CN104606459A - 一种知母降血糖提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：将知母饮片加盐水拌均匀，每100g知母饮片加入2-4g的盐，闷润至盐水被吸尽，在140℃～170℃下炒制7-9分钟，取盐知母粉碎成粗粉，加60-80％乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏；醇浸膏以适量水分散，用石油醚萃取后，再用氯仿萃取，得萃取物，蒸干，即得。本发明能够明显降低Ⅱ型糖尿病的空腹血糖值、糖化血红蛋白、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数，升高胰岛敏感指数，改善糖耐量。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药制备方法，特别是涉及一种知母降血糖提取物的制备方法。
背景技术
知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎，始载于《神农本草经》，具有清热泻火、滋阴润燥的功效。用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘等症。知母历代的主流炮制品种为盐知母，即将知母饮片加盐水用文火共同炒制至干，盐知母最早见于宋代，记有“盐水炒研末”。历版《中国药典》收载的知母的炮制品种均为盐知母，传统理论认为“入盐走肾脏仍仗软坚”，知母经盐炙后能够“引药入肾经，增强滋阴降火的作用”。早在《神农本草经》中就有记载：知母“主消渴，热中…”，表明知母具有降血糖作用。现代研究亦有报道知母中芒果苷、皂苷、多糖等有降血糖的作用。
我们课题组在进行知母盐制前后药效学对比研究时，首次发现了知母盐炙后降血糖作用显著增强，特别是盐知母高剂量组，降血糖作用高效且持久，明显优于知母组，且优于格列本脲阳性对照组。于是，在前期研究基础上，我们对盐知母的降血糖作用进行了深入研究，对盐知母不同极性部位进行降血糖作用比较研究。本技术的发明，可以使提高知母的降血糖作用，寻找到了盐知母降血糖的有效部位，可进一步开发为降血糖药物。
发明内容：
本发明的目的，是提供一种知母降血糖提取物的制备方法，本制备方法明确了盐知母降血糖作用的最佳部位，为研发新药提供基础。本方法获得的盐知母提取物，对Ⅱ型糖尿病，具有良好的降糖作用。
采用的技术方案是：
一种知母降血糖提取物的制备方法，包括下述步骤：
1.盐知母的制备
知母饮片加盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在140℃～170℃下炒制7-9分钟。每100g知母饮片加入2-4g的盐。
2.取步骤1制备的盐知母粉碎成粗粉，加60-80％乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，依次用的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂得到石油醚萃取物(Ⅰ)，氯仿萃取物(Ⅱ)，乙酸乙酯萃取物(Ⅲ)，正丁醇萃取物(Ⅳ)以及剩余部分(Ⅴ)。
3脂肪乳的制备
每100mL脂肪乳含15-25g猪油，3-8g胆固醇，8-12g果糖，8-12g蔗糖，8-12mL吐温80，8-12mL甘油。
4.造模与给药
SD大鼠适应性喂养一周左右后，随机取8只作空白对照组，正常饮食，余下组大鼠除正常饮食外每天ig脂肪乳，4周后，禁食12h,腹腔注射STZ(35mg/kg)。72h后测定空腹血糖值，选择空腹血糖大于等于12.1mmol/L的大鼠作为Ⅱ型糖尿病模型。将造模成功的糖尿病大鼠，随机分为模型对照组、阿卡波糖组(0.2g/kg)、及Ⅰ～Ⅴ提取物组(折合生药1.4g/kg)。给药组每天ig相应药液10mL/kg,对照组和模型组ig等体积蒸馏水，连续14d。
5检测指标
5.1一般生理指标观察
观察大鼠一般生理状况，包括摄食量，饮水量及活动状态等。
5.2空腹血糖值(FBG)及葡萄糖耐量(OGTT)的测定
于给药7d、14d后，采用剪尾取血法，检测各组大鼠空腹血糖水平。末次给药后，禁食4h，灌胃给予20％葡萄糖溶液(2g/kg),分别测定0、0.5h、1h、2h血糖水平，梯形法计算曲线下面积。
5.3糖化血红蛋白(HbAlc)和血清胰岛素(FINS)测定
末次给药后，禁食12h,眼眶取血，取EDTA抗凝全血按试剂盒操作说明，测定糖化血红蛋白(HbAlc)；放射免疫法测定血清胰岛素(FINS)，按公式计算胰岛敏感指数ISI及Homa胰岛素抵抗指数(Homa-IR)。
6实验结果
6.1一般生理指标观察
造模后大鼠摄食量、饮水量和尿量明显增加，体重明显下降，出现“三多一少”的症状。对照组摄食量和饮水量均衡，体重增长，反应灵敏，皮毛有光泽；模型组大鼠反应迟钝、皮毛枯萎，体重增长缓慢；给药组大鼠的状态有不同程度的好转，活动量增加。
6.2对糖尿病大鼠FBG的影响
与模型组相比，给药7d后，各给药组大鼠的FBG均显著降低(p<0.01或p<0.05)，14d后，阿卡波糖、Ⅱ及Ⅴ提取物组大鼠的FBG显著降低(p<0.01)。表明盐知母Ⅱ及Ⅴ提取物具有明显降低糖尿病大鼠空腹血糖的作用，且较其它提取物作用持久。结果见表1。
6.3对糖尿病大鼠OGTT的影响
与模型组相比，阿卡波糖及Ⅱ提取物组糖负荷后0.5，1，2h后血糖及糖耐量AUC明显下降(p<0.01)；Ⅲ提取物组糖负荷后1，2h血糖和AUC显著下降(p<0.01或p<0.05)。表明盐知母Ⅱ和Ⅲ提取物具有明显改善糖尿病大鼠糖耐量的作用。结果见表2。
6.4对HbAlc和FINS的影响
与模型组相比，阿卡波糖及Ⅱ提取物组对HbAlc、FINS、Homa-IR及ISI均有明显改善作用(p<0.05或p<0.01)；Ⅳ和Ⅴ提取物组可显著改善FINS、Homa-IR及ISI(p<0.05或p<0.01)；Ⅴ提取物组可降低HbAlc(p<0.01)和Homa-IR(p<0.05)。表明盐知母Ⅱ、Ⅳ及Ⅴ提取物具有降低胰岛素抵抗，增加组织对胰岛素敏感性的作用；盐知母Ⅱ和Ⅴ提取物可减轻长期高血糖对胰岛组织的破坏。结果见表3。
结论：盐知母不同提取部位能明显降低FBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR指数，升高ISI，改善糖耐量，其中氯仿萃取物的作用最强，可开发为降血糖药物。
具体实施方式：
实施例一
知母饮片100g，加30ml盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在150℃～160℃下炒制8分钟(每100g知母饮片加入3g的盐)，得盐知母。取盐知母粉碎成粗粉，加70％乙醇回流提取3次，每次2h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，用石油醚萃取，剩余水层再用氯仿萃取，回收溶剂，得到氯仿萃取物，即得。
实施例二
知母饮片200g，加50ml盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在160℃～170℃下炒制7分钟(每100g知母饮片加入3g的盐)，得盐知母。取盐知母粉碎成粗粉，加60％乙醇回流提取3次，每次2.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，用石油醚萃取，剩余水层再用氯仿萃取，回收溶剂，得到氯仿萃取物，即得。
实施例三
知母饮片300g，加100ml盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在140℃～150℃下炒制9分钟(每100g知母饮片加入2g的盐)，得盐知母。取盐知母粉碎成粗粉，加80％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，用石油醚萃取，剩余水层再用氯仿萃取，回收溶剂，得到氯仿萃取物，即得。
Claims (2)
1.一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：将知母饮片加盐水拌均匀，每100g知母饮片加入2-4g的盐，闷润至盐水被吸尽，在140℃～170℃下炒制7-9分钟，取盐知母粉碎成粗粉，加60-80％乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏；醇浸膏以适量水分散，用石油醚萃取后，再用氯仿萃取，得萃取物，蒸干，即得。
2.根据权利要求1所述的一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：制得的知母降血糖提取物，能够明显降低Ⅱ型糖尿病的空腹血糖值、糖化血红蛋白、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数，升高胰岛敏感指数，改善糖耐量。
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