CN104726341A - 一种黑僵菌的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种黑僵菌的培养方法，其包括如下步骤：（1）培养容器灭菌，待用；香蕉去皮,高压灭菌后冷却，加到培养容器上待用；（2）接种：将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上；（3）培养：培养温度控制在20～30℃，培养室相对湿度控制在95%以上,培养至菌丝体满布培养基表面；（4）获取：待培养基表面菌丝全面复盖变黑，培养室的相对湿度缓慢降低,至培养基里外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。采用本发明的方法，培养周期可以缩短至5天，而产品的含孢子量可达到1000亿/g，比现有技术提高10倍以上。本发明可采用次品香蕉，其价格低廉，成本低。

Description

一种黑僵菌的培养方法
技术领域
本发明涉及微生物培养领域，具体的，涉及一种黑僵菌的培养方法。
背景技术
黑僵菌(Metarhizium anisopliae)为一种可以杀死昆虫的真菌，其应用范围有鳞翅目昆虫：斜纹夜蛾(黑肚虫)、甜菜夜蛾(管仔虫)、小菜蛾(吊丝虫)、玉米穗虫(青虫)等。鞘翅目昆虫：金龟子(鸡母虫)、叩头虫(金针虫)等。直翅目昆虫：蝗虫等。黑僵菌分生孢子被害虫摄食后，沿肠道进入中肠，在中肠中释放出毒素，使中肠细胞内的线粒体和内质网结构改变，细胞核萎缩而死亡。受黑僵菌感染死亡的幼虫之后体表满布分生孢子，借由分生孢子的传播于田间行成重复有效的感染源。
现有的黑僵菌培养方法为谷壳、麦麸等固体培养基进行培养，孢子液接种，7天后开始收孢子，其孢子量一般在100亿/克。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的黑僵菌的培养方法。
本发明提供的技术方案如下：
一种黑僵菌的培养方法，其特征在于：采用香蕉去皮之后作为培养基，将黑僵菌孢子或菌体接种到培养基上进行培养。
较佳地，前述的一种黑僵菌的培养方法，包括如下步骤：
（1）培养容器灭菌，待用；香蕉去皮,高压灭菌后冷却，加到培养容器上待用；
（2）接种：将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上；
（3）培养：培养温度控制在20～30℃，培养室相对湿度控制在95%以上,培养至菌丝体满布培养基表面；
（4）获取：待培养基表面菌丝全面复盖变黑，培养室的相对湿度缓慢降低,至培养基里外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。
较佳地，步骤（1）的所述的培养容器为开放式的培养容器，例如可以采用敞口容器，如盘状、碗状、长方体等各种形状。
较佳地，步骤（1）的香蕉培养基在培养容器上的厚度为1-5cm。更佳地为3-4cm。
较佳地，步骤（2）的接种比例为，按重量比，接种的孢子液体与培养基之间的液固比为0.5-5：10。
较佳地，步骤（3）培养室温度控制在20～24℃；培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,24～48h内控制在100%,可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度，2d后停止喷水。
较佳地，步骤（4）中，培养室的温度提高到25℃-26℃,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至第5d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
采用本发明的方法，培养周期可以缩短至5天，而产品的含孢子量可达到1000亿/g，比现有技术提高10倍以上。本发明可采用次品香蕉，其价格低廉，成本低。
具体实施方式
实施例1
香蕉去皮作为固体培养基。固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2,保压60min,冷却后待用常压灭菌，利用蒸气消毒柜消毒，100℃保温2h,冷却待用。
洗干净培养盘，所述的培养盘为长方形,规格为50cm*75cm*10cm，然后放于常压灭菌柜灭菌30min,冷却待用。拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦洗,培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。培养支架用4脚式长方体钢架结构,上、下间距20cm,支架先用新洁尔灭擦洗,然后与培养室一起进行熏蒸灭菌。
采用拌种机进行接种,黑僵菌孢子接种液（含孢子105-106个/ml）与培养基的液固比为0.5:1.5,固体培养基厚度为3-4cm。
培养室温度控制在20～24℃,特别在第24～64h降低室温,以控制室温不超过30℃。培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,24～48h内控制在100%,可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度,2d后停止喷水,这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。
揭盖、培养3d后,待培养基表面菌丝全面复盖变黑,可揭去培养盘表面的簸箕,两盘对合,中间留些间隙,培养室的温度可提高到25℃,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至第5d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
5天开始收孢，收孢后，产品含孢量超过1000亿/克。
实施例2
香蕉去皮作为固体培养基。固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2,保压60min,冷却后待用常压灭菌，利用蒸气消毒柜消毒，100℃保温2h,冷却待用。
洗干净培养盘，所述的培养盘为长方形,规格为50cm*75cm*10cm，然后放于常压灭菌柜灭菌30min,冷却待用。拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦洗,培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。培养支架用4脚式长方体钢架结构,上、下间距20cm,支架先用新洁尔灭擦洗,然后与培养室一起进行熏蒸灭菌。
采用拌种机进行接种,黑僵菌孢子接种液（含孢子105-106个/ml）与培养基的液固比为2:10,固体培养基厚度为2-3cm。
培养室温度控制在20～24℃。培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,24～48h内控制在100%,可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度,2d后停止喷水,这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。
揭盖、培养3d后,待培养基表面菌丝全面复盖变黑,可揭去培养盘表面的簸箕,两盘对合,中间留些间隙,培养室的温度可提高到25℃,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至第5d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
5天开始收孢，收孢后，产品含孢量超过1000亿/克。
实施例3
香蕉去皮作为固体培养基。固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2,保压60min,冷却后待用常压灭菌，利用蒸气消毒柜消毒，100℃保温2h,冷却待用。
洗干净培养盘,所述的培养盘为长方形，规格为50cm*75cm*10cm，然后放于常压灭菌柜灭菌30min,冷却待用。拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦洗,培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。培养支架用4脚式长方体钢架结构,上、下间距20cm,支架先用新洁尔灭擦洗,然后与培养室一起进行熏蒸灭菌。
采用拌种机进行接种,黑僵菌孢子接种液（含孢子105-106个/ml）与培养基的液固比为1:10,固体培养基厚度为5cm。
培养室温度控制在20～24℃,特别在第24～64h降低室温,以控制室温不超过30℃。培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,24～48h内控制在100%,可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度,2d后停止喷水,这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。
揭盖、培养3d后,待培养基表面菌丝全面复盖变黑,可揭去培养盘表面的簸箕,两盘对合,中间留些间隙,培养室的温度可提高到25℃,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至第5d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
5天开始收孢，收孢后，产品含孢量超过1000亿/克。
上述仅为本发明的具体实施例，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。

Claims (7)

1.一种黑僵菌的培养方法，其特征在于：采用香蕉作为培养基，将黑僵菌孢子或菌体接种到培养基上进行培养。
2.如权利要求1所述的一种黑僵菌的培养方法，包括如下步骤：
（1）培养容器灭菌，待用；香蕉去果皮,高压灭菌后冷却，加到培养容器上待用；
（2）接种：将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上；
（3）培养：培养温度控制在20～30℃，培养室相对湿度控制在95%以上,培养至菌丝体满布培养基表面；
（4）获取：待培养基表面菌丝全面复盖变黑，培养室的相对湿度缓慢降低,至培养基里外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。
3.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于：步骤（1）的所述的培养容器为开放式的培养容器。
4.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于：步骤（1）的香蕉培养基在培养容器上的厚度为1-5cm。
5.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于：步骤（2）的接种比例为，按重量比，液固比为0.5-5：10。
6.如权利要求1所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于：步骤（3）培养室温度控制在20～24℃；培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,24～48h内控制在100%,可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度，2d后停止喷水。
7.如权利要求6所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于：步骤（4）中，培养室的温度提高到25℃-26℃,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至第5d,培养基里外都长满乳黄色的孢子时可进行干燥处理。
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