CN104606180A - 绿原酸在制备治疗癫痫的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种绿原酸在制备治疗癫痫的药物中的用途，绿原酸有益于癫痫病的发作缓解，有益于癫痫发作过程中GABA和血酮含量的控制与调节，有益于癫痫持续发作状态和难治性颞叶癫痫的发作，而不仅限于这些发作。

Description

绿原酸在制备治疗癫痫的药物中的用途

技术领域

本发明属于绿原酸的新的药用用途，尤其涉及绿原酸在制备治疗癫痫的药物中的用途。

背景技术

癫痫是一种神经科的常见病，是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征，以脑神经元的异常放电引起反复痫性发作为特征。癫痫的发生、扩散和终止的整个过程均伴随有许多的生化改变。癫痫发作时，患者脑组织中的抑制性神经递质GABA会显著性的下降，该病理特征与癫痫发作程度及频率密切相关，以GABA作为调节和控制的靶点，对癫痫症状的控制具有积极的意义。此外，国内外的研究已经证实，酮体能够对癫痫的发作时的惊厥等症状能起到一定的控制作用，适当增加癫痫患者体内的酮体来源，可以对疾病产生明显的治疗效果(Kim do Y,Davis LM,Sullivan PG,et al.Ketone bodies are protective againstoxidative stress in neocortical neurons.J Neurochem.2007.101(5):1316-26.)。

绿原酸(chlorogenic acid CGA)又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸(caffeic acid CA)和奎尼酸(quinic acid QA)组成的缩酚酸，其化学名为3-o-咖啡酰奎尼酸(3-o-caffeoylquinic acid CGA)。

CAS No.：327-97-9

CAS Name：

[1S-(1a,3b,4a,5a)]-3-[[3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-1,4,5-trihydroxycyclohexanecarboxylic acid

系统名：1，3，4，5-四羟基环己烷羧酸-(3，4-二羟基肉桂酸酯)

化学结构式：

绿原酸是植物在进行有氧呼吸的过程中，经磷酸戊糖途径中间产物合成的一种苯丙素类物质。其提取(通常从植物中提取)、合成技术成熟，绿原酸已经被开放应用于食品，保健品，化妆品和药品等多个领域。由于它广泛的存在于常见的各种蔬菜水果中，具有多种生物活性，如:心血管保护作用、抗氧化作用、抗紫外及抗辐射作用、抗诱变及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫调节作用等。在医药化工和食品等领域都具有广泛的应用。

发明内容

本发明的目的在于：提供绿原酸的新的药用用途，尤其是绿原酸在制备治疗癫痫的药物中的用途。

本发明目的通过下述技术方案来实现：

其中，所述的药物是上调肾脏中HMGCS2基因的药物。

上述方案中，所述的HMGCS2基因是编码三羟基三甲基辅酶A合成酶2的基因，其表达量和对应的酶活性成正相关。与机体的酮体产生量也呈正相关。

其中，所述的药物是上调HMGCS2蛋白表达的药物。

上述方案中，所述的HMGCS2蛋白是由HMGCS2基因控制的下游产物，其可发挥蛋白的生物活性，是机体内酮体合成的关键物质，其活性和量与酮体生成的量具有正相关性。

其中，所述的药物是调节酮体生物合成的药物。

上述方案中，酮体是人体在饥饿时所产生的一类化合物的总称，为机体提供足够的能量补充，国内外早年的研究已经显示，酮体对于癫痫病发作(尤其是难治性癫痫)的控制作用具有其它药物难以达到的治疗效果，其中的机制尚不明确。然而现行的许多癫痫的临床治疗方案显示，增加癫痫病患者体内的酮体来源，能对癫痫发作产生有效的抑制作用。

其中，所述的药物是增强脑神经元递质GABA含量的药物。

上述方案中，所述的GABA全称为γ-氨基丁酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质，其活性和含量与癫痫的发生密切相关。癫痫患者脑组织中的GABA水平显著低于正常人，且GABA含量与癫痫患者的发作程度及频率等均有联系，能使癫痫患者脑组织中GABA含量升高的药物，可能具有抗癫痫的功效。

其中，所述的药物是由绿原酸为有效成分，加入一种或多种药学上可接受的药用赋形剂制备而成的制剂。

上述方案中，绿原酸既可以作为唯一有效成分，也可以作为有效成分之一。

其中，所述的制剂是口服制剂或注射制剂。

上述方案中，具体剂型可以为散剂、丸剂、口服溶液剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、冻干粉针剂等等各种药用剂型。

其中，所述的制剂每制剂单位含绿原酸1-1000mg。

其中，所述的制剂的临床使用剂量为：1-100mg/kg。

前述本发明主方案及其各进一步选择方案可以自由组合以形成多个方案，均为本发明可采用并要求保护的方案，本领域技术人员在了解本发明方案后根据现有技术和公知常识可明了有多种组合，均为本发明所要保护的技术方案，在此不做穷举。

本发明试验表明，绿原酸对于癫痫的持续性发作以及难治性颞叶癫痫的发作均有治疗效果，绿原酸能够显著改善癫痫模型小组的行为学特征，使其癫痫发作次数显著降低。实验结果显示，绿原酸能有效的增强HMGCS2基因及其对应HMGCS2蛋白的表达，对酮体的生物合成产生影响，实验数据也显示绿原酸能够有效调节癫痫鼠的血酮水平，增强鼠脑组织中抑制性神经递质GABA的含量。

具体而言：

①绿原酸可以改善癫痫鼠模型的发作频率和发作程度，具有明显的药效。

②绿原酸能够上调HMGCS2基因，该基因是编码合成下游酶的基因；

③通过上调HMGCS2基因，促进对应的HMGCS2蛋白的合成，该蛋白使机体合成酮体的关键物质，其活性和含量与酮体的生物合成成正相关。

④绿原酸可以增加机体酮体水平，对于帕金森病患者具有良好的疗效，绿原酸可以调节上调模型大鼠的酮体水平。

⑤绿原酸促进癫痫患者脑组织中GABA的生成，GABA是神经元的抑制性氨基酸。简而言之，癫痫的发病机制非常复杂，有多方面的因素形成，其中GABA水平下降，是其发病的重要病理原因之一，此外，国内外的研究已经证实并已经在临床上使用的方法是增加癫痫患者体内的酮体摄入，从而对于癫痫的发病症状进行控制，实施例证明绿原酸可以增加癫痫鼠模型脑组织中的GABA水平，此外绿原酸还能上调酮体合成关键酶对应的基因和蛋白水平，促进酮体的生成，而酮体又对于癫痫具有明确的改善症状作用。

综上，绿原酸有益于癫痫病的发作缓解，有益于癫痫发作过程中GABA和血酮含量的控制与调节，有益于癫痫持续发作状态和难治性颞叶癫痫的发作，而不仅限于这些发作。

附图说明

图1是本发明实例1的各组大鼠体重的变化趋势；

图2是本发明实例1的各组大鼠的血酮含量变化趋势；

图3是本发明实例2的各组幼鼠肾脏中HMGCS2基因的表达情况；

图4是本发明实例2的各组幼鼠肾脏中HMGCS2蛋白的表达情况的Western Blot电泳结果；

图5是本发明实例2的各组幼鼠肾脏中HMGCS2蛋白的表达情况的光密度分析各组幼鼠肾脏中蛋白含量结果。

具体实施方式

下列非限制性实施例用于说明本发明。

实例1：绿原酸治疗盐酸匹罗卡品诱导的癫痫持续性发作的体内药效学试验研究

1.实验材料：

1.1动物

雄性SD大鼠80只，标准喂养。

1.2实验药物及仪器

绿原酸(四川九章生物科技有限公司)，托吡酯(妥泰，西安杨森)，氯化钾(AR，中国医药集团上海试剂公司)，盐酸匹罗卡品(SIGMA)，乙二胺四乙酸二钠(SIGMA)，大鼠血酮含量ELISA检测试剂盒(碧云天)。

2.实验方法：

2.1大鼠癫痫持续性发作模型的建立和实验分组：

将实验所用的SD大鼠先腹腔注射氯化钾，剂量按3meq/kg，18h后腹腔注射新鲜配制的盐酸匹罗卡品，剂量为30mg/kg。所有注射匹罗卡品的大鼠均于30min之内出现强直-阵挛性发作癫痫持续状态(SE)，并于30min之后，对模型大鼠的腹腔注射东莨菪碱，剂量按1mg/kg，以拮抗其外周胆碱能反应。SE后存活动物选取SE发作严重度在RacinⅣ级以上者(Racin分级Ⅰ级，面部阵挛，包括眨眼、动须、节奏型咀嚼等；Ⅱ级，Ⅰ级加节律性点头；Ⅲ级，Ⅱ级加前肢阵挛；Ⅳ级，Ⅲ级加后肢站立；Ⅴ级，Ⅳ级加摔倒)，随机分为5组，每组10只。以托吡酯(TPM)作为阳性药物治疗组，绿原酸分别设置高、中、低剂量治疗组，以注射生理盐水的模型大鼠作为模型对照组。具体命名分组如下：模型对照组(SE组，n＝10)、托吡酯治疗组(TMP组，n＝10)、绿原酸低剂量治疗组(L-LYS组，n＝10)、绿原酸中剂量治疗组(M-LYS组，n＝10)和绿原酸高剂量治疗组(H-LYS组，n＝10)，连同正常对照组(NC组，n＝10)，共6个实验组，共60只。

2.2分组给药实验

本实验采用灌胃的给药方式对各组大鼠进行治疗，具体的给药方案如表1所示：

表1.实验分组、给药方式及给药量(注：下述各组的给药体积相同)

2.3实验检测指标

2.3.1癫痫大鼠的体重检测

实验各组大鼠均按照标准的喂养方式进行喂养，实验共进行4周，这4周里，每日测定、记录各组大鼠的体重，并以一周作为一个单位，计算各组大鼠一周的体重平均值。

2.3.2癫痫大鼠发作行为的观察和记录

各组癫痫大鼠的静默期(自SE至首次出现自发性反复发作的间期)及平均每周自发性反复发作(SRS)的次数(每周共观察28h，每天4h)。实验持续时间为4周。

2.3.3大鼠血浆酮体含量的检测

将实验造模的当天设置为第0天，于实验的第0、7、14、21、28天分别对各组大鼠静脉取血，将所取血置于被乙二胺四乙酸二钠润洗过的试管内，分别编号，保存于-70℃冰箱内，备用。当集齐5次血液样品后，将所有样品缓慢融化后，2000g/min离心15min，取上清液。用大鼠酮体检测ELISA试剂盒测定大鼠血酮体含量。

3.实验结果

3.1癫痫大鼠的体重检测结果

在实验造SE模型的当天(计为第0天)，实验第一周末(实验第7天)、第二周末(实验第14天)、实验第三周末(实验第21天)和实验第四周(实验第28天)分别对各组大鼠的体重进行测定，并计算和记录其平均值。各组大鼠的体重变化趋势如图1所示：模型对照组的大鼠体重增长最为缓慢，TMP治疗组的大鼠增重趋势也较为缓慢，均在正常组以下。而中、高剂量的绿原酸治疗组的大鼠体重有比较明显的增长趋势，其增重幅度高于正常对照组。提示绿原酸治疗后的癫痫大鼠，其身体生长状态等并没有受到影响。

3.2癫痫大鼠发作行为的观察和记录

各组癫痫大鼠的静默期(自SE至首次出现SRS间期)及平均每周SRS次数(每周共观察28h)的结果显示。SE模型对照组的SRS次数较其它治疗组明显较高，TMP治疗组的癫痫大鼠，其SRS发作次数显著降低，与SE模型对照组之间有显著性差异(*p<0.05)。绿原酸治疗组的SRS次数也较SE对照组有所下降，其中，中、高剂量的绿原酸治疗组的SRS次数下降程度较大，其值与TMP治疗组之间没有统计学差异(p>0.05)。各组癫痫大鼠的静默期及平均每周(28h)的SRS次数详见表2所示：

表2 各组癫痫大鼠的静默期及平均每周(28h)的SRS次数

3.3各组大鼠的血酮含量检测结果

本实施例采用大鼠血酮含量ELISA检测试剂盒对各组大鼠的血酮含量进行检测。实验结果如表3所示：高、中、低剂量的绿原酸治疗组的大鼠血酮含量均有一定的升高，其中高剂量绿原酸治疗组的大鼠，其血酮含量值与正常组相比，具有显著性差异(p<0.05)，TMP治疗组的血酮含量未见明显上升。各组大鼠的血酮含量变化趋势如图2所示。

表3 各组大鼠在不同时间点的血酮含量测定值(mmol/L)

4统计学处理

连续型变量形式的实验数据以表示，2组数据间的比较用两样本t检验。采用SPSS13.0(SolutionsStatistical Package for the Social Sciences/Statistical Productand Service Solutions)统计软件，P<0.05为有统计学意义。

5结论

本实施例采用腹腔注射盐酸匹罗卡品的方法建立了大鼠持续癫痫的模型，并采用广谱的抗癫痫药托吡酯作为阳性治疗药物，对比了绿原酸作为抗癫痫药物的药效学。实验结果显示：高、中、低剂量的绿原酸均能降低癫痫大鼠的SRS次数，其中,中、高剂量组的绿原酸治疗组的SRS次数与托吡酯治疗组相比，没有统计学差异(p>0.05)。且绿原酸治疗组的大鼠，其体重上升趋势增强，其中，中、高剂量绿原酸治疗组的大鼠，其体重增长幅度及最终的大鼠体重平均值，均高于其它各组。而阳性药物托吡酯治疗组的大鼠，其体重增长速度则相对较为缓慢，且该组治疗终止时的最终体重也明显偏低。实验结果显示，绿原酸对癫痫持续性发作具有一定的治疗作用，能显著改善疾病发作时的症状，并不影响模型大鼠的生长，表现出良好的药效。

实例2：绿原酸对海人酸诱导的难治性颞叶癫痫的各项生化指标的影响作用

1.实验材料

1.1动物

出生后7天的雄性Wistar幼鼠50只，标准喂养。

1.2实验药物及仪器

绿原酸(冻干粉针剂，四川九章生物科技有限公司)，托吡酯(妥泰，西安杨森)，海人酸(SIGMA)，γ-氨基丁酸(GABA)标准品，乙二胺四乙酸二钠(SIGMA)，紫外分光光度计(岛津)，荧光实时定量PCR仪(美国应用生物系统公司ABI)，电泳槽(北京君意东方电泳设备有限公司)，总RNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司)，TIANScriptcDNA第一链合成试剂盒(天根生化科技有限公司)。

2.实验方法

2.1幼鼠癫痫模型的建立和实验分组

将实验所用的Wistar幼鼠40只腹腔注射海人酸，剂量为1mg/kg(实验幼鼠的癫痫发作分级标准如下：Ⅰ级，面部阵挛，包括眨眼、动须、节奏型咀嚼等；Ⅱ级，Ⅰ级加节律性点头；Ⅲ级，Ⅱ级加前肢阵挛；Ⅳ级，Ⅲ级加后肢站立；Ⅴ级，Ⅳ级加摔倒；Ⅵ级，狂奔嘶叫；Ⅶ，强直发作)。除去造模中死亡的7只幼鼠，将剩余的幼鼠随机分为3组，每组11只。以托吡酯(TPM)作为阳性治疗组，以注射生理盐水的模型大鼠作为模型对照组。具体命名分组如下：模型对照组(EP组，n＝11)、托吡酯治疗组(TMP组，n＝11)、绿原酸治疗组(L-LYS组，n＝11)和正常对照组(NC组，n＝10)，共4个实验组，共43只。

2.2分组给药实验

本实验采用腹腔注射给药的方式对各组大鼠进行治疗，其具体的给药方案如表1所示：

表1.实验分组、给药方式及给药量(注：所有给药组的给药体积相同)

2.3实验检测指标

2.3.1幼鼠行为观察

在实验进行的7天里，以造模当天计为第0天，从第1天起，每天对幼鼠的行为学进行4h的观察，共观察28h，详细记录每一组幼鼠抽搐发作的总次数和发作时的具体表现。

2.3.2实验各组幼鼠脑组织中γ-氨基丁酸(GABA)的检测

取幼鼠大脑皮层组织100mg，加预冷蒸馏水2mL匀浆，1500g离心10min后取上层清液测蛋白含量，其余上清液则取出，分别编号之后，5000g离心10min，弃去沉淀后取上清液120μl置于离心管内，80℃烘干后加入50μl蒸馏水溶解，进行电泳。电泳结束后，将滤纸显色、烘干、剪下色点，置于85％的乙醇中浸泡40min，用紫外分光光度计于505nm波长处检测其吸收值，依据标准样品的浓度计算GABA含量。

2.3.3实验各组幼鼠肾脏中HMGCS2基因表达情况及对应HMGCS2蛋白的表达情况检测。

(1)肾脏中HMGCS2基因的表达情况检测；

①鼠肾脏细胞总mRNA的提取

实验终止后，将幼鼠拉颈处死后解剖取出肾脏，并分组编号；将各组小鼠的肾脏剪碎、匀浆后分成A、B和C三份，将B和C组样品冻存于-70℃冰箱中保存。取A份组织匀浆，向其中加入350μl的预先加有β-巯基乙醇的裂解液RL，静置5min。向匀浆液中加入600μl的RNase-free ddH₂O和10μl的蛋白酶K,混匀后56℃处理20min；将得到的裂解后的液体在15,000rpm条件下离心4min，小心吸取上清液，向上清液中缓慢加入0.5倍体积的无水乙醇，反复混合，直至均匀后转移到吸附柱CR3中，10,000rpm离心3min，弃去废液，留吸附柱；向吸附柱中加入去蛋白液RW1至吸附柱中，去除蛋白，之后离心2min，弃去废液；向吸附柱CR3中加入DNase I工作液，降解其中的DNA；随后，用去蛋白液和漂洗液分别清洗吸附柱，将吸附柱放于收集管中，开启通风，充分挥干柱子上的残留液体；待液体挥干之后，向吸附柱中加入40μlRNase free ddH2O，放置2min后，12,000rpm离心2min，即得mRNA样品,备用。

②cDNA第一链的合成

本实施例采用cDNA第一链合成试剂盒和上述步骤提取得到的mRNA溶液合成对应的第一链cDNA。具体逆转录过程按照说明书操作，得到的cDNA第一链，冻存于-20℃进行保存、备用。

③RT-PCR定量

SYBER GREEN荧光染料与双链的DNA结合会产生很强的荧光，通过检测和记录最终的荧光强度，可以得到生成DNA的总量。在试管中加入荧光染料、(1)(2)步中所合成的cDNA产物、HMGCS2引物(上游引物：GTATGGGCTTCTGTTCG；下游引物：GGCGTTGGTGGTATCTA)混合均匀后进行RT-PCR检测本体系使用RNase-free water代替cDNA products组为NTC对照。每个样品均设β-actin引物组为相对值，进行相对定量。

(2)各组幼鼠肾脏组织中HMGCS2蛋白的表达情况

①将之前冻存的生物样本B组取出，每份样品进一步匀浆后，离心，弃去上清，加入5倍体积的细胞裂解液，冰上放置20min，于12000rpm/min4℃离心1h，收集上清液；

②BCA法定量样品的蛋白浓度后，把蛋白样品制成相同的浓度，加入样品缓冲液，沸水煮5min；

③进行SDS-PAGE电泳；

④取下PVDF膜，TBS浸泡10min，5％脱脂奶粉封闭1h，TBS洗脱2次，加入一抗(1:300)，孵育2h后，TBST洗脱2次，再加入二抗(1:4000)1h，TBST洗脱2次，之后用Western-blue染液显色后观察结果。

⑤用Gel Pro-4.0定量分析Western Blot蛋白条带积分光密度值，以HMGCS2同β-actin的条带积分光密度值比值来表示各组幼鼠肾脏中该蛋白的表达水平。

3.实验结果

3.1幼鼠行为学的观察结果和分析

对各组幼鼠的行为学进行观察和记录后，具体的情况如表2所示：

表2 幼鼠癫痫发病的次数和行为学观察结果

3.2幼鼠脑组织中GABA含量的检测结果

γ-氨基丁酸(GABA)是脑内最主要的一种抑制性的氨基酸，在脑内的含量较高，其含量的增加是控制癫痫发作的有效途径。对幼鼠脑组织中的GABA含量进行测定后发现，EP组幼鼠的GABA含量与正常对照组相比，有很大程度的降低，说明癫痫发作确实存在着脑内GABA含量降低这一病理变化。而TMP和绿原酸治疗组的幼鼠，其脑组织中的GABA得到较大程度的恢复，这两个治疗组均能将幼鼠脑组织中的GABA恢复至接近正常水平，这两组的数据分别与正常组比较后显示，没有统计学差异(P>0.05)，具体的实验结果如表3所示：

表3 幼鼠脑组织中GABA含量的检测结果(nmol/mgpro)

3.3实验各组幼鼠肾脏中HMGCS2基因及对应蛋白的表达情况检测

(1)肾脏中HMGCS2基因的表达水平检测

本实施例中，以β-actin作为内参基因，以HMGCS2基因相对于β-actin的表达情况作为最终统计的数值，得到的结果显示：模型对照组(EP组)的幼鼠肾脏组织中的HMGCS2基因表达水平，与正常组幼鼠肾脏中的HMGCS2表达水平相比，有了明显的下调，说明所造癫痫模型中HMGCS2基因表达下调是其病理特征的一部分。而在用绿原酸治疗后的幼鼠肾脏中，其HMGCS2基因的表达水平有了显著的上调，与模型组之间有显著性差异(p<0.05)，阳性对照药TMP治疗组的幼鼠肾脏组织中的HMGCS2基因水平也有一定程度的升高，与EP组相比，具有显著性差异(P<0.05),但是与正常对照组之间尚有显著性差异(p<0.05)，结果如图3所示。

(2)幼鼠肾脏组织中HMGCS2蛋白的表达水平检测

本实施例采用Western Blot法对各组小鼠肾脏中的HMGCS2蛋白进行了检测，结果如图4(Western Blot电泳结果)所示：模型对照组(EP组)的HMGCS2蛋白表达与正常组对照组相比，明显较弱。绿原酸治疗组的幼鼠肾脏中的HMGCS2蛋白表达较EP组有了一定程度的增强，TMP治疗组的幼鼠肾脏中，HMGCS2蛋白表达情况也有一定程度的增强。对蛋白条带进行光密度分析后的结果如图5(光密度分析各组幼鼠肾脏中蛋白含量结果)所示：模型组的HMGCS2蛋白表达较其余各组均明显较低，与其余各组之间存在显著性差异，而正常对照组、TMP治疗组和绿原酸治疗组的HMGCS2蛋白表达没有统计学差异。

4统计学处理

连续型变量形式的实验数据以表示，2组数据间的比较用两样本t检验。采用SPSS13.0统计软件，P<0.05为有统计学意义。

5.实验结论

本实施例采用腹腔注射海人酸的方式，建立难治性颞叶癫痫的小鼠模型，以托吡酯作为阳性对照药物。实验结果显示，绿原酸能够显著改善癫痫模型小组的行为学特征，使其癫痫发作次数显著降低，此外，绿原酸能有效的增强HMGCS2基因及其对应HMGCS2蛋白的表达，HMGCS2蛋白是生物体内酮体合成的关键催化酶，该结论与实例1中绿原酸能增高癫痫小鼠血酮含量的实验结果一致。同时，绿原酸能增强鼠脑组织中抑制性神经递质GABA的含量。综上，绿原酸能缓解癫痫病发作，改善癫痫病体征和生化指标，对难治性颞叶癫痫具有治疗作用，而不仅限于难治性颞叶癫痫的治疗。

实施例3：用绿原酸制备散剂

1.绿原酸的提取：

本实施例所用的绿原酸原料药，系由杜仲叶中提取、纯化得到的，纯度为98.82％。

2.绿原酸散剂的制备：

2.1处方

纯度为98.82％的绿原酸1000g

2.2制法

取处方量绿原酸过筛后，按照散剂的常规制备工艺，无菌分装成含1000瓶/袋散剂，每瓶/袋散剂含绿原酸1000mg。

实施例4：用绿原酸制备丸剂

1.绿原酸的提取

本实施例中所使用的绿原酸，系由金银花中提取、纯化得到的，纯度为98.25％。

2.绿原酸丸剂的制备

2.1处方

2.2.制法：

取适量的聚维酮K30，用无水乙醇配制成溶液，再取处方量的绿原酸和淀粉，采用等量稀释法混合均匀之后，加入聚维酮K30的乙醇溶液中，充分搅拌后制得软材，采用搓丸法制得绿原酸丸剂1000粒，每粒丸剂含绿原酸1mg。

实施例5：用绿原酸制备口服溶液剂

1.绿原酸的提取

本实施例中所使用的绿原酸，系由牛蒡叶中提取、纯化得到，纯度为99.04％。

2.绿原酸口服溶液剂的制备

2.1处方

2.2制法

取处方量的绿原酸和亚硫酸氢钠，溶解于5L注射用水中，按照口服液的常规制备工艺，过滤后，无菌灌装成1000支口服液，每支口服液为5mL，含绿原酸200mg。

实施例6：用绿原酸制备片剂

1.绿原酸的提取：

本实施例中所使用的绿原酸，系由金银花中提取、纯化得到的，纯度为98.37％。

2.绿原酸片剂的制备

2.1处方：

2.2制法：

本实施例采用制湿颗粒压片法制备绿原酸片剂。(1)按处方量取聚维酮K30制成水溶液；(2)取处方量的绿原酸、淀粉和糊精混合均匀后，加入聚维酮K30水溶液，充分搅拌均匀后制成软材；(3)将制备好的软材按常规的湿法制粒的操作规程，过筛、干燥和整粒后得到大小均一的颗粒；(4)将制得的颗粒与硬脂酸镁混合均匀后压片，共制成1000片片剂，每片含绿原酸100mg。

实施例7：用绿原酸制备胶囊剂

1.绿原酸的合成：

本实施例中所使用的绿原酸，系由牛蒡叶中提取、纯化得到，纯度为98.37％。

2.绿原酸胶囊剂的制备：

2.1处方：

2.2制法：

取处方量的绿原酸和淀粉，混合均匀，加入80％乙醇溶液制成软材，干燥，整粒后按照胶囊剂的常规制备工艺制备1000粒胶囊，每粒胶囊含绿原酸50mg。

实施例8：用绿原酸制备颗粒剂

1.绿原酸的提取

本实施例中所使用的绿原酸，系由杜仲叶中提取、纯化得到的，纯度为98.63％。

2.绿原酸颗粒剂的制备

2.1处方：

2.2制法：

取聚维酮K30，加入注射用水，制成溶液。取处方量的绿原酸、甘露醇和乳糖混合均匀之后，加入聚维酮K30溶液，制成软材。按照颗粒剂的常规制备工艺，对软材进行过筛、干燥和整粒之后，得到颗粒剂。在无菌条件下分装颗粒剂，制备1000袋颗粒剂，每袋颗粒剂含绿原酸600mg。

实施例9：用绿原酸制备冻干粉针剂

1.绿原酸的提取：

本实施例中所用的绿原酸原料药，系由杜仲叶中提取、纯化得到，纯度为99.52％。

2.绿原酸冻干粉针剂的制备

2.1处方：

将以上处方完全溶解于注射用水中，过滤后，再用0.22μm的除菌微孔滤膜精滤，调节pH后，按照无菌粉针剂的常规操作共制成2ml粉针剂1000支，每支含绿原酸60mg。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.绿原酸在制备治疗癫痫的药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是上调肾脏中HMGCS2基因的药物。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是上调HMGCS2蛋白表达的药物。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是调节酮体生物合成的药物。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是增强脑神经元递质GABA含量的药物。

6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的用途，其特征在于：所述的药物是由绿原酸为有效成分，加入一种或多种药学上可接受的药用赋形剂制备而成的制剂。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的制剂是口服制剂或注射制剂。

8.如权利要求6或7所述的用途，其特征在于：所述的制剂每制剂单位含绿原酸1-1000mg。

9.如权利要求6、7或8所述的用途，其特征在于：所述的制剂的临床使用剂量为：1-100mg/kg。