CN104651353B - 一种检测人乳头瘤病毒及病毒分型的试剂盒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测人乳头瘤病毒的试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括引物组和通用芯片；引物组包括引物对HPV‑6B、引物对HPV‑11B、引物对HPV‑16B、引物对HPV‑18B、引物对HPV‑26B、引物对HPV‑31B、引物对HPV‑33B、引物对HPV‑35B、引物对HPV‑39B、引物对HPV‑45B、引物对HPV‑51B、引物对HPV‑52B、引物对HPV‑53B、引物对HPV‑56B、引物对HPV‑58B、引物对HPV‑59B、引物对HPV‑66B、引物对HPV‑68B、引物对HPV‑70B、引物对HPV‑73B、引物对HPV‑81B和引物对HPV‑82B；通用芯片上分别固定有序列表的序列46至序列表的序列67所示的22条探针。本发明提供的试剂盒可广泛用于临床高效诊断和女性体检。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测人乳头瘤病毒及病毒分型的试剂盒及其应用。
背景技术
子宫颈癌（又称宫颈癌）是威胁妇女健康的主要疾病之一。发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌。现认为宫颈癌是全球性公共卫生问题，也是发展中国家最常见的癌症。据WHO报道，2005年有超过50万的宫颈癌新发病例，90%来自发展中国家。在已建立了筛查制度的发达国家和一些发展中国家的流行病学资料显示，子宫颈浸润癌的发病率和死亡率已经大幅度下降。
对宫颈癌发病病因的研究表明，人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）高危型持续感染是宫颈癌发生、发展的必要因素。人乳头瘤病毒是小型双链DNA病毒，主要引起高级脊椎动物的上皮细胞发生增殖以及乳头瘤样改变。依据宫颈癌发生的危险性高低将HPV分为：低危型HPV(如HPV-6、HPV-11、HPV-70、HPV-81等)和高危型HPV(如HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-53、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-68等)。
尽管多数高危型HPV感染是一过性的，病毒约经6～8个月后可被清除，但仍有少部分患者(4%)体内的HPV病毒不能被清除，感染呈持续性，这将导致上皮内瘤变（CIN）持续存在或进一步发展为宫颈癌。从高危型HPV感染开始至发展为宫颈癌的时间间隔为15年，因此早期筛查和清除HPV感染可有效地预防宫颈癌的发生。
核酸检测具有操作简单、特异性高、灵敏度高等优点，已经被广泛用于临床检测。但是普通的PCR方法和荧光定量PCR由于检测通量的局限性不能满足临床HPV分型的需求。随着越来越多高危型HPV的确定，必须建立一种能够同时检测多种HPV的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测人乳头瘤病毒的试剂盒及其应用。
本发明首先提供了一种引物组，包括22个引物对中的至少1个引物对；所述22个引物对为引物对HPV-6A、引物对HPV-11A、引物对HPV-16A、引物对HPV-18A、引物对HPV-26A、引物对HPV-31A、引物对HPV-33A、引物对HPV-35A、引物对HPV-39A、引物对HPV-45A、引物对HPV-51A、引物对HPV-52A、引物对HPV-53A、引物对HPV-56A、引物对HPV-58A、引物对HPV-59A、引物对HPV-66A、引物对HPV-68A、引物对HPV-70A、引物对HPV-73A、引物对HPV-81A和引物对HPV-82A；
所述引物对HPV-6A（用于鉴定HPV-6）由序列表的序列1自5’末端第23-45位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-11A（用于鉴定HPV-11）由序列表的序列3自5’末端第22-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-16A（用于鉴定HPV-16）由序列表的序列5自5’末端第21-45位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-18A（用于鉴定HPV-18）由序列表的序列7自5’末端第24-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-26A（用于鉴定HPV-26）由序列表的序列9自5’末端第21-40位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列10所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-31A（用于鉴定HPV-31）由序列表的序列11自5’末端第24-46位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-33A（用于鉴定HPV-33）由序列表的序列13自5’末端第24-47位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-35A（用于鉴定HPV-35）由序列表的序列15自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-39A（用于鉴定HPV-39）由序列表的序列17自5’末端第21-45位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列18所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-45A（用于鉴定HPV-45）由序列表的序列19自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列20所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-51A（用于鉴定HPV-51）由序列表的序列21自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列22所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-52A（用于鉴定HPV-52）由序列表的序列23自5’末端第21-39位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列24所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-53A（用于鉴定HPV-53）由序列表的序列25自5’末端第21-41位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列26所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-56A（用于鉴定HPV-56）由序列表的序列27自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列28所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-58A（用于鉴定HPV-58）由序列表的序列29自5’末端第21-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列30所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-59A（用于鉴定HPV-59）由序列表的序列31自5’末端第21-43位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列32所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-66A（用于鉴定HPV-66）由序列表的序列33自5’末端第21-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列34所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-68A（用于鉴定HPV-68）由序列表的序列35自5’末端第21-47位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-70A（用于鉴定HPV-70）由序列表的序列37自5’末端第22-40位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列38所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-73A（用于鉴定HPV-73）由序列表的序列39自5’末端第21-43位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列40所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-81A（用于鉴定HPV-81）由序列表的序列41自5’末端第21-41位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-82A（用于鉴定HPV-82）由序列表的序列42自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列43所示的单链DNA分子组成。
所述引物组具体可由所述22个引物对组成。所述引物组可由引物组合物甲和引物组合物乙组成；所述引物组合物甲由所述引物对HPV-6A、所述引物对HPV-11A、所述引物对HPV-18A、所述引物对HPV-26A、所述引物对HPV-31A、所述引物对HPV-33A、所述引物对HPV-39A、所述引物对HPV-45A、所述引物对HPV-51A、所述引物对HPV-52A、所述引物对HPV-53A、所述引物对HPV-56A、所述引物对HPV-58A、所述引物对HPV-59A、所述引物对HPV-66A、所述引物对HPV-68A、所述引物对HPV-73A和所述引物对HPV-81A组成；所述引物组合物乙由所述引物对HPV-16A、所述引物对HPV-35A、所述引物对HPV-70A和所述引物对HPV-82A组成。
所述引物组还可包括引物对GAPDHA（用于鉴定GAPDH内参基因）；所述引物对GAPDHA由序列表的序列44自5’末端第21-41位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列45所示的单链DNA分子组成。所述引物对GAPDHA可与所述引物组合物甲组合使用，也可与所述引物组合物乙组合使用。
所述引物组的功能为如下（a）或（b）或（c）或（d）：（a）辅助鉴定待测人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒；（b）辅助鉴定人乳头瘤病毒；（c）辅助检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒；（d）辅助鉴定含有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒。
本发明还保护以上任一所述的引物组在制备试剂盒中的应用。所述试剂盒的功能为如下（a）或（b）或（c）或（d）：（a）辅助鉴定待测人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒；（b）辅助鉴定人乳头瘤病毒；（c）辅助检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒；（d）辅助鉴定含有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒。
本发明还保护一种试剂盒，包括引物组和通用芯片；
所述引物组包括引物对HPV-6B、引物对HPV-11B、引物对HPV-16B、引物对HPV-18B、引物对HPV-26B、引物对HPV-31B、引物对HPV-33B、引物对HPV-35B、引物对HPV-39B、引物对HPV-45B、引物对HPV-51B、引物对HPV-52B、引物对HPV-53B、引物对HPV-56B、引物对HPV-58B、引物对HPV-59B、引物对HPV-66B、引物对HPV-68B、引物对HPV-70B、引物对HPV-73B、引物对HPV-81B和引物对HPV-82B；
所述引物对HPV-6B（用于鉴定HPV-6）由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-11B（用于鉴定HPV-11）由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-16B（用于鉴定HPV-16）由序列表的序列5所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-18B（用于鉴定HPV-18）由序列表的序列7所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-26B（用于鉴定HPV-26）由序列表的序列9所示的单链DNA分子和序列表的序列10所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-31B（用于鉴定HPV-31）由序列表的序列11所示的单链DNA分子和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-33B（用于鉴定HPV-33）由序列表的序列13所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-35B（用于鉴定HPV-35）由序列表的序列15所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-39B（用于鉴定HPV-39）由序列表的序列17所示的单链DNA分子和序列表的序列18所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-45B（用于鉴定HPV-45）由序列表的序列19所示的单链DNA分子和序列表的序列20所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-51B（用于鉴定HPV-51）由序列表的序列21所示的单链DNA分子和序列表的序列22所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-52B（用于鉴定HPV-52）由序列表的序列23所示的单链DNA分子和序列表的序列24所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-53B（用于鉴定HPV-53）由序列表的序列25所示的单链DNA分子和序列表的序列26所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-56B（用于鉴定HPV-56）由序列表的序列27所示的单链DNA分子和序列表的序列28所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-58B（用于鉴定HPV-58）由序列表的序列29所示的单链DNA分子和序列表的序列30所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-59B（用于鉴定HPV-59）由序列表的序列31所示的单链DNA分子和序列表的序列32所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-66B（用于鉴定HPV-66）由序列表的序列33所示的单链DNA分子和序列表的序列34所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-68B（用于鉴定HPV-68）由序列表的序列35所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-70B（用于鉴定HPV-70）由序列表的序列37所示的单链DNA分子和序列表的序列38所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-73B（用于鉴定HPV-73）由序列表的序列39所示的单链DNA分子和序列表的序列40所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-81B（用于鉴定HPV-81）由序列表的序列41所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-82B（用于鉴定HPV-82）由序列表的序列42所示的单链DNA分子和序列表的序列43所示的单链DNA分子组成；
所述通用芯片上分别固定有序列表的序列46至序列表的序列67所示的22条探针。
所述引物组可由引物组合物甲和引物组合物乙组成；所述引物组合物甲由所述引物对HPV-6A、所述引物对HPV-11A、所述引物对HPV-18A、所述引物对HPV-26A、所述引物对HPV-31A、所述引物对HPV-33A、所述引物对HPV-39A、所述引物对HPV-45A、所述引物对HPV-51A、所述引物对HPV-52A、所述引物对HPV-53A、所述引物对HPV-56A、所述引物对HPV-58A、所述引物对HPV-59A、所述引物对HPV-66A、所述引物对HPV-68A、所述引物对HPV-73A和所述引物对HPV-81A组成；所述引物组合物乙由所述引物对HPV-16A、所述引物对HPV-35A、所述引物对HPV-70A和所述引物对HPV-82A组成。
所述引物组还可包括引物对GAPDHB（用于鉴定GAPDH内参基因）；所述引物对GAPDHB由序列表的序列44所示的单链DNA分子和序列表的序列45所示的单链DNA分子组成。所述引物对GAPDHB可与所述引物组合物甲组合使用，也可与所述引物组合物乙组合使用。所述所述通用芯片上还可固定有序列表的序列68所示的探针。
所述通用芯片上还可固定有QC、BC、PC和NC。QC(表面化学质控探针)是一端带有Hex标记，另一端具有氨基修饰的寡核苷酸探针，用于观察芯片点样和固定的效率，其核苷酸序列为NH2-TCACTTGCTTCCGTTGAGG-Hex。BC（空白对照）为基因点样液，用于质控点样过程中有无样品残留污染。PC（杂交质控探针）是一段氨基修饰的寡核苷酸探针，可以与杂交液中添加的荧光标记的互补序列（C-PC）杂交，用于杂交过程的质控，其核苷酸序列为NH2-TTTTTTTTTTTTCCTCAACGGAAGCAAGTGAT。NC（阴性对照探针）是一段氨基修饰的寡核苷酸探针，与杂交液中的所有待检测序列均不会杂交，用于观察有无非特异杂交，其核苷酸序列为NH2-TTTTTTTTTTTTGTTGCTTCTGGAATGAGTTTGCT。
所述试剂盒的所述引物组中，各个下游引物上具有荧光分子、可通过化学发光进行标记检测的分子或可通过固体微粒进行标记检测的分子。具体来说，各个下游引物的5′末端可具有荧光染料TAMRA修饰。
所述试剂盒的功能为如下（a）或（b）或（c）或（d）：（a）辅助鉴定待测人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒；（b）辅助鉴定人乳头瘤病毒；（c）辅助检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒；（d）辅助鉴定含有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒。
以上任一所述的人乳头瘤病毒可为HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-26、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-53、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-68、HPV-70、HPV-73、HPV-81或HPV-82。
所述通用芯片的基片的材质可为硅、玻璃、塑料、水凝胶、硝酸纤维或尼龙。所述通用芯片的基片具体可为醛基化修饰的玻璃片。
微阵列技术的发展使得高通量地并行分析成千上万的分子相互作用成为可能。固定于微阵列芯片的特定核苷酸探针，充当解码工具，通过空间上不同的位置把溶液中并行反应产生的多个靶标分子加以区别。微阵列方法与多重PCR结合在一起，可用于检测基因有无、基因突变（包括单碱基突变、碱基删除、插入以及长片段缺失）。
在检测基因有无（比如检测样品中有无微生物的基因存在）与基因突变，尤其是临床相关的检测时，非常关注提高芯片检测的灵敏度和特异性。实现这一目标的主要障碍在于，由于标记的靶标核酸与固定于芯片表面的寡核苷酸探针之间的杂交反应是影响芯片检测关键因素。
应用本发明的试剂盒时，采用两个PCR反应体系，一个PCR反应体系采用所述引物组合物甲，另一个PCR反应体系采用所述引物组合物乙。所述引物对GAPDHB可与所述引物组合物甲组合使用，也可与所述引物组合物乙组合使用。每个PCR反应体系中都具有多个引物对，且上游引物和下游引物采用不同的浓度，即多重不对称PCR反应。
应用本发明的试剂盒时，待检样本可为：待检宫颈样本可为用无菌棉拭子或宫颈刷取疑似人乳头瘤病毒感染患者的宫颈脱落细胞，这些样本须在低于40C的环境下运送到检测实验室，并置于-700C或-200C冷冻保存。
本发明提供的试剂盒，可快速、准确地检测临床样品中的人乳头瘤病毒亚型，通量大、灵敏度高、特异性强，对于人乳头瘤病毒的早期诊断和宫颈癌的早期预防有重要意义，可广泛用于临床高效诊断和女性体检。
附图说明
图1为6型质粒的检测结果。
图2为11型质粒的检测结果。
图3为16型质粒的检测结果。
图4为18型质粒的检测结果。
图5为26型质粒的检测结果。
图6为31型质粒的检测结果。
图7为33型质粒的检测结果。
图8为35型质粒的检测结果。
图9为39型质粒的检测结果。
图10为45型质粒的检测结果。
图11为51型质粒的检测结果。
图12为52型质粒的检测结果。
图13为53型质粒的检测结果。
图14为56型质粒的检测结果。
图15为58型质粒的检测结果。
图16为59型质粒的检测结果。
图17为66型质粒的检测结果。
图18为68型质粒的检测结果。
图19为70型质粒的检测结果。
图20为73型质粒的检测结果。
图21为81型质粒的检测结果。
图22为82型质粒的检测结果。
图23为40型质粒的检测结果。
图24为42型质粒的检测结果。
图25为43型质粒的检测结果。
图26为44型质粒的检测结果。
图27为54型质粒的检测结果。
图28为61型质粒的检测结果。
图29为72型质粒的检测结果。
图30为83型质粒的检测结果。
图31为SP-001的检测结果。
图32为SP-041的检测结果。
图33为通用芯片的探针点阵排布示意图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1、试剂盒的组成
本发明提供的HPV分型试剂盒包括引物组合物和通用芯片。
一、引物组合物
引物组合物由23个引物对组成，下划线标注的区域为Tag序列，下游引物的5′末端具有荧光染料TAMRA修饰。
1、用于鉴定HPV-6的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GAGGAGATCGTAGCTGGTGCATATAATCAGAATTGGTGTATGTGG（序列表的序列1）；
下游引物：GCCCAGGGACATAACAATGG（序列表的序列2）。
2、用于鉴定HPV-11的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GCACGAGTTGGGTGAGTTTGGGTGTATGTAGCAGATTTAGACAC（序列表的序列3）；
下游引物：GCTCAGGGACATAACAATGG（序列表的序列4）。
3、用于鉴定HPV-16的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CGCAGGAGTCGTTAGATGGCTATGTAGTTTCTGAAGTAGATATGG（序列表的序列5）；
下游引物：GCACAGGGCCACAATAATGG（序列表的序列6）。
4、用于鉴定HPV-18的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GCTCGAAGAGGCGCTACAGATCCCATATTGCCCAGGTACAGGAG（序列表的序列7）；
下游引物：GCACAGGGTCATAACAATGG（序列表的序列8）。
5、用于鉴定HPV-26的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GGTTCGGATAAGCCTACGCCTGGAGTGGATGCAGATGCTG（序列表的序列9）；
下游引物：GCACAGGGTCATAATAATGG（序列表的序列10）。
6、用于鉴定HPV-31的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GTTAGGGTCGCGCCAAACTCTCCGTAGTATCACTGTTTGCAATTGC（序列表的序列11）；
下游引物：GCTCAGGGACACAATAATGG（序列表的序列12）。
7、用于鉴定HPV-33的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CCCTGTCTCGTTGCGTGTCTCGTGTACTGTCACTAGTTACTTGTGTG（序列表的序列13）；
下游引物：GCACAAGGTCATAATAATGG（序列表的序列14）。
8、用于鉴定HPV-35的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GGTCTACGGTCTACTCACGGCACACCTTGTAATGCTAACCAG（序列表的序列15）；
下游引物：GTGTCTACCATGTCCCCGTC（序列表的序列16）。
9、用于鉴定HPV-39的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CGCCAATAGACGAGAGCAGCGGTATGGAAGACTCTATAGAGGTAG（序列表的序列17）；
下游引物：GCCCAGGGCCACAACAATGG（序列表的序列18）。
10、用于鉴定HPV-45的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CGGCTCGTTACTCGCAATGGGGCACAGGATTTTGTGTAGAGG（序列表的序列19）；
下游引物：GCCCAGGGCCATAACAATGG（序列表的序列20）。
11、用于鉴定HPV-51的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CGACCGAACTTAGCGACACGAATTCATACTCTTCCCCATGCC（序列表的序列21）；
下游引物：GCGCAGGGTCACAATAATGG（序列表的序列22）。
12、用于鉴定HPV-52的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GGACGGAGCATAACGAACGCAGACGGTGGTGGGGTAAGG（序列表的序列23）；
下游引物：GGAATACCTTCGTCATGGCG（序列表的序列24）。
13、用于鉴定HPV-53的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CCTCGGACTAACTCGCCTACGTGGACATAGACTGTGTGGTT（序列表的序列25）；
下游引物：GCCCAGGGACATAATAATGG（序列表的序列26）。
14、用于鉴定HPV-56的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GGCGTATCCTCGTGTCGTTCCCTCCACATGTCTAAGGTACTG（序列表的序列27）；
下游引物：GCCCAAGGCCATAATAATGG（序列表的序列28）。
15、用于鉴定HPV-58的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GCCTCTCGTGCTTATCGTCGGTACCTTCCTTAGTTACTTCAGTG（序列表的序列29）；
下游引物：GCACAAGGTCATAACAATGG（序列表的序列30）。
16、用于鉴定HPV-59的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GCCGTGGATAGACTCGTAGGGAAGAAGTAGTAGAAGCACACAC（序列表的序列31）；
下游引物：GCTCAGGGTTTAAACAATGG（序列表的序列32）。
17、用于鉴定HPV-66的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GGCGTTACTACTCGTCTGGCGTATTGATTGATTTCACGTGCATC（序列表的序列33）；
下游引物：GCACAGGGCCATAATAATGG（序列表的序列34）。
18、用于鉴定HPV-68的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CGCTCGGAACAGTCGTAGTCGGTACAGCTGATTCAGTAGTAGTAGAC（序列表的序列35）；
下游引物：GCACAGGGACACAACAATGG（序列表的序列36）。
19、用于鉴定HPV-70的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CGAGTACAGGACCCACATCAGCAGCAGGTATGGCCGTTTC（序列表的序列37）；
下游引物：GCCCAGGGACACAATAATGG（序列表的序列38）。
20、用于鉴定HPV-73的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CACGCAGTCATACGGTTCGGAGAGTTGGCATACGTTGTAGTAG（序列表的序列39）；
下游引物：GCACAGGGACAAAATAATGG（序列表的序列40）。
21、用于鉴定HPV-81的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：GACCGAGGATAGCGTTACCGTAGAGGCCTTGTATTCTGCAG（序列表的序列41）；
下游引物：GCACAGGGACACAACAATGG（序列表的序列36）。
22、用于鉴定HPV-82的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CTAACGGAGAGACGCAACGGTTTGCTGGAGTAAATGTTTGTG（序列表的序列42）；
下游引物：GCCCAGGGCCACAATAATGG（序列表的序列43）。
23、用于鉴定GAPDH基因的引物对如下（5’→3’）：
上游引物：CACGACTCTACACGCAACCGCCTGTTTCTGGGGACTAGGGG（序列表的序列44）；
下游引物：ATGGGGAAGGTGAAGGTCGG（序列表的序列45）。
二、通用芯片
通用芯片为固定有22种Tag探针的基片（各个探针序列中，下划线标注的区域为Tag序列）。Tag探针用基因点样液（Capitalbio，Beijing,China）溶解，终浓度为10μM，重复三次点制到醛基化修饰的玻片上。图33为通用芯片的探针点阵排布示意图。
QC(表面化学质控探针)是一端带有Hex标记，另一端具有氨基修饰的寡核苷酸探针，用于观察芯片点样和固定的效率，其核苷酸序列为NH2-TCACTTGCTTCCGTTGAGG-Hex。BC（空白对照）为基因点样液，用于质控点样过程中有无样品残留污染。PC（杂交质控探针）是一段氨基修饰的寡核苷酸探针，可以与杂交液中添加的荧光标记的互补序列（C-PC）杂交，用于杂交过程的质控，其核苷酸序列为NH2-TTTTTTTTTTTTCCTCAACGGAAGCAAGTGAT。NC（阴性对照探针）是一段氨基修饰的寡核苷酸探针，与杂交液中的所有待检测序列均不会杂交，用于观察有无非特异杂交，其核苷酸序列为NH2-TTTTTTTTTTTTGTTGCTTCTGGAATGAGTTTGCT。IC（内对照探针），为用于鉴定人GAPDH基因的探针,是一段氨基修饰的寡核苷酸探针，与检测体系中多重PCR扩增产物中的人GAPDH基因扩增产物进行杂交，用于多重PCR扩增过程的质控。
1、用于鉴定HPV-6的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGAGGAGATCGTAGCTGGTGCAT（序列表的序列46）。
2、用于鉴定HPV-11的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTTGCACGAGTTGGGTGAGTTTGG（序列表的序列47）。
3、用于鉴定HPV-16的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCGCAGGAGTCGTTAGATGGC（序列表的序列48）。
4、用于鉴定HPV-18的探针序列如下（5’→3’）：
NH2–TTTTTTTTTTTTTTTGCTCGAAGAGGCGCTACAGATCC（序列表的序列49）。
5、用于鉴定HPV26的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGGTTCGGATAAGCCTACGCC（序列表的序列50）。
6、用于鉴定HPV-31的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGTTAGGGTCGCGCCAAACTCTCC（序列表的序列51）。
7、用于鉴定HPV-33的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCCCTGTCTCGTTGCGTGTCTCGT（序列表的序列52）。
8、用于鉴定HPV-35的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGGTCTACGGTCTACTCACGG（序列表的序列53）。
9、用于鉴定HPV-39的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCGCCAATAGACGAGAGCAGC（序列表的序列54）。
10、用于鉴定HPV-45的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCGGCTCGTTACTCGCAATGG（序列表的序列55）。
11、用于鉴定HPV-51的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCGACCGAACTTAGCGACACG（序列表的序列56）。
12、用于鉴定HPV-52的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGGACGGAGCATAACGAACGC（序列表的序列57）。
13、用于鉴定HPV-53的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCCTCGGACTAACTCGCCTAC（序列表的序列58）。
14、用于鉴定HPV-56的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGGCGTATCCTCGTGTCGTTC（序列表的序列59）。
15、用于鉴定HPV-58的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGCCTCTCGTGCTTATCGTCG（序列表的序列60）。
16、用于鉴定HPV-59的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGCCGTGGATAGACTCGTAGG（序列表的序列61）。
17、用于鉴定HPV-66的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGGCGTTACTACTCGTCTGGC（序列表的序列62）。
18、用于鉴定HPV-68的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCGCTCGGAACAGTCGTAGTC（序列表的序列63）。
19、用于鉴定HPV-70的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTTCGAGTACAGGACCCACATCAG（序列表的序列64）。
20、用于鉴定HPV-73的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCACGCAGTCATACGGTTCGG（序列表的序列65）。
21、用于鉴定HPV-81的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTGACCGAGGATAGCGTTACCG（序列表的序列66）。
22、用于鉴定HPV-82的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCTAACGGAGAGACGCAACGG（序列表的序列67）。
23、用于鉴定人GAPDH基因的探针序列如下（5’→3’）：
NH2-TTTTTTTTTTTTTTTCACGACTCTACACGCAACCG（序列表的序列68）。
实施例2、人乳头瘤病毒DNA的灵敏度和特异性检测
人乳头瘤病毒L1基因分型参考品：中国食品药品检定研究院；产品目录号为360002；其中具有6型质粒、11型质粒、16型质粒、18型质粒、26型质粒、31型质粒、33型质粒、35型质粒、39型质粒、45型质粒、51型质粒、52型质粒、53型质粒、56型质粒、58型质粒、59型质粒、66型质粒、68型质粒、70型质粒、73型质粒、81型质粒、82型质粒、40型质粒、42型质粒、43型质粒、44型质粒、54型质粒、61型质粒、72型质粒和83型质粒；各个质粒中的插入片段分别依次为HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-26、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-53、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-68、HPV-70、HPV-73、HPV-81、HPV-82、HPV-40、HPV-42、HPV-43、HPV-44、HPV-54、HPV-61、HPV-72或HPV-83的L1区基因全长序列。
一、灵敏度检测
对6型质粒、11型质粒、16型质粒、18型质粒、26型质粒、31型质粒、33型质粒、35型质粒、39型质粒、45型质粒、51型质粒、52型质粒、53型质粒、56型质粒、58型质粒、59型质粒、66型质粒、68型质粒、70型质粒、73型质粒、81型质粒和82型质粒分别进行检测，测试试剂盒的灵敏度。
具体如下：
将每个质粒分别进行两个体系的PCR扩增（PCR扩增体系A和PCR扩增体系B）。
PCR扩增体系A，体积为25μl，组成为：溶剂1×buffer，含质粒102-103copies/μl、引物组合物甲（实施例1的步骤一中用于鉴定HPV-6的引物对、用于鉴定HPV-11的引物对、用于鉴定HPV-18的引物对、用于鉴定HPV-26的引物对、用于鉴定HPV-31的引物对、用于鉴定HPV-33的引物对、用于鉴定HPV-39的引物对、用于鉴定HPV-45的引物对、用于鉴定HPV-51的引物对、用于鉴定HPV-52的引物对、用于鉴定HPV-53的引物对、用于鉴定HPV-56的引物对、用于鉴定HPV-58的引物对、用于鉴定HPV-59的引物对、用于鉴定HPV-66的引物对、用于鉴定HPV-68的引物对、用于鉴定HPV-73的引物对、用于鉴定HPV-81的引物对；各上游引物的浓度均为0.1μM，各下游引物的浓度均为0.6μM）、dNTP0.2mM，MgCl22mM、热启动Taq DNA聚合酶1-1.5U。
PCR扩增体系B，体积为25μl，组成为：溶剂1×buffer，含质粒102-103copies/μl、引物组合物乙（实施例1的步骤一中用于鉴定HPV-16的引物对、用于鉴定HPV-35的引物对、用于鉴定HPV-70的引物对、用于鉴定HPV-82的引物对和用于鉴定GAPDH基因的引物对；各上游引物的浓度均为0.1μM，各下游引物的浓度均为0.6μM）、dNTP0.2mM，MgCl22mM、热启动TaqDNA聚合酶1-1.5U。
PCR扩增条件：37℃10min；95℃10min；94℃30s、57℃30s、66℃45s，40个循环；60℃10min；12℃保存。
PCR扩增结束后，取PCR扩增体系A的PCR扩增产物2.5μl、PCR扩增体系B的PCR扩增产物和10μl杂交缓冲液，混合均匀，得到15μl的混合液。
杂交缓冲液：25%去离子甲酰胺、6×SSC、5×Denhart’、1%SDS。
取实施例1的步骤二制备的通用芯片，每个通用芯片每一点阵上加入14μl混合液，密封，45-60℃杂交0.5-3小时。
结果见图1至图22。对于各个质粒来说，通用芯片的检测结果均与预期结果一致，均在相应的位置显示为阳性，说明本发明提供的试剂盒灵敏度较高。进行三次重复实验，结果一致。
二、特异性检测
对40型质粒、42型质粒、43型质粒、44型质粒、54型质粒、61型质粒、72型质粒和83型质粒分别进行检测，测试试剂盒的特异性。
方法均同步骤一。
结果见图23至图30。对于各个质粒来说，结果均为阴性，说明本发明提供的试剂盒特异性较高。进行三次重复实验，结果一致。
实施例3、临床宫颈样品的检测
对58例临床宫颈上皮脱落细胞样品进行检测（已测序验证HPV分型，其中38例含HPV，20例不含HPV）。
1、分别提取各例临床宫颈上皮脱落细胞样品的总DNA。
2、将步骤1得到的总DNA进行两个体系的PCR扩增。
PCR扩增体系A，体积为25μl，组成为：溶剂1×buffer，步骤1中所提取的总DNA1μl、引物组合物甲（实施例1的步骤一中用于鉴定HPV-6的引物对、用于鉴定HPV-11的引物对、用于鉴定HPV-18的引物对、用于鉴定HPV-26的引物对、用于鉴定HPV-31的引物对、用于鉴定HPV-33的引物对、用于鉴定HPV-39的引物对、用于鉴定HPV-45的引物对、用于鉴定HPV-51的引物对、用于鉴定HPV-52的引物对、用于鉴定HPV-53的引物对、用于鉴定HPV-56的引物对、用于鉴定HPV-58的引物对、用于鉴定HPV-59的引物对、用于鉴定HPV-66的引物对、用于鉴定HPV-68的引物对、用于鉴定HPV-73的引物对、用于鉴定HPV-81的引物对；各上游引物的浓度均为0.1μM，各下游引物的浓度均为0.6μM）、dNTP0.2mM，MgCl22mM、热启动Taq DNA聚合酶1-1.5U。
PCR扩增体系B，体积为25μl，组成为：溶剂1×buffer，步骤1中所提取的总DNA1μl、引物组合物乙（实施例1的步骤一中用于鉴定HPV-16的引物对、用于鉴定HPV-35的引物对、用于鉴定HPV-70的引物对、用于鉴定HPV-82的引物对和用于鉴定GAPDH基因的引物对；各上游引物的浓度均为0.1μM，各下游引物的浓度均为0.6μM）、dNTP0.2mM，MgCl22mM、热启动TaqDNA聚合酶1-1.5U。
PCR扩增条件：37℃10min；95℃10min；94℃30s、57℃30s、66℃45s，40个循环；60℃10min；12℃保存。
PCR扩增结束后，取PCR扩增体系A的PCR扩增产物2.5μl、PCR扩增体系B的PCR扩增产物和10μl杂交缓冲液，混合均匀，得到15μl的混合液。
杂交缓冲液：25%去离子甲酰胺、6×SSC、5×Denhart’、1%SDS。
取实施例1的步骤二制备的通用芯片，每个通用芯片的每一个点阵上加入14μl混合液，密封，45-60℃杂交0.5-3小时。
结果见表1。38例含HPV的临床样本，本发明的检测结果与测序结果的符合率为95%（38/40）。20例不含HPV的临床样本，本发明的检测结果均为阴性，特异性为100%。在58例总样本中，本发明检测结果与测序结果的符合率为96.2%。SP-001的结果见图31。SP-041的结果见图32。
表1分别使用本发明的试剂盒和DNA测序检测58例临床标本的结果比较
| 样本号 | 本发明检测结果 | 测序检测结果 |
| SP-001 | HPV-18 | HPV-18 |
| SP-002 | HPV-51 | HPV-51 |
| SP-003 | HPV-70 | HPV-70 |
| SP-004 | HPV-31 | HPV-31 |
| SP-005 | HPV-52 | HPV-52 |
| SP-006 | HPV-56 | HPV-56 |
| SP-007 | HPV-52 | HPV-52 |
| SP-008 | HPV-6 | HPV-6 |
| SP-009 | HPV-33 | HPV-33 |
| SP-010 | HPV-52 | HPV-52 |
| SP-011 | HPV-82 | HPV-82 |
| SP-012 | HPV-11 | HPV-11 |
| SP-013 | HPV-16 | HPV-16 |
| SP-014 | HPV-81 | HPV-81 |
| SP-015 | HPV-16 | HPV-16 |
| SP-016 | HPV-35 | HPV-35 |
| SP-017 | HPV-58 | HPV-58 |
| SP-018 | HPV-68 | HPV阴性 |
| SP-019 | HPV-51 | HPV-51 |
| SP-020 | HPV-53 | HPV-53 |
| SP-021 | HPV-81 | HPV-81 |
| SP-022 | HPV-73 | HPV-73 |
| SP-023 | HPV-16 | HPV-16 |
| SP-024 | HPV-35 | HPV-35 |
| SP-025 | HPV-16 | HPV-16 |
| SP-026 | HPV-59 | HPV-59 |
| SP-027 | HPV-53 | HPV-53 |
| SP-028 | HPV-58 | HPV阴性 |
| SP-029 | HPV-52 | HPV-52 |
| SP-030 | HPV-68 | HPV-68 |
| SP-031 | HPV-45 | HPV-45 |
| SP-032 | HPV-59 | HPV-59 |
| SP-033 | HPV-66 | HPV-66 |
| SP-034 | HPV-26、HPV-33、HPV-53 | HPV-26、HPV-33、HPV-53 |
| SP-035 | HPV-6、HPV-18、HPV-39 | HPV-6、HPV-18、HPV-39 |
| SP-036 | HPV-16、HPV-51、HPV-56 | HPV-16、HPV-51、HPV-56 |
| SP-037 | HPV-31、HPV-35、HPV-45 | HPV-31、HPV-35、HPV-45 |
| SP-038 | HPV-82 | HPV-82 |
| SP-039 | HPV-11、HPV-39 | HPV-11、HPV-39 |
| SP-040 | HPV-16、HPV-18、HPV-31 | HPV-16、HPV-18、HPV-31 |
| SP-041 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-042 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-043 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-044 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-045 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-046 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-047 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-048 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-049 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-050 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-051 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-052 | HPV阴性 | HPV阴性 |
| SP-053 | HPV阴性 | HPV阴性 |
Claims (3)
1.一种引物组，由引物组合物甲和引物组合物乙组成；
所述引物组合物甲由引物对HPV-6A、引物对HPV-11A、引物对HPV-18A、引物对HPV-26A、引物对HPV-31A、引物对HPV-33A、引物对HPV-39A、引物对HPV-45A、引物对HPV-51A、引物对HPV-52A、引物对HPV-53A、引物对HPV-56A、引物对HPV-58A、引物对HPV-59A、引物对HPV-66A、引物对HPV-68A、引物对HPV-73A和引物对HPV-81A组成；所述引物组合物乙由引物对HPV-16A、引物对HPV-35A、引物对HPV-70A和引物对HPV-82A组成；
所述引物对HPV-6A由序列表的序列1自5’末端第23-45位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-11A由序列表的序列3自5’末端第22-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-16A由序列表的序列5自5’末端第21-45位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-18A由序列表的序列7自5’末端第24-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-26A由序列表的序列9自5’末端第21-40位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列10所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-31A由序列表的序列11自5’末端第24-46位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-33A由序列表的序列13自5’末端第24-47位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-35A由序列表的序列15自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-39A由序列表的序列17自5’末端第21-45位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列18所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-45A由序列表的序列19自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列20所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-51A由序列表的序列21自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列22所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-52A由序列表的序列23自5’末端第21-39位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列24所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-53A由序列表的序列25自5’末端第21-41位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列26所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-56A由序列表的序列27自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列28所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-58A由序列表的序列29自5’末端第21-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列30所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-59A由序列表的序列31自5’末端第21-43位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列32所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-66A由序列表的序列33自5’末端第21-44位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列34所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-68A由序列表的序列35自5’末端第21-47位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-70A由序列表的序列37自5’末端第22-40位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列38所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-73A由序列表的序列39自5’末端第21-43位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列40所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-81A由序列表的序列41自5’末端第21-41位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；
所述引物对HPV-82A由序列表的序列42自5’末端第21-42位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列43所示的单链DNA分子组成；
所述引物组的功能为如下(a)或(b)或(c)或(d)：(a)辅助鉴定待测人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒；(b)辅助鉴定人乳头瘤病毒；(c)辅助检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒；(d)辅助鉴定含有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒。
2.权利要求1所述的引物组在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(c)或(d)：(a)辅助鉴定待测人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒；(b)辅助鉴定人乳头瘤病毒；(c)辅助检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒；(d)辅助鉴定含有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒。
3.一种试剂盒，包括引物组和通用芯片；
所述引物组由引物组合物甲和引物组合物乙组成；所述引物组合物甲由引物对HPV-6B、引物对HPV-11B、引物对HPV-18B、引物对HPV-26B、引物对HPV-31B、引物对HPV-33B、引物对HPV-39B、引物对HPV-45B、引物对HPV-51B、引物对HPV-52B、引物对HPV-53B、引物对HPV-56B、引物对HPV-58B、引物对HPV-59B、引物对HPV-66B、引物对HPV-68B、引物对HPV-73B和引物对HPV-81B组成；所述引物组合物乙由引物对HPV-16B、引物对HPV-35B、引物对HPV-70B和引物对HPV-82B组成；
所述引物对HPV-6B由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-11B由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-16B由序列表的序列5所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-18B由序列表的序列7所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-26B由序列表的序列9所示的单链DNA分子和序列表的序列10所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-31B由序列表的序列11所示的单链DNA分子和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-33B由序列表的序列13所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-35B由序列表的序列15所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-39B由序列表的序列17所示的单链DNA分子和序列表的序列18所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-45B由序列表的序列19所示的单链DNA分子和序列表的序列20所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-51B由序列表的序列21所示的单链DNA分子和序列表的序列22所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-52B由序列表的序列23所示的单链DNA分子和序列表的序列24所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-53B由序列表的序列25所示的单链DNA分子和序列表的序列26所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-56B由序列表的序列27所示的单链DNA分子和序列表的序列28所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-58B由序列表的序列29所示的单链DNA分子和序列表的序列30所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-59B由序列表的序列31所示的单链DNA分子和序列表的序列32所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-66B由序列表的序列33所示的单链DNA分子和序列表的序列34所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-68B由序列表的序列35所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-70B由序列表的序列37所示的单链DNA分子和序列表的序列38所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-73B由序列表的序列39所示的单链DNA分子和序列表的序列40所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-81B由序列表的序列41所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-82B由序列表的序列42所示的单链DNA分子和序列表的序列43所示的单链DNA分子组成；
所述通用芯片上分别固定有序列表的序列46至序列表的序列67所示的22条探针；
所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(c)或(d)：(a)辅助鉴定待测人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒；(b)辅助鉴定人乳头瘤病毒；(c)辅助检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒；(d)辅助鉴定含有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒。
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