CN104610275A - 一种2,5-二羟基苯磺酸氯吡格雷及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷,其结构通式为：，2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷的工艺步骤为：(1)对羟基苯酚与浓硫酸作用，以氯仿为反应溶剂，回流为反应条件，生成2，5-二羟基苯磺酸；(2)硫酸氢氯吡格雷盐在碱性条件游离得到氯吡格雷；(3)以乙酸乙酯为反应溶剂，常温条件下2，5-二羟基苯磺酸与氯吡格雷反应生产2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷。本发明化合物具有较强的抑制血栓和血小板聚集作用和不良反应小的优点。

Description

一种2,5-二羟基苯磺酸氯吡格雷及其制备方法

技术领域

本发明属于化学合成药技术领域，具体地讲是涉及一种2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷及其制备方法。

技术领域

氯吡格雷，化学名为2-(2-氯苯基)-2-(6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基)乙酸甲酯硫，它的硫酸氢盐是一种高效的抗血小板聚集药物。由赛诺菲-安万特公司1986年研制，适用于有过近期发作的中风、心肌梗死和确诊外周动脉疾病的患者。1998年首先在美国上市后，随后进入欧洲等国家，与其他抗血小板药物相比较，它的疗效更好，平均抑制水平维持在40％-60％,在治疗中止后一般约在5天内血小板聚集和出血时间逐渐回到基线。

目前，经查阅和检索相关资料，只有专利CN200610063152.1提到该化合物，但是实质上没有具体的制备实例，也没有相关的产品性质等数据如熔点、晶型等，更没有记载相关的体内和体外相关预实验。所以关于2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷及其制备方法以及用途都没有相关的文献记载和报道。由此可见，研制一种无毒性、更好地抑制血栓和血小板聚集的2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷非常必要。

发明内容

为了克服以上技术存在的相对不足，本发明旨在提供一种毒性极小、更好地抑制血栓和血小板聚集的2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷。

本发明另一目的是提供一种2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷的制备方法。

本发明解决技术问题所采用的技术方案为：

一种2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷，其特征在于结构通式如下式(Ⅲ)所示：

一种2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷的制备方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：

(1)对羟基苯酚与浓硫酸作用，以氯仿为反应溶剂，回流为反应条件，生成2，5-二羟基苯磺酸；

(2)硫酸氢氯吡格雷盐在碱性条件游离得到氯吡格雷；

(3)以乙酸乙酯为反应溶剂，常温条件下2，5-二羟基苯磺酸与氯吡格雷反应生产2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷。

较佳地，所述2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷的制备方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：

(1)2，5-二羟基苯磺酸的合成

把22g的对苯二酚加到150ml的三氯甲烷中，加热搅拌至回流后，慢慢滴加19.6g的浓硫酸到反应液中，滴加完毕后继续加热回流2-3小时后，停止加热，除去溶剂，再加入150ml的三氯甲烷加热回流1小时，再除去溶剂即可得到2，5-二羟基苯磺酸(化合物Ⅰ)粗品；

(2)氯吡格雷的生成

把109.2g的硫酸氢氯吡格雷盐溶解到500ml的水中，加入28g的碳酸钠游离出氯吡格雷，然后加入500ml的乙酸乙酯萃取，经过无水硫酸钠干燥、浓缩得到氯吡格雷(化合物Ⅱ)；

(3)2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷盐的合成

把步骤(2)得到的氯吡格雷溶解到50ml的乙酸乙酯中，得到氯吡格雷乙酸乙酯溶液(A)；然后把步骤(1)反应得到的2，5-二羟基苯磺酸粗品溶解在50ml乙醇溶液，得到2，5-二羟基苯磺酸乙醇溶液(B)；在常温搅拌的下，把溶液(B)慢慢滴加到溶液(A)中，滴加完毕继续常温反应4小时后，把反应液慢慢滴加到1.5L的异丙醚中，有大量固体产生，过滤得到2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷粗品，把该粗品用100ml乙酸乙酯洗涤后，最后干燥得到2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷(化合物Ⅲ)。

本发明的有益效果：一方面，经过体内、外相关预试验，本发明化合物通过选择性地与血小板表面腺苷酸环化酶偶联的二磷酸腺苷(ADP)受体结合，抑制纤维蛋白原与其血小板受体GP II b/m a结合而发挥作用；另一方面，与现有市场上(河南新帅克制药股份有限公司)的相比较，本发明化合物不但几乎无毒性，而且具有较强的抑制血栓和血小板聚集作和不良反应小等优点。

附图说明

图1大鼠实验性血栓模型图。

图示：1.颈外静脉，2.聚乙烯管(内径1mm、长10cm)，3.中段聚乙烯管(内径2mm、长8cm)，4.手术线，5.颈总动脉。

具体的实施方式

实施例1

第一步：2，5-二羟基苯磺酸的合成

具体操作：把22g的对苯二酚加到150ml的三氯甲烷中，加热搅拌至回流后，慢慢滴加19.6g的浓硫酸到反应液中，滴加完毕后继续加热回流2-3小时后，停止加热，除去溶剂，再加入150ml的三氯甲烷加热回流1小时，再除去溶剂即可得到2，5-二羟基苯磺酸(化合物Ⅰ)粗品(直接投入下一步反应)。

第二步：氯吡格雷的生成

具体操作：把109.2g的硫酸氢氯吡格雷溶解到500ml的水中，加入28g的碳酸钠游离出氯吡格雷，然后加入500ml的乙酸乙酯萃取，经过无水硫酸钠干燥、浓缩得到氯吡格雷(化合物Ⅱ)；

第三步：2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷的合成

具体操作：把得到的化合物2溶解到50ml的乙酸乙酯中，得到溶液A；然后把第一步反应得到的2，5-二羟基苯磺酸(化合物Ⅱ)粗品溶解在50ml乙醇溶液，得到溶液B；在常温搅拌的下，把溶液B慢慢滴加到溶液A中，滴加完毕继续常温反应4小时后，把反应液慢慢滴加到1.5L的异丙醚中，有大量固体产生，过滤得到2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷粗品，把该粗品用100ml乙酸乙酯洗涤后，最后干燥得到2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷(化合物Ⅲ)64.0g。(总收率为62.5％)。

实施例2

体外、体内药效学预试验：

1.急性毒性试验

本发明采用最大给药量法进行KM种小鼠灌胃给药急性毒性试验，每天给药2次，给药1天，每次给药间隔4小时，持续观察14天，实验结果如表1、表2、表3、表4和表5所示。

表1 给药前小鼠的体重

表2 给药后1天小鼠的体重

表3 给药后3天小鼠的体重

表4 给药后7天小鼠的体重

表5 给药后14天小鼠的体重

通过表1至表5，可得到实验各组小鼠体重增长情况，如表6所示。

表6 实验各组小鼠体重增长情况(g，)

注：供试品组2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷(A)与阴性对照组(B)比较，*P＜0.05。

结论：试验结果表明，当采用最大给药量法(2.2g/kg，40mL/kg)对小鼠进行灌胃给药时，其平均体重和阴性对照组比较未见明显差异，未见动物有明显毒性反应，效果非常好。

2.抑制实验

2.1试验前准备

2.1.1全血血小板聚集专用稀释缓冲液(pH＝7.4)见表7

表7 缓冲液

以上物质称量好后，用蒸馏水溶解稀释至1000mL。配制好后，加0.1％叠氮化钠(迭氮钠)1mL(蒸馏水配制)，4℃保存，与抗凝全血的稀释比为1：1。当发现溶液混浊或长霉菌不得再用。

2.1.2二磷酸腺苷二钠(ADP)致聚剂

用电子分析天平(仪器型号：ME235S)精确称取一定量的二磷酸腺苷二钠，以全血血小板聚集专用稀释缓冲液(pH＝7.4)溶解，定容至终浓度为40μmol/L的二磷酸腺苷二钠溶液。

2.1.3试管硅化

用硅油l mL加乙醚99mL，浸泡经过清洗烤干的玻璃器件，滴干后置200℃的烤箱内烘4h以上，清洗烘干待用，使用数次后将要重新硅化。

1.2.4麻醉剂水合氯醛溶液的配制。

用电子分析天平(仪器型号：FA2004)精确称取10g水合氯醛置于100mL量筒中，用少量0.9％(g/mL)氯化钠注射液溶解后稀释到100mL，振摇均匀，即得到浓度为100mg/mL的水合氯醛溶液。经由腹腔注射对SD大鼠进行麻醉，给药剂量350mg/kg。

2.2实验

2.2.1 2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷盐对SD大鼠血小板聚集的抑制作用实验

本次实验选取了全血电阻抗法测定2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷盐对SD大鼠血小板聚集的影响。

人体血液是电解质溶液，将两根铂电极置入富血小板血浆(PRP)或抗凝全血中，电极初与样品接触时，表面吸附了一层血小板薄层，如没有血小板聚集产生，血小板不再粘附到电极上，两电极间电阻恒定。当有聚集剂加入和搅拌的条件下，聚集发生，愈来愈多的血小板粘附到电极表面，使电极表面原有薄层逐渐加厚，导致电极间电阻增大，此电阻增大正比于血小板聚集程度。由于此法不是根据光通量的变化，而是测量电极间的变化值，故不仅可用于PRP，也可在比浊法无法进行的全血中测量。

实验共设5个组，分别为阴性对照组、阳性对照I组和供试品组，每组SD大鼠10只。其中，阳性对照I组为硫酸氢氯吡格雷片(帅信)，给药剂量为7.5mg/kg(阳性药临床用药剂量的大鼠等效剂量)；供试品低、中、高剂量组给予2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷盐，给药剂量分别为4.5mg/kg、9.0mg/kg和18.0mg/kg。阴性对照组给予2％(mL/mL)吐温80，各组均按10mL/kg进行灌胃给药，每日给药1次，连续给药1d。

于末次给药30分钟后，取各组大鼠进行眼眶采血【每只大鼠均取0.5mL，采用肝素钠抗凝(20u/mL)】，用QX-200全血血小板聚集仪进行检测，得到的电阻值如表8所示。

表8 各组电阻值

通过表8实验结果可得到各给药组对SD大鼠血小板聚集的抑制程度，结果如表9所示。

表9 各给药组对SD大鼠血小板聚集的抑制程度(n＝10)

注：与阴性对照组比较，具有显著性差异，*：P＜0.05；**：P＜0.01。

结论：在对SD大鼠血小板聚集的抑制作用方面；一、阳性对照组及供试品各剂量组均有极佳的药效；二、阳性对照组与供试品各剂量组相比较，供试品低剂量组与阳性药硫酸氢氯吡格雷片(帅信)效果相近或相当；中、高剂量组明显优于阳性药硫酸氢氯吡格雷片(帅信)，供试品2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷有非常好的抑制血小板聚集作用。

2.2.2 2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷对SD大鼠血栓形成的抑制作用实验

共设5个组，分别为阴性对照组、阳性对照I组和供试品组，每组SD大鼠10只。其中，阳性对照I组为硫酸氢氯吡格雷片(帅信)，给药剂量为7.5mg/kg(阳性药临床用药剂量的大鼠等效剂量)；供试品低、中、高剂量组给予2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷盐，给药剂量分别为4.5mg/kg、9.0mg/kg和18.0mg/kg。阴性对照组给予2％(mL/mL)吐温80，各组均按10mL/kg进行灌胃给药，每日给药1次，连续给药1天；末次给药30min后，腹腔注射10％的水合氯醛溶液(350mg/kg)将大鼠麻醉后，钝性分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。

如图1所示，在三段聚乙烯管(2、3)的中段聚乙烯管3(内径2mm、长8cm)放入1根长5cm的四号手术线4，将0.9％(g/mL)氯化钠溶液充满聚乙烯管。当聚乙烯管2的一端插入左颈外静脉1后，从聚乙烯管2另一端注入0.9％(g/mL)氯化钠溶液(0.1mL/100g体重)，并将此端插入右颈总动脉5中，5分钟后开放血流，15分钟后终止血流，取出丝线称取血栓湿重，如表10所示，按下列公式计算血栓抑制率：

其中,血栓重量为线栓湿重减去线的毛重(0.0039g)

表10 各组线栓湿重

通过线栓湿重表10可得到各组血栓重量，如表11所示

表11 各组血栓重量

注：血栓重量为线栓湿重减去线的毛重(0.0039g)。

通过计算得到各组SD大鼠术后血栓重量，如表12所示。

表12 各组SD大鼠术后血栓重量比较(n＝10)

注：与模型对照组比较，具有显著性差异，*：P＜0.05；**：P＜0.01。

取各组大鼠进行颈部动静脉旁路血栓造模，考察2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷抑制大鼠血栓形成的作用，结果见表13。

表13 各给药组血栓抑制率比较(n＝10)

结论：供试品2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷有很好的抑制血栓形成的作用：

在抗SD大鼠血栓形成的作用方面，一、阳性对照组及供试品各剂量组均有极佳的药效；二、阳性对照组与供试品各剂量组相比较，供试品低剂量组与阳性药硫酸氢氯吡格雷片(帅信)效果相近或相当；中、高剂量组明显优于阳性药硫酸氢氯吡格雷片(帅信)，供试品2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷有极佳的抑制血栓形成作用。

综上所述，本发明通过合理的药物设计和动物药效学实验，所合成的2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷与硫酸氢氯吡格雷相比较，具有无毒性、更好的抑制血栓和血小板聚集及不良反应小等特点。

以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。

Claims (3)

1.一种2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷，其特征在于结构通式如下式(Ⅲ)所示：

2.一种5-二羟基苯磺酸氯吡格雷的制备方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：

(1)对羟基苯酚与浓硫酸作用，以氯仿为反应溶剂，回流为反应条件，生成2，5-二羟基苯磺酸；

(2)硫酸氢氯吡格雷盐在碱性条件游离得到氯吡格雷；

(3)以乙酸乙酯为反应溶剂，常温条件下2，5-二羟基苯磺酸与氯吡格雷反应生产2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷。

3.根据权利要求2所述2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷的制备方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：

(1)2，5-二羟基苯磺酸的合成

把22g的对苯二酚加到150ml的三氯甲烷中，加热搅拌至回流后，慢慢滴加19.6g的浓硫酸到反应液中，滴加完毕后继续加热回流2-3小时后，停止加热，除去溶剂，再加入150ml的三氯甲烷加热回流1小时，再除去溶剂即可得到2，5-二羟基苯磺酸(化合物Ⅰ)粗品；

(2)氯吡格雷的生成

把109.2g的硫酸氢氯吡格雷盐溶解到500ml的水中，加入28g的碳酸钠游离出氯吡格雷，然后加入500ml的乙酸乙酯萃取，经过无水硫酸钠干燥、浓缩得到氯吡格雷(化合物Ⅱ)；

(3)2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷盐的合成

把步骤(2)得到的氯吡格雷溶解到50ml的乙酸乙酯中，得到氯吡格雷乙酸乙酯溶液(A)；然后把步骤(1)反应得到的2，5-二羟基苯磺酸粗品溶解在50ml乙醇溶液，得到2，5-二羟基苯磺酸乙醇溶液(B)；在常温搅拌的下，把溶液(B)慢慢滴加到溶液(A)中，滴加完毕继续常温反应4小时后，把反应液慢慢滴加到1.5L的异丙醚中，有大量固体产生，过滤得到2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷粗品，把该粗品用100ml乙酸乙酯洗涤后，最后干燥得到2，5-二羟基苯磺酸氯吡格雷(化合物Ⅲ)。