CN104684914B

CN104684914B - 吡咯并苯并二氮杂卓

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Publication number: CN104684914B
Application number: CN201380035167.5A
Authority: CN
Inventors: 菲利普·威尔逊·霍华德; 戴维·瑟斯顿; 洪达克·米拉祖尔·拉赫曼
Original assignee: ADC Therapeutics SA; UCL Biomedica PLC
Current assignee: MedImmune Ltd
Priority date: 2012-04-30
Filing date: 2013-04-30
Publication date: 2017-12-15
Anticipated expiration: 2033-04-30
Also published as: JP2015515972A; BR112014027143B1; IN2014MN02092A; US9376440B2; CN104684914A; EP2855482B1; MX2014013098A; US20150133435A1; CA2871172C; JP6157596B2; HK1208444A1; KR101960129B1; AU2013255613B2; NZ701290A; KR20150016245A; BR112014027143A2; EP2855482A1; MX369715B; CA2871172A1; ZA201407759B

Abstract

发现具有基于(1‑甲基‑1H‑吡咯‑3‑基)苯基的氨基残基的吡咯并苯并二氮杂(PBD)是具有改善的细胞毒性和DNA结合性能的高度有效的化合物。

Description

吡咯并苯并二氮杂卓

技术领域

本发明涉及吡咯并苯并二氮杂(吡咯并苯并二氮杂卓，pyrrolobenzodiazepin)(PBD)以及尤其涉及PBD单体，其具有包含取代基的基于4-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)苄基的氨基酸残基以及涉及用于合成PBD 单体的方法。

背景技术

一些吡咯并苯并二氮杂(PBD)具有识别和结合DNA的特定序列的能力；优选的序列是PuGPu。于1965年发现第一种PBD抗肿瘤抗生素，安曲霉素(Leimgruber,et al.,J.Am.Chem.Soc.,87,5793-5795(1965)； Leimgruber,et al.,J.Am.Chem.Soc.,87,5791-5793(1965))。自那以后，已经报道了多种天然存在的PBD，并且针对各种类似物已经开发了10种以上的合成路线(Thurston,et al.,Chem.Rev.1994,433-465(1994))。家族成员包括阿比霉素(abbeymycin)(Hochlowski,et al.,J.Antibiotics,40,145-148 (1987))、芝加霉素(Konishi,et al.,J.Antibiotics,37,200-206(1984))、 DC-81(日本专利58-180487；Thurston,et al.,Chem.Brit.,26,767-772(1990)； Bose,et al.,Tetrahedron,48,751-758(1992))、甲基氨茴霉素(Kuminoto,et al.,J.Antibiotics,33,665-667(1980))、新氨茴霉素A和B(Takeuchi,et al.,J. Antibiotics,29,93-96(1976))、porothramycin(Tsunakawa,et al.,J.Antibiotics, 41,1366-1373(1988))、prothracarcin(Shimizu,etal,J.Antibiotics,35, 972-978(1982)；Langley and Thurston,J.Org.Chem.,52,91-97(1987))、西班米星(DC-102)(Hara,et al.,J.Antibiotics,41,702-704(1988)；Itoh,etal.,J. Antibiotics,41,1281-1284(1988))、西伯利亚霉素(Leber,et al.,J.Am.Chem.Soc.,110,2992-2993(1988))和托马霉素(Arima,et al.,J.Antibiotics,25, 437-444(1972))。PBD具有以下通式结构：

它们的不同之处在于在它们的芳族A环和吡咯并C环中取代基的数量、类型和位置，以及在于C环的饱和度。在B环中，在N10-C11位置 (其是负责烷基化DNA的亲电子中心)处，存在亚胺(N＝C)、甲醇胺 (NH-CH(OH))、或甲醇胺甲醚(NH-CH(OMe))。在手性C11a位置处，所有的已知的天然产物具有(S)-构型，当从C环向着A环观看时，该手性位置为它们提供右手旋转。这赋予它们适当的三维形状，用于与B型DNA的小沟的异螺旋性(isohelicity)，从而导致在结合位点处的滑动配合(Kohn,In Antibiotics III.Springer-Verlag,NewYork,pp.3-11(1975)；Hurley and Needham-VanDevanter,Acc.Chem.Res.,19,230-237(1986))。它们在小沟中形成加合物的能力使得它们能够干扰DNA加工，因而它们可用作抗肿瘤剂。在Thurston,D.E.,et al.,Chem.Rev.,1994,94,433-465和Thurston,D.E., etal.,Chem.Rev.,2011,111,2815-2864中已经综述了上述化合物的合成。

已经报道了PBD与吡咯和咪唑的多种共轭物，如：

其中n＝1-3(Damayanthi,Y.,et al.,Journal of Organic Chemistry,64(1),290-292(1999))；

其中n＝1-3以及

其中n＝1-2(Kumar,R.and Lown,J.W.Oncology Research,13(4), 221-233(2003))；Kumar,R.,et al.,Heterocyclic Communications,8(1),19-26 (2002))；

其中n＝1-4(Baraldi,P.G.,et al.,Journal of Medicinal Chemistry,42(25),5131-5141(1999))；

其中n＝3(Wells,G.,et al.,Proc.Am.Assoc.Canc.Res.,2003,44,452)。

在WO 2007/039752和Wells,G,et al.,Journal of Medicinal Chemistry 2006,49,5442-5461中，一些本发明人披露(研究中)了以下化合物(GWL-78)

和相关结构。与它的成分PBD和二吡咯成分相比，这种化合物显示 DNA结合亲和力的最高达50倍增加。

在WO 2005/085177中，一些本发明人披露了包含二芳基核心的氨基酸，其在DNA结合中可以具有有用的性能。

本发明人现在已经发现，可以改善现有技术的PBD共轭物的性能，尤其是细胞毒性和DNA结合。尤其是，本发明涉及，在PBD共轭物中加入基于单4-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)苄基的氨基残基以及基于单杂芳基的氨基残基会导致高度有效的化合物。

本发明的第一方面提供了式I的化合物：

或其盐或溶剂化物，其中：

虚线双键表示在C2和C3之间存在单键或双键；

R²选自-H、-OH、＝O、＝CH₂、-CN、-R、OR、卤基、二卤基、＝CHR、＝CHRR’、-O-SO₂-R、CO₂R和COR；

R⁷选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NRR’、硝基、Me₃Sn 和卤基；

其中R和R’独立地选自可选取代的C_1-7烷基、C_3-20杂环基和C_5-20芳基；

R¹⁰和R¹¹一起形成双键，或分别选自H和QR^Q，其中Q选自O、S 和NH以及R^Q是H或C_1-7烷基或H和SO_xM，其中x是2或3，以及M 是单价药用阳离子；

A是：

其中X和Y选自：CH和NMe；COH和NMe；CH和S；N和NMe； N和S；

B是单键或

其中X和Y是如上述所定义；以及

R¹是C_1-4烷基。

因此，B1可以具有以下结构：

本发明的第二方面提供了用于合成式I的化合物的方法。

本发明的第三方面提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本发明的第一方面的化合物和药用载体或稀释剂。

本发明的第四方面提供了本发明的第一方面的化合物应用于治疗方法。

本发明的第五方面提供了本发明的第一方面的化合物在制造用于治疗增生性疾病的药物中的用途。该方面还提供了第一方面的化合物用于治疗增生性疾病的方法。

本发明的第六方面提供了用于治疗患有增生性疾病的患者的方法，包括给予所述患者治疗上可接受量的第一方面的化合物或第三方面的组合物。

在本发明的第四至第六方面中，可以单独或连同其它治疗一起，同时或依次地给予本发明的化合物，其取决于待治疗的病症。在本发明的第三方面中，药物组合物可以包含一种或多种(例如，两种、三种或四种)另外的活性剂。

定义

取代基

如在本文中所使用的，短语“可选取代的”是指母基团，其可以是未取代的或其可以是取代的。

除非另有规定，如在本文中所使用的，术语“取代的”是指母基团，其具有一个或多个取代基。在本文中在常规意义上使用术语“取代基”并且是指化学部分，其共价连接于，或如果合适的话，稠合于母基团。各种各样的取代基是众所周知的，以及用于它们的形成和引入各种母基团的方法也是众所周知的。

下文更详细描述取代基的实例。

C_1-7烷基：如在本文中所使用的，术语“C_1-7烷基”是指通过从烃化合物的碳原子除去氢原子所获得的单价部分，其中上述烃化合物具有1至7 个碳原子，其可以是脂族或脂环族的，以及其可以是饱和或不饱和的(例如，部分不饱和的、完全不饱和的)。因此，术语“烷基”包括亚类烯基、炔基、环烷基等(下文讨论的)。

饱和的烷基的实例包括但不限于甲基(C₁)、乙基(C₂)、丙基(C₃)、丁基 (C₄)、戊基(C₅)、己基(C₆)和庚基(C₇)。

饱和直链烷基的实例包括但不限于甲基(C₁)、乙基(C₂)、正丙基(C₃)、正丁基(C₄)、正戊基(戊基)(C₅)、正己基(C₆)和正庚基(C₇)。

饱和支链烷基的实例包括异丙基(C₃)、异丁基(C₄)、仲丁基(C₄)、叔丁基(C₄)、异戊基(C₅)、和新戊基(C₅)。

C_2-7烯基：如在本文中所使用的，术语“C_2-7烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的烷基。

不饱和烯基的实例包括但不限于乙烯基(ethenyl)(乙烯基(vinyl) -CH＝CH₂)、1-丙烯基(-CH＝CH-CH₃)、2-丙烯基(烯丙基，-CH-CH＝CH₂)、异丙烯基(1-甲基乙烯基，-C(CH₃)＝CH₂)、丁烯基(C₄)、戊烯基(C₅)、和己烯基(C₆)。

C_2-7炔基：如在本文中所使用的，术语“C_2-7炔基”是指具有一个或多个碳-碳三键的烷基。

不饱和炔基的实例包括但不限于乙炔基(ethynyl)(乙炔基(ethinyl) -C≡CH)和2-丙炔基(炔丙基，-CH₂-C≡CH)。

C_3-7环烷基：如在本文中所使用的，术语“C_3-7环烷基”是指也是环基的烷基；即，通过从环烃(碳环)化合物的脂环原子除去氢原子所获得的单价部分，该部分具有3至7个碳原子，包括3至7个环原子。

环烷基的实例包括但不限于那些环烷基，其衍生自：

饱和单环烃化合物：

环丙烷(C₃)、环丁烷(C₄)、环戊烷(C₅)、环己烷(C₆)、环庚烷(C₇)、甲基环丙烷(C₄)、二甲基环丙烷(C₅)、甲基环丁烷(C₅)、二甲基环丁烷(C₆)、甲基环戊烷(C₆)、二甲基环戊烷(C₇)和甲基环己烷(C₇)；

不饱和单环烃化合物：

环丙烯(C₃)、环丁烯(C₄)、环戊烯(C₅)、环己烯(C₆)、甲基环丙烯(C₄)、二甲基环丙烯(C₅)、甲基环丁烯(C₅)、二甲基环丁烯(C₆)、甲基环戊烯(C₆)、二甲基环戊烯(C₇)和甲基环己烯(C₇)；以及

饱和多环烃化合物：

降蒈烷(C₇)、降蒎烷(C₇)、降冰片烷(C₇)。

C_3-20杂环基：如在本文中所使用的，术语“C_3-20杂环基”是指通过从杂环化合物的环原子除去氢原子所获得的单价部分，该部分具有3至20个环原子，其中1至10个是环杂原子。优选地，每个环具有3至7个环原子，其中1至4个是环杂原子。

在此上下文中，前缀(例如C_3-20、C_3-7,C_5-6等)表示环原子的数目、或环原子的数目范围，而不论是碳原子或杂原子。例如，如在本文中所使用的，术语“C_5-6杂环基”是指具有5个或6个环原子的杂环基。

单环杂环基的实例包括但不限于那些单环杂环基，其衍生自：

N₁：氮丙啶(C₃)、氮杂环丁烷(C₄)、吡咯烷(四氢化吡咯)(C₅)、吡咯啉 (例如，3-吡咯啉、2,5-二氢吡咯)(C₅)、2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯 (isopyrrole)，异吡咯(isoazole))(C₅)、哌啶(C₆)、二氢吡啶(C₆)、四氢吡啶(C₆)、氮杂(C₇)；

O₁：氧杂环丙烷(C₃)、氧杂环丁烷(C₄)、氧杂环戊烷(四氢呋喃)(C₅)、氧杂环戊二烯(二氢呋喃)(C₅)、氧杂环己烷(四氢吡喃)(C₆)、二氢吡喃(C₆)、吡喃(C₆)、氧杂环庚三烯(C₇)；

S₁：硫杂环丙环(C₃)、硫杂环丁烷(C₄)、硫杂环戊烷(四氢噻吩)(C₅)、硫杂环己烷(四氢噻喃)(C₆)、硫杂环庚烷(C₇)；

O₂：二氧杂环戊烷(C₅)、二氧杂环己烷(C₆)、和二氧杂环庚烷(C₇)；

O₃：三氧杂环己烷(C₆)；

N₂：咪唑烷(C₅)、吡唑烷(二氮杂环戊烷)(C₅)、咪唑啉(C₅)、吡唑啉(二氢吡唑)(C₅)、哌嗪(C₆)；

N₁O₁：四氢噁唑(C₅)、二氢噁唑(C₅)、四氢异噁唑(C₅)、二氢异噁唑(C₅)、吗啉(C₆)、四氢噁嗪(C₆)、二氢噁嗪(C₆)、噁嗪(C₆)；

N₁S₁：噻唑啉(C₅)、噻唑烷(C₅)、硫代吗啉(C₆)；

N₂O₁：噁二嗪(C₆)；

O₁S₁：氧硫杂环戊烷(C₅)和氧硫杂环己烷(噻噁烷)(C₆)；以及，

N₁O₁S：噁噻嗪(C₆)。

取代的单环杂环基的实例包括那些取代的单环杂环基，其衍生自糖类 (以环形式)，例如，呋喃糖(C₅)，如阿拉伯呋喃糖、来苏呋喃糖、呋喃核糖、和木糖呋喃糖，以及吡喃糖(C₆)，如吡喃糖阿洛糖、吡喃阿糖 (altropyranose)、吡喃葡糖、吡喃甘露糖、吡喃古洛糖、吡喃艾杜糖、吡喃半乳糖、和吡喃塔罗糖。

C_5-20芳基：如在本文中所使用的，术语“C_5-20芳基”是指通过从芳族化合物的芳环原子除去氢原子所获得的单价部分，该部分具有3至20个环原子。优选地，每个环具有5至7个环原子。

在此上下文中，前缀(例如C_3-20、C_5-7、C_5-6等)表示环原子的数目，或环原子的数目范围，而不论是碳原子或杂原子。例如，如在本文中所使用的，术语“C_5-6芳基”是指具有5个或6个环原子的芳基。

环原子可以都是碳原子，如在“碳芳基”中。

碳芳基的实例包括但不限于那些碳芳基，其衍生自苯(即苯基)(C₆)、萘(C₁₀)、甘菊环(C₁₀)、蒽(C₁₄)、菲(C₁₄)、并四苯(C₁₈)、和芘(C₁₆)。

包含稠环(其至少之一是芳族环)的芳基的实例包括但不限于这样的基团，其衍生自茚满(例如2,3-二氢-1H-茚)(C₉)、茚(C₉)、异茚(C₉)、四氢化萘(1,2,3,4-四氢萘(C₁₀)、二氢苊(C₁₂)、芴(C₁₃)、非那烯(C₁₃)、醋菲(C₁₅)、和醋蒽(C₁₆)。

可替换地，环原子可以包括一个或多个杂原子，如在“杂芳基”中。单环杂芳基的实例包括但不限于那些单环杂芳基，其衍生自：

N₁：吡咯(pyrrole)(吡咯(azole))(C₅)、吡啶(吖嗪)(C₆)；

O₁：呋喃(氧杂环戊二烯)(C₅)；

S₁：噻吩(thiophene)(噻吩(thiole))(C₅)；

N₁O₁：噁唑(C₅)、异噁唑(C₅)、异噁嗪(C₆)；

N₂O₁：噁二唑(呋咱)(C₅)；

N₃O₁：噁三唑(C₅)；

N₁S₁：噻唑(C₅)、异噻唑(C₅)；

N₂：咪唑(1,3-二唑)(C₅)、吡唑(1,2-二唑)(C₅)、哒嗪(1,2-二嗪)(C₆)、嘧啶(1,3-二嗪)(C₆)(例如，胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、吡嗪(1,4-二嗪)(C₆)；

N₃：三唑(C₅)、三嗪(C₆)；以及，

N₄：四唑(C₅)。

包含稠环的杂芳基的实例包括但不限于：

C₉(具有2个稠环)，其衍生自苯并呋喃(O₁)、异苯并呋喃(O₁)、吲哚(N₁)、异吲哚(N₁)、中氮茚(N₁)、二吲哚啉(N₁)、异吲哚啉(N₁)、嘌呤(N₄)(例如，腺嘌呤、鸟嘌呤)、苯并咪唑(N₂)、吲唑(N₂)、苯并噁唑(N₁O₁)、苯并异噁唑(N₁O₁)、苯并间二氧杂环戊烯(O₂)、苯并呋咱(N₂O₁)、苯并三唑(N₃)、苯并噻吩(S₁)、苯并噻唑(N₁S₁)、苯并噻二唑(N₂S)；

C₁₀(具有2个稠环)，其衍生自色烯(O₁)、异色烯(O₁)、苯并二氢吡喃 (O₁)、异苯并二氢吡喃(O₁)、苯并二氧杂环己烷(O₂)、喹啉(N₁)、异喹啉(N₁)、喹嗪(N₁)、苯并噁嗪(N₁O₁)、苯并二嗪(N₂)、吡啶并吡啶(N₂)、喹喔啉(N₂)、喹唑啉(N₂)、噌啉(N₂)、酞嗪(N₂)、二氮杂萘(N₂)、蝶啶(N₄)；

C₁₁(具有2个稠环)，其衍生自苯并二氮杂(N₂)；

C₁₃(具有3个稠环)，其衍生自咔唑(N₀)、二苯并呋喃(O₁)、二苯并噻吩(S₁)、咔啉(N₂)、萘嵌间二氮杂苯(N₂)、吡啶并吲哚(N₂)；以及，

C₁₄(具有3个稠环)，其衍生自吖啶(N₁)、呫吨(O₁)、噻吨(S₁)、氧杂蒽烯(O₂)、氧硫杂蒽(O₁S₁)、吩嗪(N₂)、吩噁嗪(N₁O₁)、吩噻嗪(N₁S₁)、噻蒽(S₂)、菲啶(N₁)、菲咯啉(N₂)、吩嗪(N₂)。

上述基团，不论是单独或另一取代基的部分，可以本身可选地被一个或多个基团取代，上述基团选自它们本身和以下列出的另外的取代基。

卤基：-F、-Cl、-Br、和-I。

羟基：-OH。

醚：-OR，其中R是醚取代基，例如，C_1-7烷基(还被称为C_1-7烷氧基，下文讨论的)、C_3-20杂环基(还被称为C_3-20杂环氧基)、或C_5-20芳基(还被称为C_5-20芳氧基)，优选C_1-7烷基。

烷氧基：-OR，其中R是烷基，例如，C_1-7烷基。C_1-7烷氧基的实例包括但不限于-OMe(甲氧基)、-OEt(乙氧基)、-O(nPr)(正丙氧基)、-O(iPr)(异丙氧基)、-O(nBu)(正丁氧基)、-O(sBu)(仲丁氧基)、-O(iBu)(异丁氧基)、和-O(tBu)(叔丁氧基)。

缩醛：-CH(OR¹)(OR²)，其中R¹和R²独立地是缩醛取代基，例如， C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基，或在“环状”缩醛基团的情况下，R¹和R²，连同它们所连接的两个氧原子和它们所连接的碳原子一起形成具有4至8个环原子的杂环。缩醛基团的实例包括但不限于-CH(OMe)₂、-CH(OEt)₂、和-CH(OMe)(OEt)。

半缩醛：-CH(OH)(OR¹)，其中R¹是半缩醛取代基，例如，C_1-7烷基、 C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。半缩醛基团的实例包括但不限于-CH(OH)(OMe)和-CH(OH)(OEt)。

缩酮：-CR(OR¹)(OR²)，其中R¹和R²是如针对缩醛所定义的，以及R 是除氢以外的缩酮取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。缩酮基团的实例包括但不限于 -C(Me)(OMe)₂、-C(Me)(OEt)₂、-C(Me)(OMe)(OEt)、-C(Et)(OMe)₂、 -C(Et)(OEt)₂、和-C(Et)(OMe)(OEt)。

半缩酮：-CR(OH)(OR¹)，其中R¹是如针对半缩醛所定义，以及R是除氢以外的半缩酮取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。半缩醛基团的实例包括但不限于-C(Me)(OH)(OMe)、 -C(Et)(OH)(OMe)、-C(Me)(OH)(OEt)、和-C(Et)(OH)(OEt)。

氧基(酮基，-酮)：＝O。

硫酮(thione)(硫酮(thioketone))：＝S。

亚氨基(亚胺)：＝NR，其中R是亚氨基取代基，例如，氢、C_1-7烷基、 C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选氢或C_1-7烷基。酯基团的实例包括但不限于＝NH、＝NMe、＝NEt、和＝NPh。

甲酰基(羧甲醛，羧基醛)：-C(＝O)H。

酰基(酮基)：-C(＝O)R，其中R是酰基取代基，例如，C_1-7烷基(还被称为C_1-7烷基酰基或C_1-7烷酰基)、C_3-20杂环基(还被称为C_3-20杂环基酰基)、或C_5-20芳基(还被称为C_5-20芳酰基)，优选C_1-7烷基。酰基的实例包括但不限于-C(＝O)CH₃(乙酰基)、-C(＝O)CH₂CH₃(丙酰基)、-C(＝O)C(CH₃)₃(叔丁酰基)、和-C(＝O)Ph(苯甲酰基，苯酮)。

羧基(羧酸)：-C(＝O)OH。

硫代羧基(硫代羧酸)：-C(＝S)SH。

巯基羧基(巯基羧酸)：-C(＝O)SH。

硫羰羧基(硫羰羧酸)：-C(＝S)OH。

亚氨酸：-C(＝NH)OH。

异羟肟酸：-C(＝NOH)OH。

酯(羧酸酯，羧酸的酯，氧羰基)：-C(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。酯基团的实例包括但不限于-C(＝O)OCH₃、-C(＝O)OCH₂CH₃、-C(＝O)OC(CH₃)₃、和-C(＝O)OPh。

酰氧基(逆酯(reverse ester))：-OC(＝O)R，其中R是酰氧基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。酰氧基的实例包括但不限于-OC(＝O)CH₃(乙酰氧基)、-OC(＝O)CH₂CH₃、-OC(＝O)C(CH₃)₃、-OC(＝O)Ph、和-OC(＝O)CH₂Ph。

氧羰氧基：-OC(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。酯基团的实例包括但不限于-OC(＝O)OCH₃、-OC(＝O)OCH₂CH₃、-OC(＝O)OC(CH₃)₃、和-OC(＝O)OPh。

氨基：-NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，例如，氢、C_1-7烷基(还被称为C_1-7烷基氨基或二C_1-7烷基氨基)、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选H或C_1-7烷基，或在“环状”氨基的情况下，R¹和R²，连同它们所连接的氮原子一起形成具有4至8个环原子的杂环。氨基可以是伯氨基(-NH₂)、仲氨基(-NHR¹)、或叔氨基(-NHR¹R²)、和阳离子形式，可以是季氨基(-⁺NR¹R²R³)。氨基的实例包括但不限于-NH₂、-NHCH₃、-NHC(CH₃)₂、-N(CH₃)₂、-N(CH₂CH₃)₂、和-NHPh。环状氨基的实例包括但不限于氮丙啶并、氮杂环丁并、吡咯烷并、哌啶并、哌嗪并、吗啉代、和硫代吗啉代。

酰氨基(氨基甲酰基，氨基甲酰，氨基羰基，氨甲酰)：-C(＝O)NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，如针对氨基所定义的。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃、-C(＝O)N(CH₃)₂、-C(＝O)NHCH₂CH₃、和-C(＝O)N(CH₂CH₃)₂，以及这样的酰氨基，其中R¹和R²，连同它们所连接的氮原子一起，形成杂环结构，如在，例如，哌啶并羰基、吗啉代羰基、硫代吗啉代羰基、和哌嗪并羰基中。

硫代酰氨基(硫代氨基甲酰)：-C(＝S)NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，如针对氨基所定义的。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝S)NH₂、-C(＝S)NHCH₃、-C(＝S)N(CH₃)₂、和-C(＝S)NHCH₂CH₃。

酰基酰氨基(酰氨基)：-NR¹C(＝O)R²，其中R¹是酰胺取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选氢或C_1-7烷基，以及R²是酰基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选氢或 C_1-7烷基。酰胺基的实例包括但不限于-NHC(＝O)CH₃、-NHC(＝O)CH₂CH₃、和-NHC(＝O)Ph。R¹和R²可以一起形成环状结构，如在，例如，琥珀酰亚胺基、马来酰亚胺基、和邻苯二甲酰亚胺基中：

氨基羰氧基：-OC(＝O)NR¹R²，其中，R¹和R²独立地是氨基取代基，如针对氨基所定义的。氨基羰氧基的实例包括但不限于-OC(＝O)NH₂、 -OC(＝O)NHMe、-OC(＝O)NMe₂、和-OC(＝O)NEt₂。

脲基：-N(R¹)CONR²R³，其中R²和R³独立地是氨基取代基，如针对氨基所定义的，以及R¹是脲基取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选氢或C_1-7烷基。脲基的实例包括但不限于-NHCONH₂、 -NHCONHMe、-NHCONHEt、-NHCONMe₂、-NHCONEt₂、-NMeCONH₂、 -NMeCONHMe、-NMeCONHEt、-NMeCONMe₂、和-NMeCONEt₂。

胍基：-NH-C(＝NH)NH₂。

四唑基：具有4个氮原子和1个碳原子的五元芳族环，

亚氨基：＝NR，其中R是亚氨基取代基，例如，例如，氢、C_1-7烷基、 C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选H或C_1-7烷基。亚氨基的实例包括但不限于＝NH、＝NMe、和＝NEt。

脒(脒基)：-C(＝NR)NR₂，其中每个R是脒取代基，例如，氢、C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选H或C_1-7烷基。脒基团的实例包括但不限于-C(＝NH)NH₂、-C(＝NH)NMe₂、和-C(＝NMe)NMe₂。

硝基：-NO₂。

亚硝基：-NO。

叠氮基：-N₃。

氰基(腈(nitrile)，碳腈(carbonnitrile))：-CN。

异氰基：-NC。

氰氧基：-OCN。

异氰氧基：-NCO。

氰硫基(thiocyano)(氰硫基(thiocyanato))：-SCN。

异氰硫基(isothiocyano)(异氰硫基(isothiocyanato))：-NCS。

巯基(硫羟，氢硫基)：-SH。

硫醚(硫化物)：-SR，其中R是硫醚取代基，例如，C_1-7烷基(还被称为C_1-7烷硫基)、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。C_1-7烷硫基的实例包括但不限于-SCH₃和-SCH₂CH₃。

二硫化物：-SS-R，其中R是二硫化物取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基(在本文中还称为C_1-7烷基二硫化物)。 C_1-7烷基二硫化物基团的实例包括但不限于-SSCH₃和-SSCH₂CH₃。

锍化物(亚硫酰基，亚砜)：-S(＝O)R，其中R是锍化物取代基，例如， C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。锍化物基团的实例包括但不限于-S(＝O)CH₃和-S(＝O)CH₂CH₃。

砜(磺酰基)：-S(＝O)₂R，其中R是砜取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基，包括，例如，氟化或全氟化C_1-7烷基。砜基团的实例包括但不限于-S(＝O)₂CH₃(甲烷磺酰基，甲磺酰基)、-S(＝O)₂CF₃(三氟甲磺酰基)、-S(＝O)₂CH₂CH₃(乙磺酰基)、-S(＝O)₂C₄F₉(九氟丁磺酰基)、-S(＝O)₂CH₂CF₃(三氟乙磺酰基)、-S(＝O)₂CH₂CH₂NH₂(牛磺酰基)、-S(＝O)₂Ph(苯基磺酰基，苯磺酰基)、 4-甲基苯磺酰基(甲苯磺酰基)、4-氯苯磺酰基(氯苯磺酰基)、4-溴苯磺酰基 (溴苯磺酰基)、4-硝基苯基(硝基磺酰基)、2-萘磺酸酯(萘磺酰基)、和5-二甲基氨基萘-1-基磺酸酯(丹酰基)。

亚磺酸(亚磺基)：-S(＝O)OH、-SO₂H。

磺酸(磺基)：-S(＝O)₂OH、-SO₃H。

亚磺酸酯(亚磺酸的酯)：-S(＝O)OR，其中R是亚磺酸酯取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。亚磺酸酯基团的实例包括但不限于-S(＝O)OCH₃(甲氧基亚硫酰基；亚磺酸甲酯) 和-S(＝O)OCH₂CH₃(乙氧基亚硫酰基；亚磺酸乙酯)。

磺酸酯(磺酸的酯)：-S(＝O)₂OR，其中R是磺酸酯取代基，例如， C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。磺酸酯基团的实例包括但不限于-S(＝O)₂OCH₃(甲氧基磺酰基；磺酸甲酯) 和-S(＝O)₂OCH₂CH₃(乙氧基磺酰基；磺酸乙酯)。

亚硫酰氧基：-OS(＝O)R，其中R是亚硫酰氧基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。亚硫酰氧基的实例包括但不限于-OS(＝O)CH₃和-OS(＝O)CH₂CH₃。

磺酰氧基：-OS(＝O)₂R，其中R是磺酰氧基取代基，例如，C_1-7烷基、 C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。磺酰氧基的实例包括但不限于-OS(＝O)₂CH₃(甲磺酸酯)和-OS(＝O)₂CH₂CH₃(乙磺酸酯)。

硫酸酯：-OS(＝O)₂OR；其中R是硫酸酯取代基，例如，C_1-7烷基、 C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。硫酸酯基团的实例包括但不限于-OS(＝O)₂OCH₃和-SO(＝O)₂OCH₂CH₃。

氨磺酰(sulfamyl)(氨磺酰(sulfamoyl)；亚磺酸酰胺(sulfinic acid amide)；亚磺酰胺(sulfinamide))：-S(＝O)NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，如针对氨基所定义的。氨磺酰基团的实例包括但不限于-S(＝O)NH₂、-S(＝O)NH(CH₃)、-S(＝O)N(CH₃)₂、-S(＝O)NH(CH₂CH₃)、-S (＝O)N(CH₂CH₃)₂、和-S(＝O)NHPh。

亚磺酰氨基(sulfonamido)(亚磺酰氨基(sulfinamoyl)；磺酸的酰胺 (sulfonicacid amide)；磺酰胺(sulfonamide))：-S(＝O)₂NR¹R²，其中R¹和R²独立地是氨基取代基，如针对氨基所定义的。亚磺酰氨基的实例包括但不限于-S(＝O)₂NH₂、-S(＝O)₂NH(CH₃)、-S(＝O)₂N(CH₃)₂、-S(＝O)₂NH(CH₂CH₃) 、-S(＝O)₂N(CH₂CH₃)₂、和-S(＝O)₂NHPh。

磺氨基：-NR¹S(＝O)₂OH，其中R¹是氨基取代基，如针对氨基所定义的。磺氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)₂OH和-N(CH₃)S(＝O)₂OH。

磺酰氨基(sulfonamino)：-NR¹S(＝O)₂R，其中R¹是氨基取代基，如针对氨基所定义的，以及R是磺酰氨基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优越C_1-7烷基。磺酰氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)₂CH₃和-N(CH₃)S(＝O)₂C₆H₅。

亚硫酰氨基：-NR¹S(＝O)R，其中R¹是氨基取代基，如针对氨基所定义的，以及R是亚硫酰氨基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基。亚硫酰氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)CH₃和-N(CH₃)S(＝O)C₆H₅。

膦基(膦)：-PR₂，其中R是膦基取代基，例如，-H、C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基、或C_5-20芳基。膦基的实例包括但不限于-PH₂、-P(CH₃)₂、-P(CH₂CH₃)₂、-P(t-Bu)₂、和-P(Ph)₂。

二氧磷基：-P(＝O)₂。

氧膦基(氧化膦)：-P(＝O)R₂，其中R是氧膦基取代基，例如，C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选C_1-7烷基或C_5-20芳基。氧膦基的实例包括但不限于-P(＝O)(CH₃)₂、-P(＝O)(CH₂CH₃)₂、-P(＝O)(t-Bu)₂、和-P(＝O)(Ph)₂。

膦酸(膦酰基)：-P(＝O)(OH)₂。

膦酸酯(膦酰基酯)：-P(＝O)(OR)₂，其中R是膦酸酯取代基，例如，-H、 C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基、或C_5-20芳基。膦酸酯基团的实例包括但不限于-P(＝O)(OCH₃)₂、-P(＝O)(OCH₂CH₃)₂、-P(＝O)(O-t-Bu)₂、和-P(＝O)(OPh)₂。

磷酸(膦酰氧基)：-OP(＝O)(OH)₂。

磷酸酯(膦酰氧基酯)：-OP(＝O)(OR)₂，其中R是磷酸酯取代基，例如， -H、C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基、或C_5-20芳基。磷酸酯基团的实例包括但不限于-OP(＝O)(OCH₃)₂、-OP(＝O)(OCH₂CH₃)₂、-OP(＝O)(O-t-Bu)₂、和-OP(＝O)(OPh)₂。

亚磷酸：-OP(OH)₂。

亚磷酸酯：-OP(OR)₂，其中R是亚磷酸酯取代基，例如，-H、C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基、或C_5-20芳基。亚磷酸酯基团的实例包括但不限于-OP(OCH₃)₂、-OP(OCH₂CH₃)₂、-OP(O-t-Bu)₂、和-OP(OPh)₂。

亚磷酰胺：-OP(OR¹)-NR² ₂，其中R¹和R²是亚磷酰胺取代基，例如， -H、(可选取代的)C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选-H、C_1-7烷基、或C_5-20芳基。亚磷酰胺基团的实例包括但不限于-OP(OCH₂CH₃)-N(CH₃)₂、-OP(OCH₂CH₃)-N(i-Pr)₂、和-OP(OCH₂CH₂CN)-N(i-Pr)₂。

氨基磷酸酯：-OP(＝O)(OR¹)-NR² ₂，其中R¹和R²是氨基磷酸酯取代基，例如，-H、(可选取代的)C_1-7烷基、C_3-20杂环基、或C_5-20芳基，优选 -H、C_1-7烷基、或C_5-20芳基。氨基磷酸酯基团的实例包括但不限于-OP(＝O)(OCH₂CH₃)-N(CH₃)₂、-OP(＝O)(OCH₂CH₃)-N(i-Pr)₂、和-OP(＝O)(OCH₂CH₂CN)-N(i-Pr)₂。

氮保护基

氮保护基是本领域中众所周知的。优选的氮保护基是氨基甲酸酯保护基，其具有以下通式：

大量的可能的氨基甲酸酯氮保护基列于Wuts,P.G.M.and Greene, T.W.,Protective Groups in Organic Synthesis,4^th Edition,Wiley-Interscience, 2007的第706至771页，其以引用方式结合于本文。

特别优选的保护基包括Alloc、Troc、Teoc、BOC、Doc、Hoc、TcBOC、 Fmoc、1-Adoc和2-Adoc。

羟基保护基

羟基保护基是本领域中众所周知的。大量的适宜基团描述于Wuts, P.G.M.andGreene,T.W.,Protective Groups in Organic Synthesis,4^th Edition, Wiley-Interscience,2007的第16至366页，其以引用方式结合于本文。

特别令人感兴趣的类别包括甲硅烷基醚、甲基醚、烷基醚、苄基醚、酯、苯甲酸酯、碳酸酯、和磺酸酯。

特别优选的保护基包括THP。

增生性疾病

本领域的技术人员能够容易地确定一种候选化合物是否治疗任何特定的细胞类型的增生性病症。例如，在以下实施例中描述了可以方便地用来评估由特定化合物提供的活性的测定。

术语“增生性疾病”是指不是所希望的过度的或不正常的细胞的不需要的或不受控制的细胞增殖，如，肿瘤性或增生性生长(无论是在体外或体内)。

增生性病症的实例包括但不限于良性细胞增殖、恶化前细胞增殖、和恶性细胞增殖，包括但不限于新生物和肿瘤(例如，组织细胞瘤、胶质瘤、星形细胞瘤、骨瘤)、癌症(例如，肺癌、小细胞肺癌、肝细胞癌、胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)，其包括胃肠癌、肠癌、结肠癌、肝细胞癌、乳癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、涎腺癌、肾癌(kidney cancer) 或肾癌(renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、头颈部癌、膀胱癌、胰癌、脑癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤、黑素瘤)、白血病、银屑病、骨病、纤维增生症(例如结缔组织的纤维增生症)、和动脉粥样硬化。特别感兴趣的癌症包括但不限于白血病和卵巢癌。

可以治疗任何类型的细胞，包括但不限于肺、胃肠(包括，例如肠、结肠)、乳腺(乳房的)、卵巢、前列腺、肝(liver)(肝的，hepatic)、肾(kidney) (肾的，renal)、膀胱、胰腺、脑、和皮肤。

特别感兴趣的癌症包括但不限于乳癌(ER阳性和ER阴性)、胰腺癌、肺癌和白血病。

治疗方法

如上所述，本发明提供了本发明的第一方面的化合物在治疗方法中的应用。

术语“治疗有效量”是足以对患者显示益处的量。上述益处可以是至少改善至少一种症状。给予的实际量、以及给予的速率和时间进程将取决于待治疗的病症的性质和严重程度。治疗处方，例如，对用量的决定，是在全科医师和其它医生的责任范围内。

可以单独或连同其它治疗一起(同时或依次地)来给予化合物，其取决于待治疗的病症。治疗和疗法的实例包括但不限于化疗(给予活性剂，包括，例如药物)；外科手术；以及放射疗法。

化疗剂的实例包括：埃罗替尼(Genentech/OSI Pharm.)、多西他赛(Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶， CAS编号51-21-8)、吉西他滨(Lilly)、PD-0325901(CAS编号 391210-10-9，Pfizer)、顺铂(顺式二胺，二氯铂(II)，CAS编号15663-27-1)、卡铂(CAS编号41575-94-4)、紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲妥单抗(Genentech)、替莫唑胺(4-甲基-5-氧-2,3,4,6,8-五氮杂双环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰氨，CAS编号85622-93-1，Schering Plough)、他莫昔芬((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺， )、和多柔比星()、Akti-1/2、 HPPD、和雷帕霉素。

化疗剂的更多实例包括：奥沙利铂(Sanofi)、硼替佐米 (Millennium Pharm.)、索坦(sutent)(SU11248， Pfizer)、来曲唑(Novartis)、甲磺酸伊马替尼( Novartis)、XL-518(Mek抑制剂，Exelixis，WO 2007/044515)、ARRY-886(Mek 抑制剂，AZD6244,ArrayBioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制剂， Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂，Novartis)、XL-147(PI3K 抑制剂，Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟维司群( AstraZeneca)、甲酰四氢叶酸(亚叶酸)、雷帕霉素(西罗莫司， Wyeth)、拉帕替尼(GSK572016,Glaxo SmithKline)、洛那法尼(SARASAR^TM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉非尼(BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(AstraZeneca)、依立替康(CPT-11,Pfizer)、tipifarnib(ZARNESTRA^TM,Johnson& Johnson)、ABRAXANE^TM(无克列莫佛(Cremophor-free))、紫杉醇的白蛋白工程纳米颗粒制剂(AmericanPharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、凡德他尼(rINN,ZD6474,AstraZeneca)、chloranmbucil、AG1478、 AG1571(SU 5271；Sugen)、特姆莫司(temsirolimus)(Wyeth)、帕唑帕尼(GlaxoSmithKline)、canfosfamide(Telik)、塞替派和环磷酰胺()；磺酸烷基酯如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)、和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺类(methylamelamine)，包括六甲蜜胺、三亚乙基密胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲密胺(trimethylomelamine)；多聚乙酰(acetogenin)(尤其是bullatacin和 bullatacinone)；喜树碱(包括合成类似物托泊替康)；苔藓抑素；callystatin； CC-1065(包括它的阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)； cryptophycins(尤其是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀； duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；eleutherobin； pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲二氯二乙胺、甲二氯二乙胺氧化物盐酸盐、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、和雷莫司汀；抗生素如烯二炔抗生素(例如卡奇霉素、卡奇霉素γ1I、卡奇霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；蒽环类抗生素、蒽环类抗生素A；二膦酸盐，如氯屈膦酸盐；esperamicin；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素(chromomycin)、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧-L-正亮氨酸、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉并-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、奈莫柔比星、马塞罗霉素；丝裂霉素如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤、嘧啶类似物如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内脂；抗肾上腺类如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充物如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；defofamine；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；埃博霉素(epothilone)；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；美登素类如美登素和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；nitraerine；喷司他丁；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯(尤其是T-2 毒素、verracurin A、roridin A和anguidine)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷(“阿糖胞苷”)；环磷酰胺；塞替派；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨()；诺消灵；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨喋呤；卡培他滨(Roche)；伊班膦酸盐； CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素如维甲酸；以及上述任何一种的药用盐、酸和衍生物。

在“化疗剂”的定义中还包括：(i)抗激素剂，其用来调节或抑制激素对肿瘤的作用如抗雌激素药和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括，例如，他莫昔芬(包括枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、LY117018、奥那司酮、和(枸橼酸托瑞米芬)；(ii)芳香酶抑制剂，它们抑制芳香酶，其在肾上腺中调节雌激素的产生，如，例如，4(5)-咪唑、氨鲁米特、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦；Pfizer)、福美坦、法倔唑、(伏氯唑)、(来曲唑；Novartis)、和(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素类如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙立德、和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂如MEK抑制剂(WO2007/044515)； (v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，尤其是那些反义寡核苷酸，其抑制基因在牵连到异常细胞增殖的信号通路中的表达，例如，PKC-α、Raf 和H-Ras，如oblimersen(Genta Inc.)；(vii)核酶如VEGF 表达抑制剂(例如，)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗如基因治疗疫苗，例如，和 rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂如 rmRH；(ix)抗血管生成剂如贝伐单抗( Genentech)；以及上述任何一种的药用盐、酸和衍生物。

在“化疗剂”的定义中还包括治疗性抗体如阿仑单抗(Campath)、贝伐单抗(Genentech)；西妥昔单抗(Imclone)；帕尼单抗(Amgen)、利妥昔单抗(Genentech/Biogen Idec)、帕妥珠单抗(OMNITARG^TM，2C4，Genentech)、曲妥单抗 (Genentech)、托西莫单抗(Bexxar,Corixia)、以及抗体药物共轭物，吉姆单抗奥佐米星(Wyeth)。

连同本发明的共轭物一起具有作为化疗剂的治疗潜力的人源化单克隆抗体包括：阿仑单抗、apolizumab、aselizumab、atlizumab、bapineuzumab、贝伐单抗、比伐单抗mertansine、cantuzumab mertansine、西利珠单抗、 certolizumab pegol、cidfusituzumab、cidtuzumab、达珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依帕珠单抗、erlizumab、非维珠单抗、fontolizumab、吉姆单抗奥佐米星、inotuzumab奥佐米星、易普利单抗、labetuzumab、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、motavizumab、motovizumab、那他珠单抗、尼妥珠单抗、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马珠单抗, 帕利珠单抗、pascolizumab、pecfusituzumab、pectuzumab、帕妥珠单抗、 pexelizumab、ralivizumab、兰尼单抗、reslivizumab、reslizumab、resyvizumab、罗维珠单抗、鲁利单抗、西罗珠单抗、siplizumab、sontuzumab、tacatuzumab tetraxetan、tadocizumab、talizumab、tefibazumab、塔西单抗、toralizumab、曲妥单抗、tucotuzumab celmoleukin、tucusituzumab、umavizumab、 urtoxazumab、和visilizumab。

按照本发明的药物组合物和按照本发明的应用，除活性组分即式I的化合物之外，还可以包含药用赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员众所周知的其它材料。上述材料应该是无毒的并且不应干扰活性组分的功效。载体或其它材料的确切特性将取决于给予途径，其可以是口服、或通过注射，例如皮肤、皮下、或静脉内注射。

用于口服给予的药物组合物可以是在片剂、胶囊剂、散剂或液体形式中。片剂可以包含固体载体或佐剂。液体药物组合物通常包含液态载体如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐水溶液、右旋糖或其它糖类溶液或二醇如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。胶囊剂可以包含固体载体如明胶。

对于静脉内、皮肤或皮下注射，或在痛苦部位处的注射，活性组分将具有肠胃道外可接受的水溶液的形式，其是无热原的并具有适宜的pH、等渗性和稳定性。本领域的相关技术人员完全能够制备适宜的溶液(利用，例如。等渗载体如氯化钠注射液、林格氏注射液、乳酸林格氏注射液)。根据要求，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。

剂量

本领域技术人员可以理解的是，化合物的适当剂量可以因患者而异。确定最佳剂量通常将涉及治疗益处的水平相对于任何危险或有害的副作用的平衡。选择的剂量水平将取决于各种因素，包括但不限于特定化合物的活性、给予途径、给予时间、化合物的排泄速率、治疗的持续时间、联合使用的其它药物、化合物、和/或材料、病症的严重程度、以及患者的种族、性别、年龄、体重、状况、一般健康状况、和既往病史。化合物的量和给予途径最终将由医师、兽医、或临床医师酌情决定，虽然通常将选择剂量以在作用部位达到局部浓度，其实现预期效果而不引起实质性的不良的或有害的副作用。

在整个治疗过程中，可以以一次剂量、连续地或间歇地(例如，以适当的间隔分开的剂量)来进行给予。用于确定给予的最有效的方法和剂量的方法是本领域技术人员众所周知的并且随用于治疗的剂型、治疗的目的、待治疗的靶细胞、和待治疗的受试者而变化。可以依据由治疗医师、兽医、或临床医师选择的剂量水平和模式来进行单次或多次给予。

一般来说，活性化合物的适宜的剂量为约100ng至约25mg(更通常约1μg至约10mg)/受试者的千克体重/天。在活性化合物是盐、酯、酰胺、前药等的情况下，基于母体化合物来计算给予的量，所以按比例增加所使用的实际重量。

在一种实施方式中，按照以下剂量方案将活性化合物给予人患者：约 100mg，每日3次。

在一种实施方式中，按照以下剂量方案将活性化合物给予人患者：约 150mg，每日2次。

在一种实施方式中，按照以下剂量方案将活性化合物给予人患者：约 200mg，每日2次。

对于疾病的预防或治疗，本发明的化合物的适当剂量将取决于待治疗疾病的类型(如上所定义的)、疾病的严重程度和病程，而不管是否给予分子是用于预防或治疗目的，先前的治疗、患者的临床史、对抗体的反应、和主治医师的决定。以一次或在一系列治疗中将分子适当地给予患者。取决于疾病的类型和严重程度，用于给予患者的初始候选剂量是约1μg/kg 至15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)分子，而不管是否，例如，通过一个或多个分开的给予、或通过连续输注。典型的每日剂量可以为约1μg/kg至100 mg/kg或更多，其取决于上文提到的因素。待给予患者的化合物的示例性剂量是约0.1至约10mg/kg患者体重。对于经数天或更长时间的重复给予，取决于病症，持续治疗直到发生疾病症状的所期望的抑制。一种示例性剂量方案包括以下疗程：给予约4mg/kg的初始负荷剂量，接着每周、两周、或三周另外给予化合物。其它剂量方案可以是有用的。通过常规技术和测定法，容易监测这种疗法的进展。

包括其它形式

除非另有规定，在上文中包括的是这些取代基的众所周知的离子、盐、溶剂化物、和保护形式。例如，提及羧酸(-COOH)还包括阴离子(羧酸盐) 形式(-COO^-)、其盐或溶剂化物、以及常规保护形式。类似地，提及氨基包括质子化形式(-N⁺HR¹R²)、氨基的盐或溶剂化物，例如，盐酸盐，以及氨基的常规保护形式。类似地，提及羟基还包括阴离子形式(-O^-)、其盐或溶剂化物，以及常规保护形式。

异构体、盐和溶剂化物

某些化合物可以存在为一种或多种特定的几何、光学、对映体、非对映体、差向异构体、阻转体、立体异构体、互变异构体、构象、或端基异构体形式，包括但不限于顺式(cis)和反式(trans)形式；E和Z形式； c、t、和r形式；内和外形式；R、S、和内消旋形式；D和L形式；d和 l形式；(+)和(-)形式；酮、烯醇、和烯醇化物形式；顺式(syn)和反式(anti)；向斜(synclinal)和背斜(anticlinal)形式；α和β形式；轴向和平伏形式；船、椅、扭转、信封、和半椅形式；以及它们的组合，在下文中统称为“异构体”(或“异构体形式”)。

本发明的优选化合物具有在C11位置处的以下立体化学：

注意，除非如下文针对互变异构形式讨论的，从术语“异构体”(如在本文中所使用的)特别排除的是结构(或构成)异构体(即异构体，其不同之处在于在原子之间的连接而不是仅在于原子在空间中的位置)。例如，提及甲氧基，-OCH₃，不应当被解释为提及它的结构异构体，羟甲基，-CH₂OH。类似地，提及邻氯苯基不应当被解释为提及它的结构异构体，间氯苯基。然而，提及一类结构可以良好地包括属于上述类的结构异构体形式(例如 C_1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正、异、仲、和叔丁基；甲氧基苯基包括邻、间、和对甲氧基苯基)。

以上排除并不涉及互变异构形式，例如，酮、烯醇、和烯醇化物形式，如在，例如，以下互变异构对中：酮/烯醇(如下式所示)、亚胺/烯胺、酰胺 /亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇、N-亚硝基/羟基偶氮、和硝基/酸式硝基。

注意，在术语“异构体”中特别包括的是具有一个或多个同位素取代的化合物。例如，H可以是任何同位素形式，包括¹H、²H(D)、和³H(T)；C 可以是任何同位素形式，包括¹²C、¹³C、和¹⁴C；O可以是任何同位素形式，包括¹⁶O和¹⁸O；等等。

除非另有规定，提及特定化合物包括所有这些异构体形式，包括它们的(全部或部分地)外消旋和其它混合物。用于制备(例如不对称合成)和分离(例如分级结晶和层析方式)上述异构体形式的方法是本领域中已知的或通过适应本文教导的方法、或已知的方法而容易获得(以已知的方式)。

除非另有规定，提及特定化合物还包括其离子、盐、溶剂化物、和保护形式，例如，如下文讨论的。

可以方便的或所期望的是，制备、纯化、和/或处理活性化合物的相应盐，例如，药用盐。在Berge,et al.,J.Pharm.Sci.,66,1-19(1977)中讨论了药用盐的实例。

例如，如果化合物是阴离子化合物，或具有官能团，其可以是阴离子的(例如-COOH可以是-COO^-)，那么可以与适宜的阳离子来形成盐。适宜的无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子如Na⁺和K⁺，碱土阳离子如 Ca²⁺和Mg²⁺，以及其它阳离子如Al³⁺。适宜的有机阳离子的实例包括但不限于铵离子(即NH₄ ⁺)和取代的铵离子(例如NH₃R⁺、NH₂R₂ ⁺、NHR₃ ⁺、NR₄ ⁺)。一些适宜的取代的铵离子的实例是那些取代的铵离子，其衍生自：乙胺、二乙胺、二环己基胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺、和氨丁三醇，以及氨基酸，如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的一个实例是N(CH₃)₄ ⁺。

如果化合物是阳离子化合物，或具有官能团，其可以是阳离子的(例如-NH₂可以是-NH₃ ⁺)，那么可以与适宜的阴离子来形成盐。适宜的无机阴离子的实例包括但不限于那些无机阴离子，其衍生自以下无机酸：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸、和亚磷酸。

适宜的有机阴离子的实例包括但不限于那些有机阴离子，其衍生自以下有机酸：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸、乙烷二磺酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘羧酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸、和戊酸。适宜的聚合物有机阴离子的实例包括但不限于那些聚合物有机阴离子，其衍生自以下聚合酸：单宁酸、羧甲基纤维素。

可以方便的或期望的是，制备、纯化、和/或处理活性化合物的相应溶剂化物。术语“溶剂化物”在本文中在常规意义上用来指溶质(例如活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂的复合物。如果溶剂是水，溶剂化物可以被方便地称为水合物，例如，单水合物、二水合物、三水合物等。

式I的化合物包括这样的化合物，其中亲核溶剂(H₂O、R^AOH、R^ANH₂、 R^ASH)加入PBD部分的亚胺键，其是如下式所示，其中溶剂是水或醇 (R^AOH，其中R^A是醚取代基，如上所述)：

这些形式可以被称为PBD的甲醇胺和甲醇胺醚形式。这些平衡式的平衡取决于其中发现化合物的条件、以及上述部分本身的特性。

可以，例如，通过冷冻干燥，以固体形式来分离这些化合物。

一般合成路线

式I的化合物，其中R¹⁰和R¹¹一起形成双键，可以合成自式2的化合物：

R’¹⁰是氮保护基以及R’¹¹是O-R¹²，其中R¹²是H或羟基保护基。这样的技术是本领域中众所周知的，并且描述于，例如，Wuts,P.G.M.and Greene,T.W.,Protective Groups inOrganic Synthesis,4^th Edition, Wiley-Interscience,2007。如果氮和羟基保护基均是存在的，则优选加以选择以通过相同条件可以去除它们。

如果在式HQR^Q的溶剂中进行这种脱保护，那么R¹⁰和R¹¹将分别是 H和QR^Q。可替换地，通过将化合物加入与其中进行脱保护的溶剂不同的溶剂来引入这些基团。

通过添加适当的亚硫酸氢盐或亚磺酸盐，接着纯化步骤，可以实现如上所讨论的式I的化合物转化成那些化合物，其具有R¹¹作为SO_xM。其它方法描述于GB 2 053 894，其以引用方式结合于本文。

在标准酰胺键形成条件下，例如在存在HOBt或DMAP和EDCl的情况下，可以通过式3和式4的化合物的偶合来制备式2的化合物：

式3的化合物可以合成自式5的化合物：

其中R’⁸是C_1-4烷基，例如甲基。可以利用标准方式，例如用碱处理，来进行羧基的这种脱保护。

可以一般按照在WO 00/12506和WO 2007/039752(其以引用方式结合于本文)中描述的方法来合成式5的化合物。尤其是，通常借助于在适当位置的适当保护基，可以在合成的任何阶段引入丁酸侧链。例如，利用例如Mitsunobo耦合，通过将受保护的或前体形式偶合于在苯环上的羟基，可以形成侧链。

可以利用在WO 2005/085177(其以引用方式结合于本文)中披露的方法来合成式4的化合物。还参考WO 2007/039752的披露内容。

DNA结合

可以利用离子对反相HPLC测定来测量化合物结合于DNA、以及尤其是寡核苷酸的能力，如描述于Rahman,K.M.,et al.,Journal of the American Chemical Society2009,131,13756和Narayanaswamy,M.,et al., Analytical Biochemistry 2008,374,173。还可以通过利用小牛胸腺DNA热变性测定来评估DNA结合亲和力，如描述于Wells,G.,et al.,Journal of Medicinal Chemistry 2006,49,5442；Jenkins,T.C.,et al.,Journal of Medicinal Chemistry 1994,37,4529；以及Gregson,S.J.,et al.,Journalof Medicinal Chemistry 2001,44,737。

进一步的偏好

C2

在任何实施方式中，可以是优选的是，C2碳是sp²中心，以致当R²选自任何以下基团时：

-H、-OH、-CN、-R、-OR、卤基、-O-SO₂-R、-CO₂R和-COR

则在C2和C3之间存在双键。

当R²选自任何以下基团时：

＝O、＝CH₂、＝CHR、＝CHRR’

则在C2和C3之间不可能存在双键。

在进一步的实施方式中，在C2和C3之间不存在双键，以及R²是H。

R²

R²选自-H、-OH、＝O、＝CH₂、-CN、-R、OR、卤基、二卤基、＝CHR、＝CHRR’、-O-SO₂-R、CO₂R和COR。

在一些实施方式中，R²可以选自-H、-OH、＝O、＝CH₂、-CN、-R、 -OR、＝CHR、＝CRR’、-O-SO₂-R、-CO₂R和-COR。

在一些实施方式中，R²可以选自-H、＝CH₂、-R、＝CHR、和＝CRR’。

在一种实施方式中，R²是H。

在一种实施方式中，R²是＝O。

在一种实施方式中，R²是＝CH₂。

在一种实施方式中，R²是＝CHR。在PBD化合物内，基团＝CHR可以具有以下所示的任何一种构型：

在一种实施方式中，构型是构型(C1)。

在一种实施方式中，R²是＝CRR’。

在一种实施方式中，R²是＝CF₂。

在一种实施方式中，R²是R。

在一种实施方式中，R²是可选取代的C_5-20芳基。

当R²是可选取代的C_5-20芳基时，它可以优选是可选取代的C_5-7芳基或C_8-10芳基。R²可以进一步优选是可选取代的苯基、可选取代的萘基、可选取代的吡啶基、可选取代的喹啉基或异喹啉基。在这些基团中，可选取代的苯基是最优选的。

当R²是可选取代的C_5-20芳基时，它可以优选具有1至3个取代基，其中1和2个取代基是更加优选的，以及单取代的基团是最优选的。取代基可以是在任何位置。

在R²是C_5-7芳基的情况下，单取代基优选是在这样的环原子上，其并不邻近化合物的剩余部分的键，即，它优选是在化合物的剩余部分的键的β或γ位。因此，在C_5-7芳基是苯基的情况下，取代基优选是在间位或对位，以及更优选是在对位。

在一种实施方式中，R²选自：

其中星号表示连接点。

在R²是C_8-10芳基例如喹啉基或异喹啉基的情况下，它可以具有在喹啉或异喹啉环的任何位置处的任何数目的取代基。在一些实施方式中，它具有1个、两个或三个取代基，以及这些取代基可以是在近侧和远侧环或两者上(如果一个以上的取代基)。

当R²是可选取代的C_5-20芳基时，取代基可以选自：卤基、羟基、醚、甲酰基、酰基、羧基、酯、酰氧基、氨基、酰氨基、酰基酰氨基、氨基羰氧基、脲基、硝基、氰基和硫醚。

当R²是可选取代的C_5-20芳基时，取代基可以选自由R、OR、SR、 NRR’、NO₂、卤基、CO₂R、COR、CONH₂、CONHR、和CONRR’组成的组。

如果在R²上的取代基是卤基，则它优选是F或Cl，更优选Cl。

如果在R²上的取代基是醚，在一些实施方式中它可以是烷氧基，例如，C_1-7烷氧基(例如甲氧基、乙氧基)或在一些实施方式中它可以是C_5-7芳氧基(例如苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基)。

如果在R²上的取代基是C_1-7烷基，它可以优选是C_1-4烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基)。

如果在R²上的取代基是C_3-7杂环基，则在一些实施方式中它可以是 C₆含氮杂环基，例如吗啉代、硫代吗啉代、哌啶基、哌嗪基。经由氮原子，这些基团可以结合于PBD部分的其余部分。这些基团可进一步被例如C_1-4烷基取代。

如果在R²上的取代基是双氧-C_1-3亚烷基，则它优选是双氧亚甲基或双氧-亚乙基。

用于R²的特别优选的取代基包括甲氧基、乙氧基、氟、氯、氰基、双氧亚甲基、甲基-哌嗪基、吗啉代和甲基-噻吩基。

特别优选的取代的R²基团包括但不限于4-甲氧基-苯基、3-甲氧基苯基、4-乙氧基-苯基、3-乙氧基-苯基、4-氟-苯基、4-氯-苯基、3,4-二氧亚甲基-苯基、4-甲基噻吩基、4-氰基苯基、4-苯氧基苯基、喹啉-3-基和喹啉-6- 基、异喹啉-3-基和异喹啉-6-基、2-噻吩基、2-呋喃基、甲氧基萘基、以及萘基。

在一种实施方式中，R²是可选取代的C_1-12烷基。

当R²是可选取代的C_1-12烷基时，它可以选自：

(a)C_1-5饱和的脂肪族烷基；

(b)C_3-6饱和的环烷基；

(c)其中R²¹、R²²和R²³各自独立地选自H、C_1-3饱和的烷基、C_2-3烯基、C_2-3炔基和环丙基，其中在R¹²基团中碳原子的总数是不大于5；

(d)其中R^25a和R^25b中的一种是H而另一种选自：苯基，该苯基是由选自卤代甲基、甲氧基的基团可选取代的，吡啶基，和苯硫基；以及

(e)其中R²⁴选自：H；C_1-3饱和的烷基；C_2-3烯基；C_2-3炔基；环丙基；苯基，该苯基是由选自卤代甲基、甲氧基的基团可选取代的；吡啶基；和苯硫基。

当R²是C_1-5饱和的脂肪族烷基时，它可以是甲基、乙基、丙基、丁基或戊基。在一些实施方式中，它可以是甲基、乙基或丙基(正戊基或异丙基)。在一些这些实施方式中，它可以是甲基。在其它实施方式中，它可以是丁基或戊基，其可以是直链或支链的。

当R²是C_3-6饱和的环烷基时，它可以是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些实施方式中，它可以是环丙基。

当R²是时，R²¹、R²²和R²³各自独立地选自H、C_1-3饱和的烷基、C_2-3烯基、C_2-3炔基和环丙基，其中在R²基团中碳原子的总数是不大于5。在一些实施方式中，在R²基团中碳原子的总数是不大于4或不大于3。

在一些实施方式中，R²¹、R²²和R²³中的一种是H，而另外两种基团则选自H、C_1-3饱和的烷基、C_2-3烯基、C_2-3炔基和环丙基。

在其它实施方式中，R²¹、R²²和R²³中的两种是H，而另一种基团则选自H、C_1-3饱和的烷基、C_2-3烯基、C_2-3炔基和环丙基。

在一些实施方式中，不是H的基团选自甲基和乙基。在一些这些实施方式中，不是H的基团是甲基。

在一些实施方式中，R²¹是H。

在一些实施方式中，R²²是H。

在一些实施方式中，R²³是H。

在一些实施方式中，R²¹和R²²是H。

在一些实施方式中，R²¹和R²³是H。

在一些实施方式中，R²²和R²³是H。

当R²是时，R^25a和R^25b中的一种是H以及另一种选自：苯基，该苯基是由选自卤基、甲基、甲氧基的基团可选取代的，吡啶基，和苯硫基。在一些实施方式中，不是H的基团是可选取代的苯基。如果苯基可选取代基是卤基，它优选是氟基。在一些实施方式中，苯基是未取代的。

当R²是时，R²⁴选自：H；C_1-3饱和的烷基；C_2-3烯基；C_2-3炔基；环丙基；苯基，该苯基是由选自卤代甲基、甲氧基的基团可选取代的，吡啶基，和苯硫基。如果苯基可选取代基是卤基，它优选是氟基。在一些实施方式中，苯基是未取代的。在一些实施方式中，R²⁴选自H、甲基、乙基、乙烯基和乙炔基。在一些这些实施方式中，R²⁴选自H和甲基。

在一种实施方式中，R²是卤基或二卤基。在一种实施方式中，R²是 -F或-F₂，上述取代基以下分别示为(C3)和(C4)：

R²可以优选选自＝CH₂、＝CH-R，其中R更优选是可选取代的C_1-4烷基，以及-R，其中R更优选是可选取代的C_5-20芳基。用于R²的特别优选的基团包括＝CH₂、＝CH-Me、和可选取代的苯基。

R⁷

R⁷可以优选选自H、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NRR’、和卤基。

R⁷可以更优选选自H和OR。

在一些实施方式中，R⁷是OR、以及更特别地OR^7A，其中R^7A独立地是可选取代的C_1-7烷基。

R^7A可以选自可选取代的饱和的C_1-7烷基和可选取代的C_2-4烯基。

R^7A可以优选选自Me、CH₂Ph和烯丙基。

R¹⁰/R¹¹

R¹⁰和R¹¹一起形成双键、或分别选自H和QR^Q，其中Q选自O、S 和NH以及R^Q是H或C_1-7烷基，或H和SO_xM，其中x是2或3，以及 M是单价药用阳离子；

在一些实施方式中，R¹⁰和R¹¹一起形成双键。

在一些实施方式中，R¹⁰是H以及R¹¹是OR^Q。在这些实施方式中， R^Q可以优选选自H或Me。

在一些实施方式中，R¹⁰是H以及R¹¹是SO_xM。x可以优选是3，以及M可以优选是Na⁺。

R¹

R¹是C_1-4烷基。

R¹可以优选是C_1-2烷基，以及更优选甲基。

A

A是：

其中X和Y选自：CH和NMe；COH和NMe；CH和S；N和NMe； N和S。

在一些实施方式中，A是A1。

在一些实施方式中，A是A2。

在任何这些实施方式中，X和Y可以优选选自CH和NMe；CH和S； N和NMe；以及N和S。X和Y可以更优选选自CH和NMe；以及N和 NMe。

在一些实施方式中，X和Y是CH和NMe。

在一些实施方式中，X和Y是N和NMe。

B

B是单键或：

其中X和Y是如上述所定义，但独立选择的。

在一些实施方式中，B是单键。

在一些实施方式中，B是B1。

在一些实施方式中，X和Y是CH和NMe。

在一些实施方式中，X和Y是N和NMe。

附图说明

图1A和1B示出用来确定本发明的两种化合物的最大耐受剂量的测定结果。

图2示出用来确定本发明的化合物的体内活性的测定结果；以及

图3示出用来确定与图2中相同的化合物的体内活性的另一测定结果。

实施例

一般方法

用ADP 220旋光仪(Bellingham Stanley Ltd)来测量旋光性并以 g/100mL为单位来给出浓度(c)。利用数字熔点仪(Electrothermal)来测量熔点。用Perkin-ElmerSpectrum 1000FT IR分光计来记录IR谱。在300K下，利用Bruker Advance NMR分光计分别在400和100MHz下，来获得¹H 和¹³C NMR谱。相对于TMS(δ＝0.0ppm)来报道化学位移，并且信号被指定为s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、dt(双重三重峰)、dd(双重双重峰)、ddd (双重双重双重峰)或m(多重峰)，其中以Hertz(Hz)为单位来给出偶合常数。 Pro-PBD编号系统用于合成中间体的碳和质子指定(即，基于最终三环PBD 环体系)。利用连接至具有Waters2996PDA的Waters 2695HPLC的Waters Micromass ZQ仪器，来收集质谱数据。使用的WatersMicromass ZQ参数是：毛细管(kV)，3.38；锥体(V)，35；萃取器(V)，3.0；源温度(℃)，100；去溶剂化温度(℃)，200；锥体流动速率(Cone flow rate)(L/h)，50；去溶剂化流动速率(L/h)，250。利用金属涂覆的硼硅酸盐玻璃尖端将样品引入仪器，用Waters Micromass QTOFGlobal，以阳性W模式来记录高分辨率质谱数据。在硅胶铝板(Merck 60，F₂₅₄)上进行薄层层析(TLC)，以及利用硅胶快速层析(Merck 60，230-400目，ASTM)。利用Radleys^TM GreenHouse Synthesizer来进行平行反应并利用IST Vacmaster^TM来进行平行纯化。对于平行进行的反应，利用Genevac VC 2000D(Genevac Technologies,UK)来蒸发溶剂。利用Heto-Lyolab 3000冷冻干燥器来冷冻干燥纯化的化合物。利用连接于帕尔(Parr)氢化装置的UHP-60H氢气发生器来进行加氢反应。合成结构单元(building block)购自MaybridgeChemicals(UK)、Bachem Chemicals(USA)和Sigma-Aldrich(UK)。试剂和溶剂购自 Sigma-Aldrich(UK)。

关键中间体的合成

(a)4-(4-(叔丁氧基羰基氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(5)

(i)2-(三氯乙酰基)-1-甲基吡咯(2)

在2L 3颈烧瓶中，经1小时10分钟，将处于干燥醚(350mL)中的 N-甲基吡咯(1)(113.06g,1.39mol,1.0当量)的溶液逐滴加入处于干燥醚 (350mL)中的三氯乙酰氯(254g,1.39mol,1.0当量)的搅拌溶液。通过用氮气冲洗来除去在反应中产生的HCl气体。允许搅拌反应混合物1.5小时并通过TLC和LCMS来定期监测反应的进展。在1.5小时以后，利用1MK₂CO₃溶液来淬灭反应。用乙酸乙酯来萃取(3x)反应混合物，然后合并有机层并真空浓缩。用正己烷来洗涤晶体残余物并最后在真空下干燥。产率 281.18g，79.5％，NMR与文献比较

IR,(FTIR,ν_max/cm^-1)3299,3121,3008,2954,1789,1674,1521,1406, 1206,1100,980,881,757；¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.42(1H,dd,J＝4.4, 1.6Hz),6.97(1H,t,J＝1.6Hz),6.22(1H,dd,J＝4.4,2.4Hz)3.97(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz):δ133.6,124.0,122.4,108.9,38.5.

(ii)1-(4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-基)-2,2,2-三氯乙酮(3)

在-10℃下，将NBS(N-溴琥珀酰亚胺，2.36g，13.24mmol，1.0当量)加入处于无水THF(35mL)中的2-(三氯乙酰基)-1-甲基吡咯(2)(3g， 13.24mmol，1.0当量)的搅拌溶液。将反应混合物保持在-10℃下2小时，然后放置以达到室温(约4小时)。真空蒸发过量的THF并将固体再溶解于 EtOAc/正己烷(1:9)的混合物。通过硅石塞来过滤产生的混合物，并真空蒸发滤液。产生的固体由正己烷再结晶以产生3(3.55g，88％)。IR(FTIR,ν_max /cm^-1):3148,2956,1669(C＝O),1458,1215,1189,1062,923,842,823,748, 678；¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.46(1H,d,J＝2.0Hz),6.95(1H,d,J＝ 1.6Hz)3.95(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz):δ172.4,132.8,124.6, 132.2,96.1,38.7；EIMS m/z(+EI)C₇H₅BrCl₃NO(M)⁺的计算值305.38,LCMS分析实测值306.86(M+H)⁺

(iii)4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(4)

通过注射器，向处于干燥MeOH(30mL)中的1-(4-溴-1-甲基-1H-吡咯 -2-基)-2,2,2-三氯-乙酮(3)(3.28g，10.74mmol，1当量)的搅拌溶液添加甲醇钠的溶液(0.5mL)。甲醇钠溶液制备自NaH(60％，在矿物油中)(43mg， 1.07mmol，0.1当量)，其先前用正己烷加以洗涤。加热溶液以回流30分钟，其时TLC分析显示原始材料完全消耗。将几滴浓H₂SO₄加入溶液以中和碱(pH 2)。真空蒸发过量MeOH并将得到的油再溶解于EtOAc(50 mL)，然后用水(40mL)洗涤。用EtOAc萃取(3x40mL)水层，合并有机相，干燥(MgSO4)，过滤和真空浓缩，以提供作为淡白色固体的产物(2.28g， 97％)。IR(FTIR,ν_max/cm^–1):3138,2948,1692,1472,1334,1245,1115,1082, 921,823,753；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ6.89(d,1H,J＝2.0Hz),6.76(d, 1H,J＝2.0Hz),3.89(s,3H),3.81(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ160.8,128.7,122.9,119.2,95.1,51.2,36.9；EIMS m/z(+EI)C₇H₈BrNO₂(M)⁺计算值为218.05，实测值为219.26(M+H)⁺。

(iv)4-(4-(叔丁氧基羰基氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(5)

在包括磁搅拌器的10-20mL微波小瓶中在存在K₂CO₃(2.856g，3当量)的情况下，将催化量的四(三苯基膦)钯，Pd(PPh₃)₄(0.477g，0.413，0.06 当量)加入处于EtOH、甲苯和水的9:3:1混合物(13.5ml)中的4(1.5g，6.88 mmol，1当量)和(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)硼酸(1.57g，6.88mmol，1.20当量)的溶液。在每次添加期间，用氮气冲洗反应容器。在惰性N₂气氛中密封反应混合物并在100℃下在EMRYS^TMOptimizer Microwave Station(Personal Chemistry)中借助于微波辐射来加热12分钟。在LCMS和 TLC分析揭示反应完成以后，用水(50mL)稀释冷却的反应混合物，用 EtOAc(3x40mL)萃取，合并滤液，经MgSO₄干燥并在真空下浓缩。使得到的油经受快速层析(正己烷/EtOAc 9:1)以产生5(产率2.2g，97％)。IR (FTIR,ν^max/cm^–1):3353,2975,1696,1521,1441,1366,1264,1235,1209, 1058,822,799,657；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.40(d,2H,J＝8.8Hz), 7.33(d,2H,J＝8.8Hz),7.16(d,1H,J＝2.0Hz,),7.02(d,1H,J＝2.0),6.45 (br s,1H),3.95(s,3H),3.83(s,3H),1.52(s,9H)；¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃):δ161.7,152.8,136.5,129.5,125.9,125.6,123.7,123.0,119.0,114.6, 80.5,51.1,36.9,28.4；EIMS m/z(+EI)C₁₈H₂₂N₂O₄(M)⁺计算值为330.38，实测值为330.46(M+H)⁺。

(b)4-(4-(叔丁氧基羰基氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(6)

将NaOH(2.0当量)的0.5M溶液加入处于二氧杂环己烷(40mL)中的 5(1.0g，3.027mmol)的溶液。在室温下允许搅拌反应混合物6小时，此时 TLC揭示反应完成。在真空下蒸发过量1,4-二氧杂环己烷并用水稀释残余物。用0.5M HCl来酸化得到的溶液。用2x乙酸乙酯(100mL x 2)从水中萃取产物并合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。利用快速层析(乙酸乙酯/正己烷2:8)来纯化产物。产率0.92g，96.8％。IR(FTIR, ν^max/cm^-1):3371,2979,1698,1671,1522,1445,1367,1285,1161,1112,1047, 823,803,762,714,631；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.33(1H,s),7.55(d, 2H,J＝8.8Hz),7.50(d,2H,J＝8.8Hz),7.36(d,1H,J＝2.0Hz,),7.22(d,1H, J＝2.0),3.97(s,3H),1.50(s,9H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ162.3, 153.7,138.6,123.0,127.1,126.0,124.4,124.0,119.5,115.1,79.9,36.9,28.6； EIMS m/z(+EI)C₁₇H₂₀N₂O₄(M)⁺的计算值为316.35，实测值为315.16 (M+H)⁺

(c)

(i)4-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(7)

将5(1g，3.027mmol)溶解于小体积的MeOH并将处于二氧杂环己烷 (15mL)中的4MHCl缓慢加入搅拌溶液。搅拌反应混合物6小时，此时 TLC显示反应完成。在真空下蒸发过量溶剂以获得棕色固体7。使固体产物经受快速层析(正己烷/EtOAc 9:1)以产生纯7(065g，94.2％)。IR(FTIR, ν^max/cm^-1):3366,2987,1688,1629,1566,1422,1372,1262,1181,1103,1067, 951,821,784,756；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.28(2H,d,J＝8.4Hz), 7.11(1H,d,J＝2.0Hz),6.96(1H,d,J＝2.0Hz),6.68(d,2H,J＝8.0Hz), 3.94(s,3H),3.83(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ161.7,144.7,126.2, 125.4,125.2,115.5,114.4,51.0,36.8；EIMS m/z(+EI)C₁₃H₁₄N₂O₂(M)⁺的计算值为230.26，实测值为231.1(M+H)⁺

(ii)4-(4-(4-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)苯基)-1-甲基-1H- 吡咯-2-羧酸甲酯(8)

将0.2g的boc保护的6(0.63mmol，1.2当量)溶解于DMF(5mL)，对其添加2.0当量的EDCI和2.5当量的DMAP，并允许搅拌混合物30分钟。在此时，添加4-氨基-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(80.9mg，0.52mmol，1.0 当量)，并允许搅拌反应混合物另外3小时，此时TLC显示反应完成。通过将它倒在冰/水混合物的混合物上来淬灭反应，并用乙酸乙酯(3x50mL)来萃取产生的混合物。用饱和NaHCO₃水溶液(50mL)、水(50mL)、盐水 (50mL)依次洗涤合并的萃取物，并最后经MgSO₄干燥。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并且粗产物用于boc脱保护步骤以提供8而不用进一步纯化。对于boc脱保护，将粗产物溶解于小体积的MeOH并将处于二氧杂环己烷(5mL)中的4M HCl缓慢加入搅拌溶液。搅拌反应混合物2小时，此时TLC显示反应完成。在真空下蒸发过量溶剂以获得棕色固体(8)。使固体产物经受快速层析(正己烷/EtOAc 9:1)以产生纯8。产率为 0.21gm，77％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.72(1H,s),7.69(1H,s),7.57(2H,d,J ＝8.0Hz),7.46(4H,d,J＝8.0Hz),7.41(2H,d,J＝8.0Hz),7.20(1H,d,J＝2.0Hz),7.06(1H,d,J＝2.0Hz,7.02(1H,d,J＝1.6Hz),6.92(1H,s).m/z (+EI)C₂₅H₂₄N₄O₃(M)⁺的计算值为428.48，实测值为429.26([M+H]⁺

(d)

(i)4-(4-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(9)

将两当量的EDCl和2.5当量的DMAP加入处于DMF(8mL)中的 6(0.45gm，1.2当量)的搅拌溶液并允许搅拌混合物30分钟，其后，添加 4-氨基-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(0.18g，1.18mmol，1.0当量)。允许搅拌反应混合物另外6小时，此时TLC显示反应完成。通过将它倒在冰/水混合物的混合物上来淬灭反应，并用乙酸乙酯(3x150mL)来萃取产生的混合物。用柠檬酸(100mL)、饱和NaHCO₃水溶液(100mL)、水(100mL)、盐水(100mL)来依次洗涤合并的萃取物并最后经MgSO₄干燥。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并且粗产物9a(0.58gm，产率90.6％) 用于boc脱保护步骤以提供9而不用进一步纯化。对于boc脱保护，将0.29 gm的9a溶解于小体积的MeOH并将处于二氧杂环己烷(15mL)中的4M HCl缓慢加入搅拌溶液。搅拌反应混合物6小时，此时TLC显示反应完成。在真空下蒸发过量溶剂以获得棕色固体(9)。使固体产物经受快速层析 (正己烷/EtOAc 9:1)以产生纯9。产率为0.21gm，95％。

(ii)4-(4-(4-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯 -2-酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(10)

在室温下，将氢氧化锂(68mg，1.65mmol，3当量)加入处于二氧杂环己烷水溶液(8ml的二氧杂环己烷，4ml水)中的9a(0.25g，0.55mmol)。搅拌反应混合物3小时，此时TLC显示反应完成。在高真空下蒸发二氧杂环己烷并用水来稀释残余物。用1M柠檬酸来酸化得到的溶液，接着用乙酸乙酯(2x50mL)进行萃取。合并有机层并用盐水(50mL)洗涤，经MgSO₄干燥并最后在减压下利用旋转蒸发器加以浓缩，以获得9a的水解酸形式，为白色固体(产量为0.23g，91.6％)。向处于DMF中的白色固体(0.23gm， 0.52nmol)的搅拌溶液添加2.0当量的EDCl和2.5当量的DMAP。在搅拌混合物20分钟以后，添加市售4-氨基-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(80.1 mg，0.52mmol，1.0当量)。允许搅拌反应混合物另外3小时，此时TLC 显示反应完成。通过将它倒在冰/水混合物的混合物上来淬灭反应并用乙酸乙酯(3x50mL)来萃取产生的混合物。用饱和NaHCO₃水溶液(50mL)和盐水(50mL)来依次洗涤合并的萃取物并最后经MgSO₄干燥。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并且粗产物用于boc脱保护步骤以提供 10。对于boc脱保护，将粗中间体溶解于小体积的MeOH并将处于二氧杂环己烷(5mL)中的4M HCl缓慢加入搅拌溶液。搅拌反应混合物3小时，此时TLC显示反应完成。在真空下蒸发过量溶剂以获得棕色固体(10)。使固体产物经受快速层析(正己烷/EtOAc 8:2)以产生纯10。产率为0.20gm， 83％，经2个步骤。

¹H-NMR(DMSO,400MHz):δ9.72(1H,s),8.09(1H,t,J＝5.6Hz), 7.71(2H,d,J＝8.8Hz),7.49(2H,d,J＝8.8Hz),7.40(1H,d,J＝2.0Hz), 7.27(1H,d,J＝2.0),7.19(1H,d,J＝2.0),7.03(1H,dd,J＝4.0,1.6Hz),7.00 (1H,t,J＝2.0Hz),6.84(1H,d,J＝2.0Hz),6.10(1H,m),3.89(3H,s).m/z (+EI)C₂₅H₂₆N₆O₄(M)⁺的计算值为474.51，实测值为475.35([M+H]⁺

(e)

4-(4-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-羧酸甲酯(11)

将0.3gm的boc保护的6(0.94mmol，1.2当量)溶解于DMF(5mL)，向其添加2.0当量的EDCl和2.5当量的DMAP。允许搅拌混合物30分钟，其后添加4-氨基-1-甲基-1H-咪唑-2-羧酸甲酯(0.121g，0.79mmol，1.0当量)。允许搅拌反应混合物另外6小时，此时TLC显示反应完成。通过将它倒在冰/水混合物的混合物上来淬灭反应并用乙酸乙酯(3x150mL)来萃取产生的混合物。用饱和NaHCO₃水溶液(50mL),、水(50mL)、盐水(50mL) 来依次洗涤合并的萃取物，并最后经MgSO₄干燥.。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并且粗产物11a(0.48gm)用于boc脱保护步骤以提供11。对于boc脱保护，将粗中间体溶解于小体积的MeOH并将处于二氧杂环己烷(5mL)中的4M HCl缓慢加入搅拌溶液。搅拌反应混合物2 小时，此时TLC显示反应完成。在真空下蒸发过量溶剂以获得棕色固体 (11)。使固体产物经受快速层析(正己烷/EtOAc 9:1)以产生纯11。产率为 0.35gm，81％，经两个步骤。

¹H-NMR(DMSO,400MHz):9.75(1H,s),8.03(1H,s),7.71(2H,d,J＝ 8.8Hz,7.53(1H,s),7.52(1H,s),7.48(2H,d,J＝8.8Hz),7.42(1H,s),7.19 (1H,d,J＝2.0),3.94(3H,s),3.91(3H,s),3.89(3H,s).m/z(+EI) C₁₈H₁₉N₅O₃(M)⁺的计算值为353.38，实测值为354.42([M+H]⁺

(f)4-(10-(烯丙氧基羰基)-7-甲氧基-5-氧-11-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酸(13)

在室温下，将0.5M的NaOH溶液(制备自1.4135g的NaOH)加入处于二氧杂环己烷中的12(化合物18，WO 2007/039752)的溶液。允许搅拌反应混合物4小时，此时TLC显示反应完成。在高真空下蒸发二氧杂环己烷并用水稀释残余物。用1M柠檬酸来酸化得到的溶液，接着用乙酸乙酯(2x100mL)加以萃取。用盐水(100mL)来洗涤合并的有机层，经MgSO₄干燥，并最后在减压下利用旋转蒸发器加以浓缩。产率8.7g，(94％)，¹H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.2(2H,s),6.90(1H,s),6.58(1H,s),5.85 (2H,d,J＝9.2Hz),5.73(2H,d,J＝9.2Hz),5.03-5.13(m,6H),4.68-4.35(m, 4H),4.09-4.01(m,4H),3.91-3.82(m,8H),3.69-3.46(m,8H),2.60-2.55 (m,4H),2.18-2.00(m,10H),1.76-1.55(m,4H),1.53-1.43(m,8H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl3):δ177.6,167.6,149.8,132.1,131.9,126.7,117.3,114.9, 110.8,100.7,96.0,91.7,88.5,67.9,66.6,63.6,60.1,56.1,46.5,31.1,30.3, 28.8,25.2,24.1,23.2,20.0；EIMS m/z(+EI)C26H34N2O9(M)⁺的计算值为 518.56，实测值为519.26(M+H)⁺

(g)4-[[4-[[4-(4-氨基苯基)-1-甲基-吡咯-2-羰基]氨基]-1-甲基-咪唑-2- 羰基]氨基]-1-甲基-吡咯-2-羧酸甲酯(19)

在室温下，将氢氧化锂(40mg，1.65mmol，3当量)加入处于二氧杂环己烷水溶液(8ml的二氧杂环己烷，4ml水)中的11a(0.25g，0.55mmol)。搅拌反应混合物3小时，此时TLC显示反应完成。在高真空下蒸发二氧杂环己烷并用水来稀释残余物。用1M柠檬酸来酸化得到的溶液，接着用乙酸乙酯(2x50mL)加以萃取。合并有机层并用盐水(50mL)加以洗涤，经MgSO₄干燥并最后在减压下利用旋转蒸发器加以浓缩，以获得17的水解酸形式，为白色固体(产率为0.235g，97％)，其用于下一步反应而无需任何进一步纯化。向处于DMF中17(0.235gm，0.54nmol)的搅拌溶液添加 2.0当量的EDCl和2.5当量的DMAP。在搅拌混合物20分钟以后，添加市售4-氨基-1-甲基-1H-咪唑-2-羧酸甲酯(100.00mg，0.54mmol，1.2当量)。允许搅拌反应混合物另外3小时，此时TLC显示反应完成。通过将它倒在冰/水混合物的混合物上来淬灭反应，并用乙酸乙酯(3x50mL)来萃取产生的混合物。用饱和NaHCO₃水溶液(50mL)和盐水(50mL)来依次洗涤合并的萃取物，并最后经MgSO₄干燥。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并将粗产物用于boc脱保护步骤，以提供18，将其溶解于小体积的MeOH并将处于二氧杂环己烷(5mL)中的4M HCl缓慢加入搅拌溶液。搅拌反应混合物3小时，此时TLC显示反应完成。在真空下蒸发过量溶剂以获得棕色固体(19)。使固体产物经受快速层析(正己烷/EtOAc 8:2) 以产生纯19。产率为0.22gm，85％，经2个步骤。

¹H-NMR(DMSO,400MHz):10.09(1H,s),δ9.89(1H,s),7.78(2H, d,J＝8.8),7.68(1H,s),7.49(2H,d,J＝8.64),7.35(1H,d,J＝1.6),7.21(1H, d,J＝2.0Hz),7.15(1H,d,J＝2.0Hz),3.97(6H,s),3.90(3H,s),3.84(3H, s)m/z(+EI)C₂₃H₂₃N₇O₄(M)⁺的计算值为461.47，实测值为462.17([M+H]⁺

实施例1

*比较实施例

(a)(S)-甲基4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16a)

(i)(11aS)-烯丙基7-甲氧基-8-(4-(4-(5-(甲氧基羰基)-1-甲基-1H-吡咯 -3-基)苯基氨基)-4-氧代丁氧基)-5-氧-11-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2,3,11,11a-六氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂-10(5H)-羧酸酯 (15a)

将Alloc-THP保护的PBD酸13(3.72g，7.16mmol，1.2当量)的溶液溶解于DMF。在室温下，将EDCl(2.49g，13.02mmol，2.0当量)和 DMAP(1.989g，16.28mmol，2.5当量)加入13的搅拌溶液并允许搅拌混合物30分钟，其后，添加MPB酯7(1.5g，6.514mmol，1.0当量)。允许搅拌反应混合物另外2小时，此时TLC显示反应完成。通过将它倒在冰/ 水混合物的混合物上来淬灭反应并用乙酸乙酯(3x150mL)来萃取产生的混合物。用柠檬酸(200mL)、饱和NaHCO₃水溶液(250mL)、水(250mL)、盐水(250mL)来依次洗涤合并的萃取物并最后经MgSO₄干燥。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并通过硅胶快速层析(MeOH:CHCl_3, 20:80)来纯化粗产物，以产生白色泡沫状固体，15a。产率4.05g。85.5％。 (FTIR,ν_max/cm^–1):2949,2362,1704,1600,1514,1436,1372,1269,1203, 1107,1021,964,765.(¹H NMR,400MHz,CDCl₃):δ7.82(1H,s),7.48(2H, m),7.41(1H,d,J＝2.0Hz),7.40(1H,d,J＝2.4Hz),7.23(2H,d,J＝8.4Hz), 7.17(1H,d,J＝2.0Hz),7.04(1H,d,J＝2.0Hz),5.93-5.65(2H,m),5.09-5.4.97(m,4H),4.68-4.32(m,4H),4.15-4.10(m,4H),3.94-3.82(m, 12H),3.68(m,2H),3.59-3.49(m,6H),2.60-2.57(m,3H),2.15-2.00(m,8H), 1.88-1.80(m,2H),1.79-1.70(6H),1.60-1.44(m,12H)；(¹³C NMR,100MHz, CDCl₃):δ177.1,170.5,167.3,161,6,149.1,136.3,132.1,131.9,130.4,128.9, 127.1,125.9,125.4,123.5,123.1,120.3,117.3,114.6,110.8,91.5,88.6,68.2, 66.5,64.3,63.6,60.3,56.0,51.1,46.4,36.8,31.1,30.9,29.1,25.1,24.6,23.2, 21.0,20.1；m/z(+EI)C₃₉H₄₆N₄O₁₀(M)⁺的计算值为730.80，实测值为731.67 ([M+H]⁺

(ii)(S)-甲基4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16a)

将钯四[三苯基膦](5.60mg，4.8μM，0.05当量)加入处于DCM(5mL) 中的Alloc-THP-PBD共轭物15a(70mg，0.097mmol)、吡咯烷(8.36mg， 0.117mmol，1.2当量)和三苯基膦(8.62mg，0.25当量)的溶液。在室温下，搅拌反应混合物2小时，此时TLC显示反应完成。在减压下通过旋转蒸发来除去过量DCM并在真空中干燥产生的残余物以除去吡咯烷酮。通过柱层析(用正己烷65％％、EtOAc 35％洗脱)来纯化产物以产生产物，为淡黄色固体，3.37(40mg，77％)。[α]^22.7 _D+165°(c＝0.046,CHCl3)；IR(FTIR, ν^max/cm^–1):3297,2944,2358,1701,1598,1567,1508,1442,1374,1264, 1212,1181,1106,1072,824,730；¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ7.68(1H,s), 7.65(1H,d,J＝4.5Hz,H-11),7.52(1H,s,H-6),7.46(2H,dd,J＝8.4,2.0Hz, 2Ar-H),7.40(2H,dd,J＝8.4,2.0Hz,2Ar-H),7.16(1H,d,J＝2.0Hz,Py-H), 7.03(1H,d,J＝1.6Hz,Py-H),6.82(1H,s,H-9),4.12-4.20(2H,m,CH2侧链连接物),3.94(3H,s,N-CH3),3.88(3H,s,O-CH3),3.68-3.71(1H,m,H-11a), 3.50-3.60(2H,m,H2-3),2.58-2.62(2H,m,CH2),2.26-2.31(4H,m,CH2), 1.50-1.54(2H,m,CH2)；¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃):δ164.5,162.4,161.6, 150.5,147.8,140.7,125.9,125.5(2C),123.6,123.1,120.3,114.6,111.8,111.0, 94.4(2C),68.0,63.7,56.1,53.7,51.0,46.6,36.8,31.9,29.6,25.2,24.8,24.1, 20.2；HRMS m/z(+EI)C₃₀H₃₂N₄O₆(M+H)⁺的计算值为545.2400，实测值为 545.2422(M+H)⁺,δ4ppm

以类似的方式，使化合物A和13反应，接着脱保护，来制备化合物 15b-d、g、h和16b-d、g、h。

(b)(S)-甲基4-(4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16b)

[α]^22.7 _D+134°(c＝0.038,CHCl₃)_；IR(FTIR,ν_max/cm^–1):3850.89,3732, 3619,2443,2354,2228,2169,2091,1971,1859,1729,1679,1521,1265,734, 629；¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ7.72(1H,s,NH),7.69(1H,s,NH),7.66 (1H,d,J＝4.0Hz,H-11),7.57(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.53(1H,s,H-6), 7.46(4H,d,J＝8.0Hz,4Ar-H),7.41(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.20(1H,d, J＝2.0Hz,Py-H),7.06(1H,d,J＝2.0Hz,Py-H),7.02(1H,d,J＝1.6Hz,Py-H),6.92(1H,s,Py-H),6.84(1H,s,H-9),4.12-4.20(2H,m,CH₂侧链连接物),4.00(3H,s,N-CH₃),3.96(3H,s,N-CH₃),3.88(3H,s,O-CH₃),3.84(3H, s,O-CH₃),3.70-3.73(1H,m,H-11a),3.55-3.61(2H,m,H₂-3),2.58-2.62(2H, m,CH₂),2.29-2.31(2H,m,CH₂),1.93-2.06(4H,m,CH₂)；¹³C-NMR(125 MHz,CDCl₃):δ164.5,162.4,161.7,150.7,147.3,139.2,126.0,125.6,125.4 (2C),125.2(2C),123.0,120.4(2C),114.6(2C),111.4,94.6(2C),68.3,63.7, 56.1,51.6(2C),41.0,36.9,31.9,29.6,25.2,24.2,24.1,20.2；HRMS m/z(+EI)C₄₂H₄₂N₆O₇(M+H)⁺的计算值为743.3193，实测值为743.3193([M+H]⁺,δ 0.3ppm)

(c)(S)-甲基4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16c)

[α]^22.7 _D+128°(c＝0.037,CHCl₃)；IR(FTIR,ν_max/cm^–1):3321,2237, 2107,2041,1967,1860,1685,1517,1435,1254,1180,1118,749,722,696,667；¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ7.98(1H,s,NH),7.88(1H,s,NH),7.68(1H, s,H-6),7.65(1H,d,J＝4.0Hz,H-11),7.64(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.54 (1H,d,J＝1.6Hz,Py-H),7.52(1H,d,J＝1.6Hz,Py-H),7.45(1H,d,J＝2.0 Hz,Py-H),7.33(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),6.97(1H,s,Py-H),6.89(1H,s, H-9),4.08-4.18(2H,m,CH₂),3.97(3H,s,N-CH₃),3.89(3H,s,N-CH₃),3.84 (3H,s,O-CH₃),3.79(3H,s,O-CH₃),3.66-3.70(1H,m,H-11a),3.55-3.60(2H, m,H₂-3),2.56-2.61(2H,m,CH₂),2.23-2.32(4H,m,CH₂),2.00-2.05(2H,m)；¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃):δ162.5,161.6,159.1,150.4,147.7,138.4, 132.8,132.1131.9(2C),128.6,128.4(2C),125.4(2C),124.8,123.0,121.0, 120.4(2C),116.2,114.6(2C),109.9,94.2,67.4,63.6,57.1,53.7,51.1,46.7, 36.9,36.7,34.0,29.6,24.2；HRMS m/z(+EI)C₃₆H₃₈N₆O₇(M)⁺的计算值为 667.2880，实测值为667.2881([M+H]⁺,δ0.1ppm)

(d)(S)-乙基4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-羧酸酯(16d)

[α]^22.7 _D+122°(c＝0.028,CHCl₃)_,IR(FTIR,ν_max/cm^–1):3324,2355, 2157,2109,2032,1913,1600,1533,1465,1262,1179,1109,751；¹H-NMR (500MHz,CDCl₃):δ8.47(1H,s,NH),7.72(1H,s,NH),7.66(1H,d,J＝4.0 Hz,H-11),7.55(1H,s,H-6),7.52(1H,d,J＝2.0,Py-H),7.49(2H,d,J＝8.0 Hz,2Ar-H),7.37(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.16(1H,d,J＝1.6Hz, Py-H),7.03(1H,s,Im-H),6.91(1H,s,H-9),4.39-4.43(2H,m,O-CH₂) 4.13-4.22(2H,m,CH₂),4.01(3H,s,N-CH₃),3.99(3H,s,N-CH₃),3.83(3H,s, O-CH₃),3.68-3.72(1H,m,H-11a),3.55-3.60(2H,m,H₂-3),2.58-2.63(2H,m, CH₂),2.24-2.32(4H,m,CH₂),2.00-2.07(2H,m,H₂-1),141-1.45(3H,m, CH₃)；¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃):δ163.1,162.5,158.7,150.4,147.7,140.7, 137.2,131.5,125.6(2C),125.4(2C),123.8,123.0,120.4(2C),114.5,111.6, 110.8,109.9,100.0,67.4,61.5,56.1,53.7,51.1,46.7,37.0,36.0,34.0,29.6,24.8,24.2,14.4；HRMS m/z(+EI)C₃₆H₃₉N₇O₇(M)⁺的计算值为682.2989，实测值为682.2986([M+H]⁺,δ-0.4ppm)。

(e)(S)-甲基4-(4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16g)

[α]^22.7 _D+149°(c＝0.054,CHCl₃)；IR(FTIR,ν_max/cm^–1):3310,2947, 2358,2168,2153,2132,2070,2011,1989,1651,1538,1434,1402,1257, 1107,753；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.02(1H,s,NH),7.88(1H,d,J＝ 5.2Hz,H-11),7.68(1H,s,H-6),7.67(1H,d,J＝1.6Hz,Py-H),7.64(1H,d,J ＝1.6Hz,Py-H),7.53(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.45(1H,d,J＝1.6Hz, Py-H),7.31(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.20(1H,s,Py-H),6.96(1H,s, Py-H),6.89(1H,bs,NH),6.81(1H,s,H-9),6.78(1H,d,J＝1.6Hz,Py-H), 6.71(1H,bs,NH),4.11-4.16(2H,m,CH₂),3.97(3H,s,N-CH₃),3.92(3H,s, N-CH₃),3.88(3H,s,N-CH₃),3.84(3H,s,N-CH₃),3.79(3H,s,O-CH₃), 3.68-3.71(1H,m,H-11a),3.55-3.60(2H,m,H₂-3),2.56-2.61(2H,m,CH₂), 2.22-2.28(4H,m,CH₂),1.99-2.04(2H,m)；HRMS m/z(+EI)C₄₁H₄₃N₉O₈ (M)⁺的计算值为790.3313，实测值为790.3314[M+H]⁺,δ0.1ppm。

(f)(S)-甲基4-(4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基)-1-甲基-1H-咪唑-2-酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16h)

[α]^22.7 _D+142°(c＝0.043,CHCl₃)；IR(ν_max cm^–1):3408,2358,2168, 2148,2019,1978,1938,1718,1534,1260,1118,757；¹H-NMR(500MHz, CDCl₃):δ8.72(1H,s,NH),8.12(1H,s,NH),7.71(1H,s),7.65(1H,d,J＝ 4.4Hz),7.53(1H,s),7.48(2H,d,J＝8.0Hz),7.47(1H,s),7.42(2H,d,J＝ 1.6Hz),7.40(2H,d,J＝8.0Hz),7.03(1H,d,J＝1.6Hz),6.95(1H,s),6.82 (1H,s),6.81(1H,d,J＝1.6Hz,),4.12-4.21(2H,m),4.07(3H,s),4.00(3H,s),3.91(3H,s),3.89(3H,s),3.81(3H,s),3.69-3.72(1H,m),3.55-3.61(2H,m), 2.58-2.63(2H,m),2.26-2.32(4H,m,CH₂),2.02-2.07(2H,m,)；HRMS(EI, m/z):C₄₁H₄₃N₉O₈(MH⁺)的计算值为:790.3313，实测值为790.3314。

实施例2

(a)

(i)4-(4-(((11S,11aS)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧-11-((四氢 -2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)丁酰氨基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(14a)

将Alloc-THP保护的PBD酸13(1.85g，3.57mmol，1.2当量)的溶液溶解于DMF。在室温下将EDCl(1.24g，6.48mmol，2.0当量)和DMAP(0.99 g，8.1mmol，2.5当量)加入13的搅拌溶液并允许搅拌混合物30分钟，其后添加4-氨基-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(0.5g，3.243mmol，1.0当量)。允许搅拌反应混合物另外6小时，此时TLC显示反应完成。通过将它倒在冰/水混合物的混合物上来淬灭反应并用乙酸乙酯(3x150mL)来萃取产生的混合物。用柠檬酸(200mL)、饱和NaHCO₃水溶液(250mL)、水(250 mL)、盐水(250mL)来依次洗涤合并的萃取物并最后经MgSO₄干燥。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并且粗产物(1.88gm)用于水解反应以提供14a。为了水解，在室温下，将氢氧化锂(0.24g，5.71mmol， 3当量)加入处于二氧杂环己烷水溶液(75ml的二氧杂环己烷，11.5ml水) 中的粗产物(1.88g，2.87mmol)。搅拌反应混合物3小时，此时TLC显示反应完成。在高真空下蒸发二氧杂环己烷并用水来稀释残余物。用1M柠檬酸来酸化得到的溶液，接着用乙酸乙酯(2x100mL)加以萃取。合并有机层并用盐水(100mL)洗涤，经MgSO₄干燥并最后在减压下利用旋转蒸发器加以浓缩，以获得14a，为白色固体(产率1.68gm，74.0％，经2个步骤)。¹H-NMRδ9.09(1H,s,NH),7.39(1H,d,J＝2.0Hz),7.14(1H,s,H-6),7.12 (1H,s,H-6),6.96(1H,s,H-9),6.76(1H,d,J＝2.0Hz,Py-H),5.86-5.75(2H, m,H-11),5.13-4.84(3H,m),4.61-4.21(2H,m),4.06-3.88(3H,m,侧链H-1, 吡喃H-6),3.87(3H,s,O/NCH3),3.87(3H,s,O/NCH3),3.86(3H,s), 3.53-3.44(3H,m),2.55-2.45(2H,m),2.13-1.88(6H,m),1.70-1.39(6H).m/z (+EI)C₃₂H₄₀N₄O₁₀(M)⁺的计算值为640.68，实测值为641.57([M+H]⁺

(ii)(11S,11aS)-烯丙基7-甲氧基-8-(4-((5-((4-(5-(甲氧基羰基)-1-甲基 -1H-吡咯-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-5-氧-11-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并 [1,2-a][1,4]二氮杂-10(5H)-羧酸酯(15e)

将Alloc-THP保护的PBD-Py酸14a(150mg，0.23mmol，1.0当量) 的溶液溶解于DMF。在室温下，将EDCl(2.49g，13.02mmol，2.0当量) 和DMAP(1.989g，16.28mmol，2.5当量)加入13的搅拌溶液并允许搅拌混合物30分钟，其后添加MPB酯7(67.83mg，0.29mmol，1.25当量)。允许搅拌反应混合物另外3小时，此时TLC显示反应完成。通过将它倒在冰/水混合物的混合物上来淬灭反应并用乙酸乙酯(3x150mL)来萃取产生的混合物。用柠檬酸(50mL)、饱和NaHCO₃水溶液(50mL)、水(50mL)、盐水(50mL)来依次洗涤合并的萃取物并最后经MgSO₄干燥。在减压下通过旋转蒸发器来蒸发过量乙酸乙酯并且粗产物直接用于下一步骤而不用进一步纯化。m/z(+EI)C₄₅H₅₂N₆O₁₁(M)⁺的计算值为852.93，实测值为 854.87([M+H]⁺

(iii)(S)-甲基4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)-1-甲基-1H-吡咯-2-酰胺基) 苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16e)

将钯四[三苯基膦](12.17mg，10.5μM，0.05当量)加入处于DCM(5mL) 中的Alloc-THP-PBD共轭物15e(179mg，0.21mmol)、吡咯烷(17.91mg， 0.25mmol，1.2当量)和三苯基膦(13.81mg，0.25当量)的溶液。在室温下，搅拌反应混合物2h，此时TLC显示反应完成。在减压下通过旋转蒸发来除去过量DCM并在真空中干燥产生的残余物以除去吡咯烷酮。通过高效液相色谱(用丙酮：水梯度并借助于1％TFA进行洗脱)来纯化产物以产生产物，为淡黄色固体，16e(48mg，34％，在HPLC纯化以后)。

[α]^22.7 _D+197°(c＝0.052,CHCl₃)_,IR(FTIR,ν_max/cm^–1):3330,2360, 2214,2180,2041,2020,1999,1967,1698,1517,1438,1265,1180,1119,756, 722,696,667,630；¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ7.77(1H,s,NH),7.68(1H, s,H-6),7.67(2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.64(1H,d,J＝5.0Hz,H-11),7.55 (2H,d,J＝8.0Hz,2Ar-H),7.47(1H,d,J＝2.0Hz,Py-H),7.43(1H,s,NH), 7.18(1H,d,J＝2.0Hz,Py-H),7.09(1H,d,J＝2.0Hz,Py-H),7.05,(1H,d,J ＝2.0Hz,Py-H),6.83(1H,s,H-9),4.09-4.16(2H,m,CH₂),3.95(3H,s, N-CH₃),3.90(6H,s,N-CH₃,O-CH₃),3.84(3H,s,O-CH₃),3.67-3.71(1H,m, H-11a),3.54-3.57(2H,m,H₂-3),2.53-2.56(2H,m,CH₂),2.23-2.30(4H,m, CH₂),2.00-2.05(2H,m)；¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃):δ169.8,164.5, 162.6,161.6,159.5,150.7,147.9,140.8,133.1,132.2,132.1,131.9,131,7, 128.5,128.4,125.9,125.5,123.7,123.1,121.5,120.7,120.4,119.7,114.7, 112.0,111.4,103.9,68.1,56.2,53.7,51.0,46.7,36.8,33.2,29.6,25.1,24.1； HRMS m/z(+EI)C₃₆H₃₈N₆O₇(M)⁺的计算值为667.2880，实测值为 667.2882([M+H]⁺,δ0.3ppm)。

以类似的方式，使化合物13与咪唑基结构单元反应，接着与MPB结构单元反应，最后通过脱保护，来制备化合物14b、15f和16f。

(b)(S)-甲基4-(4-(4-(4-(7-甲氧基-5-氧-2,3,5,11a-四氢-1H-吡咯并 [2,1-c][1,4]苯并二氮杂-8-基氧基)丁酰氨基)-1-甲基-1H-咪唑-2-酰胺基) 苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸酯(16f)

[α]^22.7 _D+188°(c＝0.052,CHCl₃)_,IR(FTIR,ν_max/cm^–1):3301,2169, 2136,2018,1978,1937,1680,1564,1518,1439,1265,1181,1108,750,722；¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ8.90(1H,s,NH),7.98(1H,s,NH),7.67(1H, s,H-6),7.63(1H,d,J＝4.4Hz,H-11),7.59(2H,d,J＝8.4Hz,2Ar-H),7.46 (2H,d,J＝8.4Hz,2Ar-H),7.42(1H,s,Im-H),7.19(1H,d,J＝2.0Hz,Py-H), 7.06(1H,d,J＝1.6Hz,Py-H),6.83(1H,s,H-9),4.10-4.22(2H,m,CH₂),4.07(3H,s,N-CH₃),3.96(6H,s,N-CH₃,O-CH₃),3.84(3H,s,O-CH₃),3.67-3.70 (1H,m,H-11a),3.54-3.58(2H,m,H₂-3),2.57-2.67(2H,m,CH₂),2.26-2.31 (4H,m,CH₂),1.98-2.05(2H,m)；¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃):δ169.5, 164.5,162.5,161.6,156.4,150.4,147.8,135.6,132.1,131.9(2C),128.5, 128.4,126.0,125.6,123.5,123.1,121.5,119.7,114.6(2C),111.6,111.0,67.7, 56.1,53.7,51.1,46.6,36.9,35.8,33.9,29.6,24.7,24.1；HRMS m/z(+EI) C₃₅H₃₇N₇O₇(M)⁺的计算值为668.2833，实测值为668.2838[M+H]⁺,δ0.5 ppm。

实施例3

利用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑)比色测定 (如下所述)，在96小时暴露以后，在许多肿瘤细胞系和非癌细胞系WI38 中，比较了本发明的化合物16c-h与比较化合物16a、16b和GWL-78的细胞毒性潜力。

多种类型的人癌细胞系(包括表皮样(A431)、肺(A549)、卵巢(A2780) 和乳腺(MCF7和MDAMB-231)、以及非肿瘤细胞系WI38)的板，用来确定化合物的细胞毒性。在37℃下在5％CO₂的加湿气氛下在正常条件下，在补充有10％胎牛血清(Biosera,UK)、1％的L-谷氨酰胺、1％非必需氨基酸和0.05％氢化可的松(Gibco,Invitrogen,USA)的Dulbecco改良的Eagle 培养基或改良的Eagle培养基(取决于细胞系)中生长细胞。然后将细胞接种入总体积为160μl的96孔板，并在开始实验以前允许达到30-40％的汇合度(degree ofconfluence)。以100μM的最大浓度，将配体溶解于灭菌超纯水，并制备系列十倍稀释液。以40μl的体积，将它们加入细胞。在连续暴露于每种配体96小时以后，通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5- 二苯基溴化四唑)(Lancaster Synthesis Ltd,UK)比色测定(SkehanP,S.R.,et al.,Journal of the National Cancer Institute 1990,82,1107)来确定细胞毒性。通过分光光度测定法在λ＝570nm处(ELx808,Bio-Tek仪器，Inc.,USA)来量化吸收度。通过剂量响应分析并利用Origin 6.0^TM软件来计算IC₅₀值。

*比较化合物

利用膜联蛋白V测定(van Engeland,M,et al.,Cytometry 1998,31,1-9) (如下所述)，还在原代CLL细胞系中比较了本发明的化合物16c-h与比较化合物16a、16b和GWL-78的细胞毒性潜力。

在补充有100U/mL青霉素、100mg/mL链霉素、和10％胎牛血清的 RPMI培养基(Invitrogen,Paisley,U.K.)中培养新鲜分离的外周血CLL细胞 (1×10⁶mL^-1)。在37℃下，在加湿的5％CO₂气氛中，在存在每种化合物的情况下，温育细胞。将所有化合物溶解于DMSO并在系列稀释液中针对原代CLL细胞加以评估。此外，进行对照培养，其中未添加药物。利用膜联蛋白V/普罗匹定碘化物(propidium iodide)流式细胞术测定(Bender Medsystems,Vienna,奥地利)来量化化合物的细胞毒性效应。重复进行所有测定，以及依据S形剂量响应曲线并利用Prism 6.0软件(Graphpad Software Inc.,San Diego,CA)来计算LD₅₀值。通过相对于由该浓度诱导的凋亡百分比来绘制化合物浓度的对数，从而得出S形剂量响应曲线。宽范围的浓度用来建立每种单独化合物的生物活性范围。

实施例4

用乳腺和胰腺癌的小鼠模型，在体内异种移植研究中，测试了16e 和16f。

最初，利用腹腔内给予(IP)，进行小规模研究，以确定在Swiss-Webster 小鼠中的MTD(最大耐受剂量)。化合物一般是耐受性良好的而没有毒性的任何迹象。然而，对于16e，在400μg/Kg/天剂量水平的剂量水平下，观测到轻微的体重减轻(图1A)。对于16f，在相同的剂量水平下，也观测到一些不显著的体重减轻。仅使用350μg/Kg/天的16f进行的重复的MTD实验并不显示出任何体重减轻或毒性的其它迹象(图1B)。因为在MTD研究中，16f提供稍微更好的毒性曲线，因此决定对这种分子进行更广泛的体内肿瘤异种移植研究。

ER阴性MDA MB 231乳癌异种移植研究

在小鼠模型至，在ER阴性MDA MB 231乳癌异种移植物中进行了 16f的活性的体内研究。人乳癌细胞系MDA-MB-231(5x10⁶个细胞)用来在 2-3个月龄并且体重为20-25g的雌性MF1裸鼠的胁腹中建立异种移植。随后的传代在胁腹中皮下植入小肿瘤块(大约1mm³)。当肿瘤达到大约 0.06cm³(植入后3周)时，它们被分为3组(每组4只小鼠)。药物治疗组被给予250μg/Kg/天或300μg/Kg/天的IV剂量(在DMSO中)，连续5天，接着两个无药日，持续3周，接着在第4周连续2天，此时停止剂量。如图2所示，与对照小鼠(▲)相比，在250μg/Kg(◆)和300μg/Kg(■)剂量水平下，16f产生突出的体内抗肿瘤活性而没有毒性的任何迹象(图2，其中箭头显示最后的注射剂量)。在300μg/Kg剂量水平的情况下，在给予最后的 IV剂量以后，肿瘤没有再生长，最长达3周。

在小鼠模型中Mia Paca 2胰腺癌异种移植

以与上述类似的方式，在胰腺癌异种移植小鼠模型中进行16f的体内研究。药物(16f)治疗组被给予300μg/Kg/天的IV剂量，连续5天，接着无药物2天，并持续上述循环3周。在300μg/Kg剂量水平下，与对照小鼠相比，16f产生突出的抗肿瘤活性而没有毒性的任何迹象(图3：◆300 μg/Kg 16f；■对照)。在撤销药物以后肿瘤无法立即重新生长是显著的，并且在最后的给予剂量以后没有观察到生长最长达21天。对来自肿瘤和对照组织的横截面进行免疫组化染色，并且，与对照相比，在实验动物中，研究结果是与NFκB抑制一致的。

实施例5

用商用Transcription Factor Activation Profiling Array Assay^TM(Signosis) 并利用HeLa细胞系来评估16f。在此测定中，利用生物素标记的DNA探针的集合，基于单个转录因子DNA-结合位点的共有序列，可以同时监测 48种转录因子的活性。前五位转录因子(在10nM的浓度下4小时，其活性被7h下调节至少30％)是：NFAT、EGR、NF-κB、SMAD和OCT-4。 NF-κB的活性减少几乎50％。

基于以下假设：通过结合于NF-κB的同源DNA序列，16f可以下调节NF-κB依赖性基因(例如，IκB、BCL2、BCLX_L)的表达，从而阻止转录因子蛋白的相互作用并抑制多种基因的转录，因此决定探索在CLL细胞中的这种可能性，其中已知NF-κB信号是活性的并密切相关于恶性肿瘤的起始和进展。相比于作为对照的肌动蛋白，利用磷酸化IκB和p65的水平作为NF-κB活性的替代物，蛋白质印迹表明，在温育24小时以后，在下降至0.1nM的浓度下，16f引起磷酸化IκBα的显著抑制，其中对磷酸化p65仅具有轻微影响。

Claims

1.一种式I的化合物：

或其盐，其中：

R⁷是OR^7A，其中R^7A选自Me、CH₂Ph和烯丙基；

R¹⁰和R¹¹一起形成双键；

A是：

其中X和Y选自：CH和NMe；COH和NMe；CH和S；N和NMe；N和S；

B是单键；以及

R¹是C_1-4烷基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中，在基团A中，X和Y选自CH和NMe；CH和S；N和NMe；以及N和S。

3.根据权利要求2所述的化合物，其中，在基团A中，X和Y选自CH和NMe；以及N和NMe。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中，R¹是C_1-2烷基。

5.根据权利要求4所述的化合物，其中，R¹是甲基。

6.一种药物组合物，包含根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，以及药用载体或稀释剂。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物在制造用于治疗增生性疾病的药物中的用途。

8.一种根据权利要求6所述的组合物在制备用于治疗患有增生性疾病的患者的药物中的应用。