CN106589045B - 娑罗子七叶皂苷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种娑罗子七叶皂苷的制备方法和七叶皂苷钠的制备方法。所述娑罗子七叶皂苷的制备方法包括：(1)将娑罗子采用10～70vol％的乙醇水溶液作为溶剂进行提取，得到提取液；(2)将所述的提取液制备成上样样品；将所述的上样样品上反相色谱柱，依次采用8～25vol％的乙醇水溶液、35～80vol％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集35～80vol％的乙醇水溶液得到的洗脱液。本发明的制备方法能够有效除去杂质成分，同时七叶皂苷类成分的损失量很少，且无需另外的活性炭脱色操作即可实现脱色。

Description

娑罗子七叶皂苷的制备方法

技术领域

本发明涉及一种娑罗子七叶皂苷的制备方法。

背景技术

娑罗子是一味药材，可疏肝理气，和胃止痛，用于肝胃气滞，胸腹胀闷，胃脘疼痛。娑罗子的主要活性成分是七叶皂苷类成分，其属于三萜皂苷，具有消炎、抗渗出、恢复毛细血管通透性、提高静脉张力、改善血循环、扩张动脉、扩张冠脉、增加耐缺氧能力、促进脑功能恢复等作用。以娑罗子七叶皂苷为原料制备的上市药品有注射用七叶皂苷钠、复方七叶皂苷钠凝胶等。

现有的娑罗子七叶皂苷多采用不同浓度的乙醇水溶液进行提取，得到娑罗子粗提物。该粗提物中除含有皂苷类成分外，还含有大量的其他类成分，例如黄酮类、黄酮苷类、鞣质、有机酸，此外还含有色素成分，致使粗提物的颜色较深。为了除去杂质，提高七叶皂苷的纯度，现有技术通常采用大孔树脂柱或离子交换柱洗脱的方法，首先用水做洗脱剂，除去一些水溶性杂质，再用不同浓度的乙醇洗脱得到皂苷部位，还可以采用活性炭或氧化铝进行脱色。例如，中国专利申请201210116934.2公开了一种七叶皂苷钠的制备方法，包括提取、纯化和烘干步骤，其中采用的提取溶剂为10vol％的乙醇溶液，纯化步骤采用的是大孔树脂柱，首先用纯化水洗脱，再用95vol％乙醇溶液洗脱，所得洗脱产物再经过95vol％乙醇溶液沉淀、抽滤、脱水，得到七叶皂苷钠。中国专利申请201410594483.2公开了一种七叶皂苷钠的制备方法，包括提取和纯化步骤，其中提取溶剂采用的是30vol％～70vol％的乙醇溶液，提取液离心后用截留分子量为1000～15000道尔顿的超滤膜过滤，滤液上大孔树脂柱，依次用纯水、20vol％～40vol％的乙醇溶液、50vol％～70vol％的乙醇溶液洗脱，收集50vol％～70vol％的乙醇溶液的洗脱液减压回收至无醇味，再过聚酰胺树脂柱，收集洗脱液，再以10vol％～30vol％的乙醇溶液洗脱，与上述洗脱液合并，浓缩，加水溶液，以氢氧化钠溶液调节pH至8～11，加入丙酮，析出沉淀，过滤，干燥，即得。非专利文献(高小宁等，娑罗子中七叶皂苷提取工艺研究，中药材，2008，31(3)，459～460)报道了一种娑罗子中七叶皂苷提取工艺，包括采用95vol％乙醇浸提、活性炭脱色、有机溶剂(乙酸乙酯、正丁醇、氯仿等)萃取的步骤。

上述的娑罗子七叶皂苷的提取、纯化方法中，均采用大孔树脂柱进行分离纯化，皂苷类成分的损失率较大，且仍含有黄酮类、黄酮苷类及其他杂质。

因此，需要一种能够有效除去杂质、且七叶皂苷损失小的娑罗子七叶皂苷的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种娑罗子七叶皂苷的制备方法，该方法七叶皂苷的损失较小，且能够有效除去杂质。

本发明的另一目的在于提供一种七叶皂苷钠的制备方法。

本发明的目的是通过如下制备方法实现的：

本发明提供一种娑罗子七叶皂苷的制备方法，其包括如下步骤：

(1)将娑罗子采用10～70vol％的乙醇水溶液作为溶剂进行提取，得到提取液；

(2)将所述的提取液制备成上样样品；将所述的上样样品上反相色谱柱，依次采用第一洗脱剂、第二洗脱剂进行梯度洗脱，并依次得到第一洗脱液和第二洗脱液；收集所述的第二洗脱液；

其中，所述的第一洗脱剂为8～25vol％的乙醇水溶液，所述的第二洗脱剂为35～80vol％的乙醇水溶液。

本发明中，优选地，步骤(2)中，所述的第一洗脱剂为8～15vol％的乙醇水溶液，第一洗脱剂的用量为柱体积的2～3倍。

本发明中，优选地，步骤(2)中，所述的第二洗脱剂为45～60vol％的乙醇水溶液，洗脱剂的用量为柱体积的2～4倍。

本发明中，优选地，所述的第一洗脱剂和第二洗脱剂的流速均为0.2～2ml/min。

本发明中，优选地，步骤(2)中，所述的上样样品通过如下方法制备得到：将所述的提取液浓缩和干燥，得到提取物；将所述的提取物用浓度低于60vol％的乙醇水溶液或水溶解，得到所述的上样样品。

本发明中，优选地，步骤(2)中，所述的上样样品中的七叶皂苷含量为5～45wt％。

本发明中，优选地，步骤(2)中，所述的反相色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶或丁烷基硅烷键合硅胶作为填料，以15～95vol％的乙醇水溶液湿法上柱，再以蒸馏水洗至水系统，得到所述的反相色谱柱。

本发明中，优选地，所述反相色谱柱的径高比为1:3～18。

本发明中，优选地，所述的制备方法还包括如下步骤：

(3)将所述的第二洗脱液浓缩和干燥；可选地，和

(4)将步骤(2)结束后的反相色谱柱采用85～100vol％的乙醇水溶液冲洗，再用蒸馏水洗至水系统。

本发明还提供一种七叶皂苷钠的制备方法，所述的制备方法包括上述的方法制备娑罗子七叶皂苷。

相对于现有的娑罗子七叶皂苷的制备方法，本发明的制备方法能够有效除去黄酮类、黄酮苷类、色素类等杂质成分，获得高纯度的娑罗子七叶皂苷。同时，本发明的方法七叶皂苷类成分的损失量较少，且无需另外的活性炭脱色等操作即可实现脱色。

附图说明

图1示出了实施例2的上样样品高效液相色谱图。

图2示出了实施例2的第一浓缩液高效液相色谱图。

图3示出了实施例2的第二浓缩液高效液相色谱图。

其中，1为七叶皂苷A的色谱峰，2为七叶皂苷B的色谱峰。

具体实施方式

本发明中，所述的娑罗子包括七叶树科植物七叶树Aesculus chinensis Bge.、浙江七叶树Aesculus chinensis Bge.var.chekiangensis(Hu et Fang)Fang或天师栗Aesculus wilsonii Rehd.的干燥成熟种子。

本发明中，所述的“100vol％的乙醇水溶液”是为了表述方便，其是指无水乙醇。

本发明中，所述的将反相色谱柱蒸馏水洗至水系统，是指采用蒸馏水将反相色谱柱冲洗至色谱柱中的液相只有水，或仅含有微量的乙醇。

本发明中，所述的反相色谱柱的高度，是指反相色谱柱中填料的高度；所述的反相色谱柱的柱体积，是指反相色谱柱中填料的体积。

本发明中，所述的“七叶皂苷”、“七叶皂苷类化合物”、“七叶皂苷类成分”具有相同的含义，均是指娑罗子中含有的具有七叶皂苷母核的化合物。

以下实验例中作为指标性成分的七叶皂苷A的结构式为：

七叶皂苷B的结构式为：

本发明的娑罗子七叶皂苷的制备方法包括：(1)娑罗子的提取步骤，和(2)纯化步骤。所述的纯化步骤采用反相色谱柱作为层析柱，采用不同浓度的乙醇水溶液进行梯度洗脱，从而获得富集七叶皂苷类化合物的洗脱液。本发明的制备方法还可以包括：(3)将所述的富集七叶皂苷类化合物的洗脱液进行浓缩、干燥的步骤，从而得到固体的娑罗子七叶皂苷。此外，本发明的制备方法还可以包括：(4)纯化步骤完毕后冲洗色谱柱的步骤。本发明还提供七叶皂苷钠的制备方法。

根据本发明的一个实施方式，所述的娑罗子七叶皂苷的制备方法，包括如下步骤：

(1)将娑罗子采用25～50vol％的乙醇水溶液作为溶剂进行提取，得到提取液；

(2)将所述的提取液浓缩，干燥，得到提取物；将所述提取物加入10～40vol％的乙醇水溶液或水制备成上样样品，所述上样样品中七叶皂苷的含量为25～45wt％；将所述的上样样品以50～100mg七叶皂苷/100g干填料的上样量上反相色谱柱，依次采用第一洗脱剂、第二洗脱剂进行梯度洗脱，并依次得到第一洗脱液和第二洗脱液；收集所述的第二洗脱液；

其中，所述的反相色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶作为填料；所述的第一洗脱剂为8～25vol％的乙醇水溶液，第一洗脱剂的用量为柱体积的2～3倍；所述的第二洗脱剂为35～80vol％的乙醇水溶液，第二洗脱剂的用量为柱体积的2～4倍。

＜提取步骤＞

本发明的娑罗子的提取步骤中，首先将娑罗子采用10～70vol％的乙醇水溶液进行提取，得到提取液。

本发明中，优选地，所述的乙醇水溶液的浓度为25～70vol％，更优选为25～50vol％。根据本发明的一个实施方式，所述的乙醇水溶液的浓度为25vol％。采用所述的优选浓度的乙醇水溶液提取时，能够将娑罗子中的七叶皂苷类化合物充分提取出来，避免在提取步骤中损失七叶皂苷类化合物。

本发明中，所述的娑罗子与乙醇水溶液的料液重量比为1：3～15，更优选为1：3～12，再优选为1：5～12。所述的提取的方式选自加热回流法、冷浸法、超声法或渗漉法，优选采用加热回流法。

根据本发明的一个实施方式，所述的提取步骤为：将娑罗子采用25～50vol％的乙醇水溶液加热回流法提取1～4次，每次提取的溶剂用量为娑罗子重量的3～10倍量，每次提取的时间为0.5～2小时，过滤，滤液合并，得到提取液。

＜纯化步骤＞

在纯化步骤中，将提取步骤得到的提取液制备成上样样品；将所述的上样样品上反相色谱柱，依次采用第一洗脱剂、第二洗脱剂进行梯度洗脱，并得到第一洗脱液和第二洗脱液；收集所述的第二洗脱液；其中，所述的第一洗脱剂为8vol％～25vol％的乙醇水溶液，所述的第二洗脱剂为35vol％～80vol％的乙醇水溶液。

本发明中，所述的上样样品可以通过如下方法任意之一制备得到：

1)将所述的提取液浓缩，得到上样液，作为上样样品；

2)将所述的提取液浓缩和干燥，得到提取物，作为上样样品；

3)将所述的提取液浓缩和干燥，得到提取物；将所述的提取物用溶剂溶解，得到上样样品。

本发明中，为了更准确地确定上样量，优选采用上述方法3)制备上样样品。方法3)中，所述的溶剂可以是浓度低于60vol％的乙醇水溶液或水。优选地，所述的溶剂为浓度低于40vol％，更优选为低于25vol％，再优选为低于15vol％的乙醇水溶液。根据本发明的一个实施方式，所述的溶剂为15vol％的乙醇水溶液。根据本发明的另一个实施方式，所述的溶剂为水。当采用浓度低于15vol％的乙醇水溶液或水作为溶剂时，提取物的溶解度更佳，有助于增大上样量，提高分离效率。优选地，方法3)中，所述的上样样品的上样量控制在低于120mg七叶皂苷/100g填料干重，更优选低于110mg七叶皂苷/100g填料干重。优选地，所述上样样品的上样量控制在30～110mg七叶皂苷/100g干填料，更优选为50～100mg七叶皂苷/100g干填料，再优选为70～90mg七叶皂苷/100g干填料。所述的上样样品中的七叶皂苷的含量是以七叶皂苷钠作为标准品，采用外标一点法测定的含量。方法3)中，所述的上样样品中七叶皂苷的含量优选为5～45wt％，优选为10～45wt％，更优选为25～45wt％。当采用所述的上样样品时，能够在反相色谱柱不超载的情况下，保持较大的上样量。

本发明中，所述的反相色谱柱的填料选自C4～C25硅烷键合硅胶，优选为十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶或丁烷基硅烷键合硅胶，更优选为十八烷基硅烷键合硅胶。优选地，所述的反相色谱柱采十八烷基硅烷键合硅胶作为填料，以15～95vol％的乙醇水溶液、更优选以70～95vol％的乙醇水溶液湿法上柱，再以蒸馏水洗至水系统，得到所述的反相色谱柱。采用所述方法处理得到的反相色谱柱，更有利于步骤(1)的提取物中不同类别的组分的分离。本发明中，所述反相色谱柱的径高比为1:3～18，优选为1:3～12，更优选为1:3～10。根据本发明的一个实施方式，所述反相色谱柱的径高比为1:3～5。当采用所述的径高比范围的反相色谱柱时，特别是采用具有上述优选的径高比的反相色谱柱时，柱压更低，洗脱效率更高，同时又能保证有效除去杂质。本发明中，优选地，所述反相色谱柱的内径为1～6cm，更优选为2～4cm；所述反相色谱柱的高度为12～40cm。

本发明中，所述的第一洗脱剂为8～25vol％的乙醇水溶液。当采用所述的第一洗脱剂时，娑罗子提取物中的黄酮类、黄酮苷类、色素类等杂质成分能够被有效脱除，且很少损失七叶皂苷类成分；同时，采用所述浓度的第一洗脱剂时，能够有效脱除色素，避免色素对后续洗脱七叶皂苷类成分的干扰。优选地，第一洗脱剂的用量为柱体积的1～3倍。优选地，所述的第一洗脱剂为8～15vol％的乙醇水溶液，第一洗脱剂的用量为柱体积的2～3倍。当采用所述的第一洗脱剂时，杂质能够被有效脱除，且七叶皂苷类成分损失少，同时成本更低。根据本发明的一个优选的实施方式，所述的第一洗脱剂为15vol％的乙醇水溶液，第一洗脱剂的用量为柱体积的2倍。

本发明中，所述的第二洗脱剂为35～80vol％的乙醇水溶液。采用所述的第二洗脱剂时，七叶皂苷类成分能够被有效洗脱下来，富集在第二洗脱液中，同时其他类别的组分很少或基本不会被洗脱下来，从而有利于得到高纯度的七叶皂苷类成分。优选地，第二洗脱剂的用量为柱体积的1～4倍。优选地，所述的第二洗脱剂为45～60vol％的乙醇水溶液，第二洗脱剂的用量为柱体积的2～4倍。当采用所述的第二洗脱剂时，七叶皂苷类成分即可被有效洗脱下来，同时其他类别的组分几乎不会被洗脱下来，同时成本更低。根据本发明的一个优选的实施方式，所述的第二洗脱剂为60vol％的乙醇水溶液，第二洗脱剂的用量为柱体积的3倍。

本发明中，优选地，所述的第一洗脱剂和第二洗脱剂的流速均为0.2～2ml/min，更优选为0.3～1.5ml/min。根据本发明一个优选的实施方式，所述的第一洗脱剂和第二洗脱剂的流速为0.5ml/min。

＜浓缩、干燥步骤＞

本发明中，所述的制备方法还包括步骤(3)：将所述的第二洗脱液浓缩、干燥。本发明中，娑罗子中的七叶皂苷类化合物富集在所述的第二洗脱液中，将该洗脱液浓缩、干燥，即得到娑罗子七叶皂苷。所述的浓缩步骤优选为首先加热回收乙醇，然后将剩余的水分蒸发。所述的干燥步骤优选为将浓缩后的产物在95～105℃下干燥2～3小时。

＜冲洗步骤＞

本发明中，为了重复使用反相色谱柱，提高处理效率，优选地，所述的制备方法还可以包括(4)冲洗步骤：将所述的纯化步骤结束后的反相色谱柱采用85～100vol％的乙醇水溶液冲洗，再用蒸馏水洗至水系统。本发明中，优选地，采用90～100vol％的乙醇水溶液，更优选90～95vol％的乙醇水溶液冲洗所述反相色谱柱。采用所述浓度的乙醇水溶冲洗反相色谱柱，能够将残留的成分冲洗干净，以利于所述的反相色谱柱的重复使用。优选地，所述的乙醇水溶液的用量为柱体积的1～10倍，所述的蒸馏水的用量为柱体积的2～10倍。

＜七叶皂苷钠的制备方法＞

本发明的七叶皂苷钠的制备方法包括上述的娑罗子七叶皂苷的制备方法。本发明的七叶皂苷钠的制备方法还包括将上述的娑罗子七叶皂苷经过阳离子树脂的离子交换处理，得到七叶皂苷钠。所述的七叶皂苷钠纯度高，可用于进一步制备注射用七叶皂苷钠等成药。

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，并通过实验例进行验证。以下实施例中，采用的娑罗子为七叶树Aesculus chinensis Bge.的干燥成熟种子。以下实施例中，上样样品中的七叶皂苷的含量采用外标一点法测定，以七叶皂苷钠(购自中国食品药品检定研究院)作为标准品。

实施例1

本实施例的娑罗子七叶皂苷的制备方法包括如下步骤：

(1)将娑罗子用25vol％的乙醇水溶液作为溶剂加热回流提取2次，溶剂用量依次为娑罗子重量的8倍量、6倍量，提取时间依次为1.5小时、1小时，得到提取液；

(2)将所述的提取液浓缩，干燥，得到提取物，将所述提取物用15vol％的乙醇水溶液溶解，得到含七叶皂苷约40wt％的上样样品；将该上样样品上反相色谱柱，依次采用2倍柱体积的15vol％的乙醇水溶液(第一洗脱剂)、3倍柱体积的60vol％的乙醇水溶液(第二洗脱剂)洗脱，依次得到第一洗脱液、第二洗脱液，收集第二洗脱液；同时收集第一洗脱液作验证用；

其中，该反相色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，95vol％的乙醇水溶液湿法上柱，再经蒸馏水冲洗至水系统得到，该反相色谱柱的径高比为1:3.25。

该第二洗脱液为含有娑罗子七叶皂苷的溶液。

实施例2

采用实施例1的方法制备得到第二洗脱液，将该第二洗脱液浓缩、干燥，得到固体的娑罗子七叶皂苷。

实施例3

本实施例的娑罗子七叶皂苷的制备方法包括如下步骤：

(1)将娑罗子用25vol％的乙醇水溶液作为溶剂超声提取3次，每次溶剂用量均为娑罗子重量的6倍，提取时间依次为1.5小时、1小时和1小时，得到提取液；

(2)将所述的提取液浓缩，干燥，得到提取物，将所述提取物用10vol％的乙醇水溶液溶解，得到含七叶皂苷约43wt％的上样样品；将该上样样品上反相色谱柱，依次采用2倍柱体积的20vol％的乙醇水溶液(第一洗脱剂)、4倍柱体积的40vol％的乙醇水溶液(第二洗脱剂)进行洗脱，依次得到第一洗脱液、第二洗脱液，收集第二洗脱液；同时收集第一洗脱液作验证用；

其中，该反相色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，90vol％的乙醇水溶液湿法上柱，再经蒸馏水冲洗至水系统得到，该反相色谱柱的径高比为1:10.5。

(3)将第二洗脱液浓缩、干燥，得到固体的娑罗子七叶皂苷类成分；

(4)将步骤(2)处理后的反相色谱柱用3倍柱体积的90vol％的乙醇水溶液冲洗，再以6倍柱体积的蒸馏水冲洗至水系统，以备重复使用。

实施例4

本实施例的娑罗子七叶皂苷的制备方法包括如下步骤：

(1)将娑罗子用娑罗子重量的10倍量的25vol％的乙醇水溶液作为溶剂渗漉提取24小时，得到提取液；

(2)将所述的提取液浓缩，干燥，得到提取物，将所述提取物用10vol％的乙醇水溶液溶解，得到含七叶皂苷约39wt％的上样样品；将该上样样品上反相色谱柱，依次采用1.5倍柱体积的25vol％的乙醇水溶液(第一洗脱剂)、2倍柱体积的70vol％的乙醇水溶液(第二洗脱剂)进行洗脱，依次得到第一洗脱液、第二洗脱液，收集第二洗脱液；同时收集第一洗脱液作验证用；

该反相色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，95vol％的乙醇水溶液湿法上柱，再经蒸馏水冲洗至水系统得到，该反相色谱柱的径高比为1:6。

(3)将第二洗脱液浓缩、干燥，得到固体的娑罗子七叶皂苷类成分；

(4)将步骤(2)处理后的反相色谱柱用3倍柱体积的90vol％的乙醇水溶液冲洗，再以6倍柱体积的蒸馏水冲洗至水系统，以备重复使用。

实施例5

将实施例2得到的娑罗子七叶皂苷，进行阳离子树脂的离子交换处理，制备得到七叶皂苷钠。

实验例1

将实施例2～4得到的上样样品、第一洗脱液、第二洗脱液采用高效液相色谱法进行检测。

样品的准备：

取实施例2的上样样品，备用；

将实施例2的第一洗脱液浓缩至等于上样样品的体积，得到第一浓缩液，备用。

将实施例2的第二洗脱液浓缩至等于上样样品的体积，得到第二浓缩液，备用。

高效液相色谱条件为：采用岛津分析型HPLC(LC-20AD)高效液相色谱仪，色谱柱Venusil ASB C₁₈column(4.6×250mm,5μm)；柱温为35℃；流动相为0.05％三氟乙酸水(A)-乙腈(B)溶液，梯度洗脱(0-23min，15％-30％B；24-40min，40％B；45-60min，60％-95％B；60-70min，95％B)；流速为1.0mL/min；检测波长为220nm。

将上述的上样样品、第一浓缩液和第二浓缩液分别取10μl，注入高效液相色谱仪，分别得到如图1、图2和图3所示的高效液相色谱图。

经采用槲皮素、山奈酚、七叶皂苷A、七叶皂苷B、异七叶皂苷A、异七叶皂苷B作为对照品进行定位，并通过化合物鉴定，得知保留时间在30～50min范围内的为七叶皂苷类化合物的色谱峰，保留时间在5～20min范围的为黄酮类、黄酮苷类成分的色谱峰。特别对特征性成分七叶皂苷A和七叶皂苷B做了定量检测，其中，1为七叶皂苷A的色谱峰，2为七叶皂苷B的色谱峰。由收集的第一和第二洗脱液可见，第一洗脱液颜色较深，第二洗脱液几乎为无色。

实施例3～4的上样样品、第一洗脱液和第二洗脱液与实施例1的色谱图相似，颜色也相似。实施例2～4的上样样品、第一洗脱液和第二洗脱液中的七叶皂苷A和七叶皂苷B含量见表1。

表1

由表可见，本发明的方法从娑罗子中提取得到七叶皂苷类成分，并有效脱除黄酮类等杂质成分，并有效脱色，同时与上样样品中含有的七叶皂苷类成分相比，第二洗脱液中的七叶皂苷类成分的种类和含量均损失很少。

本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

Claims (8)

1.一种娑罗子七叶皂苷的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将娑罗子采用25～50vol％的乙醇水溶液作为溶剂进行提取，得到提取液；

(2)将所述的提取液制备成上样样品；将所述的上样样品上反相色谱柱，依次采用第一洗脱剂、第二洗脱剂进行梯度洗脱，并依次得到第一洗脱液和第二洗脱液；收集所述的第二洗脱液；

其中，所述的上样样品通过如下方法制备得到：将所述的提取液浓缩和干燥，得到提取物；将所述的提取物用浓度低于60vol％的乙醇水溶液或水溶解，得到所述的上样样品；所述反相色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶或丁烷基硅烷键合硅胶作为填料，以15～95vol％的乙醇水溶液湿法上柱，再以蒸馏水洗至水系统，得到所述的反相色谱柱；

其中，所述的第一洗脱剂为8～25vol％的乙醇水溶液，所述的第二洗脱剂为45～60vol％的乙醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的第一洗脱剂为8～15vol％的乙醇水溶液，第一洗脱剂的用量为柱体积的2～3倍。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的第二洗脱剂的用量为柱体积的2～4倍。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的第一洗脱剂和第二洗脱剂的流速均为0.2～2ml/min。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的上样样品中的七叶皂苷含量为5～45wt％。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反相色谱柱的径高比为1:3～18。

7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括如下步骤：

(3)将所述的第二洗脱液浓缩和干燥；可选地，

(4)将步骤(2)结束后的反相色谱柱采用85～100vol％的乙醇水溶液冲洗，再用蒸馏水洗至水系统。

8.一种七叶皂苷钠的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括采用权利要求1～7任一项所述的制备方法制备娑罗子七叶皂苷。