CN104756872A - 一种辣木组织培养中的种子消毒方法 - Google Patents

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高敏霞
叶新福
方智振
王小安
韦晓霞
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Pomology Research Institute Fujian Academy of Agricultural Sciences
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Abstract

本发明属于组织培养领域，具体为一种辣木组织培养中的种子（预处理）消毒方法。该方法通过将种子的纸质羽翼以及褐色外壳去除，然后利用75%的酒精和0.1%的升汞进行消毒处理。本发明针对消毒方法较繁琐，耗时较长等问题，提供了一种辣木组织培养中的种子消毒方法。本发明所述方法与现有的辣木组织培养中的种子消毒方法相比，具有消毒时间短、污染率小、萌发率高的优点，保证了较高的出苗率。

Description

一种辣木组织培养中的种子消毒方法
技术领域
本发明属于组织培养领域，具体为一种辣木组织培养中的种子（预处理）消毒方法。
背景技术
辣木为辣木科辣木属植物，富含蛋白质、钙、铁、钾、Va、Vc等多种营养元素。辣木不仅可以食用，而且在医疗保健方面也有广泛应用。随着辣木功能的不断开发，辣木的种植规模也在不断扩大。
随着植物组织培养技术越来越成熟，现已被应用到多种植物中进行快速繁殖。在植物组织培养中，获得无菌苗是试验成功的第一步，而无菌苗一般是通过种子获得的，因此，种子的有效消毒方法显得尤为重要。
目前，在辣木组织培养中关于辣木种子的消毒方法已有报道（罗云霞 等，2007），但其消毒方法较繁琐，耗时较长，增加了对种子的毒害性。
发明内容
针对上述技术的不足，本发明提供了一种辣木组织培养中的种子消毒方法。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：种子消毒前，将种子的纸质羽翼以及褐色外壳去除，然后利用75%的酒精和0.1%的升汞进行消毒处理。
本方法包括如下步骤：
（1）    选择籽粒饱满的辣木种子，将纸质羽翼和褐色外壳去除；
（2）    用无菌水冲洗；
（3）    用75%的酒精消毒；
（4）    用0.1%的升汞消毒；
（5）    最后用无菌水冲洗完成消毒步骤。
步骤（2）中用无菌水冲洗1-2次。
步骤（3）中酒精消毒时间为30s。
步骤（4）中加入1-2滴吐温-20 。
步骤（4）中用0.1%的升汞消毒的时间为7-15min， 以10min为优。
步骤（5）中用无菌水冲洗5-6次。
在辣木组织培养中，现有的种子消毒方法，种子需经过流水冲洗、浸泡等步骤，而且消毒剂消毒处理时间较长；本发明中种子无需经过流水冲洗、浸泡等步骤，从而缩短了种子处理时间，同时在消毒剂消毒处理时消毒时间缩短，降低了消毒剂对种子的毒害作用。本发明所述方法与现有的辣木组织培养中的种子消毒方法相比，具有种子处理时间短、消毒时间短、污染率小、萌发率高的优点，保证了较高的出苗率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明，但本发明并不局限于此。本实施例均以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料。
应用实施例一
本实施例采用三种处理方式对种子进行预处理，并进行了0.1%的升汞消毒时间对辣木种子消毒效果的影响研究。
一、辣木种子预处理方法设计：                                               种子去除纸质羽翼；种子去除纸质羽翼和褐色外壳；未经处理的种子。
种子消毒方法：每个处理100粒种子，在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒10min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。
二、0.1%的升汞消毒时间对辣木种子消毒效果的影响
辣木种子消毒时间设计：0.1%的升汞消毒7min；0.1%的升汞消毒10min；0.1%的升汞消毒15min。
种子消毒方法：每个处理100粒种子，将去除纸质羽翼和褐色外壳的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。
三、辣木无菌苗培养
将消毒处理后的辣木种子，接种于MS培养基上，置于培养室中培养，培养温度（25±2）℃，光照强度1500-2000lx，光照时间12h/d。
培养3天后观察种子的消毒效果，培养15天时观察统计种子的污染率、发芽率。
结果与分析如下：
表1 种子预处理方法对辣木种子发芽及消毒效果的影响
由表1可知，处理2的发芽率为86%、污染率为0%，明显优于处理1、3，由此可知处理2的预处理方法对种子的消毒效果有积极作用，是实现高发芽率、低污染率较理想的方法。
表2 消毒时间对辣木种子发芽及消毒效果的影响
由表2可知，处理1、2、3都能达到较好的消毒效果，且处理2、3的污染率均为0%，但处理3的发芽率低于处理1、2。由此可知消毒时间的长短影响种子的发芽率，以处理2:（0.1%的升汞消毒10min）为佳。
应用实施例二
实施例1
以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料，将去除纸质羽翼的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理10min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。
实施例2
以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料，将去除纸质羽翼和褐色外壳的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理10min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。
实施例3
以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料，将未经处理的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理10min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。
实施例4
以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料，将去除纸质羽翼和褐色外壳的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理7min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。
实施例5
以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料，将去除纸质羽翼和褐色外壳的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理10min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。
实施例6
以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料，将去除纸质羽翼和褐色外壳的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理15min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。

Claims (7)

1.一种辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
（1）选择籽粒饱满的辣木种子，将纸质羽翼和褐色外壳去除；
（2）用无菌水冲洗；
（3）用75%的酒精消毒；
（4）用0.1%的升汞消毒；
（5）最后用无菌水冲洗完成消毒步骤。
2.根据权利要求1所述的辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：步骤（2）中用无菌水冲洗1-2次。
3.根据权利要求1所述的辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：步骤（3）中酒精消毒时间为30s。
4.根据权利要求1所述的辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：步骤（4）中加入1-2滴吐温-20 。
5.根据权利要求1所述的辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：步骤（4）中用0.1%的升汞消毒的时间为7-15min。
6.根据权利要求5所述的辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：步骤（4）中用0.1%的升汞消毒的时间为10min。
7.根据权利要求1所述的辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：步骤（5）中用无菌水冲洗5-6次。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105961197A (zh) * 2016-05-09 2016-09-28 华南农业大学 一种辣木高效再生方法
CN106718941A (zh) * 2017-02-15 2017-05-31 钦州市林业科学研究所 一种辣木再生体系的构建方法

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