CN102229632B - 矢车菊-3-o-葡萄糖苷的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种矢车菊-3-O-葡萄糖苷的制备方法,以紫色作物为原料,以体积分数为30-80%、pH值为1-4的乙醇水溶液为提取液对原料进行提取,将得到的花青素粗提物用截留分子量为1000-5000道尔顿的超滤膜进行超滤处理,对滤液冷冻干燥,得到分子量小于1000-5000道尔顿的滤液干粉,将所述滤液干粉用水配制成0.05-5wt%的上柱液,上凝胶色谱柱初步纯化,洗脱收集520nm处具有吸收峰的洗脱液,并保留其中的矢车菊-3-O-葡萄糖苷馏分;将所述矢车菊-3-O-葡萄糖苷馏分用制备型HPLC进一步纯化,收集矢车菊-3-O-葡萄糖苷吸收峰。本发明通过改进提取分离及纯化条件和操作,避在有效去除提取物中的糖、蛋白、其他类型花色苷及黄酮类色素的同时,步骤简单,试剂安全,利于得到高纯度矢车菊-3-O-葡萄糖苷产品。

Description

矢车菊-3-0-葡萄糖苷的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及食品加工中功能性色素的分离技术,具体是关于一种单一种类花青素,矢车菊-3-0-葡萄糖苷制备的方法。
背景技术
[0002] 花青素(Anthocyanidin)是自然界广泛存在的一类水溶性天然色素,属黄酮类化合物。花青素的母核结构是2-苯基苯并吡喃阳离子,含有8个共轭双键构成高度共轭体系,常与一个或多个糖苷通过糖苷键连接形成花色苷。花色苷的糖苷基和羟基还可以与香豆酸等酸类通过酯键形成酰基化的花色苷。
[0003] 不同类型的花青素由于分子中共轭体系和羟基数目、位置、存在形式的不同,颜色有一定程度的差异,其功能性质也不同。矢车菊-3-0-葡萄糖苷(也称矢车菊素葡萄糖苷)是花青素中最有代表性的化合物,是以黄酮为母核的黄酮类成分。近来研究表明矢车菊-3-0-葡萄糖苷具有较强清除氧自由基的能力及抗癌性。该化合物极性大,水溶性非常好,易溶于甲醇、乙醇、丙酮中,但不溶于氯仿、乙醚等非极性溶剂。有研究显示,作为一种天然食用色素,矢车菊-3-0-葡萄糖苷不仅具有花青素的共同特点,安全、无毒、资源丰富,更具有一定营养和药理作用,尤其表现在:能够降低氧化酶的活性;抑制胆固醇吸收,降低低密度脂蛋白胆固醇含量;抗变异、抗肿瘤、抗过敏等多种功能;因此在食品、化妆品、医药等领域有着巨大应用潜力。由于花青素,尤其是矢车菊-3-0-葡萄糖苷的特殊性质和功效,在作为食品色素的同时,分离出功效和特性更加突出的色素单体成分,对于更深层面上研究和开拓花青素的应用具有显然的意义。
[0004] 对于花青素的分离纯化,目前已经公开的报道有很多,例如,中国发明公开CN03139995、CN 0311087.9、CN 200810017611.1、CN 200710032567.7、CN200710064006.5、CN200510111686.2分别公开了从黑米皮、越橘、荔枝、紫玉米、杨梅等食品或食品副产物中分离纯化花青素的方法,但是包括上述公开在内的现有技术所得到的产品均为多种类型花色苷的混合花青素,均未报道如何分离纯化出单一种类的花青素矢车菊-3-0-葡萄糖苷。
[0005]黑豆皮、紫玉米苞叶、紫豇豆、桑葚、紫甘蓝等天然紫色作物都是花青素的主要来源,其中矢车菊-3-0-葡萄糖苷均为主要成分。所以,也有一些相关的报道,例如,中国专利CN200680002073.8公开了一种名称为“黑大豆皮提取物及其提取方法和应用”的技术方案,其中的提取方法采用含酶的水溶剂对黑豆皮浸提,再经超滤、吸附树脂纯化、浓缩、喷雾干燥等手段最终得到的是黑大豆皮提取物,其中包括矢车菊素10-45%,儿茶素10-25%,寡聚原花青素40% -80%。也就是说,该专利方法所得到的提取物仍然为混合的花青素及多酚类物质,矢车菊素含量仅为10-45%。中国专利公开200810052526.9中也公开了一种以紫色作物为原料制备含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷的有效部位的方法,所获得的有效部位产物可以用于防治类风湿性关节炎的药物或食品的制备。根据其公开的技术方案,为得到含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷的有效部位,对紫色原料利用醇酸水溶液提取后,还需要利用大孔树脂和凝胶柱进行分离,而所得到的产物中,矢车菊-3-0-葡萄糖苷的含量仅在50%左右;此外,该提取工艺中,原料的醇提物必须先经大孔树脂分离,但是大孔树脂中存在的未聚单体、交联剂、以及必须的添加剂等都会在分离产物中造成残留,作为保健品、尤其是作为药品原料使用时,先期的检测和处理是必须的步骤(需要报请SFDA认定的检测机构出具相关原料中大孔吸附树脂残留物检验报告)。
[0006] 高纯度花青素不仅在食品、化妆品、医药领域的应用方面有着巨大潜力,并且在单一花青素的性质、功能及标准品方面具有很好的科研价值。因此以黑豆皮、紫玉米、紫豇豆、桑葚、红色结球菊苣、紫甘蓝等紫色作物为原料制备高纯度的矢车菊-3-0-葡萄糖苷具有重大的意义。
发明内容
[0007] 本发明所解决的技术问题是:利用紫色作物为原料,在传统提取方法的基础上,改进提取分离条件,提供一种制备高纯度单一花青素,矢车菊-3-0-葡萄糖苷的方法。
[0008] 矢车菊-3-0-匍萄糖昔,又名2-(3,4-二羟基苯基)_3_ ( β -D-吡喃匍萄糖氧基)-5, 7- 二羟基-1-苯并氯化物、矢车菊素,分子式为C21H21O11,可缩写为C-3-G,结构式
为:
Figure CN102229632BD00041
[0010] 本发明提供了一种制备矢车菊-3-0-葡萄糖苷的方法,该方法包括以下过程:
[0011] 以紫色作物为原料,以体积分数为30-80%、pH值为1-4的乙醇水溶液为提取液对原料进行提取,提取温度为室温至65°C,提取物经过滤、浓缩得到花青素粗提物;
[0012] 将所述花青素粗提物溶于水,使用截留分子量为1000-5000道尔顿的超滤膜进行超滤处理,对滤液冷冻干燥,得到分子量小于1000-5000道尔顿的滤液干粉;
[0013] 将所述滤液干粉用水配制成0.05-lwt%的上柱液,上凝胶色谱柱初步纯化,用混合洗液洗脱,收集520nm处具有吸收峰的洗脱液,并保留其中的矢车菊_3_0-葡萄糖苷馏分,所述混合洗液为含酸0.1-5%的酸液:有机溶剂=4: 6-9: I (体积比)的混合液;
[0014] 将所述矢车菊-3-0-葡萄糖苷馏分用制备型HPLC进一步纯化,其中,采用C18制备色谱柱,柱温20-50°C,流速10-50mL/min,收集矢车菊-3-0-葡萄糖苷吸收峰。
[0015] 本发明所使用的原料可以是任何含有花青素,尤其是含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷丰富的紫色作物,包括新鲜的或干燥的黑豆皮、紫玉米、紫玉米苞叶、黑米、紫甘薯、蓝莓、蔓越莓、欧洲越橘、黑加仑、草莓、李子、杨梅、木耳菜果实、紫![豆、桑葚、红色结球菊苣、紫菜花、紫甘蓝等或其二种以上的混合物,将其植物组织破碎成为原料。
[0016] 本发明的方法可以大体划分为提取和分离纯化二部分,由于花青素对温度敏感,为避免提取过程中花青素的分解,需要考虑对提取液和提取温度的选择。本发明最终确定的提取液为体积分数为30-80%的乙醇水溶液,并应事先调节其pH值在1_4(通常可以使用盐酸液进行调节,也可以使用其他对提取物无影响的酸性物质),提取温度可以为室温,为提高提取率和提取效率也可适当加热,但不应高于65°C,比较好是控制提取温度在30-55°C。实际操作中,优选控制提取时间l_4h,更利于得到较高的提取率和纯度。提取操作中可以根据原料的性质(例如含水量)以及后期浓缩操作情况确定适当的料液比,一般可以控制原料质量与提取液体积的料液比(克/毫升)为1: 10-25,具体比例根据原料中花青素含量以及含水量可以在此范围内调整,以提高花青素的提取率且降低后期过滤浓缩成本为目标。另一方面,为提高提取率,可以采用多次提取,例如提取1-5次,将提取物过滤(经80-120目筛过滤),收集滤液合并成为花青素粗提物。为便于后续处理,将提取物的滤液先进行浓缩是必需的,当然,为避免花青素的分解,需要低温浓缩,例如采用减压蒸发浓缩得到花青素粗提取物。
[0017] 再一方面,为了减少粗提物的量和下一工序的操作时间,条件许可时,也可以将浓缩后的粗提物喷雾干燥成粗提物粉末(干粉),例如,将提取物浓缩至原体积的1/5-1/20,直接用于超滤,或者进行喷雾干燥,调节进风口温度100-140°C,出风口温度70-80°C,得到粉末状花青素粗提物,花青素虽然属于热敏性,但物料在喷雾干燥中受热时间较短,一般不会产生很明显的变化,而且增加喷雾干燥工序缩短了超滤处理时间,从综合效益考虑,在实际生产中还是有利的。
[0018] 根据本发明的方法,对于所得到的花青素粗提物首先采用超滤去除其中所包含的大分子的糖、蛋白及其他的黄酮类物质。因为矢车菊-3-0-葡萄糖苷分子量为449,所以本发明通常可使用截留分子量为1000-5000道尔顿的超滤膜进行分离。超滤前,将花青素粗提物先溶于水,为减少挥发组分的引入,最好使用双蒸水或三蒸水,通过超滤处理可以去除提取物中1000-5000道尔顿分子量以上的蛋白、多糖及其它的黄酮类物质。对于超滤膜的选择本发明没有特别限定,只要能对大分子量组分进行有效截留,例如可以选择商购中空纤维膜、醋酸纤维素膜、聚 砜酰胺膜或聚醚砜膜等常规超滤膜。超滤时,将所述提取得到的花青素粗提物(浓缩物或干粉)配制成粗提物与水的质量体积比为1: 50-100(克/毫升)的上柱液,加到能连续洗滤的超滤装置的料液瓶中,优选可以控制透膜压力2-4bar,流速控制在0.5-50mL/min,优选15_40mL/min,收集滤过液,冷冻干燥,得到1000-5000道尔顿分子量以下的滤液干粉。
[0019] 根据本发明的方法,对于经过超滤处理的滤液干粉还需利用凝胶色谱(树脂)柱进行初步纯化(流速可以为20-50ml/min),收集520nm处具有吸收峰的洗脱液,并保留其中的矢车菊-3-0-葡萄糖苷馏分,以达到初步纯化的目的。经此步骤的收集液中已经富含了矢车菊-3-0-葡萄糖苷组分,即,已经去除了大部分其他类型花色苷及黄酮类色素。具体操作中可以通过与标准品的比对,只收集矢车菊-3-0-葡萄糖苷馏分。该初步纯化所使用的凝胶柱可选自 Sephadex G-25 柱、Sephadex LH-20 柱、Sephadex G-20 柱或 Sephadex G-15柱等。上柱过程所用酸与有机溶剂的混合洗液,优选地,所述酸可以包括甲酸、乙酸、三氟乙酸或磷酸等或其混合,所述有机溶剂可以包括乙醇、甲醇、乙腈或正丁醇等或其混合。对凝胶树脂柱洗脱时的流速优选控制为20-50ml/min。收集520nm处具有吸收峰的洗脱液合并成为初步纯化的矢车菊-3-0-葡萄糖苷提取物。滤液干粉先配置成0.05-1 % (质量浓度)的上柱液,为利于操作,上柱液的浓度优选可以为0.05-0.5%。
[0020] 为得到高纯度的矢车菊-3-0-葡萄糖苷制品,本发明方法还包括利用HPLC制备色谱对上述经凝胶树脂柱分离出的矢车菊-3-0-葡萄糖苷组分进一步纯化。该纯化过程采用常规的C18制备色谱柱,例如:安捷伦ZORBAXPrepHT柱;Z0RBAX Eclipse Plus柱等,柱温 20-50°C,最好是 20-30°C,流速 10_75mL/min,最好是 10_50mL/min,更好是 10_30mL/min,具体操作条件可以是:流动相A为0.3-0.6% (体积浓度)的甲酸水溶液;流动相B为
0.3-0.6% (体积浓度)的甲酸乙腈溶液;洗脱梯度为Omin 10-20% B,20-40min 45-70%B ;DAD检测器:检测波长520nm。收集的矢车菊-3-0-葡萄糖苷吸收峰组分进一步浓缩,例如在温度30-55°C下,旋转蒸发浓缩去除溶剂,冷冻干燥后得到高纯度的矢车菊-3-0-葡萄糖苷制品。花青素的特征可见吸收峰在520nm,因此以下实施例中是以520nm作为检测波长来分离花青素,以C-3-G标品作为外标,收集样品中分离的C-3-G吸收峰馏分。采用液相色谱或其它手段测定其纯度,测定结果可以证明,按照本发明方法所得到的C-3-G提取物的纯度可达75-85%,甚至更高(经高效液相法测定只含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷一个吸收峰)。
[0021] 本发明的方法在传统提取方法的基础上,通过改进提取分离及纯化条件和操作,避免了大孔树脂的使用,在有效去除提取物中的糖、蛋白、其他类型花色苷及黄酮类色素的同时,步骤简单,试剂安全(降低了残留物引入),利于得到高纯度矢车菊-3-0-葡萄糖苷产品,该单一花青素组分尤其可以用于药品或保健食品的生产。
附图说明
[0022] 图1为实施例1的黑豆皮原料中总花青素的高效液相色谱图(520nm)。
[0023] 图2为实施例1得到的矢车菊-3-0-葡萄糖苷制品的高效液相色谱图(520nm)。
[0024] 图3为实施例2的干燥紫玉米苞叶原料中总花青素的高效液相色谱图(520nm)。
`[0025] 图4为实施例2中以干燥紫玉米苞叶为原料获得的矢车菊-3-0-葡萄糖苷制品的高效液相色谱图(520nm)。
具体实施方式
[0026] 以下通过具体实施例详细说明书本发明的技术方案和所产生的有益技术效果,但不能理解为对本发明可实施范围的任何限定。
[0027] 实施例1
[0028] 原料为黑豆皮,经测定总花青素含量为2.04%,其中矢车菊-3-0-葡萄糖苷含量占总花青素含量的90%以上(即100克干黑豆皮中包含总花青素2.04g,其中含矢车菊-3-0-葡萄糖苷约1.83克)。图1是该黑豆皮原料中总花青素的高效液相色谱图(520nm)。
[0029] 取1000g上述黑豆皮原料,采用15L 70%乙醇的酸水溶液(事先用lmol/L的盐酸调节至pH=2.5)于50°C左右分3次提取,每次I小时。三次提取液经100目筛过滤合并,控制55°C条件下旋转蒸发(真空度0.0SMPa)进行浓缩,浓缩至原体积的1/8左右,进行喷雾干燥(进风口温度120°C,出风口温度80°C ),最终得到粉末状花青素粗提物275g。
[0030] 将该粗提物按重量体积比(g/ml)为1: 60的比例溶于双蒸水,进行超滤处理,使用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜(聚醚砜),控制透膜压力在3bar,流速为30mL/min,进行超滤处理,截留去掉5000道尔顿分子量以上的蛋白和多糖及其他大分子黄酮类化合物,滤过液冷冻干燥,得到5000道尔顿分子量以下的滤液干粉45g。
[0031] 将上述滤液干粉以水为溶剂配制成质量百分比为0.1 %的水溶液上凝胶树脂柱(Sephadex G-20)进行初步纯化,采用含0.5%三氟乙酸的酸水:甲醇=8: 2(体积比)的混合洗液进行洗脱,流速控制在15mL/min,收集520nm处的吸收峰,并经分析型HPLC检测(外标:矢车菊-3-0-葡萄糖苷标准品(Chromadex 00016371,纯度92.5%, Chromadex公司)比对,保留并融合含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷的馏分。
[0032] 上述馏分进一步以制备型HPLC进行纯化,采用ZORBAX PrepHT C18色谱柱,柱规格100X21.2mm,柱温25°C,流速15mL/min ;流动相A:0.5%的甲酸水溶液,流动相B:0.5%的甲酸乙腈溶液;洗脱梯度=Omin 10% B,32min 60% B ;DAD检测器:检测波长520nm。收集520nm波长的吸收峰,在温度55°C下,旋转蒸发浓缩去除溶剂,浓缩物冷冻干燥,得到12.3g提取物,经高效液相法(520nm)测定矢车菊-3-0-葡萄糖苷组分纯度达到89.0% (见图2)。
[0033] 实施例2
[0034] 原料采用干燥紫玉米苞叶粉碎物,经测定其总花青素含量为3.49%,其中矢车菊-3-0-葡萄糖苷含量占总花青素含量的40%左右(即100克干紫玉米苞叶粉碎物中含花青素3.49g,其中矢车菊-3-0-葡萄糖苷含量为约1.40g),该原料的高效液相谱图见图3(520nm)。
[0035] 取1000g紫玉米粉碎物,采用12L 50%乙醇(pH = 3.0)的酸水溶液于50°C左右分2次提取,每次I个小时。两次提取液合并过100目筛,控制约55°C旋转蒸发(真空度0.075MPa)浓缩至原体积的1/10左右,进行喷雾干燥(进风口温度110°C,出风口温度80°C ),得到粉末状花青素粗提物290g。
`[0036] 将该粗提物按重量体积比(g/ml)为1: 70的比例溶于双蒸水,加到超滤装置的料液缸中,使用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜(聚醚砜膜),控制透膜压力在3bar,流速为35mL/min,进行超滤处理,截留去掉5000道尔顿分子量以上的蛋白和多糖及其他大分子黄酮类化合物,滤过液冷冻干燥,得到5000道尔顿分子量以下的滤液干粉56g。
[0037] 将上述滤液干粉以水为溶剂配制成质量百分比为0.1 %的水溶液上凝胶树脂柱(Sephadex LH-20)进行初步纯化,采用含0.3%甲酸的酸水:甲醇=6: 4(体积比)的混合洗液进行洗脱,流速控制在15mL/min,收集520nm处的吸收峰,并经分析型HPLC检测(外标:矢车菊-3-0-葡萄糖苷标准品(Chromadex 00016371,纯度92.5%, Chromadex公司)比对,保留并融合含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷的馏分。
[0038] 上述馏分进一步以制备型HPLC进行纯化,采用ZORBAX PrepHT C18色谱柱,柱规格为100X21.2mm,柱温25°C,流速15mL/min ;流动相A:0.5%的甲酸水溶液,流动相B:0.5%的甲酸乙腈溶液;洗脱梯度:0min 10%B,32min 60% B ;DAD检测器:检测波长520nm。收集520nm波长的吸收峰,在温度50°C下,旋转蒸发浓缩去除溶剂,浓缩物冷冻干燥,得到12.1g提取物,经高效液相法(520nm)测定矢车菊-3-0-葡萄糖苷组分纯度达到77.5% (图4)。
[0039] 实施例3
[0040] 原料为新鲜紫皮豇豆,总花青素含量为0.057%,其中矢车菊-3-0-葡萄糖苷含量占总花青素含量的93%以上(即10000克新鲜紫皮豇豆中包含总花青素5.7g,其中含矢车菊-3-0-葡萄糖苷约5.3g)。
[0041] 称取IOKg新鲜紫豇豆,破碎后投入提取罐,添加150L 60%乙醇(pH = 3)的酸水溶液于55°C分2次提取,每次I个小时。两次提取液合并过120目筛,控制50°C条件下旋转蒸发(真空度0.08MPa)浓缩至原体积1/20左右,进行喷雾干燥(进风口温度110°C,出风口温度80°C )得到粉末状花青素粗提物450g。
[0042] 将上述粗提物按重量体积比(g/mL)为1: 75的比例溶于双蒸水,进行超滤处理,使用截留分子量为1000道尔顿的超滤膜(中空纤维膜),控制透膜压力在3.5bar,流速为40mL/min,去掉1000道尔顿分子量以上的蛋白和多糖及其他大分子黄酮类化合物,滤过液冷冻干燥,得到1000道尔顿分子量以下的滤液干粉11.2g。
[0043] 将上述滤液干粉以水为溶剂配制成质量百分比为0.1%水溶液上S印hadex G_25凝胶树脂柱进行初步纯化,采用含I %乙酸的水:乙醇=7: 3(体积比)的混合洗液进行洗脱,流速控制在10mL/min,收集520nm处的吸收峰,并经分析型HPLC检测(外标:矢车菊-3-0-葡萄糖苷标准品(Chromadex 00016371,纯度92.5%, Chromadex公司)比对,保留并融合含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷的馏分。
[0044] 上述馏分进一步以制备型HPLC进行纯化,采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱,柱规格100X21.2mm,柱温30°C,流速16mL/min ;流动相A:0.3%的甲酸水溶液,流动相B:0.3%的甲酸乙腈溶液;洗脱梯度=Omin 10% B,35min 70% B ;DAD检测器:检测波长520nm。收集520nm的吸收峰,在温度50°C下,旋转蒸发浓缩去除溶剂,浓缩物冷冻干燥,得到3.03克提取物,经测定矢车菊-3-0-葡萄糖苷组分纯度达到78.5%,与实施例1和2相似地,经高效液相法测定只含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷一个吸收峰。
[0045] 实施例4 [0046] 原料为新鲜紫甘蓝,其总花青素含量为0.06%,其中矢车菊-3-0-葡萄糖苷含量占总花青素含量的90%以上(即10000克新鲜紫甘蓝中包含总花青素6g,其中含矢车菊-3-0-葡萄糖苷约5.4g)。
[0047] 称取IOKg新鲜紫甘蓝,样品粉碎后投入提取罐,采用IOOL 75%乙醇(pH = 3)的酸水溶液于55°C左右分2次提取,每次1.5个小时。两次提取液合并过120目筛,控制50°C条件下旋转蒸发(真空度0.085MPa)浓缩至原体积1/20,进行喷雾干燥(进风口温度110°C,出风口温度80°C ),得到粉末状花青素粗提物571g。
[0048] 上述花青素粗提物按重量体积比(g/mL)为1: 80的比例溶于双蒸水,进行超滤,使用截留分子量为1000道尔顿的超滤膜(中空纤维),控制透膜压力在3.5bar,流速为40mL/min,截留去掉1000道尔顿分子量以上的蛋白和多糖及其他大分子黄酮类化合物,滤过液冷冻干燥,得到1000道尔顿分子量以下的滤液干粉13g。
[0049] 将上述干粉以纯水为溶剂配制质量百分比为0.5%的样品上S印hadexLH-20凝胶树脂柱初步纯化,采用含0.5%甲酸的水:乙醇=6: 4(体积比)的混合洗液进行洗脱,流速控制在10mL/min,收集520nm处的吸收峰,并经分析型HPLC检测(外标:矢车菊-3-0-葡萄糖苷(C-3-G)标准品(Chromadex 00016371,纯度 92.5%, Chromadex 公司)比对),保留含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷的 馏分。
[0050] 上述馏分进一步以制备型HPLC进行纯化,采用ZORBAX PrepHT C18色谱柱,柱规格100 X 21.2mm,柱温25°C,流速llmL/min ;流动相A:0.4%的甲酸水溶液,流动相B:0.4%的甲酸乙腈溶液;洗脱梯度=Omin 10% B,40min 60% B ;DAD检测器:检测波长520nm。收集520nm波长下的吸收峰,在温度55°C下,旋转蒸发浓缩去除溶剂,浓缩物冷冻干燥,得到
3.14克提取物,经测定矢车菊-3-0-葡萄糖苷组分纯度达到80.0%,与实施例1和2相似地,经高效液相法 测定只含有矢车菊-3-0-葡萄糖苷一个吸收峰。

Claims (9)

1.一种制备矢车菊-3-0-葡萄糖苷的方法,该方法包括以下过程: 以紫色作物为原料,以体积分数为30-80%、pH值为1-4的乙醇水溶液为提取液对原料进行提取,提取温度为室温至65°C,提取物经过滤、浓缩得到花青素粗提物; 将所述花青素粗提物溶于水,使用截留分子量为1000-5000道尔顿的超滤膜进行超滤处理,对滤液冷冻干燥,得到分子量小于1000-5000道尔顿的滤液干粉; 将所述滤液干粉用水配制成0.05-lwt%的上柱液,上凝胶色谱柱初步纯化,用混合洗液洗脱,收集520nm处具有吸收峰的洗脱液,并保留其中的矢车菊_3_0-葡萄糖苷馏分,所述混合洗液为含酸0.l-5wt%的酸液:有机溶剂=4:6-9:1体积比的混合液; 将所述矢车菊-3-0-葡萄糖苷馏分用制备型HPLC进一步纯化,其中,采用C18制备色谱柱,柱温20-50°C,流速10-75mL/min,收集矢车菊-3-0-葡萄糖苷; 其中,所述紫色作物为黑豆皮、紫玉米、紫玉米苞叶、黑米、紫甘薯、蓝莓、蔓越莓、欧洲越橘、黑加仑、草莓、李子、杨梅、木耳菜果实、紫豇豆、桑葚、红色结球菊苣、紫菜花、紫甘蓝或其混合物。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,利用所述乙醇水溶液对原料提取的温度30-55°C,提取时间1-4小时。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述原料提取物经过滤、浓缩后,实施喷雾干燥,得到粉末状花青素粗提物。
4.根据权利要求1所述的方法,其中,所述提取过程中,原料质量与提取液的体积比为1:10-25克/毫升。
5.根据权利要求1所述的方法,其中,超滤处理时透膜压力2-4bar,流速控制0.5_50mL/mino`
6.根据权利要求1所述的方法,其中,所述凝胶色谱柱选自S印hadex G_25柱、Sephadex LH-20 柱、Sephadex G-20 柱或 Sephadex G-15 柱。
7.根据权利要求1所述的方法,其中,上凝胶色谱柱实施初步纯化时所用的混合洗液中,所述酸为甲酸、乙酸、三氟乙酸或磷酸或其混合,所述有机溶剂为乙醇、甲醇、乙腈或正丁醇。
8.根据权利要求1或7所述的方法,其中,对凝胶色谱柱洗脱时的流速控制为20-50ml/mino
9.根据权利要求1所述的方法,其中,矢车菊-3-0-葡萄糖苷馏分用制备型HPLC进一步纯化时,流动相A为0.3-0.6%的甲酸水溶液,流动相B为0.3-0.6%的甲酸乙腈溶液。
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