CN104688795A - 一种由淫羊藿制备总黄酮的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种由淫羊藿制备总黄酮的方法，该方法包括以下步骤：a.首先将淫羊藿干叶通过乙醇溶液进行提取，得到提取液；b.将提取液减压浓缩；c.将步骤b得到的浓缩液用大孔树脂柱吸附，接着依次用水和乙醇洗脱所述的大孔树脂柱，收集最后一次乙醇洗脱液；d.将步骤c得到的洗脱液干燥，得到所述的总黄酮。通过本发明方法得到的总黄酮中淫羊藿苷相对于原始原料中的淫羊藿苷，损失率保持在20％以内，朝藿定C的损失率保持在20％。
Description
技术领域
本发明涉及一种由淫羊藿制备总黄酮的方法，属于医药领域。
背景技术
淫羊藿(Epimedii Folium)为小檗科(Berbridaceae)淫羊藿属(Epimedium)植物，主要包括心叶淫羊藿(Epimedium brevicornu Maxim.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimediumpubescent Maxim.)和朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)。淫羊藿是中国常用中药，具有滋阴补阳，壮阳强身的药用价值。淫羊藿主要含有淫羊藿总黄酮和淫羊藿多糖两大类成分。现有的研究结果表明,淫羊藿总黄酮主要包括淫羊藿苷、宝藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、大花淫羊藿苷C和大花淫羊藿苷B等。现代药理研究表明，淫羊藿总黄酮在骨质疏松、补肾壮阳以及免疫调节等方面都具有药用价值。
在申请号为03129242.9的专利申请中公开了淫羊藿素具有预防和治疗肿瘤的作用。其中淫羊藿总黄酮中的淫羊藿苷和朝藿定C均可转化为淫羊藿素。
因此，需要研究一种从淫羊藿中提取总黄酮的方法，其中经过提取得到的总黄酮中的淫羊藿苷和朝藿定C均有较高含量。
发明内容
本发明一方面提供了一种由淫羊藿制备总黄酮的方法，通过该方法，有效地保证了总黄酮中的淫羊藿苷和朝藿定C的收率及质量。
本发明一方面提供了一种由淫羊藿制备总黄酮的方法，该方法包括以下步骤：
a.首先将淫羊藿干叶通过乙醇溶液提取，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用大孔树脂柱吸附，接着依次用水和乙醇洗脱所述的大孔树脂柱，收集最后一次乙醇洗脱液；
c.将步骤b得到的洗脱液干燥，得到所述的总黄酮。
优选地，在所述的步骤a中，乙醇溶液的体积浓度为20-90％，乙醇溶液为淫羊藿干叶重量的10-14倍，共提取2-4次，每次回流1-1.5小时。
优选地，在所述的步骤a和b之间还包括步骤d，将步骤a得到的提取液浓缩。
优选地，浓缩温度为40-100℃，浓缩液密度为1.0-1.2g/ml。
优选地，在所述的步骤c中，将步骤d得到的提取液以0.5-1.5倍柱体积/小时的流速通过大孔树脂柱吸附。
优选地，在所述的步骤b中，首先用水洗脱大孔树脂柱，接着用乙醇洗脱大孔树脂柱两次，收集第二次乙醇洗脱液。
优选地，在所述的步骤b中，首先用6-10倍柱床体积的蒸馏水洗脱大孔树脂柱，蒸馏水洗脱液的流速为1.0-1.5倍柱体积/小时。
优选地，在所述的步骤b中，第一次洗脱大孔树脂柱乙醇体积浓度为20％-40％，乙醇体积为3-5倍柱床体积，乙醇洗脱液的流速为1.0-1.5倍柱体积/小时。
优选地，在所述的步骤b中，第二次洗脱大孔树脂柱的乙醇的体积浓度为60％-80％，乙醇体积为4-7倍柱床体积，乙醇洗脱液的流速为1.0-1.5倍柱体积/小时。
优选地，所述的大孔树脂柱为HPD-300型大孔树脂柱。
优选地，在所述的步骤c中，将洗脱液回收乙醇，浓缩至稠膏，喷雾干燥，得到所述的总黄酮。
本发明的有益效果在于：通过本发明的方法，有效地保证了淫羊藿总黄酮中淫羊藿苷和朝藿定C的含量。通过本发明的方法，得到总黄酮中淫羊藿苷相对于原始原料中的淫羊藿苷，损失率保持在20％以内，朝藿定C的损失率保持在20％以内。
附图说明
图1表示本发明总黄酮的制备流程。
图2上半图表示淫羊藿干叶中总黄酮的高效液相色谱图。
图2下半图表示经过实施例1方法得到总黄酮的高效液相色谱图。
具体实施方式
除非另外说明，本文中术语的“总黄酮”指的是通过乙醇水溶剂提取淫羊藿，再进行纯化干燥得到的提取物，提取物中含有包括朝藿定C以及淫羊藿苷在内的多种黄酮类化合物。
除非另外说明，本文中的术语“柱床体积”指的是大孔树脂柱内填充物的总体积。
除非另外说明，本文中的术语“提取转移率”指的是通过本发明提取纯化方法，获得的总黄酮中的目标成分相对于该成分在原料中的比例。
除非另外说明，本文中的HPD-300型大孔树脂购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司。
实施例1
1.提取
称取淫羊藿干叶145g，粉碎，过筛至1目，第一次以干叶14倍重量的乙醇溶剂回流提取1小时，其中乙醇溶剂的体积浓度为40％，过滤，收集滤渣。
向滤渣中加入其10倍重量的40％体积浓度的乙醇溶剂回流提取1小时，合并两次提取溶液，60℃减压浓缩至相对密度为1.035g/ml(T＝30℃检测)，过滤，收集滤液进行纯化。
2.纯化
将滤液加入HPD-300型大孔树脂柱(内径40mm，长300mm)，并调节上样流速为1.0倍柱体积/小时。上样完成后，静置2小时。然后用8倍于柱体积的蒸馏水，以1.2倍柱体积/小时的流速洗涤柱床。再用3倍于柱床体积20％体积浓度的乙醇溶液，以1.2倍柱体积/小时的流速洗涤柱床。最后用4倍于柱床体积70％体积浓度乙醇溶剂洗涤柱床，收集洗脱液。接着进行浓缩、干燥。
3.干燥
将滤液控温60℃减压浓缩，然后在60℃鼓风干燥中干燥8小时，得总黄酮14.25g，质量收率为9.8％。通过高效液相色谱检测，其中淫羊藿苷重量含量为17.83％，朝藿定C重量含量为52.52％，淫羊藿苷和朝藿定C总重量含量为70.35％。总黄酮中得到的淫羊藿苷相对于原料中淫羊藿苷的提取转移率为90.29％，朝藿定C提取转移率为93.20％。
总黄酮的特征如下：黄褐色粉末，气微，味苦；在水、甲醇、30％-70％乙醇中易于溶解，在丙酮及醋酸乙酯中几乎不溶。
4.高效液相色谱检测
4.1总黄酮中主要成分的检测
通过高效液相色谱检测步骤3得到的总黄酮，见图2下半图。
高效液相色谱(HPLC)条件：色谱柱：C18柱；流动相：乙腈－水(其中含体积分数为0.0125％的三氟乙酸)，洗脱梯度见下表1，洗脱时间60min，流速：1.0mL/min，柱温：35℃。紫外检测器检测波长分别为254、272、320nm。
表1 溶剂梯度洗脱表
结果显示:在3分钟时出现的峰为溶剂峰，在22分钟出现的峰为朝藿定C，24分钟出现的峰为淫羊藿苷的峰，46分钟以及52分钟的出峰为总黄酮中的其他成分出峰。
4.2淫羊藿干叶中主要成分的检测
结论：通过以上方法检测的淫羊藿干叶的总黄酮图谱，见图2上半图。与通过实施例1方法得到的淫羊藿中总黄酮图谱(HPLC-UV)的对比可以看出，该提取工艺对药材中的黄酮成分提取充分。
实施例2
1.提取
称取淫羊藿干叶25Kg，粉碎，过筛至1目，第一次以干叶11倍重量的乙醇溶液回流提取1.5小时，其中乙醇溶剂的体积浓度为40％，过滤，收集滤渣。
向滤渣中加入其10倍量的40％体积浓度的乙醇溶剂回流提取1小时。合并两次提取溶液并置于双效浓缩器中，控温80℃减压浓缩至相对密度为1.033g/ml(T＝30℃检测)，过滤，收集滤液进行纯化。
2.纯化
将滤液加入HPD-300型大孔树脂柱(内径20cm，长200cm)，并调节上样流速为0.8倍柱体积/小时。上样完成后，静置2小时。然后用10倍于柱床体积的蒸馏水，以1.5倍柱体积/小时的流速洗涤柱床；再用5倍于柱体积30％体积浓度的乙醇水溶液，以1.5倍柱体积/小时的流速洗涤柱床。最后用7倍于柱床体积80％体积浓度的乙醇溶剂洗涤柱床，收集洗涤液，进入浓缩、干燥工序。
3.干燥
将滤液控温60℃减压浓缩，浓缩液经喷雾干燥，得淫羊藿总黄酮2.5kg，质量收率为10％。通过实施例1公开的高效液相色谱方法检测，其中淫羊藿苷重量含量为18.02％，朝藿定C重量含量为53.12％，淫羊藿苷和朝藿定C总重量含量为71.14％。总黄酮中的淫羊藿苷相对于原料中淫羊藿苷的提取转移率为91.09％，朝藿定C提取转移率为92.54％。
Claims (10)
1.一种由淫羊藿制备总黄酮的方法，该方法包括以下步骤：
a.首先将淫羊藿干叶通过乙醇溶液进行提取，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用大孔树脂柱吸附，接着依次用水和乙醇洗脱所述的大孔树脂柱，收集最后一次乙醇洗脱液；
c.将步骤b得到的洗脱液干燥，得到所述的总黄酮。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤a中，乙醇溶液的体积浓度为20-90％，乙醇溶液为淫羊藿干叶重量的10-14倍，共提取2-4次，每次回流1-1.5小时。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤a和b之间还包括步骤d，将步骤a得到的提取液浓缩；优选地，浓缩温度为40-100℃，浓缩液密度为1.0-1.2g/ml。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在所述的步骤c中，将步骤d得到的浓缩液以0.5-1.5倍柱体积/小时的流速通过大孔树脂柱吸附。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤b中，首先用水洗脱大孔树脂柱，接着用乙醇洗脱大孔树脂柱两次，收集第二次乙醇洗脱液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤b中，首先用6-10倍柱床体积的蒸馏水洗脱大孔树脂柱，蒸馏水洗脱液的流速为1.0-1.5倍柱体积/小时。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤b中，第一次洗脱大孔树脂柱的乙醇体积浓度为20％-40％，乙醇体积为3-5倍柱床体积，乙醇洗脱液的流速为1.0-1.5倍柱体积/小时。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述的步骤b中，第二次洗脱大孔树脂柱的乙醇的体积浓度为60％-80％，乙醇体积为4-7倍柱床体积，乙醇洗脱液的流速为1.0-1.5倍柱体积/小时。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的大孔树脂柱为HPD-300型大孔树脂柱。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步骤c中，将洗脱液回收乙醇，浓缩至稠膏，喷雾干燥，得到所述的总黄酮。
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| CN110251549A (zh) * | 2019-06-24 | 2019-09-20 | 浙江省肿瘤医院 | 淫羊藿总黄酮提取物在制备防治桥本甲状腺炎的药物或保健品中的应用 |
| CN112552356A (zh) * | 2020-06-29 | 2021-03-26 | 郑州福瑞堂制药有限公司 | 一种淫羊藿苷制备方法 |
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