CN104737915A - 一种以叶片为外植体的红马银花组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种以叶片为外植体的红马银花组织培养方法。该方法包括外植体的采集和预处理、灭菌和接种、愈伤组织诱导培养、芽诱导培养、继代培养、炼苗和移栽。本发明方法能够促使红马银花愈伤组织顺利生根，其组培苗生根率达到80％以上，根长苗壮，移栽成活率达到90％以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种以叶片为外植体的红马银花组织培养方法。
背景技术
红马银花(Rhododendron vialii Delavay et Franch.)属于杜鹃花科，杜鹃花属的马银花亚属，为常绿灌木。红马银花由于种子较少，有性繁殖出苗率极低，组培时生根困难，种苗难以满足市场需求。
说明书
本发明提供一种以叶片为外植体的红马银花组织培养方法，该方法通过改良组织培养方法，使红马银花组培丛生芽能正常生根，从而达到快速繁育种苗的目的。
本发明所述的一种以叶片为外植体的红马银花组织培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体的采集和预处理
采集无病虫害的野生红马银花带叶茎段，清水冲洗，在茎段上切取叶片；
(2)灭菌和接种
将清洗干净的红马银花叶片在超净工作台上按下列顺序进行灭菌：质量分数为0.1％HgCl2溶液中消毒5min，无菌水清洗4-5次，质量分数为2％NaClO溶液中灭菌5min，无菌水清洗4-5次，无菌滤纸吸干表面水分，然后将叶片切成0.8-1.0cm长的片段，接种在基础培养基上，所述基础培养基为：WPM+蔗糖20-30g/L+琼脂5-8g/L，pH 5.3-5.5；
(3)愈伤组织诱导培养
将步骤(2)接种的叶片转接到叶片愈伤组织培养基中，在温度25℃±2℃，
暗培养至有愈伤组织出现，所述叶片愈伤组织培养基：WPM+6-BA 1.8-2.2mg/L+2,4-D 2.8-3.2mg/L，pH 5.3-5.5；
(4)芽诱导培养
将步骤(3)形成的愈伤组织接种到芽诱导和继代培养基中，在光照强度
1400-1800Lx、光照时间12h/d、温度25±2℃的条件下培养诱导形成丛生芽，所述芽诱导和继代培养基为：WPM+ZT 0.8-1.2mg/L+NAA 0.05mg/L+AC 0.5g/L，pH 5.3-5.5；
(5)继代培养
将步骤(4)诱导形成的丛生芽每隔60-80d按步骤(4)所述的同样方法进行继代培养；
(6)生根培养
将步骤(5)继代培养的丛生芽分株转接到生根培养基中，在25±2℃，光
强1600-2200Lx，光照时间12-14h/d条件下培养至基部长出3-6条根系即成红马银花组培苗，所述生根培养基为：WPM+IBA 0.8-1.2mg/L+NAA0.4-0.6mg/L+AC 1g/L，pH 5.3-5.5；
(7)组培苗的炼苗和移栽
①炼苗：将根长为6-10cm,根数量≥6根的组培苗带瓶移至大棚内，放置2-4天后打开瓶盖，在24-28℃，空气相对湿度75-90％，光强6500-8000Lx条件下炼苗4-6天；②移栽与培养：将炼苗后的组培苗洗净根部培养基，用质量分数为0.1-0.15％的多菌灵百菌清溶液浸泡根部40-80秒后，移栽至沙壤土∶腐殖土按体积6:4的混合基质中，用塑料薄膜覆盖保温保湿，温度保持在28-30℃，空气相对湿度85-95％，于6000Lx条件下培育8-10d，即成红马银花种苗。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提出了新的技术方案，能够促使红马银花愈伤组织顺利生根，生产出马银花组培苗，从而达到了快速繁育种苗的目的。本发明培育组培苗生根率达到80％，根长苗壮，所培育的组培苗移栽成活率达到90％以上，可在园林绿化与组培企业中推广应用。
具体实施方式
以下实施例无特殊说明的，为常规方法。
实施例1
本发明所提供的一种以叶片为外植体的红马银花组织培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体的采集和预处理
采集无病虫害的野生红马银花带叶茎段，清水冲洗，在茎段上切取叶片；
(2)灭菌和接种
将清洗干净的红马银花叶片在超净工作台上按下列顺序进行灭菌：质量分数为0.1％HgCl2溶液中消毒5min，无菌水清洗4-5次，质量分数为2％NaClO溶液中灭菌5min，无菌水清洗4-5次，无菌滤纸吸干表面水分，然后将叶片切成0.8-1.0cm长的片段，接种在基础培养基上，所述基础培养基为：WPM+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，pH 5.3；
(3)愈伤组织诱导培养
将步骤(2)接种的叶片转接到叶片愈伤组织培养基中，在温度25℃，暗培养至有愈伤组织出现，所述叶片愈伤组织培养基为：WPM+6-BA 1.8mg/L+2，4-D2.8mg/L，pH 5.3；
(4)芽诱导培养
将步骤(3)形成的愈伤组织接种到芽诱导和继代培养基中，在光照强度1400Lx、光照时间12h/d、温度25℃的条件下培养诱导形成丛生芽，所述芽诱导和继代培养基为：WPM+ZT 0.8mg/L+NAA 0.05mg/L+AC(活性炭)0.5g/L，pH 5.3；
(5)继代培养
将步骤(4)诱导形成的丛生芽每隔60d按步骤(4)所述的芽诱导培养方法(即采用与步骤(4)芽诱导培养所述的芽诱导和继代培养基及其在光照强度1400Lx、光照时间12h/d、温度25℃的条件下继代培养)进行一次继代培养；
(6)生根培养
将步骤(5)继代培养的丛生芽分株转接到生根培养基中，在25±2℃，光强1600Lx，光照时间12h/d条件下培养至基部长出3-6条根系即成红马银花组培苗，所述生根培养基为：WPM+IBA 0.8mg/L+NAA 0.4mg/L+AC(活性炭)1g/L，pH 5.3；
(7)组培苗的炼苗和移栽
①炼苗：将根长为6-10cm,根数量≥6根的组培苗带瓶移至大棚内，放置3天后打开瓶盖，在28℃，空气相对湿度90％，光强7000Lx条件下炼苗4天；②移栽与培养：将炼苗后的组培苗洗净根部培养基，用质量分数为0.15％的多菌灵百菌清溶液浸泡根部40秒后，移栽至沙壤土∶腐殖土按体积6:4的混合基质中，用塑料薄膜覆盖保温保湿，温度保持在30℃，空气相对湿度95％，于6000Lx条件下培育8d即成红马银花种苗。
上述培养生根率达到80％，本发明培育的组培苗根长苗壮，所培育出的组培苗移栽成活率达到90％以上。
Claims (1)
1.一种以叶片为外植体的红马银花组织培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体的采集和预处理
采集无病虫害的野生红马银花带叶茎段，清水冲洗，在茎段上切取叶片；
(2)灭菌和接种
将清洗干净的红马银花叶片在超净工作台上按下列顺序进行灭菌：质量分数为0.1％HgCl2溶液中消毒5min，无菌水清洗4-5次，质量分数为2％NaClO溶液中灭菌5min，无菌水清洗4-5次，无菌滤纸吸干表面水分，然后将叶片切成0.8-1.0cm长的片段，接种在基础培养基上，所述基础培养基为：WPM+蔗糖20-30g/L+琼脂5-8g/L，pH 5.3-5.5；
(3)愈伤组织诱导培养
将步骤(2)接种的叶片转接到叶片愈伤组织培养基中，在温度25℃±2℃，暗培养至有愈伤组织出现，所述叶片愈伤组织培养基：WPM+6-BA 1.8-2.2mg/L+2,4-D 2.8-3.2mg/L，pH 5.3-5.5；
(4)芽诱导培养
将步骤(3)形成的愈伤组织接种到芽诱导和继代培养基中，在光照强度1400-1800Lx、光照时间12h/d、温度25±2℃的条件下培养诱导形成丛生芽，所述芽诱导和继代培养基为：WPM+ZT 0.8-1.2mg/L+NAA 0.05mg/L+AC 0.5g/L，pH 5.3-5.5；
(5)继代培养
将步骤(4)诱导形成的丛生芽每隔60-80d按步骤(4)所述的方法进行继代培养；
(6)生根培养
将步骤(5)继代培养的丛生芽分株转接到生根培养基中，在25±2℃，光强1600-2200Lx，光照时间12-14h/d条件下培养至基部长出3-6条根系即成红马银花组培苗，所述生根培养基为：WPM+IBA 0.8-1.2mg/L+NAA 0.4-0.6mg/L+AC1g/L，pH 5.3-5.5；
(7)组培苗的炼苗和移栽
①炼苗：将根长为6-10cm,根数量≥6根的组培苗带瓶移至大棚内，放置2-4天后打开瓶盖，在24-28℃，空气相对湿度75-90％，光强6500-8000Lx条件下炼苗4-6天；②移栽与培养：将炼苗后的组培苗洗净根部培养基，用质量分数为0.1-0.15％的多菌灵百菌清溶液浸泡根部40-80秒后，移栽至沙壤土∶腐殖土按体积6:4的混合基质中，用塑料薄膜覆盖保温保湿，温度保持在28-30℃，空气相对湿度85-95％，于6000Lx条件下培育8-10d即成红马银花种苗。
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| CN (1) | CN104737915B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105830917A (zh) * | 2016-03-24 | 2016-08-10 | 江苏省农业科学院 | 羊踯躅叶片再生植株的方法 |
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2015
- 2015-04-20 CN CN201510184811.6A patent/CN104737915B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (5)
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105830917A (zh) * | 2016-03-24 | 2016-08-10 | 江苏省农业科学院 | 羊踯躅叶片再生植株的方法 |
| CN105830917B (zh) * | 2016-03-24 | 2017-11-17 | 江苏省农业科学院 | 羊踯躅叶片再生植株的方法 |
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