CN104688779A - 一种蚕蛹的超高压提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蚕蛹的超高压提取方法，包括如下步骤：（1）取新鲜、干蚕蛹、加入水或浓度为50%~90%乙醇溶液，超高压提取1~5次，每次5~20min，即得提取液，其中，超高压提取的压强为200-600MPa，温度为20~80℃；（2）离心步骤（1）的提取液，得上清，浓缩，得浓缩液；（3）将步骤（2）的浓缩液冷藏24~48h，去除上层油脂，离心，浓缩，干燥，粉碎，即可。本发明超高压提取方法可以有效提取蚕蛹的有效成分，收率高，操作简便，应用前景良好。

Description

一种蚕蛹的超高压提取方法

技术领域

本发明涉及一种蚕蛹的超高压提取方法。 

背景技术

蚕蛹性平味甘，具有祛风、健脾、止消渴、镇惊安神、益精助阳等功效。《备急千金要方》说它“益精气，强男子阳道，治泄精。”《本草纲目》记载：“为末饮服，治小儿疳瘦，长肌，退热，除蛔虫;煎汁饮，止消渴。”药理研究表明，蚕蛹对机体糖、脂肪代谢能起到一定的调整作用。白僵蚕蛹油有降血脂的作用;用蚕蛹油提纯品制成丸剂，用于治疗高胆固醇血症，对降低胆固醇和改善肝功能有显著疗效。适量食用蚕蛹，对高血压、高血脂、慢性肝炎及营养不良患者有较好的辅助治疗功效。此外，蚕蛹中含有一种广谱免疫物质，对癌症有特殊疗效。据报道，日本等国已经从蚕蛹中生产出了α-干扰素，临床用于抗癌治疗。 

蚕蛹具有极高的营养价值，含有丰富的蛋白质（鲜蚕蛹含粗蛋白占51%）、脂肪酸（粗脂肪占29%）、维生素（包括维生素A、维生素B2、维生素D及麦角甾醇等）。蚕蛹的蛋白质含量在50%以上，远远高于一般食品，而且蛋白质中的必需氨基酸种类齐全。蚕蛹蛋白质由18种氨基酸组成，其中人体必需的8种氨基酸含量很高。蚕蛹中的这8种人体必需的氨基酸含量大约是猪肉的2倍、鸡蛋的4倍、牛奶的10倍，且营养均衡、比例适当，是一种优质的昆虫蛋白质。 

超高压提取(u ltrah igh-pressure ex traction,UHPE)，也称超高冷等静压提取，是指用100～1000MPa的流体静压力作用于提取溶剂和中药的混合液上，并在预定压力下保持一段时间，使植物细胞内外压力达到平衡后迅速卸压。由于细胞内外渗透压力忽然增大，细胞膜的结构发生变化，使得细胞内的有效成分能够穿过细胞的各种膜而转移到细胞外的提取液中，达到提取中药有效成分的目的。超高压提取可以有效提取黄酮类、皂苷类、多糖类和生物碱类等有效成。 

目前，未见采用超高压方法提取蚕蛹的报道。 

发明内容

本发明提供了一种新的蚕蛹的超高压提取方法。 

本发明蚕蛹的超高压提取方法，包括如下步骤： 

（1）取新鲜、干蚕蛹，以水或浓度为50%～90%乙醇溶液为溶剂，匀浆， 超高压提取1～5次，每次5～20min，即得提取液，其中，超高压提取的压强为100-800MPa，温度为20～80℃； 

（2）过滤步骤（1）的提取液，得上清液，浓缩，浓缩液中加入10%～40%（w/v）的中性氧化铝； 

（3）将步骤（2）的浓缩液冷藏24～48h，去除上层油脂，离心，得上清液，浓缩，干燥，粉碎，即可。 

步骤（1）中，所述溶剂的用量为蚕蛹的6～10倍（v/w）。优选地，所述溶剂的用量为蚕蛹的6～8倍（v/w）。 

步骤（1）中，用匀浆机对加入溶剂的蚕蛹进行匀浆。 

步骤（1）中，所述乙醇溶液的浓度为60%～80%。优选地，所述乙醇溶液的浓度为70%。 

步骤（1）中，所述超高压提取的次数为2～3次，提取时间为15～20min。 

步骤（1）中，所述超高压提取的压强为200～600MPa。优选地，所述超高压提取的压强为500MPa 

步骤（1）中，所述超高压提取的温度为50～70℃。优选地，所述超高压提取的温度为60℃。 

步骤（2）中，所述浓缩是浓缩至相对密度为1.05～1.25（50℃测）。 

步骤（2）中，所述浓缩液中加入20～30%（w/v）中性氧化铝脱色、脱臭。优选地，所述中性氧化铝的用量为25%（w/v）。 

步骤（3）中，所述冷藏的温度为0～15℃。 

步骤（3）中，所述离心的温度为5～15℃，转速10000r/min。 

目前通常采用酶解的方法来提高蚕蛹蛋白质的收率，操作复杂、耗时长，在制备过程中易受微生物的污染。在质量控制方面未对蚕蛹的功效成分氨基酸进行检测。 

而本发明采用超高压提取方法，可以高效提取蚕蛹的有效成分，收率高、耗时短、不易被污染，制得的提取物中，氨基酸总量高达199g，蛋白质总量高达326g。 

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明权利要求书记载的内容所实现的技术均属于本发明的范围。 

附图说明

图1为氨基酸的含量测定方法的标准图谱。 

具体实施方式

Ⅰ、氨基酸的含量测定方法（方法来源：食品中氨基酸的测定方法GB/T5009.124—2003） 

1.原理 

食品蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱 分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。 

2.试剂 

全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为往离子水。 

2.1浓盐酸：优级纯。 

2.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。 

2.3苯酚：需重蒸馏。 

2.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L 

2.5缓冲液： 

2.5.1pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na₃C₆H₅O₇.2H₂O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2。 

2.5.2pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。 

2.5.3pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。 

2.5.4pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。 

2.6茚三酮溶液 

2.6.1pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加进冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。 

2.6.2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加进4g水合茚三酮（C9H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C₁₈H₁₀O₆.2H₂O）搅拌至完全溶解。 

2.7高纯氮气：纯度99.99%。 

2.8冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合 

3.仪器和设备 

3.1真空泵 

3.2恒温干燥箱 

3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。用往离子水冲洗干净并烘干。 

3.4真空干燥器（温度可调节） 

3.5日本日立(Hitachi,Japan)L-8900型全自动氨基酸分析仪天美(中国)科学仪器有限公司 

4.检测方法 

4.1试样处理 

样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。 

4.2分析步骤 

4.2.1称样 

正确称取一定量样品，精确到0.0001g。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的样品防于水解管中。 

4.2.2水解 

在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定），含水量高的样品（如牛奶）可加进等体积的浓盐酸，加进新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放进冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0psi），然后充进高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。 

打开水解管，将水解液过滤后，用往离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50ml容量瓶内，用往离子水定容。吸取滤液1ml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40～50℃干燥，残留物用1～2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mlpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。 

4.2.3测定 

正确吸取0.200ml混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓度为5.00nmol/50μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标法测定样品测定液的氨基酸含量。 

4.2.4结果计算 

按下式计算 

$X=\frac{c\×\frac{1}{50}\×F\×V\×M}{m\×{10}^9}\×100$

式中： 

X—试样氨基酸的含量，单位为克每100克（g/100g）； 

C—试样测定液中氨基酸含量，单位为纳摩尔每50微升（nmol/50ul）； 

F—试样稀释倍数； 

V—水解后试样定容体积，单位为毫升（ml）； 

M—氨基酸分子量； 

m—试样质量，单位为克（g）； 

—折算成每毫升试样测定的氨基酸含量，单位为微摩尔每升（μmol/L）； 

10⁹—将试样含量有纳克（ng）折算成克（g)的系数。 

十六种氨基酸分子量： 

天冬氨酸：133.1；苏氨酸：119.1；丝氨酸：105.1;谷氨酸:147.1;脯氨酸:155.1;甘氨酸:75.1;丙氨酸:89.1;缬氨酸:117.2;蛋氨酸:149.2;异亮氨酸:131.2;亮氨酸:131.2;酪氨酸:181.2;苯丙氨酸:165.2;组氨酸:155.2；赖氨酸：146.2；精氨酸：174.2 

计算结果表示为：试样氨基酸含量在1g/100g以下，保留两位有效数字；含量在1g/100g以上，保留三位有效数字。 

精密度 

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的12%。 

4.2.5标准图谱 

Ⅱ、蛋白质的含量测定方法 

本发明中，蛋白质的含量采用GB50095-2010食品安全国家标准《食品中蛋白质的测定》第二法（分光光度法）进行测定。 

范围 

本标准规定了食品中蛋白质的测定方法。 

本标准第一法和第二法适用于各种食品中蛋白质的测定，第三法适用于蛋白质含量在10g/100g以上的粮食、豆类、奶粉、米粉、蛋白质粉等固体试样的筛选测定。 

本标准不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品测定。 

2原理 

食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在pH4.8的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长400nm下测定吸光度值，与标准系列比较定量，结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。 

3试剂和材料 

除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。 

3.1硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）。 

3.2硫酸钾（K₂SO₄）。 

3.3硫酸（H₂SO₄密度为1.84g/L）：优级纯。 

3.4氢氧化钠（NaOH）。 

3.5对硝基苯酚（C₆H₅NO₃）。 

3.6乙酸钠（CH₃COONa·3₂HO）。 

3.7无水乙酸钠（CH₃COONa）。 

3.8乙酸（CH₃COOH）：优级纯。 

3.937%甲醛（HCHO）。 

3.10乙酰丙酮（C₅H₈O₂）。 

3.11氢氧化钠溶液（300g/L）：称取30g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100mL。 

3.12对硝基苯酚指示剂溶液（1g/L）：称取0.1g对硝基苯酚指示剂溶于 2mL95%乙醇中，加水稀释至100mL。 

3.13乙酸溶液（1mol/L）：量取5.8mL乙酸（3.8），加水稀释至100mL。 

3.14乙酸钠溶液（1mol/L）：称取41g无水乙酸钠（3.7）或68g乙酸钠（3.6），加水溶解后并稀释至500mL。 

3.15乙酸钠-乙酸缓冲溶液：量取60mL乙酸钠溶液（3.14）与40mL乙酸溶液（3.13）混合，该溶液pH4.8. 

3.16显色剂：15mL甲醛（3.9）与7.8mL乙酰丙酮（3.10）混合，加水稀释至100mL，剧烈振摇混匀（室温下放置稳定3d）。 

3.17氨氮标准储备溶液（以氮计）（1.0g/L）：称取105℃干燥2h的硫酸铵0.4720g加水溶解后移于100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0mg氮。 

3.18氨氮标准使用溶液（0.1g/L）：用移液管吸取10.00mL氨氮标准储备液（3.17）于100mL容量瓶内，加水定容至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于0.1mg氮。 

4仪器和设备 

4.1分光光度计。 

4.2电热恒温水浴锅：100℃±0.5℃。 

4.310mL具塞玻璃比色管。 

4.4天平：感量为1mg。 

5分析步骤 

5.1试样消解 

称取经粉碎混匀过40目筛的固体试样0.1g～0.5g（精确至0.001g）、半固体试样0.2g～1g（精确至0.001g）或液体试样1g～5g（精确至0.001g），移入干燥的100mL或250mL定氮瓶中，加入0.1g硫酸铜、1g硫酸钾及5mL硫酸（3.3），摇匀后于瓶口放一小漏斗，将定氮瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热半小时。取下放冷，慢慢加入20mL水，放冷后移入50mL或100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。按同一方法做试剂空白试验。 

5.2试样溶液的准备 

吸取2.00mL～5.00mL试样或试剂空白消化液于50mL或100mL容量瓶内，加1滴～2滴对硝基苯酚指示剂溶液（3.12），摇匀后滴加氢氧化钠溶液（3.11）中和至黄色，再滴加乙酸溶液（3.13）至溶液无色，用水稀释至刻度，混匀。 

5.3标准曲线的绘制 

吸取0.00mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL和1.00mL氨氮标准使用溶液（相当于0.00μg、5.00μg、10.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg和100.0μg氮），分别置于10mL比色管中。加4.0mL乙酸钠-乙酸缓冲液（3.15）及4.0mL显色剂（3.16），加水稀释至刻度，混匀。置于100℃水浴中加热15min。取出用水冷却至室温后，移入1cm比色杯内，以零管为参比，于波长400nm处测量吸光度值，根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。 

5.4试样测定 

吸取0.50mL～2.00mL（约相当于氮＜100μg）试样溶液和同量的试剂空白溶液，分别于10mL比色管中。以下按3.3自“加4mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液（pH4.8）及4mL显色剂......”起操作。试样吸光度值与标准曲线比较定量或代入线性回归方程求出含量。 

6分析结果的表述 

试样中蛋白质的含量按下式进行计算。 

$X=\frac{(C-C_0)}{m\×\frac{V_2}{V_1}\×\frac{V_4}{V_3}\×1000\×1000}\×100\×F$

式中： 

X—试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）； 

c—试样测定液中氮的含量，单位为微克（μg）； 

c₀—试剂空白测定液中氮的含量，单位为微克（μg）； 

V₁—试样消化液定容体积，单位为毫升（mL）； 

V₂—制备试样溶液的消化液体积，单位为毫升（mL）； 

V₃—试样溶液总体积，单位为毫升（mL）； 

V₄—测定用试样溶液体积，单位为毫升（mL）； 

m—试样质量，单位为克（g）； 

F—氮换算为蛋白质的系数。一般食物为6.25；纯乳与纯乳制品为6.38；面粉为5.70；玉米、高粱为6.24；花生为5.46；大米为5.95；大豆及其粗加工制品为5.71；大豆蛋白制品为6.25；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30；复合配方食品为6.25. 

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量≥1g/100g时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量＜1g/100g时，结果保留两位有效数字。 

7精密度 

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 

8其他 

本方法当称样量为5.0g时，定量检出限为0.1mg/100g。 

下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细地描述： 

实施例1本发明蚕蛹的超高压提取方法 

称取来新鲜蚕蛹1430g（相当于干蚕蛹1000g），加入6倍量（v/w）水，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至100MPa，循环加压1次，每次20min，温度为20℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于60℃减压浓缩，相对密度为1.05（50℃测），加入10%的中性氧化铝，混匀，于0℃冷藏24小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为5℃，转速10000r/min。离心液于60℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物312g。 

实施例2本发明蚕蛹超高压提取方法 

称取来新鲜蚕蛹1430g（相当于干蚕蛹1000g），加入7倍量（v/w）50%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至200MPa，循环加压2次，每次15min，温度为40℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于65℃减压浓缩，相对密度为1.08（50℃测），加入20%的中性氧化铝，混匀，于6℃冷藏36小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为6℃，转速10000r/min。离心液于65℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物365g。 

实施例3本发明蚕蛹的超高压提取方法 

称取来新鲜蚕蛹1430g（相当于干蚕蛹1000g），加入8倍量（v/w）70%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至500MPa，循环加压4次，每次10min，温度为60℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于70℃减压浓缩，相对密度为1.15（50℃测），加入30%的中性氧化铝，混匀，于15℃冷藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为8℃，转速10000r/min。离心液于70℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物451g。 

实施例4本发明蚕蛹的超高压提取方法 

称取来新鲜蚕蛹1430g（相当于干蚕蛹1000g），加入10倍量（v/w）90%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至800MPa，循环加压5次，每次5min，温度为80℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于65℃减压浓缩，相对密度为1.25（50℃测），加入40%的中性氧化铝，混匀，于2℃冷藏24小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层 液于高速冷冻离心机里离心，温度为10℃，转速10000r/min。离心液于65℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物324g。 

实施例5本发明蚕蛹的超高压提取方法 

称取来干蚕蛹1000g，加入7倍量（v/w）水，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至150MPa，循环加压2次，每次10min，温度为30℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于80℃减压浓缩，相对密度为1.10（50℃测），加入15%的中性氧化铝，混匀，于5℃冷藏36小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为15℃，转速10000r/min。离心液于80℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物336g。 

实施例6本发明蚕蛹的超高压提取方法 

称取来干蚕蛹1000g，加入8倍量（v/w）60%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至400MPa，循环加压3次，每次15min，温度为50℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于70℃减压浓缩，相对密度为1.15（50℃测），加入25%的中性氧化铝，混匀，于10℃冷藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为12℃，转速10000r/min。离心液于70℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物469g。 

实施例7本发明蚕蛹的超高压提取方法 

称取来干蚕蛹1000g，加入9倍量（v/w）80%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至600MPa，循环加压4次，每次5min，温度为70℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于60℃减压浓缩，相对密度为1.20（50℃测），加入35%的中性氧化铝，混匀，于12℃冷藏36小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为5℃，转速10000r/min。离心液于60℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物408g。 

实施例8本发明蚕蛹的超高压提取方法 

称取来干蚕蛹1000g，加入8倍量（v/w）70%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至700MPa，循环加压1次，每次15min，温度为60℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于75℃减压浓缩，相对密度为1.06（50℃测），加入30%的中性氧化铝，混匀，于8℃冷藏24小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为10℃，转速10000r/min。离心液于75℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物413g。 

实施例9本发明蚕蛹的超高压提取方法的参数筛选 

称取来干蚕蛹9份，各1000g，加入8倍量（v/w）70%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,分别升压至100MPa、200MPa、300MPa、400MPa、500MPa、600MPa、700MPa、800MPa、900MPa，循环加压2次，每次15min，温度为60℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于75℃减压浓缩，相对密度为1.06（50℃测），加入30%的中性氧化铝，混匀，于8℃冷藏24小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为10℃，转速10000r/min。离心液于75℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物。 

实验结果见表1 

表1不同压强对蚕蛹提取物中氨基酸和蛋白质总量的影响 

如表1所示，蚕蛹提取物中氨基酸和蛋白质的总量随着压强增大，先增加后降低。压强为100-800MPa时，氨基酸总量大于100g、蛋白质总量大于200g；，压强为300-600MPa时，氨基酸总量大于150g、蛋白质总量大于250g，压强为500MPa时，氨基酸总量和蛋白质总量最高，分别为193g和308g。 

本发明蚕蛹的超高压提取方法中，超高压处理的有效压强范围为100-800MPa，优选为300-600MPa，进一步优选为500MPa。超出权利范围氨基酸总量低于70g，蛋白质总量低于140g。 

实施例10本发明蚕蛹的超高压提取方法的参数筛选 

称取来干蚕蛹7份，各1000g，分别加入8倍量（v/w）水、50%、60%、70%、80%、90%、95%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至500MPa，循环加压2次，每次15min，温度为60℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于75℃减压浓缩，相对密度为1.10（50℃测），加入30%的中性氧化铝，混匀，于10℃冷藏24小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为10℃，转速10000r/min。离心液于75℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物。实验结果见表2 

表2不同提取溶剂对蚕蛹提取物中氨基酸和蛋白质总量的影响 

如表2所示，蚕蛹提取物中氨基酸和蛋白质的总量不同溶剂提取时存在差异。提取溶剂为水或50%～90%乙醇时，氨基酸总量大于100g、蛋白质总量大于210g；提取溶剂为60%～80%乙醇时，氨基酸总量大于150g、蛋白质总量大于250g，提取溶剂为70%乙醇时，氨基酸总量和蛋白质总量最高，分别为199g和326g。 

本发明蚕蛹的超高压提取方法中，超高压处理的提取溶剂为水或50%～90%乙醇，优选为60%～80%乙醇，进一步优选为70%乙醇。超出权利范围的氨基酸总量低于60g，蛋白质总量低于130g。 

实施例11本发明蚕蛹的超高压提取方法的参数筛选 

称取来干蚕蛹8份，各1000g，分别加入8倍量（v/w）70%乙醇，于匀浆机中匀浆，将匀浆液置于柔性容器装袋密封。置于超高压提取器中,升压至500MPa，循环加压2次，每次15min，温度分别为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，卸压，开盖取样，过滤。滤液于75℃减压浓缩，相对密度为1.10（50℃测），加入30%的中性氧化铝，混匀，于10℃冷藏24小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为10℃，转速10000r/min。离心液于75℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明蚕蛹提取物。 

实验结果见表3 

表3不同提取温度对蚕蛹提取物中氨基酸和蛋白质总量的影响 

如表3所示，蚕蛹提取物中氨基酸和蛋白质的总量在不同提取温度时的差异不大。各温度下下氨基酸总量高于100g，蛋白质总量高于200g：本发明蚕蛹的超高压提取方法中，超高压处理的温度为20～80℃，优选为50～70℃，进 一步优选为60℃。超出权利范围的氨基酸总量低于140g，蛋白质总量低于220g。 

对比实施例 

称取来干蚕蛹1000kg，加入70%的乙醇回流提取3次，每次分别加入8倍、6倍、6倍，过滤，滤液于70℃减压回收乙醇。回收纸无乙醇味，相对密度为1.05（50℃测），浓缩液于0℃冷藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为10℃，转速10000r/min。离心液于75℃减压浓缩、干燥、粉碎，即为蚕蛹提取物136g。 

实验结果见表4 

表4不同提取方法对蚕蛹提取物中氨基酸总量、蛋白质总量以及性状的影响 

如表4所示，本发明方法的氨基酸总量、蛋白质总量均比对比实施例方法高，且性状明显好于对比实施例方法。 

Claims (8)

1.一种蚕蛹的超高压提取方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取新鲜、干蚕蛹，加入水或浓度为50%~90%乙醇溶液，匀浆，在温度为20~80℃，压强为100-800MPa条件下，超高压提取1~5次，每次5~20min，即得提取液；

（2）过滤步骤（1）的提取液，得上清液，浓缩，浓缩液中加入10%~40%（w/v）的中性氧化铝；

（3）将步骤（2）的浓缩液冷藏24~48h，去除上层油脂后，离心，得上清液，浓缩，干燥，粉碎，即可。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1）中，所述溶剂的用量为蚕蛹的6~10倍（v/w）。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1）中，所述用匀浆机对加入溶剂的蚕蛹进行匀浆。

4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述溶剂的用量为蚕蛹的6~8倍（v/w）。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1）中，所述乙醇溶液的浓度为60%~80%。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1）中，所述超高压提取的次数为2~3次，提取时间为15~20min。

7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1）中，所述超高压提取的压强为300~600MPa,选为提取的压强为500MPa。

8.权利要求1~7任一项所述方法制备的蚕蛹提取物。