CN104586841A

CN104586841A - (3r,2’r)-格隆溴铵作为m3毒蕈碱性受体拮抗剂在制药中的用途

Info

Publication number: CN104586841A
Application number: CN201310521408.9A
Authority: CN
Inventors: 孙宏斌; 向左娟; 温小安
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2013-10-30
Filing date: 2013-10-30
Publication date: 2015-05-06

Abstract

本发明涉及制药领域，具体涉及(3R，2’R)-格隆溴铵在制备预防或治疗呼吸系统疾病、泌尿系统疾病或肠胃道疾病的药物中的用途。

Description

(3R,2’R)-格隆溴铵作为M3毒蕈碱性受体拮抗剂在制药中的用途

技术领域

本发明涉及制药领域，具体涉及(3R,2'R)-格隆溴铵在制备预防或治疗呼吸系统疾病、泌尿系统疾病或肠胃道疾病的药物中的用途。

技术背景

M受体主要分布在副交感神经节后纤维所支配的效应器细胞，共有5种亚型，分别为M1、M2、M3、M4、M5。可用M3受体拮抗剂治疗的疾病包括呼吸系统疾病、泌尿系统疾病和肠胃道疾病等。所述呼吸系统疾病包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)、支气管炎、支气管反应过度、咳嗽、鼻炎、哮喘等；所述泌尿系统疾病包括膀胱过度活动症、尿频、尿急、尿失禁、慢性膀胱炎、神经源性或不稳定性膀胱、膀胱痉挛等。所述肠胃道疾病包括过敏性肠道综合症、痉挛性结肠炎、憩室炎和消化性溃疡等。

M3受体拮抗剂格隆溴铵具有抗分泌作用且无明显的中枢副作用，其片剂是消化性溃疡的治疗药物，注射剂用于麻醉前用药，口服溶液剂则用于治疗儿童慢性流涎症。上世纪80年代人们发现吸入格隆溴铵(0.1～1.2mg)具有8～12h的支气管平滑肌舒张作用。2005年，诺华和Sosei开始共同研发格隆溴铵吸入性胶囊制剂(NVA237)用于治疗呼吸道疾病，已获得欧盟和日本卫生劳动福利部的批准。

格隆溴铵分子中因含有两个手性中心而产生四个光学异构体，市售的格隆溴铵是(3S,2'R)及(3R,2'S)一对对映异构体的混合物，因此给药物的疗效和安全性带来一定的不确定性。专利US6307060公开了碘化3-羟基-1，1-二甲基吡咯烷基-α-环戊基扁桃酸酯(格隆碘铵)的四个光学异构体，其中，(3S，2′R)构型与M3受体的结合活性最高并与功能性试验结果一致，(3R,2'S)异构体的活性则弱于(3S，2′R)和(3R，2′R)。专利CN103012231A虽公开了格隆溴铵的四个立体异构体，但并未提供(3R，2′R)-格隆溴铵的制备实施例，尤其值得关注的是，CN103012231A虽然进行了离体的抑制豚鼠肠收缩测试和抑制豚鼠气管收缩测试，但其活性测试结果与专利US6307060的测试结果不一致，甚至结论完全相反!

综上所述，格隆溴铵及其四个立体异构体单体作为胆碱能拮抗剂在疗效和安全性上的差异尚待探究，尤其是(3R,2'R)、(3S,2'R)及(3R,2'S)构型格隆溴铵单体的有效性、安全性及成药性尚不明确。因此，对格隆溴铵及其四个立体异构体单体的深入研究是非常必要的，以开发更安全有效的M3受体拮抗剂。

发明内容

本发明公开了下式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物在制备预防或治疗慢性阻塞性肺疾病、支气管炎、支气管反应过度、咳嗽、鼻炎、哮喘、膀胱过度活动症、尿频、尿急、尿失禁、慢性膀胱炎、神经源性或不稳定性膀胱、膀胱痉挛、过敏性倡导综合症、痉挛性结肠炎、憩室炎或消化性溃疡的药物中的用途。

在对M3毒蕈碱性受体的亲合力测试中，本发明人惊奇地发现，在格隆溴铵及其所有四个立体异构体单体中，式I化合物与M3受体结合活性最高，而格隆溴铵中一个立体异构体(3S,2'R)-格隆溴铵的活性弱于(3R,2'R)-格隆溴铵，另一个立体异构体(3R,2'S)-格隆溴铵活性较(3R,2'R)则弱了超过50倍。对M3毒蕈碱性受体的拮抗作用的功能性实验结果与亲合力测试结果基本一致，式I化合物与M3受体结合活性最高且超过格隆溴铵，(3S,2'R)-格隆溴铵较式I化合物活性弱一倍，(3R,2'S)-格隆溴铵活性较(3R,2'R)则弱了近300倍，而(3S,2'S)-格隆溴铵则几乎失去活性。本发明的活性测试结果与US6307060的测试结果(针对格隆碘铵)有所不同，且与CN103012231A的测试结果完全相反。

另一方面，尽管格隆溴铵是以固体形式存在的，但本发明人惊奇地发现，当分别制备格隆溴铵的(3S,2'R)及(3R,2'S)两个对映异构体单体时，这两个单体竟然都是油状物!因此，这两个对映异构体单体的成药性几乎是不可能的。而在市售药物格隆溴铵及其所有四个立体异构体单体中，式I化合物不仅在活性测试中表现出了最强活性，且其为性状良好的固体，因此，在成药性方面显著优于油状物的(3S,2'R)-格隆溴铵及(3R,2'S)-格隆溴铵。

本发明的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物可用于制备预防或治疗呼吸系统疾病、泌尿系统疾病或肠胃道疾病的药物。所述呼吸系统疾病包括慢性阻塞性肺疾病、支气管炎、支气管反应过度、咳嗽、鼻炎或哮喘。所述泌尿系统疾病包括膀胱过度活动症、尿频、尿急、尿失禁、慢性膀胱炎、神经源性或不稳定性膀胱或膀胱痉挛。所述肠胃道疾病包括过敏性肠道综合症、痉挛性结肠炎、憩室炎或消化性溃疡。

本发明的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物可以单独给药，或与其他具有可以有效治疗此类疾病的药物联用，如与β2受体激动剂、固醇类、抗过敏药物、磷酸二酯酶4抑制剂和/或白三烯D4(LTD4)拮抗剂同时、独立或序贯联合给药，用于预防和治疗呼吸系统疾病。

本发明还提供了一种预防或治疗所述的呼吸系统疾病、泌尿系统疾病或肠胃道疾病的药物组合物，所述药物组合物中含有治疗有效量的本发明的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物作为活性成份和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是吸入气雾剂、吸入粉雾剂、普通片剂、缓释片剂、控释片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服液或注射剂。

本发明的药物组合物中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的剂量随症状和年龄等不同而不同。对成人而言，在以吸入气雾剂或吸入粉雾剂给药时，一次给药量的下限是0.001mg，上限是50mg；在口服或静脉给药时，一次给药量的下限是0.001mg，上限是100mg。也可根据疾病程度的不同和剂型的不同而偏离此剂量范围。

具体实施方式

下面通过实施例具体说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实施例是为了更好的阐述本发明，而不是用来限制本发明的范围。

实施例1

受试化合物对M3毒蕈碱性受体的亲合力测试

1.实验目的：测定化合物对M3毒蕈碱性受体的拮抗活性和亲合力(通过与同位素标记的阳性化合物[³H]NMS竞争)。

2.实验材料：本发明化合物用结合缓冲液溶解为20mM，并立即应用与检测。其它材料：a)[3H]NMS：82Ci/mmol，珀金埃尔默；b)阿托品，Sigma-Aldrich；c)表达人M3毒蕈碱性受体的膜制剂，金斯瑞；d)UniFilter-96GF/C过滤板，珀金埃尔默；e)结合缓冲液：50mM Tris-HCl，5mM MgCl₂，pH7.4，4℃过滤并保存；f)洗涤缓冲液：50mM Tris-HCl，pH7.4，4℃过滤并保存。

检测仪器：微孔板闪烁发光计数仪，珀金埃尔默

3.实验步骤：

3.1试验操作步骤：

(1)微孔板预PEI处理：a)Unifilter96孔板GF/C使用前每孔用100uL0.5％聚亚乙基亚胺(用超纯水溶解)在4℃浸泡30-60分钟以减少滤膜降解。b)用微孔多头抽真空装置(8-15mmHg)抽滤，用冷的孵育缓冲液(4-8℃)洗板，2ml/well，抽滤。

(2)结合：根据方案，在96孔反应板上配置反应体系。25℃孵育2小时，摇床速度500转/分。

(3)过滤：不需要的孔用顶盖密封A(透明的)封住顶部。用枪把样品快速转移到96孔板，真空抽去液体(5～10mm Hg)留下配体/受体结合复合物。

(4)漂洗：用冰的洗涤缓冲液洗孔，3mL/孔。

(5)封底：用吸水纸小心吸去板下方悬液，在通风橱风干30分钟；用干净的底水封(非透明)把底部封紧。

(6)每孔加20uL闪烁液MicroScint20。

(7)在样品板上方用顶盖密封A封好

(8)在微孔板闪烁发光计数仪上检测1分钟的计数值(CPM)。

3.2试验条件：

3.3数据分析：采用绘制医学图表软件第四版进行数据处理。计算公式为％置换＝100×(1-(样品CPM/总结和CPM))

4.实验结果：见表1。

表1、受试化合物对M3受体的亲合力

结合活性结果表明，在所有受试化合物中，式I化合物与M3受体结合力最强。

实施例2

受试化合物对M3毒蕈碱性受体的拮抗作用的功能性实验

1.实验目的：通过功能性试验测定化合物对M3毒蕈碱性受体的拮抗活性(通过检测钙流的变化，对M3受体有作用的化合物会引起过量稳定表达M3受体的CHO-k1细胞内钙离子浓度的变化)。

2.实验材料：a)表达人M3毒蕈碱性受体的膜制剂，金斯瑞；b)Calcium4assay kit钙流试剂盒，美国分子仪器公司；c)卡巴胆碱，金斯瑞；d)DAU5884盐酸盐，Tocris Bioscience。

3.实验步骤：

3.1试验操作步骤：提前18小时将20uL CHO-k1细胞膜制剂置于384孔板(37℃/5％C0₂)，浓度为15000cell/well。加入20uL染色缓冲液。将受试化合物溶解于DMSO中，用HBSS缓冲液配置为受试浓度(测试浓度最高10μM，10倍稀释，8个浓度，双复孔)，将10uL5×测试浓度的样品加入384孔板。以DAU5884盐酸盐为对照品。37℃孵育1小时，室温孵育15分钟。读取FLIPR时，在20秒加入卡巴胆碱，于之后的100秒内读取信号。

3.2数据分析：采用ScreenWorks(3.1版)和GraphPad Prism5进行数据处理。

4.实验结果：见表2。

表2、受试化合物对M3受体拮抗作用的功能性试验结果

功能性试验测试结果与结合活性结果基本一致，在所有受试化合物中，式I化合物具有最强的M3毒蕈碱性受体拮抗活性，且显著强于市售药物格隆溴铵及(3S,2'R)-格隆溴铵和(3R,2'S)-格隆溴铵。而(3S,2'S)-格隆溴铵几乎失去活性。

实施例3

(2R,5R)-2-特丁基-5-苯基-1，3-二噁烷-4-酮

将R-扁桃酸(10.00g，0.07mol)溶解于到正戊烷(100mL)中，加入特戊醛(7.00g，0.09mol)和三氟甲磺酸(430mg，3.08mmol)，回流6h。有白色固体析出，抽滤，滤饼用8％碳酸氢钠溶液洗涤，烘干，得到白色固体(7.50g，51％).mp131～134℃；(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.43(m，5H)，5.34(m，1H)，5.25(s，1H)，1.09(s，9H)；EI-MS m/z243.1[M+Na]⁺.

实施例4

(2R,5S)-2-特丁基-5-苯基-5-(环戊基-1-羟基)-1，3-二噁烷-4-酮

将(2R,5R)-2-特丁基-5-苯基-1，3-二噁烷-4-酮(9.00g，0.04mol)溶解于无水四氢呋喃(68mL)中，冷却至-78℃，加入LiHMDS(53.1mL，0.05mol)，搅拌0.5h，想体系中缓慢滴加环戊酮(5.1mL，0.06mol)，反应2.5h。--78℃滴加磷酸二氢钠饱和溶液(9mL)淬灭反应，将反应液倾倒于饱和氯化铵溶液(90mL)中，分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到棕黄色固体，经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯，40：1)得到白色固体(5.70g，46％).mp131～134℃；(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.77(m，2H)，7.36(m，3H)，5.50(s，1H)，1.55～1.93(m，8H)，0.87(s，9H)；EI-MS m/z327.2[M+Na]⁺.

实施例5

(2R，5R)-2-特丁基-5-苯基-5-(1-环戊烯基)-1，3-二噁烷-4-酮

将(2R,5S)-2-特丁基-5-苯基-5-(环戊基-1-羟基)-1，3-二噁烷-4-酮(6.20g，20.4mmol)溶解于无水四氢呋喃(41mL)中，冰浴下滴加二氯亚砜(2.81mL，57.3mmol)和吡啶(4.52mL，0.01mol)，搅拌1h，反应液变浑浊，加入饱和氯化铵溶液(124mL)淬灭，分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到黄色油状物(6.26g，108％).¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.57(m，2H)，7.34(m，3H)，5.98(m，1H)，5.20(s，1H)，2.46(m，2H)，2.28(m，1H)，2.16(m，1H)，1.90(m，2H)，1.06(s，9H)；EI-MS m/z309.2[M+Na]⁺.

实施例6

(R)-α-苯基-α-(1-环戊烯基)-α-羟基乙酸

将(2R，5R)-2-特丁基-5-苯基-5-(1-环戊烯基)-1，3-二噁烷-4-酮(6.26g，0.02mol)溶解于甲醇(48mL)和水(24mL)的混合溶液中，加入氢氧化钾(12.20g，0.2mol)，回流1h。用1N盐酸调节pH到1，用乙酸乙酯萃取，收集有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到黄色固体(4.10g，87％).mp102～105℃；(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.56(m，2H)，7.35(m，3H)，5.81(m，1H)，2.40(m，4H)，1.93(m，2H)；EI-MS m/z217.1[M-H]^-.

实施例7

(R)-α-苯基-α-环戊基-α-羟基乙酸

将(R)-α-苯基-α-(1-环戊烯基)-α-羟基乙酸(3.55g，16.3mmol)溶解于甲醇(32mL)中，加入10％Pd/C(355mg)，室温反应6h。硅藻土抽滤，收集滤液，将滤液旋干得到黄色油状物，经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸，100：1：0.3)得到白色固体，经石油醚/乙酸乙酯(4：1)溶液(20mL)重结晶，得到白色固体(0.90g，25％).mp116～118℃；(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.65(m，2H)，7.32(m，3H)，2.94(m，1H)，1.29～1.76(m，8H).EI-MS m/z219.2[M-H]^-.

实施例8

(2S,5S)-2-特丁基-5-苯基-1，3-二噁烷-4-酮

将S-扁桃酸(12.00g，0.08mol)溶解于到正戊烷(120mL)中，加入特戊醛(8.40g，0.1mol)和三氟甲磺酸(516mg，3.44mmol)，回流8h。有白色固体析出，抽滤，滤饼用8％碳酸氢钠溶液洗涤，烘干，得到白色固体(7.44g，41％).mp135～137℃；(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.43(m，5H)，5.33(m，1H)，5.24(s，1H)，1.08(s，9H)；EI-MS m/z243.1[M+Na]⁺.

实施例9

(2S,5R)-2-特丁基-5-苯基-5-(环戊基-1-羟基)-1，3-二噁烷-4-酮

将(2S,5S)-2-特丁基-5-苯基-1，3-二噁烷-4-酮(7.40g，0.03mol)溶解于无水四氢呋喃(56mL)中，冷却至-78℃，加入LiHMDS(43.7mL，0.04mol)，搅拌0.5h，想体系中缓慢滴加环戊酮(4.2mL，0.05mol)，反应2.5h。-78℃滴加7mL磷酸二氢钠饱和溶液淬灭反应，将反应液倾倒于75mL饱和氯化铵溶液中，分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到棕黄色固体，经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯，40：1)得到白色固体(4.60g，45％).mp136～138℃；(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.79(m，2H)，7.34(m，3H)，5.52(s，1H)，1.56～1.97(m，8H)，0.88(s，9H)；EI-MS m/z327.2[M+Na]⁺.

实施例10

(2S，5S)-2-特丁基-5-苯基-5-(1-环戊烯基)-1，3-二噁烷-4-酮

将(2S,5R)-2-特丁基-5-苯基-5-(环戊基-1-羟基)-1，3-二噁烷-4-酮(4.10g，13.5mmol)溶解于无水四氢呋喃(41mL)中，冰浴下滴加二氯亚砜(2.78mL，0.04mol)和吡啶(5.0mL，0.06mmol)，搅拌1h，反应液变浑浊，加入饱和氯化铵溶液(82mL)淬灭，分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到黄色油状物(3.60g，93％). ¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.58(m，2H)，7.36(m，3H)，5.99(m，1H)，5.21(s，1H)，1.86～2.47(m， 6H)，1.06(s，9H)；EI-MS m/z309.2[M+Na]⁺.

实施例11

(S)-α-苯基-α-(1-环戊烯基)-α-羟基乙酸

将(2S，5S)-2-特丁基-5-苯基-5-(1-环戊烯基)-1，3-二噁烷-4-酮(3.60g，12.5mmol)溶解于甲醇(28mL)和水(14mL)的混合溶液中，加入氢氧化钾(7.00g，0.13mol)，回流1h。用1N盐酸调节pH到1，用乙酸乙酯萃取，收集有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物黄色固体(2.50g，91％).mp118～120℃；(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.55(m，2H)，7.37(m，3H)，5.80(m，1H)，2.38(m，4H)，1.92(m，2H)；EI-MS m/z217.1[M-H]^-.

实施例12

(S)-α-苯基-α-环戊基-α-羟基乙酸

将(S)-α-苯基-α-(1-环戊烯基)-α-羟基乙酸(2.50g，11.5mmol)溶解于甲醇(23mL)中，加入250mg10％Pd/C，室温反应4h。硅藻土抽滤，收集滤液，将滤液旋干得到黄色油状物，经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸，100：1：0.3)得到白色固体，经石油醚/乙酸乙酯(20：1)溶液(20mL)重结晶，得到白色固体(2.20g，36％).mp116～118℃；(c＝0.1，MeOH)； ¹H NMR(DMSO，300MHz)δ7.65(m，2H)，7.30(m，3H)，2.94(m，1H)，1.28～1.73(m，8H)；EI-MS m/z219.2[M-H]^-.

实施例13

(3R，2′R)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷

将(R)-α-苯基-α-环戊基-α-羟基乙酸(100mg，0.46mmol)溶解于无水甲苯(0.5mL)中，加入CDI(150mg，0.68mmol)，室温搅拌30min。加入(R)-1-甲基-3-羟基吡咯烷(69mg，0.68mmol)，搅拌过夜。向反应液中加入水(1mL)，收集有机层，再2N盐酸萃取3遍，合并水层并用少量二氯甲烷洗，用固体碳酸钠调节水层至碱性(到无气泡放出)，二氯甲烷萃取三遍，合并有机层，有机层分别用1N氢氧化钠溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到淡黄色油状物(60mg，44％).EI-MS m/z304.2[M+H]⁺.

实施例14

(3R，2′R)-格隆溴铵(式I化合物)

将化合物(3R，2′R)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷(60mg，0.20mmol)溶解于丁酮(1mL)中，冰浴下滴加溴甲烷(39mg，0.40mmol)，升至室温并搅拌过夜，将溶剂旋干，经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇，40：1)得到白色固体(40mg，51％).(c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.63(m，2H)，7.37(m，2H)，7.28(m，1H)，5.48(s，1H)，3.83(m，1H)，3.71(m，1H)，3.60(m，2H)，3.1.9(s，3H)，3.03(m，1H)，3.00(s，3H)，2.78(m，1H)，2.29(m，1H)，1.62(m，5H)，1.50(m，1H)，1.37(m，2H)；EI-MS m/z318.2[M+H]⁺.

实施例15

(3S，2′R)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷

将(R)-α-苯基-α-环戊基-α-羟基乙酸(100mg，0.46mmol)溶解于无水甲苯(0.5mL)中，加入 CDI(150mg，0.68mmol)，室温搅拌30min。加入(S)-1-甲基-3-羟基吡咯烷(69mg，0.68mmol)，搅拌过夜。向反应液中加入水(1mL)，收集有机层，再2N盐酸萃取3遍，合并水层并用少量二氯甲烷洗，用固体碳酸钠调节水层至碱性(到无气泡放出)，二氯甲烷萃取三遍，合并有机层，有机层分别用1N氢氧化钠溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到淡黄色油状物(129mg，94％).EI-MS m/z304.2[M+H]⁺.

实施例16

(3S，2′R)-格隆溴铵

将化合物(3S，2′R)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷(129mg，0.43mmol)溶解于丁酮(1mL)中，冰浴下滴加溴甲烷(82mg，0.86mmol)，升至室温并搅拌过夜，将溶剂旋干，经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇，40：1)得到(3S，2′R)-格隆溴铵的无色油状物(110mg，65％). (c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.63(m，2H)，7.38(m，2H)，7.30(m，1H)，5.48(s，1H)，3.86(m，1H)，3.61(m，3H)，3.22(s，3H)，2.99(s，3H)，2.97(m，1H)，2.73(m，1H)，2.17(m，1H)，1.68(m，5H)，1.50(m，1H)，1.37(m，2H)；EI-MS m/z318.2[M+H]⁺.

实施例17

(3R，2′S)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷

将(S)-α-苯基-α-环戊基-α-羟基乙酸(100mg，0.46mmol)溶解于无水甲苯(0.5mL)中，加入CDI(150mg，0.68mmol)，室温搅拌30min。加入(R)-1-甲基-3-羟基吡咯烷(69mg，0.68mmol)，搅拌过夜。向反应液中加入水(1mL)，收集有机层，再2N盐酸萃取3遍，合并水层并用少量二氯甲烷洗，用固体碳酸钠调节水层至碱性(到无气泡放出)，二氯甲烷萃取三遍，合并有机层，有机层分别用1N氢氧化钠溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到淡黄色油状物(55mg，40％).EI-MS m/z304.2[M+H]⁺.

实施例18

(3R，2′S)-格隆溴铵

将化合物(3R，2′S)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷(55mg，0.18mmol)溶解于丁酮(1mL)中，冰浴下滴加溴甲烷(34mg，0.36mmol)，升至室温并搅拌过夜，将溶剂旋干，经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇，40：1)得到(3R，2′S)-格隆溴铵的无色油状物(48mg，67％). (c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.62(m，2H)，7.36(m，2H)，7.28(m，1H)，5.49(s，1H)，3.92(m，1H)，3.64(m，3H)，3.23(s，3H)，2.99(s，3H)，2.97(m，1H)，2.734(m，1H)，2.17(m，1H)，1.66(m，5H)，1.49(m，1H)，1.37(m，2H)；EI-MS m/z318.2[M+H]⁺.

实施例19

(3S，2′S)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷

将(S)-α-苯基-α-环戊基-α-羟基乙酸(100mg，0.46mmol)溶解于无水甲苯(0.5mL)中，加入CDI(150mg，0.68mmol)，室温搅拌30min。加入(S)-1-甲基-3-羟基吡咯烷(69mg，0.68mmol)，搅拌过夜。向反应液中加入水(1mL)，收集有机层，再2N盐酸萃取3遍，合并水层并用少量二氯甲烷洗，用固体碳酸钠调节水层至碱性(到无气泡放出)，二氯甲烷萃取三遍，合并有机层，有机层分别用1N氢氧化钠溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到淡黄色油状物(120mg，88％).EI-MS m/z304.2[M+H]⁺.

实施例20

(3S，2′S)-格隆溴铵

将化合物(3S，2′S)-1-甲基-3-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰氧基)吡咯烷(120mg，0.40mmol)溶解于丁酮(1mL)中，冰浴下滴加溴甲烷(79mg，0.80mmol)，升至室温并搅拌过夜将溶剂旋干，经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇，40：1)得到(3S，2′S)-格隆溴铵的白色固体(105mg，67％). (c＝0.1，MeOH)；¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.66(m，2H)，7.37(m，2H)，7.28(m，1H)，5.49(s，1H)，3.88(m，1H)，3.75(m，1H)，3.64(m，2H)，3.22(s，3H)，3.05(m，1H)，3.03(s，3H)，2.78(m，1H)，2.29(m，1H)，1.62(m，5H)，1.50(m，1H)，1.37(m，2H)；EI-MS m/z318.2[M+H]⁺.

实施例21

药用组合物的制备：吸入气雾剂

将(3R,2'R)-格隆溴铵(式I化合物，0.5g)溶于22g乙醇中，制备活性成分的浓缩液。将该浓缩液加入到合适的罐装设备中，将活性成分浓缩液分装到气雾剂容器中，向所述容器顶端空间冲入氮气或HFC-134A蒸汽(所冲入成分不得含有超过1ppm氧)，用阀密封。将115Ghfc-134A抛射器加压充入所述密封的容器中。

实施例22

药用组合物的制备：吸入粉雾剂

将(3R,2'R)-格隆溴铵(式I化合物)粉碎，称360mg的式I化合物的超细粉，与36g的研磨乳糖混合均匀，再与468g的结晶乳糖混合均匀，测含量，计算装量，用微量胶囊充填机充填于3号胶囊，共制成约20000粒。

实施例23

药用组合物的制备：片剂

将(3R,2'R)-格隆溴铵(式I化合物，1g)与23g乳糖和5.7g微晶纤维素用混合机混合。用滚轴压紧机将所得混合物压制成型，值得薄片状压制物料。用锤式粉碎机将所述薄片状压制物料研磨成粉，使所得粉状物料通过20目筛过筛。将一份0.3g轻质二氧化硅和0.3g硬脂酸镁加入到已过筛的物料中，并混合。所得混合产物用制片机压片。

Claims

1.如下式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物在制备预防或治疗呼吸系统疾病、泌尿系统疾病或肠胃道疾病的药物中的用途：

2.如权利要求1的用途，其特征在于，所述呼吸系统疾病是慢性阻塞性肺疾病、支气管炎、支气管反应过度、咳嗽、鼻炎或哮喘。

3.如权利要求1的用途，其特征在于，所述泌尿系统疾病是膀胱过度活动症、尿频、尿急、尿失禁、慢性膀胱炎、神经源性或不稳定性膀胱或膀胱痉挛。

4.如权利要求1的用途，其特征在于，所述肠胃道疾病是过敏性肠道综合症、痉挛性结肠炎、憩室炎或消化性溃疡。

5.一种预防或治疗呼吸系统疾病、泌尿系统疾病或肠胃道疾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中含有治疗有效量的权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物作为活性成分和药学上可接受的载体。

6.如权利要求5的药物组合物，其特征在于，所述呼吸系统疾病是慢性阻塞性肺疾病、支气管炎、支气管反应过度、咳嗽、鼻炎或哮喘。

7.如权利要求5的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物是吸入气雾剂、吸入粉雾剂、普通片剂、缓释片剂、控释片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服液或注射剂。