CN104719151B - 一种傣百解的快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种傣百解的快速繁殖方法，通过将干净、无菌、消毒后的傣百解种子接种于诱导培养基上，诱导出苗，把在起始培养阶段所形成的幼苗切割后接种于增殖培养基上，进行增殖培养；经增殖培养长成的无菌苗切成单株，接种于生根培养基上，进行生根培养；经生根培养长出完整植株后，炼苗5天，洗掉根部培养基后将移栽至苗床；其中，各各阶段培养基进行优化选择。本发明增殖培养的增殖系数达到4以上，且培育时间短，2个月即可移栽，为傣百解的迅速繁殖及大规模育苗垫定基础。

Description

一种傣百解的快速繁殖方法
技术领域
本发明属于植物繁殖技术领域，尤其涉及一种傣百解的快速繁殖方法。
背景技术
傣百解，傣族传统用药，为傣族民间和临床最常用的一种解药，傣语称为“雅解先打”，意为解百毒的药。其药用部位为根，性味苦、凉，入火、土、风塔；功效清火解毒，消肿止痛，解毒；用于咽喉肿痛，口舌生疮，疔疡斑疹，肺热咳嗽，胃脘痛，尿痛，食物、药物中毒引起的各种不良反应。傣百解的基原植物，《云南省中药材标准》收录为萝摩科植物苦绳Dregeasinensis Hemsl.，后经更正为萝藦科牛奶菜属植物通光散Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.《Flora ofChina》。
因傣百解临床效果好，使用范围广，需求量日益增加，但由于当地老百姓无节制的滥采乱伐，外加采收方式不当，导致基原植物野生资源日益匮乏，供需矛盾不断恶化，严重影响到傣百解药材的深入研究及进一步应用。因此，一种傣百解的人工快速繁殖培育技术亟待开发。
发明内容
本发明的目的在于提供一种傣百解的快速繁殖方法，旨在解决傣百解繁殖技术欠缺的问题。
本发明是这样实现的，一种傣百解的快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)将干净、无菌、消毒后的傣百解种子接种于诱导培养基上，在25～28℃培养温度、1500lx光照强度、12h/d光照周期条件下，诱导出苗；
(2)把在起始培养阶段所形成的幼苗切割后接种于增殖培养基上，在25～28℃培养温度、1500lx光照强度、12h/d光照周期条件下，进行增殖培养；
(3)经增殖培养长成的无菌苗切成单株，接种于生根培养基上，在25～28℃培养温度、1500lx光照强度、12h/d光照周期条件下，进行生根培养；
(4)经生根培养长出完整植株后，炼苗5天，洗掉根部培养基后将移栽至苗床。
优选地，在步骤(1)中，所述傣百解种子的干净、无菌、消毒处理包括以下步骤：种子经洗洁精充分洗涤，后用自来水冲洗干净，无菌条件下用质量浓度为75％酒精消毒30s，再在质量浓度为0.1％的HgCl2溶液中浸泡10min，后用无菌水冲洗4～5次。
优选地，在步骤(1)中，所述诱导培养基通过将MS基本成分、2.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、6g/L的琼脂粉、1g/L的活性炭混合后，在121℃高压灭菌20min得到。
优选地，在步骤(2)中，所述增殖培养基通过将MS基本成分、5.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、6g/L的琼脂粉、1g/L的活性炭混合后，在121℃高压灭菌20min得到。
优选地，在步骤(3)中，所述生根培养基为通过将MS基本成分、1.0mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、6g/L的琼脂粉、1g/L的活性炭混合后，在121℃高压灭菌20min得到。
相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：本发明增殖培养的增殖系数达到4以上，且培育时间短，2个月即可移栽，为傣百解(通光散)的迅速繁殖及大规模育苗奠定基础。
附图说明
图1是本发明实施例中不同诱导培养基诱导种子发芽率实验数据图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
1、材料和方法
1.1材料
通光散种子购自中国医学科学院药用植物研究所云南分所。
1.2方法
1.2.1培养基和培养条件。
①培养基成分：实验所用培养基配方见表1。
②培养条件：培养基均附加蔗糖30g/L，琼脂粉6g/L，活性炭1g/L，121℃高压灭菌20min。培养温度25～28℃，光照强度1500lx，光照周期12h/d。
1.2.2外植体处理及诱导培养
种子经洗洁精充分洗涤，后用自来水冲洗干净，无菌条件下用75％酒精消毒30s，再在0.1％的HgCl2溶液中浸泡10min，后用无菌水冲洗4～5次。将消毒后的材料，在超净工作台上接种于诱导培养基上培养，诱导出苗。诱导培养基为表1中的1～6#培养基，每瓶接2粒种子，每个处理接20瓶。
表1培养基配方
1.2.3增殖培养
把在起始培养阶段所形成的幼苗切割后接种于表1中的6～10#培养基，以增殖系数及后期生长情况为评估指标，筛选最优增殖培养基。
1.2.4生根培养
经增殖培养长成的无菌苗切成单株，接种于表1中的11～13#培养基，比较各培养基的生根情况。
1.2.5移栽
经生根培养长出完整植株后，打开培养基瓶盖炼苗5天，用自来水冲洗掉根部培养基后将其移栽至苗床，移栽后放置于阴凉通风处。
2结果与分析
2.1诱导培养基的筛选
外植体接种3天，可观察到4#、6#培养基已有个别新芽出现，随后各培养基的诱导出苗情况不同，具体情况如图1所示。由图1可知，通光散种子在诱导培养基中生长速度较快，仅诱导3天，即有个别种子发芽出苗，且即使在未加任何生长素和激素的CK培养基中亦有诱导苗发出；在诱导培养10～15天期间，各诱导培养基的发芽率处于高潮阶段，在第15天，6#培养基的诱导率已达到100％；除CK培养基外，其余培养基均在诱导培养23天后，发芽率达到100％。综合考虑，6#培养基因其生长速度较快，成为通光散组织培养的最佳诱导培养基。
2.2增殖培养基的筛选
各增殖培养基对通光散诱导苗的增殖情况如表2所示，比较各培养基的增殖系数及后期生长情况，7#培养基为最佳增殖培养基。
表2各增殖培养基对初生苗的增殖情况
2.3生根培养与炼苗
在3个生根培养基中，生根情况及后期(1个月后)生长情况最佳的为13#培养基，根数多，根系良好，移栽成活率高。
将炼苗后的小苗从培养基中取出，用自来水轻轻洗去根部培养基，置于1000倍多菌灵溶液中浸泡3～5min，移栽至腐殖土中，15天后观察，移栽成活率达90％以上。
3、结论与讨论
该实验以通光散M.tenacissima(Roxb.)Wight etArn.的种子为外植体，通过13种不同配比的培养基筛选最佳诱导培养基、增殖培养基及生根培养基。通过比较，发现通光散为组培易发芽品种，即使在未加任何激素的培养基中也有较好的发芽率，但后期的生长就需要筛选适宜的培养基。通过以上实验，筛选出通光散最佳的诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，增殖培养基为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L，生根培养基为MS+NAA 1.0mg/L。通过以上实验，筛选出最优培养基，增殖培养的增殖系数达到4以上，且培育时间短，2个月即可移栽，为其迅速繁殖及大规模育苗提供技术支撑。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种傣百解的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干净、无菌、消毒后的傣百解种子接种于诱导培养基上，在25～28℃培养温度、1500lx光照强度、12h/d光照周期条件下，诱导出苗，所述诱导培养基通过将MS基本成分、2.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、6g/L的琼脂粉、1g/L的活性炭混合后，在121℃高压灭菌20min得到；
(2)把在起始培养阶段所形成的幼苗切割后接种于增殖培养基上，在25～28℃培养温度、1500lx光照强度、12h/d光照周期条件下，进行增殖培养，所述增殖培养基通过将MS基本成分、5.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、6g/L的琼脂粉、1g/L的活性炭混合后，在121℃高压灭菌20min得到；
(3)经增殖培养长成的无菌苗切成单株，接种于生根培养基上，在25～28℃培养温度、1500lx光照强度、12h/d光照周期条件下，进行生根培养，所述生根培养基为通过将MS基本成分、1.0mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、6g/L的琼脂粉、1g/L的活性炭混合后，在121℃高压灭菌20min得到；
(4)经生根培养长出完整植株后，炼苗5天，洗掉根部培养基后将移栽至苗床。
2.如权利要求1所述的傣百解的快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述傣百解种子的干净、无菌、消毒处理包括以下步骤：种子经洗洁精充分洗涤，后用自来水冲洗干净，无菌条件下用质量浓度为75％酒精消毒30s，再在质量浓度为0.1％的HgCl2溶液中浸泡10min，后用无菌水冲洗4～5次。
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