CN104774237A - 一种姜状三七皂苷r1的制备方法 - Google Patents

一种姜状三七皂苷r1的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104774237A
CN104774237A CN201410009391.3A CN201410009391A CN104774237A CN 104774237 A CN104774237 A CN 104774237A CN 201410009391 A CN201410009391 A CN 201410009391A CN 104774237 A CN104774237 A CN 104774237A
Authority
CN
China
Prior art keywords
methyl alcohol
preparation
carried out
ginsenoside
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410009391.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104774237B (zh
Inventor
叶正良
朱琼
李德坤
周大铮
鞠爱春
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201410009391.3A priority Critical patent/CN104774237B/zh
Publication of CN104774237A publication Critical patent/CN104774237A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104774237B publication Critical patent/CN104774237B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/256—Polyterpene radicals

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种姜状三七皂苷R1的制备方法，步骤如下：1）取人参皂苷Ro，加水溶解，用碱调节pH为8-13.8，在温度60-80℃的条件下进行。水解反应30-60min，反应结束后，冷却，pH值调节至7，得水解液；2）水解液过处理好的大孔吸附树脂柱，流速约0.5-1.0mL·min-1，弃去流出液，待水解液流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用醇洗脱，收集醇洗脱液；3）将醇洗脱液和硅胶拌样，挥干醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=75-55:25-45:10的下层液进行洗脱，分段收集样品，层析法检测，将含相同物质的样品进行合并，将各进行质谱检测，分子量为794的洗脱液为姜状三七皂苷R1，浓缩干燥即得姜状三七皂苷R1。

Description

一种姜状三七皂苷R1的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种三七皂苷R1的制备方法，特别涉及一种姜状三七皂苷R1的制备方法。
背景技术：
人参皂苷（Ginsenoside，GS）是一种固醇类化合物，三萜皂苷，主要存在于人参属药材中，是人参的主要有效成分。人参皂苷都具有相似的基本结构，都含有由30个碳原子排列成四个环的甾烷类固醇核，它们依糖苷基架构的不同而被分为两组：达玛烷型和齐墩果烷型。现已明确知道的人参皂苷单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。
人参皂苷Ro（Ginsenoside-Ro）为齐墩果烷型人参皂苷，又被称为竹叶参Ⅴ，存在于人参，牛膝，竹叶参中，具有表面活性剂作用，对柴胡皂苷具有增溶的作用，能促进细胞增生，调节小鼠脾细胞Th1/Th2型细胞因子的产生，能促进毛发生长，还能抑制5α-还原酶和抗慢性心绞痛的作用。
人参皂苷Ro结构存在糖苷键、酯苷键，易水解，所以人参皂苷Ro很不稳定（文献：刘宏群.人参中丙二酸单酰基和齐墩果酸型皂苷研究[D].中国农业科学院，2010）。人参皂苷Ro在加热条件下酯苷键易破坏，这种报道大多集中在定性分解及通过结构物质推测其产物。人参皂苷Ro在酸性条件下的水解难于控制，但人参皂苷Ro在碱性条件下的水解情况及水解产物尚无报道，本发明人研究了人参皂苷Ro在碱性条件下的稳定性，考察了不同温度不同pH值下人参皂苷Ro的水解情况，结果发现水解符合一级动力学反应。水解速率与水解温度和水解体系的pH值相关，相同的水解温度，pH值越高，水解越快；相同的pH值，温度越高水解越迅速。
本发明人在研究人参皂苷Ro在碱性条件下的水解时意外的发现其水解产物中含有大量的姜状三七皂苷R1。
姜状三七皂苷R1是一种已知物质，存在于姜状三七、竹叶参、牛膝、人参等药材中，具有降糖的特性，具有体外抗氧化能力等重要的价值。
本发明由此开发出一种有用的用人参皂苷Ro制备姜状三七皂苷R1的制备方法。
发明内容：
本发明的目的是提供一种人参皂苷Ro碱水解得到姜状三七皂苷R1的制备方法，该制备的关键步骤是控制人参皂苷Ro的水解条件。
本发明提供一种姜状三七皂苷R1的制备方法，所述方法，步骤如下：
1）取人参皂苷Ro，加水溶解，用碱调节pH为8-13.8，在温度60-80℃的条件下进行
水解反应30-60min，反应结束后，冷却，pH值调节至7，得水解液；
2）水解液过处理好的大孔吸附树脂柱，优选AB-8、D101、Cleanert-PS树脂，最优选Cleanert-PS树脂，流速约0.5-1.0mL·min-1，弃去流出液，待水解液流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用醇洗脱，优选甲醇或乙醇，最优选甲醇，收集醇洗脱液；
3）将醇洗脱液和硅胶拌样，挥干醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=75-55:25-45:10，优选65：35：10的下层液进行洗脱，分段收集样品，层析法检测，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，浓缩干燥即得姜状三七皂苷R1。
其中步骤1所述的碱是指甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液，硼砂-氢氧化钠缓冲液，碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，碳酸钠-氢氧化钠，磷酸氢二钠-氢氧化钠，氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液或氢氧化钠缓冲溶液中的一种。优选磷酸氢二钠-氢氧化钠或氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节PH至12-13。
最优选用磷酸氢二钠-氢氧化钠调节PH至12或用氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节PH至13；
本发明优选的姜状三七皂苷R1制备方法，步骤如下：
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，磷酸氢二钠-氢氧化钠或氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节PH至12-13，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到18mg姜状三七皂苷R1。
本申请姜状三七皂苷R1收率能够达到72%左右。
本发明的方法是在研究人参皂苷Ro水解过程中获得的，该研究过程如下：
1、仪器与试剂
人参皂苷Ro对照品（天津马克生物科技有限公司，纯度为99%，批号：201310912）；氯仿为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯（德国Merck公司），磷酸为色谱纯（天津市光复精细化工研究所），超纯水为实验室自制；Waters e2695高效液相色谱仪，Waters2489紫外检测器，岛津UFLC-IT-TOF，Bruker400M核磁共振仪，Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司），XS105梅特勒精密电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。
2、方法与结果
2.1人参皂苷Ro水解产物测定
2.1.1色谱检测条件Waters Symmetry C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.05%磷酸，梯度洗脱程序：0～20min，30%乙腈～70%乙腈；流速：1mL/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量：10μL。人参皂苷Ro水解结果见图1。
2.1.2工作曲线的绘制取人参皂苷Ro对照品适量，配制成质量浓度为0.60mg·mL-1的储备液，分别稀释5、10、20、40、80、160倍，分别吸取上述不同质量浓度的人参皂苷Ro对照品10μL进样，测定其峰面积。以人参皂苷Ro的进样质量为横坐标（X），色谱峰的峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得工作曲线方程Y＝3346 554X＋174 456，（r＝0.9999，n＝6），表明人参皂苷Ro在0.12mg·mL-1～3.75×10-3mg·mL-1的范围内呈良好的线性关系。
2.1.3检测限的测定将人参皂苷Ro适量，配制成合适浓度，进样检测，当信噪比为3时，检测浓度为3.73ng。
2.1.4定量限的测定取人参皂苷Ro适量，配制成合适浓度，进样检测，当信噪比为10时，该浓度为14.92ng。
2.1.5精密度试验吸取人参皂苷Ro对照品溶液10μL，连续进样6次，其RSD0.40%，表明测定条件精密度良好。
2.1.6稳定性试验将人参皂苷Ro对照品溶液放置0h，2h，4h，8h，12h，24h后分别测定其峰面积，RSD1.70%，表明溶液稳定性良好。
2.2人参皂苷Ro碱水解动力学模型的建立
2.2.1水解实验过程取人参皂苷Ro对照品适量，精密称定，置于25mL的容量瓶中，用甲醇溶解定容，摇匀，配制成质量浓度为1.08mg·mL-1的储备液。精密吸取该储备液1mL于25mL容量瓶中，分别用pH值为8.01、9.02、9.98、11.01、12.03、13.01的缓冲液稀释并定容，充分摇匀，分装于2mL的安瓿瓶中，置于不同温度的水浴锅内，于不同的时间点取样，HPLC测定人参皂苷Ro水解后质量浓度的变化情况。
2.2.2不同温度不同pH值下人参皂苷Ro的水解动力学方程将“2.2.1”下的水解结果进行C（浓度）对t、lnC对t、1/C对t进行曲线拟合和线性回归，结果显示lnC与t成良好的线性关系，其相关系数r都在0.99以上。因此确定人参皂苷Ro在碱性条件下的水解属于一级动力学方程。由一级动力学方程：Ct＝C0e-kt，即lnCt＝－kt＋C0可求出水解速率常数k（文献：张毅，翁代群，王海军，等.乌头碱的水解动力学研究[J].中草药，2009，40(S1)：120-122），结果见表1。不同温度不同pH值下的水解趋势情况见图2。
从水解曲线可以看出温度和pH值对人参皂苷Ro的水解速率具有明显的影响，随着温度的升高，斜率的绝对值增大，水解速率加快。尤其是当pH值为12.02和13.01时，纵坐标lnC的值变化越快，水解速率变化更为明显。这可能与人参皂苷Ro的酯苷键性质有关。
表1人参皂苷Ro一级水解动力学参数结果
从表1的水解动力学方程相关参数可以看出，温度越高，水解速率常数k值越大，说明水解速率更快，由一级动力学方程可以推出半衰期公式t1/2＝ln2/k，从而求出半衰期t1/2。从表1中可以看出在pH值为13.01，半衰期为15min时，水解速率最快。因此通过以上研究可得出人参皂苷Ro在pH值为13，70℃条件下水解45min几乎完全水解，并且没有新的水解产物产生。
2.3人参皂苷Ro碱水解产物制备
2.3.1人参皂苷Ro碱水解产物制备取30mg人参皂苷Ro，在pH为13，温度为70℃的条件下水解45min，冷却，pH值调节至7，然后过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，得到18mg纯的水解产物。
2.3.2人参皂苷Ro碱水解产物UFLC-MS/MS鉴定结果UFLC-MS/MS测定的结果得出，该水解产物的一级质谱中分子离子峰为m/z793.4，表明该化合物的相对分子量可能为794。m/z612.4的离子可能是该化合物裂解丢失一分子六碳糖产生的碎片离子，m/z453.0的离子应该为齐墩果酸的母核碎片离子。因为本水解产物的ESI MS/MS与人参皂苷Ro的ESI MS/MS离子种类基本一致（文献：刘宏群.人参中丙二酸单酰基和齐墩果酸型皂苷研究[D].中国农业科学院，2010），认为该水解产物是比人参皂苷Ro少一个葡萄糖的齐墩果酸型皂苷。
2.3.3人参皂苷Ro碱水解产物NMR鉴定结果1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)谱中能够观察到两组葡萄糖的信号，2个糖端基质子信号的化学位移δ＝4.41(1H，d，J＝7.6Hz)、δ＝4.27(1H，d，J＝7.1Hz)，两个糖的偶合常数都在7左右，与13C-NMR谱数据结合进行分析，可判断出2个糖的构型均为β-构型。1H-NMR谱还给出7个明显的甲基质子信号，由大到小分别为：δ1.09(3H，s)、δ0.99(3H，s)、δ0.87(9H，s)、δ0.75(3H，s)、δ0.71(3H，s)。该甲基信号与人参皂苷Ro的7个甲基信号基本一致。由于Liebermann-Buchard反应与Molish反应结果均显示为阳性。更加明确该水解产物是齐墩果烷型的三萜皂苷。
13C-NMR(100.6MHz，DMSO-d6)谱显示共42个碳，其中δ＝178.1(C-28)、δ＝144.3(C-13)、δ＝122.0(C-12)是齐墩果烷型五环三萜类化合物的特征信号。δ＝104.5、δ＝104.1两个碳信号，为糖端基的碳信号，提示可能有2个糖的存在。δ＝172.6是葡萄糖醛酸的羰基碳信号，表明有葡萄糖醛酸存在。与人参皂苷Ro的13C-NMR比较（文献：Peng W，Sun J，Lin F，et al.Facile synthesisof ginsenoside Ro[J].Synlett，2004，2004(02)：0259-0262），C-28位为δ＝179.1，化学位移向低场移动了，说明C-28没有糖苷键，且相对分子量与Ro相比，恰好少了一分子六碳糖，其余碳谱数据见表2。
表213C-NMR data of zingibroside R1
注：*被DMSO-d6溶剂峰干扰
与文献比对（文献①：Peng W，Sun J，Lin F，et al.Facile synthesis ofginsenoside Ro[J].Synlett，2004，2004(02)：0259-0262；文献②：邱楠楠.紫红参化学成分、指纹图谱及生物活性的研究[D].吉林大学，2013；文献③：Rukunga GM，Waterman PG.A new oleanane glycoside from the stem bark ofAlbizia gummifera[J].Fitoterapia，2001，72(2)：140-145），再结合质谱数据可知该结构为姜状三七皂苷R1（zingibroside R1），其化学名称为3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸，其结构式见图5。
附图说明
图1人参皂苷Ro水解HPLC图，图中：1-空白；2-人参皂苷Ro对照品；3-人参皂苷Ro水解样品
图2人参皂苷Ro在pH为13.01（A）、12.03（B）、11.01（C）9.98（D）、9.02（E）、8.01（F）下的水解曲线
图3人参皂苷Ro水解产物一级MS图
图4人参皂苷Ro水解产物二级MS图
图5姜状三七皂苷R1
具体实施方式
实施例1
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，磷酸氢二钠-氢氧化钠或氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节PH至12-13，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇，流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到18mg姜状三七皂苷R1。
测定收率为72%。
实施例2
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用氢氧化钠调节pH为13.8，温度为80℃，搅拌水解30min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的AB-8树脂柱使用前用乙醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇，流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集乙醇洗脱液。
3）将乙醇洗脱液和硅胶拌样，挥干乙醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到19mg姜状三七皂苷R1。
实施例3
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节pH为13，温度为60℃，搅拌水解60min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的D101树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇），流速约0.5mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=75：25:10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到17mg姜状三七皂苷R1。
实施例4
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用磷酸氢二钠-氢氧化钠调节pH为12，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=55：45：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到20mg姜状三七皂苷R1。
实施例5
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液调节pH为12.79，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到21mg姜状三七皂苷R1。
实施例6
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用硼砂-氢氧化钠缓冲液调节pH为9，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用乙醇进行处理，再用水冲洗至无乙醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。
3）将乙醇洗脱液和硅胶拌样，挥干乙醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到17mg姜状三七皂苷R1。
实施例7
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液调节pH为10，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用乙醇进行处理，再用水冲洗至无乙醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。
3）将乙醇洗脱液和硅胶拌样，挥干乙醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到19mg姜状三七皂苷R1。
实施例8
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用碳酸钠-氢氧化钠调节pH为11，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到18mg姜状三七皂苷R1。
实施例9
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用磷酸氢二钠-氢氧化钠调节pH为12.79，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到20mg姜状三七皂苷R1。
实施例10
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节pH为13.39，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱（内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇），流速约1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10（下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到19mg姜状三七皂苷R1。

Claims (10)

1.一种姜状三七皂苷R1的制备方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：
1）取人参皂苷Ro，加水溶解，用碱调节pH为8-13.8，在温度60-80℃的条件下进行水解反应30-60min，反应结束后，冷却，pH值调节至7，得水解液；
2）水解液先过处理好的大孔吸附树脂柱，流速约0.5-1.0mL·min-1，弃去流出液，待水解液流至与树脂层相平时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用醇洗脱，收集醇洗脱液；
3）将醇洗脱液和硅胶拌样，挥干醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=75-55:25-45:10的下层液进行洗脱，分段收集样品，层析法检测，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1的洗脱液，浓缩干燥即得姜状三七皂苷R1。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中步骤1所述的碱是指甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液，硼砂-氢氧化钠缓冲液，碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，碳酸钠-氢氧化钠，磷酸氢二钠-氢氧化钠，氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液或氢氧化钠缓冲溶液中的一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中步骤1所述的碱调节PH是指用磷酸氢二钠-氢氧化钠或氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节PH至12-13。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中步骤1所述的碱调节PH是指用磷酸氢二钠-氢氧化钠调节PH至12或用氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节PH至13。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述大孔吸附树脂柱，选自AB-8、D101、Cleanert-PS树脂。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述大孔吸附树脂柱，为Cleanert-PS树脂。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述用醇洗脱选自用甲醇或乙醇洗脱。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述醇为甲醇。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述氯仿：甲醇：水=65：35：10。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤如下：
1）取30mg人参皂苷Ro，加入水溶解，用磷酸氢二钠-氢氧化钠或氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液调节pH至12-13，温度为70℃，搅拌水解45min，冷却，pH值调节至7，得到水解液；
2）水解液过处理好的Cleanert-PS商品树脂柱，内径1cm，树脂床高约2cm；300μm，流速1.0mL·min-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液；
3）将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水=65：35：10的下层液进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状三七皂苷R1洗脱液，经过浓缩干燥得到18mg姜状三七皂苷R1。
CN201410009391.3A 2014-01-09 2014-01-09 一种姜状三七皂苷r1的制备方法 Active CN104774237B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410009391.3A CN104774237B (zh) 2014-01-09 2014-01-09 一种姜状三七皂苷r1的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410009391.3A CN104774237B (zh) 2014-01-09 2014-01-09 一种姜状三七皂苷r1的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104774237A true CN104774237A (zh) 2015-07-15
CN104774237B CN104774237B (zh) 2017-10-13

Family

ID=53616034

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410009391.3A Active CN104774237B (zh) 2014-01-09 2014-01-09 一种姜状三七皂苷r1的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104774237B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109266626A (zh) * 2018-09-19 2019-01-25 云南农业大学 齐墩果酸葡糖醛酸转移酶及其编码基因和应用
CN111662352A (zh) * 2020-07-16 2020-09-15 云南众爱生物科技有限公司 一种无定形态三七皂苷r1及其制备方法
CN115806581A (zh) * 2022-09-30 2023-03-17 河南中医药大学 一种从怀牛膝中提取姜状三七皂苷r1的方法及其在制备治疗肝损伤药物中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55122724A (en) * 1979-03-13 1980-09-20 Res Inst For Prod Dev Antidiabetic agent
CN1414009A (zh) * 2001-10-26 2003-04-30 香港生物科技研究院 从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法
CN1414011A (zh) * 2002-10-17 2003-04-30 南开大学 三七皂苷的提取方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55122724A (en) * 1979-03-13 1980-09-20 Res Inst For Prod Dev Antidiabetic agent
CN1414009A (zh) * 2001-10-26 2003-04-30 香港生物科技研究院 从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法
CN1414011A (zh) * 2002-10-17 2003-04-30 南开大学 三七皂苷的提取方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘宏群: "人参中丙二酸单酰基和齐墩果酸型皂苷研究", 《中国农业科学院学位论文》 *
周家明等: "从三七根、茎中快速批量分离提取三七皂苷R1、R2及人参皂苷Rg1有效部位群的方法", 《特产研究》 *
李向高等: "红参炮制加工中的皂苷水解反应极其产物的研究", 《吉林农业大学学报》 *
陈英杰等: "人参皂甙碱水解的研究", 《沈阳药学院学报》 *
陈英杰等: "甙键的碱裂解法研究", 《沈阳药学院学报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109266626A (zh) * 2018-09-19 2019-01-25 云南农业大学 齐墩果酸葡糖醛酸转移酶及其编码基因和应用
CN109266626B (zh) * 2018-09-19 2021-11-09 云南农业大学 齐墩果酸葡糖醛酸转移酶及其编码基因和应用
CN111662352A (zh) * 2020-07-16 2020-09-15 云南众爱生物科技有限公司 一种无定形态三七皂苷r1及其制备方法
CN115806581A (zh) * 2022-09-30 2023-03-17 河南中医药大学 一种从怀牛膝中提取姜状三七皂苷r1的方法及其在制备治疗肝损伤药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104774237B (zh) 2017-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kwon et al. Determination of astragalin and astragaloside content in Radix Astragali using high-performance liquid chromatography coupled with pulsed amperometric detection
CN101167788B (zh) 一种用于久病虚损,气阴不足的贞芪扶正中药制剂质控方法
CN105424820A (zh) 一种对11种人参皂苷类成分同时进行定性及定量的方法
CN105223282A (zh) 一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙有关物质的方法
CN101096378B (zh) 白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物单体的提取、分离方法
CN104774237A (zh) 一种姜状三七皂苷r1的制备方法
CN103235050A (zh) 三七总皂苷注射剂的质量控制方法
CN106198832A (zh) 一种强力枇杷露的生产质量控制方法
Huang et al. Systematic investigation on the distribution of four hidden toxic Aconitum alkaloids in commonly used Aconitum herbs and their acute toxicity
CN104974122B (zh) 一种源自烟草的香豆素化合物、其制备方法和用途
CN101810705B (zh) 地榆皂苷ⅰ的含量测定方法
CN101650303B (zh) 一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法
CN105628837A (zh) 一种土壤中硝磺草酮及其代谢物的检测方法
CN113433232A (zh) 一种测定人参属中药中人参皂苷含量的方法
Wu et al. Simultaneous determination of six saponins in Panacis Japonici Rhizoma using quantitative analysis of multi-components with single-marker method
CN102204999A (zh) 裸花紫珠制剂中木犀草素的含量测定方法
Li et al. Characterization and identification of chemical components in Neopicrorhiza scrphulariiflora roots by liquid chromatography-electrospray ionization quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry
Cho et al. Re-evaluation of physicochemical and NMR data of triol ginsenosides Re, Rf, Rg2, and 20-gluco-Rf from Panax ginseng roots
CN105699510A (zh) 一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法
CN109212082B (zh) 一种复方罗汉果清肺制剂的含量检测方法
CN110346463A (zh) 一种岗梅根药材hplc-elsd指纹图谱的建立方法
CN105806964A (zh) 刺五加甘草制剂的检测方法及其应用
CN107655994A (zh) 淫羊藿提取物中16种化学成分含量的测定方法
CN103424492B (zh) 一种对参麦注射液中麦冬皂苷d′含量的测定方法
Huo et al. Simultaneous and sensitive determination of eight coumarins in rat bile and urine after oral administration of Radix Angelicae dahuricae extract by liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant