CN104666358A - 一种蟾皮缓释滴丸及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种蟾皮缓释滴丸及其制备方法，属于医药技术领域。该滴丸是由蟾皮脂溶性物质和基质加工而成，所述蟾皮脂溶性物质：基质的重量比为3:2，所述基质包括硬脂酸和PEG4000，所述硬脂酸和PEG4000的重量比为2～4:1。本发明主要对蟾皮有效成分最佳提取工艺进行考察，得到蟾皮脂溶性成分最佳提取工艺；其次通过细胞技术对蟾皮有效成分进行筛选，筛选出抗肿瘤效果最佳的成分最为制剂研究的主药；然后是对缓释滴丸制备工艺进行考察，以体外累积溶出率、圆整度和丸重差异为指标，确定缓释滴丸的最佳处方和最佳制备工艺；最后对蟾皮缓释滴丸进行急性毒性研究，最终得到一种安全有效、患者顺应性好的蟾皮缓释滴丸。

Description

一种蟾皮缓释滴丸及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种蟾皮缓释滴丸及其制备方法。

背景技术

蟾皮是蟾蜍科动物中华大蟾蛛（Bufo bufo gargarizans Cantor）或黑眶蟾蜍（Bufo elanostictus Schneider）的干燥表皮，其味辛、性凉、微毒，归心、肝、脾、肺经，有清热解毒，利水消胀之功效，我国民间多用来治疗原发性肝癌、肺癌等，具有较好的临床效果。现代药理学对蟾皮提取物进行了相关研究发现，蟾皮提取物具有强心、抗肿瘤、抗病毒、麻醉、止痛、促进骨骼增生等功能，并可调节肿瘤患者的细胞免疫和体液免疫功能，日益受到患者及研究开发人员的关注。目前，蟾皮提取物被开发成多种上市产品，如华蟾素注射液、华蟾素片、华蟾素口服液及华蟾素胶囊等，效果显著。另外，也有其他剂型的研究报道，如干蟾皮提取液微球栓塞剂、华蟾素滴丸、华蟾素分散片、华蟾素注射乳剂等。

蟾毒内酯类被认为是蟾皮、蟾酥中的主要抗肿瘤有效成分，华蟾酥毒基和酯蟾毒配基作为蟾毒内酯类成分，经常用来作为蟾皮和蟾酥提取方法考察及制剂质量标准的指标性成分，但是由于此类成分半衰期短，导致患者服用量大，服用次数频繁，顺应性差，而大剂量服用导致患者毒副作用频发，不利于疾病的治疗，给患者及家庭造成重大损失，故本发明将蟾皮提取物制成缓释滴丸，以期能达到降低服用次数，提高患者顺应性，降低毒性的效果。

缓释制剂（sustained-release system）亦称长效制剂或延效制剂，是指有目的地控制药物释放以达到合理治疗效果的一类剂型，它使人体获得平稳的治疗学药浓度，从而避免了普通制剂频繁用药所致的“峰谷”现象，提高了药物的安全性、有效性和顺应性。缓释制剂能够缓慢持久释放药物，给药频率比普通制剂减少一半或给药频率比普通制剂有所减少，且能显著增加患者的顺应性的制剂，是药物制剂研究方向的热点之一。滴丸剂（guttate pills）系指固体或液体药物与适当基质加热熔化混匀后，滴入不相容的冷凝液中、收缩冷凝而制成的小丸状制剂，主要供口服使用。滴丸是利用固体分散体技术的原理制备的丸剂，具有将液态药品固体化、提高难溶性药品的生物利用度、制备简便、成产方便、质量易控等特点，并且，根据不同基质的选择，可以有效控制有效成分的释放，将滴丸制备成速释滴丸及缓释滴丸，从而达到速效及长效的目的。缓释滴丸是选择水不溶性辅料作为主要基质，阻碍有效成分在介质中的释放，从而获得平稳的血药浓度，提高患者用药的有效性及安全性。

由于缓释滴丸能够提高药物的安全性和有效性，因此越来越受到重视，是国家重点开发的一类制剂，目前对缓释滴丸的研究报道正在逐年增加。以蟾皮的抗肿瘤效果为基础，依靠固体分散体技术制备成蟾皮缓释滴丸，使药物缓慢持久释放，对有毒类中药的发展有很大优势，且缓释滴丸能减少患者服用次数，提高患者顺应性。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种蟾皮缓释滴丸及其制备方法的技术方案。

所述的一种蟾皮缓释滴丸，其特征在于是由蟾皮脂溶性物质和基质加工而成，所述蟾皮脂溶性物质：基质的重量比为3:2，所述基质包括硬脂酸和PEG4000，所述硬脂酸和PEG4000的重量比为2～4:1。

所述的一种蟾皮缓释滴丸，其特征在于所述硬脂酸和PEG4000的重量比为3:1。

所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）取蟾皮超微粉加入乙醇溶液进行提取，提取液浓缩、蒸干，得到蟾皮脂溶性物质；

2）以蟾皮脂溶性物质为原料药，硬脂酸和PEG4000为基质，所述原料药与基质的重量比为 3:2，所述的硬脂酸和PEG4000的重量比为2～4:1；

3）按照上述比例，分别准确称取所述原料药和基质，将原料药与无水乙醇混合，将基质水浴熔融后，将无水乙醇混悬的原料药加入到基质中，搅拌至无醇味，保持料液温度在80～90℃，以二甲基硅油为冷凝液，60℃至5℃冷凝，药液的滴速以两滴之间不相融合为标准，滴距为4～10cm进行滴制，成型后甩干，选丸，即得蟾皮缓释滴丸。

所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中取蟾皮超微粉加入10～20倍量浓度为70～90%的乙醇溶液提取1～3次，每次30～90min。

所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中取蟾皮超微粉加入20倍量浓度为80%的乙醇溶液提取2次，每次60min。

所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中硬脂酸和PEG4000的重量比为3:1。

所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中保持料液温度在85℃，滴距为4cm。

本发明主要对蟾皮有效成分最佳提取工艺进行考察，得到蟾皮脂溶性成分最佳提取工艺；其次通过细胞技术对蟾皮有效成分进行筛选，筛选出抗肿瘤效果最佳的成分最为制剂研究的主药；然后是对缓释滴丸制备工艺进行考察，以体外累积溶出率、圆整度和丸重差异为指标，确定缓释滴丸的最佳处方和最佳制备工艺；最后对蟾皮缓释滴丸进行急性毒性研究，最终得到一种安全有效、患者顺应性好的蟾皮缓释滴丸。

附图说明

图1为不同乙醇浓度对脂溶性成分含量的影响图；

图2为不同提取溶剂倍量对脂溶性成分含量的影响图；

图3为不同提取时间对脂溶性成分含量的影响图；

图4为不同提取次数对脂溶性成分含量的影响图；

图5为不同药材粒径对脂溶性成分含量的影响；

图6为华蟾酥毒基线性回归方程；

图7为不同溶出介质缓释滴丸溶出曲线图；

图8为不同亲水性基质对缓释滴丸溶出曲线影响图；

图9为不同疏水性基质对缓释滴丸溶出曲线影响图；

图10为最佳制备工艺进行平行试验验证图。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步说明本发明。

试验例1：蟾皮脂溶性成分提取工艺的考察

1.1 单因素考察

1.1.1 不同乙醇浓度对脂溶性成分含量的影响

分别称取4份0.50g的蟾皮超微粉加入锥形瓶中，分别加入20倍量60%、70%、80%、90%乙醇回流提取，提取时间为60min，提取1次，过滤，滤液定容至25ml，在以上色谱条件下，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基之和为指标，测定不同乙醇浓度对脂溶性成分含量的影响，如图1。结果表明，随着乙醇浓度的增加，脂溶性成分含量有所增加，当乙醇浓度为70%、80%、90%时，相对增加的比较平稳。

1.1.2 不同提取溶剂倍量对脂溶性成分含量的影响

分别称取3份0.50g的蟾皮超微粉加入锥形瓶中，分别加入10、15、20倍量的80%乙醇回流提取，提取时间为60min，提取1次，过滤，滤液定容至25ml，在以上色谱条件下，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基之和为指标，测定不同提取溶剂倍量对脂溶性成分含量的影响，如图2。结果表明，随着提取溶剂乙醇浓度的增加，脂溶性成分的含量有所增加。

1.1.3 不同提取时间对脂溶性成分含量的影响

分别称取3份0.50g的蟾皮超微粉加入锥形瓶中，分别加入20倍量的80%乙醇回流提取，提取时间分别为30、60、90min，提取1次，过滤，滤液定容至25ml，在以上色谱条件下，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基之和为指标，测定不同提取溶剂倍量对脂溶性成分含量的影响，如图3。结果表明，随着提取时间的增加，脂溶性成分含量有所增加。

1.1.4 不同提取次数对脂溶性成分含量的影响

分别称取3份0.50g的蟾皮超微粉加入锥形瓶中，分别加入20倍量的80%乙醇回流提取，提取时间分别为60min，分别提取1、2、3次，过滤，滤液分别定容至25、50、50ml容量瓶中，在以上色谱条件下，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基之和为指标，测定不同提取次数对脂溶性成分含量的影响，如图4。结果表明，随着提取时间的增加，脂溶性成分含量有所增加。

1.1.5 不同药材粒径对脂溶性成分含量的影响

分别称取0.50g的蟾皮超微粉和0.50g蟾皮10目粉加入锥形瓶中，分别加入20倍量的80%乙醇回流提取，提取时间分别为60min，提取1次，过滤，滤液分别定容至25ml容量瓶中，在以上色谱条件下，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基之和为指标，测定不同药材粒径对脂溶性成分含量的影响，如图5。结果表明，药材粒径对蟾皮脂溶性成分的提取有较大影响，超微粉能破坏药材细胞膜，有利于有效成分的提取，所以选取蟾皮超微粉作为考察对象考察蟾皮脂溶性成分的最佳提取工艺。

1.2 因素水平设计

以前期工作为基础，选取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基和干膏量作为评价指标，考察乙醇浓度（A）、提取倍量（B）、提取时间（C）、提取次数（D）等因素对提取效果的影响。因素水平设计见表1。

表1

1.3 正交试验设计

称取干蟾皮超微粉9份，每份2.00g，采用L9（34）正交表安排试验，进行提取，合并提取液，定容至100ml容量瓶中。分别进行华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定，进行干膏量的测定。综合加权评分权重系数华蟾酥毒基含量（X1）为0.4，脂蟾毒配基含量（X2）为0.4，干膏量（X3）为0.2。华蟾酥毒基（X1）、脂蟾毒配基（X2）和干膏量（X3）均为质量分数较高者为好，分别将此三项指标的最高值定为100。按一下公式计算综合评分：

Y=0.4×X1×100/X1max+0.4×X2×100/X2max+0.4×X3×100/X3max

正交试验设计见表2，方差分析见表3。

表2

表3

根据直观分析和方差分析可知，各因素对提取工艺的影响程度依次为B>D>A>C，即提取倍量>提取次数>乙醇浓度>提取时间；且提取倍量对工艺影响显著（P<0.05）。以华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的提取率及干膏率为指标确定的最佳提取工艺为A2B3C2D2，即以20倍量80%乙醇溶液提取2次，每次60min。

1.3 验证试验

称取干蟾皮超微粉2.00g，共3分，按最佳提取工艺进行平行试验。结果见表4。表明所采用的提取工艺简便、稳定，方法可行。

表4

试验例2：滴丸剂有效成分筛选

通过人胃癌细胞SGC7901的MTT实验，筛选蟾皮有效成分，为下一步的滴丸制备主药的选择奠定基础。目前蟾皮有效成分存在两种看法，一者说蟾皮的有效成分主要是脂溶性成分，包括华蟾酥毒基、酯蟾毒配基等蟾毒内酯类，一者说蟾皮的有效成分为其水溶性成分，即吲哚生物碱类。本试验对蟾皮的脂溶性成分及水溶性成分进行比较，并进一步比较脂、水混合的肿瘤抑制效果。在前提提取工作中，水提浸膏得率较高，不利于后期制剂制备工艺的研究，所以对水提部分进行醇沉纯化。即本实验主要是比较蟾皮水提、醇提、不同乙醇浓度醇沉后的沉淀及上清液和醇提混合药物的肿瘤细胞增殖抑制效果。

1 药物的制备

1.1 水溶性成分药物的制备

取干蟾皮超微粉以50倍量水提取3次，每次90min，提取液浓缩、蒸干，得水溶性成分药物。

1.2脂溶性成分药物的制备

取干蟾皮超微粉以20倍量80%乙醇溶液提取2次，每次60min，提取液浓缩、蒸干，得脂溶性成分药物。

1.3 50%醇沉工艺

按1.2对蟾皮脂溶性成分提取工艺的考察的最佳工艺进行提取，提取液浓缩、蒸干，得脂溶性成分药物，浓缩。药渣按1.1水溶性成分的最佳工艺提取，所得提取液浓缩至一定体积，加入无水乙醇调节乙醇含量为50%，放入冰箱48h，过滤，得上清液和沉淀。所得上清液和沉淀分别与等量的脂溶性药物混合，蒸干，得50%醇沉上清液和脂溶性成分混合药物及50%醇沉沉淀和脂溶性成分混合药物。

1.4 80%醇沉工艺

按1.2对蟾皮脂溶性成分提取工艺的考察的最佳工艺进行提取，提取液浓缩、蒸干，得脂溶性成分药物，浓缩。药渣按1.1水溶性成分的最佳工艺提取，所得提取液浓缩至一定体积，加入无水乙醇调节乙醇含量为80%，放入冰箱48h，过滤，得上清液和沉淀。所得上清液和沉淀分别与等量的脂溶性药物混合，蒸干，得80%醇沉上清液和脂溶性成分混合药物及80%醇沉沉淀和脂溶性成分混合药物。

注：所有提取物用前用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液配制成所需浓度，水不溶性成分用DMSO助溶，DMSO最终浓度<0.01%。

2 细胞培养

2.1 细胞复苏

取出冻存的SGC7901细胞，投入37℃水浴，迅速融化后，800rpm离心5min，弃上清，加入RPIM-1640培养液（含10%胎牛血清，1%青霉素-链霉素），混悬，移至培养瓶中，放入具有饱和湿度、37℃、 5% CO2 培养箱中培养。

2.2 细胞传代

倒置电镜下观察，当贴壁生长的肿瘤细胞密度较大时，即可进行传代。细胞在培养瓶中生长达到一定密度时，加1ml胰酶消化，待细胞形态变圆，间隙增大后，加入2ml完全培养液，终止消化。用弯头吸管轻轻吹下贴壁细胞，1000 rpm，离心2min，弃上清，加入新鲜培养液传代培养。

实验方法

MTT法检测蟾皮不同有效成分对SGC7901细胞的增殖抑制作用。取对数生长期SGC7901细胞制成7×104/mL 单细胞悬液, 接种于96 孔板中, 每孔100μL, 37℃、5% CO2条件下培养24 h后, 给予不同浓度的蟾皮各提取物，各100μl/孔，另设空白对照组（只加培养液）和阴性对照组（未加药组），每组均设3个复孔。给药浓度如下：

表5

细胞在加药处理48h 后, 加入5% MTT溶液 (5 mg·mL−1) 20 μl, 继续孵育4 h, 然后加入DMSO 150 μL/孔, 低速振荡15min, 用酶标仪490 nm 处测各孔的吸收度 (A) 值。根据公式计算细胞增殖率:细胞增殖抑制率 (%) = (1 − 加药孔平均A 值/对照孔平均A 值) × 100%。

3结果

蟾皮不同成分对人胃癌SGC7901细胞的增殖有不同的作用，其中第1组蟾皮水溶性成分对人胃癌SGC7901细胞的增殖作用随着药物浓度的提高抑制率减少，无法算出IC50。第2、3、4、5、6组抑制率随着药物浓度的增加而增加，IC50分别是141.13µg/ml、201.18µg/ml、141.22µg/ml、117.17µg/ml和255.12µg/ml，根据NCI标准，IC50≤230µg/ml可作为抗肿瘤药物，说明蟾皮脂溶性提取物有很好的抑制肿瘤细胞增殖的活性，见表

表6

注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与空白对照组相比^△P＜0.05， ^△△P＜0.01

表7

注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与空白对照组相比^△P＜0.05， ^△△P＜0.01；IC50=141.13µg/ml

表8

注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与空白对照组相比^△P＜0.05， ^△△P＜0.01；IC50=201.18µg/ml

表9

注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与空白对照组相比^△P＜0.05， ^△△P＜0.01；IC50=141.22µg/ml

表10

注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与空白对照组相比^△P＜0.05， ^△△P＜0.01；；IC50=117.17µg/ml

表11

注：与阴性对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与空白对照组相比^△P＜0.05， ^△△P＜0.01；；IC50=255.12µg/ml

4.结论

华蟾素是蟾皮提取精制而成的水溶性制剂，目前上市的有华蟾素片、华蟾毒口服液、华蟾毒注射液等，取得了良好的临床治疗效果，其主要活性成分也进行了大量的研究，从目前的研究来看，生物碱类成分并没有明显的细胞毒活性，本试验也进一步证明了脂溶性成分的肿瘤细胞增殖抑制作用明显强于水溶性成分。

人胃癌细胞SCG7901细胞MTT试验中，对蟾皮水提、醇提、不同乙醇浓度醇沉后的沉淀及上清液和醇提混合药物的肿瘤细胞增殖抑制效果进行了比较，和醇提取相混合的组别均具有良好的肿瘤细胞增殖抑制作用，考虑到滴丸制剂载药量小及后期工业生产的可行性，采用醇提取作为接下来制剂制备的主药。

试验例3：处方筛选及制备工艺

根据细胞MTT试验，筛选出细胞抑制率最高的蟾皮脂溶性成分作为主药，在缓释滴丸的基质选择方面，药物的性质起到关键的作用，可以根据主药的性质，通过预实验，初步确定缓释滴丸基质的种类及配比，其中主要是水溶性辅料和难溶性辅料应用比例的筛选过程，对药物是否能达到缓释作用，有很重要的意义。

PEG X 是滴丸制剂中最常用的水溶性载体，无生理作用，化学稳定性好，易溶于水，熔点低，毒性小，具有良好的分散力和较大的内聚力，在胃肠道内容易吸收，不干扰药物的含量分析，能够显著地增加药物的溶出速率，提高药物的生物利用度。硬脂酸是一种内源性的长链饱和脂肪酸，在体内无毒，具有良好的生物兼容性，不溶于水，在体系中可作为骨架材料起到缓释效果。另外，较常用的难溶性辅料还包括十八醇、单硬脂酸甘油酯等，在实验中进一步进行筛选。

常用的滴丸冷凝液有液体石蜡、二甲基硅油、植物油等，综合考虑实验室实际情况，拟选择液体石蜡和二甲基硅油进行考察。

在滴制过程中，控制好滴制速度非常关键，滴速过快，滴丸容易粘连，硬度和圆整度较差，滴速过慢，圆整度好，成型性较好，但是容易增加丸重差异，比较耗时，所以应在不影响成型效果的情况下提高滴速。滴距也是影响滴丸圆整度的一个重要指标，滴距过小，液体来不及收缩，丸型不圆整，滴距过大，液体容易在液面成扁形或跌散形成小丸。在料温的考察发现，料温过低，易出现拖尾，圆整度差，料温过高，可能发生局部焦糊现象，而且易使滴丸表面褶皱，圆整度降低，所以在预实验中，可以对滴制速度、滴距和料温进行初步摸索。

一、方法和结果

（一）缓释滴丸预实验

1 缓释滴丸评价指标

针对缓释滴丸的特点和该制剂的要求，选用外观（圆整度、丸重差异）和累计释放度作为评价指标，通过综合评分的方法，对缓释滴丸的处方和滴制条件进行筛选和优化。评分标准如下：

圆整度（R）：滴丸的最短径/最长径×100%（圆整度越接近100%，圆整性越好，不得低于80%）。

丸重差异（W）：丸重差异的RSD（%），以（100%-W）计入综合评分。

累积释放度（K）：选取起始点（1h），中间点（6h）和结束点（10h）三个时间点的累积释放度分别为Q1，Q6，Q10，其中，Q1以25%为标准（确定有无突释现象），评分为│Q1-25│，Q6以60%为标准（确定释药特性），评分为│Q6-60│，Q10以80%为标准（确定药物是否释药完全），评分为│Q10-80│，则K=│Q1-25│+│Q6-60│+│Q10-80│，K值越小，说明释放度与所定标准越接近，即处方越合理。以（100%-K）计入综合评分。

综合评分Y=R/Rmax*0.3+（100%-W）/（100%-Wmin）*0.3+（100%-K）/（100%-Kmin）*0.4

2 累积释放度及含量测定方法学的建立

2.1对照品溶液的制备

精密称取华蟾素毒基5.3mg置于25ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品储备液。

2.2 供试品溶液的制备

参照蟾皮脂溶性成分提取最佳工艺制备（干蟾皮超微粉以20倍量80%乙醇溶液提取2次，每次60min，提取液浓缩、蒸干，得脂溶性成分药物）供试品溶液，称取滴丸约0.2g，80%乙醇20ml，提取两次，每次2次，定容于50ml容量瓶内。

2.3标准曲线的绘制

分别精密移取不同体积的华蟾酥毒基对照品储备液置于5ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，测定吸光度。华蟾酥毒基对照品储备液移取量分别为0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8ml，制备成编号为1-6的标准品溶液。以样品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，华蟾酥毒基线性回归方程Y=21.523X-0.0213，R=0.9994，如图6，可见华蟾酥毒基在0.00848~0.03392 mg/ml范围内，吸光度与浓度存在良好的线性关系。

2.4精密度试验

精密移取华蟾酥毒基对照品储备液0.5ml置于5ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，测定吸光度。

表12

结果表明：华蟾酥毒基吸光度相对标准偏差（RSD）小于2%，表明仪器的精密度良好。

3.体外释放度试验

药物释放度参照2010版《中国药典》（二部）中缓释、控释和迟释制剂指导原则的规定，用转篮法分别测定蟾皮缓释滴丸的释放度，精密称取样品适量，量取0.1mol/l盐酸溶出介质500ml注入溶出杯中，转速为100 r·min-1，温度为（37±0.5）℃，分别于1、2、4、6、8、10、12h取样，同时补充同体积同温度的溶出介质，经0.45μm微孔滤膜过滤后，测定有效成分的含量，计算累积释放度，绘制体外时间-浓度曲线，评价其缓释的特性。

4 单因素实验

4.1 载药量的确定

《浙江省中药炮制规范》2005年版收载干蟾，规定蟾皮用量为1-3g/天，服用剂量较大，在保证滴丸能够成型的前提下，最大程度的提高载药量，主药占滴丸的百分比大于45%时，料液过于粘稠，不能滴制，百分比在40%时，可以滴制，并对滴丸的成型性影响较小，所以确定主要占滴丸的40%，主药：基质=3:2。

4.2 料液制备方法的确定

通过查阅大量文献发现，在滴丸滴制过程中，主药以粉末形式加入到熔融的基质中较常见，由于本课题所用主要是蟾皮的醇提取，较难干燥并粉碎，所以参照固体分散体的制备方法，以熔剂-熔融法进行制备，首先将基质熔融，然后将提取物均匀混悬于有机溶剂中，再少量多次加入到基质中，搅拌，待溶剂挥发完全，进行滴制。

主要对80%乙醇和无水乙醇进行考察，80%乙醇挥发较慢，并且会在挥发时产生大量气泡，影响滴丸的圆整度及光滑度，无水乙醇挥发较快，气泡少，最终确定以无水乙醇作为溶剂。

4.3 冷凝介质的确定

中国药典2010版一部附录ⅠK滴丸剂项下规定，冷凝介质必须安全无害，且与药物不发生作用，常用的冷凝介质有液体石蜡、植物油、甲基硅油和水等，本实验主要对冷凝介质种类进行筛选，为有利于滴丸基质中气泡的排除，采用冷凝液温度梯度，提高滴丸的圆整度。

分别以液体石蜡、二甲基硅油为冷凝液，50→5℃梯度冷凝，按主药：基质=3:2，硬脂酸：PEG4000=3:1精密称取药物与基质，基质于90℃水浴熔融，加入无水乙醇混悬的蟾皮提取物，搅拌至无醇味，滴速以两滴之间不相融合为标准，滴距为7cm进行滴制，滴丸滴制完成后用滤纸和吸水纸擦干，测定圆整度发现，二甲基硅油为冷凝液滴制的滴丸圆整度较好，故选择二甲基硅油为冷凝液，梯度冷凝制备滴丸。

4.4 蟾皮缓释滴丸溶出介质的确定

分别精密称取蟾皮缓释滴丸各4分，分别以蒸馏水、0.1mol/l盐酸溶液、0.5%SDS溶液和1%SDS溶液为溶出介质，绘制溶出曲线，如图7。根据溶出曲线的形态，选择最佳溶出介质。

结果表明，不同溶出介质对蟾皮缓释滴丸的溶出有较大影响，SDS溶液能增加蟾皮有效成分的释放，SDS浓度越高，释放越快，但是到释放后期，吸光度有下降趋势，蒸馏水作为溶出介质，曲线前端没有突释现象，但是释放后期，有下降趋势，0.1mol/l盐酸溶液溶出曲线较好，故选择0.1mol/l盐酸溶液作为缓释滴丸的溶出曲线。

4.5 亲水性基质种类的选择

PEG X 是滴丸剂常用辅料，能够增加难溶性药物的溶解度，提高生物利用度，本课题所选主药为蟾皮醇提物，难溶性成分，需要PEG X 调节有效成分的释放。分别选择PEG2000、PEG4000、PEG6000做为亲水性基质滴制滴丸，以0.1mol/l盐酸溶液作为溶出介质，绘制溶出曲线，如图8。根据溶出曲线，最终选择PEG4000作为亲水性基质。

4.6 疏水性基质种类的选择

缓释滴丸的制备，常用的疏水性基质有硬脂酸、十八醇、单硬脂酸甘油酯等，这些疏水性基质可以形成疏水性骨架，降低有效成分的释放速率。分别选择硬脂酸、十八醇、单硬脂酸甘油酯做为疏水性基质滴制滴丸进行溶出实验。在滴制过程中，十八醇作为疏水性基质进行熔剂-熔融法混悬时，产生大量结块，不易滴制，即以硬脂酸和单硬脂酸甘油酯作为疏水性基质的比较，如图9所示。选择硬脂酸作为疏水性基质。

（二）正交设计试验

1 因素水平表设计

通过预实验，选定硬脂酸：PEG4000（A），管口温度（B）、滴距（C）、料温（D）4个主要因素，每个因素选取3个水平，采用正交设计法L9（34），以滴丸蟾皮有效成分的累计百分释放量为考察指标，考察滴丸的缓释效果，确定最佳制备工艺。

表13

2 正交表设计及结果

表14

表15

根据直观分析和方差分析可知，各因素对提取工艺的影响程度依次为D>A>C>B，即料温>硬脂酸：PEG4000>滴距>冷凝液温度；且料温和硬脂酸：PEG4000对缓释滴丸成型及释放度有影响（P<0.1）。以滴丸圆整度、丸重差异和累积释放率为指标确定的蟾皮缓释滴丸最佳制备工艺为A2B2C1D2，即硬脂酸：PEG4000=3:1混合熔融，加入无水乙醇混悬的主药，搅拌并维持料温在85℃，冷凝液温度为60→5℃，滴距为4cm时进行滴制，滴丸滴制完成后用滤纸和吸水纸擦干，保存。

3 验证

按最佳制备工艺进行平行试验3次。结果见表16，图10所示。表明所采用的制备工艺简便、稳定，方法可行。

表16

4 蟾皮缓释滴丸释放方程的拟合

经过研究，蟾皮缓释滴丸能达到很好的缓释效果，通过对已知模型对试药过程进行拟合，能进一步解释蟾皮缓释滴丸的释药机制，目前研究比较多的药物释放数学模型主要有零级模型、一级模型和Higuchi模型等。制备3批蟾皮缓释滴丸，按释放度测定方法进行试验，将溶出结果进行以上三种药物释放动力学数学模型进行拟合，确定最佳药物释放模型，见表。

零级释药模型：K=a1+k1t

一级释药模型：ln（100-K）=-a2+k2t

Higuchi方程：K=a3+k3t1/2

上式中，K为药物累计释放度，t为取样时间，k1、k2、k3为释药常数，a1、a2、a3为常数。

表17

经过拟合后发现，Higuchi方程的r2 更接近1，也就是说，以Higuchi方程对释放曲线进行拟合，得到的拟合方程能较好的解释药物的释药机制。

5 蟾皮缓释滴丸制备方法

以二甲基硅油为冷凝液，60→5℃梯度冷凝，按主药：基质=3:2，硬脂酸：PEG4000=3:1精密称取药物与基质，水浴熔融，加入无水乙醇混悬的蟾皮提取物，搅拌至无醇味，保持料液温度在85℃，滴速以两滴之间不相融合为标准，滴距为4cm进行滴制，滴丸滴制完成后用滤纸和吸水纸擦干，测定圆整度、丸重差异和体外累积释放率。

二、分析与讨论

第一，蟾皮缓释滴丸的制备是以圆整度（R）、丸重差异（W）及累计释放度（K）作为评价指标综合评分。圆整度（R）是以百分制计入综合评分，R越接近100%，则评分越高；丸重差异（W），即丸重差异的RSD（%），以（100%-W）计入综合评分，W越小，说明丸重差异越小，即（100%-W）越接近100%，则评分越高；累计释放度（K）是缓控释制剂的一个重要指标，也是综合评分中所占份额较大的指标，以（100%-K）计入综合评分，首先根据缓控释制剂的指导原则，在药物释放过程中确定三个点，即起始点（1h），中间点（6h）和结束点（10h），通过预实验和相关文献，确定这三个点的理论累计释放度分别为25%、60%、80%，得出K=│Q1-25│+│Q6-60│+│Q10-80│，K越小，说明释放过程越符合理论值，也就是说（100%-K）越接近100%，则评分越高。

第二，蟾皮醇提取过程中会把蟾皮中少量脂肪油提取出来，所以不能干燥并粉碎成粉末，所以料液制备过程不能选择常见的直接加入粉末的方法，将蟾皮醇提取混悬与无水乙醇中，再通过熔剂熔融法制备料液，能够将主药均匀混匀于基质中，不过应注意将无水乙醇全部挥发完全，否则影响药物的溶出情况。

第三，缓释滴丸的处方筛选中，亲水性基质和疏水性基质对药物的释放起着关键作用。亲水性基质是对PEG2000、PEG4000和PEG6000进行了比较，发现随着聚乙二醇的分子量增加，累计释放度有所降低，也就是说，聚乙二醇的水溶性随着分子量的增大而降低。疏水性基质主要比较了硬脂酸和单硬脂酸甘油酯，硬脂酸的对药物释放的减缓作用比单硬脂酸甘油酯较强。

第三，通过单因素及正交设计试验，得到蟾皮缓释滴丸的最佳处方比例及制备工艺，所制备的蟾皮缓释滴丸的重现性好，工艺简单。

第四，Higuchi模型是扩散型药物释放系统的经典模型，以Higuchi方程对释放曲线进行拟合，得到的拟合方程能较好的解释药物的释药机制。

三、小结

本部分对蟾皮缓释滴丸的处方筛选及制备工艺进行了研究，从蟾皮缓释滴丸的圆整度、丸重差异及累计释放度进行综合评分，确定最佳处方为：主药：基质=3:2，硬脂酸：PEG4000=3:1，最佳滴制条件为：以二甲基硅油为冷凝液，60→5℃梯度冷凝，保持料液温度在85℃，滴速以两滴之间不相融合为标准，滴距为4cm进行滴制，结果表明该制备工艺简单、科学、可靠、重现性好。

Claims (7)

1.一种蟾皮缓释滴丸，其特征在于是由蟾皮脂溶性物质和基质加工而成，所述蟾皮脂溶性物质：基质的重量比为3:2，所述基质包括硬脂酸和PEG4000，所述硬脂酸和PEG4000的重量比为2～4:1。

2.如权利要求1所述的一种蟾皮缓释滴丸，其特征在于所述硬脂酸和PEG4000的重量比为3:1。

3.如权利要求1所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）取蟾皮超微粉加入乙醇溶液进行提取，提取液浓缩、蒸干，得到蟾皮脂溶性物质；

2）以蟾皮脂溶性物质为原料药，硬脂酸和PEG4000为基质，所述原料药与基质的重量比为 3:2，所述的硬脂酸和PEG4000的重量比为2～4:1；

3）按照上述比例，分别准确称取所述原料药和基质，将原料药与无水乙醇混合，将基质水浴熔融后，将无水乙醇混悬的原料药加入到基质中，搅拌至无醇味，保持料液温度在80～90℃，以二甲基硅油为冷凝液，60℃至5℃冷凝，药液的滴速以两滴之间不相融合为标准，滴距为4～10cm进行滴制，成型后甩干，选丸，即得蟾皮缓释滴丸。

4.如权利要求3所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中取蟾皮超微粉加入10～20倍量浓度为70～90%的乙醇溶液提取1～3次，每次30～90min。

5.如权利要求3所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中取蟾皮超微粉加入20倍量浓度为80%的乙醇溶液提取2次，每次60min。

6.如权利要求3所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中硬脂酸和PEG4000的重量比为3:1。

7.如权利要求3所述的一种蟾皮缓释滴丸的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中保持料液温度在85℃，滴距为4cm。