CN104655775B - 一种食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种食用香精香料中3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩的测定方法，前处理选用含有内标的无水乙醇超声萃取样品，萃取液过滤膜后直接进入气相色谱‑质谱联用仪进行测定，选择离子模式检测，内标法进行定量。本方法采用气相‑质谱联用测定食用香精香料中3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩，方法样品处理简单、易于操作，检测成本低，方法重复性好，回收率高，可以实现对香精香料中3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩含量进行快速、准确、批量测定，且实验过程不使用有毒有害化学品，对操作人员危害小，对环境无污染。
Description
技术领域
本发明属于食品添加剂理化检验技术领域，具体涉及一种食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法。
背景技术
2013年6月4日欧洲食品安全管理局(EFSA)公布了对3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩重新评估的意见，认为该物质在体内和体外试验均表现出致突变性，作为食品用香料使用存在安全问题。2013年6月14日，欧盟委员会通过法规(Regulation(EC)No 545/2013)，禁止2,5-二甲基-3-乙酰基-噻吩作为食品用香料使用，将其从食品用香料法规附录I食品用香料清单中删除。
2013年8月以前，我国允许将3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩作为食品用香料使用。《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB 2760-2011)“允许使用的食品用合成香料名单”中收录该物质。欧盟食品用香料法规(REGULATION(EC)No1334/2008)的附录I食品用香料清单收录“3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩(编号15.024)”。2014年8月14日，中国香精香料化妆品工业协会根据现有的安全评估结论及协会对国内部分香料香精主要生产企业“3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩”生产和使用情况的调查结果，发布了香料香精行业自律文件-关于3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的限制要求(香化协字[2013]62号)，自律文件规定：自本自律文件发布之日起，香料生产企业不得生产用作食品用香料的3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩；食品用香精生产企业调整配方，不得再使用该物质。
食用香精香料是食品生产中不可或缺的主要组成从部分，其安全性是食品安全的重要方面，而安全控制的源头，就是生产原料，文献调研表明：目前我国尚无香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的检测方法，也缺乏相关方面的研究，为确保食品添加剂的安全，有必要建立食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法。
发明内容
发明目的：提供一种能够快速、简便、准确分析食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的气相色谱-质谱联用检测方法,填补该物质分析方法的空白。本发明前处理简单、易于操作，定性准确，灵敏度和回收率高。
本发明的技术方案是提供一种食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法，其特征在于包括以下步骤：
1)将食用香精香料样品加入到含有内标物的无水乙醇萃取液中，室温下超声萃取15min，静置1-3min。
2)取上清萃取液，经滤膜过滤后采用气相色谱-质谱仪进行检测，选择离子模式检测，由组分峰面积与内标峰面积之比进行内标法定量。
所述内标物为草酸二乙酯，所述含有内标物的无水乙醇萃取液中内标物浓度为5μmol/L。
所述滤膜为有机滤膜，孔径为0.22μm或0.45μm。
所述方法的气相色谱条件：采用Thermo TG-WAXMS色谱柱进行分离，进样口温度220℃，进样量1μL，分流比1:10，柱流量：1mL/min,升温程序：50℃保持1min,以20℃/min升至200℃，保持20min。
所述质谱条件:采用电子电离源，电力电压70eV，离子源温度300℃；四级杆温度280℃，溶剂延迟：7.5min，选择离子检测扫描定量，3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩及内标物草酸二乙酯定量和定性选择离子如下表：
| 序号 | 化合物名称 | 保留时间(min) | 定性离子及其峰度比 | 定量离子 |
| 1 | 3-乙酰基-2,5-二甲基 | 8.37 | 139.154.111(100:55:25) | 139 |
| 噻吩 | ||||
| 2 | 草酸二乙酯 | 13.60 | 74:45:30(100:93:67) | 74 |
本发明的有益效果如下：
1、本发明首次采用气相色谱分离、质谱选择离子扫描监测、内标法定量的的方式检测食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的含量，本方法耗时短，灵敏度和回收率高，重复性好，能实现对食用香精香料中该物质快速、准确、批量检测。
2、本发明实验过程不使用有毒有害化学品，对操作人员危害小，易于操作。
3、本发明操作简便、快速、准确、灵敏度及重复性好的优点。
4、本发明所采用的色谱条件使得目标物和内标物的色谱峰分离较好，并具有较好的线性相关性，检出限为0.98mg/kg。
附图说明
附图1为本发明方法的测定程序
附图2为本发明实例1的样品色谱图
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
1、仪器及试剂
气相色谱-质谱联用仪(Thermo TRACE 1300)色谱柱(Thermo TG-WAXMS，30m×0.25mm×0.25μm)，Millipore Q-pod Element超纯水系统(美国Millipore公司)；AB204-S型电子分析天平(感量0.0001g)(瑞士梅特勒公司)，0.22μm微孔过滤膜，超声清洗器。
超纯水(18MΩ)，乙醇(色谱纯，百灵威化学试剂公司)，250pmoL/μL，安捷伦公司)。
2、溶液配制
(1)内标溶液配制
内标储备液：准确称取0.0365g(精确至0.0001g)草酸二乙酯于50mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容，得到0.73g/L的内标母液。于阴凉、干燥处保存，防止受潮。
内标萃取液：移取1mL内标储备液于1000mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，得浓度为5μmol/L的萃取液，于阴凉、干燥处保存。
(2)标准工作溶液配制：准确移取0.1002g纯度为99.8％的3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩标准溶液于100ml容量瓶中，用内标萃取液定容，得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩母液。分别移取不同体积的母液，用内标萃取液配制为浓度为0.1mg/L、0.5mg/L 1.0mg/L 2.0mg/L5.0mg/L 10.0mg/L的六级系列标准溶液。
(3)气相色谱/质谱条件
色谱条件:采用Thermo TG-WAXMS色谱柱进行分离，进样口温度220℃，进样量1μL，分流比1:10，柱流量：1mL/min,升温程序：50℃保持1min,以20℃/min升至200℃，保持20min；
质谱条件:采用电子电离源，电力电压70eV，离子源温度300℃；四级杆温度280℃，溶剂延迟：7.5min，选择离子检测扫描定量，3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩及内标物草酸二乙酯定量和定性选择离子如下表：
(4)标准曲线绘制：将不同系列浓度的标准溶液进入气相色谱-质谱联用仪检测；以被测物的峰面积与其内标的峰面积的比值(Y)对被测物的浓度(X)进行线性回归，求得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的标准曲线；
(5)样品制备和分析：准确称取0.3g待测样品，放入50ml磨口三角瓶中，准确加入25mL内标萃取液(草酸二乙酯浓度为5μmol/L)，超声15min，取出后摇荡锥形瓶片刻使其混合均匀，经0.22μm滤膜过滤后进行气相色谱－质谱联用仪分析；
本实施例中选取的不同生产厂家、不同类型的食用香精香料36个样品中，除1个样品检测出3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩(含量为86.2mg/kg)外，其余样品均未检出。
实施例2
本实施例对本发明的加标回收率进行检测，分析方法如下：
以实施例1中检出含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的样品为对象，参照实施例1的方法，采用低、中、高三个水平加标的方法，向样品中加入3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩标样，测其加标后含量。每个水平平行测定三次，取平均值进行加标回收率的计算，测定结果表1：
表1方法加标回收率
从表1可知，样品的加标回收率在95.91-100.23％之间，说明本方法的回收率较好。
实施例3
本实施例对本发明的精密度进行检测，分析方法如下：
以实施例1中检出含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的样品为对象，参照实施例1的方法，6次平行测定加标样品中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的含量，计算相对标准偏差，考察方法的精密度，结果如表2所示，
表2方法的精密度
从表2可以看出，本方法的相对标准偏差RSD小于3％，说明本方法的重复性好，满足实验要求。
本发明的上述实施例仅仅清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动，这里无法对所用的实施方式予以穷举，凡是属于本发明技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (1)
1.一种食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法，其特征在于包括以下步骤：
1)将食用香精香料样品加入到含有内标物的无水乙醇萃取液中，室温下超声萃取15min后，静置1-3min；
2)取静置后上清液，经滤膜过滤后采用气相色谱-质谱仪进行检测，选择离子模式检测，内标法定量；
所述内标物为草酸二乙酯；
所述含有内标物的无水乙醇萃取液中内标物浓度为5μmol/L；
所述滤膜为有机滤膜，孔径为0.22μm或0.45μm；
所述步骤中的色谱条件如下：
色谱柱：采用Thermo TG-WAXMS色谱柱进行分离
进样口温度：220℃
进样量：1μL
分流比：1:10
柱流量：1mL/min
升温程序：50℃保持1min,以20℃/min升至200℃，保持20min；
所述步骤中的质谱条件如下：
离子源：电子电离源
电力电压：70eV
离子源温度：300℃
四级杆温度280℃
溶剂延迟：7.5min，
扫描方式：选择离子检测扫描定量；
3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩及内标物草酸二乙酯定量和定性选择离子如下表：
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