份继续PDA培养续代培养(称作PDA-1),一份使用本发明方法培养(称作YE-1),分别收集孢子进行对比。所述本发明方法培养的具体过程如下:
1、饲养中间寄主银纹夜蛾:从野外采集银纹夜蛾的健康幼虫,在室温25℃、相对湿度78%、光照条件L∶D=16∶8的环境下,使用以紫茎泽兰干粉为主要原料的银纹夜蛾半人工饲料(按专利文件ZL201410125557.8)进行饲养,幼虫饲养至6天时备用。
2、制备蜡蚧轮枝菌菌种:
(1)、培养蜡蚧轮枝菌:将蜡蚧轮枝菌KMZW-1菌株接种到PDA培养基上,放入25±0.5℃的恒温培养箱培养9天;
(2)、制备蜡蚧轮枝菌的分生孢子液:取在PDA培养基上长好的KMZW-1菌落,用无菌水将孢子洗下并过滤,定量滤液内蜡蚧轮枝菌的分生孢子数到108孢子/ml,得到分生孢子液;
(3)、接种及繁育:
A、将制备的分生孢子液加入占其重量3%的吐温-80和8%的甘油,于28℃下制成悬浮液;
B、将悬浮液均匀喷于银纹夜蛾幼虫体表至体表面湿润,再把幼虫放入无菌人工气候室内,于25℃、RH80%、光照L∶D=16h∶8h的条件下,继续用紫茎泽兰干粉为主要原料的银纹夜蛾半人工饲料进行饲养12天,此时虫体长满菌丝。
C、收集上步的虫体,于7℃的密闭环境下,使用干燥剂进行脱水干燥,干燥至虫体水分含量10%,将干燥后的虫体贮存于-80℃的冰箱。
蜡蚧轮枝菌的孢子活性实验
以上数据表明同样为第六代培养,本发明方法的孢子活性显著高于PDA培养基培养。
蜡蚧轮枝菌对害虫虫体的感染能力实验(使用预混孢子液喷雾)
以上数据显示,本发明方法培育的蜡蚧轮枝菌对害虫感染能力显著高于PDA培养基。
本发明的有益效果:经过本发明技术繁殖的蜡蚧轮枝菌,繁殖续代过程中能够长时间保持菌株孢子活力及其感染能力,也可利用该方法对感染力及活力严重下降的菌株进行活力及感染能力恢复。
具体实施方式
实施例1.方法如下:
1、饲养中间寄主银纹夜蛾:从野外采集银纹夜蛾的健康幼虫,在室温24℃、相对湿度77%、光照条件L∶D=16∶8的环境下,使用以紫茎泽兰干粉为主要原料的银纹夜蛾半人工饲料(按专利文件ZL201410125557.8)进行饲养,幼虫饲养至4天时备用。
2、制备蜡蚧轮枝菌菌种:
(1)、培养蜡蚧轮枝菌:将蜡蚧轮枝菌KMZW-1菌株接种到PDA培养基上,放入25±0.5℃的恒温培养箱培养10天;
(2)、制备蜡蚧轮枝菌的分生孢子液:取在PDA培养基上长好的KMZW-1菌落,用无菌水将孢子洗下并过滤,定量滤液内蜡蚧轮枝菌的分生孢子数到120孢子/ml,得到分生孢子液;
(3)、接种及繁育:
A、将制备的分生孢子液加入占其重量1%的吐温-80和5%的甘油,于34℃下制成悬浮液;
B、将悬浮液均匀喷于银纹夜蛾幼虫体表至体表面湿润,再把幼虫放入无菌人工气候室内,于24℃、RH85%、光照L∶D=16h∶8h的条件下,继续用紫茎泽兰干粉为主要原料的银纹夜蛾半人工饲料进行饲养14天,此时虫体长满菌丝。
C、收集上步的虫体,于5℃的密闭环境下,使用干燥剂进行脱水干燥,干燥至虫体水分含量12%,将干燥后的虫体贮存于-80℃的冰箱。将所得贮存于冰箱的虫体置于常温,粉碎至40目,取1克干粉兑0.2公斤水,并加入1%吐温-80,搅拌均匀,在室温放置2小时,再搅拌均匀,置于喷雾器内进行喷雾。效果:对蚜虫、粉虱、蚧、蓟马和害螨等农业害虫均具有良好的寄生效果。
实施例2.方法如下:
1、饲养中间寄主银纹夜蛾:从野外采集银纹夜蛾的健康幼虫,在室温26℃、相对湿度75%、光照条件L∶D=16∶8的环境下,使用以紫茎泽兰干粉为主要原料的银纹夜蛾半人工饲料(按专利文件ZL201410125557.8)进行饲养,幼虫饲养至7天时备用。
2、制备蜡蚧轮枝菌菌种:
(1)、培养蜡蚧轮枝菌:将蜡蚧轮枝菌KMZW-1菌株接种到PDA培养基上,放入25±0.5℃的恒温培养箱培养8天;
(2)、制备蜡蚧轮枝菌的分生孢子液:取在PDA培养基上长好的KMZW-1菌落,用无菌水将孢子洗下并过滤,定量滤液内蜡蚧轮枝菌的分生孢子数到100孢子/ml,得到分生孢子液;
(3)、接种及繁育:
A、将制备的分生孢子液加入占其重量5%的吐温-80和11%的甘油,于22℃下制成悬浮液;
B、将悬浮液均匀喷于银纹夜蛾幼虫体表至体表面湿润,再把幼虫放入无菌人工气候室内,于25℃、RH80%、光照L∶D=16h∶8h的条件下,继续用紫茎泽兰干粉为主要原料的银纹夜蛾半人工饲料进行饲养10天,此时虫体长满菌丝。
C、收集上步的虫体,于9℃的密闭环境下,使用干燥剂进行脱水干燥,干燥至虫体水分含量9%,将干燥后的虫体贮存于-90℃的冰箱。将所得贮存于冰箱的虫体置于常温,粉碎至100目,取1克干粉兑0.5公斤水,并加入1%吐温-80,搅拌均匀,在室温放置2小时,再搅拌均匀,置于喷雾器内进行喷雾。效果:对蚜虫、粉虱、蚧、蓟马和害螨等农业害虫均具有良好的寄生效果。
Claims (2)
1.一种用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法,其特征在于按如下步骤:
一、饲养银纹夜蛾;
二、制备蜡蚧轮枝菌菌种:
(1)、培养蜡蚧轮枝菌:将蜡蚧轮枝菌KMZW-1菌株接种到PDA培养基上,放入25±0.5℃的恒温培养箱培养8~10天;
(2)、制备蜡蚧轮枝菌的分生孢子液:取在PDA培养基上长好的KMZW-1菌落,用无菌水将孢子洗下并过滤,定量滤液内蜡蚧轮枝菌的分生孢子数到100~120孢子/ml,得到分生孢子液;
(3)、接种及繁育:
A、将制备的分生孢子液加入占其重量1%~5%的吐温-80和5%~12%的甘油,于20℃~35℃下制成悬浮液;
B、将悬浮液均匀喷于银纹夜蛾幼虫体表至体表面湿润,再把幼虫放入无菌人工气候室内,于24~26℃、不低于RH85%、光照L∶D=16h∶8h的条件下,饲养银纹夜蛾9-15天至虫体长满菌丝;
C、收集上步的虫体,于4℃~10℃的密闭环境下,使用干燥剂进行脱水干燥,干燥至虫体水分含量≤12%,将干燥后的虫体贮存于-78℃~-95℃的冰箱。
2.如权利要求1所述的用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法,其特征在于饲养银纹夜蛾的方法为:从野外采集银纹夜蛾的健康幼虫,在室温24~26℃、相对湿度75%~80%、光照条件L∶D=16∶8的环境下,使用以紫茎泽兰干粉为主要原料的半人工饲料对银纹夜蛾进行饲养,幼虫饲养至3~7天时备用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510294306.7A CN104838892B (zh) | 2015-06-02 | 2015-06-02 | 用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510294306.7A CN104838892B (zh) | 2015-06-02 | 2015-06-02 | 用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104838892A CN104838892A (zh) | 2015-08-19 |
CN104838892B true CN104838892B (zh) | 2017-04-12 |
Family
ID=53839210
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510294306.7A Expired - Fee Related CN104838892B (zh) | 2015-06-02 | 2015-06-02 | 用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104838892B (zh) |
Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1184154A (zh) * | 1996-12-05 | 1998-06-10 | 大韩民国农村振兴厅 | 使用蚕培养拟青霉的菌种 |
RU2120756C1 (ru) * | 1997-06-17 | 1998-10-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Штамм гриба verticillium lecanii для получения акарицидного и энтомопатогенного препарата |
CN1414091A (zh) * | 2001-10-26 | 2003-04-30 | 李健 | 用昆虫培育冬虫夏草的新技术 |
CN101273729A (zh) * | 2008-05-20 | 2008-10-01 | 重庆大学 | 一种真菌孢子油悬浮剂 |
CN101440349A (zh) * | 2007-11-20 | 2009-05-27 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一株防治温室刺吸式害虫的高效菌株及其制剂 |
CN101444226A (zh) * | 2008-12-26 | 2009-06-03 | 沈阳农业大学 | 一种用于防治蚜虫和温室白粉虱的蜡蚧轮枝菌水分散粒剂配方及制备方法 |
CN101451108A (zh) * | 2008-12-31 | 2009-06-10 | 云南农业大学 | 一种防治蝇类害虫的蜡蚧轮枝菌及其应用 |
CN101619295A (zh) * | 2009-08-10 | 2010-01-06 | 赵振良 | 批量生产乳状病芽孢杆菌的方法 |
CN101889588A (zh) * | 2010-02-03 | 2010-11-24 | 福建农林大学 | 蜡蚧霉黄色无纺布菌剂及制备方法 |
CN103563650A (zh) * | 2013-10-17 | 2014-02-12 | 烟台金刚生源生物科技有限公司 | 培育飞禽冬虫草的工艺 |
CN104115709A (zh) * | 2014-06-30 | 2014-10-29 | 泰山医学院 | 一种利用蚂蚁传播蜡蚧轮枝菌防治树干柏长喙大蚜的方法 |
CN104450535A (zh) * | 2014-11-12 | 2015-03-25 | 泰山医学院 | 一种保持蜡蚧轮枝菌对寄主昆虫毒力的方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2937967B2 (ja) * | 1997-10-07 | 1999-08-23 | 有限会社吉井菌学研究所 | 冬虫夏草菌の培養方法 |
-
2015
- 2015-06-02 CN CN201510294306.7A patent/CN104838892B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1184154A (zh) * | 1996-12-05 | 1998-06-10 | 大韩民国农村振兴厅 | 使用蚕培养拟青霉的菌种 |
RU2120756C1 (ru) * | 1997-06-17 | 1998-10-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Штамм гриба verticillium lecanii для получения акарицидного и энтомопатогенного препарата |
CN1414091A (zh) * | 2001-10-26 | 2003-04-30 | 李健 | 用昆虫培育冬虫夏草的新技术 |
CN101440349A (zh) * | 2007-11-20 | 2009-05-27 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一株防治温室刺吸式害虫的高效菌株及其制剂 |
CN101273729A (zh) * | 2008-05-20 | 2008-10-01 | 重庆大学 | 一种真菌孢子油悬浮剂 |
CN101444226A (zh) * | 2008-12-26 | 2009-06-03 | 沈阳农业大学 | 一种用于防治蚜虫和温室白粉虱的蜡蚧轮枝菌水分散粒剂配方及制备方法 |
CN101451108A (zh) * | 2008-12-31 | 2009-06-10 | 云南农业大学 | 一种防治蝇类害虫的蜡蚧轮枝菌及其应用 |
CN101619295A (zh) * | 2009-08-10 | 2010-01-06 | 赵振良 | 批量生产乳状病芽孢杆菌的方法 |
CN101889588A (zh) * | 2010-02-03 | 2010-11-24 | 福建农林大学 | 蜡蚧霉黄色无纺布菌剂及制备方法 |
CN103563650A (zh) * | 2013-10-17 | 2014-02-12 | 烟台金刚生源生物科技有限公司 | 培育飞禽冬虫草的工艺 |
CN104115709A (zh) * | 2014-06-30 | 2014-10-29 | 泰山医学院 | 一种利用蚂蚁传播蜡蚧轮枝菌防治树干柏长喙大蚜的方法 |
CN104450535A (zh) * | 2014-11-12 | 2015-03-25 | 泰山医学院 | 一种保持蜡蚧轮枝菌对寄主昆虫毒力的方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
一种重要的昆虫病原真菌-蜡蚧轮枝菌V.lecanii;罗小刚;《贵州农业科学》;19880131(第1期);第57-64页 * |
蜡蚧轮枝菌 KMZW-1 菌株对扶桑绵粉蚧的毒力测定;闫鹏飞等;《华中农业大学学报》;20130731(第4期);第38-42页 * |
蜡蚧轮枝菌昆明菌株可湿性粉剂;张亚平等;《中国生物防治》;20070930(第23期);第28-31页 * |
银纹夜蛾的发生及综合防治;兰国胜等;《湖北农业科学》;20070131(第1期);第74-75页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104838892A (zh) | 2015-08-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Feng et al. | Production, formulation and application of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana for insect control: current status | |
CN109401981B (zh) | 金龟子绿僵菌ippmhbhc-7及其应用 | |
CN105420115B (zh) | 一种用于蜜环菌孢子分离、培养的培养基及方法和应用 | |
CN111235039B (zh) | 一种用于培养高毒力金龟子绿僵菌的培养基及其制剂和应用 | |
CN110157638A (zh) | 一种克里布所类芽孢杆菌yy-1及其应用 | |
CN107164241B (zh) | 一种白僵菌固体培养基及其制备方法 | |
Latifian et al. | Mass production of entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae by using agricultural products based on liquid-solid diphasic method for date palm pest control | |
CN111662829B (zh) | 一株绿僵菌chma-005及其在防治茶尺蠖中的应用 | |
CN116322356A (zh) | 新型青贮饲料添加剂组合物 | |
EP3939430A1 (en) | Pest control material using entomoparasitic microbe and pest control method using same | |
CN115747130B (zh) | 一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基及其制剂和应用 | |
CN104838892B (zh) | 用银纹夜蛾幼虫繁殖蜡蚧轮枝菌恢复其活力的方法 | |
JP2842580B2 (ja) | 線虫類の培養方法 | |
CN107058180B (zh) | 一种高寒草地牧草内生细菌枯草芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其制备方法和应用 | |
Salama et al. | Utilization of Fodder Yeast and Agro-Industrial by-Products in Production of Spores and Biologically—Active Endotoxins from Bacillus thuringiensis | |
WO2008041505A1 (en) | Novel bacillus bacterium strain capable of degrading/volume-reducing plant residue | |
JP4715243B2 (ja) | ペーシロマイセス属に属する微生物の分生子を製造する方法 | |
KR101425046B1 (ko) | 패실로마이세스 속 곰팡이의 대량 생산 방법 | |
KR101288414B1 (ko) | 신규한 로도토루라 그라미니스 y435 및 이를 포함하는 식물 저장병균 방제제 | |
CN111961622A (zh) | 暹罗芽孢杆菌b11及其在预防和/或治疗杂交竹干基腐烂病中的应用 | |
CN100384979C (zh) | 一种高纯度孢子粉生产工艺及所用的立式多层产孢箱 | |
CN105838650B (zh) | 一株甲基营养型芽孢杆菌及其在餐厨垃圾防蝇产蛆中的应用 | |
JP3225627B2 (ja) | 微生物資材、その製造方法およびその用途 | |
CN111808778B (zh) | 一株防治黄萎病的韦氏芽孢杆菌及其培养方法、菌剂及其制备方法和应用 | |
CN115851458B (zh) | 一种产菌丝蛋白的威尼斯镰刀菌及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170412 Termination date: 20180602 |