CN1388253A - 同步鉴别多种人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒、方法及组合物 - Google Patents

同步鉴别多种人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒、方法及组合物 Download PDF

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CN1388253A
CN1388253A CN 01118333 CN01118333A CN1388253A CN 1388253 A CN1388253 A CN 1388253A CN 01118333 CN01118333 CN 01118333 CN 01118333 A CN01118333 A CN 01118333A CN 1388253 A CN1388253 A CN 1388253A
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林景堉
林瑞文
游秋绵
黄馨萱
李柏亨
李贤雄
林育如
范智钧
许汉钏
施恰雯
叶志新
高翊峰
潘志龙
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Abstract

一种用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒,该试剂盒包含:一载体,其包含第一部分与第二部分,并可承载该检体于其上;第一种寡核苷酸,其承载于载体的第一部分;以及第二种寡核苷酸,其承载于载体的第二部分,其中该第一种及第二种寡核苷酸可分别与第一种及第二种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸杂交。本发明还涉及一种用于同步鉴别多种人类乳突瘤病毒亚型的方法及一种用以检测一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的组合物。

Description

同步鉴别多种人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒、方法及组合物
本发明涉及一种用于鉴别病毒的试剂盒及方法,尤指一种用于同步鉴别多种人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒及方法,本发明还涉及一种用以检测一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的组合物。
子宫颈癌是台湾女性的头号杀手,同时也是女性十大癌症的榜首。台湾的子宫颈癌患者的死亡率是先进国家的七、八倍,它是最危险但也是最容易发现的癌症。已受感染的男性或女性经由性行为再传染给对方,女性可能因细胞病变罹患子宫颈癌,男性则罹患尖锐湿疣,也就是俗称的菜花。子宫颈癌前病变经医学研究发现,在产生子宫颈癌之前的5到10年间,子宫颈的细胞必须先经过子宫颈的上皮赘生瘤(cervicalintraepithelial neoplasm,CIN)的形成而发展到子宫颈癌(invasivecervical carcinoma)。为了降低子宫颈癌的发生率,政府正大力推广子宫颈抹片检查(pap smear),希望病变的子宫颈细胞在还没发展到子宫颈癌前就被检测出来,以便早期治疗。但是子宫颈抹片的正确率大约在60~70%之间,也就是有30~40%左右的子宫颈癌前期病变被漏失。此外,许多的研究报告共同指出,超过95%的子宫颈癌合并有先前人类乳突瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的感染,因此子宫颈癌被视为「会传染的癌症」,若同时进行子宫颈抹片与人类乳突瘤病毒检测,可大幅提高子宫颈癌的检出率。
因此,申请人与罗东博爱医院合作以子宫颈抹片与人类乳突瘤病毒检测为工具,此人类乳突瘤病毒检测结合聚合酶连锁反应与核酸定序技术,进行妇女子宫颈癌流行病调查,其中受检人共2424人,其年龄介于16-84岁,有效样本1963件。结果:1)1.9%(37/1963)的妇女有抹片不正常;2)抹片正常的妇女有12.7%(244/1926)有病毒感染;3)抹片不正常的妇女病毒盛行率为51.4%(19/37),且随抹片异常严重程度呈正相关(非典型鳞状上皮细胞23.1%、低度上皮细胞病变41.7%、高度上皮细胞病变75%);4)发现29种病毒亚型分别如下:52、58、53、70、16、18、68、33、66、35、37、54、59、67、72、69、82、39、31、32、HLT7474-S、6、CP8061、62、CP8304、44、11、61、74,其中非典型鳞状上皮细胞发现有52、53、31,低度上皮细胞病变发现有51、58、69、70,高度上皮细胞病变发现有16、18、33、52、53、82、CP8061。
而公知HPV检验套组只有DIGENE公司出产的Hybrid Capture II HPVDNA microplate assay套组,其所能检测的病毒亚型中高危险群病毒亚型有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68;低危险群病毒亚型有6、11、42、43、44共18种病毒亚型。
对照子宫颈癌流行病调查结果可知,人类乳突瘤病毒多种亚型混合感染的检体无法以公知技术来同时辨别各种病毒亚型,因此公知HPV检验套组并不适用于台湾的妇女。此外,公知HPV检验套组测得的检验结果只表示该检体是高危险群病毒感染或低危险群病毒感染,因此需慎重考虑其伪阳性,即只有高、低危险群的区别,无法得知病毒亚型;与伪阴性,即没有对有效检体的认定,有效检体认定是可以测出人类细胞中甘油醛-3-磷酸去氢酶或其它常驻基因的存在。
有鉴于此,本发明的一个目的在于提供一种用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒(human papilloma virus,HPV)亚型的试剂盒,其可准确地鉴别出检体中所含的人类乳突瘤病毒亚型。
本发明的另一目的在于提供一种用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒(human papilloma virus,HPV)亚型的方法,其可准确地鉴别出检体中所含的人类乳突瘤病毒亚型。
本发明的再一目的在于提供一种用以检测一检体中特定人类乳突瘤病毒亚型的方法。
本发明的又一目的在于提供一种用以检测一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的组合物。
一方面,本发明的一种用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒,该试剂盒包含有一载体,该载体包含一第一部分与一第二部分,并可承载该检体于其上,第一种寡核苷酸承载于该载体的所述第一部分上,第二种寡核苷酸承载于该载体的所述第二部分上,其中该第一种及第二种寡核苷酸可分别与第一种及第二种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸(DNA)杂交,以同步鉴别该检体中所含有的人类乳突瘤病毒亚型。
根据上述方案,试剂盒中所述载体可为一尼龙膜或一玻璃片。
根据上述方案,试剂盒中所述第一种人类乳突瘤病毒亚型与第二种人类乳突瘤病毒亚型分别选自于36型病毒之一,该第一种寡核苷酸的序列选自于所述第一种人类乳突瘤病毒亚型对应的寡核苷酸组中的一序列及其互补物,该第二种寡核苷酸的序列选自于所述第二种人类乳突瘤病毒亚型对应的寡核苷酸组中的一序列及其互补物。
根据上述方案,所述试剂盒为一寡核苷酸试片。
另一方面,本发明的一种用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,该方法包含下列步骤:提供第一检验试剂及第二检验试剂,该第一检验试剂包含第一种寡核苷酸,该第二检验试剂包含第二种寡核苷酸,其中该第一种及第二种寡核苷酸为可分别与第一种及第二种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸(DNA)杂交的序列,杂交该检体中的脱氧核糖核酸(DNA)与该等寡核苷酸,以及去除无法与该等寡核苷酸杂交的脱氧核糖核酸,以同步鉴别该检体中所含有的该等人类乳突瘤病毒亚型。
根据上述方案,所述检体中的脱氧核糖核酸为聚合酶连锁反应的产物,且该脱氧核糖核酸含有信号物质。
根据上述方案,所述信号物质为生物素(biotin),或为萤光物质
根据上述方案,若所述信号物质为生物素,该方法进一步包含进行该生物素与卵白素-碱性磷酸酶的反应。若该信号物质为萤光物质,则该萤光物质可为青色素5(Cyanine 5)。
又一方面,本发明的关于一种用以检测一检体中特定人类乳突瘤病毒亚型的方法,该方法包含:提供一寡核苷酸,该寡核苷酸的序列可专一地与该特定人类乳突瘤病毒亚型特有的一段脱氧核糖核酸(DNA)序列杂交,杂交该检体中的脱氧核糖核酸(DNA)与该寡核苷酸,去除无法与该检验试剂中的该寡核苷酸杂交的脱氧核糖核酸,以及检测剩余的脱氧核糖核酸,以显示该检体中是否含有该特定人类乳突瘤病毒亚型,其中该特定人类乳突瘤病毒亚型的基因编号与其特有的一段脱氧核糖核酸(DNA)序列于该基因的位置,选自于特定的36种人类乳突瘤病毒亚型。
再一方面,本发明的一种用以检测一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的组合物,该组合物包含有一种寡核苷酸,该寡核苷酸的序列可与该人类乳突瘤病毒亚型特有的脱氧核糖核酸(DNA)杂交,用以检测该人类乳突瘤病毒亚型的存在,其中该人类乳突瘤病毒亚型选自于HPV 26、HPV 32、HPV 37、HPV 53、HPV 61、HPV 62、HPV 66、HPV 67、HPV 69、HPV 70、HPV 72、HPV 74、HPV 82、HPV CP8061、HPV CP8304、HPV L1AE5、HPV MM4、HPV MM7及HPV MM8中的一种类型。
以下结合附图和优选实施例对本发明进行详细地描述:
图1为本发明实施例1的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒;
图2为本发明实施例2的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒;
图3(a)及(b)为本发明实施例3的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒;
图4(a)、(b)及(c)为应用本发明实施例3鉴别人类乳突瘤病毒亚型的结果;
图5为应用本发明实施例3鉴别检体中人类乳突瘤病毒亚型的结果;
图6(a)及(b)为本发明实施例4的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒;
图7(a)及(b)为应用本发明实施例4鉴别人类乳突瘤病毒亚型的结果。
请参阅图1。寡核苷酸试片10为本发明的实施例1,其用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒(human papilloma virus,HPV)亚型。载体11为一尼龙膜,其固定于该载体11上的点阵列12,其中的每一点为一寡核苷酸(15至30个核苷酸)探针,每一寡核苷酸探针可专一地与一种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸(DNA)杂交。
申请人将已知97种人类乳突瘤病毒亚型的核苷酸序列,经由核苷酸序列比对软件排列后,挑选出曾流行于台湾的人类乳突瘤病毒亚型,设计出可专一地杂交该等人类乳突瘤病毒亚型的寡核苷酸序列,如表1至表36所示。即各表为本发明针对特定人类乳突瘤病毒亚型所采用的寡核苷酸序列,用以专一地杂交该特定人类乳突瘤病毒亚型。
所述载体11上每一寡核苷酸探针序列的选择是参照表1至表36进行的。例如,该载体11上其中一寡核苷酸探针的序列可采用序列编号M1101至M1125(如表1)中的一序列,用以杂交人类乳突瘤病毒亚型11(HPV11)。表1可与HPV 11杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 11基因位置
  序列编号            序列5’→3’  该序列于HPV 11的位置
  M1101  ATCTGTGTCTAAATC     6799-6813
  M1102  TCTGTGTCTAAATCTGCTAC     6800-6819
  M1103  ATCTGTGTCTAAATCTGCTACATACA     6799-6824
  M1104  TGCATCTGTGTCTAAATCTG     6796-6815
  M1105  AAATCTGCTACATACACTAA     6809-6828
  M1106  CTAAATCTGCTACATACACTA     6807-6827
  M1107  CTACATACACTAATTCAGAT     6816-6835
  M1108  TAGCATTACATTATCTGCAGAAG     6895-6917
  M1109  TCCTTCTGTTTTGGAGGAC     6943-6961
  M1110  TTTATCGCCTCCACCAAATGGTACAC     6973-6998
  M1111  TTATAGATATGTACAGTCACAGGCC     7009-7033
  M1112  ACCCACACCTGAAAAAGAAAAAC     7048-7070
  M1113  GGCGGATGCTCATTATGCGACTG     1044-1066
  M1114  ATATGTAAGTCCTATAAGCAATGTAG     1101-1126
  M1115  CTAATGCAGTAGAAAGTGAGATAAGT     1127-1152
  M1116  CACGGTTAGACGCCATTAAACTTACA     1154-1179
  M1117  CACAGCCAAAAAAGGTAAAGCGACGG     1181-1206
  M1118  GCAACGCAGGTAGAGAAACATGGCGA     1264-1289
  M1119  GAAAATGGGGGAGATGGTCAGGAAAGGGAC     1294-1323
  M1120  GACACAGGGAGGGACATAGAGGGTGA     1321-1346
  M1121  ACATAGAGAGGCGGAAGCAGTAGACG     1356-1381
  M1122  ACAGCACCCGAGAGCATGCAGACACA     1382-1407
  M1123  TCAGGAATATTAGAATTACTAAAATG     1408-1433
  M1124  GCTGTCATTTGTTGATTTA     1482-1500
表2可与HPV 16杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 16基因位置
 序列编号            序列5’→3’ 该序列于HPV 16的位置
  M1601  TATGTCATTATGTGCTGCCA     6659-6678
  M1602  GTGCTGCCATATCTACTTCA     6670-6689
  M1603  TGCCATATCTACTTC     6674-6688
  M1604  TATCTACTTCAGAAACTACA     6679-6698
  M1605  CTACTTCAGAAACTACATATAA     6682-6703
  M1606  ATAAAAATACTAACTTTAAG     6700-6719
  M1607  CAAAATAACCTTAACTGCAGACG     6773-6795
  M1608  TTCCACTATTTTGGAGGAC     6821-6839
  M1609  TCTACAACCTCCCCCAGGAGGCACAC     6851-6876
  M1610  TTATAGGTTTGTAACCCAG     6887-6905
  M1611  ACATACACCTCCAGCACCT     6923-6941
  M1612  CCTTAAAAAATACACT     6956-6971
  M1613  AGCAAAACAACATAGAGATGCAG     1089-1111
  M1614  ACTTAGTGATATTAGTGGATGTGTAG     1145-1170
  M1615  TAGTCCTAGATTAAAAGCTATATGTATAGA     1181-1210
  M1616  GAAAAACAAAGTAGAGCTGCAAAAAG     1209-1234
  M1617  CTCAGCAGATGTTACAGGTAGAAGGG     1285-1310
  M1618  CCATGAGACTGAAACACCATGTAGTC     1313-1338
  M1619  GGGGGTGGTTGCAGTCAGTACAGTAG     1356-1381
  M1620  GTGGGGGAGAGGGTGTTAGTGAAAGA     1387-1412
  M1621  CTATATGCCAAACACCACTTACAAAT     1417-1442
  M1622  GTTATACGGGGTGAGTTTTTCAGAAT     1502-1527
表3可与HPV 18杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 18基因位置
序列编号            序列5’→3’  该序列于HPV 18的位置
  M1801  TTCTACACAGTCTCC     6650-6664
  M1802  CAGTCTCCTGTACCTGGGCA     6657-6676
  M1803  AGTCTCCTGTACCTGGGCAA     6658-6677
  M1804  TCTCCTGTACCTGGGCAATATGA     6660-6682
  M1805  CTGTACCTGGGCAATATGAT     6664-6683
  M1806  ATGATGCTACCAAATTTAAG     6679-6698
  M1807  TACTATTACTTTAACTGCAGATG     6752-6774
  M1808  TAGCAGTATTTTAGAGGAT     6800-6818
  M1809  TGTTCCCCCCCCCCCAACTACTAGTT     6830-6855
  M1810  ATATCGTTTTGTACAATCTGTT     6866-6887
  M1811  GGATGCTGCACCGGCTGAA     6905-6923
  M1812  CTATGATAAGTTAAAG     6935-6950
  M1813  GGTCCACAATGATGCACAAGTGT     1135-1157
  M1814  CACAGAAAACAGTCCATTAGGGGAGC     1192-1217
  M1815  GCTGGAGGTGGATACAGAGTTAAGTC     1219-1244
  M1816  AGTGGGCAGAAAAAGGCAAAAAGGCGGCTG     1271-1300
  M1817  CACAGATTCAGGTAACTACAAATGGC     1347-1372
  M1818  CAATGTATGTAGTGGCGGCAGTACGG     1384-1409
  M1819  GACAACGGGGGCACAGAGGGCAACAA     1418-1443
  M1820  GTAGACGGTACAAGTGACAATAGCAA     1451-1476
  M1821  CCACAATGTACCATAGCACAATTAAA     1493-1518
  M1822  CACATATGGGCTATCATTTACAGATT     1573-1598
表4可与HPV 26杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 26基因位置
序列编号            序列5’→3’ 该序列于HPV 26的位置
  M2601  TAGTACATTATCTGCAGCAT     6619-6638
  M2602  ATTATCTGCAGCATC     6625-6639
  M2603  TGCAGCATCTGCATCCACTC     6631-6650
  M2604  GCATCTGCATCCACTCCATTTAAA     6635-6658
  M2605  CTCCATTTAAACCATCTGAT     6648-6667
  M2606  TAAAATAACACTTACAACAGATG     6727-6749
  M2607  TGCCTCCATATTGGAGGAT     6775-6793
  M2608  ACTAACCTTACCTCCCACTGCTAGTT     6805-6830
  M2609  CTATAGGTTTATTAAAAACTCT     6841-6862
  M2610  TAACGCCCCTCCTGTGCCA     6880-6898
  M2611  AAAACAGGCAAATACAAAGGCAG     1093-1115
  M2612  CTAGGTAGTCAGAACAGCCCGTTGCA     1139-1164
  M2613  GCGACAGTCAGCAGAATACACACCAAGTAA     1194-1223
  M2614  CAAAAGGAGAGCCGTGGACAGTGTAC     1237-1262
  M2615  CCGTACAGGTAGATAAACAATATGAA     1305-1330
  M2616  GCCTAGTGTGTGTAGTCAGGGGGGG     1345-1369
  M2617  GCCTCAGTGGAAGATATCGATGTAGA     1376-1401
  M2618  CAGTGTTACACAAATATGTGAATTAT     1414-1439
  M2619  CAGTATATGGTGTAAGTTTTGCAGAA     1485-1510
表5可与HPV 31杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 31基因位置
序列编号             序列5’→3’  该序列于HPV 31的位置
  M3101  TGCAATTGCAAACAG     6592-6606
  M3102  GCAATTGCAAACAGTGATAC     6593-6612
  M3103  CAATTGCAAACAGTGATACT     6594-6613
  M3104  GCAAACAGTGATACTACATTTAA     6599-6621
  M3105  CTACATTTAAAAGTAGTAAT     6612-6631
  M3106  CAAAATAACATTATCTGCAGACA     6691-6713
  M3107  TCCTGCTATTTTGGAAGAT     6739-6757
  M3108  ATTGACCACACCTCCCTCAGGTTCTT     6769-6794
  M3109  CTATAGGTTTGTCACCTCACAG     6805-6826
  M3110  AACTGCCCCCCAAAAGCCC     6844-6862
  M3111  AGCGGAGGAACATGCAGAGGCTG     1083-1105
  M3112  TTTAAGTGATATTAGTAGTTGTGTGG     1140-1165
  M3113  AGTCCACGGTTAAAAGCTATATGCATAGAA     1177-1206
  M3114  GACTCTTTGAACTTCCAGACAGCGGG     1232-1257
  M3115  GCAGCAGATGGTACAGGTAGAGGAGC     1281-1306
  M3116  AATGGTAGTGACGGGACACATAGTGA     1327-1352
  M3117  CCAACACGTAATATATTGCAAGTGTT     1369-1394
  M3118  GCAATGGTAAAGCTGCTATGTTAGGT     1403-1428
  M3119  TTATATGGTGTAAGTTTTATGGAAC     1441-1465
表6可与HPV 32杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 32基因位置
 序列编号          序列5’→3’  该序列于HPV 32的位置
  M3201  TGCTACTGTAACAACTGAAG     6906-6925
  M3202  GCTACTGTAACAACTGAAGA     6907-6926
  M3203  TACTGTAACAACTGA     6909-6923
  M3204  ACTGTAACAACTGAAGACAC     6910-6929
  M3205  CAACTGAAGACACATACAAGTC     6917-6938
  M3206  CAAAATTACATTATCTGTAGAGG     7005-7027
  M3207  TCCTGACATACTAGACGAT     7053-7071
  M3208  TGTAGCTCCACCGCCCTCTGGTACTT     7083-7108
  M3209  TTATAGATTTGTGCAGTCTCAG     7119-7140
  M3210  TAAGGTAACAGCACCTGAA     7158-7176
  M3211  TTTTTCTGACTATTCA     7188-7203
  M3212  AGCACATGCAGATAAGGAGGCAG     1062-1084
  M3213  GGCAGTCCATATGAAAGTCCCGCCAGTGAT     1111-1140
  M3214  GAGCTAAGCCCTAGGCTTGGTGGATT     1162-1187
  M3215  GGGGCCAAACGACGACTATTTCAATC     1210-1235
  M3216  GCAGGAACAGGTAGAAAATGGACATG     1284-1309
  M3217  GTGTACATGGGGTGCAGGAAAATCAG     1352-1377
  M3218  GCCTACAACAAGGGTGGTGGAATTGC     1395-1420
  M3219  GCAAGCAACATTGTTAGGTAAGTTTA     1437-1462
  M3220  GCTGTTTGGATTGTCATTTGGTGATT     1467-1492
表7可与HPV 33杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 33基因位置
序列编号            序列5’→3’  该序列于HPV 33的位置
  M3301  TATGCACACAAGTAACTAGT     6624-6643
  M3302  CACACAAGTAACTAG     6628-6642
  M3303  ACAAGTAACTAGTGACAGTA     6631-6650
  M3304  GTAACTAGTGACAGTACATATAA     6635-6657
  M3305  GTACATATAAAAATGAAAAT     6648-6667
  M3306  CAAAGTTACCTTAACTGCAGAAG     6727-6749
  M3307  TCCAGATATTTTAGAAGAT     6775-6793
  M3308  TTTAACACCTCCTCCATCTGCTAGTT     6805-6830
  M3309  CTATAGGTTTGTTACCTCTCAG     6841-6862
  M3311  AACAGTACCTCCAAAGGAA     6880-6898
  M3312  CTTAGGTAAATATACA     6910-6925
  M3313  AGGGGAGGATGATTTAAATGCTG     1100-1122
  M3314  GCATGTTCACAAAGTGCTGCGGAGGA     1149-1174
  M3315  GATCGTGCTGCAAACCCGTGTAGAAC     1182-1207
  M3316  GAATGCACATACAGAAAACGAAAAATAGAT     1227-1256
  M3317  AAATAGATGAGCTAGAAGACAGCGGA     1249-1274
  M3318  GGTACAACAGGTAGAAAGTCAAAATG     1307-1332
  M3319  GACTTAGAATCTAGTGGGGTGGGGGA     1350-1357
  M3320  CTGTGAGACAAATGTAGATAGCTGTG     1391-1416
  M3321  CGTTGCAGGAAATTAGTAATGTTCTA     1426-1451
  M3322  GAGGCCTATGGAATAAGTTTTAT     1494-1516
表8可与HPV 35杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 35基因位置
序列编号           序列5’→3’ 该序列于HPV 35的位置
  M3501  TCTGCTGTGTCTTCTAGTGA     6612-6631
  M3502  TGCTGTGTCTTCTAG     6614-6628
  M3503  GTGTCTTCTAGTGACAGTAC     6618-6637
  M3504  CTTCTAGTGACAGTACATATAAA     6622-6644
  M3505  GTACATATAAAAATGACAAT     6634-6653
  M3506  TAAAATAACACTAACAGCAGATG     6713-6735
  M3507  CCCGTCCATTTTAGAGGAT     6761-6779
  M3508  CCTTACACCACCGCCTTCTGGTACCT     6791-6816
  M3509  ATATCGCTATGTAACATCACAG     6827-6848
  M3510  ACCCAGTGCACCAAAACCT     6866-6884
  M3511  GGAGCAAACACACAAAGAGGCTG     1089-1111
  M3512  GCAGCGTGAGCTTATGTGTTAATAATAACA     1151-1180
  M3513  GTCCACGTTTAAAAGCTATTTGCA     1184-1207
  M3514  CGATTATTTGAACTACCAGACAGCGG     1237-1262
  M3515  GAGATACAACAGGTAGAGGGGCATGA     1291-1316
  M3516  GGGCAGTGGGGATAGTATAACCTCTA     1338-1363
  M3517  GACATGATGAGACTCCAACGCGAGAC     1376-1401
  M3518  CTAAAATGTAGTAATGCAAACGCAGC     1414-1439
  M3519  GCTATGTTGGCTAAATTTAAAGAACT     1438-1463
表9可与HPV 37杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 37基因位置
序列编号           序列5’→3’  该序列于HPV 37的位置
  M3701  TGTCTACTGACAATG     6782-6796
  M3702  TGTCTACTGACAATGGCGAA     6782-6801
  M3703  TGACAATGGCGAAGTTACAG     6789-6808
  M3704  GACAATGGCGAAGTTACAGA     6790-6809
  M3705  AATGGCGAAGTTACAGAATA     6793-6812
  M3706  CAGAATATAATTCTCAAACA     6806-6825
  M3707  TAAAGTTCCTTTAAAGGCTGAGG     6885-6907
  M3708  TTCTGGTATATTGGAAGAG     6933-6951
  M3709  ATTTGTACCTACTCCAGATAATTCAG     6963-6988
  M3710  TTATAGGTACATTAATTCAAAG     6999-7020
  M3711  TGCAGTTGTTGAAAAAGAA     7038-7056
  M3712  CTTTGCAAAATATACA     7068-7083
表10可与HPV 39杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 39基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV 39的39的位置
  M3901  CTCTATAGAGTCTTC     6677-6691
  M3902  TAGAGTCTTCCATACCTTCT     6682-6701
  M3903  ATAGAGTCTTCCATACCTTC     6681-6700
  M3904  GTCTTCCATACCTTCTACATATG     6686-6708
  M3905  CTACATATGATCCTTCTAAG     6700-6719
  M3906  TACTGTCACATTAACAACTGATG     6779-6801
  M3907  TTCCTCTATATTGGACAA     6827-6844
  M3908  TGTAGCTCCTCCACCATCTGCCAGTT     6857-6882
  M3909  TTACAGATACCTACAGTCTGCA     6893-6914
  M3910  GGATGCTCCAGCACCTGAA     6932-6950
  M3911  ATATGACGGTCTAAAG     6962-6977
  M3912  GGCCCAAAGGGATGCACAAGCAG     1149-1171
  M3913  CAGACAGCAGTGGCGACACTAGACCGTATG     1196-1225
  M3914  GTAGGCAGGAATACCAGGGGAACAC     1234-1258
  M3915  GCAGTACGCAGGCAACACAAACGGTG     1283-1308
  M3916  GGAGGAGGTAACTGTAGCAACTAATA     1362-1387
  M3917  CATGGCGGCAGTGTACGGGAGGAGTG     1411-1436
  M3918  GGATAGTGCTATAGATAGTGAAAACC     1446-1471
  M3919  CTCCAACTGCACAAATTAAATTATTG     1484-1509
  M3920  CCAATAACAAAAAGGCTGCAATGCTA     1517-1542
表11可与HPV 44杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 44基因位置
序列编号        序列5’→3’ 该序列于HPV 40的位置
  M4401  TGCCACTACACAGTC     6719-6733
  M4402  CTACACAGTCCCCTCCGTCT     6724-6743
  M4403  TGCCACTACACAGTCCCCTC     6719-6738
  M4404  CAGTCCCCTCCGTCTACATATA     6729-6750
  M4405  CTACATATACTAGTGAACAA     6742-6761
  M4406  TAGTATTACCTTAACGGCGGAGG     6821-6843
  M4407  TGCTGGTATTTTAGAACAG     6869-6887
  M4408  GTTGTCGCCGCCCCCAAATGGTACCT     6899-6924
  M4409  ATACAGATATGTGCAGTCCCAG     6935-6956
  M4410  GCCACCCCCTGAAAAGGCA     6974-6992
  M4411  CTATGCAAAATTAAGT     7004-7019
  M4412  GGCGGATGCTCATTATGCGGCTG     1038-1060
  M4413  GGTAGTCCATATGTTAGTCCTTTAAGTAAT     1087-1116
  M4414  CACGGCTGGACGCTATAACATTAAGT     1148-1173
  M4415  GACGGCTGTTTGACAGACCAGAATTA     1196-1221
  M4416  GCTGAAACGCAGGTAGAGAGAAATGG     1255-1280
  M4417  GGGAGGTGGACAAGGAAGGGACACAG     1299-1324
  M4418  GGAAGTGCAGACACATAGCAACACAC     1347-1372
  M4419  GGTACTAGAACTATTGAAATGTAAGA     1395-1420
  M4420  GCTTGGTAAGTTTAAGGATTGCTATG     1437-1462
表12可与HPV 45杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 45基因位置
序列编号         序列5’→3’ 该序列于HPV 45的位置
  M4501  TGCCTCTACACAAAATCCTG     6651-6670
  M4502  CTCTACACAAAATCC     6654-6668
  M4503  ACAAAATCCTGTGCCAAGTA     6660-6679
  M4504  CAAAATCCTGTGCCAAGTAC     6661-6680
  M4505  AATCCTGTGCCAAGTACATATG     6664-6685
  M4506  GTACATATGACCCTACTAAG     6677-6696
  M4507  CACTATTACTTTAACTGCAGAGG     6756-6778
  M4508  TAGTAGTATATTAGAAAAT     6804-6822
  M4509  TGTCCCTCCACCACCTACTACAAGTT     6834-6859
  M4510  ATATCGTTTTGTGCAATCAGTT     6870-6891
  M4511  GGATACTACACCTCCAGAA     6909-6927
  M4512  AGTTCAGAATGATGCACAGGTGT     1135-1157
  M4513  GCAGCTAAGTGTGGATACGGATCTAAGTCC     1216-1245
  M4514  CAAGAAATTTCATTAAATAGTGGGCA     1253-1278
  M4515  ACGGTTGTTTACAATATCAGATAGTG     1294-1319
  M4516  CATAGTACACAAAGTAGTGGTGGGGA     1397-1422
  M4517  GACAATGCAGAAAATGTAGATCCGCA     1430-1455
  M4518  GGAGCTATTACAAGCAAGTAACAAAA     1477-1502
  M4519  GCAATGCTGGCAGTATTTAAAGACA     1508-1532
  M4520  ATATGGGCTGTCATTTACGGATTTGG     1534-1559
表13可与HPV 51杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 51基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV 51的位置
  M5101  CACTGCCACTGCTGCGGTTT     6555-6574
  M5102  TGCCACTGCTGCGGT     6558-6572
  M5103  CACTGCTGCGGTTTCCCCAA     6561-6580
  M5104  CCACTGCTGCGGTTTCCCCA     6560-6579
  M5105  CTGCGGTTTCCCCAACATTTAC     6566-6587
  M5106  CAACATTTACTCCAAGTAAC     6578-6597
  M5107  TAAAATTACTTTAACTACAGAGG     6657-6679
  M5108  TCCTACCATTCTTGAACAG     6705-6723
  M5109  ATTAACATTACCTCCGTCTGCTAGTT     6735-6760
  M5110  ATATAGGTTTGTTAGAAATGCA     6771-6792
  M5111  GGACACCCCTCCACAGGCT     6810-6828
  M5112  TTTGGCCAAATATAAA     6840-6855
  M5113  ATTACAGGCAAACAAAGAGGCTG     1092-1114
  M5114  GCGAAGCAGCCCATTAGGAGACATTACAAA     1149-1178
  M5115  CCATAGTCAGGCAAACGAGTCACAAG     1197-1222
  M5116  AGATTACTGGACAGTTATCCGGACA     1231-1255
  M5117  CAGGTAGATGGGCAACATGGCGGTTC     1300-1325
  M5118  AGCTGTGCAAATGTAGAACTAAACAG     1384-1409
  M5119  GGTATTAGTTATAATGAGTTGGTACG     1477-1502
表14可与HPV 52杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 52基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV 52的位置
  M5201  TGAGGTTAAAAAGGA     6695-6709
  M5202  TGAGGTTAAAAAGGAAAGCA     6695-6714
  M5203  GAGGTTAAAAAGGAAAGCAC     6696-6715
  M5204  TTAAAAAGGAAAGCACATAT     6700-6719
  M5205  AAAGGAAAGCACATATAAAAAT     6704-6725
  M5206  GCACATATAAAAATGAAAAT     6712-6731
  M5207  CAAAATTACATTAACAGCTGATG     6791-6813
  M5208  TGCCACTATTTTAGAGGAC     6839-6857
  M5209  CCTTACCCCACCACCGTCTGCATCTT     6869-6894
  M5210  ATACAGATTTGTCACTTCTACT     6905-6926
  M5211  AAACACACCACCTAAAGGA     6944-6962
  M5212  TTTAAAGGACTATATG     6974-6989
  M5213  AGGGGAGGATGATTTACATGCTG     1085-1107
  M5214  GCAGTCCGGAAAGTGCTGGGCAAGATGGTG     1135-1164
  M5215  GGTAGTCCGCGTGCAAAACACATTTG     1176-1201
  M5216  CCAAAACGCAAACCATGTCACGTAGA     1224-1249
  M5217  CAAAATGGCGACTGGCAAAGTA     1311-1332
  M5218  GCTAGTAATTCAGATGTAAGTTGTAC     1359-1384
  M5219  GAGGAAAATAGTAATAGAACGCTAAA     1401-1426
  M5220  GCGAAAATAGCATAAAAACAACTGTA     1447-1472
  M5221  AGAAACATATGGTGTTAGCTTTATGG     1487-1512
表15可与HPV 53杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 53基因位置
序列编号           序列5’→3’ 该序列于HPV 53的位置
  M5301  TCCGCAACCACACAGTCTAT     6681-6700
  M5302  CCGCAACCACACAGT     6682-6696
  M5303  CCGCAACCACACAGTCTATG     6682-6701
  M5304  CACAGTCTATGTCTACATATAA     6691-6712
  M5305  CTACATATAATTCAAAGCAA     6703-6722
  M5306  TAAAATATCCCTGTCTGCTGAGG     6782-6804
  M5307  TTCTACCTTACTGGAAGAC     6830-6848
  M5308  TTTGTCGCCTCCTGTTGCCACTAGCT     6860-6885
  M5309  ATACAGATATGTGAAAAGTGCA     6896-6917
  M5310  GGATCAGCCCCCTCCTGAA     6935-6953
表16可与HPV 54杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 54基因位置
序列编号            序列5’→3’ 该序列于HPV 54的位置
  M5401  TACAGCATCCACGCA     6633-6647
  M5402  CAGCATCCACGCAGGATAGC     6635-6654
  M5403  ACGCAGGATAGCTTTAATAA     6643-6662
  M5404  CACGCAGGATAGCTTTAATA     6642-6661
  M5405  ATAGCTTTAATAATTCTGAC     6650-6669
  M5406  TACCATAACCCTTACAGCAGATG     6729-6751
  M5407  TCCCACTATTCTAGAGGAC     6777-6795
  M5408  TATAACCCCCCCAGCTACAAGTAGTT     6807-6832
  M5409  ATATAGGTTTGTACAGTCACAG     6843-6864
  M5410  GAATAATGCCCCTGCAAAGGAA     6882-6903
  M5411  GCTGCAGGCAGATGTAGAGGCAG     1043-1065
  M5412  CGTATGTAAGTCCTGTTGCAAACAGCGAAC     1099-1128
  M5413  CTGTGTAGAAAAGGACCTAA     1130-1149
  M5414  TATATCCCTAGGACGGCGGTCAGCCA     1166-1191
  M5415  GGTAAATACCGAGGGGACAGATGAAA     1265-1290
  M5416  GAAACAACTACAGATAGCCTAGGAAG     1323-1348
  M5417  CGTGTAGCATTGTTTGGTATGTTTAA     1386-1411
  M5418  TATGGATTAAGTTTTATGGACC     1419-1440
表17可与HPV 56杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 56基因位置
序列编号     序列5’→3’ 该序列于HPV 56的位置
  M5601  CTGCTACAGAACAGT     6630-6644
  M5602  GCTACAGAACAGTTAAGTAA     6632-6651
  M5603  CAGAACAGTTAAGTAAATAT     6636-6655
  M5604  GAACAGTTAAGTAAATATGATGC     6638-6660
  M5605  GTAAATATGATGCACGAAAA     6648-6667
  M5606  CAAAATTACTTTGTCTGCAGAGG     6727-6749
  M5607  TGCTAACCTACTGGAGGAC     6775-6793
  M5608  GTTATCCCCGCCAGTGGCCACCAGCC     6805-5830
  M5609  ATATAGATATGTTAGAAGCACA     6841-6862
  M5610  GGAACAGCCACCAACAGAA     6880-6898
表18可与HPV 58杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 58基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV 58的位置
  M5801  ATGCACTGAAGTAACTAAGG     6674-6693
  M5802  CACTGAAGTAACTAAGGAAG     6677-6696
  M5803  TGAAGTAACTAAGGA     6680-6694
  M5804  GAAGTAACTAAGGAAGGTAC     6681-6700
  M5805  CTAAGGAAGGTACATATAAAAA     6688-6709
  M5806  ATAAAAATGATAATTTTAAG     6703-6722
  M5807  CAAAATTACACTAACTGCAGAGA     6776-6798
  M5808  TTCCAATATTTTGGAGGAC     6824-6842
  M5809  TTTAACACCTCCTCCGTCTGCCAGTT     6854-6879
  M5810  ATATAGATTTGTTACCTCCCAG     6890-6911
  M5811  AACAGCACCCCCTAAAGAA     6929-6947
  M5812  AGGGGTGGACGATATAAATGCTG     1104-1126
  M5813  GCATGCTCAGAAAGTGCTGTAGA     1153-1175
  M5814  GCAAATGTGTGTGTATCGTGGAAATATAAA     1195-1224
  M5815  AAATTATTGAGCTAGAAGACAG     1253-1274
  M5816  GCACACCAGGTAGAAAGCCAA     1312-1332
  M5817  GGCTAGTTCAGATGTAAGCAGTGAAA     1377-1402
  M5818  GTAATATTCTACATAACAGTAA     1445-1466
  M5819  GCAACGCTATTATATAAATTC     1474-1494
  M5820  GCTTATGGAGTAAGTTTTATGGAA     1501-1524
表19可与HPV 59杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 59基因位置
序列编号           序列5’→3’ 该序列于HPV 59的位置
  M5901  TTCTACTACTTCTTC     6643-6657
  M5902  ACTACTTCTTCTATTCCTAA     6647-6666
  M5903  ACTTCTTCTATTCCTAATGT     6650-6669
  M5904  TCTTCTATTCCTAATGTATACAC     6653-6675
  M5905  ATGTATACACACCTACCAGT     6666-6685
  M5906  TAAAATAACATTAACTACAGAGG     6745-6767
  M5907  TACCACTATTTTGGAGGAT     6793-6811
  M5908  TGTTACACCACCTCCTACTGCTAGTT     6823-6848
  M5909  ATACCGTTTTGTTCAATCTGCT     6859-6880
  M5910  GGACACCGCACCGCCAGTT     6898-6916
  M5911  TTATGACAAACTAAAG     6928-6943
  M5912  AGCCCAAAGGGATGCACGGGAAA     1093-1115
  M5913  GCAGTATAGAAAACAGTAGTGAGAAAGCGG     1143-1172
  M5914  CCATTACAAGAAATATCAGTAAATG     1196-1220
  M5915  GGTTAATAACAGTGCCAGACAGCG     1245-1268
  M5916  GGTAACCGTGGAGAATACTGGAAATG     1306-1331
  M5917  CTGTAGCGACAGCAGTAACATGGATG     1372-1397
  M5918  CCCACTAATCAATTGTTACAGTTA     1421-1444
  M5919  GGGTTATCATTTCAAGATTTGG     1499-1520
表20可与HPV 61杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 61基因位置
序列编号            序列5’→3’ 该序列于HPV 61的位置
  M6101  CTGCTACATCCCCCC     6803-6817
  M6102  ACATCCCCCCCTGTATCTGA     6808-6827
  M6103  CATCCCCCCCTGTATCTGAA     6809-6828
  M6104  CCCCTGTATCTGAATATAAAGC     6815-6836
  M6105  CTGAATATAAAGCCACAAGC     6824-6843
  M6106  TAAAATACATTTAACCCCTGAAA     6903-6925
  M6107  TAAGGCCTTGTTGGATGAC     6951-6969
  M6108  TGTGGTACCACCACCCTCTACCAGTT     6981-7006
  M6109  ATATAGGTTTTTGCAGTCCAGA     7017-7038
  M6110  GGGTGCTGCTGCCCCGCCGCCC     7056-7077
  M6111  CTATGCCAAGTTATCC     7089-7104
  M6112  TGCACAGGATGACGCTGCAACGG     1038-1060
  M6113  CCTTGGTGGACAGTGAATTAAGTCCC     1115-1140
  M6114  GGACAGGACAGGGCTAGGAGAAGGCTGTTT     1168-1197
  M6115  TGTTTGAGCAAGATAGTGGC     1193-1212
  M6116  GGATGCGCAACATGAGGGGGGGGGGG     1263-1288
  M6117  GGCCGAGGCCACAGGTAACCAGGAAA     1335-1360
  M6118  GGCAGACATATTAGAGGTGTTTAAGG     1380-1405
  M6119  CTGTACAAATTCAAGGACCTATTTGG     1429-1454
  M6120  CTAGCATTTGGGGAGCTGGTA     1456-1476
表21可与HPV 62杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 62基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV 62的位置
  M6201  CCGCCTCCACTGCTG     92-106
  M6202  GCCTCCACTGCTGCAGCAGA     94-113
  M6203  CTGCTGCAGCAGAATACACG     101-120
  M6204  GCAGAATACACGGCTACCAA     109-128
  M6205  CAGAATACACGGCTACCAAC     110-129
  M6206  CAAAATACAGTTAACCCCCGAAA     189-211
  M6207  CAAGGACCTTTTGGATGAC     237-255
  M6208  GGTTTTACCTCCCCCTTCCACTAGTT     267-292
  M6209  ATATCACTATTTCGAGTCTCGG     303-324
  M6210  GGGGCTGCCTACCCGTCCC     342-360
  M6211  GTATGCGCAAATGACA     372-387
表22可与HPV 66杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 66基因位置
序列编号       序列5’→3’ 该序列于HPV 66的位置
  M6601  CAGCTAAAAGCACAT     6680-6694
  M6602  CAGCTAAAAGCACATTAACT     6680-6699
  M6603  CTAAAAGCACATTAACTAAA     6683-6702
  M6604  TTAACTAAATATGATGCCCG     6694-6713
  M6605  CTAAATATGATGCCCGTGAA     6698-6717
  M6606  TAAAATAACCTTAACTGCAGAAG     6777-6799
  M6607  TAATACTTTATTAGACGAT     6825-6843
  M6608  CTTATCCCCACCAGTTGCAACTAGCT     6855-6880
  M6609  ATATAGGTATATTAAAAGCACA     6891-6912
  M6610  GGAACAGCCCCCTGCAGAA     6930-6948
  M6611  CCTGGCTAAATATAAG     6960-6975
  M6612  AGCACATGCAGATGCACAGACG     1116-1137
  M6613  GGTAGTCCCTTAAGTGATATTAGTAA     1165-1190
  M6614  GCAAACTGTGTACCGAGAGGAAGTAA     1194-1219
  M6615  AAGGCTAATATTATCAGAAGACAGCGGGTA     1224-1253
  M6616  GAAACATCACAACAGGTAGAATACG     1276-1300
  M6617  GAGCTCACAAAATGGAGGCTCGCAAA     1320-1345
  M6618  ATCAAATATGGATATAGATACAAATA     1371-1396
  M6619  CCAATTGCAGGAACTATTTAAAAGTA     1413-1438
  M6620  CAAGGAAGATTACATTTTAAATTTAA     1447-1472
  M6621  AGAAGTGTATGGAGTGCCAT     1473-1492
表23可与HPV 67杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 67基因位置
序列编号       序列5’→3’ 该序列于HPV 67的位置
  M6701  CTGAGGAAAAATCAG     6655-6669
  M6702  GAGGAAAAATCAGAGGCTAC     6657-6676
  M6703  ATCAGAGGCTACATACAAAAATG     6665-6687
  M6704  AGGAAAAATCAGAGGCTACA     6658-6677
  M6705  CTACATACAAAAATGAAAAC     6673-6692
  M6706  CAAAATATCCCTTACTGCAAATG     6752-6774
  M6707  TCCAGATATATTAGAGGAC     6800-6818
  M6708  CCTTACACCACCTCCTTCAGGTAATT     6830-6855
  M6709  ATATAGATTTGTTACCTCGCAG     6866-6887
  M6710  AACATCCCCTCCAACAGCA     6905-6923
  M6711  TCTTAAAAAGTACAGT     6935-6950
  M6712  AGAGGAGGATGACCTAAACGCTG     1096-1118
  M6713  CAGGCATGTGGTGGTAATAGTAATGG     1151-1176
  M6714  GCCGCAAAACGCAGAGCATACGACATAGAA     1199-1228
  M6715  GGCAAAATGGCGATATGCAGTGCAGT     1287-1312
  M6715  GCAAGTAGTACGGGAAACAGTGTAGA     1331-1356
  M6716  GTCAGGAACAAAGCATGCCATTGCAA     1380-1405
  M6717  GCATGTAAATAATATAAAGGCAACG     1423-1447
  M6718  GGAAGCATATGGGGTAACGTTTACAC     1465-1490
表24可与HPV 68杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 68基因位置
序列编号        序列5’→3’ 该序列于HPV 68的位置
  M6801  CTACTACTGAATCAG     2653-2667
  M6802  TGAATCAGCTGTACCAAATA     2660-2679
  M6803  GAATCAGCTGTACCAAATAT     2661-2680
  M6804  CAGCTGTACCAAATATTTATGA     2665-2686
  M6805  ATATTTATGATCCTAATAAA     2677-2696
  M6806  TCCTGCTATTTTGGATGAT     2804-2822
  M6807  TACTATAACATTGTCCACTGATG     2756-2778
  M6808  TGTTGCCCCTCCACCATCTGCTAGTC     2834-2859
  M6809  ATACCGCTATCTGCAATCAGCA     2870-2891
  M6810  AGACGCCCCTGCACCTACT     2909-2927
  M6811  ATATGATGGCTTAAAC     2939-2954
  M6812  GGCCCAAAGGGATGCACAAACAG     4990-5012
  M6813  GCCCTTTAGCAAAGTCGCCATTACAG     5055-5080
  M6814  GGTAACTGTAGCAACTAATA     5115-5134
  M6815  GGAAAATGGCGACAGCATACGGGAGGACTG     5163-5192
  M6816  GACAGTGCTATAGATAGTGAAAACCA     5203-5228
  M6817  CCTACTACGCAACTAAAAGTATTA     5242-5265
  M6818  AAGCTGCAATGTTAACAGAATTTAAA     5285-5310
表25可与HPV 69杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 69基因位置
序列编号        序列5’→3’ 该序列于HPV 69的位置
  M6901  TATTAGTACTGTATCTGCAC     6572-6591
  M6902  CTGTATCTGCACAAT     6580-6594
  M6903  CTGTATCTGCACAATCTGCA     6580-6599
  M6904  TGCACAATCTGCATCTGCCA     6587-6606
  M6905  CAATCTGCATCTGCCACTTTTA     6591-6612
  M6906  CCACTTTTAAACCATCAGAT     6604-6623
  M6907  TAAAATTACTCTTACCACTGATG     6683-6705
  M6908  TTCTACTATTTTGGAAAAT     6731-6749
  M6909  CCTTACCTTGCCTCCTACTGCTAGTT     6761-6786
  M6910  ATATAGGTTTATTAAAAATTCA     6797-6818
  M6911  CGATGCCCCTGCACAGCCC     6836-6854
  M6912  AACACAAGCAAATAAGAAGGCAG     1101-1123
  M6913  GAACAGCCCGTTGCAAGACATAACAA     1158-1183
  M6914  CAGACGAAGTAAACAATTTACAGGC     1208-1232
  M6915  GGAGAGCAGTGGACAGTGTTCCGGACAGCG     1238-1267
  M6916  GGTAGATAAACACAATGAACAAAATG     1308-1333
  M6917  TCAAGTGGATCTGTATCAGACA     1360-1381
  M6918  GCACAGGCAAGTAGTGTAACCAAAA     1399-1423
  M6919  GTAATGTAAAAGCAGCATTATTAA     1445-1468
  M6920  CAGTATATGGTGTAAGTTATA     1481-1501
表26可与HPV 6杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 6基因位置
序列编号         序列5’→3’ 该序列于HPV 6的位置
  M0601  CATCCGTAACTACATCTTCC     6814-6833
  M0602  ATCCGTAACTACATCTTCCA     6815-6834
  M0603  CTACATCTTCCACATACACCAA     6823-6844
  M0604  CATCTTCCACATACACCAAT     6826-6845
  M0605  ATCTTCCACATACACCAATT     6827-6846
  M0606  CCACATACACCAATTCTGAT     6832-6851
  M0607  TAGCATTACATTGTCTGCTGAAG     6911-6933
  M0608  TCCCTCTGTTTTGGAAGAC     6959-6977
  M0609  GTTATCGCCTCCCCCAAATGGTACAT     6989-7014
  M0610  CTATAGGTATGTGCAGTCACAG     7025-7046
  M0611  GCCCACTCCTGAAAAGGAA     7064-7082
  M0612  CTATAAGAACCTTAGT     7094-7109
  M0613  GGCGGACACCCATTATGCGACTG     1045-1067
  M0614  GTTAGTCCTATAAACACTATAGCCGA     1106--1131
  M0615  CCACGATTGGACGCCATTAAACTTACAAGA     1154-1183
  M0616  GGCTGTTTCAAACCAGGGAACTAACG     1206-1231
  M0617  GGTAGAGAAACATGGCGTACCGGAAA     1279-1304
  M0618  GGACACAGGAAGGGACATAGAGGGGG     1327-1352
  M0619  CACAAACAGTGTACGGGAGCATGCAG     1378-1403
  M0620  GCTAAAATGTAAAGATTTACGGGCAG     1426-1451
  M0621  GCTTTGGGCTGTCTTTTATAGATTTA     1476-1501
表27可与HPV 70杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 70基因位置
序列编号         序列5’→3’ 该序列于HPV 70的位置
  M7001  TGTCTGCCTGCACCGAAACG     6614-6633
  M7002  CTGCACCGAAACGGC     6621-6635
  M7003  GAAACGGCCATACCTGCTGT     6628-6647
  M7004  CGAAACGGCCATACCTGCTG     6627-6646
  M7005  CGGCCATACCTGCTGTATATAG     6632-6653
  M7006  CTGTATATAGCCCTACAAAG     6644-6663
  M7007  TACTATCACATTAACTGCTGACG     6723-6745
  M7008  TCCTGCAATTTTGGACAAT     6771-6789
  M7009  AGTTACCCCTCCACCATCTGCAAGCT     6801-6826
  M7010  GTATAGGTATTTACAATCAGCA     6837-6858
  M7011  GGATGCTCCTACACCTGAA     6876-6894
  M7012  CTATGACGATTTAAAA     6906-6921
  M7013  GGCCCAAAGGGATGCACAATCAG     1149-1171
  M7014  GCAATCTAAATAAAAGTCCTTGT     1202-1224
  M7015  GTACATAGGGAACAAAGGGTAACAC     1240-1264
  M7016  GGTAAACATATGCAATAAACAGG     1278-1300
  M7017  ACAAACGTGTATTCAGTACCAGACAGCGGC     1306-1335
  M7018  GTAGTAAATAATACAAATGGGGAAGA     1378-1403
  M7019  GGAGTGCAGTAGTGTAGACAGTGCTA     1446-1471
  M7020  TCCACAGTCACCTACTGCACAGCTAA     1491-1516
  M7021  GCTAATAACCAAAAAGCCATACTAC     1531-1555
  M7022  CACACATATGGATTAGCATTTAACGA     1570-1595
表28可与HPV 72杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 72基因位置
序列编号       序列5’→3’ 该序列于HPV 72的位置
  M7201  ATCTGTTGGTTTAATGAGCT     6759-6778
  M7202  TTTGTGACAGTTGTAGATAC     6780-6799
  M7203  CTGCCACAGCGTCCT     6829-6843
  M7204  ACAGCGTCCTCTGTATCAGA     6834-6853
  M7205  CCACAGCGTCCTCTGTATCA     6832-6851
  M7206  AGCGTCCTCTGTATCAGAATAT     6836-6857
  M7207  CAGAATATACAGCTTCTAAT     6850-6869
  M7208  TAAAATTCACTTAACTCCTGAAA     6929-6951
  M7209  TAAGGCCTTATTGGATGAC     6977-6995
  M7210  TGTGGTGCCTCCTCCTTCTACCAGTT     7007-7032
  M7211  CTATAGGTTTTTGCAGTCTCGT     7043-7064
  M7212  GGGGGCTGCCACCCCTCCTCCT     7082-7103
  M7213  ATATGCTAACTTATCC     7115-7130
表29与HPV 74杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 74基因位置
序列编号         序列5’→3’ 该序列于HPV 74的位置
  M7401  CCTACCTCACAATCG     1686-1700
  M7402  CTCACAATCGCCTTCTGCTA     1691-1710
  M7403  ACCTCACAATCGCCTTCTGC     1689-1708
  M7404  CAATCGCCTTCTGCTACATATA     1695-1716
  M7405  ACAATCGCCTTCTGCTACATAT     1694-1715
  M7406  CTACATATAATAGTTCAGAC     1708-1727
  M7407  TAGTATTAAGTTAACTGCTGAGG     1787-1809
  M7408  TCCTACAGTTTTAGAAGAG     1835-1853
  M7409  GCTAACGCCTCCCCCCAATGGTACTT     1865-1890
  M7410  CTACAGATATGTGCAGTCCCAG     1901-1922
  M7411  ACCTACGCCTGATAAAGCA     1940-1958
  M7412  CTATGCAAATTTAAGT     1970-1985
表30可与HPV 82杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV 82基因位置
序列编号            序列5’→3’ 该序列于HPV 82的位置
  M8201  TGCTGTTACTCCATC     6608-6622
  M8202  TGCTGTTACTCCATCTGTTG     6608-6627
  M8203  ACTCCATCTGTTGCACAAAC     6615-6634
  M8204  AAACATTTACTCCAGCAAAC     6631-6650
  M8205  TAAAATCACTTTAACTACTGAAA     6710-6732
  M8206  TTCTACAATTTTAGAACAG     6758-6776
  M8207  ATTAACATTGCCCCCCTCCGCTAGTT     6788-6813
  M8208  CTATCGATTTGTAAAAAATGCA     6824-6845
  M8209  GGACAGTCCTCCACAGGCT     6863-6881
  M8210  AACACAGGCACACAAAGAGGCTG     1094-1116
  M8211  GCAGCCCATTAAAAGACATTACAAA     1156-1180
  M8212  GTCAGCAACAACCAAAACAGGCAAACCTTC     1201-1230
  M8213  GGAGATTACTGGACAGTTATCCGGACA     1243-1269
  M8214  CCTTACAGGTAGATGGGCAAAATGAC     1309-1334
  M8215  GAGCAGCGACAGAAGTACAGAGATAG     1367-1392
  M8216  GCTACCAATGTAGGACTAAACAGTA     1413-1437
  M8217  GTAGCAATGCAAAAGCAATGTTTATG     1456-1481
  M8218  GGTGTTAGTTATAATGAGTTGGTAAG     1503-1528
表31可与HPV CP8061杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV CP8061基因位置
序列编号       序列5’→3’ 该序列于HPV CP8061的位置
  M806101  TCTGTGCTACCAAAACTGTT     86-105
  M806102  CTACCAAAACTGTTG     92-106
  M806103  ACCAAAACTGTTGAGTCTAC     94-113
  M806104  AACTGTTGAGTCTACATATAAA     99-120
  M806105  GTTGAGTCTACATATAAAGC     103-122
  M806106  CTACATATAAAGCCTCTAGT     110-129
  M806107  TGTTATTAATTTAACAGCTGAAA     189-211
  M806108  TGCTACATTACTGGAGGAC     237-255
  M806109  GTTCTTACCACCTCCTACTG     267-286
  M806110  CTACCGCTTTTTACAGTCTCAG     303-324
  M806111  AAACAGTCCTCCTCCTGCAGAA     342-363
  M806112  CTATGCAGATCTTACA     375-390
表32可与HPV CP8034杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV CP8034基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV CP8034的位置
  M830401  CAGCTACATCTGCTG     92-106
  M830402  GCTACATCTGCTGCTGCAGA     94-113
  M830403  ACATCTGCTGCTGCAGAATACA     97-118
  M830404  TGCTGCAGAATACAAGGCCT     105-124
  M830405  GCTGCAGAATACAAGGCCTC     106-125
  M830406  CAGAATACAAGGCCTCTAAC     110-129
  M830407  TAAAATACAGTTAACACCAGAAA     189-211
  M830408  CAAGGCACTGTTGGATGAT     237-255
  M830409  TGTGTTGCCACCTCCTTCCACCAGTT     267-292
  M830410  ATATCGCTTTTTACAGTCTCGG     303-324
  M830411  GGGTGCTGCTGCCCCTGCGCCC     342-363
  M830412  TTATGCCGACATGTCA     375-390
表33可与HPV L1AE5杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV L1AE5基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV L1AE5的位置
  MAE501  ATCTACTGCAACTACTAATC     69-88
  MAE502  CTGCAACTACTAATC     74-88
  MAE503  CTGCAACTACTAATCCAGTT     74-93
  MAE504  ACTACTAATCCAGTTCCATCTA     79-100
  MAE505  CTAATCCAGTTCCATCTATA     83-102
  MAE506  CTATATATGAACCTTCTAAA     98-117
  MAE507  TAAAATTACACTTACTACTGATG     177-199
  MAE508  TCCTACTATTTTAGATAGT     225-243
  MAE509  TGTTAGTCCTCCCCCATCTGCTAGCT     255-280
  MAE510  ATATAGGTTTTTACAGTCATCT     291-312
  MAE511  GGATGTGGTTGTTCCACAA     330-348
表34可与HPV MM4杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV MM4基因位置
序列编号        序列5’→3’ 该序列于HPV MM4的位置
  MM401  CTGCTGTTACTCAATCTGTT     92-111
  MM402  TGCTGTTACTCAATC     93-107
  MM403  GTTACTCAATCTGTTGCACA     97-116
  MM404  TGCACAAACATTTACTCCAG     111-130
  MM405  TTACTCAATCTGTTGCACAAAC     98-119
  MM406  AAACATTTACTCCAGCAAAC     116-135
  MM407  TAAAATCACTTTAACTACTGAAA     195-217
  MM408  TTCTACAATTTTAGAACAG     243-261
  MM409  ATTAACCTTGCCCCCCTCAGCTAGTT     273-298
  MM410  CTATCGATTTGTAAAAAATGCA     309-330
  MM411  GGACAGTCCTCCACAGGCT     348-366
表35可与HPV MM7杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV MM7基因位置
序列编号          序列5’→3’ 该序列于HPV MM7的位置
  MM701  TGCTGCTACACAGGC     93-107
  MM702  GCTGCTACACAGGCTAATGA     94-113
  MM703  TGCTACACAGGCTAATGAAT     96-115
  MM704  CTACACAGGCTAATGAATACAC     98-119
  MM705  ATGAATACACAGCCTCTAAC     110-129
  MM706  CAAAATACATCTTACCCCTGAAA     189-211
  MM707  TGAACATTTATTGGATGAG     237-255
  MM708  CGTGTTACCACCTCCTTCCACCAGCC     267-292
  MM709  CTATCGCTATCTGCAGTCCCGT     303-324
  MM710  GGGTCCTTCCGCCCCTGCCCCT     342-363
  MM711  TTATGATGGCCTTGTA     375-390
表36可与HPV MM8杂交的寡核苷酸序列及所对应的HPV MM8基因位置
序列编号     序列5’→3’ 该序列于HPV MM8的位置
  MM801  TGCTACCAACACCGA     93-107
  MM802  CTACCAACACCGAATCAGAA     95-114
  MM803  CCAACACCGAATCAGAATATAA     98-119
  MM804  CAGAATATAAACCTACCAAT     110-129
  MM805  TAAGGTCCGTCTGACTCCAGAGG     189-211
  MM806  TGACTCCTTATTAGATGAG     237-255
  MM807  TGTTGTGCCCCCTCCCTCCACAAGTT     267-292
  MM808  CTATAGGTACTTGCAGTCTCGC     303-324
  MM809  GGGGGCCGCCGCCGCCAAGCCT     342-363
  MM810  TTATGCTGGCATGTCC     375-390
本发明将每一核苷酸探针固定于所述载体11(尼龙膜)的方法叙述如下:
1.寡核苷酸探针的3’端以末端转移酶加入核苷酸,成为3’端氨基修饰-TTTTTTTTTTTTTTT-寡核酸
1.1将下列物品混合均匀:
10X NEBuffer 4                         5μ1
2.5mM CoCl2                           5μ1
寡核苷酸探针(购自当地厂商)             5~300pmol
10~300mM dATP、dCTP、dTTP或dGTP       1μ1
末端转移酶(20U/u1)(NEW English         0.5~5μl
BioLabs,M0252S)
加M.Q.H2O                             50μl
1.2该混合物置于37℃,反应15~60分钟;
1.3加10μl的0.2M EDTA(pH8.0)至该混合物以终止反应;
2.将3’端增加核苷酸的寡核苷酸探针点到带正电的载体11(尼龙膜)上
2.1将具有3’端增加核苷酸的每一寡核苷酸探针以直径400μm宽的针头点至带正电的载体11(尼龙膜)上,各点间距1200μm;
2.2以紫外光照射载体11(尼龙膜)
2.3即为本发明用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒10,将该试剂盒10保存于干燥箱备用。
请参阅图2。寡核苷酸试片20为本发明的实施例2,其用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒(human papilloma virus,HPV)亚型,其中载体21为一玻璃片。固定于该载体21上的点阵列22,其中的每一点为一寡核苷酸(15至26个核苷酸)探针,每一寡核苷酸探针可专一地与一种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸(DNA)杂交。
载体21上每一寡核苷酸探针序列的选择,请参照表1至表36。各表为本发明针对特定人类乳突瘤病毒亚型所采用的寡核苷酸序列,用以专一地杂交该特定人类乳突瘤病毒亚型。例如,该载体21上其中一寡核苷酸探针的序列可采用序列编号1至12(如表1)中的一序列,用以杂交人类乳突瘤病毒亚型11(HPV 11)。
本发明将每一核苷酸探针固定于该载体21(玻璃片)的方法叙述如下:
1.载体21(玻璃片)的表面处理
1.1载体21(该玻璃片可选用显微镜载玻片SuperFrost,Menzel-Glaser Co.,Germany)以无萤光软性清洁剂清洗干净;
1.2将清洗完毕的载体21泡入10%NaOH过夜;
1.3载体21依序以二次水、1%氯化氢溶液、甲醇振摇2分钟,置于烘箱中干燥。
1.4载体21硅烷化溶液(1%的3-氨基丙基三甲氧基硅烷(APTMS)在95%的丙酮水溶液中),室温反应约2分钟;
1.5载体21以丙酮清洗10次,每次5分钟。移至110℃烘箱,干燥45分钟;
1.6干燥完毕的载体21浸入0.2%的1,4-亚苯基二异氰酸酯溶液中(溶剂为10%的吡啶在二甲基甲酰胺中),于室温反应约2小时;
1.7最后,载体21以甲醇及丙酮清洗,静置干燥;
1.8将表面处理完毕的载体21,置于真空干燥器保存备用。
2.将上述的寡核酸探针固定于载体21(玻璃片)上
2.1将3’端氨基修饰-TTTTTTTTTTTTTTT-寡核酸序列以直径400μm宽的针头点至载体21上,各点间距1200μm;
2.2将载体21浸入1%氨水中约2分钟,再以二次水清洗,室温下风干;
2.3即为本发明用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒20,将该试剂盒20保存于干燥箱备用。
本发明用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法叙述如下:
1.检体处理:
1.1若有颈刷或棉花棒置于管内,需先震荡数秒将细胞震下后并取出颈刷或棉花棒,然后置于20℃下1500rpm离心5分钟;
1.2脱落细胞以10mM Tris(PH8.5)缓冲液清洗并溶于8mM NaOH,将细胞吸取至1.5ml微量离心管;
1.3依照细胞沉淀物的体积,加入适量PreTaq(1U/μl)溶液,94℃反应1小时后,于20℃下13,500rpm离心5分钟,将所得检体DNA保存于-20℃。
2.聚合酶连锁反应(PCR)
2.1以甘油醛-3-磷酸去氢酶基因为内部控制(internal control)的聚合酶连锁反应
2.1.1依下表添加下列物质试剂               库存            取量           最终浓度无菌H2O                           2.610X Taq缓冲液                      0.5            1X Taq缓冲液dNTP               2.5mM           0.4            200μM模板                               1GAP241-51)引子    10pmol/μl      0.2            0.4pmol/μlGAP241-32)引子    10pmol/μl      0.2            0.4pmol/μlProTaq(PROTECH)    5U/μl          0.1            0.1U/μl总体积(μl)                        5
1)Gap2 1-5:CCACCAACTGCTTAGCACCCC
2)Gap2 1-3:TGCAGCGTACTCCCCACATCA
3)最后加入适量矿物油防止蒸发。
2.1.2依下列程序进行PCR反应:
程序一         程序二           程序三
              94℃,15秒94℃,3分钟       57℃,1分钟      72℃,5分钟
              72℃,30秒
              40个循(cycle)
2.1.3 PCR产物于2.5%洋菜胶/EtBr(0.5×TBE)中分析;
2.2检体DNA的第一次聚合酶连锁反应:2.2.1依下表添加下列物质试剂                库存            取量      最终浓度消毒H2O                            4.7-5.710X Taq缓冲液                       1         1X Taq缓冲液dNTP                2.5mM           0.8       200μM模板                                1-2BSA                 10mg/ml         0.1       0.1μg/μl引子1,2)           10pmol/lμl     0.6       0.6pmol/μl引子1,2)           10pmol/μl      0.6       0.6pmol/μlProTaq(PROTEcH)     5U/μl          0.2       0.1U/μl总体积(μ1)                         101)MY09/MY11:Manos等,Cancer Cells 1989,7,209-214;2)E1 301L/E1 847R:Ylitalo等,J.Clin.Microbiol.1995,33,1822-1828;3)最后加入适量矿物油防止蒸发。2.2.2依下列程序进行PCR反应:
程序一          程序二            程序三
              94℃,45秒94℃,3分钟       45℃,1分钟       72℃,5分钟
              72℃,1.5分钟
              45个循环(cycle)2.2.3 PCR产物于2.5%洋菜胶/EtBr(0.5×TBE)中分析2.3使用内扩引子对进行第二次聚合酶连锁反应2.3.1依下表添加下列物质试剂                库存            取量       最终浓度消毒H2O                            11.7510X Taq缓冲液                       2.5        1X Taq缓冲液rdNTP                2.5mM           2          200μM第一次PCR产物                       5BSA                 10mg/ml         0.25       0.1μg/μl引子1)             10pmol/μl      1.5        0.6pmol/μl引子1,2,3)         10pmol/μl      1.5        0.6pmol/μlProTaq (PROTECH)    5U/μl          0.5        0.1U/μl总体积(μl)                         25
1)GP5+/GP6+:De Roda Husman等,J.Gen.Virol.1995,76,1057-1062;
2)El 350L/E1 547R:Ylitalo等,J.Clin.Microbiol.1995,33,1822-1828;
3)GP6+及El 547R引子的5’端可加上生物素标记或Cy5萤光标记;
4)最后加入适量矿物油防止蒸发。
2.3.2以下列程序进行PCR反应;
程序一             程序二                 程序三
                  94℃,45秒
94℃,3分钟       45℃,1分钟          72℃,5分钟
                  72℃,1.5分钟
                  45个循环(cycle)
2.3.3 PCR产物于2.5%洋菜胶/EtBr(0.5×TBE)中分析
3.以本发明所提供的寡核苷酸试片10(载体11为尼龙膜)用以检测人类乳突瘤病毒亚型;
3.1将该寡核苷酸试片10浸泡在2X SSC溶液作用5分钟;
3.2将该寡核苷酸试片10置于含有50μg/μL鲑鱼精子核苷酸的杂交缓冲液里,于35℃预杂交约30分钟;
3.3将含有生物素标记的检体的聚合酶连锁反应产物加入含有50μg/μL鲑鱼精子核酸的杂交缓冲液混合均匀,95℃加热约5分钟;将核酸改性后,置于冰上待用;
3.4将改性后的聚合酶连锁反应产物加入该寡核苷酸试片10上的核苷酸点阵列中,35℃杂交约4小时或过夜;
3.5用2X SSC/1%SDS溶液于35℃清洗该寡核苷酸试片10约15分钟;
3.6再用0.2X SSC/0.1%SDS溶液于35℃清洗该寡核苷酸试片10约l5分钟;
3.7该寡核苷酸试片10以0.5%阻隔试剂处理约1小时;
3.8该寡核苷酸试片10以卵白素-碱性磷酸酶接合物反应约1小时;
3.9该寡核苷酸试片10以1X PBST清洗二次,每次约10分钟;
3.10该寡核苷酸试片10以Tris/NaCl缓冲液清洗二次,每次约五分钟;
3.11该寡核苷酸试片10以NBT/BCIP在室温下进行呈色反应;
3.12由该寡核苷酸试片10上各呈色点对应其所杂交的人类乳突瘤病毒亚型,即可判断该检体中所含为何种人类乳突瘤病毒亚型。
4.以本发明所提供的寡核苷酸试片20(载体21为玻璃片)用以检测人类乳突瘤病毒亚型
4.1含Cy5萤光标记的聚合酶连锁反应产物以PCR Clean Up-M System(Viogene,USA)纯化,以酒精沉淀含Cy5萤光标记的聚合酶连锁反应产物,最后以真空干燥沉淀物备用;
4.2沉淀物加入12μl杂交液(2XSSC/0.1%SDS),充分溶解后,离心1分钟,沸水浴2分钟;
4.3取出后迅速插入冰上,静置5分钟;离心30秒后,取出10μl于寡核酸微阵列杂交区左方,小心地将一盖波片沿左方引溶液覆盖于杂交区上,避免产生气泡;使寡核酸微阵列杂交区朝下,置于Humid Chamber(Sigma,USA)中,35℃杂交4小时或过夜;
4.4将杂交反应完毕的寡核苷酸试片20,垂直放于盛有洗涤液A(2XSSC/1%SDS)的50ml烧杯中,轻轻振动寡核苷酸试片20,使盖玻片脱落,再将寡核苷酸试片20放入装有洗涤液A的50ml离心管中,以160rpm的速率于平面振荡器上洗涤12分钟;
4.5接着寡核苷酸试片20以洗涤液B(0.2XSSC/0.1%SDS),于35℃中振摇12分钟后,以二次水清洗表面,静置干燥;
4.6干燥完毕的寡核苷酸试片20,使用GenePixTM4000(Axon,USA)进行扫描,选用635nm激发波长,以GenePix Pro 3.0(Axon,USA)软件进行分析。
请参阅图3(a)及(b)。图3(a)为本发明实施例3的示意图,寡核苷酸试片30用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒(human papillomavirus,HPV)亚型,其中载体31为一尼龙膜,其实际长度约为1.44公分,宽度约为0.96公分。点阵列32依上述方法固定于该载体31上,其中点距约为1.2公厘,每一点直径约为0.4公厘,且每一点为一寡核苷酸(15至30个核苷酸)探针,每一寡核苷酸探针可专一地与一种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸(DNA)杂交。图3(b)标示点阵列32中每一寡核苷酸探针所对应的人类乳突瘤病毒亚型。而各寡核苷酸探针序列选自于表1至表36中的序列。其中SC(system control)为任何一种人类乳突瘤病毒亚型经由含生物素引子用聚合酶连锁反应的产物NC(negative control),其为与HPV无关的植物基因的片段;IC(internal control)为针对人类常驻基因(housekeeping gene)甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶(Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase,GAP-DH)的专一探针(序列:5’-gcccagactgtgggtggcag-3’),添加上述探针的目的皆为监视检测反应是否正常。
将寡核苷酸试片30分别依照上述方法,检测含有特定人类乳突瘤病毒亚型部分基因的质体(即positive clones),其结果如图4(a)至(c)所示。该含有特定人类乳突瘤病毒亚型部分基因的质体经由MY11/MY09引子进行第一次聚合酶连锁反应,所得第一次聚合酶连锁反应产物于2.5%洋菜胶/EtBr中分析,电泳结果如图4(a)所示。该聚合酶连锁反应产物经由GP5/GP6引子进行第二次聚合酶连锁反应,所得第二次聚合酶连锁反应产物于2.5%洋菜胶/EtBr中分析,电泳结果如图4(a)所示。其中该等人类乳突瘤病毒亚型质体及其标号,说明如表37。
表37
  标号     HPV质体   标号   HPV质体   标号 HPV质体
    M DNA标识(DNA marker)     7     33     14     56
    1     6     8     35     15     59
    2     11     9     44     16     61
    3     16     10     45     17     66
    4     18     11     52     18     70
    5     26     12     53     19   CP8061
    6     31     13     54     20   L1AE5
将上述编号(1)至(20)的第二次聚合酶连锁反应产物分别以二十片寡核苷酸试片30检测的结果,如图4(c)所示。将图4(c)的检测结果以SC为基准点与图3(b)对照可知,本发明所提供的寡核苷酸试片用于鉴别各人类乳突瘤病毒亚型,具有高度准确性。
本发明另将寡核苷酸试片30应用于鉴别受检人检体中带有的人类乳突瘤病毒亚型,其结果如图5所示。将图5的检测结果以SC为基准点与图3(b)对照可知,检体(1)带有人类乳突瘤病毒第53型(HPV 53),检体(2)带有人类乳突瘤病毒第45型(HPV 45),检体(3)带有人类乳突瘤病毒第52型(HPV 52),及检体(4)带有人类乳突瘤病毒第39型(HPV 39)。
请参阅图6(a)及(b)。图6(a)为本发明实施例4的示意图,寡核苷酸试片40用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒(human papillomavirus,HPV)亚型,其中载体41为一玻璃片,点阵列42依上述方法固定于该载体41上,且每一点为一寡核苷酸(15至30个核苷酸)探针,每一寡核苷酸探针可专一地与一种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸(DNA)杂交。图6(b)标示点阵列42中每一寡核苷酸探针所对应的人类乳突瘤病毒亚型。而各寡核苷酸探针序列分别选自于表1、3或14中的序列。
将本发明寡核苷酸试片40以SYBR Green II染色,并使用GenePixTM4000(Axon,USA)进行扫描,选用635nm激发波长,结果如图7(a)所示。将分别含有人类乳突瘤病毒11型、18型部分基因的质体(即positiveclones)分别经由两次聚合酶连锁反应的产物,以本发明寡核苷酸试片40进行检测,检测结果如图7(b)所示,其中红色萤光即为阳性反应。将图7(b)的检测结果对照图6(b)可知,本发明所提供的寡核苷酸试片用于鉴别人类乳突瘤病毒亚型,的确具有高度准确性。
总之,熟悉本发明技术领域的技术人员,在不背离本发明精神的情况下,所作的修改与润饰,皆在本发明的权利要求书的保护范围之内。

Claims (14)

1.一种用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒,该试剂盒包含有:
一载体,该载体包含第一部分与第二部分,并可承载所述检体于其上;
第一种寡核苷酸,该第一种寡核苷酸承载于所述载体的第一部分上;以及
第二种寡核苷酸,该第一种寡核苷酸承载于所述载体的第二部分上,其中该第一种及第二种寡核苷酸可分别与第一种及第二种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸DNA杂交,以同步鉴别该检体中所含有的所述人类乳突瘤病毒亚型。
2.如权利要求1的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒,其中所述载体的材质为尼龙。
3.如权利要求1的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒,其中所述载体为一玻璃片。
4.如权利要求1的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒,其中所述第一种人类乳突瘤病毒亚型与第二种人类乳突瘤病毒亚型分别选自于下列36型病毒之一,所述第一种寡核苷酸的序列选自于该第一种人类乳突瘤病毒亚型对应的寡核苷酸组中的一序列及其互补物,所述第二种寡核苷酸的序列选自于该第二种人类乳突瘤病毒亚型对应的寡核苷酸组中的一序列及其互补物:
HPV 11 NC 001525序列编号    序列5’→3’                    该序列于HPV 11之的位置M1101    ATCTGTGTCTAAATC                         6799-6813M1102    TCTGTGTCTAAATCTGCTAC                    6800-6819M1103    ATCTGTGTCTAAATCTGCTACATACA              6799-6824M1104    TGCATCTGTGTCTAAATCTG                    6796-6815M1105    AAATCTGCTACATACACTAA                    6809-6828M1106    CTAAATCTGCTACATACACTA                   6807-6827M1107    CTACATACACTAATTCAGAT                    6816-6835M1108    TAGCATTACATTATCTGCAGAAG                 6895-6917M1109    TCCTTCTGTTTTGGAGGAC                     6943-6961M1110    TTTATCGCCTCCACCAAATGGTACAC              6973-6998M1111    TTATAGATATGTACAGTCACAGGCC               7009-7033M1112    ACCCACACCTGAAAAAGAAAAAC                 7048-7070M1113    GGCGGATGCTCATTATGCGACTG                 1044-1066M1114    ATATGTAAGTCCTATAAGCAATGTAG              1101-1126M1115    CTAATGCAGTAGAAAGTGAGATAAGT              1127-1152M1116    CACGGTTAGACGCCATTAAACTTACA              1154-1179M1117    CACAGCCAAAAAAGGTAAAGCGACGG              1181-1206M1118    GCAACGCAGGTAGAGAAACATGGCGA              1264-1289M1119    GAAAATGGGGGAGATGGTCAGGAAAGGGAC          1294-1323M1120    GACACAGGGAGGGACATAGAGGGTGA              1321-1346M1121    ACATAGAGAGGCGGAAGCAGTAGACG              1356-1381M1122    ACAGCACCCGAGAGCATGCAGACACA              1382-1407M1123    TCAGGAATATTAGAATTACTAAAATG              1408-1433M1124    GCTGTCATTTGTTGATTTA                     1482-1500
HPV 16 NC 001526序列编号    序列5’→3’                   该序列于HPV 16的位置M1601    TATGTCATTATGTGCTGCCA                    6659-6678M1602    GTGCTGCCATATCTACTTCA                    6670-6689M1603    TGCCATATCTACTTC                         6674-6688M1604    TATCTACTTCAGAAACTACA                    6679-6698M1605    CTACTTCAGAAACTACATATAA                  6682-6703M1606    ATAAAAATACTAACTTTAAG                    6700-6719M1607    CAAAATAACCTTAACTGCAGACG                 6773-6795M1608    TTCCACTATTTTGGAGGAC                     6821-6839M1609    TCTACAACCTCCCCCAGGAGGCACAC              6851-6876M1610    TTATAGGTTTGTAACCCAG                     6887-6905M1611    ACATACACCTCCAGCACCT                     6923-6941M1612    CCTTAAAAAATACACT                        6956-6971M1613    AGCAAAACAACATAGAGATGCAG                 1089-1111M1614    ACTTAGTGATATTAGTGGATGTGTAG              1145-1170M1615    TAGTCCTAGATTAAAAGCTATATGTATAGA          1181-1210M1616    GAAAAACAAAGTAGAGCTGCAAAAAG              1209-1234M1617    CTCAGCAGATGTTACAGGTAGAAGGG              1285-1310M1618    CCATGAGACTGAAACACCATGTAGTC              1313-1338M1619    GGGGGTGGTTGCAGTCAGTACAGTAG              1356-1381M1620    GTGGGGGAGAGGGTGTTAGTGAAAGA              1387-1412M1621    CTATATGCCAAACACCACTTACAAAT              1417-1442M1622    GTTATACGGGGTGAGTTTTTCAGAAT              1502-1527
HPV 18 NC 001357序列编号      序列5’→3’                该序列于HPV 18的位置M1801    TTCTACACAGTCTCC                        6650-6664M1802    CAGTCTCCTGTACCTGGGCA                   6657-6676M1803    AGTCTCCTGTACCTGGGCAA                   6658-6677M1804    TCTCCTGTACCTGGGCAATATGA                6660-6682M1805    CTGTACCTGGGCAATATGAT                   6664-6683M1806    ATGATGCTACCAAATTTAAG                   6679-6698M1807    TACTATTACTTTAACTGCAGATG                6752-6774M1808    TAGCAGTATTTTAGAGGAT                    6800-6818M1809    TGTTCCCCCCCCCCCAACTACTAGTT             6830-6855M1810    ATATCGTTTTGTACAATCTGTT                 6866-6887M1811    GGATGCTGCACCGGCTGAA                    6905-6923M1812    CTATGATAAGTTAAAG                       6935-6950M1813    GGTCCACAATGATGCACAAGTGT                1135-1157M1814    CACAGAAAACAGTCCATTAGGGGAGC             1192-1217M1815    GCTGGAGGTGGATACAGAGTTAAGTC             1219-1244M1816    AGTGGGCAGAAAAAGGCAAAAAGGCGGCTG         1271-1300M1817    CACAGATTCAGGTAACTACAAATGGC             1347-1372M1818    CAATGTATGTAGTGGCGGCAGTACGG             1384-1409M1819    GACAACGGGGGCACAGAGGGCAACAA             1418-1443M1820    GTAGACGGTACAAGTGACAATAGCAA             1451-1476M1821    CCACAATGTACCATAGCACAATTAAA             1493-1518M1822    CACATATGGGCTATCATTTACAGATT             1573-1598
HPV 26 NC 001583序列编号    序列5’→3’                 该序列于HPV 26的位置M2601    TAGTACATTATCTGCAGCAT                    6619-6638M2602    ATTATCTGCAGCATC                         6625-6639M2603    TGCAGCATCTGCATCCACTC                    6631-6650M2604    GCATCTGCATCCACTCCATTTAAA                6635-6658M2605    CTCCATTTAAACCATCTGAT                    6648-6667M2606    TAAAATAACACTTACAACAGATG                 6727-6749M2607    TGCCTCCATATTGGAGGAT                     6775-6793M2608    ACTAACCTTACCTCCCACTGCTAGTT              6805-6830M2609    CTATAGGTTTATTAAAAACTCT                  6841-6862M2610    TAACGCCCCTCCTGTGCCA                     6880-6898M2611    AAAACAGGCAAATACAAAGGCAG                 1093-1115M2612    CTAGGTAGTCAGAACAGCCCGTTGCA              1139-1164M2613    GCGACAGTCAGCAGAATACACACCAAGTAA          1194-1223M2614    CAAAAGGAGAGCCGTGGACAGTGTAC              1237-1262M2615    CCGTACAGGTAGATAAACAATATGAA              1305-1330M2616    GCCTAGTGTGTGTAGTCAGGGGGGG               1345-1369M2617    GCCTCAGTGGAAGATATCGATGTAGA              1376-1401M2618    CAGTGTTACACAAATATGTGAATTAT              1414-1439M2619    CAGTATATGGTGTAAGTTTTGCAGAA              1485-1510
HPV 31 NC 001527序列编号    序列5’→3’                 该序列于HPV 31的位置M3101    TGCAATTGCAAACAG                      6592-6606M3102    GCAATTGCAAACAGTGATAC                  6593-6612M3103    CAATTGCAAACAGTGATACT                  6594-6613M3104    GCAAACAGTGATACTACATTTAA               6599-6621M3105    CTACATTTAAAAGTAGTAAT                  6612-6631M3106    CAAAATAACATTATCTGCAGACA               6691-6713M3107    TCCTGCTATTTTGGAAGAT                   6739-6757M3108    ATTGACCACACCTCCCTCAGGTTCTT            6769-6794M3109    CTATAGGTTTGTCACCTCACAG                6805-6826M3110    AACTGCCCCCCAAAAGCCC                   6844-6862M3111    AGCGGAGGAACATGCAGAGGCTG               1083-1105M3112    TTTAAGTGATATTAGTAGTTGTGTGG            1140-1165M3113    AGTCCACGGTTAAAAGCTATATGCATAGAA        1177-1206M3114    GACTCTTTGAACTTCCAGACAGCGGG            1232-1257M3115    GCAGCAGATGGTACAGGTAGAGGAGC            1281-1306M3116    AATGGTAGTGACGGGACACATAGTGA            1327-1352M3117    CCAACACGTAATATATTGCAAGTGTT            1369-1394M3118    GCAATGGTAAAGCTGCTATGTTAGGT            1403-1428M3119    TTATATGGTGTAAGTTTTATGGAAC             1441-1465
HPV 32 NC 001586序列编号    序列5’→3’                  该序列于HPV 32的位置M3201    TGCTACTGTAACAACTGAAG                  6906-6925M3202    GCTACTGTAACAACTGAAGA                  6907-6926M3203    TACTGTAACAACTGA                       6909-6923M3204    ACTGTAACAACTGAAGACAC                  6910-6929M3205    CAACTGAAGACACATACAAGTC                6917-6938M3206    CAAAATTACATTATCTGTAGAGG               7005-7027M3207    TCCTGACATACTAGACGAT                   7053-7071M3208    TGTAGCTCCACCGCCCTCTGGTACTT            7083-7108M3209    TTATAGATTTGTGCAGTCTCAG                7119-7140M3210    TAAGGTAACAGCACCTGAA                   7158-7176M3211    TTTTTCTGACTATTCA                      7188-7203M3212    AGCACATGCAGATAAGGAGGCAG               1062-1084M3213    GGCAGTCCATATGAAAGTCCCGCCAGTGAT        1111-1140M3214    GAGCTAAGCCCTAGGCTTGGTGGATT            1162-1187M3215    GGGGCCAAACGACGACTATTTCAATC            1210-1235M3216    GCAGGAACAGGTAGAAAATGGACATG            1284-1309M3217    GTGTACATGGGGTGCAGGAAAATCAG            1352-1377M3218    GCCTACAACAAGGGTGGTGGAATTGC            1395-1420M3219    GCAAGCAACATTGTTAGGTAAGTTTA            1437-1462M3220    GCTGTTTGGATTGTCATTTGGTGATT            1467-1492
HPV 33 NC 001528序列编号    序列5’→3’                  该序列于HPV 33的位置M3301    TATGCACACAAGTAACTAGT                 6624-6643M3302    CACACAAGTAACTAG                      6628-6642M3303    ACAAGTAACTAGTGACAGTA                 6631-6650M3304    GTAACTAGTGACAGTACATATAA              6635-6657M3305    GTACATATAAAAATGAAAAT                 6648-6667M3306    CAAAGTTACCTTAACTGCAGAAG              6727-6749M3307    TCCAGATATTTTAGAAGAT                   6775-6793M3308    TTTAACACCTCCTCCATCTGCTAGTT            6805-6830M3309    CTATAGGTTTGTTACCTCTCAG                6841-6862M3311    AACAGTACCTCCAAAGGAA                   6880-6898M3312    CTTAGGTAAATATACA                      6910-6925M3313    AGGGGAGGATGATTTAAATGCTG               1100-1122M3314    GCATGTTCACAAAGTGCTGCGGAGGA            1149-1174M3315    GATCGTGCTGCAAACCCGTGTAGAAC            1182-1207M3316    GAATGCACATACAGAAAACGAAAAATAGAT        1227-1256M3317    AAATAGATGAGCTAGAAGACAGCGGA            1249-1274M3318    GGTACAACAGGTAGAAAGTCAAAATG            1307-1332M3319    GACTTAGAATCTAGTGGGGTGGGGGA            1350-1357M3320    CTGTGAGACAAATGTAGATAGCTGTG            1391-1416M3321    CGTTGCAGGAAATTAGTAATGTTCTA            1426-1451M3322    GAGGCCTATGGAATAAGTTTTAT               1494-1516
HPV 35 NC 001529序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV 35的位置M3501    TCTGCTGTGTCTTCTAGTGA                  6612-6631M3502    TGCTGTGTCTTCTAG                       6614-6628M3503    GTGTCTTCTAGTGACAGTAC                  6618-6637M3504    CTTCTAGTGACAGTACATATAAA               6622-6644M3505    GTACATATAAAAATGACAAT                  6634-6653M3506    TAAAATAACACTAACAGCAGATG               6713-6735M3507    CCCGTCCATTTTAGAGGAT                   6761-6779M3508    CCTTACACCACCGCCTTCTGGTACCT            6791-6816M3509    ATATCGCTATGTAACATCACAG                6827-6848M3510    ACCCAGTGCACCAAAACCT                   6866-6884M3511    GGAGCAAACACACAAAGAGGCTG               1089-1111M3512    GCAGCGTGAGCTTATGTGTTAATAATAACA        1151-1180M3513    GTCCACGTTTAAAAGCTATTTGCA              1184-1207M3514    CGATTATTTGAACTACCAGACAGCGG            1237-1262M3515    GAGATACAACAGGTAGAGGGGCATGA            1291-1316M3516    GGGCAGTGGGGATAGTATAACCTCTA            1338-1363M3517    GACATGATGAGACTCCAACGCGAGAC            1376-1401M3518    CTAAAATGTAGTAATGCAAACGCAGC            1414-1439M3519    GCTATGTTGGCTAAATTTAAAGAACT            1438-1463
HPV 37 NC 001687序列编号    序列5’→3’                   该序列于HPV 37的位置M3701    TGTCTACTGACAATG                       6782-6796M3702    TGTCTACTGACAATGGCGAA                  6782-6801M3703    TGACAATGGCGAAGTTACAG                  6789-6808M3704    GACAATGGCGAAGTTACAGA                  6790-6809M3705    AATGGCGAAGTTACAGAATA                  6793-6812M3706    CAGAATATAATTCTCAAACA                  6806-6825M3707    TAAAGTTCCTTTAAAGGCTGAGG               6885-6907M3708    TTCTGGTATATTGGAAGAG                   6933-6951M3709    ATTTGTACCTACTCCAGATAATTCAG            6963-6988M3710    TTATAGGTACATTAATTCAAAG                6999-7020M3711    TGCAGTTGTTGAAAAAGAA                 7038-7056M3712    CTTTGCAAAATATACA                    7068-7083
HPV 39 NC 001 535序列编号    序列5’→3’                   该序列于HPV 39的位置M3901    CTCTATAGAGTCTTC                        6677-6691M3902    TAGAGTCTTCCATACCTTCT                   6682-6701M3903    ATAGAGTCTTCCATACCTTC                   6681-6700M3904    GTCTTCCATACCTTCTACATATG                6686-6708M3905    CTACATATGATCCTTCTAAG                   6700-6719M3906    TACTGTCACATTAACAACTGATG                6779-6801M3907    TTCCTCTATATTGGACAA                     6827-6844M3908    TGTAGCTCCTCCACCATCTGCCAGTT             6857-6882M3909    TTACAGATACCTACAGTCTGCA                 6893-6914M3910    GGATGCTCCAGCACCTGAA                    6932-6950M3911    ATATGACGGTCTAAAG                       6962-6977M3912    GGCCCAAAGGGATGCACAAGCAG                1149-1171M3913    CAGACAGCAGTGGCGACACTAGACCGTATG         1196-1225M3914    GTAGGCAGGAATACCAGGGGAACAC              1234-1258M3915    GCAGTACGCAGGCAACACAAACGGTG             1283-1308M3916    GGAGGAGGTAACTGTAGCAACTAATA             1362-1387M3917    CATGGCGGCAGTGTACGGGAGGAGTG             1411-1436M3918    GGATAGTGCTATAGATAGTGAAAACC             1446-1471M3919    CTCCAACTGCACAAATTAAATTATTG             1484-1509M3920    CCAATAACAAAAAGGCTGCAATGCTA             1517-1542
HPV 44 NC 001689序列编号    序列5’→3’                   该序列于HPV 40的位置M4401    TGCCACTACACAGTC                       6719-6733M4402    CTACACAGTCCCCTCCGTCT                  6724-6743M4403    TGCCACTACACAGTCCCCTC                  6719-6738M4404    CAGTCCCCTCCGTCTACATATA                6729-6750M4405    CTACATATACTAGTGAACAA                  6742-6761M4406    TAGTATTACCTTAACGGCGGAGG               6821-6843M4407    TGCTGGTATTTTAGAACAG                   6869-6887M4408    GTTGTCGCCGCCCCCAAATGGTACCT            6899-6924M4409    ATACAGATATGTGCAGTCCCAG                6935-6956M4410    GCCACCCCCTGAAAAGGCA                   6974-6992M4411    CTATGCAAAATTAAGT                      7004-7019M4412    GGCGGATGCTCATTATGCGGCTG               1038-1060M4413    GGTAGTCCATATGTTAGTCCTTTAAGTAAT        1087-1116M4414    CACGGCTGGACGCTATAACATTAAGT            1148-1173M4415    GACGGCTGTTTGACAGACCAGAATTA            1196-1221M4416    GCTGAAACGCAGGTAGAGAGAAATGG            1255-1280M4417    GGGAGGTGGACAAGGAAGGGACACAG            1299-1324M4418    GGAAGTGCAGACACATAGCAACACAC            1347-1372M4419    GGTACTAGAACTATTGAAATGTAAGA            1395-1420M4420    GCTTGGTAAGTTTAAGGATTGCTATG            1437-1462
HPV 45 NC 001590序列编号    序列5’→3’                   该序列于HPV 45的位置M4501    TGCCTCTACACAAAATCCTG                  6651-6670M4502    CTCTACACAAAATCC                       6654-6668M4503    ACAAAATCCTGTGCCAAGTA                  6660-6679M4504    CAAAATCCTGTGCCAAGTAC                  6661-6680M4505    AATCCTGTGCCAAGTACATATG                6664-6685M4506    GTACATATGACCCTACTAAG                  6677-6696M4507    CACTATTACTTTAACTGCAGAGG               6756-6778M4508    TAGTAGTATATTAGAAAAT                   6804-6822M4509    TGTCCCTCCACCACCTACTACAAGTT            6834-6859M4510    ATATCGTTTTGTGCAATCAGTT                6870-6891M4511    GGATACTACACCTCCAGAA                   6909-6927M4512    AGTTCAGAATGATGCACAGGTGT               1135-1157M4513    GCAGCTAAGTGTGGATACGGATCTAAGTCC        1216-1245M4514    CAAGAAATTTCATTAAATAGTGGGCA            1253-1278M4515    ACGGTTGTTTACAATATCAGATAGTG            1294-1319M4516    CATAGTACACAAAGTAGTGGTGGGGA            1397-1422M4517    GACAATGCAGAAAATGTAGATCCGCA            1430-1455M4518    GGAGCTATTACAAGCAAGTAACAAAA            1477-1502M4519    GCAATGCTGGCAGTATTTAAAGACA             1508-1532M4520    ATATGGGCTGTCATTTACGGATTTGG            1534-1559
HPV 51 NC 001533序列编号    序列5’→3’                  该序列于HPV 51的位置M5101    CACTGCCACTGCTGCGGTTT                  6555-6574M5102    TGCCACTGCTGCGGT                       6558-6572M5103    CACTGCTGCGGTTTCCCCAA                  6561-6580M5104    CCACTGCTGCGGTTTCCCCA                  6560-6579M5105    CTGCGGTTTCCCCAACATTTAC                6566-6587M5106    CAACATTTACTCCAAGTAAC                  6578-6597M5107    TAAAATTACTTTAACTACAGAGG               6657-6679M5108    TCCTACCATTCTTGAACAG                   6705-6723M5109    ATTAACATTACCTCCGTCTGCTAGTT            6735-6760M5110    ATATAGGTTTGTTAGAAATGCA                6771-6792M5111    GGACACCCCTCCACAGGCT                   6810-6828M5112    TTTGGCCAAATATAAA                      6840-6855M5113    ATTACAGGCAAACAAAGAGGCTG               1092-1114M5114    GCGAAGCAGCCCATTAGGAGACATTACAAA        1149-1178M5115    CCATAGTCAGGCAAACGAGTCACAAG            1197-1222M5116    AGATTACTGGACAGTTATCCGGACA             1231-1255M5117    CAGGTAGATGGGCAACATGGCGGTTC            1300-1325M5118    AGCTGTGCAAATGTAGAACTAAACAG            1384-1409M5119    GGTATTAGTTATAATGAGTTGGTACG            1477-1502
HPV 52 NC 001592序列编号  序列5’→3’                  该序列于HPV 52的位置M5201    TGAGGTTAAAAAGGA                       6695-6709M5202    TGAGGTTAAAAAGGAAAGCA                  6695-6714M5203    GAGGTTAAAAAGGAAAGCAC                  6696-6715M5204    TTAAAAAGGAAAGCACATAT                  6700-6719M5205    AAAGGAAAGCACATATAAAAAT                6704-6725M5206    GCACATATAAAAATGAAAAT                  6712-6731M5207    CAAAATTACATTAACAGCTGATG               6791-6813M5208    TGCCACTATTTTAGAGGAC                   6839-6857M5209    CCTTACCCCACCACCGTCTGCATCTT            6869-6894M5210    ATACAGATTTGTCACTTCTACT                6905-6926M5211    AAACACACCACCTAAAGGA                   6944-6962M5212    TTTAAAGGACTATATG                      6974-6989M5213    AGGGGAGGATGATTTACATGCTG               1085-1107M5214    GCAGTCCGGAAAGTGCTGGGCAAGATGGTG        1135-1164M5215    GGTAGTCCGCGTGCAAAACACATTTG            1176-1201M5216    CCAAAACGCAAACCATGTCACGTAGA            1224-1249M5217    CAAAATGGCGACTGGCAAAGTA                1311-1332M5218    GCTAGTAATTCAGATGTAAGTTGTAC            1359-1384M5219    GAGGAAAATAGTAATAGAACGCTAAA            1401-1426M5220    GCGAAAATAGCATAAAAACAACTGTA            1447-1472M5221    AGAAACATATGGTGTTAGCTTTATGG            1487-1512
HPV 53 NC 001593序列编号    序列5’→3’                   该序列于HPV 53的位置M5301    TCCGCAACCACACAGTCTAT                  6681-6700M5302    CCGCAACCACACAGT                       6682-6696M5303    CCGCAACCACACAGTCTATG                 6682-6701M5304    CACAGTCTATGTCTACATATAA               6691-6712M5305    CTACATATAATTCAAAGCAA                 6703-6722M5306    TAAAATATCCCTGTCTGCTGAGG              6782-6804M5307    TTCTACCTTACTGGAAGAC                  6830-6848M5308    TTTGTCGCCTCCTGTTGCCACTAGCT           6860-6885M5309    ATACAGATATGTGAAAAGTGCA               6896-6917M5310    GGATCAGCCCCCTCCTGAA                  6935-6953
HPV 54 NC 001676序列编号    序列5’→3’               该序列于HPV 54的位置M5401    TACAGCATCCACGCA                       6633-6647M5402    CAGCATCCACGCAGGATAGC                  6635-6654M5403    ACGCAGGATAGCTTTAATAA                  6643-6662M5404    CACGCAGGATAGCTTTAATA                  6642-6661M5405    ATAGCTTTAATAATTCTGAC                  6650-6669M5406    TACCATAACCCTTACAGCAGATG               6729-6751M5407    TCCCACTATTCTAGAGGAC                   6777-6795M5408    TATAACCCCCCCAGCTACAAGTAGTT            6807-6832M5409    ATATAGGTTTGTACAGTCACAG                6843-6864M5410    GAATAATGCCCCTGCAAAGGAA                6882-6903M5411    GCTGCAGGCAGATGTAGAGGCAG               1043-1065M5412    CGTATGTAAGTCCTGTTGCAAACAGCGAAC        1099-1128M5413    CTGTGTAGAAAAGGACCTAA                  1130-1149M5414    TATATCCCTAGGACGGCGGTCAGCCA            1166-1191M5415    GGTAAATACCGAGGGGACAGATGAAA            1265-1290M5416    GAAACAACTACAGATAGCCTAGGAAG            1323-1348M5417    CGTGTAGCATTGTTTGGTATGTTTAA            1386-1411M5418    TATGGATTAAGTTTTATGGACC                1419-1440
HPV 56 NC 001594序列编号    序列5’→3’                 该序列于HPV 56的位置M5601    CTGCTACAGAACAGT                     6630-6644M5602    GCTACAGAACAGTTAAGTAA                6632-6651M5603    CAGAACAGTTAAGTAAATAT                6636-6655M5604    GAACAGTTAAGTAAATATGATGC             6638-6660M5605    GTAAATATGATGCACGAAAA                6648-6667M5606    CAAAATTACTTTGTCTGCAGAGG             6727-6749M5607    TGCTAACCTACTGGAGGAC                 6775-6793M5608    GTTATCCCCGCCAGTGGCCACCAGCC          6805-5830M5609    ATATAGATATGTTAGAAGCACA              6841-6862M5610    GGAACAGCCACCAACAGAA                 6880-6898
HPV 58 NC 001443序列编号    序列5’→3’             该序列于HPV 58的位置M5801    ATGCACTGAAGTAACTAAGG                  6674-6693M5802    CACTGAAGTAACTAAGGAAG                  6677-6696M5803    TGAAGTAACTAAGGA                       6680-6694M5804    GAAGTAACTAAGGAAGGTAC                  6681-6700M5805    CTAAGGAAGGTACATATAAAAA                6688-6709M5806    ATAAAAATGATAATTTTAAG                  6703-6722M5807    CAAAATTACACTAACTGCAGAGA               6776-6798M5808    TTCCAATATTTTGGAGGAC                   6824-6842M5809    TTTAACACCTCCTCCGTCTGCCAGTT            6854-6879M5810    ATATAGATTTGTTACCTCCCAG                6890-6911M5811    AACAGCACCCCCTAAAGAA                   6929--6947M5812    AGGGGTGGACGATATAAATGCTG               1104-1126M5813    GCATGCTCAGAAAGTGCTGTAGA               1153-1175M5814    GCAAATGTGTGTGTATCGTGGAAATATAAA        1195-1224M5815    AAATTATTGAGCTAGAAGACAG                1253-1274M5816    GCACACCAGGTAGAAAGCCAA                 1312-1332M5817    GGCTAGTTCAGATGTAAGCAGTGAAA            1377-1402M5818    GTAATATTCTACATAACAGTAA                1445-1466M5819    GCAACGCTATTATATAAATTC                 1474-1494M5820    GCTTATGGAGTAAGTTTTATGGAA              1501-1524
HPV 59 NC 001 635序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV 59的位置M5901    TTCTACTACTTCTTC                         6643-6657M5902    ACTACTTCTTCTATTCCTAA                    6647-6666M5903    ACTTCTTCTATTCCTAATGT                    6650-6669M5904    TCTTCTATTCCTAATGTATACAC                 6653-6675M5905    ATGTATACACACCTACCAGT                    6666-6685M5906    TAAAATAACATTAACTACAGAGG                 6745-6767M5907    TACCACTATTTTGGAGGAT                     6793-6811M5908    TGTTACACCACCTCCTACTGCTAGTT              6823-6848M5909    ATACCGTTTTGTTCAATCTGCT                  6859-6880M5910    GGACACCGCACCGCCAGTT                     6898-6916M5911    TTATGACAAACTAAAG                        6928-6943M5912    AGCCCAAAGGGATGCACGGGAAA                 1093-1115M5913    GCAGTATAGAAAACAGTAGTGAGAAAGCGG          1143-1172M5914    CCATTACAAGAAATATCAGTAAATG               1196-1220M5915    GGTTAATAACAGTGCCAGACAGCG                1245-1268M5916    GGTAACCGTGGAGAATACTGGAAATG              1306-1331M5917    CTGTAGCGACAGCAGTAACATGGATG              1372-1397M5918    CCCACTAATCAATTGTTACAGTTA                1421-1444M5919    GGGTTATCATTTCAAGATTTGG                  1499-1520
HPV 61 NC 001694序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV 61的位置M6101    CTGCTACATCCCCCC                       6803-6817M6102    ACATCCCCCCCTGTATCTGA                  6808-6827M6103    CATCCCCCCCTGTATCTGAA                  6809-6828M6104    CCCCTGTATCTGAATATAAAGC                6815-6836M6105    CTGAATATAAAGCCACAAGC                  6824-6843M6106    TAAAATACATTTAACCCCTGAAA               6903-6925M6107    TAAGGCCTTGTTGGATGAC                   6951-6969M6108    TGTGGTACCACCACCCTCTACCAGTT            6981-7006M6109    ATATAGGTTTTTGCAGTCCAGA                7017-7038M6110    GGGTGCTGCTGCCCCGCCGCCC                7056-7077M6111    CTATGCCAAGTTATCC                       7089-7104M6112    TGCACAGGATGACGCTGCAACGG                1038-1060M6113    CCTTGGTGGACAGTGAATTAAGTCCC             1115-1140M6114    GGACAGGACAGGGCTAGGAGAAGGCTGTTT         1168-1197M6115    TGTTTGAGCAAGATAGTGGC                   1193-1212M6116    GGATGCGCAACATGAGGGGGGGGGGG             1263-1288M6117    GGCCGAGGCCACAGGTAACCAGGAAA             1335-1360M6118    GGCAGACATATTAGAGGTGTTTAAGG             1380-1405M6119    CTGTACAAATTCAAGGACCTATTTGG             1429-1454M6120    CTAGCATTTGGGGAGCTGGTA                  1456-1476
HPV 62 U12499序列编号    序列5’→3’                  该序列于HPV 62的位置M6201    CCGCCTCCACTGCTG                       92-106M6202    GCCTCCACTGCTGCAGCAGA                  94-113M6203    CTGCTGCAGCAGAATACACG                  101-120M6204    GCAGAATACACGGCTACCAA                  109-128M6205    CAGAATACACGGCTACCAAC                  110-129M6206    CAAAATACAGTTAACCCCCGAAA               189-211M6207    CAAGGACCTTTTGGATGAC                   237-255M6208    GGTTTTACCTCCCCCTTCCACTAGTT            267-292M6209    ATATCACTATTTCGAGTCTCGG                303-324M6210    GGGGCTGCCTACCCGTCCC                   342-360M6211    GTATGCGCAAATGACA                      372-387
HPV 66 NC 001695序列编号    序列5’→3’                 该序列于HPV 66的位置M6601    CAGCTAAAAGCACAT                       6680-6694M6602    CAGCTAAAAGCACATTAACT                  6680-6699M6603    CTAAAAGCACATTAACTAAA                  6683-6702M6604    TTAACTAAATATGATGCCCG                  6694-6713M6605    CTAAATATGATGCCCGTGAA                  6698-6717M6606    TAAAATAACCTTAACTGCAGAAG               6777-6799M6607    TAATACTTTATTAGACGAT                   6825-6843M6608    CTTATCCCCACCAGTTGCAACTAGCT            6855-6880M6609    ATATAGGTATATTAAAAGCACA                6891-6912M6610    GGAACAGCCCCCTGCAGAA                   6930-6948M6611    CCTGGCTAAATATAAG                      6960-6975M6612    AGCACATGCAGATGCACAGACG                1116-1137M6613    GGTAGTCCCTTAAGTGATATTAGTAA            1165-1190M6614    GCAAACTGTGTACCGAGAGGAAGTAA            1194-1219M6615    AAGGCTAATATTATCAGAAGACAGCGGGTA        1224-1253M6616    GAAACATCACAACAGGTAGAATACG             1276-1300M6617    GAGCTCACAAAATGGAGGCTCGCAAA            1320-1345M6618    ATCAAATATGGATATAGATACAAATA            1371-1396M6619    CCAATTGCAGGAACTATTTAAAAGTA            1413-1438M6620    CAAGGAAGATTACATTTTAAATTTAA            1447-1472M6621    AGAAGTGTATGGAGTGCCAT                  1473-1492
 HPV 67 D21208序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV 67的位置M6701    CTGAGGAAAAATCAG                       6655-6669M6702    GAGGAAAAATCAGAGGCTAC                  6657-6676M6703    ATCAGAGGCTACATACAAAAATG               6665-6687M6704    AGGAAAAATCAGAGGCTACA                  6658-6677M6705    CTACATACAAAAATGAAAAC                  6673-6692M6706    CAAAATATCCCTTACTGCAAATG               6752-6774M6707    TCCAGATATATTAGAGGAC                   6800-6818M6708    CCTTACACCACCTCCTTCAGGTAATT            6830-6855M6709    ATATAGATTTGTTACCTCGCAG                6866-6887M6710    AACATCCCCTCCAACAGCA                   6905-6923M6711    TCTTAAAAAGTACAGT                      6935-6950M6712    AGAGGAGGATGACCTAAACGCTG               1096-1118M6713    CAGGCATGTGGTGGTAATAGTAATGG            1151-1176M6714    GCCGCAAAACGCAGAGCATACGACATAGAA        1199-1228M6715    GGCAAAATGGCGATATGCAGTGCAGT            1287-1312M6715    GCAAGTAGTACGGGAAACAGTGTAGA            1331-1356M6716    GTCAGGAACAAAGCATGCCATTGCAA            1380-1405M6717    GCATGTAAATAATATAAAGGCAACG             1423-1447M6718    GGAAGCATATGGGGTAACGTTTACAC            1465-1490
HPV 68 M73258序列编号    序列5’→3’                  该序列于HPV 68的位置M6801    CTACTACTGAATCAG                       2653-2667M6802    TGAATCAGCTGTACCAAATA                  2660-2679M6803    GAATCAGCTGTACCAAATAT                  2661-2680M6804    CAGCTGTACCAAATATTTATGA                2665-2686M6805    ATATTTATGATCCTAATAAA                  2677-2696M6806    TCCTGCTATTTTGGATGAT                   2804-2822M6807    TACTATAACATTGTCCACTGATG               2756-2778M6808    TGTTGCCCCTCCACCATCTGCTAGTC            2834-2859M6809    ATACCGCTATCTGCAATCAGCA                2870-2891M6810    AGACGCCCCTGCACCTACT                   2909-2927M6811    ATATGATGGCTTAAAC                      2939-2954M6812    GGCCCAAAGGGATGCACAAACAG               4990-5012M6813    GCCCTTTAGCAAAGTCGCCATTACAG            5055-5080M6814    GGTAACTGTAGCAACTAATA                  5115-5134M6815    GGAAAATGGCGACAGCATACGGGAGGACTG        5163-5192M6816    GACAGTGCTATAGATAGTGAAAACCA            5203-5228M6817    CCTACTACGCAACTAAAAGTATTA              5242-5265M6818    AAGCTGCAATGTTAACAGAATTTAAA            5285-5310
HPV 69 NC 002171序列编号    序列5’→3’               该序列于HPV 69的位置M6901    TATTAGTACTGTATCTGCAC                   6572-6591M6902    CTGTATCTGCACAAT                        6580-6594M6903    CTGTATCTGCACAATCTGCA                   6580-6599M6904    TGCACAATCTGCATCTGCCA                   6587-6606M6905    CAATCTGCATCTGCCACTTTTA                 6591-6612M6906    CCACTTTTAAACCATCAGAT                  6604-6623M6907    TAAAATTACTCTTACCACTGATG               6683-6705M6908    TTCTACTATTTTGGAAAAT                   6731-6749M6909    CCTTACCTTGCCTCCTACTGCTAGTT            6761-6786M6910    ATATAGGTTTATTAAAAATTCA                6797-6818M6911    CGATGCCCCTGCACAGCCC                   6836-6854M6912    AACACAAGCAAATAAGAAGGCAG               1101-1123M6913    GAACAGCCCGTTGCAAGACATAACAA            1158-1183M6914    CAGACGAAGTAAACAATTTACAGGC             1208-1232M6915    GGAGAGCAGTGGACAGTGTTCCGGACAGCG        1238-1267M6916    GGTAGATAAACACAATGAACAAAATG            1308-1333M6917    TCAAGTGGATCTGTATCAGACA                1360-1381M6918    GCACAGGCAAGTAGTGTAACCAAAA             1399-1423M6919    GTAATGTAAAAGCAGCATTATTAA              1445-1468M6920    CAGTATATGGTGTAAGTTATA                 1481-1501
HPV 6 NC 000904序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV 6的位置M0601    CATCCGTAACTACATCTTCC                  6814-6833M0602    ATCCGTAACTACATCTTCCA                  6815-6834M0603    CTACATCTTCCACATACACCAA                6823-6844M0604    CATCTTCCACATACACCAAT                  6826-6845M0605    ATCTTCCACATACACCAATT                  6827-6846M0606    CCACATACACCAATTCTGAT                  6832-6851M0607    TAGCATTACATTGTCTGCTGAAG               6911-6933M0608    TCCCTCTGTTTTGGAAGAC                  6959-6977M0609    GTTATCGCCTCCCCCAAATGGTACAT           6989-7014M0610    CTATAGGTATGTGCAGTCACAG               7025-7046M0611    GCCCACTCCTGAAAAGGAA                  7064-7082M0612    CTATAAGAACCTTAGT                     7094-7109M0613    GGCGGACACCCATTATGCGACTG              1045-1067M0614    GTTAGTCCTATAAACACTATAGCCGA           1106-1131M0615    CCACGATTGGACGCCATTAAACTTACAAGA       1154-1183M0616    GGCTGTTTCAAACCAGGGAACTAACG           1206-1231M0617    GGTAGAGAAACATGGCGTACCGGAAA           1279-1304M0618    GGACACAGGAAGGGACATAGAGGGGG           1327-1352M0619    CACAAACAGTGTACGGGAGCATGCAG           1378-1403M0620    GCTAAAATGTAAAGATTTACGGGCAG           1426-1451M0621    GCTTTGGGCTGTCTTTTATAGATTTA           1476-1501
HPV 70 NC 001711序列编号    序列5’→3’             该序列于HPV 70的位置M7001    TGTCTGCCTGCACCGAAACG                  6614-6633M7002    CTGCACCGAAACGGC                       6621-6635M7003    GAAACGGCCATACCTGCTGT                  6628-6647M7004    CGAAACGGCCATACCTGCTG                  6627-6646M7005    CGGCCATACCTGCTGTATATAG                6632-6653M7006    CTGTATATAGCCCTACAAAG                  6644-6663M7007    TACTATCACATTAACTGCTGACG               6723-6745M7008    TCCTGCAATTTTGGACAAT                   6771-6789M7009    AGTTACCCCTCCACCATCTGCAAGCT            6801-6826M7010    GTATAGGTATTTACAATCAGCA                6837-6858M7011    GGATGCTCCTACACCTGAA                   6876-6894M7012    CTATGACGATTTAAAA                      6906-6921M7013    GGCCCAAAGGGATGCACAATCAG               1149-1171M7014    GCAATCTAAATAAAAGTCCTTGT               1202-1224M7015    GTACATAGGGAACAAAGGGTAACAC             1240-1264M7016    GGTAAACATATGCAATAAACAGG               1278-1300M7017    ACAAACGTGTATTCAGTACCAGACAGCGGC        1306-1335M7018    GTAGTAAATAATACAAATGGGGAAGA            1378-1403M7019    GGAGTGCAGTAGTGTAGACAGTGCTA            1446-1471M7020    TCCACAGTCACCTACTGCACAGCTAA            1491-1516M7021    GCTAATAACCAAAAAGCCATACTAC             1531-1555M7022    CACACATATGGATTAGCATTTAACGA            1570-1595
HPV 72 X94164序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV 72的位置M7201    ATCTGTTGGTTTAATGAGCT             6759-6778M7202    TTTGTGACAGTTGTAGATAC             6780-6799M7203    CTGCCACAGCGTCCT                  6829-6843M7204    ACAGCGTCCTCTGTATCAGA             6834-6853M7205    CCACAGCGTCCTCTGTATCA             6832-6851M7206    AGCGTCCTCTGTATCAGAATAT           6836-6857M7207    CAGAATATACAGCTTCTAAT             6850-6869M7208    TAAAATTCACTTAACTCCTGAAA          6929-6951M7209    TAAGGCCTTATTGGATGAC              6977-6995M7210    TGTGGTGCCTCCTCCTTCTACCAGTT       7007-7032M7211    CTATAGGTTTTTGCA6TCTCGT           7043-7064M7212    GGGGGCTGCCACCCCTCCTCCT           7082-7103M7213    ATATGCTAACTTATCC                 7115-7130
HPV 74 U40822序列编号    序列5’→3’               该序列于HPV 74的位置M7401    CCTACCTCACAATCG                     1686-1700M7402    CTCACAATCGCCTTCTGCTA                1691-1710M7403    ACCTCACAATCGCCTTCTGC                1689-1708M7404    CAATCGCCTTCTGCTACATATA              1695-1716M7405    ACAATCGCCTTCTGCTACATAT              1694-1715M7406    CTACATATAATAGTTCAGAC                1708-1727M7407    TAGTATTAAGTTAACTGCTGAGG             1787-1809M7408    TCCTACAGTTTTAGAAGAG                 1835-1853M7409    GCTAACGCCTCCCCCCAATGGTACTT          1865-1890M7410    CTACAGATATGTGCAGTCCCAG              1901-1922M7411    ACCTACGCCTGATAAAGCA                 1940-1958M7412    CTATGCAAATTTAAGT                    1970-1985
HPV 82 AB027021序列编号    序列5’→3’               该序列于HPV 82的位置M8201    TGCTGTTACTCCATC                        6608-6622M8202    TGCTGTTACTCCATCTGTTG                   6608-6627M8203    ACTCCATCTGTTGCACAAAC                  6615-6634M8204    AAACATTTACTCCAGCAAAC                  6631-6650M8205    TAAAATCACTTTAACTACTGAAA               6710-6732M8206    TTCTACAATTTTAGAACAG                   6758-6776M8207    ATTAACATTGCCCCCCTCCGCTAGTT            6788-6813M8208    CTATCGATTTGTAAAAAATGCA                6824-6845M8209    GGACAGTCCTCCACAGGCT                   6863-6881M8210    AACACAGGCACACAAAGAGGCTG               1094-1116M8211    GCAGCCCATTAAAAGACATTACAAA             1156-1180M8212    GTCAGCAACAACCAAAACAGGCAAACCTTC        1201-1230M8213    GGAGATTACTGGACAGTTATCCGGACA           1243-1269M8214    CCTTACAGGTAGATGGGCAAAATGAC            1309-1334M8215    GAGCAGCGACAGAAGTACAGAGATAG            1367-1392M8216    GCTACCAATGTAGGACTAAACAGTA             1413-1437M8217    GTAGCAATGCAAAAGCAATGTTTATG            1456-1481M8218    GGTGTTAGTTATAATGAGTTGGTAAG            1503-1528
HPV CP8061 U12479序列编号    序列5’→3’             该序列于HPV CP8061的位置M806101    TCTGTGCTACCAAAACTGTT                 86-105M806102    CTACCAAAACTGTTG                      92-106M806103    ACCAAAACTGTTGAGTCTAC                 94-113M806104    AACTGTTGAGTCTACATATAAA               99-120M806105    GTTGAGTCTACATATAAAGC                 103-122M806106    CTACATATAAAGCCTCTAGT                 110-129M806107    TGTTATTAATTTAACAGCTGAAA             189-211M806108    TGCTACATTACTGGAGGAC                 237-255M806109    GTTCTTACCACCTCCTACTG                267-286M806110    CTACCGCTTTTTACAGTCTCAG              303-324M806111    AAACAGTCCTCCTCCTGCAGAA              342-363M806112    CTATGCAGATCTTACA                    375-390
HPV CP8034 U12480序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV CP8034的位置M830401    CAGCTACATCTGCTG                        92-106M830402    GCTACATCTGCTGCTGCAGA                   94-113M830403    ACATCTGCTGCTGCAGAATACA                 97-118M830404    TGCTGCAGAATACAAGGCCT                   105-124M830405    GCTGCAGAATACAAGGCCTC                   106-125M830406    CAGAATACAAGGCCTCTAAC                   110-129M830407    TAAAATACAGTTAACACCAGAAA                189-211M830408    CAAGGCACTGTTGGATGAT                    237-255M830409    TGTGTTGCCACCTCCTTCCACCAGTT             267-292M830410    ATATCGCTTTTTACAGTCTCGG                 303-324M830411    GGGTGCTGCTGCCCCTGCGCCC                 342-363M830412    TTATGCCGACATGTCA                       375-390
HPV L1AE5 AF039910序列编号    序列5’→3’            该序列于HPV L1AE5的位置MAE501    ATCTACTGCAACTACTAATC                   69-88MAE502    CTGCAACTACTAATC                         74-88MAE503    CTGCAACTACTAATCCAGTT                    74-93MAE504    ACTACTAATCCAGTTCCATCTA                  79-100MAE505    CTAATCCAGTTCCATCTATA                    83-102MAE506    CTATATATGAACCTTCTAAA                    98-117MAE507    TAAAATTACACTTACTACTGATG                 177-199MAE508    TCCTACTATTTTAGATAGT                     225-243MAE509    TGTTAGTCCTCCCCCATCTGCTAGCT              255-280MAE510    ATATAGGTTTTTACAGTCATCT                  291-312MAE511    GGATGTGGTTGTTCCACAA                     330-348
HPV MM4 U12488序列编号    序列5’→3’                 该序列于HPV MM4的位置MM401    CTGCTGTTACTCAATCTGTT                  92-111MM402    TGCTGTTACTCAATC                       93-107MM403    GTTACTCAATCTGTTGCACA                  97-116MM404    TGCACAAACATTTACTCCAG                  111-130MM405    TTACTCAATCTGTTGCACAAAC                98-119MM406    AAACATTTACTCCAGCAAAC                  116-135MM407    TAAAATCACTTTAACTACTGAAA               195-217MM408    TTCTACAATTTTAGAACAG                   243-261MM409    ATTAACCTTGCCCCCCTCAGCTAGTT            273-298MM410    CTATCGATTTGTAAAAAATGCA                309-330MM411    GGACAGTCCTCCACAGGCT                   348-366
HPV MM7 U12489序列编号    序列5’→3’                该序列于HPV MM7的位置MM701    TGCTGCTACACAGGC                       93-107MM702    GCTGCTACACAGGCTAATGA                  94-113MM703    TGCTACACAGGCTAATGAAT                  96-115MM704    CTACACAGGCTAATGAATACAC                98-119MM705    ATGAATACACAGCCTCTAAC                  110-129MM706    CAAAATACATCTTACCCCTGAAA               189-211MM707    TGAACATTTATTGGATGAG                   237-255MM708    CGTGTTACCACCTCCTTCCACCAGCC            267-292MM709    CTATCGCTATCTGCAGTCCCGT                303-324MM710    GGGTCCTTCCGCCCCTGCCCCT                342-363MM711    TTATGATGGCCTTGTA                      375-390
HPV MM8 U12490序列编号    序列5’→3’                 该序列于HPV MM8的位置MM801    TGCTACCAACACCGA                     93-107MM802    CTACCAACACCGAATCAGAA                95-114MM803    CCAACACCGAATCAGAATATAA              98-119MM804    CAGAATATAAACCTACCAAT                110-129MM805    TAAGGTCCGTCTGACTCCAGAGG             189-211MM806    TGACTCCTTATTAGATGAG                 237-255MM807    TGTTGTGCCCCCTCCCTCCACAAGTT          267-292MM808    CTATAGGTACTTGCAGTCTCGC              303-324MM809    GGGGGCCGCCGCCGCCAAGCCT              342-363MM810    TTATGCTGGCATGTCC                    375-390
5.如权利要求1的用以同步鉴别一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的试剂盒,其中所述试剂盒为一寡核苷酸试片。
6.一种用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,该方法包含下列步骤:
提供第一检验试剂及第二检验试剂,该第一检验试剂包含第一种寡核苷酸,该第二检验试剂包含第二种寡核苷酸,其中该第一种及第二种寡核苷酸为可分别与第一种及第二种人类乳突瘤病毒亚型的脱氧核糖核酸DNA杂交的序列;
杂交该检体中的脱氧核糖核酸DNA与该等寡核苷酸;以及
去除无法与该等寡核苷酸杂交的脱氧核糖核酸,以同步鉴别该检体中所含有的该等人类乳突瘤病毒亚型。
7.如权利要求6的用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,其中所述检体中的脱氧核糖核酸为聚合酶连锁反应的产物。
8.如权利要求6的用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,其中所述检体中的脱氧核糖核酸含有信号物质。
9.如权利要求8的用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,其中所述信号物质为生物素。
10.如权利要求9的用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,其中进一步包含进行该生物素与卵白素-碱性磷酸酶的反应。
11.如权利要求8的用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,其中所述信号物质为萤光物质。
12.如权利要求11的用以检测且鉴别一检体中人类乳突瘤病毒存在的方法,其中所述萤光物质为Cyanine 5。
13.一种用以检测一检体中特定人类乳突瘤病毒亚型的方法,该方法包含:
提供一寡核苷酸,该寡核苷酸的序列可专一地与该特定人类乳突瘤病毒亚型特有的一段脱氧核糖核酸DNA序列杂交;
杂交该检体中的脱氧核糖核酸DNA与该寡核苷酸;
去除无法与该检验试剂中的该寡核苷酸杂交的脱氧核糖核酸;以及
检测剩余的脱氧核糖核酸,以显示该检体中是否含有该特定人类乳突瘤病毒亚型,
其中该特定人类乳突瘤病毒亚型的基因编号与其特有的一段脱氧核糖核酸DNA序列于该基因的位置,选自于下列36组中的一组:
HPV      基因编号/基因长度           特有序列的位置/序列
         (Accession number/bp)       长度(10ci/bp)
11型      NC 001525/7931             6727-7135/409
                                     1044-1509/466
16型      NC 001526/7904             6602-7013/412
                                     1089-1538/450
18型      NC 001357/7857             6578-6992/415
                                     1135-1609/475
26型      NC 001583/7855             6553-6967/415
                                     1093-1522/430
31型      NC 001527/7912             6520-6931/412
                                     1083-1476/394
32型      NC 001586/7961             6837-7245/409
                                     1032-1536/505
33型      NC 001528/7909             6559-6967/409
                                     1100-1532/433
35型      NC 001529/7851         6542-6953/412
1089                             1089-1497/409
37型      NC 001687/7421         G711-7125/415
39型      NC 001535/7833         6605-7019/415
                                 1149-1593/445
44型      NC 001689/7833         6647-7061/415
                                 1038-1491/454
45型      NC 001590/7858         6582-6996/415
                                 1136-1567/432
51型      NC 001533/7808         6486-6897/412
                                 1092-1506/415
52型      NC 001592/7942         6623-7031/409
                                 1085-1526/442
53型      NC 001593/7856         6614-7022/409
54型      NC 001676/7759         6561-6972/412
                                 1013-1484/472
56型      NC 001594/7844         6559-6967/409
58型      NC 001443/7824         6608-7016/409
                                 1104-1536/433
59型      NC 001635/7896         6571-6985/415
                                 1093-1528/436
61型      NC 001694/7989         6732-7146/415
                                 1005-1515/511
62型      U12499/449             21-429/409
66型      NC 001695/7824         6609-7017/409
                             1023-1545/523
67型      D21208/7801        6584-6992/409
                             1096-1504/409
68型      M73258/6042        2582-2996/415
                             4990-5350/361
69型      NC 002171/7700     6509-6923/415
                             1101-1518/418
6型       NC 000904/8012     6743-7151/409
                             1045-1510/466
70型      NC 001711/7905     6549-6963/415
                             1149-1608/460
72型      X94164/7988        6758-7172/415
74型      U40822/3891        1613-2027/415
82型      AB027021/7871      6536-6950/415
                             1094-1532/439
CP8061型  U12479/452         21-432/412
CP8304型  U12480/452         21-432/412
L1AE5型   AF039910/364       11-360/350
MM4型     U12488/455         21-435/415
MM7型     U12489/452         21-432/412
MM8型     U12490/452         21-432/412
14.一种用以检测一检体中所含人类乳突瘤病毒亚型的组合物,该组合物包含有:
一种寡核苷酸,该寡核苷酸的序列可与该人类乳突瘤病毒亚型特有的脱氧核糖核酸DNA杂交,用以检测该人类乳突瘤病毒亚型的存在,
其中该人类乳突瘤病毒亚型选自于HPV 26、HPV 32、HPV 37、HPV 53、HPV 61、HPV 62、HPV 66、HPV 67、HPV 69、HPV 70、HPV 72、HPV 74、HPV 82、HPV CP8061、HPV CP8304、HPV L1AE5、HPV MM4、HPV MM7及HPV MM8中的一型。
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