CN104774775B - 一种酵母菌株、其培养方法以及应用 - Google Patents

一种酵母菌株、其培养方法以及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及酵母菌领域，特别涉及一种酵母菌株、其培养方法以及应用。一种酵母菌株，2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2014330，保藏名称为Meyerozyma caribbica GZUMc6。本发明提供的酵母菌株，菌落形态为圆形、近圆形，边缘锯齿状，菌落干燥，表面粗糙，杏白色，具有浓郁的香蕉香味。本发明通过对酵母菌株的培养基成分碳源、氮源以及微量元素进行筛选，得到的培养基能很好的满足酵母菌株生长的需求。本发明提供的酵母菌株在酵素、酱油、醋、果酒等发酵中均取得了很好的增香效果，得到的发酵物风味独特，对发酵物风味物质的形成起到非常重要的作用。

Description

一种酵母菌株、其培养方法以及应用
技术领域
本发明涉及酵母菌领域，具体而言，涉及一种酵母菌株、其培养方法以及应用。
背景技术
增香酵母是一类能够产生芳香气味物质的酵母，目前增香酵母对酱油、酒类等食品在酿造过程中风味物质的形成起到重要的作用，但由于风味物质的形成过程非常缓慢，目前仍了解甚少。日本学者横缘保根据检出的耐盐酵母的发酵性能、香气成分等将所用酵母分为三类：(1)鲁氏酵母群发酵生长良好的一群；(2)生长发酵均不良的一群；(3)生长缓慢，最后赋予发酵醪液优良风味的酵母群。属于第一类的主要是鲁氏酵母，而球拟酵母属于第三类。目前常用的产香酵母为鲁氏接合酵母和球拟酵母，在酱油酿造过程中，此2种酵母菌可以通过不同的代谢途径产生多种芳香味化合物，进而赋予发酵产品特殊的香味，在发酵产品的特殊风味形成中发挥重要的作用。
菌种Myerozyma caribbica无性型为Candida fermentati；曾用名为Candidacarribica、Pichia carribica、Torula fermentati，是发酵食品中常见的增香酵母菌株。Myerozyma caribbica常用于发酵食品，如酱油、醋鱼子酱等，用以增加风味物质以及代谢合成芳香味化合物以及VB1等功能活性物质。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种酵母菌株，所述的酵母菌株发酵后具有浓郁的香蕉香味，对发酵物风味物质的形成起到重要的作用。
本发明的第二目的在于提供一种所述的酵母菌株的培养方法，通过筛选最佳的培养基以及发酵条件，为酵母菌株提供最充足的营养成分，使其快速生长，产香更浓郁。
本发明的第三目的在于提供一种所述的酵母菌株的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种酵母菌株，2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏号为CCTCC NO：M 2014330，保藏名称为Meyerozymacaribbica GZUMc6。
本发明提供的酵母菌株，菌落形态为圆形、近圆形，直径为0.10-0.16mm，边缘锯齿状，菌落干燥，表面粗糙，杏白色，具有浓郁的香蕉香味；保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名称为Meyerozyma caribbica GZUMc6，保藏号为CCTCC M 2014330。
本发明还提供了所述的酵母菌株的培养方法，所述酵母菌株的发酵培养基的碳源为葡萄糖，氮源为牛肉膏和酵母膏的混合物，微量元素为FeSO4和MnSO4。
本发明通过对酵母菌株的培养基成分碳源、氮源以及微量元素进行筛选，得到的培养基能很好的满足酵母菌株生长的需求。
进一步地，所述牛肉膏和酵母膏的质量比为1:0.9-1.1。以该配比得到的牛肉膏和酵母膏的混合物，能更好的满足酵母菌株的生长需求。
为了更好的满足菌株发酵生长的需求，优选地，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖1.9％-2.1％，牛肉膏和酵母膏1.4％-1.6％，FeSO40.10-0.11g/L，MnSO40.06-0.07g/L。
更优选地，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖1.5％，牛肉膏和酵母膏2.5％，FeSO40.11g/L，MnSO40.07g/L。
更优选地，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖2.5％，牛肉膏和酵母膏1.5％，FeSO40.11g/L，MnSO40.06g/L。
最优选地，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖2％，牛肉膏和酵母膏1.5％，FeSO40.11g/L，MnSO40.06g/L。
本发明还对该酵母菌株的发酵条件进行了摸索，为了使发酵过程更优化，优选地，所述酵母菌株的发酵条件为:摇床转速为175-185rpm，培养温度为24-26℃，发酵培养基的pH为6.4-6.6，发酵培养基的菌体终浓度为4.8×106-5.2×106cfu/ml。
更优选地，所述酵母菌株的发酵条件为：摇床转速为180rpm，培养温度为25℃，发酵培养基的pH为6.5，发酵培养基的菌体终浓度为5×106cfu/ml。
本发明还提供了所述的酵母菌株在增香发酵中的应用。本发明提供的酵母菌株在酵素、酱油、醋、果酒等发酵中均取得了很好的增香效果，得到的发酵物风味独特，对发酵物风味物质的形成起到非常重要的作用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的酵母菌株，培养后具有浓郁的香蕉香味，对发酵产物的风味具有非常重要的作用；
(2)本发明通过优化酵母菌株发酵培养基的成分，得到的发酵培养基很好的满足了酵母菌株在发酵过程中对营养需求；
(3)本发明通过优化酵母菌株发酵条件的摸索，得到的发酵条件很好的满足了酵母菌株在发酵过程中对生长环境的需求。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例3中不同碳源物质的活菌数的曲线图；
图2为本发明实施例3中不同氮源物质的活菌数的曲线图；
图3为本发明实施例3中微量元素为Mg2+的活菌数的曲线图；
图4为本发明实施例3中微量元素为Fe2+的活菌数的曲线图；
图5为本发明实施例3中微量元素为Mn2+的活菌数的曲线图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售获得的常规产品。
实施例1
1.酵母菌的分离
1.1原料选择
已成熟，无腐烂、病虫害的生姜(新鲜的)、猕猴桃、苹果、金钗石斛、山楂、柠檬、葡萄、桂圆、菠萝蜜、芒果、山药、西红柿、萝卜、草莓、鱼腥草、柚子、洋葱、紫薯、花椰菜、包菜、胡萝卜；
原料用量：以上所有原料用量均为300g。
1.2制作方法
清洗以上水果和蔬菜等选出烂果、烂叶，去掉泥，去除梗、壳；
用自来水清洗干净，转入食盐浓度为5％的盐水里浸泡1小时，再用清水冲洗干净，虑干；
将清洗干净并虑干的果蔬原料用搅拌机打浆，转入20L的玻璃瓶中；
按10-15％(g/g)的比例向打成浆的原料中加入红糖，搅拌均匀；
26-30℃培养10-20天得到发酵醅；
取发酵醅(即发酵第10、20天)的发酵醪样品各10g，分别放入盛有90ml无菌水的三角瓶中，振荡5分钟，充分摇匀，稀释至合适浓度，吸取100μl涂布分离培养基平板。28±1℃静置培养2d，根据酵母菌的菌落大小、形态和颜色等表型特征挑取单菌落，转接相应培养基斜面，28±1℃静置培养2d，编号保存备用。共分离到308株酵母菌株。
将于28±1℃静置培养24h左右的酵母斜面菌种，用无菌水洗下菌苔，加入到灭菌离心管中，以10000rpm的速度离心15s，将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗涤2次后，备用。菌株DNA提取按照试剂盒标准抽提步骤进行，得到各菌株的DNA。
2.ITS-5.8S rDNA PCR扩增
以ITS 1(5’-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3’)、ITS 4(5’-TCC TCC GCT TAT TGATAT GC-3’)为引物，以不同酵母菌的提取的总DNA为模板进行PCR扩增。在PCR反应管中加入DNA模版1μl，2×Mix 13μl，10μM ITS1 1μl，10μM ITS2 1μl，ddH2O 9μl，混匀后进行PCR反应。PCR扩增反应条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；72℃延长10min。
3.测序方法
DNA测序采用双脱氧终止法。
4.序列分析
采用ClustalW2.1对分离菌株的ITS1-5.8S-ITS2序列进行多序列比对分析，将完全一致的序列所代表的菌株归为一类。然后利用BLASTN 2.2.29+程序搜索核算数据库，下载得分高、序列一致性达到95％以上的序列，采用ClustalW2.1进行多序列比对分析，用MEGA6.06软件采用N-J法重建系统发育树。数据分析采用最大组合似然模型(MaximumComposite Likelihood)，采取1000次bootstrap检验(Larkin MA2007；Tamura K,2013；Zhen Zhang,2000；Aleksandr Morgulis,2008)。
分离得到的酵母菌株ITS1-5.8S-ITS2序列经过多序列比对分析，308株酵母菌株共分为27类群。
5.用MEGA6.06软件采用N-J法重建系统发育树，采用最大组合似然模型将27个类群酵母菌的代表菌株进行系统发育分析。28号菌株与下载的膜醭毕赤酵母(Pichiamembranifaciens)标准序列在同一个进化枝，确定为膜醭毕赤酵母。165、152号菌株确定为克鲁维毕赤酵母克鲁维变种(Pichia kluyveri var.kluyveri)。5号菌株确定为异常毕赤酵母。
8和47号菌株与下载的Myerozyma caribbica标准菌株序列在同一个进化枝，确定为Myerozyma caribbica。186、233、193、245、259、178、236、211、237号菌株虽然与Myerozyma caribbica标准菌株序列分成了两个进化枝，但是，编号Myerozyma caribbicastrain AUMC7262(2)的菌株与编号Meyerozyma caribbica strain AUMC7262的菌株为同一株菌，二者的序列分属于strain AUMC7262 ITS1-5.8S-ITS2区核酸序列的一部分。可以判断186、233、193、245、259、178、236、211、237号菌株与Myerozyma caribbica strainAUMC7262(2)菌株为同种，进而可以认为186、233、193、245、259、178、236、211、237号菌株为Myerozyma caribbica。将8、47、186、233、193、245、259、178、236、211、237号菌株确定为Myerozyma caribbica。
菌株325、350、278、141、9、13-2、242、207、243被判定为奥莫柯达酵母(Kodamaeaohmeri)。菌株325、350、278、141、9、13-2和菌株242、207、243分为两个进化枝，这种情况可能是存在着生理小种的差异。
菌株65为德巴利酵母(Debaryomyces sp.)，菌株351为东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)，菌株136为美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)，菌株356为葡萄有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)。
一般认为，ITS区序列进化速率较快，其基因序列和长度存在显著的种间差异，因此，ITS常常用来作为属或种以下的分类学指标(Beek S V,2003)。序列的相似性超过99％以上，可以认为已经鉴定到种的水平(LEE S B,1992)。通过聚类、选取代表菌株进行ITS1-5.8S-ITS2区域序列系统发育分析的方法，将308株酵母归于8个属，分别是假丝酵母(Candida)，包括桔假丝酵母(Candida quercitrusa)(54株)、福山假丝酵母(Candidafukuyamaensis)(2株)；有孢汉逊酵母(Hanseniaspora)，经鉴定为葡萄酒有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)(3株)；德巴利酵母(Debaryomyces)(3株)；毕赤酵母(Pichia)，分别为克鲁维毕赤酵母克鲁维变种(Pichia kluyveri var.kluyveri)(20株)、异常毕赤酵母(Pichia anomala)(69株)、膜醭毕赤酵母(Pichia membranifaciens)(18株)；伊萨酵母(Issatchenkia)，经鉴定为东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)(1株)；柯达酵母(Kodamaea)，经鉴定为奥莫柯达酵母(Kodamaea ohmeri)(47株)；梅奇酵母(Metschnikowia)，经鉴定为美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)(1株)；Meyerozyma，经鉴定为Meyerozyma carribica(90株)，具体见表1所示。
表1 不同菌株的类别
实施例2
将实施例1中得到的菌株进行发酵性能和香味的初步筛选
1.培养基
麦芽汁固体培养基:麦芽浸膏20.0g，葡萄糖20.0g，琼脂15.0g，加热溶于适量水中，定容至1000ml，pH自然。分装后115℃灭菌30min，冷却备用。
麦芽汁液体培养基:麦芽浸膏20.0g，葡萄糖20.0g，定容至1000ml，pH自然。分装后115℃灭菌30min，冷却备用。
生姜浸提液：取生姜洗净去泥沙，用搅拌机破碎，称量1kg破碎后的生姜，加入2L纯净水浸泡24h即得生姜浸提液。
姜汁培养基：取适量生姜浸提液，加入适量白砂糖，用手持糖度计测混合物糖度10％，115℃灭菌30min。
姜汁高渗培养基：取适量生姜浸提液，加入适量白砂糖，用手持糖度计测混合物糖度40％，115℃灭菌30min。
麦芽汁-乙醇培养基：将麦芽汁液体培养基用蔗糖调节糖度至6°Brix，115℃灭菌30min；临用前向培养基中加入95％(v/v)乙醇和无菌水，调整乙醇浓度至所需。
2.酵母菌的活化
将获得的酵母菌分别接种于麦芽汁固体斜面试管中，置于28±1℃培养48h，再转入麦芽汁液体培养基中培养一代。菌液可置于冰箱4℃暂存，暂存30天后需要再次活化。
3.酵母菌的初筛
起酵时间测定：在杜氏发酵管中装入15ml姜汁培养基，接入酵母菌，28±1℃静置培养，观察起酵情况。试验重复3次。
耐高渗性能测定：在杜氏发酵管中装入15ml姜汁高渗培养基，接入酵母菌，28±1℃静置培养，观察起酵情况。试验重复3次。
高渗培养条件下酵母产香评定：在18×试管中装入15ml姜汁高渗培养基，接入酵母菌，28±1℃静置培养48h后，进行酵母产香感官评定。香气感官评分标准参考GBT 15038(2006)葡萄酒和果酒评分标准，具体如表2所示。
表2 香气评定标准
由于菌株数量太多，就不再详细列出各菌株的感官以及起酵的状况。其中，菌株S456、S442、S432、S458、S438在姜汁培养基中起酵快，产生的二氧化碳在15小时内充满杜氏小管；在高渗培养基中也能够较快起酵，产生丰富、细腻的泡沫。
酵母菌的香型较复杂，每株酵母的产香情况都不完全相同，同种香型气味浓淡也不相同。初筛菌株按照6类产香类型：果香、清香、酯香、甜香、酱香、酒糟味，从中选取香气浓厚、具有代表性，且在姜汁培养基中起酵较快，在高渗培养基中能够快速起酵的Mc186(浓郁香蕉香)、Is351(甜香)、Pa187-2(酯香)、Pk152(酸甜果香)作为增香酵母进入复筛。
综合考虑液体发酵情况与生香情况，选择Mc186、Is351、Pa187-2、Pk152共4株酵母菌进入复筛。
4.酵母菌的复筛
耐酒精性能测定：在250ml锥形瓶中装入麦芽汁-乙醇培养基100ml，使各瓶的乙醇浓度(v/v)分别为8％、10％、13％、15％、18％、20％，各管的糖度一致，接种量相同，置于28±1℃静置培养48h，用紫外分光光度计测定菌液OD值；试验重复3次。
9株酵母菌接种于不同乙醇浓度的麦芽汁-乙醇液体培养基中,在25℃条件下静置培养48h，发现酵母菌的生长情况受培养基中乙醇的抑制程度随着菌株、乙醇浓度的不同而各不相同。
其中，在不含乙醇的麦芽汁培养基中，9株酵母的生长量Mc186>Pa187-2>Is351>Pk152。Pk152菌液在乙醇浓度为0％和8％时，浓度均为最小，说明Pk152菌株生长繁殖能力、耐酒精能力最差。
随着培养基中乙醇浓度的升高，各菌株生长受抑制的程度逐渐加深。但是，Mc186菌株的生长量明显好于其他菌株，并且在乙醇浓度为13％以下均能保持良好的生长。
在耐酒精性能测定结束后，对麦芽汁13％乙醇培养基培养的酵母菌进行产香评定，结果如表3所示。
表3 二级菌株产香评定
菌株编号 产香评定
Is351 1
Mc186 香蕉味水果香，5
Pa187-2 刺鼻酯香，5
Pk152 甜味略带点酸，3
从表3可以看出，Is351产香受到抑制；Pa187-2产生刺鼻酯香；Mc186产生气味柔和的香蕉味水果香；Pk152产生较淡的酸甜味。Mc186在麦芽汁-乙醇培养基中产香情况最好。
综合比较4株复筛菌株的酒精耐受情况以及产香情况，选取Mc186作为果蔬酵素发酵菌株。
其中，Mc186菌株的菌落形态为圆形、近圆形，直径为0.10-0.16mm，边缘锯齿状，菌落干燥，表面粗糙，杏白色，浓郁的香蕉香味。该菌株命名为Mc186，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名称为Meyerozyma caribbica GZUMc6，保藏号为CCTCC M 2014330。
Mc186菌株的ITS1-5.8S-ITS2序列为：
TTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATTCCTACCTGATCTGAGGTCGAGCTTAGTTAAAAGTTCGGCGGCCAAAGCGTGCTAAAWRTTTAGTTCACTTCGTCCACGACGTTCCATTTCGAAAAAGGCATAGCCTGTTCTCAACTCTGCTTGCGCAAGAAGGAAACGACGCTCAGACAGGCATGCCCCATGGAATACCATGGGGCGCAATGTGCGTTCAAGAACTCGATGATTCACGATGGCTGCAATTCACACTAGGTATCGCATTTCGCTGCGCTCTTCATCGATGCGAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGTTTTGTTAAAACTTASTGACTGGTAGTATTACAATTTTAGGTGTTTGGTGCGCTCACGCATGTGTATAAGATATAAATCACAGTAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCTACGGAAG。
实施例3
发酵培养基的确定
1、最佳碳源物质的确定
将1×108cfu/ml Mc186酵母以2％的接种量接种于YPD培养基，YPD培养基包括以下成分，0.6％酵母膏，1％蛋白胨，1.5％葡萄糖。其中，将YPD培养基中的葡萄糖分别改为等量的蔗糖、葡萄糖+蔗糖(重量比例1：1)；置于摇床中28±1℃ 150rpm振荡培养至24h后，测定活菌数。结果如图1所示。
从图1可以看出，当采用葡萄糖为碳源时，菌株Mc186活菌数最高(P<0.01)，为4.5×108个/ml；选用葡萄糖为菌株Mc186发酵培养基的碳源。
2、最佳氮源物质的确定
在250ml三角瓶中装入100ml初始pH为6.0的YPD培养基(采用最佳碳源)，将其中的蛋白胨分别改为等量的牛肉膏、酵母膏、牛肉膏+酵母膏(按1：1比例添加)；将1×108cfu/ml酵母分别以2％的接种量接种于发酵培养基，置于摇床中28±1℃ 150rpm振荡培养24h后，测定活菌数。得到的结果如图2所示。
从图2可以看出，菌株Mc186在氮源为牛肉膏酵母膏组合时达到最大活菌数，为4.5×108个/ml(P<0.05)。根据最佳氮源试验结果，选择牛肉膏酵母膏为菌株Mc186发酵培养基氮源。
3、最佳微量元素添加量的确定
在250ml三角瓶中装入100ml YPD培养基(采用最佳碳氮源)，向其中分别添加不同含量的FeSO4、MnSO4、MnSO4，具体添加量如表4所示。
表4 微量元素的添加量
微量元素 添加量(g/L)
Fe2+ 0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12
Mg2+ 0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50
Mn2+ 0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12
将1×108cfu/ml Mc186酵母以2％的接种量接种，25℃ 150rpm振荡培养24h后测定活菌数。
微量元素为Mg2+的结果如图3所示。从图3可以看出，菌株Mc186在不添加Mg2+的培养基中活菌数最高，为4.75×108cfu/ml(P>0.05)；微量元素为Fe2+的结果如图4所示，从图4可以看出，在添加0.1g/L Fe2+的培养基中活菌数最高，为4.98×108cfu/ml(P<0.05)；微量元素为Mn2+的结果如图5所示，从图5可以看出，在添加0.04g/L Mn2+的培养基中活菌数最高，为5.2×108cfu/ml(P<0.01)，Mn2+对菌株Mc186生长影响较大。
根据最佳微量元素试验结果，选取FeSO4、MnSO4微量元素加入菌株Mc186发酵培养基。
4、培养基的正交试验
培养基影响菌株Mc186生长的主要因素有碳源(葡萄糖)、氮源(牛肉膏+蛋白胨)、微量元素Fe2+、Mn2+，1×108cfu/ml Mc186酵母以2％的接种量接种于培养基，选用L9(34)正交表进行4因素3水平的正交试验，对菌株Mc186最佳发酵培养基进行研究。试验因子和水平如表5。按正交表安排试验，实验方案如表6。按设计方案进行实验，实验结果如表7。
表5 菌株Mc186最佳发酵培养基正交试验因素水平表
表6 菌株Mc186最佳发酵培养基正交实验方案
表7 菌株Mc186最佳发酵培养基正交试验结果
结果表明，在菌株Mc186发酵培养基中，四个因子对结果影响由大到小为B>C>D>A，即氮源>微量元素Fe2+>微量元素Mn2+>碳源。最优组合为B1C3D2A2，即当碳源选取葡萄糖，添加量为2.0％；氮源选取牛肉膏+酵母膏，按照1：1比例添加，共计添加量为1.5％；FeSO4添加量为0.11g/L；MnSO4添加量为0.06g/L时，菌株Mc186生长量最大。
实施例4
以确定的最佳培养基进行最佳发酵条件的摸索
选用L9(34)正交表进行4因素3水平的正交试验，对菌株Mc186最佳增菌条件进行研究。试验因子和水平如表8所示。按正交表安排试验，实验方案如表9所示。按设计方案进行实验，实验结果如表10所示。其中，接种的Mc186酵母种子液浓度为1×108cfu/ml。
表8 菌株Mc186最佳增菌条件正交试验因素水平表
表9 菌株Mc186最佳增菌条件正交实验方案
表10 菌株Mc186最佳增菌条件正交实验结果
结果表明，在菌株Mc186发酵过程中，四个因子对结果影响由大到小为C>B>A>D，即溶氧量>温度>初始pH>接种量。最优组合为C3B1A3D2，即当摇床转速为180rpm，培养温度为25℃，初始pH为6.5，以酵母浓度为1×108cfu/ml接种，接种量为5％时，菌株Mc186生长量最大。其中，以酵母浓度为1×108cfu/ml接种，接种量为5％，即使得发酵培养基中的菌体终浓度为5×106cfu/ml。
其中，接种量为移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例。
综上可以看出，Mc186最佳发酵培养基配方为：碳源选取葡萄糖，添加量为2.0％；氮源选取牛肉膏+酵母膏，按照1：1比例添加，共计添加量为1.5％；FeSO4添加量为0.11g/L；MnSO4添加量为0.06g/L。Mc186最佳发酵条件为：发酵培养基中的菌体终浓度为5×106cfu/ml，发酵培养基初始pH为6.5，摇床转速为180rpm，培养温度为25℃。
应用实例一
应用于酵素的发酵
1、活化保藏的MC186菌株3次；
2、转接斜面培养基，30℃±0.5℃培养12h；
3、用无菌水洗下斜面菌苔，制得浓度为108cfu/ml菌悬液；
4、按5％-10％的接种量将菌悬液接种至装有200ml麦汁培养基的500ml三角瓶中，30℃±0.5℃，180rpm摇床恒温振荡18h，制得菌株MC186液体种子，浓度为109cfu/ml；
5、将MC186液体种子液按400-500ml/100kg接种到打浆或切块果蔬或其它发酵基质中，25℃±1℃发酵20-30d，实现酵素产品生产的第一阶段发酵。
发酵结束，酒精度在8-12度，香味是浓郁而愉悦的香蕉香味和栗香味。
应用实例二
应用于酱油发酵
1、活化保藏的MC186菌株3次；
2、转接斜面，30℃±0.5℃培养12h；
3、用无菌水洗下斜面菌苔，制得浓度为108cfu/ml菌悬液；
4、按5％-10％的接种量将菌悬液接种至装有200ml麦汁培养基的500ml三角瓶中，30℃±0.5℃，180rpm摇床恒温振荡18h，制得菌株MC186液体种子，浓度为109cfu/ml；
5、按5-10％的接种量加入生酱油中，25℃±1℃发酵60-70d。
发酵结束，酱香更浓郁。
应用实例三
应用于醋的发酵
1、活化保藏的MC186菌株3次；
2、转接斜面，30℃±0.5℃培养12h；
3、用无菌水洗下斜面菌苔，制得浓度为108cfu/ml菌悬液；
4、按5％-10％的接种量将菌悬液接种至装有200ml麦汁培养基的500ml三角瓶中，30℃±0.5℃，180rpm摇床恒温振荡18h，制得菌株MC186液体种子，浓度为109cfu/ml；
5、按5-10％的接种量加入到制醋工艺中酒精发酵介素时的发酵醪液中，25℃±1℃再继续发酵40-60d。
发酵结束，醋味中带有愉悦的果香味。
应用实例四
应用于果酒发酵
1、活化保藏的MC186菌株3次；
2、转接斜面，30℃±0.5℃培养12h；
3、用无菌水洗下斜面菌苔，制得浓度为108cfu/ml菌悬液；
4、按5％-10％的接种量将菌悬液接种至装有200ml麦汁培养基的500ml三角瓶中，30℃±0.5℃，180rpm摇床恒温振荡18h，制得菌株MC186液体种子，浓度为109cfu/ml；
5、水果酒精发酵至酒精度达到6-8时，按5-10％的接种量加入菌株MC186液体种子液，25℃±1℃再继续发酵20-30d。
发酵结束，果酒的香味是浓郁而愉悦的香蕉香味。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种酵母菌株，其特征在于，2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2014330，保藏名称为Meyerozyma caribbica GZUMc6。
2.权利要求1所述的酵母菌株的培养方法，其特征在于，所述酵母菌株的发酵培养基的碳源为葡萄糖，氮源为牛肉膏和酵母膏的混合物，微量元素为FeSO4和MnSO4。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述牛肉膏和酵母膏的质量比为1:0.9-1.1。
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖1.9％-2.1％，牛肉膏和酵母膏1.4％-1.6％，FeSO40.10-0.11g/L，MnSO40.06-0.07g/L。
5.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖1.5％，牛肉膏和酵母膏2.5％，FeSO40.11g/L，MnSO40.07g/L。
6.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖2.5％，牛肉膏和酵母膏1.5％，FeSO40.11g/L，MnSO40.06g/L。
7.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下成分：按重量百分数计，葡萄糖2％，牛肉膏和酵母膏1.5％，FeSO40.11g/L，MnSO40.06g/L。
8.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，所述酵母菌株的发酵条件为:摇床转速为175-185rpm，培养温度为24-26℃，发酵培养基的pH为6.4-6.6，发酵培养基的菌体终浓度为4.8×106-5.2×106cfu/ml。
9.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述酵母菌株的发酵条件为：摇床转速为180rpm，培养温度为25℃，发酵培养基的pH为6.5，发酵培养基的菌体终浓度为5×106cfu/ml。
10.权利要求1所述的酵母菌株在增香发酵中的应用。
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Denomination of invention: Yeast strain, and culture method and application thereof

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