CN104737920B - 一种苹果砧木m9的组培快速育苗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种苹果砧木M9的组培快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 获取无菌材料、(2) 苹果的初代培养、(3) 苹果的增殖培养、(4) 生根壮苗培养、(5) 驯化移栽。有益效果：本发明由于采用在M9培养基的基础上，通过调整大量元素的种类和浓度以及优化激素调控琼脂浓度等，为苹果组培苗继代增殖提供了均衡合理的营养需求，生根系数得到提高，有效的促进了节间伸长。

Description

一种苹果砧木M9的组培快速育苗方法
技术领域
本发明涉及一种苹果砧木M9的组培快速育苗方法。
背景技术
苹果是落叶乔木，叶子是椭圆形，有锯齿，花白色带有红晕。果实圆形，味道甜或略酸，是常见水果，具有丰富营养成分，有食疗、辅助治疗功能，是世界四大水果之一。苹果原产于欧洲、中亚、西亚和土耳其一带，于十九世纪传入中国。中国是世界最大的苹果生产国，在东北、华北、华东、西北和四川、云南等地均有栽培。苹果富含丰富的维生素营养，是世界四大水果之冠。
传统的苹果苗通常采用插插、嫁接、分株、压条等繁殖，这些方法都可能携带一种甚至多种病毒或类病毒,对苗木的生产及产品质量都会产生不良影。采用组织培养技术可以快速繁殖作物新品种，加快新品种的推广速度，同时植物组织培养培育的组培苗，遗传基因高度一致，生产稳定，苗木品质性能好，能为产业化生产提供优质的苗木。目前，苹果组培工厂化育苗的技术问题还没完全解决，采用MS 培养基苹果组培苗继代增殖培养时，常出现组培苗生长势弱、增殖系数低、节间伸长生长慢等问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种苹果砧木M9的组培快速育苗方法，解决组培阶段种苹果节间伸长生长慢、增殖系数低的问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种苹果砧木M9的组培快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1) 获取无菌材料：
于春季剪取苹果新萌发的小芽，用65-75％的乙醇浸泡10-25s清洗材料后，在纯净水中浸泡10-12分钟后于超净工作台上，再用吸水纸吸小芽体干表面水分；
(2) 苹果的初代培养：
取小芽基部，切成0.5-lcm 长的小段，接种到小芽诱导培养上，所述的小芽诱导培养基的成分为：MN+2.6mg/L 6-BA+0.45 mg/L 2,4-D +0.15 mg/L NAA+ 6g/L 琼脂，小芽接种于小芽诱导培养基15-20天后，进行继代增殖培养；
(3) 苹果的增殖培养：
将带有愈伤组织的芽接种于pH 值为5.5-6.3 的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，所述的增殖培养基的成分为硝酸钾0.36mg/L+磷酸二氢钾0.13mg/L+硫酸镁0.18mg/L+碘化钾0.25mg/L硫酸锌0.21mg/L+钼酸钠0.14mg/L+硫酸亚铁0.55mg/L+盐酸吡哆醇0.25mg/L+烟酸0.15mg/L+吲哚乙酸0.25mg/L +6-BA1.0-3.0mg/L + 琼脂4-6g/L，其中，先进行暗处理10天，再给予每日光照15-20h，增殖培养的培养温度为22-25℃；
(4) 生根壮苗培养：
在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于pH值为5.3-6.1 的生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基的成分为0.22mg/LIBA+NAA0.55-1.5mg/L+IBA2.0-6.0mg/L+ 蔗糖23g/L+ 琼脂5-6g/L，进行生根和壮苗培养；
(5) 驯化移栽：
当根长为1-3cm 时，进行驯化移栽，将培养瓶移至大棚内炼苗7-12天，洗去培养基，将根部浸泡5.5％高锰酸钾溶液进行消毒，移栽入穴盘中， 10天后除去薄膜，给予全光照，进行肥水管理。
有益效果：本发明由于采用在M9培养基的基础上，通过调整大量元素的种类和浓度以及优化激素调控琼脂浓度等，为苹果组培苗继代增殖提供了均衡合理的营养需求，生根系数得到提高，有效的促进了节间伸长。
具体实施方式
实施例：
一种苹果砧木M9的组培快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1) 获取无菌材料：
在春季剪取苹果新萌发的小芽，用75％的乙醇浸泡20-30s清洗材料后，在纯净水中浸泡15-20分钟后放于超净工作台上，再用吸水纸吸小芽体干表面水分；
(2) 苹果的初代培养：
取小芽基部，切成lcm 长的小段，接种至小芽诱导培养上，所述的小芽诱导培养基的成分为：MN+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D +0.2 mg/L NAA+ 30 g/L 白糖＋ 6g/L 琼脂粉，小芽接种于小芽诱导培养基19天后，进行继代增殖培养；
(3) 苹果的增殖培养：
将带有愈伤组织的芽接种于pH 值为5.8-6.2 的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，所述的增殖培养基的成分为0.3mg/L+磷酸二氢钾0.1mg/L+硫酸镁0.2mg/L+碘化钾0.2mg/L硫酸锌0.3mg/L+钼酸钠0.1mg/L+硫酸亚铁0.5mg/L+盐酸吡哆醇0.2mg/L+烟酸0.1mg/L+吲哚乙酸0.2mg/L +6-BA1.0-3.0mg/L+ 蔗糖30g/L+ 琼脂6g/L，其中，先进行暗处理1 周，再给予每日光照16h，增殖培养的培养温度为24-26℃；
(4) 生根壮苗培养：
在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于pH值为5.8-6.2 的生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基的成分为0.2mg/LIBA+NAA0.5-1.0mg/L+IBA2.0-6.0mg/L+ 蔗糖30g/L+ 琼脂6g/L，进行生根和壮苗培养；
(5) 驯化移栽：
当根长为2-4cm 时，进行驯化移栽，将培养瓶移至大棚内炼苗6-10 天，洗去培养基，将根部浸泡5％高锰酸钾溶液进行消毒，移栽入穴盘中， 1 周后除去薄膜，给予全光照，进行肥水管理。
由于采用在M9培养基的基础上，通过调整大量元素的种类和浓度与优化激素调控琼脂浓度等，为苹果组培苗继代增殖提供了均衡合理的营养需求，保证了其快速、高效、健壮生长，生根系数高，有效的促进了节间伸长，提高了增殖系数。
以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
本发明未涉及部分均与现有技术相同或可采用现有技术加以实现。

Claims (1)

1.一种苹果砧木M9的组培快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1) 获取无菌材料：
选择在春季剪取苹果新萌发的小芽，用65-75％的乙醇浸泡10-25s清洗材料后，在纯净水中浸泡10-12分钟后于超净工作台上，再用吸水纸吸干小芽体表面水分；
(2) 苹果的初代培养：
取小芽基部，切成0.5-lcm 长的小段，接种到小芽诱导培养基上，所述的小芽诱导培养基的成分为：MN+2.6mg/L 6-BA+0.45 mg/L 2,4-D +0.15 mg/L NAA+ 6g/L 琼脂，小芽接种于小芽诱导培养基15-20天后，进行继代增殖培养；
(3) 苹果的增殖培养：
将带有愈伤组织的芽接种于pH 值为5.5-6.3 的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，所述的增殖培养基的成分为硝酸钾0.36mg/L+磷酸二氢钾0.13mg/L+硫酸镁0.18mg/L+碘化钾0.25mg/L硫酸锌0.21mg/L+钼酸钠0.14mg/L+硫酸亚铁0.55mg/L+盐酸吡哆醇0.25mg/L+烟酸0.15mg/L+吲哚乙酸0.25mg/L +6-BA1.0-3.0mg/L + 琼脂4-6g/L，其中，先进行暗处理10天，再给予每日光照15-20h，增殖培养的培养温度为22-25℃；
(4) 生根壮苗培养：
在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于pH 值为5.3-6.1 的生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基的成分为NAA0.55-1.5mg/L+IBA2.22-6.22mg/L+ 蔗糖23g/L+ 琼脂5-6g/L，进行生根和壮苗培养；
(5) 驯化移栽：
当根长为1-3cm 时，进行驯化移栽，将培养瓶移至大棚内炼苗7-12天，洗去培养基，将根部浸泡5.5％高锰酸钾溶液进行消毒，移栽入穴盘中， 10天后除去薄膜，给予全光照，进行肥水管理。
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