CN104666511B - 用栀子植物的叶子制备栀子环烯醚萜苷类化合物的工艺方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了用栀子植物的叶子制备栀子环烯醚萜苷类化合物的工艺方法。具体工艺步骤如下：（1）在新鲜的栀子的叶子中加入加打浆剂打浆，或在干燥的栀子的叶子粉中加入提取剂制成栀子叶浆；（2）将栀子叶浆加洗涤剂搅拌洗涤1次以上，再过滤或离心，合并保留上清液或滤液即为栀子环烯醚萜苷类有效成分提取液；（3）将提取液浓缩，上色谱柱洗脱，即得到栀子环烯醚萜苷化合物，为类白色或白色粉末，其中栀子苷为20～99.9%。本发明方法可低成本地大量制备以栀子苷为主的栀子环烯醚萜苷类化合物。本发明利用栀子叶生产栀子环烯醚萜苷类有效成分，较传统的以栀子果为原料的生产方法，可极大地降低生产成本，原料成本仅是传统成本的1/50。

Description

用栀子植物的叶子制备栀子环烯醚萜苷类化合物的工艺方法

技术领域

本发明属于生物制品的提取制备技术领域，涉及栀子环烯醚萜苷类有效成分制备工艺方法。

背景技术

栀子环烯醚萜苷类化合物是国际公认的中药栀子的主要有效成分。该类成分一直以来都是从茜草科植物栀子的干燥成熟的果实中提取得到。栀子果是中国传统中药，也是中国近年来大力发展，拟打入国际市场的中国特色产品。栀子果中除含有栀子苷或京尼平苷等环烯醚萜苷类成分外还含有大量栀子色素。其中栀子环烯醚萜苷类化合物具有多种用途：可以制成天然食用色素栀子蓝，也是用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病的原料药物。具体药用活性包括：（1）利胆作用；（2）镇静、降压作用；（3）抗微生物作用，能对许兰氏黄癣菌、腹股沟表皮癣菌、红色表皮癣菌等多种真菌及血吸虫有抑制作用；（4）解热作用；（5）抗炎作用；（6）降低血压；（7）促进胰腺分泌，并能保持胰细胞膜的结构和功能；此外还有抑制人口肌收缩、止血、保肝、止泻、镇痛和防治动脉粥样硬化等作用。

栀子环烯醚萜苷类化合物成分具有广阔的应用领域，但传统的制备方法都是从栀子果中提取，而栀子果含有大量的干扰物质，导致提取工艺复杂，物耗过大、收得率低，同时原料成本也很高，产品极其昂贵，从而限制了该类成分的大量应用和我国近年相关产业的发展。

发明内容

为了降低栀子环烯醚萜苷类化合物生产成本及加工难度，本发明提供一种用栀子植物的叶子作为加工原料制备栀子环烯醚萜苷类化合物的工艺方法。

从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的工艺步骤如下：

（1）在新鲜的栀子的叶子中或干燥粉碎的栀子的叶子粉中加入加打浆剂，打浆，制成栀子叶浆；

（2）将栀子叶浆过滤或离心，加洗涤剂搅拌洗涤1次以上，再过滤或离心，合并保留的上清液或滤液即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液；

（3）将栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液浓缩，上色谱柱洗脱，即得到栀子环烯醚萜苷类化合物，为类白色或白色粉末；其中栀子苷的含量为20～99.9%。

从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的具体工艺操作步骤如下：

（1）栀子叶浆的制备

将新鲜的栀子叶和打浆剂按料液体积比1:0.2～3（w/w）混合打浆，在10～98℃，提取1～200分钟，得到栀子叶浆；或将干燥的栀子叶粉碎后与提取剂，按料液比1:1~8（w/w）混合搅拌，在10～98℃，提取10～600分钟，得到栀子叶浆；

（2）栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液制备

将栀子叶浆离心或过滤，在离心沉淀或过滤残渣中按料液体积比1:0.2～2（w/w）加洗涤剂搅拌洗涤1～2次，并再次分别离心或过滤，合并离心上清液或滤液即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液；

（3）制得环烯醚萜苷类化合物

将栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液减压浓缩到原体积的10～100%，过滤，然后进行色谱法纯化，色谱填料为树脂或反相C18，浓缩的提取液样品上到色谱柱中，先用1～10倍柱体积的水洗涤，然后，用5～90%的甲醇或乙醇溶液等度洗脱或梯度洗脱，收集目标成分，脱去溶剂得到干燥的白色或类白色粉末，即为栀子环烯醚萜苷类化合物，栀子环烯醚萜苷类化合物中栀子苷（gardenoside）的含量为20～99.9%。

所述打浆剂为水或浓度为5～95%的甲醇或乙醇。

所述洗涤剂为水或浓度为5～95%的甲醇或乙醇。

所述栀子为栀子属（Gardenia Ellis）植物山栀子或水栀子或小叶栀子。

所述步骤（2）中的离心转速为3000～10000转/分钟，离心时间为5～30分钟。

所述步骤（2）中的过滤为过20～80目筛的压滤或抽滤。

所述步骤（3）中的洗脱为等度洗脱或梯度洗脱。

所述等度洗脱是：浓度为5～90%甲醇或浓度为5～90%乙醇溶液的洗脱，洗脱时间为10～600分钟。

梯度洗脱条件为：起始以浓度为1～5%甲醇或乙醇洗脱，甲醇或乙醇的浓度随洗脱时间均匀逐渐升高，最后醇的浓度达到50～100%，洗脱时间为10～600分钟。

本发明的有益技术效果体现在下述几个方面：

1、本发明利用栀子叶生产栀子环烯醚萜苷类化合物，较传统的以栀子果为原料的生产方法，可极大地降低生产成本。传统的以果为原料加工时，果的原料成本目前每千克为25元左右，而叶的成本仅0.5元左右，因此本发明的原料成本仅是传统的1/50。另一方面栀子的叶产量远远大于果的产量。一亩栀子产鲜果100~400千克，而可产鲜叶2000~10000千克，还可利用修剪下的废叶，因此以叶生产栀子环烯醚萜苷类化合物，原料来源丰富并可巨大地提高产量降低生产成本；

2、本发明在前期研究中发现栀子植物的叶子中同样含有栀子环烯醚萜苷类化合物，并且与栀子果一样，其主要成分都是栀子苷。叶中栀子苷含量与果相近，由于栀子叶的组成较栀子果简单，特别是没有栀子黄色素的干扰，叶中干扰物质较少；因此其环烯醚萜苷类化合物提取纯化工艺较以果为原料果的提取纯化工艺大大简化，可使色谱分离效率提高一倍以上，工艺成本降低一倍以上；

3、由于栀子叶来源丰富，可全年供货，从而可使栀子环烯醚萜苷类化合物长年生产，大大提高设备利用率和资金周转周期，降低生产风险，产生巨大经济效益；

4、因此按本发明工艺方法生产的产品成本低，工艺简便、工艺稳定、生产设备投资可大可小，生产灵活，适合多种规模的企业投资。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步地描述。

实施例1：

从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的具体操作步骤如下：

1.栀子叶浆的制备

将100千克新鲜的山栀子（Gardenia jasminoides Ellis）的叶子和20千克水（料液比1:0.2（w/w））混合打浆，温度10℃，提取600分钟，得到栀子叶浆120千克；

（2）栀子环烯醚萜苷类化合物提取液的制备

将120千克栀子叶浆在转速3000转/分钟条件下离心30分钟，得到离心沉淀60千克，在60千克离心沉淀中加入12千克水（料液比1:0.2（w/w））搅拌洗涤1次，然后再次在转速3000转/分钟条件下离心5分钟，合并两次离心上清液共80千克即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液；

（3）制得环烯醚萜苷类化合物

将80千克栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液减压浓缩到8千克（等于原体积10%），经20目筛过滤，然后进行色谱法纯化，色谱填料为树脂；将过滤后的栀子环烯醚萜苷类化合物的浓缩提取液上到色谱柱中后，先用1倍柱体积的水洗涤，然后用浓度5%的甲醇溶液等度洗脱，洗脱时间600分钟，收集目标成分，脱去溶剂，得到干燥的类白色粉末2800克，即为栀子环烯醚萜苷类化合物，栀子环烯醚萜苷类化合物中栀子苷（gardenoside）的含量为20%。

实施例2：

从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的具体操作步骤如下：

1.栀子叶浆的制备

将100千克新鲜的水栀子（Gardenia jasminoides var. radicans Makino）的叶子和300千克浓度5%的乙醇（料液比1:3）混合打浆，温度98℃，提取10分钟，得到栀子叶浆400千克；

（2）栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液的制备

将400千克栀子叶浆在转速10000转/分钟条件下离心5分钟，得到离心沉淀60千克，在60千克离心沉淀中加入120千克浓度5%的乙醇（料液比1:2）搅拌洗涤2次，并分别在转速10000转/分钟条件下离心30分钟，合并三次的离心上清液共460千克即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液；

（3）制得环烯醚萜苷类化合物

将460千克栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液减压浓缩到460千克（等于原体积的100%，实际不浓缩），过80目筛，然后进行色谱法纯化，色谱填料为树脂，将过滤后的栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液上到色谱柱中后，后先用10倍柱体积水洗涤，然后用乙醇溶液梯度洗脱，即开始为1%的乙醇洗脱，乙醇浓度在600分钟内上升到浓度50%，洗脱洗脱时间为600分钟，收集目标成分，脱去溶剂后得到干燥的白色粉末640克，即为栀子环烯醚萜苷化合物，栀子环烯醚萜苷类化合物中栀子苷（gardenoside）的含量为99.9%。

实施例3：

从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的具体操作步骤如下：

1 栀子叶浆的制备

将100千克干燥的山栀子（Gardenia jasminoides Ellis）的叶子打成叶子粉，与100千克95%甲醇（料液比1:1）混合搅拌，温度10℃，提取600分钟，得到栀子叶浆200千克；

（2）栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液的制备

将200千克栀子叶浆在转速5000转/分钟条件下离心15分钟，得离心沉淀150千克，在150千克离心沉淀中加入30千克95%甲醇（料液比1:0.2）搅拌洗涤，过20目筛，合并二次的离心上清液即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液，共80千克；

（3）制得环烯醚萜苷类化合物

将80千克栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液浓缩到原体积10%，过20目筛，然后进行色谱法纯化，色谱填料为树脂，将过滤后的栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液上到色谱柱中后，先用5倍柱体积水洗涤，然后用浓度90%的甲醇等度洗脱，洗脱时间10分钟，收集目标成分，脱去溶剂后得到干燥的白色粉末2800克，即为栀子环烯醚萜苷类化合物，栀子环烯醚萜苷类化合物中栀子苷（gardenoside）含量为60%。

实施例4：

从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的具体操作步骤如下：

1 栀子叶浆的制备

将100千克干燥的水栀子（Gardenia jasminoides var. radicans Makino）的叶子打成叶子粉，与800千克浓度95%的乙醇（料液比1:8）混合搅拌，温度98℃，提取10分钟，得到栀子叶浆900千克；

（2）栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液的制备

将900千克栀子叶浆过60目筛，得过滤残渣150千克，在150千克过滤残渣中分2次共加入浓度95%的乙醇300千克（料液比1:2）搅拌洗涤，并分别过60目筛，合并三次的滤液即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液，共1000千克；

（3）制得环烯醚萜苷化合物

将1000千克栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液减压浓缩到原体积50%，过60目筛，然后进行色谱法纯化，色谱填料为反相C18，将过滤后的栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液上到色谱柱中后，先用2倍柱体积水洗涤，然后进行梯度洗脱，即开始用浓度5%的甲醇溶液洗脱，然后醇度逐渐提高，在10分钟内醇度升到100%，洗脱洗脱时间为10分钟，收集目标成分，脱去溶剂后得到干燥的白色粉末1800克，即为栀子环烯醚萜苷类化合物，栀子环烯醚萜苷类化合物中栀子苷（gardenoside）的含量为98%。

实施例5：

从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的具体操作步骤如下：

1 栀子叶浆的制备

将100千克新鲜的小叶栀子（Gardenia angkorensis）的叶子和200千克浓度50%的乙醇溶液（料液比1:2）混合打浆，温度50℃，提取300分钟，得到栀子叶浆300千克；

（2）栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液的制备

将300千克栀子叶浆过60目筛，得过滤残渣60千克，在60千克过滤残渣中分两次加入浓度50%的乙醇溶液共120千克（料液比1:2）搅拌洗涤2次，并分别过60目筛，合并三次的滤液即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液，共360千克；

（3）制得环烯醚萜苷化合物

将360千克栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液浓缩到180千克（是原体积的50%），过60目筛，然后进行色谱法纯化，色谱填料为树脂，将过滤后的栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液上到色谱柱中后，先用5倍柱体积水洗涤，然后用浓度50%的乙醇溶液等度洗脱，洗脱时间300分钟，收集目标成分，脱去溶剂后得到干燥的白色粉末1100克，即为栀子环烯醚萜苷类化合物，栀子环烯醚萜苷类化合物中栀子苷（gardenoside）的含量为60.0%。

Claims (3)

1.从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷类化合物的工艺方法，其特征在于具体工艺操作步骤如下：

（1）栀子叶浆的制备

将新鲜的栀子叶和打浆剂按料液体积比1:0.2～3混合打浆，在10～98℃，提取1～200分钟，得到栀子叶浆；或将干燥的栀子叶粉碎后与提取剂，按料液比1:1~8混合搅拌，在10～98℃，提取10～600分钟，得到栀子叶浆；

所述栀子为栀子属植物山栀子或水栀子或小叶栀子；

所述打浆剂为水或浓度为5～95%的甲醇或乙醇；

（2）栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液制备

将栀子叶浆离心或过滤，在离心沉淀或过滤残渣中按料液体积比1:0.2～2加洗涤剂搅拌洗涤1～2次，并再次分别离心或过滤，合并离心上清液或滤液即为栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液；

所述洗涤剂为水或浓度为5～95%的甲醇或乙醇；

（3）制得环烯醚萜苷类化合物

将栀子环烯醚萜苷类化合物的提取液减压浓缩到原体积的10～100%，过滤，然后进行色谱法纯化，色谱填料为树脂或反相C18，浓缩的提取液样品上到色谱柱中，先用1～10倍柱体积的水洗涤，然后，用5～90%的甲醇或乙醇溶液等度洗脱或梯度洗脱，收集目标成分，脱去溶剂得到干燥的白色或类白色粉末，即为栀子环烯醚萜苷类化合物，栀子环烯醚萜苷类化合物中栀子苷的含量为20～99.9%；

所述等度洗脱是：浓度为5～90%甲醇或浓度为5～90%乙醇溶液的洗脱，洗脱时间为10～600分钟；

梯度洗脱条件为：起始以浓度为1～5%甲醇或乙醇洗脱，甲醇或乙醇的浓度随洗脱时间均匀逐渐升高，最后醇的浓度达到50～100%，洗脱时间为10～600分钟。

2.根据权利要求1所述的从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷化合物的工艺方法，其特征在于：所述步骤（2）中的离心转速为3000～10000转/分钟，离心时间为5～30分钟。

3.根据权利要求1所述的从栀子叶中制备栀子环烯醚萜苷化合物的工艺方法，其特征在于：所述步骤（2）中的过滤为过20～80目筛的压滤或抽滤。