CN104800250A - 一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，属于银杏提取物加工领域，银杏叶提取物主要包含黄酮类和萜内酯类，尤其涉及一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其克服了现有技术中一般仅仅利用单一提取物进行配比混合的成本高企，或者是没有针对性去除杂质造成的极性物质杂质过多的现实缺陷。本发明提供一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其特征在于：分为银杏叶提取物溶剂提取，利用大孔吸附树脂吸附叶绿素、黄酮类物质、银杏酸，再经硅胶柱层析，在判别确实极性物质低于检出限之后，将吸附后的银杏叶提取物添加辅料制片的步骤。

Description

一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法

技术领域    

本发明属于银杏提取物深加工领域，银杏叶提取物主要包含黄酮类和萜内酯类，尤其涉及一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法。

背景技术

近年来，银杏萜内酯的独特药理作用引起了国内外学者的关注，其提取纯化成为研究的重要内容。银杏叶中独有的具有特殊分子结构和药理活性的成分，早期认为黄酮类和萜内酯都是抗衰老的有用物质，但近年研究表明，银杏叶中主要的抗衰老物质是萜内酯类，以及白果内酯，主要有萜内酯银杏内酯（ginkgolide）GA、GB、GC、GJ、GM，以及属于倍半萜内酯的一种，白果内酯BB（bilobalide），这各个不同的内酯对人体内的PAF受体等受体有不同的特异性抑制作用，或者能抗人体神经末梢的衰老，围绕银杏萜内酯的提取与纯化工作，近年来屡有研究。

但是，现有的银杏萜内酯的提纯中，往往没有特意针对极性物质的去除步骤，不用说一般的以黄酮类和萜内酯类的主要提取物的方法，还有很多刻意去除黄酮类，只留下萜内酯类的提取方法，其中的极性物质由于没有有效地去除，导致银杏酸、叶绿素等杂质偏多，对银杏叶制剂的纯度，取得的临床效果都有很大的不良影响，现有技术中未有专门针对这一缺陷涉及的解决方案，以萜内酯各种类单独提纯以混合来看，这耗费的人力物力又过于高企，不适合多数情况下的需要。总的来说，现有技术需要一种能够针对极性物质进行专门去除的，能够取得比较纯净的萜内酯提取物的方法。

发明内容

本发明提出一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其克服了现有技术中一般仅仅利用单一提取物进行配比混合的成本高企，或者是没有针对性去除杂质造成的极性物质杂质过多的现实缺陷。

本发明提供一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其特征在于：

分为银杏叶提取物溶剂提取，利用大孔吸附树脂吸附叶绿素、黄酮类物质、银杏酸，再经硅胶柱层析，在判别确实极性物质低于检出限之后，将吸附后的银杏叶提取物添加辅料制片的步骤。

一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其四个步骤具体为：

1）银杏叶提取物溶剂提取：针对银杏叶片进行溶剂提取，利用一定量的甲醇、乙醇、乙酸乙酯的任意一种进行提取，得到含有叶绿素、黄酮类物质、银杏酸杂质的萜内酯提取物；

2）杂质去除步骤：利用大孔吸附树脂吸附叶绿素、黄酮类物质、银杏酸，再经硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇洗脱，得洗脱后产物；

3）判别极性物质低于检出限：先经过取小样溶于水pH距离7的偏离度简单判别，再经过GC-MS进一步判别，如果pH离7偏差不大，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限，则进入下一步，如果上述有一个条件不满足，则重复步骤2，直至pH离7偏差不大，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限两个条件都满足为止，得到去除极性物质的产物；

4）将去除极性物质的产物添加辅料制片：辅料加入β—含水乳糖、聚山梨酯-80、羟丙纤维素L-HPC、磷酸氢钙、微晶纤维素。

其中：步骤1中，利用的甲醇、乙醇、乙酸乙酯的溶剂的任意一种进行提取，可以是纯溶剂，也可以是添加了一定量的与之互溶的水；提取具体是将银杏叶粉末用溶剂浸泡溶解足够时间，旋转离心去除沉淀取上清液；

步骤2中，大孔吸附树脂是HPD100、 D101、DA201、DM301、DS401这些大孔吸附树脂中的一种，或几种组合使用，吸附方式可以是将树脂放入混合物中吸附，也可以是将树脂做成滤芯状在管道中流动吸附；用100-300目的硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇予以洗脱，二氯乙烷-甲醇的配比比例范围为20：1~2：1，

步骤3中的pH离偏差不大，具体可以是指将0.1克产物溶于100ml去离子水中，7.2≥pH值≥6.8，检出限是0.05-0.02mg/m3；

步骤4中的制片，具体是指将前述所得的银杏叶制剂或银杏叶制剂前体作为主要成分，辅料加入β—含水乳糖、聚山梨酯-80、羟丙纤维素L-HPC、磷酸氢钙、微晶纤维素，以及添加60-50%的含水乙醇以润湿，并制粒干燥，60-50%的含水乙醇均挥发后，压制成片。

吸附的大孔树脂可以是HPD100，也可以选用D101、DA201、DM301、DS401等，通过适用条件的调节，都能达到不错的吸附银杏酸的效果。

具体实施方式

实施例1

   1）银杏叶提取物溶剂提取：针对银杏叶片进行溶剂提取，利用一定量的70%的乙酸乙酯（30%为水，质量分数）进行提取，将银杏叶粉末用溶剂浸泡溶解足够时间，旋转离心去除沉淀取上清液，得到含有叶绿素、黄酮类物质、银杏酸杂质的萜内酯提取物；

2）杂质去除步骤：利用大孔吸附树脂吸附叶绿素、黄酮类物质、银杏酸，再经硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇洗脱，得洗脱后产物；大孔吸附树脂是HPD100，吸附方式是将树脂做成滤芯状在管道中流动吸附；用200-300目的硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇予以洗脱，二氯乙烷-甲醇的配比比例为10：1，

3）判别极性物质低于检出限：先经过取小样溶于水pH距离7的偏离度简单判别，再经过GC-MS进一步判别，如果将0.1克产物溶于100ml去离子水中，7.2≥pH值≥6.8，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限，则进入下一步，如果上述有一个条件不满足，则重复步骤2，直至7.2≥pH值≥6.8，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限两个条件都满足为止，得到去除极性物质的产物；GC-MS检出限是0.05mg/m3；

4）将去除极性物质的产物添加辅料制片：辅料加入β—含水乳糖、聚山梨酯-80、羟丙纤维素L-HPC、磷酸氢钙、微晶纤维素，以及添加60%的乙醇以润湿，并制粒干燥，60%的乙醇均挥发后，压制成片。

实施例2

   1）银杏叶提取物溶剂提取：针对银杏叶片进行溶剂提取，利用一定量的60%的乙醇（40%为水，质量分数）进行提取，将银杏叶粉末用溶剂浸泡溶解足够时间，旋转离心去除沉淀取上清液，得到含有叶绿素、黄酮类物质、银杏酸杂质的萜内酯提取物；

2）杂质去除步骤：利用大孔吸附树脂吸附叶绿素、黄酮类物质、银杏酸，再经硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇洗脱，得洗脱后产物；大孔吸附树脂是DM301，吸附方式是将树脂放入混合物中吸附；用100-200目的硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇予以洗脱，二氯乙烷-甲醇的配比比例为8：1，

3）判别极性物质低于检出限：先经过取小样溶于水pH距离7的偏离度简单判别，再经过GC-MS进一步判别，如果将0.1克产物溶于100ml去离子水中，7.1≥pH值≥6.9，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限，则进入下一步，如果上述有一个条件不满足，则重复步骤2，直至7.2≥pH值≥6.8，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限两个条件都满足为止，得到去除极性物质的产物；GC-MS检出限是0.02mg/m3；

4）将去除极性物质的产物添加辅料制片：辅料加入β—含水乳糖、聚山梨酯-80、羟丙纤维素L-HPC、磷酸氢钙、微晶纤维素，以及添加50%的乙醇以润湿，并制粒干燥，50%的乙醇均挥发后，压制成片。

需要指出的是，虽然在这里仅仅给出了两个实施例，但是本发明的实际实施并不受这些限制，而是前述所有提到的一些范畴内都可以替换选择，如溶剂的选用，大孔树脂的选用硅胶柱层析的参数等，可以以其他的方式具体实施，只是因为这些实施方式仅仅是实施例1、2的替换或数值变换，因此在这里不作赘述。

Claims (3)

1.一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其特征在于：

分为银杏叶提取物溶剂提取，利用大孔吸附树脂吸附叶绿素、黄酮类物质、银杏酸，再经硅胶柱层析，在判别确实极性物质低于检出限之后，将吸附后的银杏叶提取物添加辅料制片的步骤。

2.按照权利要求1所述的一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其四个步骤具体为：

1）银杏叶提取物溶剂提取：针对银杏叶片进行溶剂提取，利用一定量的甲醇、乙醇、乙酸乙酯的任意一种进行提取，得到含有叶绿素、黄酮类物质、银杏酸杂质的萜内酯提取物；

2）杂质去除步骤：利用大孔吸附树脂吸附叶绿素、黄酮类物质、银杏酸，再经硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇洗脱，得洗脱后产物；

3）判别极性物质低于检出限：先经过取小样溶于水pH距离7的偏离度简单判别，再经过GC-MS进一步判别，如果pH离7偏差不大，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限，则进入下一步，如果上述有一个条件不满足，则重复步骤2，直至pH离7偏差不大，并且GC-MS检测中叶绿素、黄酮类物质、银杏酸均低于检出限两个条件都满足为止，得到去除极性物质的产物；

4）将去除极性物质的产物添加辅料制片：辅料加入β—含水乳糖、聚山梨酯-80、羟丙纤维素L-HPC、磷酸氢钙、微晶纤维素。

3.按照权利要求2所述的一种不含极性物质的银杏叶片提取物片剂制作方法，其中：

    步骤1中，利用的甲醇、乙醇、乙酸乙酯的溶剂的任意一种进行提取，可以是纯溶剂，也可以是添加了一定量的与之互溶的水；提取具体是将银杏叶粉末用溶剂浸泡溶解足够时间，旋转离心去除沉淀取上清液；

    步骤2中，大孔吸附树脂是HPD100、 D101、DA201、DM301、DS401这些大孔吸附树脂中的一种，或几种组合使用，吸附方式可以是将树脂放入混合物中吸附，也可以是将树脂做成滤芯状在管道中流动吸附；用100-300目的硅胶柱层析，用二氯乙烷-甲醇予以洗脱，二氯乙烷-甲醇的配比比例范围为20：1~2：1，

    步骤3中的pH离偏差不大，具体可以是指将0.1克产物溶于100ml去离子水中，7.2≥pH值≥6.8，检出限是0.05-0.02mg/m3；

步骤4中的制片，具体是指将前述所得的银杏叶制剂或银杏叶制剂前体作为主要成分，辅料加入β—含水乳糖、聚山梨酯-80、羟丙纤维素L-HPC、磷酸氢钙、微晶纤维素，以及添加60-50%的含水乙醇以润湿，并制粒干燥，60-50%的含水乙醇均挥发后，压制成片。