CN104762297A - 一种核酸提取方法及核酸提取试剂盒 - Google Patents

一种核酸提取方法及核酸提取试剂盒 Download PDF

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范静彦
周荣华
李必松
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Abstract

本发明公开了一种核酸提取试剂盒，结构简单，易于操作。本发明提供的核酸提取试剂盒，所述核酸提取试剂盒包括管体、管盖和预装到管体中的螯合树脂，所述管盖与所述管体采用螺纹、枢轴或折页连接，结构简单，操作容易，提取的DNA用于PCR反应的效果好。本发明还提供一种核酸提取方法，简化了核酸提取的流程，有效减少核酸提取过程中核酸的损失。同时，由于采用悬浮液(包含甘油或PVP)稀释螯合树脂方法，螯合树脂的加入量准确且易控制，成本低，有利于推广应用。

Description

一种核酸提取方法及核酸提取试剂盒
技术领域
本发明生物化学领域，尤其涉及一种核酸提取方法及核酸提取试剂盒。
背景技术
近年来，核酸DNA提取方法研究的发展将趋于用非有机溶剂提取法替代传统的有机溶剂提取；实现一步提取法，省去繁琐的提取和多次离心过程，更适于批量操作；利用物理吸附法，操作简便、提取效率高、对基因组DNA没有损伤作用，适宜于自动化操作；提取过程自动化，把基因组DNA的提取与其他分子生物学技术(毛细细管电脉，PCR，基因芯片技术等)结合起来，实现从样品处理到基因分析过程的全部自动化操作。
核酸DNA提取常用方法主要：酚-氯仿抽提法、碱抽提法、CTAB抽提法、硅基质离心柱法、磁珠法和Chelex-100法。
当检材较少时或者基因分型只需要少量的DNA时，一般采用Chelex-100提取方法提取。
但是，Chelex-100提取方法中螯合树脂Chelex-100的配制和加入不易操作且难以控制，同时螯合树脂溶液长期储存会导致性能下降，不利于实际应用。
发明内容
本发明提供了一种核酸提取方法及核酸提取试剂盒，结构简单，易于操作。
另外，本发明一种核酸提取方法及核酸提取试剂盒简化了核酸提取的流程，有效减少核酸提取过程中核酸的损失。
同时，由于采用预装螯合树脂的方法，螯合树脂的加入量准确易控制，成本低，有利于推广应用。
本发明提供的核酸提取试剂盒包括管体、管盖和预装到管体中的螯合树脂，所述管盖与所述管体采用螺纹、枢轴或折页连接。
优选的，所述管体由圆柱体和圆锥体两部分构成，所述圆锥体的底部为弧形球面。
优选的，所述核酸提取试剂盒的容量为1-2ml。
优选的，所述核酸提取试剂盒还包括甘油或PVP，所述螯合树脂为聚苯乙烯二乙烯基苯和甘油或PVP的悬浊液，经干燥处理附着于管体底部。
优选的，所述螯合树脂的添加量为0.001-0.12g。
本发明还提供一种核酸提取方法，所述核酸提取方法使用前述核酸提取试剂盒提取核酸，包括：
将细胞样本加入到所述核酸提取试剂盒中，第一次离心；
除去第一上清液，加入裂解缓冲液；
加热使细胞膜破裂，蛋白质变性；
第二次离心； 
分离得到第二上清液。
优选的，所述第一次离心的速率为10000转/分-15000转/分，离心时间为3-10分钟。
优选的，所述裂解缓冲液的添加量为30-60μL。
优选的，所述第二次离心的速率为10000转/分-15000转/分，离心时间为1-5分钟。
优选的，所述裂解缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH为11-12，使用量为10-200ul。
从以上技术方案可以看出，本发明实施例具有以下优点：本发明核酸提取试剂盒包括管体、管盖和预装到管体中的螯合树脂，所述管盖与所述管体采用螺纹、枢轴或折页连接，结构简单，操作容易，提取的DNA用于PCR反应的效果好。另外，本发明一种核酸提取方法及核酸提取试剂盒简化了核酸提取的流程，有效减少核酸提取过程中核酸的损失。同时，由于采用悬浮液(包含甘油或PVP)稀释螯合树脂方法，螯合树脂的加入量准确易控制，成本低，有利于推广应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例核酸提取试剂盒与现有核酸提取试剂盒定量PCR扩增管家基因片段效果对比；
图2为本发明实施例核酸提取试剂盒10个样本提取核酸定量PCR扩增曲线图；
图3为现有核酸提取试剂盒10个样本提取核酸定量PCR扩增曲线图；
图4为本发明实施例核酸提取试剂盒10个样本提取核酸定量PCR熔解曲线图；
图5为现有核酸提取试剂盒10个样本提取核酸定量PCR熔解曲线图；
图6为Gapdh引物qPCR扩增灵敏度验证图；
图7为Gapdh引物标准曲线结果图；
图8为本发明实施例核酸提取试剂盒与现有核酸提取试剂盒提取核酸浓度效果对比。
具体实施方式
本发明提供了一种核酸提取试剂盒，结构简单，易于操作，能够快速简便地提取细胞中的核酸。
将螯合树脂直接加入到小管中，制成核酸提取试剂盒，直接加入细胞样本，离心，离心后去上清，加入配制好的pH确定的裂解缓冲液，混匀，加热使得细胞膜破裂，蛋白质变性，离心分离得到上清液。本发明实施例方法可以快速完成核酸的提取。本发明核酸提取试剂盒结构简单，易于操作，有效减少核酸提取过程中核酸的损失。
或者，将螯合树脂用悬浮液(包含甘油或PVP)稀释螯合树脂方法，加入到小管中，经干燥处理制成核酸提取试剂盒，加入细胞样本，离心，离心 后去上清，加入配制好的pH确定的裂解缓冲液，混匀，加热使得细胞膜破裂，蛋白质变性，离心分离得到上清液。本发明核酸提取方法可以快速完成核酸的提取，试剂盒结构简单，易于操作，提取的DNA用于PCR反应的效果好。同时，由于悬浮液(包含甘油或PVP)稀释螯合树脂方法，螯合树脂的加入量准确易控制，成本低，有利于推广应用。
如图1-8和表1-3所示，本发明核酸提取试剂盒与DNA纯化试剂盒比较，同样样本量提取核酸的量更高(提取DNA浓度比对比试剂盒高1倍，如表3及图8所示)，提取DNA用于PCR反应的效果更好，但本发明核酸提取试剂盒结构简单，生产成本为现有核酸提取试剂盒的25％，远低于现有DNA纯化试剂盒，有利于推广应用。
表1本发明核算提取试剂盒与现有核酸提取试剂盒对比
表2模板DNA统计表
表3浓度和260/180结果对比表
所属领域的技术人员可以清楚地了解到，为描述的方便和简洁，上述描述的装置的具体工作过程，可以参考前述方法实施例中的对应过程，在此不再赘述。在本申请所提供的几个实施例中，应该理解到，所揭露的装置可以通过其它的方式实现。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸试提取剂盒包括管体、管盖和预装到管体中的螯合树脂，所述管盖与所述管体采用螺纹、枢轴或折页连接。
2.根据权利要求1所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述管体由圆柱体和圆锥体两部分构成，所述圆锥体的底部为弧形球面。
3.根据权利要求1所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒的容量为1-2ml。
4.根据权利要求1所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸试提取剂盒还包括甘油或PVP，所述螯合树脂为聚苯乙烯二乙烯基苯和甘油或PVP的悬浊液，经干燥处理附着于所述管体底部。
5.根据权利要求1所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述螯合树脂的添加量为0.001-0.12g。
6.一种核酸提取方法，其特征在于，所述核酸提取方法使用权利要求1-5任一项所述的核酸提取试剂盒提取核酸，包括：
将细胞样本加入到所述核酸提取试剂盒中，第一次离心；
除去第一上清液，加入裂解缓冲液；
加热使细胞膜破裂，蛋白质变性；
第二次离心；
分离得到第二上清液。
7.根据权利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述第一次离心的速率为10000转/分-15000转/分，离心时间为3-10分钟。
8.根据权利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述裂解缓冲液的添加量为30-60μL。
9.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述第二次离心的速率为10000转/分-15000转/分，离心时间为1-5分钟。
10.根据权利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述裂解缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH为11-12，使用量为10-200ul。
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